amplificação do flo10

Amplificação do FLO10

1-     Lambda Hind III2-     FLO10 amplificado da linhagem laboratorial W3031a 3-     FLO10 amplificado da linhagem industrial GA001 4-     FLO10 amplificado da linhagem industrial FleischmanFLO10 amplificado da linhagem industrial Pedra2

COM GLICOSE SEM GLICOSE

UniformeDuas fases

(Fase superior ainda turva)

Fleischman Selvagem Fleischman Transformada

Uniforme Duas fases

Fleischman Selvagem Fleischman Transformada

pYADE4

ADH2 FLO5 MOX-BB

YEp-FLO5 pUC-BB

ClaISmaI(SphI) ClaI SacI HincII

pYADE4-FLO5

(SphI)/SmaI ClaI SmaI/HincII

SacI

SacI

YEp352-MOXBB-FLO5

YEp352

NI FLO5 MOXBB-FLO5

A. B. C.YEp352

NI FLO5 MOXBB-FLO5

12 14 16 18 20 22pYADE4-FLO5 (C)

-0,5

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 10 20 30

Time (h)

glu

cose

co

nce

ntr

atio

n

(%)

YEp352 YEP352-FLO1

pYADE4-FLO1 YEP352-FLO1-BB

YEp352-BB-FLO5 (D)12 14 16 18 20 22

YEp 352 (A) YEp352-FLO5 (B) 12 14 16 18 20 22 12 14 16 18 20 22

Determination of glucose concentration (E)

pYADE4 pGEM-T-FLO10

FLO5

Sal IBamH I

pYADE4-FLO10

BamH I Sal I

ADH2

BamH I Sal I

12 14 16 18 20 22pYADE4-FLO5 (C)

-0,5

0

0,5

1

1,5

2

2,5

0 10 20 30

Tempo (h)

Co

nce

ntr

ação

de

glic

ose

(%

)

YEp352 YEP352-FLO1

pYADE4-FLO1 YEP352-FLO1-BB

YEp352-BB-FLO5 (D)12 14 16 18 20 22

YEp 352 (A) YEp352-FLO5 (B) 12 14 16 18 20 22 12 14 16 18 20 22

Determinação da concentração de glicose (E)

1° estágio 2° estágio 3° estágio 4° estágio

TRATAMENTO

MOSTO

ESTÉRIL

INÍCIO DE PRODUÇÃO Vinho para a destilaria

300 l50 l 12.000 l 150.000 l

400.000 litros por dorna

* * * * * * *

Pré inóculoS. cerevisiae

Centifugação

Crossing

pYADE4-FLO5

ADH2CAN1 CAN1FLO5

ADH2 FLO5

Gene CAN1 no cromossomo

PCR

Construção se integra no cromossomoADH2CAN1 FLO5 CAN1