447-793-1-sm

ISSN 2302-1616Vol 1, No. 1, Juni 2013, hal 51-60

Analisis Multidrug Resistensi Terhadap Antibiotik Pada Salmonella typhiDengan Teknik Multiplex PCR

ANDI EVI ERVIANIJurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Hasanuddin

Jl. Perintis Kemerdekaan, Makassar 90516email: [email protected]

ABSTRACTThis research is about the analysis of resistance multidrug for antibiotic of Salmonella typhi

with multiplex technique of PCR. This research purpose conducted to determine the presence ofresistance multidrug for kloramfenikol and ampicillin of Salmonella typhi using multiplex techniqueof PCR. Testing of resistance multidrug performed using disc diffusion test and detection ofresistance gene for kloramfenikol (cat P) and ampicillin (tem) with molecular technique usingmultiplex of PCR. Result of research indicate the suitability between resistance test using discdiffusion and detection resistance gene with multiplex of PCR, which is based on result of discdiffusion test and multiplex of PCR have occurred of resistance multidrug for kloramfenikol andampicillin antibiotics, amount 10 patients (33.3%), resistance of one antibiotics amount 10 patient(33.3%) and non-resistance (sensitive) for both antibiotic amount 10 patient (33.3%).

Keywords: Antibiotics, Multidrug, Resistance, Salmonella typhi

PENDAHULUANLingkungan di sekitar manusia

mengandung berbagai jenis unsur patogen,seperti bakteri, virus, fungi, protozoa danparasit yang dapat menyebabkan infeksi padamanusia.. Salmonella typhi merupakan bakteripatogen yang dapat menimbulkan penyakitdemam tifoid pada manusia, yang dapatdieksresikan melalui sekret saluranpencernaan, urine, dan tinja dalam waktu yangbervariasi (Kresno,2001; Lay,1994; Jawetz etal.,2001). S. typhi masuk ke dalam tubuhmanusia melalui makanan atau minuman yangtercemar ke dalam lambung, kelenjar limfoid,usus halus kemudian masuk ke dalamperedaran darah (Kadang, 2000).

Sanitasi, higienitas dan vaksinasi yangdapat menurunkan tingkat insidensi penyakitcenderung masih sulit diterapkan di negaraberkembang termasuk Indonesia, sehinggapenggunaan antibiotik dinilai sebagai carayang paling efektif. Antibiotik yang seringdigunakan dalam terapi demam tifoid adalahklorampenikol, ampisilin, kotrimkszol,norfloksasin, neomisin, ciproflaksasin danpefloksasin (Mirza et al., 2000).

Penggunaan antibiotik diketahuimenyebabkan masalah baru yaitu munculnya

resistensi terutama pada pemakaian antibiotikyang tidak prosedural dan tidak terkontrol(Mirza et al., 2000). Resistensi antibiotik padademam tifoid seringkali dihubungkan denganmeningkatnya morbiditas dan mortalitas yangmuncul. Dari beberapa hasil pengujianterhadap resistensi antibiotik membuktikanbahwa telah terjadi resistensi terhadapkloramphenikol, ampisilin, dan sulfonamid.

Teknik PCR dianggap suatu cara yangsederhana, praktis dan cepat untukmemperbanyak sekuen DNA spesifik yangdiinginkan dengan ukuran tertentu denganmekanisme perubahan suhu. Prinsip dasar darimetode ini adalah amplifikasi materi genetikyang terkandung dalam setiap organismehidup. PCR dapat dilakukan dalam waktukurang dari satu hari dan jutaan DNA dapatdihasilkan. Dalam penelitian ini, akandilakukan analisa multidrug resistensi terhadapantibiotik kloramfenikol dan ampisilin padapenderita demam tifoid dengan menggunakanteknik multiplex PCR.

METODEKultur dan Identifikasi. Sampel darah

dimasukkan ke dalam medium bile broth 1:10kemudian diinkubasi pada temperatur 35-370C

ANDI EVI ERVIANI Biogenesis 52

selama 24 jam. Koloni yang tumbuhdiinokulasi ke medium Salmonella Shigellapada temperatur 370C selama 24 jam.Pertumbuhan koloni diamati, jika adadilanjutkan pada TSI agar, diinkubasi 35-370Cselama 18-24 jam. Jika ada pertumbuhandilanjutkan pada media SM, MR-VP, ureasitrat dan uji gula-gula, masing-masingdiinkubasi 35-370C selama 18-24 jam.

Uji Disc Diffusion. Suspensi bakteriS.typhi dari kultur dilakukan pengenceranuntuk mengetahui tingkat kekeruhan denganmenggunakan standar kekeruhan Mc Farland.Pada kepekaan yang sesuai dengan 0,5 standarMc Farland ditanam pada permukaan agarMueller Hilton-Agar dengan pH 7,2-7,4dengan metode sebar. Kemudian paper discyang mengandung antibiotik kloramfenikoldan antibiotik ampisilin diletakkan dipermukaan agar, kemudian diinkubasikansemalam pada suhu 350C selama 16-18 jam.Zona hambatan yang terbentuk pada agar danlebar zona tersebut dibandingkan dengan lebarzona hambat standar menurut Oxoid yangmengacu pada kriteria National Commitee forClinical Laboratory Standard (NCCLS)dengan kategori resisten, intermediat dansensitif. Kategori intermediat untukkepentingan klinis dimasukkan dalam kategoriresisten. Untuk kloramfenikol, kategoriresisten ditunjukkan dengan diameterhambatan ≤12 mm, intermediat 13-17 mm, dansensitif ≥18 mm. Sedangkan untuk ampisilin,kategori resisten ditunjukkan dengan diameterhambatan ≤13 mm, intermediat 14-16 mm, dansensitif ≥17 mm.

Ekstraksi DNA. Sebanyak 900 μl (bufferlisis) ditambahkan sampel sebanyak 100 μlatau sedimen sampel yang telah dipekatkandengan menggunakan sentrifus kecepatantinggi (12.000 rpm selama 10 menit) dan 40 μlsuspensi diatom ditambahkan ke dalamtabung. Campuran tersebut divortex dandiaduk dengan menggunakan gyrotary shakerdengan kecepatan 100 rpm selama 10 menit.Kemudian divortex kembali dan disentrifusdalam mikrosentrifus ependorf pada kecepatan12.000 rpm selama 15 detik. Supernatandipisahkan dari setiap vial denganmenggunakan pengisap yang terbuat dari pipet

Pasteur plastik tanpa balon udara dandihubungkan dengan vacuum pump.Pencucian dilakukan sebanyak 2 kali denganmenggunakan 1 ml buffer pencuci L2. 1 mlbuffer pencuci L2 ditambahkan ke dalamtabung dan divortex, sentrifus selama 15 detikdan supernatan diisap dengan menggunakanpipet. Pencucian dua kali denganmenggunakan etanol 70 % dan 1 kali dengan 1ml aseton. Aseton dipisahkan yang terdapatdalam supernatan dengan cara membukapenutup vial dan dipanaskan 560C dalam waterbath atau dengan menggunakan dry blockheater. 60 ml TE buffer elusi ditambahkanpada vial. Kemudian divortex secara meratasehingga sedimen dari suspensi tersebut larut.Vial diinkubasi dalam water bath selama 10menit pada suhu 60 0C. Sentrifus 12.000 rpmselama 30 detik dan diambil secara hati-hatisekitar 40-50 μl supernatan dan dimasukkandalam vial yang baru. Buffer TE ditambahkanulang 80 μl ke dalam sedimen diatom dandivortex kembali sehingga sedimen akan larutdalam TE buffer elusi. Vial diinkubasi kembalipada water bath selama 10 menit pada suhu560- 600C. sentrifus 12.000 rpm selama 30detik dan diambil secara hati-hati sekitar 40-50μl supernatan dan dimasukkan dalam vial yangsama. Pada akhir prosedur Boom akan didapatsejumlah kecil diatom (sekitar 4 μl suspensidiatom dalam 100 ml TE buffer elusi). Hasilekstraksi dapat disimpan pada suhu-200C atausuhu -800C.

Proses Amplifikasi pada Mesin PCRuntuk Deteksi gen cat P dan Tem F.Amplifikasi PCR untuk pengujian resistensidiperlukan DNA mix untuk satu kali reaksiyang berisi dNTPs 2 μl, primer TEM Forward(Tem F) dan primer cat P Forward masing-masing 0,1 μl, 0,2 μl Taq Polymerase, 10 kaliPCR Buffer, dan aquades 17,6 μl. Campuranreaksi ini dimasukkan dalam tabung 0,5 ml danditambahkan 2,5 μl ekstrak DNA Salmonellatyphi hasil isolasi, dan 1 tabung diisi dengan2,5 μl aquadest steril sebagai kontrol negatif.Amplifikasi dengan menggunakan mesin PCR(DNA Termal Cycler) sebanyak 40 siklusdengan setiap siklus terdiri dari denaturasi940C selama 45 detik, annealing 570C selama60 detik, dan polimerisasi 720C selama 60

Vol 1, Juni 2013 Biogenesis 53

detik, setelah selesai 40 siklus kemudiandiikuti dengan 720C selama 1 malam. Hasilamplifikasi dapat disimpan pada suhu -800C.Setelah amplifikasi, 8 μl hasil amplifikasi PCRdan 2 μl loading buffer dicampur dandimasukkan ke dalam sumur gel agarose 2 %yang sudah diberi ethidium bromida. Agar geldirendam pada wadah yang berisi buffer TBE,selanjutnya elektroforesis dijalankan selama 1jam dengan tegangan konstan 100 volt. Setelahsatu jam, elektroforesis dihentikan, geldiangkat untuk diamati di bawah sinar UV.Pada deteksi gen tem F (gen resisten terhadapampisilin), dikatakan hasil positif jika terdapatpita DNA pada fragmen 291 pasangan basa,sedangkan untuk gen cat P (gen resistenterhadap kloramfenikol), dikatakan hasilpositif jika terdapat pita DNA pada fragmen436 pasangan basa.

Analisis Data. Data yang diperoleh darihasil uji kultur, disc diffusion, dan multiplexPCR ditabulasi dan dianalisis

HASILUji Resistensi Antibiotik Dengan

Metode Disc Diffusion. Zona hambat yangterbentuk dari masing-masing disk antibiotikdibandingkan dengan lebar zona hambatstandar menurut oxoid yang mengacu padaNational Commitee for Clinical LaboratoryStandars (NCLLS). Hasil pengukurandiameter hambatan dari antibiotikkloramfenikol dan ampisilin dapat dilihat padatabel 1. Terjadi resistensi terhadap antibiotikkloramfenikol dan ampisilin. Di mana jumlahpenderita demam tifoid yang resisten terhadapkedua antibiotik (Multi Drug Resisten)sebanyak 10 pasien (33,3%).

Namun ada pula yang resisten hanyaterhadap salah satu antibiotik, yaitu 5 pasien(16,67%) yang resisten terhadap antibiotikkloramfenikol tetapi sensitif terhadapantibiotik ampisilin. Ditemukan 5 pasien(16,67%) yang resisten terhadap antibiotikampisilin, tetapi sensitif terhadap antibiotikkloramfenikol. Ada juga yang sensitif baikterhadap antibiotik kloramfenikol maupunantibiotik ampisilin, yaitu sebanyak 10 pasien(33,3%).

Uji Resistensi Antibiotik DenganTeknik Multiplex PCR. Pada uji PCR,resistensi terhadap kloramfenikol dideteksidengan mengamplifikasi gen cat P, sedangkanresistensi terhadap ampisilin dideteksi denganmengamplifikasi gen tem. Amplifikasi inimenggunakan primer forward untuk gen cat P(5’-CC GTT GAT AT ATC CCAA TGG-3’),reverse (5’- CTG GTGA AACT CAC CCAGG G-3’), dan primer forward untuk gen tem(5’-GC TGATC TCA ACA GCG GTA AG-3’), reverse (5’- C TGA CAA CGA GAGGACC-3’) (Haque, et al., 2005).

Pola Resistensi AntibiotikKloramfenikol dan Ampisilin PadaPenderita Demam Tifoid. Jumlah penderitademam tifoid yang resisten terhadapkloramfenikol berdasarkan uji PCR dan discdiffusion adalah 15 orang (50 %) (Tabel 3).Jumlah pasien yang tidak resisten (sensitif)juga 15 orang (50%). Sedangkan untukantibiotik ampisilin menunjukkan hasil yangsama. Di mana jumlah penderita demam tifoidyang resisten berdasarkan uji PCR dan Discdiffusion adalah 15 orang (50%), dan jumlahpenderita demam tifoid yang sensitifberjumlah 15 orang (50 %).

Tabel 1. Hasil pengukuran diameter hambatan terhadap antibiotik kloramfenikol dan ampisilinNo RS Nama Umur

(tahun)JK LD

(hari)Kultur Diameter zona hambatan

(mm)Kesimpulan

Kloramfenikol Ampisilin1 WS MT 26 L 5 POS 24 (S) 25 (S) S2 GW JL 38 P 7 POS 27 (S) 24 (S) S3 WS GH 45 L 3 POS 21 (S) 22 (S) S4 DY LI 12 P 7 POS 23 (S) 26 (S) S5 UP JU 18 L 4 POS 19 (S) 28 (S) S6 DY GA 29 L 5 POS 20 (S) 31 (S) S


7 KS YTM 32 P 3 POS 25 (S) 32 (S) S8 GW MK 43 L 4 POS 23 (S) 29 (S) S9 KS WS 31 L 8 POS 22 (S) 24 (S) S10 WS DM 19 P 6 POS 30 (S) 25 (S) S11 DY TK 27 L 6 POS 10 (R) 22 (S) SR12 KS LS 29 P 7 POS 11 (R) 20 (S) SR13 DY DUI 50 P 4 POS 8 (R) 21 (S) SR14 KS FKL 26 L 5 POS 9 (R) 28 (S) SR15 WS FKL 16 L 4 POS 10 (R) 27 (S) SR16 WS HJ 30 P 5 POS 28 (S) 8 (R) SR17 KS UT 54 L 6 POS 24 (S) 8 (R) SR18 GW RI 27 L 3 POS 23 (S) 8 (R) SR19 KS EB 21 P 5 POS 25 (S) 9 (R) SR20 DY GG 28 L 6 POS 27 (S) 10 (R) SR21 UP SY 39 L 3 POS 8 (R) 11 (R) MDR22 WS IW 43 P 5 POS 11 (R) 13 (R) MDR23 GW DW 51 L 4 POS 12 (R) 12 (R) MDR24 DY OB 14 L 3 POS 14 (R) 10 (R) MDR25 WS HH 19 P 4 POS 8 (R) 10 (R) MDR26 KS KW 29 P 7 POS 10 (R) 9 (R) MDR27 DY ART 50 P 6 POS 8 (R) 8 (R) MDR28 WS CG 44 L 3 POS 9 (R) 8 (R) MDR29 KS PIT 34 L 6 POS 12 (R) 13 (R) MDR30 GW JKE 16 L 5 POS 8 (R) 12 (R) MDR

KeteranganWS : RS. Wahidin SudirohusodoDY : RS. DayaGW : RS. Sungguhminasa, GowaKS : Puskesmas Kassi-Kassi, MakassarS : Sensitif terhadap antibiotikR : Resisten terhadap antibiotikSR : Sensitif resisten (Resisten terhadap salah satu antibiotik)MDR : Multi Drug Resisten (Resisten terhadap 2 antibiotik)

Tabel 2. Perbandingan hasil uji PCR dan uji disc diffusionNo RS Nama JK Diameter zona hambatan (mm) Uji

Disc DiffusionUji PCR Kesimpulan

Kloramfenikol Ampisilin Cat P Tem F1 WS MT L 24 (S) 25 (S) Negatif Negatif S2 GW JL P 27 (S) 24 (S) Negatif Negatif S3 WS GH L 21 (S) 22 (S) Negatif Negatif S4 DY LI P 23 (S) 26 (S) Negatif Negatif S5 UP JU L 19 (S) 28 (S) Negatif Negatif S6 DY GA L 20 (S) 31 (S) Negatif Negatif S7 KS YTM P 25 (S) 32 (S) Negatif Negatif S8 GW MK L 23 (S) 29 (S) Negatif Negatif S9 KS WS L 22 (S) 24 (S) Negatif Negatif S10 WS DM P 30 (S) 25 (S) Negatif Negatif S11 DY TK L 10 (R) 22 (S) Positif Negatif SR


12 KS LS P 11 (R) 20 (S) Positif Negatif SR13 DY DUI P 8 (R) 21 (S) Positif Negatif SR14 KS FKL L 9 (R) 28 (S) Positif Negatif SR15 WS FKL L 10 (R) 27 (S) Positif Negatif SR16 WS HJ P 28 (S) 8 (R) Negatif Positif SR17 KS UT L 24 (S) 8 (R) Negatif Positif SR18 GW RI L 23 (S) 8 (R) Negatif Positif SR19 KS EB P 25 (S) 9 (R) Negatif Positif SR20 DY GG L 27 (S) 10 (R) Negatif Positif SR21 UP SY L 8 (R) 11 (R) Positif Positif MDR22 WS IW P 11 (R) 13 (R) Positif Positif MDR23 GW DW L 12 (R) 12 (R) Positif Positif MDR24 DY OB L 14 (R) 10 (R) Positif Positif MDR25 WS HH P 8 (R) 10 (R) Positif Positif MDR26 KS KW P 10 (R) 9 (R) Positif Positif MDR27 DY ART P 8 (R) 8 (R) Positif Positif MDR28 WS CG L 9 (R) 8 (R) Positif Positif MDR29 KS PIT L 12 (R) 13 (R) Positif Positif MDR30 GW JKE L 8 (R) 12 (R) Positif Positif MDR

Tabel 3. Hubungan hasil tes sensitivitas antara metode disc diffusion terhadap sampel yang sensitive danresisten dan teknik PCR

Hasil Uji Disc diffusionKloramfenikol Ampisilin

Positif(Resisten)

Negatif(Sensitif)

Positif(Resisten)

Negatif(Sensitif)

PCR Kloramfenikol Resisten 15 - - -Sensitif - 15 - -

Ampisilin Resisten - - 15 -Sensitif - - - 15

Total 15 15 15 15

Gambar 1. Comb 1. Sumur 1:marker 100 bp, sumur 2-5: negatif gen cat P dan negatif gen tem F, sumur 6-8:positif gen cat P, sumur 9-11: positif gen tem F, sumur 12-15: positif gen cat P dan gen tem F,sumur 16: kontrol negatif


Gambar 2. Grafik pola resistensi antibiotik berdasarkan jenis kelamin dan kelompok umur

Tabel 4. Persentase penderita demam tifoid pada hasil kultur berdasarkan kelompok umurKelompok Umur Kultur Positif

11 – 20 Tahun 7 (23,3 %)

21 – 30 Tahun 10 (33, 3 %)

31 – 40 Tahun 5 (16,7 %)

41 – 50 Tahun 6 (20,0 %)

>50 Tahun 2 (6,7 %)

Jumlah Pasien (Orang) 30 (100,0 %)

Tabel 5. Persentase penderita demam tifoid pada hasil kultur berdasarkan jenis kelaminJenis Kelamin Kultur Positif

Laki-Laki 18 (60,0 %)Perempuan 12 (40,0 %)


Tabel 6. Persentase penderita demam tifoid pada hasil kultur berdasarkan lama demamLama Demam Kultur Positif

1 – 6 hari 25 (83,3 %)7 – 14 hari 5 (16,7 %)


PEMBAHASANUji Resistensi Antibiotik Dengan

Metode Disc Diffusion dan Uji PCR. Dalamuji disc diffusion maupun dengan uji PCR(tabel 2) ditemukan jumlah penderita demamtifoid yang resisten terhadap kedua antibiotiksebanyak 10 pasien (33,3%). Namun adapulayang resisten hanya terhadap salah satuantibiotik, yaitu 5 pasien (16,67%) yang

resisten terhadap antibiotik kloramfenikoltetapi sensitif terhadap antibiotik ampisilin.Ditemukan 5 pasien (16,67%) yang resistenterhadap antibiotik ampisilin, tetapi sensitifterhadap antibiotik kloramfenikol. Ada jugayang sensitif baik terhadap antibiotikkloramfenikol maupun antibiotik ampisilin,yaitu sebanyak 10 pasien (33,3 %). Sesuailaporan Hadinegoro (1999), para klinisi di


beberapa Negara mengamati adanya kasusdemam tifoid yang berat disebabkan olehstrain S. typhi yang telah resisten terhadapantibiotik. Sehingga diperlukan pemilihanantibiotik yang tepat dan biaya yang tidakterlalu tinggi.

Metode disc diffusion digunakan untukmengetahui resistensi dan sensitifitas bakteriterhadap penggunaan antibiotik. Kultur danidentifikasi bakteri S. typhi selama 4 hari,dilanjutkan dengan uji disc diffusion, yaitususpensi bakteri S.typhi dari kultur dilakukanpengenceran kemudian ditanam padapermukaan Mueller Hilton Agar denganmetode sebar, selanjutnya paper disk yangmengandung antibiotik kloramfenikol danampisilin diletakkan di permukaan agar,kemudian diinkubasikan semalam (Brooks etal., 2005). Jadi total waktu yang dibutuhkankurang lebih 1 minggu. Sedangkan metodePCR (multiplex PCR) selain mendeteksikeberadaan S. typhi juga bisa langsungmendeteksi adanya resistensi atau multidrugresistensi sampai ke tingkat gen dalam waktukurang dari 10 jam. PCR lebih sensitif (100%)dibandingkan dengan metode disc diffusion(Muladno, 2001). PCR dapat digunakan untukmendeteksi adanya multidrug resistensiterhadap ampisilin dan kloramfenikol.Sehingga diketahui adanya S. typhi yangresisten terhadap kloramfemikol dan ampisilinkarena adanya gen cat P dan gen tem (gambar1). Adanya fragmen DNA pada posisi 436 bpmenunjukkan bahwa terdapat gen cat Ptermutasi dari Salmonella typhi yang resistenterhadap kloramfenikol. Sedangkan adanyafragmen DNA pada posisi 291 bpmenunjukkan bahwa terdapat gen temtermutasi dari Salmonella typhi yang resistenterhadap ampisilin.

Pola Resistensi Antibiotik PadaPenderita Demam Tifoid BerdasarkanKelompok Umur dan Jenis Kelamin.Berdasarkan jenis kelamin (gambar 2), jumlahpasien yang multidrug resistensi lebih banyakditemukan pada pasien berjenis kelamin laki-laki, yaitu 6 orang (20,0%) dari padaperempuan yaitu 4 orang (13,3%). Jumlahpasien yang resisten terhadap salah satuantibiotik juga ditemukan lebih banyak pada

pasien berjenis kelamin laki-laki yaitu 6 orang(40,0%) dari pada perempuan yaitu 4 orang(13,3%). Jumlah pasien yang sensitif terhadap2 antibiotik juga ditemukan lebih banyak padapasien berjenis kelamin laki-laki yaitu 6 orang(40,0%) dari pada perempuan yaitu 4 orang(13,3%). Berdasarkan jenis kelamin, jumlahpasien yang multidrug resistensi, resisten, dansensitif lebih banyak ditemukan pada pasienberjenis kelamin laki-laki. Sedangkanberdasarkan kelompok umur, pasien yangmultidrug resistensi lebih banyak ditemukanpada kelompok umur antara 11-20 tahun dan41-50 tahun, yaitu masing-masing 3 orang(10,0%). Jumlah pasien yang resisten terhadapsalah satu antibiotik lebih banyak ditemukanpada kelompok umur antara 21-30 tahun yaitu7 orang (23,3%). Jumlah pasien yang sensitifterhadap 2 antibiotik lebih banyak ditemukanpada kelompok umur antara 11-20 tahun dan31-40 tahun, yaitu masing-masing 3 orang(10,0%). Hal tersebut sesuai dengan pendapatKadang (2003), bahwa demam tifoid dapatditemukan pada semua kelompok umur, danditemukan lebih banyak pada laki-lakidibanding perempuan dengan rasio 2-3:1.Namun demikian, menurut B.Senthilkumar etal., (1995), wanita lebih bersifat carierdibandingkan pria dengan rasio 3:1.

Berdasarkan lama demam, penderitademam tifoid lebih banyak dijumpai pada lamademam 1-6 hari atau pada minggu pertama.Hal tersebut berarti hasil positif didapatkanpada minggu pertama berlangsungnyapenyakit, yang disebabkan karena minggupertama merupakan fase bakterimia danseptikimia yang berat. Pada fase tersebut,jumlah bakteri S. typhi yang berada dalamdarah adalah besar, sehingga persentase kulturdarah pada rentang demam di atas dapatmencapai 100 % (Stratford, 1997).

Gejala demam tifoid yang timbulbervariasi. Dalam minggu pertama, gejala dankeluhan serupa dengan penyakit infeksi akutpada umumnya. Yaitu, demam, nyeri kepala,pusing, nyeri otot, anoreksia, mual, muntah,obstipasi atau diare, perasaan tidak enak diperut, batuk dan epistaksis. Pada pemeriksaanfisik hanya didapatkan peningkatan suhubadan. Dalam minggu kedua, gejala-gejala


menjadi lebih jelas. Berupa demam, bradikardirelatif, lidah tifoid (kotor di tengah, tepi danujung merah), hepatomegali, splenomegali,meteorismus, gangguan kesadaran berupasamnolen sampai koma (Mansjoer, dkk.,2001).

Dalam pengujian metode kultur, dapatdipengaruhi oleh beberapa faktor.Diantaranya, penggunaan antibitok olehpenderita sebelum pemeriksaan, kurangnyavolume darah yang digunakan untuk kultur,karakteristik intraselular S. typhi dan jenismedia yang digunakan untuk kultur (Haque, etal., 1999).

Multi Drug Resistensi (MDR)Salmonella typhi Terhadap AntibiotikAmpisilin dan Kloramfenikol. Dari hasilpengujian terhadap resistensi antibiotik, baikmenggunakan uji disc diffusion maupun ujiPCR menunjukkan bahwa telah terjadimultidrug resistensi terhadap antibiotikampisilin dan kloramfenikol. Diketahui, dalamberbagai pengobatan terhadap penyakit,ampisilin paling sering digunakan. Resistensiterhadap ampisilin sebagai salah satu antibotikyang termasuk dalam golongan penisilinditentukan oleh produksi enzim perusak cincinpenisilin yang dihasilkan organisme (β-laktamase). Beta laktamase membuka cincinβ-laktam penisilin dan sefalosporin β-laktamdan meniadakan aktivitas antimikrobianya.Ada satu kelompok β-laktamase yang kadang-kadang ditemukan dalam spesies gram negatifmisalnya Klebsiella pneumoniae dan E. coli.Enzim tersebut dikenal dengan ExtendedSpectrum β-laktamase (ESBL), yangmempunyai kemampuan tambahan kepadabakteri untuk menghidrolisa cincin β-laktamsefotaksim, seftasidim atau astreonam (Jawetzet al., 2001).

Di samping bakteri Klebsiellapneumoniae dan E.coli yang menghasilkanenzim ini, di beberapa negara telah dilaporkanjuga bahwa bakteri gram negatif termasukEnterobacter, Salmonella, Proteus,Citrobacter spp, Morganella morganii,Shigela dysenterica dan Pseudomonasaeruginosa menghasilkan ESBL. PadaSalmonella ditemukan beberapa macam ESBLyaitu enzim tem, sulfhydryl variabel (SHV),

PER, oxacilin OXA dan CTX-M (Kruger etal., 2004). Modifikasi biokimia antobiotik olehenzim bakteri merupakan suatu masalah yangsangat serius dalam pengobatan antobiotik dankemoterapi. Jawetz et al., (2001) menyebutkanbahwa semua obat β-laktam menghambatsintesis dinding sel bakteri dan oleh karena itu,aktif melawan pertumbuhan bakteri. Langkahawal dari aksi obat berupa ikatan obat padareseptor sel. Setelah obat β-laktam melekatpada satu atau beberapa reseptor, reaksitranspeptidase dihambat dan sintesispeptidoglikan dihentikan. Langkahselanjutnya meliputi perpindahan atauinaktivasi inhibitor enzim otolitik pada dindingsel. Aktivasi enzim litik ini menimbulkan lisisjika lingkingan isotonik.

Ada dua tipe mekanisme resistensi untukgolongan penisilin. Satu mekanisme karenaketiadaan beberapa reseptor penisilin danterjadi sebagai hasil mutasi kromosom. Keduaadalah kegagalan obat β-laktamase untukmengaktivasi enzim otolitik pada dinding sel.Sebagai hasilnya, organisme dihambat tapitidak dibunuh. Sifat toleransi ini telah diamatisecara khusus pada Stafilokokus danStreptokokus tertentu. Kloramfenikol sebagaiantibiotik yang juga digunakan dalampenelitian ini, merupakan penghambat yangkuat terhadap sintesis protein padamikroorganisme. Obat tersebut memblokirikatan asam amino pada rantai peptida yangmulai timbul pada unit 50S ribosom denganmengganggu kerja peptidyl transferase.Kloramfenikol bersifat bakteriostatik danbakteri dapat tumbuh kembali jika pengaruhobat dihilangkan. Mikroorganisme resistenterhadap kloramfenikol karena menghasilkanenzim kloramfenikol acetyltranferase yangmerusak aktivitas obat. Produksi enzim inibiasanya berada di bawah kontrol plasmid.(Jawetz et al., 2001).

Setelah kloramfenikol bertahan sekitar 25tahun, dilaporkan oleh beberapa peneliti diberbagai negara adanya strain Salmonellatyphi yang resisten terhadap kloramfenikol.Peneliti India melaporkan adanya kasusdemam tifoid yang resisten terhadapkloramfenikol pada tahun 1970, sedangkan diMexico pertama kali dilaporkan pada tahun


1972 (Hadinegoro, 1999). Resistensi tersebutternyata diikuti oleh adanya resistensiSalmonella typhi terhadap obat-obat lain yangbiasa dipergunakan untuk mengobati demamtifoid. Pada bulan Juni 1988, dilaporkan bahwatelah terjadi resistensi terhadap kloramfenikol,ampisilin, trimethoprim, sulfamethoxazole diMesir (Mikhail et al., 1989). Di negaraberkembang, antibiotik yang tersedia untukpengobatan demam tifoid adalah ampisilin,kloramfenikol, dan kotrimoksazol. Olarte danGalindo melaporkan pertama kali adanyastrain Salmonella typhi yang resisten terhadapampisilin dan kloramfenikol di Mexico tahun1973 (Hadinegoro, 1999).

Pada saat itu kotrimoksazol baruditemukan sebagai pengganti kloramfenikoluntuk mengobati demam tifoid meskipunkotrimoksazol cepat menjadi resisten. Padaperkembangan resistensi Salmonella typhiselanjutnya, beberapa negara melaporkanadanya strain Salmonella typhi yang telahresisten terhadap dua atau lebih golonganantibiotik utama untuk pengobatan demamtifoid yaitu kloramfenikol, ampisilin,amoksilin, dan kotrimoksazol (multi-drugresistant = MDR Salmonella typhi) (Bhutta etal., 1994: Bhutta, 1997: Mirza, 1995: Memonet al., 1998).Pada tahun 1984 di Thailanddilaporkan adanya MDR pada demam tifoidanak, selanjutnya diikuti oleh negara lain(Mirza, 1995).

Terdapat 4 jalur mekanisme resistensiantibiotik, yaitu penurunan permeabilitasterhadap antibiotik, adanya proses enzimatik,modifikasi letak reseptor obat, danpeningkatan sintesis metabolit antagonisterhadap antibiotik.

Sampai saat ini baru diketahui empatfaktor tersebut di atas yang dapat memutuskankerja antibiotik, yang selanjutnya dapatmenyebabkan resistensi masih terdapat faktorfisiologi dari mikroorganisme, tetapi hanyasedikit berpengaruh yaitu replikasi genetik sel(transcription, translocation) (Corcoran et al.,1992).

KESIMPULAN1. Teknik Multiplex PCR secara umum

mampu mendeteksi adanya multidrug

resistensi pada penderita demam tifoiddengan menggunakan primer spesifik gencat P pada bands 436 bps terhadapkloramfenikol, dan primer spesifik gen tempada bands 291 bps untuk deteksi resistensiterhadap ampisilin.

2. Terdapat Salmonella typhi yang multidrugresistensi terhadap antibiotik kloramfenikoldan ampisilin, sebanyak 10 sampel (33,3%). Resisten terhadap antibiotikkloramfenikol tetapi sensitif terhadapampisilin sebanyak 5 sampel (16,67 %).Resisten terhadap antibiotik ampisiln tetapisensitif terhadap kloramfenikol sebanyak 5sampel (16,67 %). Tidak reisten (sensitif)terhadap kedua antibiotik sebanyak 10sampel (33,3%). Hal ini berdasarkan hasildari dua uji, yaitu disc diffusion danmultiplex PCR.

3. Berdasarkan jenis kelamin, jumlah pasienyang multidrug resistensi, resisten, dansensitif lebih banyak ditemukan pada pasienberjenis kelamin laki-laki dari padaperempuan.

4. Berdasarkan hasil kedua uji yang dilakukanmenunjukkan diperolehnya sensitivitas danspesivisitas yang sama terhadap antibiotikkloramfenikol dan ampisilin pada sampeldarah.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjutmengenai resistensi antibiotik terhadap S.typhi, khususnya tentang Multi DrugResistensi (MDR). Sedangkan untukdiagnostik resisten kloramfenikol danampisilin disarankan menggunakan teknikmultiplex PCR agar tindakan pengobatan padapenderita demam tifoid cepat dilakukan.

DAFTAR PUSTAKABhutta ZA, Khan IA dan Molla AM. 1994.

Therapy of multidrug-resistant typhoidfever with oral cefixime vs. intravenousceftriaxone. Pediatr Infect Dis J. vol 13:990-994.

Bhutta ZA. 1997. MDR Typhoid: a potentialalgorithmic approach to diagnosis andmanagement. Makalah disajikan padaThird Asia-Pacific Symposium onTyphoid Fever and Other Salmonellosis,Bali, 11 Desember.


Brooks GF, Butel SJ, Morse, Stephan A. 2005.Mikrobiologi Kedokteran. Penerjemahdan Editor, Bagian Mikrobiologi FakultasKedokteran Universitas Airlangga,Salemba. Jakarta: Medika.

Hadinegoro SR. 2007. Masalah Multi DrugResistance pada Demam Tifoid Anak.www.kalbe.co.id. Diakses 3 Juli 2007.

Haque A, Abdul H, Yasra S, Aamir A, Saira B,Ayesha T, and Mushkoor M. 2005.Identification of Drug Resistance Genes inClinical Isolates of Salmonella typhi forDevelopment of Diagnostic MultiplexPCR. Pak. Med. SCI.J. vol 21 (4), 402-407.

Jawetz ZE, Joseph MEAA, Delberg. 2001.Mikrobiologi Kedokteran. Terjemahanoleh Eddy Mudihardi, dkk. BagianMikrobiologi Fak. KedokteranUniversitas Airlangga. Jakarta: SalembaMedika.

Kadang KJ. 2000. Pengenalan Dini DemamTifoid. Makalah Temu Muka danKonsultasi Metode Tepat MengatasiDemam untuk Pengenalan Dini DemamBerdarah dan Tifoid. Bekasi: KlinikAnakku.

Kresno BS. 2001. Imunologi: Diagnosis danProsedur laboratorium Edisi IV. Jakarta:Fakultas Kedokteran, UniversitasIndonesia.

Lay BW. 1994. Analisis Mikroba diLaboratorium. Jakarta: PT. Raja GrafindoPersada.

Mansjoer A, Triyanti K, Savitri R., WardhaniWI, Setiowulan W. 2001. Kapita SelektaKedokteran. Jakarta: Media AesculapiusFakultas Kedokteran UniversitasIndonesia

Memon IA, Billoo AG, and Memon HI. 1998.Cefixime: An oral option for the treatment

of multidrug-resistant enteric fever inchildren. South Med J. vol 90: 1204-7

Mirza SH. 1995. The Prevalence and ClinicalFeatures of Multi-Drug ResistantSalmonella typhi Infections inBaluchistan, Pakistan. Ann Trop Med andParasitol. vol 1 (89): 513-519.

Mirza S, Kariuki S, Mamun KZ, Beeching NJ.and Hart CA. 2000. Analiysis of Plasmidand Cromosomal DNA of Multidrug-Resistant Salmonella enterica SerovarTyphi from Asia. Journal of ClinicalMicrobiology. vol 38 (4): 1449-1452.

Muladno. 2001. Dasar-Dasar Teknik DNA danBeberapa Aplikasinya. Bogor: BalaiPenelitian dan Pengembangan Zoologi,Pusat Penelitian dan PengembanganBiologi LIPI.

Myrvik QN, Russel S, dan Weiser. 1998.Fundamental of Medical Bacteriology andMycology. Philadelphia: Lea and Febiger.

Naim R. 2002. Cara Kerja dan MekanismeResistensi Antibiotik. Harian Kompas.Diakses 20 februari 2008.

Olarte J and Emma G. 1973. Salmonella typhiResistant to Chloramphenicol, Ampicilin,and Other Antimicrobial Agents: StrainIsolated during an Extensive TyphiodFever Epidemic in Mexico. Antimicrob.Agents Chemotherapy J. vol 4: 597-601.

Parkhill J and Dougan G. 1989. CompleteGenom Sequence of a Multiple DrugResistant Salmonella enterica SerovarTyphi CT 18. Cambridge: CambridgeUniversity Press.

Shanahan MA, Philippa, Mary VJ, ChristoperJT and Sabastian GB. 1998. MolecularAnalysis of and Identification ofAntibiotic Resistance Genes in ClinicalIsolates of Salmonella typhi from India.Clinical Microbiology J. vol 36(6): 1595.

447-793-1-sm

Documents