anÁlisis de criterios y requisitos internacionales para determinar la biocomparabilidad de...
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1
FACULTAD DE QUÍMICA
ANÁLISIS DE CRITERIOS Y REQUISITOS
INTERNACIONALES PARA DETERMINAR LA
BIOCOMPARABILIDAD DE PRODUCTOS QUE
CONTIENEN ERITROPOYETINA
TRABAJO ESCRITO VÍA CURSOS DE EDUCACIÓN CONTINUA
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE:
QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO
PRESENTA:
JOSÉ MIGUEL PADILLA VALDEZ
MÉXICO, D.F. 2015
2
JURADO ASIGNADO:
PRESIDENTE: INÉS FUENTES NORIEGA.
VOCAL: HELGI HELENE JUNG COOK.
SECRETARIO: KENNETH RUBIO CARRASCO.
1er. SUPLENTE: ROBERTO CARLOS CAÑAS ALONSO.
2° SUPLENTE: JORGE RAFAEL MARTÍNEZ PENICHE.
SITIO DONDE SE DESARROLLÓ EL TEMA:
UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE QUÍMICA.
EDIFICIO D, DEPARTAMENTO DE EDUCACIÓN CONTINÚA.
CIRCUITO INSTITUTOS, CIUDAD UNIVERSITARIA, CP. 04510.
ASESOR DEL TEMA:
___________________________
Dra. Helgi Helene Jung Cook.
SUSTENTANTE:
___________________________
José Miguel Padilla Valdez.
3
ÍNDICE.
ABREVIATURAS……………………………………………………….. 4
1. INTRODUCCIÓN ……………………………………………………….. 5
2. OBJETIVOS ……………………………………………………………... 6
3. GENERALIDADES ……………………………………………………… 6
3.1 Medicamentos Biotecnológicos …………………………………. 6
3.2 El Eritrocito ………………………………………………………… 9
3.3 Eritropoyetina ……………………………………………………... 10
3.4 Estructura Bioquímica de la Eritropoyetina ……………………. 11
3.5 Estructura Bioquímica del Receptor de la Eritropoyetina ……. 13
3.6 Vías de Señalización de la Eritropoyetina ……………………... 14
3.7 Eritropoyetina Recombinante Humana ………………………… 15
3.8 Tipos de rHuEPO y Agentes Estimuladores de la
Eritropoyetina ………………………………………………………
16
3.9 Medicamentos Biosimilares ……………………………………... 21
3.10 Eritropoyetina Humana Recombinante Biosimilar …………… 23
4. METODOLOGÍA ………………………………………………………… 24
5. RESULTADOS ………………………………………………………….. 28
6. DISCUSIÓN ……………………………………………………………… 49
7. CONCLUSIONES ……………………………………………………….. 54
8. BIBLIOGRAFÍA ………………………………………………………….. 55
4
ABREVIATURAS
BFU-E Unidad Eritroide Estimulante de la Eritroaceleración.
CFU-E Unidad formadora de Colonias Eritrocítica.
CFU-GEMM
Unidad formadora de colonia Granulocito, Eritrocito, Megacariocito,
Monocito.
EPO Eritropoyetina.
EPO-R Receptor de Eritropoyetina.
FLT-3L Ligando de la Tirosina Fetal 3.
GM-CSF Factor Estimulante de colonias de Granulocitos y Monocitos.
Hb Hemoglobina.
IL-3 Interleucina 3.
IL-4 Interleucina 4.
JAK2 Proteína Janus Kinase 2.
rHuEPO Eritropoyetina Recombinante Humana.
SAT
Proteínas Transductoras y Activadoras de las señales de
Transducción.
SCF Factor de Células seminales.
TPO Trombopoyetina.
5
1. INTRODUCCIÓN.
Los medicamentos obtenidos por biotecnología constituyen una nueva perspectiva
y representan el futuro de la terapéutica médica en el tratamiento de
enfermedades crónicas. Entre los productos desarrollados mediante biotecnología
se encuentran los fármacos constituidos por proteínas expresadas y producidas
con métodos de ingeniería genética y tecnología de recombinación de ADN, pero
también anticuerpos monoclonales producidos por tecnología de hibridación,
vectores (virus, moléculas lipídicas) para la transferencia genética, fragmentos de
anticuerpos, moléculas antisentido y vectores lipídicos para la formulación de
fármacos. Los medicamentos biotecnológicos reducen la mortalidad prematura,
disminuyen la morbilidad y, mejoran la calidad de vida de los pacientes.
El primer fármaco biotecnológico que salió al mercado fue la insulina humana
recombinante en el año de 1982. A principios del 2004, las patentes de la primera
generación de medicamentos biotecnológicos comenzaron a expirar, dejando las
puertas abiertas a otros fabricantes para producirlos. Actualmente se
comercializan en nuestro país, una serie de medicamentos biotecnológicos cuya
patente ha vencido, entre los cuales se encuentran: somatropina, interferón alfa-
2b, interferón beta-1a, interferón beta-1b, filgrastim, eritropoyetina, y antígeno
VHB. Debido a los altos costos de los innovadores, estos son intercambiados en la
práctica clínica (por las copias), sin embargo, no se conoce con certeza si estos
productos cumplen con las características que avalen su comparabilidad. A la
fecha, se han publicado diferentes guías y procedimientos para llevar a cabo las
pruebas que garanticen la similitud entre el producto innovador y los productos de
entrada subsecuente.
6
2. OBJETIVO.
El objetivo del presente trabajo fue realizar una revisión de los criterios y requisitos
para evaluar la Biocomparabilidad de productos conteniendo eritropoyetina.
3. GENERALIDADES.
3.1 MEDICAMENTOS BIOTECNOLÓGICOS.
En la actualidad, la industria Farmacéutica es uno de los sectores empresariales
más influyentes del mundo. Se encuentra conformada por numerosas
organizaciones públicas y privadas enfocadas a realizar la investigación, el
desarrollo, fabricación y comercialización de medicamentos para la prevención o
tratamiento de las enfermedades humanas y animales. Existen diferentes
definiciones que se pueden utilizar para un medicamento, en nuestro país la
definición que se encuentra dentro del marco regulatorio de la Ley General de
Salud en su artículo 221 se refiere a un medicamento como:
“Toda sustancia o mezcla de substancias de origen natural o sintético que tenga
efecto terapéutico, preventivo o rehabilitatorio, que se presente en forma
farmacéutica y se identifique como tal por su actividad farmacológica,
características físicas, químicas y biológicas”. Cuando un producto contenga
nutrimentos, será considerado como medicamento, siempre que se trate de un
preparado que contenga de manera individual o asociada: vitaminas, minerales,
electrólitos, aminoácidos o ácidos grasos, en concentraciones superiores a las de
los alimentos naturales y además se presente en alguna forma farmacéutica
definida y la indicación de uso contemple efectos terapéuticos, preventivos
o rehabilitatorios” (Ley General de Salud, 2013).
En base a lo establecido previamente se puede definir de forma general que un
medicamento es una sustancia terapéutica que se utiliza para prevenir o tratar
7
enfermedades. Gracias a los avances realizados en las últimas décadas en el
campo de la biotecnología hoy en día se cuenta con un nuevo tipo de
medicamentos, los medicamentos biotecnológicos, a partir de los cuales se han
desarrollado nuevos tratamientos seguros y eficaces que han revolucionado el
campo de la medicina (Mikhail, A. 2013). En la actualidad ya se encuentran en el
mercado una gran variedad de medicamentos biotecnológicos entre los cuales se
encuentran: las proteínas recombinantes, los anticuerpos monoclonales, los
péptidos sintéticos y los plásmidos, entre otros. Entre los ejemplos más
destacados de medicamentos biotecnológicos que se utilizan actualmente se
pueden mencionar son: la eritropoyetina, indicada en el tratamiento de cuadros
anémicos, la insulina, indicada en el tratamiento de pacientes que padecen algún
tipo de diabetes y los interferones, empleados en el tratamiento de enfermedades
inflamatorias (Mikhail, A. 2013).
En nuestro país dentro del marco regulatorio del Reglamento de Insumos para la
Salud (RIS) en su artículo 81 define a un medicamento Biotecnológico como:
“Toda substancia que haya sido producida por biotecnología molecular, que tenga
efecto terapéutico, preventivo o rehabilitatorio, que se presente en forma
farmacéutica, que se identifique como tal por su actividad farmacológica y
propiedades físicas, químicas y biológicas” (Reglamento de Insumos para la
Salud, 2012).
Los medicamentos biotecnológicos se caracterizan por ser moléculas grandes y
complejas que se obtienen por elaborados procesos de producción en los cuales
el producto final es totalmente dependiente de cada una de las etapas del proceso
de fabricación. Los medicamentos biotecnológicos se obtienen empleando “células
vivas”, es decir, microorganismos o líneas celulares que han sido modificadas
genéticamente para la producción de una molécula deseada (Mikhail, A. 2013).
Como consecuencia, una de las características que resaltan en este tipo de
medicamentos es la gran variabilidad que puede existir en el medicamento al
finalizar el proceso de fabricación. Dicha variabilidad puede ocasionar alteraciones
clínicamente significativas en términos de seguridad y eficacia del producto final, o
bien provocar una respuesta inmunitaria no deseada en el paciente.
8
Otra de las principales diferencias de estos nuevos medicamentos está
relacionada con el tamaño de la molécula, la cual generalmente es mucho mayor
en los medicamentos biotecnológicos (de 100 a 1000 veces mayor en algunos
casos). Sin embargo, la diferencia más significativa de este tipo de
medicamentos y que es causa de múltiples debates por los investigadores radica
en la estructura de la molécula. Debido a que de forma general estos
medicamentos son clasificados bioquímicamente como proteínas (en algunos
casos péptidos), las características particulares de cada tipo de proteína se
encuentran determinadas principalmente por dos factores de variación, el primer
factor radica en la secuencia de aminoácidos propia de la proteína y el segundo
se atribuye a los diferentes plegamientos así como las configuraciones espaciales
que puede adquirir la molécula. Al combinar estos factores se puede obtener una
explicación de la variabilidad y la dificultad que pueden presentar estos
medicamentos al tratar de obtener las versiones genéricas de los mismos.
La fabricación de los medicamentos biotecnológicos es un proceso muy exigente.
A continuación se describen las etapas generales del proceso:
1. Producción de la línea celular maestra que contiene el gen que permite
fabricar la proteína deseada.
2. Cultivo de grandes cantidades de células que producirán posteriormente la
proteína deseada.
3. Aislamiento y purificación de la proteína.
4. Preparación del tratamiento biológico para su uso en paciente.
En cada paso de este proceso, es fundamental mantener el entorno específico
que las células necesitan para seguir creciendo. Incluso los cambios sutiles
pueden afectar a las células y alterar las proteínas que producen (Amgen, 2014).
Por este motivo, se necesitan controles estrictos para garantizar la calidad y la
reproducibilidad del producto final.
9
3.2 EL ERITROCITO.
El término “anemia” se refiere por lo general a un estado en el cual la sangre tiene
un número menor de glóbulos rojos y hemoglobina de lo normal. Debido a lo
anterior, la sangre no tiene la capacidad de transportar la suficiente cantidad de
oxígeno a las células. En la actualidad se han descrito diversos tipos de anemias,
sin embargo las causas principales que provocan este padecimiento son: la falta
de producción de glóbulos rojos, un aumento en la velocidad de destrucción de
los glóbulos rojos y un aumento en la pérdida de glóbulos rojos por algún tipo de
sangrado (Guía Breve Sobre la Anemia, 2011).
Los glóbulos rojos o eritrocitos tienen como función principal transportar el oxígeno
desde los pulmones a los tejidos y eliminar el dióxido de carbono como desecho
del metabolismo de las células (Alegre, A. 2005). Para lograrlo, los glóbulos rojos
utilizan la proteína hemoglobina (Hb), la cual ocupa una tercera parte del volumen
total de los mismos. Dicho de otra manera la misión de los hematíes es proteger y
transportar la Hb para que ésta pueda realizar su función respiratoria. Para ello,
tanto el núcleo como las estructuras citoplasmáticas han sido reemplazadas por
una solución concentrada de Hb, en la que también se encuentran enzimas,
encargadas de mantener un reducido metabolismo celular (Palomo, I. 2009). Al no
tener núcleo, el eritrocito no puede replicarse ni sintetizar nuevas proteínas por lo
que los sistemas metabólicos de los hematíes se hacen progresivamente menos
activos con el tiempo, y las células se hacen más frágiles, debido a lo anterior el
tiempo de vida de un eritrocito en circulación sistémica es de aproximadamente
120 días (Palomo, I. 2009).
La eritropoyesis (formación de eritrocitos), es el proceso que se lleva a cabo en la
médula ósea mediante el cual se generan los eritrocitos a partir de una célula
madre pluripotente o progenitora. Durante este proceso, los eritrocitos pasan a
través de diferentes estadios de maduración transformándose en células cada vez
más especializadas, hasta alcanzar la circulación sanguínea (Palomo, I. 2009).
10
Los eritrocitos se desarrollan a partir de la célula madre mieloide multipotencial
(CFU-GEMM) bajo la influencia de distintas citocinas como: la hormona
eritropoyetina (EPO), el factor estimulante de colonias de granulocitos y
monocitos (GM-CSF), la interleucina 3 (IL-3) y la interleucina 4 (IL-4). La célula
progenitora eritrocítica sensible a la eritropoyetina (CFU-E), da origen al primer
precursor eritrocítico reconocible el proeritroblasto (Palomo, I. 2009). El proceso
de maduración y diferenciación se encuentra caracterizado por: la síntesis
progresiva de hemoglobina, la reducción del tamaño nuclear y posteriormente la
expulsión del núcleo (como se observa en la figura 1) (Palomo, I. 2009). Es
importante mencionar que durante este proceso, la eritropoyetina (EPO) actúa
como una de las principales citocinas reguladoras en el proceso de maduración y
diferenciación del eritrocito (Jelkmann, W. 2003).
FIGURA 1. Etapas de la Eritropoyesis. (Tomado de Cummings, Benjamin. 2001).
3.3 LA ERITROPOYETINA
La eritropoyetina (EPO) es una hormona glucoproteica de 30.4 kDa compuesta
por 165 aminoácidos, la cual es secretada en respuesta a la hipoxia celular
(Jelkmann, W. 2011). Esta molécula es producida principalmente por las células
renales y en menor proporción por células hepáticas y actúa como una de las
principales citocinas reguladoras de la eritropoyesis (Palomo, I. 2009). Como se ha
mencionado, la hipoxia es el principal estímulo para su producción, sin embargo
algunas otras condiciones que desencadenan la producción de la EPO son: la
disminución de la hemoglobina en la sangre, la hipoglucemia, la disminución de la
11
presión arterial, el aumento del calcio intracelular, la liberación de insulina y las
altas temperaturas (Jelkmann, W. 2003).
La actividad principal de la EPO es controlar la producción de células eritroides a
través de la promoción de la sobrevivencia, proliferación y diferenciación de
progenitores eritroides en la médula ósea. En las células progenitoras eritroides
tempranas (BFU-E), la EPO actúa como agente mitogénico y promueve su
proliferación, mientras que en progenitores eritroides tardíos (CFU-E), actúa como
agente de sobrevivencia (Miyajima, A. 1999). Es importante destacar que además
de la EPO, existen otras citocinas como: interleucina 3 (IL-3), trombopoyetina
(TPO), ligando de la tirosina fetal 3 (FLT-3L) y el factor de células seminales (SCF)
que también participan en la eritropoyesis. Estas citocinas son capaces de actuar
de forma sinérgica con la EPO y regular la proliferación, diferenciación y
sobrevivencia de células progenitoras y precursores eritroides (Oppenheim, J.
2001).
3.4 ESTRUCTURA BIOQUÍMICA DE LA EPO.
La EPO humana es una hormona que se encuentra conformada por dos partes. La
primera parte de esta hormona consta de 165 aminoácidos, la cual es la
responsable de la unión al receptor de EPO (EPO-R) (Jelkmann, W. 2005). La
segunda corresponde a la parte glicosilada y constituye el 35 – 40 % de la
molécula. La función que desempeñan estos carbohidratos es de resaltar, ya que
mejoran la estabilidad y prolongan el tiempo de vida media de la EPO en la
circulación sistémica (Alegre, A. 2005). La EPO es una Glicoproteína compuesta
por cuatro cadenas helicoidales unidas de forma antiparalela. Los carbohidratos
de esta molécula impiden la unión al EPO-R a través de fuerzas electrostáticas.
Además, la abundancia en residuos de ácido siálico disminuye la afinidad por el
receptor, pero aumenta la actividad de la EPO al prolongar el tiempo de vida
media debido a que disminuye su degradación.
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Señala las N- Glicosilaciones.
Señala las O-Glicosilaciones.
La estructura terciaria de la proteína se compone de 4 hélices-α antiparalelas, con
dos puentes disulfuro que se establecen entre cuatro cisteínas (Alegre, A. 2005).
La EPO humana se encuentra glicosilada en cuatro lugares distintos a lo largo
de la secuencia de aminoácidos. Como se observa en la figura 2, existen tres N-
Glicosilaciones en Asp24, 38, 83 y una O-Glicosilación en Ser126 de la cadena
de aminoácidos (Jelkmann, W. 2005). Es importante destacar que el número de
glicosilaciones y la cantidad de carbohidratos afectan las propiedades
farmacocinéticas de la misma en condiciones fisiológicas.
FIGURA 2. Patrón de Glicosilación de la EPO. Se muestran los sitios de glicosilación en la
cadena de aminoácidos de la EPO (Danishefsky, Samuel. 2013).
El contenido de carbohidratos de la molécula de EPO es del 35%. Los
carbohidratos de la glicoproteína son principalmente ácido siálico (11 %), hexosas,
N-Acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina y ácido N-acetilneuramínico.
13
La estructura y composición de los carbohidratos de la molécula de EPO son
importantes para el mantenimiento de la hormona en circulación. El ácido siálico
es necesario para el mantenimiento de la actividad biológica “in vivo”. La remoción
química o enzimática del ácido siálico, “desialación”, expone un residuo
galactosílico en la molécula que puede entonces ligarse rápidamente a receptores
de galactosa en los hepatocitos, lo que determina su metabolismo casi inmediato
en el hígado.
La glicosilación de la EPO también es necesaria para el transporte plasmático de
la hormona y para el paso de la misma desde la sangre a la médula ósea a través
de las células endoteliales de la barrera sangre-médula ósea.
La molécula de EPO humana posee 4 cisteínas ligadas por puentes internos de
disulfuro entre las cisteínas 29-33 y 7-161, cuya conservación es necesaria para el
mantenimiento de la actividad biológica. En tal sentido, la alquilación de los grupos
sulfhidrilos produce una pérdida irreversible de la actividad eritropoyética.
3.5 ESTRUCTURA BIOQUÍMICA DEL RECEPTOR DE EPO.
El receptor de la eritropoyetina (EPO-R) es un homodímero, por lo que se
encuentra conformado por dos cadenas de glicoproteínas de 484 aminoácidos
cada una de ellas, las dos sub-unidades del EPO-R se unen a una sola molécula
de EPO para poder ser activados (Alegre, A. 2005). El EPO-R se expresa
principalmente en las membranas de células inmaduras, se encuentra en mayor
proporción en las células progenitoras eritroides como CFU-E y BFU-E. Este
receptor pertenece a la familia de receptores de citocinas tipo 1, los receptores de
dicha familia se caracterizan por estar conformados por tres secciones bien
diferenciadas: una porción extracelular, una región transmembranal y finalmente
una porción intracelular (Jelkmann, W. 2005), las partes del receptor se muestran
en la figura 3. La región extracelular es la responsable de la dimerización de las
dos moléculas del receptor tras activarse con la unión de la EPO. La región
transmembranal se encuentra involucrada en la formación de dímeros y
multímeros constitutivamente activos. Finalmente la región intracelular se
encuentra involucrada en las distintas vías de señalización (Alegre, A. 2005).
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FIGURA 3. Estructura del EPO-R. Se muestran la región extracelular en color verde, la región
transmembranal en color morado y la región intracelular en color violeta
(Tomado de Brines & Cerami, 2005).
3.6 VIAS DE SEÑALIZACIÓN DE LA EPO.
Para que la EPO pueda llevar a cabo sus funciones en la maduración de las
células progenitoras eritroides, es necesario que se una a su receptor específico
(EPO-R). Como consecuencia de la unión de la EPO a su receptor se
desencadenarán una serie de cambios a nivel molecular. En primer lugar el
EPO-R sufre un cambio conformacional y la formación de un dímero estable en la
superficie de la célula (Alegre, A. 2005). Posteriormente, las proteínas cinasas
JAK2 (Janus kinase 2) que se encuentran asociadas a cada unidad del receptor
en la región citoplasmática se activan por transfosforilación. La fosforilación de las
proteínas JAK2 les permite fosforilar posteriormente a los residuos de tirosina
presentes en la región citoplasmática del EPO-R (Jelkmann, W. 2003). En estos
residuos fosforilados se crean sitios de unión a los cuales se les pueden unir
distintas moléculas que desencadenarán las distintas vías de señalización (como
se observa en la figura 4), una de las vías que se activa tras la unión de la EPO a
su receptor específico es la vía JACK/STAT (Alegre, A. 2005).
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FIGURA 4. Principales vías de la señalización activadas por la unión de la EPO a su receptor.
Se muestran las vías JACK/STAT, MAPK y PI3K/AKT (Tomado de Jelkmann, W. 2005).
En la activación de la vía JACK/STAT las proteínas STAT (proteínas
Transductoras y Activadoras de las señales de Transcripción) se unen a los
residuos de tirosina fosforilada, para que posteriormente estas proteínas STAT
sean fosforiladas por las proteínas JACK, tras esta fosforilación las proteínas
STAT se dimerizan para que posteriormente se puedan translocar al núcleo de la
célula en donde activan la transcripción de los genes relacionados con la
proliferación y la diferenciación eritroide (Valle Mendiola & Soto Cruz, 2005).
3.7 ERITROPOYETINA RECOMBINANTE HUMANA.
Hoy en día gracias a los distintos avances en al campo de la biología molecular
y otras disciplinas de la ciencia, el ser humano cuenta con una gran variedad de
medicamentos biotecnológicos que han revolucionado las opciones terapéuticas
para un gran número de padecimientos que no contaban con opciones de
tratamiento en el pasado. Entre los medicamentos biotecnológicos más
destacados de los últimos 25 años figura la eritropoyetina recombinante
16
humana (rHuEPO), la cual es ampliamente utilizada en el mundo (García, F.
2011).
En 1977 Miyake y colaboradores purificaron a partir de orina humana a la
molécula de la EPO (Miyake, K, Kung, & Goldwasser, 1977), lo que permitió
dilucidar la secuencia de aminoácidos y la clonación del gen que posteriormente
fue expresado en células CHO (del inglés Chinese Hamster Ovary cells) dando
como resultado la rHuEPO (Fu Ken, Siddney, Chi Hweling, & Jeffrey, 1985).
Posteriormente, Eschbach y col. publicaron el primer ensayo clínico, demostrando
una corrección en la anemia causada por la insuficiencia renal terminal (IRT)
mediante la utilización de EPO humana recombinante (rHuEPO). Desde entonces,
se estableció la utilidad de la terapia con rHuEPO para mejorar otras anemias
asociadas diversos padecimientos como: La falla renal crónica, distintos tipos de
cáncer, enfermedades autoinmunes, VIH, Hepatitis C, entre otras (Jelkmann, W.
2003). Es importante señalar que hoy en día en los casos de anemias severas la
rHuEPO es utilizada para incrementar los niveles de eritrocitos y evitar de esta
forma el riesgo de contraer posibles infecciones post- transfusionales y mejorar la
calidad de vida del paciente (Jelkmann, W. 2003).
3.8 TIPOS DE rHuEPO Y AGENTES ESTIMULADORES DE LA ERITOPOYETINA.
De acuerdo a la Organización Mundial de la Salud (OMS) es necesario asignar
una Denominación Común Internacional (DCI, también llamado INN por sus siglas
en Ingles) para nombrar a las sustancias biológicas o biotecnológicas (World
Health Organization, 2008). La raíz utilizada para designar a los factores
biológicos tipo eritropoyetina es: “poetin”. Esta raíz debe ser designada a todas las
Eritropoyetinas que tengan la misma secuencia de aminoácidos que la
Eritropoyetina Humana. Además, se debe designar una letra griega para denotar
una diferencia en el patrón de glicosilación entre las eritropoyetinas (ej. Epoetin
alfa, Epoetin beta). Finalmente, si existe una diferencia en la secuencia de
aminoácidos en comparación con la Eritropoyetina Humana se debe utilizar un
prefijo distinto en la raíz del nombre principal (ej. Darbepoetina) (WHO, 2008).
17
Desde su aprobación por la FDA en 1989 la rHuEPO y los agentes estimuladores
de eritropoyetina (ESA, Erythropoietin Stimulating Agents) se han convertido en
un estándar en el tratamiento de la anemia causada por la deficiencia en la
producción de la EPO (Hayat, Dhiren , & Moro O , 2008) como es el caso de los
pacientes que sufren una enfermedad renal crónica.
Las primeras eritropoyetinas recombinantes humanas que estuvieron disponibles
en el mercado fueron la Epoetin-alfa y la Epoetin-beta hace ya aproximadamente
25 años. En ambos casos la secuencia de aminoácidos es exactamente igual, sin
embargo la diferencia principal entre ellas radica en el patrón de glicosilación
(Casadevall, N. 2009), debido a esta diferencia los tiempos de vida media entre la
Epoetin-alfa y la Epoetin-beta mostraron ser distintos en cada caso.
La mayor desventaja de estas eritropoyetinas radicó en el tiempo de vida media
corto en circulación sistémica, de 6 a 8 horas, por lo que era necesario administrar
una inyección dos o tres veces por semana (Macdougall, C. 2008).
Posteriormente, se desarrollaron la Epoetin–omega y la Epoetin-delta, la
diferencia en este tipo de eritropoyetinas en comparación con la Epoetin-alfa y la
Epoetin-beta radicó en la línea celular utilizada para su producción (tabla 1). De
forma general al conjunto de estas eritropoyetinas se les denominó de primera
generación, a pesar de que se utilizaron líneas celulares distintas para su
producción, estas eritropoyetinas presentaban 2 cosas en común, la misma
secuencia de 165 aminoácidos que la eritropoyetina endógena y un tiempo de vida
media corto en circulación sistémica (Macdougall, C. 2008).
Posteriormente, las empresas farmacéuticas se enfocaron en desarrollar nuevos
tipos de eritropoyetinas que presentaran un mayor tiempo de vida media en
circulación sistémica, disminuyendo así la necesidad de varias administraciones
en los pacientes.
La siguiente generación de eritropoyetinas tuvo como objetivo el desarrollo de
eritropoyetinas con una mayor duración en circulación sistémica. Darbepoetin alfa
se catalogó como una eritropoyetina de segunda generación, ya que se
caracterizó por triplicar el tiempo de vida media en circulación sistémica. Para
lograrlo se adicionaron cinco aminoácidos a la secuencia original de la
18
eritropoyetina endógena permitiendo así dos sitios de N-glicosilaciones adicionales
en la molécula lo cual dio como resultado un incremento significativo en el tiempo
de vida media (Macdougall, C. 2008).
La tercera generación de eritropoyetinas se encuentra representada por el
“Activador Continuo del Receptor de la Eritropoyetina” (CERA, Continuos
Erythropoietin Receptor Activator), cuyo nombre comercial es Mircera ®, su
característica principal radica en la adición de una cadena de metoxi-
polietilenglicol a la secuencia de aminoácidos de la Epoetin-beta (Lys 45 o Lys 52)
(Thieme & Hemmersbach, 2010). Debido a esta adición se incrementó el tamaño
de la molécula de 30 kDa a 60 kDa, además se observó un incremento
significativo en el tiempo de vida media, aproximadamente de 130 horas,
permitiendo así reducir el esquema de dosificación a una sola administración del
medicamento cada dos semanas (Thieme & Hemmersbach, 2010).
19
TABLA1. Tipos de Eritropoyetinas recombinantes Humanas y Eritropoyetinas Biosimilares
( Modificado de Thieme D. 2010 ).
DENOMINACIÓN
COMÚN
INTERNACIONAL
NOMBRE
COMERCIAL
TIEMPO DE
VIDA MEDIA
t ½ ( Horas )
COMPAÑÍA
FARMACÉUTICA
LÍNEA
CELULAR
Primera Generación
Epoetin-alfa. Epogen®. Procrit®. Eprex®.
IV: 4 - 13. IV: 4 - 13. IV: 4 - 6.
Amgen. Ortho Biotech. Janssen-Ortho.
CHO
Epoetin-beta.
Recormon®. NeoRecormon®
IV: 4 - 12. SC: 13 - 28.
Boehringer Mannheim. Roche.
CHO-DN2-3α3
Epoetin-omega. EpoMax®.
Elanex®. Epomega®. Repotina®.
SC: 23 - 33
Elanex
Pharmaceuticals.
Baxter
BHK
Epoetin-delta.
Dynepo®.
IV: 7 - 20. SC: 18 - 20.
Shire Pharmaceuticals
Human Fibrosarcoma cell Line HT- 1080
Segunda Generación
Darbepoetin
Alfa.
Aranesp® IV: aprox. 25 SC: 27 - 89
Amgen
CHO
Tercera Generación
Continuous
Erythropoietin Receptor Activator (CERA)
Mircera®. IV: 134 ± 65 SC: 139 ± 69
Roche
CHO
BHK: Baby Hamster Kidney cells. CHO: Chinese Hamster Ovary cells.
IV: Administración Intravenosa. SC: Administración Sub-Cutánea.
20
TABLA1. (Continuación) Tipos de Eritropoyetinas recombinantes Humanas y Eritropoyetinas
Biosimilares
( Modificado de Thieme D. 2010 ).
DENOMINACIÓN
COMÚN
INTERNACIONAL
NOMBRE
COMERCIAL
TIEMPO DE
VIDA MEDIA
t ½ ( Horas )
COMPAÑÍA
FARMACÉUTICA
LÍNEA
CELULAR
B I O S I M I L A R E S
Epoetin-alfa HX575.
Abseamed®.
Binocrit®.
Epoetin alfa Hexal®.
IV: 4 – 5 SC: aprox. 24
IV: 4 – 6
SC: aprox. 24
IV: 4 – 6 SC: aprox. 24
Medice Arzneimittel Putter. Sandoz GmbH. Hexal Biotech. CHO
Epoetin-zeta SB309
Retacrit®
Epobel®
IV: 4 – 6 SC: aprox. 24
IV: 4 – 6
SC: aprox. 24
Hospira. STADA
BHK: Baby Hamster Kidney cells. CHO: Chinese Hamster Ovary cells.
IV: Administración Intravenosa. SC: Administración Sub-Cutánea.
21
3.9 MEDICAMENTOS BIOSIMILARES.
Desde la aprobación de la insulina humana recombinante en 1982 se ha
observado un incremento en la aceptación de un número mayor de medicamentos
biológicos por parte de las distintas entidades regulatorias como los son la EMA y
la FDA ( Mikhail & Farouk, 2013). Durante los últimos años muchas de las
patentes de estos medicamentos biológicos han expirado o en su defecto están
próximas a expirar, lo que ha permitido la apertura de un nuevo mercado a
muchas industrias farmacéuticas en cuanto a la manufactura y comercialización de
las versiones “similares” de estos medicamentos biológicos ( Mikhail & Farouk,
2013).
Estos medicamentos se describen en forma general como “Medicamentos
Biosimilares” o como son llamados en nuestro país “Medicamentos
Biocomparables” (en el presente trabajo se describirán como biosimilares). De
acuerdo con la EMA se define a un medicamento biosimilar como:
“Un medicamento biosimilar es un medicamento biológico que se desarrolla para
que sea similar a un medicamento biológico ya existente (el «medicamento de
referencia»). Los biosimilares no son iguales a los genéricos, que tienen
estructuras químicas más simples y se consideran idénticos a sus medicamentos
de referencia. El principio activo de un biosimilar y su medicamento de referencia
es esencialmente la misma sustancia biológica, aunque existen ligeras diferencias
debido a la complejidad de su naturaleza y a los métodos de producción”
(European Medicines Agency, 2012).
En la práctica clínica la introducción de los medicamentos biosimilares ha
permitido a los pacientes el acceso a nuevas terapias que anteriormente tenían
un muy alto costo. Sin embargo, de acuerdo a los expertos en el tema y a la
definición previa, los medicamentos biosimilares no son exactamente iguales a los
innovadores que se han utilizado como referencia, esto debido al complejo
proceso de producción que involucra múltiples etapas y factores que hacen
imposible reproducir las moléculas con la misma exactitud ( Mikhail & Farouk,
2013), lo que ha causado gran polémica respecto al uso de los mismos.
22
Además de las múltiples etapas en los procesos de producción, se debe resaltar la
gran variabilidad que puede existir en estos medicamentos al tratarse de un
proceso llevado a cabo en un modelo biológico. Por lo anterior los expertos se
cuestionan si estas versiones de medicamentos biosimilares son capaces de
cumplir con el perfil de seguridad, eficacia y calidad que deben de cumplir los
medicamentos genéricos de síntesis tradicional para su aprobación por parte de
las Entidades Regulatorias.
Uno de los temas más debatidos por las distintas autoridades sanitarias y los
diversos investigadores a nivel mundial sobre el uso de los medicamentos
biosimilares es la inmunogenicidad. El concepto de inmunogenicidad se define
como la capacidad de un compuesto (ej. una proteína) para inducir una
respuesta inmune (ej. anticuerpos anti-medicamentos). Las consecuencias de
estas respuestas inmunológicas pueden ser variadas y a menudo impredecibles.
Se han descrito diversas reacciones que van desde la disminución en la eficacia
del medicamento, hasta la inducción del sistema inmunológico para lo formación
de anticuerpos específicos que neutralicen a la molécula terapéutica en cuestión o
en el peor de los casos que neutralicen la molécula nativa/endógena del paciente
(Schellekens, H. 2009). Un ejemplo de lo anterior fue reportado en 1998 cuando
debido a una reformulación de la Epoetin-alfa (Eprex®) se observó un incremento
en el número de pacientes con daño renal, que desarrollaron aplasia pura de la
serie roja (eritroblastopenia) debido a que desarrollaron anticuerpos anti
eritropoyetina (Bennett, C. 2005). Los cambios involucrados en la formulación
fueron dos, en primer lugar se cambió la vía de administración de intravenosa a
subcutánea y en segundo lugar se cambió a la Albúmina sérica humana por
Polisorbato 80 como estabilizador (Schellekens, H. 2006).
Los factores que pueden desencadenar inmunogenicidad en un paciente pueden
estar relacionados a: los cambios en la estructura de la molécula, cambios en la
secuencia de los aminoácidos, cambios en la secuencia de glicosilación,
impurezas y contaminantes en el medicamento, e incluso las condiciones de
transporte y almacenamiento del producto final. En cuanto a los factores
relacionados con los pacientes es importante mencionar: la vía de administración,
23
el régimen de dosificación, la duración del tratamiento, así como el padecimiento a
tratar del paciente (Schellekens, H. 2009).
3.10 ERITROPOYETINA HUMANA RECOMBINANTE BIOSIMILAR.
A finales del año 2007 las primeras eritropoyetinas biosimilares “Epoetin-alfa
(HX575)” y “Epoetin-zeta (SB309)” fueron aprobadas por la Agencia Europea de
Medicamentos (EMA). Para evaluar la comparabilidad de estas versiones
biosimilares se realizaron estudios preclínicos, farmacocinéticos,
farmacodinámicos, así como ensayos clínicos fase 3 para evaluar la seguridad y
eficacia de los mismos. Los estudios realizados le permitieron a la EMA
determinar la similitud entre las versiones biosimilares y el medicamento
innovador. Sin embargo, los investigadores señalan que los márgenes para
evaluar la equivalencia de las versiones biosimilares son muy amplios, por lo que
no sería posible discriminar las diferencias en la seguridad y la eficacia de estos
medicamentos.
Debido a que la inmunogenicidad, es un criterio muy importante para la evaluación
de la seguridad de los medicamentos biocomparables, además de los reportes de
Aplasia Pura de la Serie Roja vinculados con la reformulación de la Epoetin-alfa
(Eprex®), los investigadores se cuestionan seriamente si los requerimientos
establecidos por las distintas entidades regulatorias son los adecuados para
garantizar la seguridad, eficacia y calidad de las eritropoyetinas biosimilares.
24
4. INVESTIGACIÓN REALIZADA. METODOLOGÍA.
La metodología a seguir fue la siguiente:
Se llevó a cabo una búsqueda de las guías publicadas por la FDA,
Health Canada, OMS y México, así como las establecidas por la EMA
para determinar la biosimilitud de productos conteniendo eritropoyetina.
En caso de que no existieran guías específicas para eritropoyetina, se
revisaron las guías generales para la evaluación de productos biosimilares.
La revisión consistió en los criterios Fisicoquímicos, Estudios Preclínicos y
Estudios Clínicos requeridos para determinar la biosimilitud.
Posteriormente se llevó a cabo la comparación entre ellas.
Las guías revisadas para el presente trabajo fueron las siguientes:
1) European Medicines Agency (EMA):
Guideline on similar biological medicinal products. (CHMP/437/04 Rev 1).
Guideline on Similar Biological Medicinal Products containing Biotechnology
derived Proteins as Active Substance: Quality Issues.
(EMA/CHMP/BWP/247713/2012).
Guideline on non-clinical and clinical development of similar biological
medicinal products containing recombinant erythropoietins (Revision).
(EMEA/CHMP/BMWP/301636/2008).
Guideline on immunogenicity assessment of biotechnology-derived
therapeutic proteins. (EMEA/CHMP/BMWP/ 14327/2006).
Specifications: Test procedures and acceptance criteria for new drug
biotechnological/biological products. Q6B. (CPMP/ICH/365/96).
25
Note for guidance on toxicokinetics: A guidance for assessing systemic
exposure in toxicological studies. S3A. (CPMP/ICH/384/95).
Note for guidance on repeated dose toxicity. (CPMP/SWP/1042/99).
Note for guidance on non-clinical local tolerance testing of medicinal
products. (CPMP/SWP/2145/00).
2) Food and Drug Administration (FDA):
Guidance for Industry, Scientific Considerations in Demonstrating
Biosimilarity to a Reference Product. U.S. Department of health and
Human Services, Food and Drug Administration, April 2015.
Guidance for Industry, Quality Considerations in Demonstrating Biosimilarity
of a Therapeutic Protein Product to a Reference Product. U.S. Department
of health and Human Services, Food and Drug Administration, April 2015.
Guidance for Industry, Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein
Products. U.S. Department of health and Human Services, Food and Drug
Administration, August 2014).
Specifications: Test procedures and acceptance criteria for new drug
biotechnological/biological products. Q6B. (CPMP/ICH/365/96).
Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals.
S6(R1). (CPMP/ICH/302/95).
Guidance for Industry, Statistical Approaches to Establishing
Bioequivalence. U.S. Department of health and Human Services, Food and
Drug Administration, January 2001.
26
3) Health Canada:
Guidance for Sponsors: Information and Submission Requirements for
Subsequent Entry Biologics (SEBs). Health Canada, March 2010.
Specifications: Test procedures and acceptance criteria for new drug
biotechnological/biological products. Q6B. (CPMP/ICH/365/96).
Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals. S6
(R1). (CPMP/ICH/302/95).
Pharmacovigilance planning. E2E (CPMP/ICH/5716/03).
4) Expert Committee on Biological Standardization (OMS):
Guidelines on Evaluation of similar biotherapeutic products (SBPs). WHO
Expert Committee on Biological Standardization, WHO Technical Report
Series No. 977, 2013.
Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals. S6
(R1). (CPMP/ICH/302/95).
Choice of control group and related issues in clinical trials (E10). Geneva,
International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for
Registration of Pharmaceuticals for Human Use, 2000.
Statistical principles for clinical trials (E9). Geneva, International Conference
on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of
Pharmaceuticals for Human Use, 1998.
Pharmacovigilance planning. E2E (CPMP/ICH/5716/03).
27
5) En el caso de México se consultaron:
Ley General de Salud, publicada en el Diario Oficial de la Federación,
última reforma 04 de Diciembre de 2013.
Reglamento de Insumos para la Salud, publicado en el Diario Oficial de la
Federación, última reforma 09 de Octubre de 2012.
Reglamento de la Ley General de Salud en materia de investigación para la
Salud, publicado en el Diario Oficial de la Federación el 06 de Enero de
1987.
Reglamento Interior del Comité de Moléculas Nuevas, publicado en el
Diario Oficial de la Federación, última reforma 23 de Abril de 2012.
Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2013, “Buenas prácticas de
fabricación de medicamentos”, publicada en el Diario Oficial de la
Federación el 22 de Julio de 2013.
Norma Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-2013, “Que establece las pruebas
y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable.
Requisitos a que deben sujetarse los Terceros Autorizados que realicen las
pruebas de intercambiabilidad. Requisitos para realizar los estudios de
biocomparabilidad. Requisitos a que deben sujetarse los Terceros
Autorizados, Centros de Investigación o Instituciones Hospitalarias que
realicen las pruebas de biocomparabilidad”, publicada en el Diario Oficial de
la Federación el 20 de Septiembre de 2013.
Norma Oficial Mexicana NOM-220-SSA1-2012, “Instalación y operación de
la Farmacovigilancia”, publicada en el Diario Oficial de la Federación el 07
de Enero de 2013.
Norma Oficial Mexicana NOM-257-SSA1-2014, “En materia de
Medicamentos Biotecnológicos”, publicada en el Diario Oficial de la
Federación el Jueves 11 de diciembre de 2014.
28
6. RESULTADOS.
En la tabla 2 se presenta un cuadro comparativo de los criterios y requisitos para
evaluar la biocomparabilidad de los productos biotecnológicos conteniendo
eritropoyetina, los cuales se subdividieron en:
1) El análisis comparativo a través de la caracterización estructural y fisicoquímica
de los medicamentos.
2) Los estudios Pre-clínicos in vitro/ in vivo para la evaluación de los parámetros
PK, PD, toxicocinética e inmunogenicidad.
3) Los Ensayos Clínicos, en los cuales se describen las pruebas necesarias para
la evaluación de los parámetros PK, PD, y de eficacia en humanos, así como la
inmunogenicidad.
4) El plan de Farmacovigilancia para monitorear las posibles reacciones Adversas
del medicamento (RAMs).
29
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO.
ENTIDADES REGULATORIAS. Comunidad Europea
(EMA) Canadá (Health Canada).
Estados Unidos de América (FDA)
OMS Expert Committee on Biological Standardization
México (COFEPRIS).
NOMBRE ESTABLECIDO.
Similar Biological Medicinal Product.
(Biosimilar)
Medicamento Biológico de entrada Subsecuente.
(SEB)
Medicamento Biológico Biosimilar
(Biosimilar)
Similar Biotherapeutic Products
(SBPs)
Medicamento Biotecnológico Innovador.
(Biocomparable)
GUÍA PRINCIPAL
Guideline on Non-clinical and Clinical Development
of similar biological medicinal products
containing recombinant erythropoietins.
ESPECÍFICA
Information And
Submission Requierements for Subsequent Entry
Biologics(SEBs)
GENERAL
Scientific Considerations in Demonstrating Biosimilarity
to a Reference Product Guidance for Industry
GENERAL
Guidelines on evaluation of
similar biotherapeutic products (SBPs).
GENERAL
Norma Oficial Mexicana
NOM-177-SSA1-2013
GENERAL
a) REQUISITOS PREVIOS AL ESTUDIO DE BIOSIMILITUD.
1) CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA.
1. CARACTERIZACIÓN. Las pruebas necesarias para realizar el análisis comparativo son:
1. CARACTERIZACIÓN.
La caracterización se llevará a cabo mediante los requisitos establecidos en la guía:
1. ANÁLISIS ESTRUCTURAL/ CARACTERIZACIÓN FISICOQUÍMICA.
Los patrocinadores deben llevar a cabo una amplia caracterización estructural tanto del producto
1. CARACTERIZACIÓN.
Realizar una caracterización fisicoquímica exhaustiva del RBP (Referencia) y del SBP (Prueba)
1. CARACTERIZACIÓN
Se deberán evaluar las siguientes
características de los medicamentos
biotecnológicos, las que deberán ser
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
30
Composición de Aminoácidos.
Secuencia Amino- y Carboxi- terminal.
Mapeo de Péptidos. (Determinación de la estructura primaria).
Determinación de Grupos SH y puentes Disulfuro.
Determinación de la estructura secundaria y terciaria.
Caracterización de hidratos de Carbono.
Análisis estructural de N-
glicanos. Análisis estructural de O-
glicanos. Ác. Siálico.
2. PROPIEDADES FÍSICAS.
Para el desarrollo del análisis comparativo se deben determinar las siguientes propiedades del principio activo de ambos medicamentos biológicos:
Peso Molecular.
Estado de agregación.
Punto de Fusión.
Patrón de Isoformas.
Patrón electroforético.
ICH Q6B Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/biological Products La caracterización del SEB y el medicamento biológico de referencia se llevará a cabo mediante la determinación de:
La determinación de las propiedades fisicoquímicas.
La actividad biológica.
Propiedades Inmunoquímicas.
Determinación de pureza e impurezas, contaminantes.
Los criterios de aceptación deben ser establecidos y justificados.
2. PROPIEDADES FÍSICAS.
Peso o tamaño Molecular.
Patrón de Isoformas.
Coeficiente de extinción
(o absortividad molar).
Patrones electroforéticos.
Perfiles espectroscópicos.
Patrones de cromatografía
líquida.
Perfiles espectroscópicos.
Propiedades Inmunoquímicas
Pureza e impurezas.
propuesto y el producto de referencia en varios lotes representativos. En general, las pruebas de caracterización incluyen la determinación de:
La Estructuras primaria (la secuencia de aminoácidos).
Las estructuras de orden superior, incluidas, y la estructura cuaternaria, terciaria y secundaria (incluyendo la agregación).
Modificaciones enzimáticas postraduccionales.
Glicosilación. Fosforilación. Desamidación. Oxidación de
proteínas.
Modificaciones químicas intencionales.
Sitios de PEGilación.
Además para la caracterización se debe de tomar en cuenta: 1.1 Sistema de expresión. 1.2 Proceso De Manufactura. 1.3 Evaluación de las propiedades fisicoquímicas. La Evaluación de las propiedades Fisicoquímicas se llevará a cabo De acuerdo a la ICH Q6B.
utilizando las técnicas bioquímicas, biológicas y analíticas apropiadas. Es necesario proporcionar para el principio activo:
Estructura primaria.
Estructuras de Orden superior.
Modificaciones post-traduccionales (incluyendo, pero no limitado a, glicoformas).
Actividad biológica.
Pureza /impurezas.
Propiedades Inmunoquímicas.
Si se encuentran diferencias entre el SBP y el RBP, su impacto potencial en la seguridad y eficacia de debe ser evaluado. El conocimiento de las limitaciones de cada técnica de análisis utilizados para caracterizar el producto (por ejemplo, límites de sensibilidad, poder de resolución) debe ser valorado al determinar la similitud. La medición de atributos de calidad en los estudios de caracterización no requieren necesariamente el uso de ensayos validados, pero los ensayos deben ser científicamente sólidos y calificados. Estos deben proporcionar resultados que sean significativos y fiables.
comparables:
Identidad.
Estructura.
Contenido de ácido siálico.
Modificaciones post-
traduccionales.
Punto isoeléctrico.
Glicosilación.
Actividad biológica
2. CALIDAD.
Se deberán demostrar en el
medicamento biocomparable las
siguientes características de pureza y
estabilidad:
Ausencia de otras proteínas
además de la de interés. Será
necesario demostrar una pureza
no menor del 95 %.
Cuantificación de impurezas
relacionadas al producto.
Presencia de proteína modificada
químicamente (oxidación,
desaminación, glicación, etc.) o
variantes, como puede ser
agregados o productos de
proteólisis del producto de interés.
Cuantificación de impurezas
relacionadas al proceso. ADN
residual, proteínas de hospedero,
endotoxinas, agentes biológicos
endógenos o adventicios,
substancias utilizadas en la
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
31
Punto Isoeléctrico.
3. ACTIVIDAD BIOLÓGICA.
Se deben incluir una evaluación de las propiedades biológicas como un paso esencial en el perfil de caracterización por medio de:
Ensayos de unión a receptor
(in vitro / in vivo).
Ensayos de Actividad biológica.
(in vitro / in vivo).
3. ACTIVIDAD BIOLÓGICA.
La actividad biológica debe ser
proporcionada por el fabricante.
Los ejemplos de procedimientos
utilizados para medir la actividad
biológica incluyen:
Ensayos biológicos de origen
animal, que miden la
respuesta biológica de un
organismo para el producto.
Ensayos biológicos a nivel
celular, que determinen la
respuesta bioquímica o
fisiológica a nivel celular.
La caracterización del medicamento biosimilar el medicamento biológico de referencia se llevará a cabo mediante la determinación de:
La determinación de las propiedades fisicoquímicas.
La actividad biológica.
Propiedades Inmunoquímicas.
Determinación de pureza e impurezas, contaminantes.
Los criterios de aceptación deben ser establecidos y justificados.
1.3.1 Propiedades Físicas.
Peso o tamaño Molecular.
Patrón de Isoformas.
Coeficiente de extinción (o absortividad molar).
Patrones electroforéticos.
Perfiles espectroscópicos.
Patrones de cromatografía líquida.
Perfiles espectroscópicos.
Propiedades Inmunoquímicas
Pureza e impurezas.
1.3.2 Actividad Biológica. La actividad biológica debe ser proporcionada por el fabricante. Los ejemplos de procedimientos utilizados para medir la actividad biológica incluyen:
2. ACTIVIDAD BIOLÓGICA.
Es necesario realizar un ensayo biológico relevante (s) con precisión y exactitud apropiada para confirmar que no hay diferencia funcional significativa entre el SBP y el RBP.
Debido a que la potencia es la medida cuantitativa de la actividad biológica, un ensayo de potencia validado debe ser parte de la caracterización del SBP y RBP. Los resultados de la prueba de potencia deben ser proporcionados y expresados en unidades de actividad.
producción, como inductores,
inhibidores de proteasas u otros
contaminantes potenciales.
3. ESTABILIDAD.
Se realizarán estudios de estabilidad
en tiempo real, estabilidad acelerada y
pruebas de estrés. Deberán utilizarse
contenedores representativos del que
se utilizará para el almacenamiento del
biofármaco y el medicamento
biotecnológico durante su manufactura
y comercialización.
Se deberán presentar las
especificaciones, métodos de
análisis y certificados analíticos de
manera comparativa realizados a
3 lotes del medicamento
biotecnológico no innovador
versus 3 lotes del medicamento
biotecnológico de referencia.
En el caso de que se utilicen
métodos no farmacopeicos
deberán presentar la validación
correspondiente de acuerdo a la
NOM-177-SSA1-2013.
La validación de los métodos
deberán considerar por lo menos
los siguientes parámetros:
linealidad, precisión, LOD/LOQ,
robustez, especificidad,
comparación de lote a lote y
estabilidad.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
32
Ensayos biológicos de origen animal, que miden la respuesta biológica de un organismo para el producto.
Ensayos biológicos a nivel celular, que determinen la respuesta bioquímica o fisiológica a nivel celular.
1.4 Ensayos de funcionalidad. 1.5 Afinidad por el receptor / Propiedades Inmunoquímicas.
Para algunas sustancias
farmacéuticas o productos de drogas,
puede necesitar ser examinado
utilizando procedimientos
inmunoquímicos, por ejemplo ICH
Q6B.
ELISA.
Western-Blot.
1.6 Impurezas.
1.7 Producto de referencia /
Estándares de referencia. (ICH
Q6B)
Una evaluación fisicoquímica y
biológica a fondo se debe de
desarrollar del producto de
referencia que proporcione una
base de información necesaria
para justificar la dependencia
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
33
de ciertos conocimientos
científicos existentes sobre el
producto de referencia.
1.8 Producto Terminado ICH Q8
(R2).
1.9 Estabilidad. ICH Q5C, ICH Q1A
(R2).
b) REQUISITOS PARA EL ESTUDIO DE BIOSIMILITUD.
2) ESTUDIOS PRE-CLÍNICOS
Comunidad Europea (EMA)
Canadá (Health Canada). Estados Unidos de América
(FDA)
OMS Expert Committee on Biological Standardization
México (COFEPRIS).
1. ESTUDIOS FARMACOLÓGICOS.
Estudios In vitro Se deben realizar los estudios comparativos entre el medicamento biológico similar y el medicamento biológico de referencia:
Ensayos de unión a
receptor (in vitro / in vivo, Línea celular eritroleucémica humana).
Ensayos de Actividad biológica. (in vitro / in vivo).
Ensayos de Proliferación
1. GENERALIDADES.
De acuerdo a lo establecido
en la (ICH S6 R1), los estudios
pre-clínicos deben de
considerar:
Selección de una especie
relevante.
Edad.
Estado Fisiológica.
Estabilidad del material a
probar en las condiciones
normales de uso.
Se debe de establecer la dosis, vía de administración y régimen de dosificación.
1. GENERALIDADES.
De acuerdo a lo establecido en la
(ICH S6 R1), los estudios pre-clínicos
deben de considerar:
Selección de una especie
relevante.
Edad.
Estado Fisiológica.
Estabilidad del material a probar
en las condiciones normales de
uso.
Se debe de establecer la dosis, vía
de administración y régimen de
1. ESTUDIOS FARMACOLÓGICOS.
Previamente a los estudios pre-clínicos es necesario demostrar un alto grado de similitud molecular entre la SBP y el RBP debería reducir significativamente la necesidad de estudios no clínicos. En el diseño apropiado del estudio pre-clínico se debe de tomar en cuenta la guía: (ICH S6 R1).
2. Estudios in vitro.
Se deben realizar estudios de unión al
1. GENERALIDADES. El Comité de Moléculas Nuevas previa consulta al Subcomité de Evaluación de Productos Biotecnológicos evaluará los protocolos preclínicos (caso por caso) y podrá solicitar la extensión de pruebas preclínicas cuando así lo considere pertinente para productos nacionales. Los métodos y técnicas analíticas empleadas deben validarse con los parámetros de validación que demuestren que cumplen con el propósito para el cual fueron diseñados. Se deberá realizar el análisis de
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
34
celular. (por medio de una Línea celular eritroleucémica humana).
Estudios In vivo Los efectos eritrogénicos del medicamento biológico similar y el medicamento de referencia deben compararse cuantitativamente en un ensayo animal apropiado, como por ejemplo:
El ensayo en ratones policitémicos.
El ensayo en ratones normocitémicos.
2. ESTUDIOS
TOXICOLÓGICOS.
2.1 Estudio de toxicidad de
dosis repetida.
2.1.1 Selección de un
modelo Animal. (Estudios In
vivo).
2.1.2 Número / Género de
los Animales.
2.1.3 Administración y
selección de la dosis
2. FARMACODINAMIA /
ACTIVIDAD BIOLÓGICA.
(ESTUDIOS IN VITRO)
Se deben de utilizar líneas
celulares in vitro derivadas de
células de mamíferos para:
Predecir aspectos específicos
de la actividad in vivo.
Evaluar cuantitativamente la
sensibilidad relativa del
biofármaco en diversas
especies incluyendo a la
especie humana.
Estos estudios deben diseñarse
para evaluar:
La Afinidad por el receptor.
La ocupación por el receptor.
Evaluación de la actividad
biológica.
Proliferación Celular.
Sensibilidad en otras
especies.
dosificación.
La actividad farmacológica de los
productos de proteína debe ser
evaluados in vitro y en ensayos
funcionales in vivo.
a) En ensayos in vitro pueden incluir,
pero no se limitan a:
Ensayos biológicos.
Ensayos de unión.
Ensayos de cinética de la
enzimática.
b) Ensayos in vivo pueden incluir
El uso de modelos
animales que posean la
enfermedad para evaluar
los efectos funcionales
(Ensayos de Funcionalidad)
sobre los marcadores
farmacodinámicos.
Ensayos en animales.
1.1 Ensayos de Funcionalidad.
Se pueden utilizar ensayos
funcionales para proporcionar
evidencia adicional de que la
actividad biológica, el
mecanismo de acción y la
potencia del producto propuesto
son muy similares a las del
receptor o ensayos basados en
células (por ejemplo, células de
proliferación o ensayos de
citotoxicidad) para establecer la
comparabilidad de la actividad
biológica / farmacodinámica del SBS
y del RBP.
Estos datos son por lo general ya está
disponible a partir de los ensayos
biológicos descritos en la parte de la
calidad.
3. Estudios in vivo.
Se deben realizar estudios en una
especie animal conocida, en la que se
ha demostrado que el RBP posee una
actividad farmacodinámica y
toxicológica, además se debe
considerar evaluar:
La actividad biológica /
farmacodinámico relevante para
la aplicación clínica. Si la
actividad es factible, biológica
puede evaluarse como parte del
estudio de toxicidad por
administración de dosis
repetidas (descrito más
adelante).
estructura superior empleando métodos analíticos que permitan conocer la estructura tridimensional e integridad química, a saber:
Plegamiento.
Estabilidad termodinámica.
Tamaño.
Modificaciones postraduccionales.
Isoformas.
Variantes de carga (oxidaciones, de amidaciones, isomerizaciones, entre otras).
Masa absoluta.
2. PRUEBAS DE SEGURIDAD.
Se realizarán para definir los efectos toxicológicos y farmacológicos previos a los estudios en humanos a través del desarrollo del estudio clínico. Los estudios de seguridad preclínica deben considerar: 2.1 Elección de una especie relevante. 2.2 Estudios Toxicológicos. Se deben realizar estudios de dosis única que puedan generar datos útiles para describir la relación de dosis para toxicidad sistémica y local.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
35
2.1.4 Toxicocinética
Se debe de incorporar la evaluación Toxicocinética al diseño del estudio de dosis repetidas de acuerdo con la guía: Note for guidance on toxicokinetics: A guidance for assessing systemic exposure in toxicological studies (ICH S3A).
2.1.5 Inmunogenicidad.
Se debe de realizar la medición de anticuerpos asociados con la administración de medicamentos biotecnológicos cuando se lleven a cabo estudios de toxicidad de dosis repetidas de acuerdo a la guía: Guideline on immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic proteins”, EMEA/CHMP/BMWP/14327/2006).
2.1.5.1 Monitoreo Terminal.
Se debe de realizar una autopsia
de todos los animales
involucrados en el estudio así
como el análisis histopatológico
de los distintos órganos de
3. SELECCIÓN DE UN MODELO
ANIMAL. (ESTUDIOS IN VIVO).
La cual debe expresar el
receptor específico para el
cual el material es
farmacológicamente activo. Cuando no existan especies
relevantes, el uso de animales
transgénicos pertinentes que
expresan el receptor humano
o el uso de proteínas
homólogas debe ser
considerado.
4. INMUNOGENICIDAD.
Se debe de realizar la
medición de anticuerpos
asociados con la
administración de
medicamentos biotecnológicos
cuando se lleven a cabo
estudios de toxicidad de dosis
repetidas.
Las respuestas de anticuerpos
deben caracterizarse, se debe
determinar el título de
anticuerpos, y caracterizar el
tipo de anticuerpo (como
neutralizante o no
neutralizante).
Se debe determinar los
producto de referencia.
2. FARMACODINAMIA / ACTIVIDAD
BIOLÓGICA. (Estudios In vitro)
Se deben de utilizar líneas celulares
in vitro derivadas de células de
mamíferos para predecir aspectos
específicos de la actividad in vivo y
para evaluar cuantitativamente la
sensibilidad relativa del biofármaco
en diversas especies incluyendo a la
especie humana. Estos estudios
deben diseñarse para evaluar:
La Afinidad por el receptor.
La ocupación por el receptor.
Evaluación de la actividad
biológica.
Proliferación Celular.
Sensibilidad en otras especies.
2.1 Selección de un modelo
Animal. (Estudios In vivo).
La evaluación de seguridad
deben incluir el uso de las
especies relevante. La cual debe
expresar el receptor específico
para el cual el material es
farmacológicamente activo. Las
técnicas para determinar una
especie relevante son:
4. Estudios Toxicológicos.
Los estudios de Toxicidad se
determinarán en al menos un estudio
de toxicidad de dosis repetidas en
una especie relevante. Las
determinaciones toxicocinéticas
deben incluir:
Determinación y caracterización
de anticuerpos.
Título de anticuerpos.
Reactividad Cruzada con
proteínas homólogas.
Capacidad neutralizante del
producto.
La duración de los estudios debe
de ser lo suficiente para detectar
las diferentes respuestas de
toxicidad del SBP y RBP.
Dependiendo de la vía de
administración, la tolerancia local
debe ser evaluada. Si es factible, esta
evaluación se puede realizar como
parte del estudio de toxicidad.
Los estudios correspondientes a:
toxicología reproductiva,
genotoxicidad y carcinogenicidad
no son requisitos en las pruebas
pre-clínicas para el SBP.
Cuando sea posible, los estudios de dosis única deben incluir toxicocinética.
Para los biotecnológicos que inducen efectos farmacológicos y toxicológicos prolongados, un grupo de animales debe ser monitoreado hasta que se demuestre la reversibilidad.
La duración de los estudios de dosis repetida debe basarse en la duración de la exposición clínica pretendida y la indicación para la enfermedad. La duración reportada de los estudios debe estar técnicamente justificada para permitir la detección de diferencias relevantes en la toxicidad y respuestas inmunes entre el M.B.B. y el M.B. de referencia.
Si los resultados de los estudios mencionados no son suficientes, se deben incluir observaciones relevantes en el mismo estudio toxicológico de dosis repetida, incluyendo, tolerabilidad local.
Sólo se requerirán reportes de otros estudios toxicológicos como seguridad farmacológica, toxicología reproductiva, mutagénesis y carcinogénesis para la evaluación de M.B.B., si los resultados de los estudios de dosis repetida así lo requieren.
Si los estudios preclínicos emplean OGM deben efectuarse en concordancia con las
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
36
acuerdo a la guía:
Note for guidance on repeated
dose toxicity. (CPMP/SWP/1042/99).
2.2 Ensayos de Tolerancia.
La evaluación de la tolerancia se
debe de desarrollar previamente
a los estudios clínicos. Estos
estudios se deben de desarrollar
de acuerdo a los establecido en
la guía:
Note for guidance on non-clinical
local tolerance testing of
medicinal products"
(CPMP/SWP/2145/00).
efectos de los anticuerpos
sobre los parámetros PK y
PD, efectos adversos,
activación del complemento, la
aparición de efectos tóxicos.
5. FARMACOCINÉTICA Y
TOXICOCINÉTICA.
Se sugiere realizar los estudios:
Farmacocinéticos de dosis
múltiples.
Toxicocinéticos.
Estudios de distribución
Tisular.
5.1 Estudio de toxicidad de dosis
repetida.
Se debe realizar al menos un
estudio de toxicidad de dosis
repetida, incluyendo la
caracterización de los parámetros
toxicocinéticos, realizados en una
especie relevante, dicho estudio
debe de contener:
Se debe seleccionar una
especie animal relevante.
El régimen de dosificación, la
ruta de administración y la
dosis deben reflejar el uso o la
exposición clínica prevista.
Cuando sea posible, los
Ensayos inmunoquímicos.
Pruebas funcionales.
Cuando no existan especies
relevantes, el uso de animales
transgénicos pertinentes que
expresan el receptor humano o
el uso de proteínas homólogas
debe ser considerado.
2.2 Número / Género de los
Animales.
El número de animales se debe
seleccionar debe tener en
consideración:
Debe existir una relación entre el
número de animales y la
capacidad de detectar posibles
eventos tóxicos.
Ambos géneros en general
deben ser utilizados o presentar
las justificaciones por omisiones
específicas.
2.3 Administración y selección de
la dosis.
La vía y frecuencia de
administración deben estar tan
cerca como sea posible al
propuesto para uso clínico.
El uso de otras vías de
De acuerdo a lo establecido en la guía de armonización (ICH S6 R1), los estudios complementarios a la etapa pre-clínica se describen a continuación:
5. INMUNOGENICIDAD.
Se debe de realizar la medición
de anticuerpos asociados con la
administración de
medicamentos biotecnológicos
cuando se lleven a cabo estudios
de toxicidad de dosis repetidas.
Las respuestas de anticuerpos
deben caracterizarse, se debe
determinar el título de
anticuerpos, y caracterizar el tipo
de anticuerpo (como
neutralizante o no neutralizante).
Se debe determinar los efectos
de los anticuerpos sobre los
parámetros PK y PD, efectos
adversos, activación del
complemento, la aparición de
efectos tóxicos.
La detección de anticuerpos no
debe ser el único criterio para la
terminación anticipada de un
estudio de seguridad preclínica o
modificación en la duración del
estudio de diseño a menos que
la respuesta inmune neutralice
los efectos farmacológicos y / o
toxicológicas del medicamento
disposiciones jurídicas aplicables.
2.3 Pruebas de actividad biológica.
La actividad biológica debe ser
evaluada mediante ensayos in vitro o
in vivo que puedan demostrar efectos
del producto relacionados con la
actividad biológica descrita, éstos
deben considerar:
La selección de biomarcadores de
acuerdo a su relevancia, a fin de
demostrar la eficacia terapéutica
del producto tanto en el diseño
como en el desarrollo del estudio
preclínico.
El empleo de líneas celulares,
derivadas de mamíferos, para
predecir aspectos específicos de
la actividad in vivo y para obtener
cuantitativamente la sensibilidad
relativa de varias especies
(incluyendo el humano). Estos
estudios deben determinar:
La ocupación del
receptor.
la afinidad por el
receptor y los efectos
farmacológicos.
Así como para ayudar
en la selección de una
especie animal
apropiada para más
estudios farmacológicos
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
37
estudios deben incluir
toxicocinética.
La duración del estudio debe
ser lo suficientemente larga
para determinar las
diferencias en la toxicidad o
en la respuesta inmunológica
entre el SEB y el fármaco
biológico de referencia.
La duración de los estudios de
dosis repetidas se debe basar
en la duración prevista de la
exposición clínica e indicación
de la enfermedad.
Otros estudios toxicológicos,
incluyendo farmacología de
seguridad, toxicología
reproductiva, mutagénesis y
estudios de carcinogenicidad
NO SE REQUIEREN al menos
que se encuentre justificado
en los resultados de los
estudios toxicológicos de dosis
repetidas.
administración puede ser
aceptable si la vía de
administración limita la
biodisponibilidad.
Se debe considerar la
Farmacocinética y la
biodisponibilidad del producto en
la especie que se utiliza.
Los niveles de dosificación
deben ser seleccionados para
proporcionar información sobre
una relación dosis-respuesta,
incluyendo una dosis tóxica y un
nivel de efecto adverso no
observado.
Para justificar la selección de
dosis alta, se debe considerar a
los efectos fisiológicos/
farmacológicos esperados, la
disponibilidad de material de
prueba adecuado, y el uso
clínico previsto.
2.4 Inmunogenicidad.
Se debe de realizar la medición
de anticuerpos asociados con la
administración de
medicamentos biotecnológicos
cuando se lleven a cabo
estudios de toxicidad de dosis
repetidas.
Las respuestas de anticuerpos
deben caracterizarse, se debe
determinar el título de
anticuerpos, y caracterizar el
en una gran proporción de los
animales.
La inducción de la formación de
anticuerpos en animales no es
predictivo de un potencial para la
formación de anticuerpos en
seres humanos.
Las reacciones inflamatorias en
el sitio de la inyección pueden
ser indicativos de una respuesta
estimuladora.
6. Farmacocinética y
Toxicocinética.
Es difícil establecer directrices
uniformes para los estudios
farmacocinéticos de los productos
farmacéuticos derivados de la
biotecnología. Se sugiere realizar
estudios:
Farmacocinéticos de dosis
múltiples.
Toxicocinéticos.
Estudios de distribución Tisular.
Los estudios farmacocinéticos deben,
siempre que sea posible, utilizar los
preparados que sean representativos
para las pruebas de toxicidad y su
uso clínico, y emplear una vía de
administración que sea relevante para
los estudios clínicos previstos.
y toxicológicos in vivo.
Los efectos directos
sobre el fenotipo celular,
la proliferación,
activación celular y la
unión a moléculas
blanco.
La inmunogenicidad en animales
se realizará sólo en estudios de
toxicidad a dosis repetidas con la
finalidad de ayudar a la
interpretación de estos estudios y
sólo cuando se demuestre la
relevancia de la especie.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
38
tipo de anticuerpo (como
neutralizante o no neutralizante).
Se debe determinar los efectos
de los anticuerpos sobre los
parámetros PK y PD, efectos
adversos, activación del
complemento, la aparición de
efectos tóxicos.
3. EVALUACIÓN DE LA
EXPOSICIÓN.
3.1 Farmacocinética y
Toxicocinética.
Es difícil establecer directrices
uniformes para los estudios
farmacocinéticos de los productos
farmacéuticos derivados de la
biotecnología. Se sugiere realizar
estudios:
Farmacocinéticos de dosis
múltiples.
Toxicocinéticos.
Estudios de distribución Tisular.
7. Estudio de toxicidad de dosis
repetida.
Se debe realizar al menos un estudio
de toxicidad de dosis repetida,
incluyendo la caracterización de los
parámetros toxicocinéticos, realizados
en una especie relevante, dicho
estudio debe de contener:
Se debe seleccionar una
especie animal relevante.
El régimen de dosificación, la
ruta de administración y la dosis
deben reflejar el uso o la
exposición clínica prevista.
Cuando sea posible, los estudios
deben incluir toxicocinética.
La duración del estudio debe ser
lo suficientemente larga para
determinar las diferencias en la
toxicidad o en la respuesta
inmunológica entre el SEB y el
fármaco biológico de referencia.
La duración de los estudios de
dosis repetidas se debe basar en
la duración prevista de la
exposición clínica e indicación de
la enfermedad.
Otros estudios toxicológicos,
incluyendo farmacología de
seguridad, toxicología
reproductiva, mutagénesis y
estudios de carcinogenicidad NO
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
39
3.2 Estudio de toxicidad de dosis
repetida.
Se debe realizar al menos un estudio
de toxicidad de dosis repetida,
incluyendo la caracterización de los
parámetros toxicocinéticos,
realizados en una especie relevante,
dicho estudio debe de contener:
Se debe seleccionar una
especie animal relevante.
El régimen de dosificación, la
ruta de administración y la dosis
deben reflejar el uso o la
exposición clínica prevista.
Cuando sea posible, esos
estudios deben incluir
toxicocinética.
La duración del estudio debe
ser lo suficientemente larga
para determinar las diferencias
en la toxicidad o en la respuesta
inmunológica entre el
medicamento biosimilar y el
fármaco biológico de referencia.
La duración de los estudios de
dosis repetidas se debe basar
en la duración prevista de la
exposición clínica e indicación
de la enfermedad.
Otros estudios toxicológicos,
incluyendo farmacología de
seguridad, toxicología
reproductiva, mutagénesis y
estudios de carcinogenicidad
SE REQUIEREN al menos que
se encuentre justificado en los
resultados de los estudios
toxicológicos de dosis repetidas.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
40
NO SE REQUIEREN al menos
que se encuentre justificado en
los resultados de los estudios
toxicológicos de dosis repetidas.
3) ESTUDIOS CLÍNICOS
Comunidad Europea (EMA)
Canadá (Health Canada). Estados Unidos de América
(FDA)
OMS Expert Committee on Biological Standardization
México (COFEPRIS).
1. ESTUDIOS FARMACOCINÉTICOS.
Se debe realizar un estudio cruzado del medicamento biológico similar y del medicamento biológico de referencia.
Se debe de administrar una sola dosis.
Se debe de evaluar la vía subcutánea (SC) y la vía intravascular (IV).
El estudio se debe realizar en voluntarios sanos.
La dosis seleccionada se debe de encontrar en la parte SENSIBLE de la curva dosis-respuesta.
Se considerará como parámetro farmacocinético primario al área bajo la curva (AUC) y como
1. ESTUDIOS
FARMACOCINÉTICOS.
Evaluación de la absorción,
distribución, metabolismo y
eliminación en una población
de pacientes/voluntarios
sanos, debidamente
justificado. El diseño de los estudios
farmacocinéticos comparativos
(por ejemplo, un estudio
cruzado frente al estudio
paralelo) debe seguir los
siguientes factores a
consideración:
Tiempo de vida media.
Linealidad de los parámetros
PK.
Condiciones y enfermedades
a tratar.
Vía de administración.
Condiciones para las cuales el
1. GENERALIDADES. El patrocinador de un producto propuesto debe presentar la información a la FDA que demuestre que :
No hay diferencias clínicamente significativas entre el producto biológico y el producto de referencia en cuanto a la seguridad, pureza y potencia del producto.
Como una cuestión científica, la FDA espera que el patrocinador lleve a cabo los estudios referentes a:
PK humana comparada. Estudios PD (si hay una
medida pertinente PD). Una evaluación de la
inmunogenicidad clínica.
1. ESTUDIOS FARMACOCINÉTICOS.
Los estudios farmacocinéticos en general, se deben realizar para las vías de administración solicitadas y la dosis se debe encontrar dentro del rango de dosis terapéuticas recomendadas para el RBP. La comparación farmacocinética de la SBP y la RBP debe incluir:
Absorción / biodisponibilidad.
Eliminación (aclaramiento).
Tiempo de vida media. Para evaluar los parámetros PK es necesario realizar un estudio cruzado con los siguientes características:
Dosis única.
Población Homogénea.
Misma vía de
1. GENERALIDADES.
Para la realización de los estudios
clínicos el patrocinador debe presentar
toda la información con respecto a la
caracterización fisicoquímica, estudios
preclínicos de los productos bajo
estudio y demás documentos, así como
la información necesaria para la
elaboración del protocolo clínico.
Los Estudios clínicos deben tener
además de lo que indique la Secretaría
de Salud:
Estudios de Eficacia.
Inmunogenicidad.
Reporte de eventos
Adversos.
Reporte comparativo de
Farmacocinética, Toxicología
y Tolerabilidad.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
41
parámetros secundarios a la concentración máxima (Cmax) y el tiempo de vida media (t1/2) o en su defecto al Cl / F.
Los márgenes de equivalencia deben de ser definidos a priori y estos deben de estar debidamente justificados.
Las diferencias en los t1/2 para la administración subcutánea (SC) e Intravascular (IV) y la dependencia de la dosis en cuanto a la velocidad de la eliminación de la epoetina deben tenerse en cuenta al momento de diseñar estos estudios.
2. ESTUDIOS
FARMACODINÁMICOS.
Los estudios Farmacodinámicos deben de ser evaluados preferentemente como parte del estudio farmacocinético comparativo.
La dosis seleccionada se debe de encontrar en la parte lineal ascendente de la curva dosis-respuesta.
En los estudios de una sola dosis, se considerará al recuento de reticulocitos como marcador
SEB está aplicando.
La Dosis utilizada en los estudios PK debe de estar dentro del rango de dosificación terapéutico especificado en la monografía del producto del fármaco biológico de referencia.
2. ESTUDIOS FARMACODINÁMICOS.
Los parámetros investigados en los estudios farmacodinámicos (PD) deben ser clínicamente relevantes y los marcadores indirectos deben ser validados clínicamente.
Evaluar el efecto del medicamento en un periodo de tiempo, lo cual se puede combinar con:
a) Estudios farmacocinéticos. b) Estudios de eficacia clínica que evalúen la naturaleza, la severidad y la frecuencia de los efectos adversos y deben evaluar la inmunogenicidad.
2. ESTUDIOS CLÍNICOS COMPARATIVOS.
Como una cuestión científica, será necesario un estudio clínico comparativo para apoyar la demostración de la biosimilitud si hay incertidumbre residual sobre si hay diferencias clínicamente significativas entre el producto propuesto y el producto de referencia basado en:
La caracterización estructural y funcional.
La experimentación con animales.
Datos PK y PD en humanos.
La evaluación de la inmunogenicidad clínica.
3. ESTUDIOS CLÍNICOS.
Un estudio clínico comparativo para
un programa de desarrollo biosimilar
debe de:
Tener en cuenta la naturaleza y el
grado de incertidumbre residual que
permanece sobre biosimilitud basado
en datos generados a partir de:
La caracterización
estructural y funcional de
la experimentación con
Administración.
Condiciones semejantes para las cuales el SBP está aplicando.
La Dosis utilizada en los estudios PK
debe de estar dentro del rango de
dosificación terapéutico especificado
en la monografía del producto del
fármaco biológico de referencia.
2. ESTUDIOS FARMACODINÁMICOS.
Los efectos farmacodinámicos deben ser investigados en una población adecuada utilizando una dosis o dosis dentro de la parte escarpada de la curva dosis - respuesta con el fin de maximizar la probabilidad de detectar diferencias de potencial entre el SBP y el RBP.
Tales estudios deben proporcionar información útil sobre la relación entre la dosis y el efecto, sobre todo si lleva a cabo a diferentes niveles de dosis.
En muchos casos, los parámetros farmacodinámicos se investigan en el contexto de los estudios farmacocinéticos / farmacodinámicos combinados
El diseño experimental, dependerá de
la naturaleza del biotecnológico según
aplique. En caso de requerirse un
diseño diferente a éstos, se debe
justificar científicamente:
Estudios de Biocomparabilidad
Fase IA Seguridad Clínica Dosis
única Creciente.
Estudios de Biocomparabilidad
Fase IA Seguridad Clínica y de
PK/PD.
Estudios de Biocomparabilidad
Fase III: Equivalencia Terapéutica
y Seguridad Clínica.
2. ELABORACIÓN DEL PROTOCOLO
CLÍNICO.
Cada protocolo de un estudio clínico,
debe cumplir con lo señalado en la Ley
General de Salud, en el Reglamento de
la Ley General de Salud en Materia de
Investigación para la Salud y debe ser
acorde al tipo de producto a evaluar y
pruebas requeridas de acuerdo a lo
señalado en el Reglamento de Insumos
para la Salud, cumpliendo con las BPC,
las BPL y demás disposiciones
jurídicas aplicables.
El Protocolo debe ser dictaminado por
el Comité de Ética en Investigación y
por el Comité de Investigación, y
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
42
farmacodinámico para la evaluación de la actividad de la eritropoyetina.
3. ESTUDIOS CLÍNICOS DE EFICACIA.
La similitud en la eficacia clínica entre el medicamento biológico similar y el medicamento biológico de referencia debe de ser demostrada mediante ensayos clínicos aleatorizados de grupos paralelos.
El estudio se debe realizar por ambas vías de administración (Intravascular, subcutánea), mediante alguna de las siguientes opciones:
Mediante la realización
de dos ensayos clínicos separados.
Demostrar la eficacia comparable para una vía de administración en un estudio clínico comparativo y proporcionar los datos farmacocinéticos y farmacodinámicos a una dosis única y a múltiples dosis en una población de estudio
3. ESTUDIOS DE SEGURIDAD
CLÍNICA.
3.1 Ensayos de
inmunogenicidad.
La inmunogenicidad de los SEB
debe evaluarse mediante estudios
clínicos diseñados adecuadamente,
teniendo en cuenta el impacto
potencial sobre la eficacia y la
seguridad.
Los métodos de análisis deben ser validados y deben de ser capaces de caracterizar el contenido de anticuerpos (concentración o título), así como el tipo de anticuerpos formados, tales como los anticuerpos neutralizantes y los anticuerpos con reactividad cruzada. Además se deben de evaluar el posible impacto de los anticuerpos sobre la seguridad y
eficacia del medicamento.
animales.
PK humana y estudios de
PD.
La evaluación de la
inmunogenicidad clínica.
3.1 ESTUDIOS
FARMACOCINÉTICOS.
Diseño del estudio.
El diseño del estudio debe evaluar la
similitud de los parámetros PK y PD
para el desarrollo de productos
biosimilares por lo que se proponen:
Diseño Cruzado.
Estudio en Paralelo.
Diseño Cruzado
Estudio en Paralelo.
Producto de Referencia.
Designado por la FDA.
Selección de la Dosis. La dosis seleccionada debe ser la más sensible para detectar y evaluar las diferencias en los perfiles de PK y PD entre el producto biosimilar y el producto de referencia.
Se deben seleccionar Marcadores farmacodinámicos en base a su relevancia clínica.
3. ESTUDIOS CONFIRMATORIOS
PK/PD. Por lo general se requieren ensayos clínicos para demostrar la eficacia similar entre el SBP y el RBP. En ciertos casos, sin embargo, un estudio comparativo PK/PD puede ser apropiado , siempre que:
Las propiedades farmacocinéticas y farmacodinámicas del RBP se encuentren bien caracterizadas.
Al menos un marcador farmacodinámico se encuentre como un marcador ligado a la eficacia.
La relación entre la dosis / exposición, el marcador relevante farmacodinámico y la respuesta / eficacia del RBP se encuentren bien establecidos.
La población de estudio y la dosis deben representar un sistema de prueba que sea conocido por ser sensible a las diferencias de potencial entre el SBP y el RBP.
autorizado por la Secretaría.
El Comité de Moléculas Nuevas previa
consulta al Subcomité de Evaluación
de Productos Biotecnológicos, evaluará
los protocolos clínicos de
biocomparabilidad (caso por caso) y
podrá solicitar la extensión de pruebas
clínicas cuando así lo considere
pertinente.
Para la elaboración del protocolo se
debe incluir la participación de personal
estadístico (cálculo de tamaño de
muestra, pruebas estadísticas de
biocomparabilidad, etc.).
3. ESTUDIOS FARMACOCINÉTICOS.
(General)
Se podrán realizar estudios de una sola dosis o de dosis múltiple.
Los intervalos de aceptación para cualquier parámetro farmacocinético se deben basar en el criterio clínico, tomando en cuenta toda la información disponible de eficacia y seguridad en los productos de referencia y de prueba.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
43
sensible a la administración de la eritropoyetina.
Se recomienda como población de estudio aquellos pacientes que padezcan anemia renal (anemia asociada a la enfermedad renal crónica) sin alguna otra complicación mayor que puedan poner en peligro relevante la respuesta al tratamiento con eritropoyetina.
Población de Estudio.
Los estudios PK y PD deben llevarse
a cabo en voluntarios sanos si el
producto se puede administrar de
forma segura a esta población.
Los estudios de farmacología clínica
deberán realizarse en los pacientes
cuando la seguridad o
consideraciones éticas impidan la
participación de voluntarios sanos en
los estudios o si los marcadores PD
sólo sería relevante en los pacientes
con la condición o enfermedad.
Vía de Administración.
Los estudios PK y PD deben llevarse
a cabo utilizando la misma vía de
administración para el producto
biológico propuesto y el producto de
referencia.
Determinaciones
Farmacocinéticas (PK).
Determinar Cmax y la exposición total
(AUC) en un fluido biológico
relevante.
4. ESTUDIOS CLÍNICOS DE EFICACIA.
La similitud de la Eficacia entre el SBP y el RBP se debe demostrar a través de un ensayo clínico aleatorizado y controlado. Los principios de tales ensayos se establecen en las directrices ICH relevantes:
Choice of control group and related issues in clinical trials (E10). Geneva, International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use, 2000.
Statistical principles for clinical trials (E9). Geneva, International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use, 1998.
4. ESTUDIOS FARMACODINÁMICOS.
(General)
Seleccionar los biomarcadores farmacodinámicos con base en la relevancia que tengan para demostrar la eficacia terapéutica del producto.
La duración y el diseño de los estudios
deben de ser justificados, los estudios
combinados de
farmacocinética/farmacodinamia
pueden dar información útil sobre la
relación entre la exposición y el efecto.
5. ESTUDIOS CLÍNICOS DE EFICACIA
Se debe de realizar un estudio administrando el medicamento biocomparable y el medicamento de referencia en pacientes con anemia renal.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
44
Determinaciones Farmacodinámicas (PD).
Las Determinaciones PD se determinarán mediante una medida PD que refleje el mecanismo de acción del fármaco, siempre y cuando la medida PD tenga una amplia gama dinámica en el rango de concentraciones de fármaco obtenidos durante el estudio PK. En esos casos, será necesaria una evaluación completa de la seguridad y de la inmunogenicidad. En los casos en que exista una correlación significativa entre los resultados de los perfiles PK y PD y la eficacia clínica, los resultados del perfil PK/PD puede hacer un estudio de eficacia comparativa innecesario. Comparación estadística de
los datos PK y PD. Se debe de realizar de acuerdo a lo establecido en la guía : Guidance for Industry, Statistical Approaches to Establishing Bioequivalence.
5. SEGURIDAD. Los datos de seguridad deben ser preferiblemente comparativos. Los datos de seguridad obtenidos a partir de los ensayos clínicos se deben enfocar principalmente en detectar reacciones adversas frecuentes y a corto. Estos datos son por lo general suficientes para la pre-licencia, pero es necesario un plan de seguridad clínica del SBP para la fase de post-comercialización.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
45
4) ENSAYOS CLÍNICOS DE INMUNOGENICIDAD.
La FDA recomienda el uso de un diseño paralelo comparativo en pacientes sin tratamiento previo para evaluación general de la inmunogenicidad. La evaluación general inmunogenicidad debe considerar:
La naturaleza de la respuesta inmune (por ejemplo, anafilaxis, anticuerpos neutralizantes).
La relevancia clínica y la gravedad de las consecuencias (por ejemplo, la pérdida de eficacia de los efectos adversos terapéuticos y otros para salvar vidas).
La incidencia de la respuesta inmune.
La población en estudio. Como una cuestión científica, un promotor debe evaluar los siguientes parámetros de anticuerpos en la evaluación de la inmunogenicidad clínica:
Título de anticuerpos, la especificidad, la distribución de isotipo correspondiente, curso temporal del desarrollo, la persistencia, la desaparición, el impacto en la PK, y la asociación con secuelas clínicas.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
46
4) ESTUDIOS COMPLEMENTARIOS
Comunidad Europea (EMA)
Canadá (Health Canada). Estados Unidos de
América (FDA)
OMS Expert Committee on Biological Standardization
México (COFEPRIS).
1. ESTUDIOS DE SEGURIDAD
CLÍNICA.
1.1 Inmunogenicidad.
Los datos comparativos de seguridad de los ensayos de eficacia en general son suficientes para proporcionar una base de datos adecuada de seguridad antes de la comercialización del medicamento.
El solicitante deberá presentar al menos 12 meses de datos de inmunogenicidad previa autorización. Los principios de la evaluación de la inmunogenicidad se llevarán a cabo de acuerdo a la guía:
“Guideline on immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic proteins (EMEA/CHMP/BMWP/ 14327/2006)”.
Es necesario el uso de un método validado altamente sensible para la detección de anticuerpos, este método debe de ser capaz de
1. PLAN DE
FARMACOVIGILANCIA
Se debe desarrollar un Plan de Gestión de Riesgo, el cual describe la información de seguridad del medicamento, además describe el plan de farmacovigilancia. 3. REQUISITOS POSTERIORES A
LA COMERCIALIZACIÓN.
Reacción adversa al
medicamento (RAM)
Presentación de informes.
Se requieren los informes de las
RAMs posteriores a la
comercialización de acuerdo con la
sección C.01.016 del Reglamento
de Productos Alimenticios y
Farmacéuticos: cualquier RAM
grave que se informe exige al
fabricante de ese medicamento
presentar toda la información con
respecto a dicho informe dentro de
1. CONSIDERACIONES DE
MONITOREO POST-COMERCIALIZACIÓN.
El Control de la seguridad posterior a la comercialización debe primero tener en cuenta:
Las preocupaciones de seguridad y eficacia particulares asociadas con el uso del producto de referencia y su clase.
La condición específica de uso y población de pacientes.
La exposición del paciente en el programa de desarrollo de biosimilares.
2. CONSULTA CON FDA
. Formal Meetings Between the FDA and Biosimilar Biological Product Sponsors or Applicants. La FDA normalmente debe
proporcionar información sobre una base de caso por caso de los componentes de
1. ENSAYOS DE INMUNOGENICIDAD.
La respuesta inmune a un bioterapéutico está influenciada por muchos factores incluyendo la naturaleza de la sustancia farmacológica, a productos y procesos relacionados impurezas, excipientes y estabilidad del producto, vía de administración, dosificación régimen, y el paciente, factores de enfermedades y / o relacionadas con el tratamiento. La inmunogenicidad de un bioterapéutico siempre debe ser investigado en los seres humanos ya que los datos de animales son por lo general no son predictivos de la respuesta inmune en los seres humanos. En caso de una eficacia similar se demuestre en los estudios PK/PD, todavía serán necesarios datos de inmunogenicidad en la población objetivo. El fabricante tendrá que justificar su estrategia de pruebas de anticuerpos incluyendo:
La selección de las pruebas.
1. PLAN DE FARMACOVIGILANCIA.
La farmacovigilancia, debe cubrir los requisitos establecidos en la Ley General de Salud, en el Reglamento de Insumos para la Salud y en la NOM-220-SSA1-2012.
La Farmacovigilancia se llevará a cabo empleando:
Método de notificación espontánea.
Método de farmacovigilancia intensiva.
Método de notificación en investigación clínica.
La farmacovigilancia se realizará a través del análisis de la siguiente información:
Estudios clínicos fases I a IV.
Reporte periódico de seguridad.
Informe de seguridad en México.
Reportes de seguridad de estudios clínicos.
Generación de señales.
Bases de datos epidemiológicas.
Planes de manejo de riesgos.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
47
detectar la respuesta inmune temprana y la respuesta inmune tardía.
Los anticuerpos detectados necesitan una caracterización adicional incluyendo su potencial de neutralización.
La base de datos referente a la
inmunogenicidad debe de incluir
un número suficiente de
pacientes con anemia renal
tratados por la vía subcutánea
(SC).
2. PLAN DE
FARMACOVIGILANCIA Dentro del procedimiento de autorización, el solicitante deberá presentar un plan de farmacovigilancia de acuerdo con la legislación de la Unión Europea actual y las Guías de Farmacovigilancia correspondientes.
El plan de farmacovigilancia se debe desarrollar de acuerdo a la guía: Note for Guidance on planning pharmacovigilance activities (ICH E2E).
los 15 días después de recibir la
información.
Informes Periódicos de
Seguridad (PSUR).
Se deben presentar como se discute en el PvP. La periodicidad de presentación de los PSUR debe ser coherente con las directrices ICH (ICH E2E) para nuevos productos o como lo determine el Ministro sobre la aprobación.
un programa de desarrollo de un producto propuesto.
La FDA recomienda a los patrocinadores utilizar un enfoque paso a paso para establecer la totalidad de la evidencia que soporta una demostración de biosimilitud.
La FDA también aconseja a los patrocinadores presentar sus planes de desarrollo de productos y establecer un calendario de hitos que servirán como puntos de referencia para las futuras discusiones con la Agencia.
Evaluación y caracterización de los ensayos.
La identificación de los tiempos de muestreo apropiados.
Se debe de incluyendo la línea de base.
Los volúmenes de muestra y el procesamiento de la muestra.
La selección de métodos estadísticos para el análisis.
Los Anticuerpos detectados deben de ser caracterizados y se debe de evaluar sus posibles implicaciones clínicas para la seguridad, la eficacia y la farmacocinética del medicamento.
2. PLAN DE FARMACOVIGILANCIA
El fabricante deberá presentar un pliego
de condiciones de seguridad y el plan de
farmacovigilancia en el momento de
presentación de la solicitud de
autorización de comercialización.
El plan de farmacovigilancia se debe de
realizar de acuerdo con lo establecido en
la guía de armonización ICH E2E Pharmacovigilance planning.
El plan de farmacovigilancia debe describir las actividades posteriores a la comercialización y los métodos basados en la especificación de seguridad.
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE CONTENGAN EPO (Continuación).
48
3. AMPLIACIÓN DE LA INDICACIÓN.
Debido a que el mecanismo de acción de la eritropoyetina es el mismo para todas las indicaciones aprobadas actualmente y sólo hay un receptor conocido de la eritropoyetina, la demostración de la eficacia y la seguridad en la anemia renal permitirá la extrapolación a otras indicaciones del medicamento de referencia con la misma vía de administración.
49
6. DISCUSIÓN
Durante la revisión de los requisitos necesarios para evaluar la biocomparabilidad
de los productos que contienen EPO en las diferentes regulaciones se encontró
que la única agencia regulatoria que cuentan con una guía específica para evaluar
este producto es la EMA.
Los demás países cuentan con guías generales para la caracterización
fisicoquímica, las pruebas preclínicas y las pruebas clínicas que avalen su
biocomparabilidad.
Al revisar los requisitos necesarios en la evaluación de la biocomparabilidad de
los productos en las diferentes guías internacionales, se encontró que:
La etapa medular en la evaluación de la biocomparabilidad es la caracterización
fisicoquímica de los medicamentos biotecnológicos. Debido a la naturaleza del
proceso de fabricación de estos medicamentos, es necesario que mediante la
caracterización fisicoquímica se demuestre que el medicamento biocomparable
sea altamente comparable al medicamento biológico innovador.
La EMA, a través de la guía: “Guideline on similar biological medicinal products
containing biotechnology-derived proteins as active substance: quality issues”,
describe de una forma más específica las pruebas necesarias para evaluar la
caracterización estructural, las propiedades fisicoquímicas y la actividad biológica
de la EPO. Las pruebas requeridas por la EMA se basan específicamente en
caracterizar ampliamente la estructura primaria, secundaria y terciaria de la
proteína así como las propiedades fisicoquímicas. Además, la EMA describe las
pruebas específicas para evaluar las modificaciones post-traduccionales de la
proteína como la caracterización de carbohidratos, la determinación de puentes
disulfuro, la cantidad de ácido siálico y el patrón de glicosilación de la proteína. La
evaluación del patrón de glicosilación y la cantidad de ácido siálico es de resaltar
ya que estas propiedades afectan drásticamente las características
farmacocinéticas de la EPO.
50
En cuanto a los ensayos de actividad biológica, estos son necesarios para
complementar la caracterización, la EMA es concreta al establecer que los
ensayos de unión al receptor, proliferación celular y ensayos de actividad se
realicen en una línea celular específica, que es la línea celular eritroleucémica
humana.
Por su parte, la FDA y Canadá se basan en la guía de Armonización “ICH Q6B:
Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/biological products”.
Aunque la guía es de carácter general para los productos biotecnológicos, en ella
se resalta la importancia de la caracterización de los mismos. De forma similar que
la EMA, en esta guía se especifica que es necesario evaluar tres aspectos
principales del medicamento biotecnológico: La caracterización estructural, las
propiedades fisicoquímicas y la actividad biológica. En esta guía se describe la
necesidad de evaluar: la secuencia de aminoácidos, modificaciones post-
traduccionales, actividad biológica, determinación de puentes disulfuro y patrón de
glicosilación. Sin embargo, debido al carácter general de la guía, será necesario
evaluar que pruebas son aplicables al medicamento biotecnológico en cuestión.
De igual forma la COFEPRIS y la OMS, se enfocan en evaluar los tres aspectos
de la caracterización, sin embargo se observa que la cantidad de pruebas a
realizar es menor en comparación con la EMA y la ICH Q6B. Esto es de resaltar,
ya que en las guías se establece la necesidad de una amplía caracterización del
medicamento biológico, entre mayor sea la caracterización, se tendrá mayor
confiabilidad en la realización y evaluación de los estudios pre-clínicos, clínicos y
de seguridad, estudios necesarios para evaluar la similitud en cuanto la seguridad
y eficacia del medicamento biosimilar.
51
Estudios Preclínicos.
En la realización de los estudios preclínicos en las guías de forma general se
establece la necesidad de evaluar in vitro / in vivo los parámetros PK, PD,
toxicocinética e inmunogenicidad.
En este aspecto, la EMA establece que la evaluación in vitro se debe de realizar
en una línea celular específica, la línea celular eritroleucémica, y los estudios in
vivo se realicen en ratones normocitémicos o policitémicos. De esta forma, se
busca evaluar de una forma más específica a la EPO y complementar el perfil de
caracterización de la misma.
En el caso de las guías ICH Q6B, WHO y la NOM-177, para la evaluación de los
estudios in vitro es necesario una línea celular derivada de mamíferos que exprese
el receptor específico, y para la evaluación de los estudios in vivo será necesario
evaluarlos en una especie relevante, la cual debe de reunir ciertas características
dependiendo de la guía consultada y del medicamento biológico a evaluar.
Todas las guías requieren que se lleven a cabo estudios de toxicidad en animales
en dosis repetidas, incluyendo la prueba de inmunogenicidad. En el caso de la
EMA, la evaluación de la inmunogenicidad se realiza a través de la guía:
“Guideline on immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic
proteins (EMEA/CHMP/BMWP/ 14327/2006)”. La FDA y Canadá requieren
también de pruebas de toxicidad a dosis repetidas así como la prueba de
inmunogenicidad, mediante la medición y caracterización de anticuerpos. En el
caso de México, se requiere llevar a cabo estudios de toxicocinética, seguridad
farmacológica e inmunogenicidad.
52
Estudios Clínicos.
a) Estudios de Farmacocinética.
Al hacer la comparación de los requisitos de los estudios clínicos, se encontró que:
Todas las guías requieren de un estudio fase 1 de farmacocinética y
farmacodinamia. En el caso de la EMA, para la eritropoyetina en particular, se
requiere que el estudio sea cruzado, dosis única, balanceado, en voluntarios
sanos, midiendo los parámetros: Área Bajo la curva (AUC) como parámetro
primario y a concentración plasmática máxima (Cmax) y vida media de eliminación
(t1/2) como parámetros secundarios. Las guías de Canadá y OMS requieren que
se determine la absorción, distribución metabolismo y eliminación del producto a
comparar vs el producto innovador, mientras que la guía de México no especifica
los parámetros a evaluar.
b) Estudios clínicos de eficacia.
Considerando que la farmacocinética no necesariamente está relacionada con la
eficacia, la mayor parte de las agencias regulatorias requieren que se lleve a cabo
un estudio clínico en el caso de productos biotecnológicos. Un caso interesante
es la FDA, ya que en su guía establece que si existe un marcador
farmacodinámico, el estudio de Farmacocinético /Farmacodinámico en pacientes
o voluntarios, sería suficiente para el registro del medicamento biocomparable
siempre y cuando haya demostrado que sus propiedades fisicoquímicas han sido
exhaustivamente evaluadas.
En el caso de la EMA, la guía requiere de un estudio en paralelo en pacientes con
anemia renal sin alguna otra complicación que pueda poner en riesgo la respuesta
al tratamiento con la eritropoyetina. La guía de Canadá establece que el estudio
clínico deberá ser un estudio de equivalencia terapéutica, mientras que la OMS
requiere de un estudio clínico aleatorizado y controlado bajo las directrices de las
guías ICH E10 e ICH E9. En el caso de México la guía establece realizar un
estudio administrando el medicamento biocomparable y el medicamento de
referencia en pacientes con anemia renal.
53
c) Inmunogenicidad.
Debido a que bioquímicamente la EPO está clasificada como una glicoproteína, el
sistema inmunitario es capaz de reconocerla como extraña y reaccionar en su
presencia, como por ejemplo el desarrollo de anticuerpos neutralizantes, etc. La
evaluación de la inmunogenicidad es un punto fundamental en el perfil de
seguridad Clínica en la evaluación de la EPO Biosimilar.
En este aspecto, al revisar las guías correspondientes de las entidades
regulatorias consultadas en este trabajo (EMA, FDA, Health Canada, OMS y
COFEPRIS) es notorio que la evaluación de la inmunogenicidad debe de
realizarse durante las diferentes etapas del estudio de biocomparabilidad, desde la
caracterización fisicoquímica, posteriormente los estudios pre-clínicos y clínicos, y
finalmente la monitorización de las posibles RAMs a través del plan de
farmacovigilancia.
Para la evaluación de la inmunogenicidad, la EMA emplea la guía: “Guideline on
immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic proteins”
(EMEA/CHMP/BMWP/ 14327/2006)”, en donde se establecen los requisitos
específicos a evaluar en este aspecto. De acuerdo con esta guía no solo es
necesario contar con un método validado capaz de detectar la respuesta
inmunológica temprana y tardía, también será necesario la caracterización y el
potencial de neutralización de los anticuerpos detectados de ser necesario. En el
caso de la FDA, esta se apoya en la guía: “Immunogenicity Assessment for
Therapeutic Protein Products”, evaluando los siguientes parámetros: título de
anticuerpos, especificidad, distribución del isotipo correspondiente, curso temporal
de desarrollo y su impacto en la farmacocinética y su asociación con secuelas
clínicas. En el caso de Canadá, esta agencia solicita la evaluación de los mismos
parámetros que la FDA. La OMS, establece que los anticuerpos detectados
deberán ser caracterizados y se debe evaluar el impacto en la seguridad, eficacia
y farmacocinética del medicamento. México no hace mención de los parámetros
para evaluar la inmunogenicidad.
54
7. CONCLUSIONES.
La Eritropoyetina es una glicoproteína ácida con una masa molecular de 30.4 kDa,
cuya estructura es compleja. Consta 165 aminoácidos residuales que forman
cuatro cadenas anti-paralelas, dos α-hélices y dos β-hojas, además cuenta con
dos intra-cadenas puentes disulfuro. La porción de carbohidratos (40% de la
molécula) comprende tres N-glicanos y un O-glicano. Los N-glicanos tienen una
variedad de funciones, incluyendo la protección de la EPO de proteasas y la
modulación de sus puentes receptores de afinidad.
Este biofármaco forma parte fundamental en la terapia de pacientes con daño
renal para tratar o prevenir la anemia, por lo que es de suma importancia
garantizar que al cambiar de una marca por otra no se ponga en riesgo al
paciente.
La revisión bibliográfica mostró que para demostrar la biocomparabilidad de los
productos conteniendo eritropoyetina, las agencias regulatorias requieren que se
realicen las siguientes pruebas para demostrar la biocomparabilidad:
a) Caracterización estructural y fisicoquímica.
b) Estudios preclínicos que incluyen: estudios de toxicología, evaluación de
unión a receptor y estudios de farmacocinética.
c) Estudios clínicos que incluyen: estudios de farmacocinética en voluntarios
sanos, estudios de farmacodinamia, estudios de eficacia en pacientes y
estudios de inmunogenicidad.
d) Estudios de farmacovigilancia.
Por la complejidad de estas moléculas, se requiere contar con equipos
especializados y personal altamente calificado para llevar a cabo las diferentes
etapas de los estudios. Este conjunto de pruebas permitirá garantizar la
seguridad, calidad y eficacia de los productos del mercado nacional conteniendo
este biofármaco.
55
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