a valódiság problémája a prothrombin vizsgálatokban. a bio ... · a valódiság problémája a...
Post on 21-Jan-2020
1 Views
Preview:
TRANSCRIPT
A valódiság problémája a prothrombin vizsgálatokban. A Bio-Rad Lyphochek
gyártói alkalmazása:egy lépés elıre.
Vajda ZoltánTomai ErzsébetSzén LeventeBuhala ErzsébetAjzner Éva
Horváth ÉvaDiagon Kft., Prodia RT.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
• Some important definition
• Accuracy :The closeness of agreement between a test result and the accepted reference value
• Trueness : The closeness of agreement between the average
• expetcted from a large series of test result and the accepted reference value.
• Bias: The distance between our average results and the reference value.
• Precision : The closeness of agreement between independent test results obtained under stipulated conditions
Az INR képlete
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®
Biological variations of quality specifications
•The problem of "true normal " or normal reference range in the population.
•It depends on;
•Age
•Gender
•Race
•Dietary habits
•Genetics
•The method used for it's determination
•The way of calculation
•Endocrin influences
•Diurnal rythm (it's absence is a sign for disease ! )
•Seasonal variations
•Some unknownDIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Some examples for the biological variations in blood coagulation tests.The difficulty to define the precisenormal reference range:
PT : 10 -15 sec. depending age, smoking,gender ( hormonal status), and haematocritFibrinogen : 2,4 – 3,8 g/L. Every life decade
increase the mean with 0,2 g/L
APTT : Under 12 year it can be prolonged
without haemophilia. DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Sources of variations of measured data
•Biological variation (within subject , between subject )
•Praeanalytical variation ( primary tube, centrifuge , time elapse )
•Random analytical variation (labspecific)
•Variation / bias (instrument/software/reagent specific)
•Quality requirement ; The analytical variation should not exceed the half of the biological variation within the normal reference range .
• 0,5 C.V.% biol > C.V.% anal .
•If this requirement is fulfilled, the function ; normal reference range = (geometric) mean +/- 3 S.D. encompasses the actual normal value with 95% probability (one tail z statistics)l
•Outside of the normal range the proportion between the analytical and biological variability is distorted. The computation of pathological reference range is rather arbitrary. DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Imprecision of pooled healthy plasma prothrombin time
•Offlcial normal (100%) Pooled blood donor plasma by Verband
•vonDeutschen Gerate Hersteller. (DGH)
– Every lot PT was divided by the seconds produced by DGH pool.
– The prothrombin ratios determined by different thromboplastins were different ;
• Type of PT reagent ratio (95% C.I.)
• Rabbit plain 0,98 (0,91 - 1,06)
•
• Rabbit FV supplemented 1,02 ( 0,98 -1,06)
•
• Recombinant 0,93 (0,87 - 0,97 )
Total imprecision ; 2,16 %
It’s impact on INR imprecision is big, because of the mathematical
formula of INR equation INR = (Patient sec./normal sec) power ISI, the denominator's error should be minimalised.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
A torzítás okai:A normál tartomány definitív nehézsége
• 1, A normál plazma sec-ok a legkevébbé mutatják a normál eloszlást ( normál eloszlás = csak random hiba. Ha az eloszlás nem normális akkor szisztematikus hiba vsz.)
• 2, A várható érték ( a laborban ) az átlaggal bizonytalanul közelíthetı, ezért az osztó az INR képeletben hibával terhelt.
• 3, Hemosztázis szempontból ki az egészséges ?Hogy definiálnánk ?
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
A torzítás okai II: Az ISI meghatározás elvi buktatói
• 1, A normál plazmákon és a kumarinizált plazmákon átfektetett regressziós egyenesek iránytangensei gyakran különbözıek, ez az ISI-nek egy hibát ad.
• 2, A regresszió linearizálási hibája (nem mérési hiba) amely abban nyilvánul meg, hogy a regressziós egyenes mentén az antikoagulált plazmák szélsı értékei milyen távol vannak egymástól és számban egymáshoz hogy aránylanak. Így a válogatott minták milyensége függvényében az ISI lehet alul v. felül kalkulált.(Pld. Két nemzetközi centrum ugynazt a PT reagenst közel 0,1 ISI különbséggel minısíti).
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Megj. : Minél alacsonyabb a reagens ISI, a citrát érzékenyég annál kifejezettebb
A torzítás okai III: A hematokrit és citrát viszonya , az eltérı citrát koncentrációjú csövek.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Visszavezethetıség
• 1, Összehasonlító mérések sorozata, ahol egy függvénykapcsolat segítségével az aktuális mérés eredménye egy nemzetközileg, referens módszerrel hitelesített etalon egységgel kifejezhetı.
• 2, Az összehasonlító mérések során a mérések pontatlansága nem adódik össze olyan mértékben, (hibavándorlás) amely együttesen meghaladja a referens módszer konfidencia limitjét az etalonon.
• 3, Az etalon egysége feleljen meg a S.I. Egységek valamelyikének.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Hol sérül a visszavezethetıség a PT esetén?
• 1, Nincs definitív INR etalon (vannak módszerfüggı INR kalibrátorok, de nem széles körben elismertek.)
• 2, Az ISI /INR a nem kumarin kezelt plazmára nem értelmezett ! (Az INR skála 2.0 -nál kezdıdik!!)
• 3, A PT reakció a referens módszer esetén sem fejezhetı ki az S.I. Konform egységgel ( specifikus enzimaktivitás = tömeg / idı)
• A visszavezetési lánc tagjai mentén ( Manchester Std., primer és szekunder WHO standardok, cégek Master lotjai és az aktuális lot-ok) a regressziós hibaterjedés nagyon valószínő, de szisztematikus adatok hiányoznak.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
A WHO PT standardok komplex hierarchiája
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Miért nehéz valódiság kontrollt gyártani ?
• A nyersanyag nyerés módja (zsákos vs. plazmaferezis)
• A feldolgozás technológiája
• A szükséges adalékanyagok minısége és mennyisége
• ( faktorpótlás, konzerválóanyagok, vázképzı anyagok)
• Együttesen a liofilezett kontrollplazma ionereje, pH-ja, faktorkoncentrációja eltér az eredeti kindulási plazmától.
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Mi a követelménye a valódiságkontrollnak ?
• Lehetı leghosszabb lot !
• Jó reproducibilitás
• Jó nyitott stabilitás
• Matrixviszonyai a lehetı legkevésbé torzítók (nem megoldott)
• Bevizsgálás sok laborban
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
Anyag és módszer
• Lyphochek Lot no.: 78141-143• Dia-PT „Master Lot” 920 642 ISI 1,29• Diagon MEO Labor• Prodia laborok• STA-R és Compact
15,014,514,013,5
Median
Mean
14,414,314,214,114,0
1st Quartile 13,925
Median 14,3003rd Quartile 14,400Maximum 14,900
14,015 14,405
14,024 14,400
0,317 0,609
A-Squared 0,38P-Value 0,363
Mean 14,210StDev 0,417Variance 0,174Skewness -0,660631Kurtosis 0,687545N 20
Minimum 13,200
Anderson-Darling Normality Test
95% Conf idence Interv al f or Mean
95% Conf idence Interv al f or Median
95% Conf idence Interv al f or StDev95% Confidence Intervals
Summary for C2
A Dia-PT sec. eloszlása mintákonDIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
15,014,514,013,513,012,5
Median
Mean
14,214,114,013,913,813,713,6
1st Quartile 13,625
Median 13,8003rd Quartile 14,550Maximum 15,200
13,647 14,243
13,700 14,100
0,484 0,930
A-Squared 0,72P-Value 0,052
Mean 13,945StDev 0,637Variance 0,406Skewness 0,078373Kurtosis 0,410957N 20
Minimum 12,500
Anderson-Darling Normality Test
95% Conf idence Interv al f or Mean
95% Conf idence Interv al f or Median
95% Conf idence Interv al f or StDev95% Confidence Intervals
Summary for C1
A Dia-PT Masterlot sec. eloszlása a Level I-en DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
1,041,000,960,920,88
Median
Mean
0,98000,97750,97500,97250,97000,96750,9650
1st Quartile 0,95713Median 0,974233rd Quartile 0,98281Maximum 1,04323
0,96470 0,97939
0,96567 0,97423
0,02504 0,03561
A-Squared 0,88P-Value 0,023
Mean 0,97204StDev 0,02940Variance 0,00086
Skewness 0,08132Kurtosis 1,29677N 64
Minimum 0,88089
Anderson-Darling Normality Test
95% Conf idence Interv al f or Mean
95% Conf idence Interv al f or Median
95% Conf idence Interv al f or StDev95% Confidence Intervals
Summary for Lev1INR
Az INR –ek eloszlása a Lyphochek level I-enDIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
3,63,53,43,33,23,13,0
Median
Mean
3,283,263,243,223,20
1st Quartile 3,1595Median 3,24213rd Quartile 3,3200Maximum 3,5900
3,2087 3,2734
3,2048 3,2813
0,1164 0,1628
A-Squared 0,42P-Value 0,323
Mean 3,2411StDev 0,1357Variance 0,0184
Skewness 0,101845Kurtosis 0,356834N 70
Minimum 2,9600
Anderson-Darling Normality Test
95% Conf idence Interv al f or Mean
95% Conf idence Interv al f or Median
95% Conf idence Interv al f or StDev95% Confidence Intervals
Summary for lev.2INR
A level II INR értékei eloszlása DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
6543210
Median
Mean
5,45,35,25,1
1st Quartile 5,0790Median 5,31603rd Quartile 5,5257Maximum 6,3800
5,0686 5,4149
5,1900 5,3998
0,6225 0,8712
A-Squared 6,28
P-Value < 0,005
Mean 5,2418StDev 0,7260Variance 0,5271Skewness -5,4970Kurtosis 40,0479N 70
Minimum 0,0000
Anderson-Darling Normality Test
95% Conf idence Interv al f or Mean
95% Conf idence Interv al f or Median
95% Conf idence Interv al f or StDev95% Confidence Intervals
Summary for Lev.3INR
A Level III INR értékei eloszlásaDIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
A Lyphochek reagensgyártói alkalmazásával szerzett kedvezı tapasztalatok
• 1, A reagens gyártás közben segít a reagens MNPT beállításában
• 2, A három szintő kontroll jelentısen megkönnyíti a vonalkódos kalibrációs egyenes egyenletének kiszámolását
• 3, A elegendıen hosszú terméksorozat segíti a hosszúidın keresztüli lot-to lot consistency megtartását
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
A Lyphochek alklamazásával feltételezhetıelınyök a reagens felhasználói oldalon
• 1, A %-os értékeken keresztül megbízhatóbb információt kapunk az MNPT értékérıl
• 2, A szériahosszúság miatt a felhasználóobjektív képet formálhat a PT reagens ingadozásáról
• 3, A level II és level III INR értékei a diagon Master lottal lettek megállapítva, melyek közvetlen kapcsolatban vannak a WHO PT standarddal
DIAGONDIAGONDIAGONDIAGON®®®® Ltd.Ltd.Ltd.Ltd.
top related