determinacion de hierro con ortofenantrolina
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IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
LIC. EN QUÍMICA
ANÁLISIS QUÍMICO
DETERMINACION DE NITROGENO EN UNA MUESTRA DE HIGADO CON ORTO-FENANTROLINA
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
Jennifer Bocanegra y Deissy Sánchez
RESUMEN
En el presente artículo se presentarán las observaciones y datos obtenidos a partir
de la determinación de hierro en una muestra de hígado la cual se trato con orto-
fenantrolina, produciendo un complejo de color rojo llamado ferroína. A partir de
este complejo que se formó también en la muestra patrón se realizaron todos los
pasos de validación de un proceso analítico como son: curva de calibración, límites
de detección y cuantificación, precisión, sensibilidad, exactitud, carta de control y
cantidad de hierro presente en la muestra.
Anterior a esto se hizo la respectiva calibración de los equipos y materiales a usar
durante la práctica, además de ello se trabajó con una muestra patrón (sal de Mohr)
utilizando 10 concentraciones distintas que luego fueron analizadas en 4 equipos de
marca diferente en donde se tomaron las respectivas absorbancias haciendo el
barrido espectral para localizar la longitud de onda a trabajar durante el proceso
analítico.
PALABRAS CLAVE
Método Orto-fenantrolina, Calibración, Hierro, Espectrofotometría, ley de Beer,
Absorbancia, Análisis, Curvas, Precisión, exactitud, sensibilidad
ABSTRACT
In this article we present the observations and data obtained from the
determination of iron in a liver sample which was treated with ortho-
phenanthroline, producing a red complex called ferroin. From this complex is also
formed in the standard sample were carried out all steps of validation of an
analytical process such as: calibration curve, detection and quantification limits,
precision, sensitivity, accuracy, control chart and quantity of iron present in the
sample
This was done before the respective calibration of equipment and materials to use
during practice, it also worked with a sample (Mohr salt) using 10 different
concentrations were then analyzed in 4 different brand teams where absorbance by
taking the respective spectral scanning to find the length of walk to work during
the analytical process.
KEY WORDS
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
Ortho-phenanthroline method, Calibration, Iron, Spectrophotometry, Beer's law,
absorbance, Analysis, Curve, Precision, accuracy, sensitivity
__________________________________________________________________________
INTRODUCCIÓN
La ortofenantrolina reacciona con el Fe2+,
originando un complejo de color rojo
característico (ferroína) que absorbe
notablemente en las regiones del espectro
visible de alrededor de 505 nm. El Fe3+ no
presenta absorción a esa longitud de onda
y debe ser reducido a Fe2+ mediante un
agente reductor apropiado, como la
hidroxilamina, (en forma de clorato para
incrementar su solubilidad). (Boumans,
1997)
La reducción cuantitativa de Fe3+ a Fe2+
ocurre en pocos minutos en un medio
ácido (pH 3-4) de acuerdo a la siguiente
ecuación:
Después de la reducción del Fe 3+ a Fe
2+, se da la formación de un complejo con
la adición de ortofenantrolina. En un medio
acido la ortofenantrolina se encuentra en
su forma protonada como ion 1,10-
fenantrolin (FenH+).
La reacción de complejación puede ser
descrita por la siguiente ecuación: (La
estructura química del complejo se
muestra en la figura 2)
Fig. 2. Estructura química de la ferroína. Consiste en 3 moléculas de OP (ortofenantrolina) alrededor de un átomo central de Fe. Los átomos de carbono de la ferroína
están representados con sombras grises. Los átomos de N están representados en blanco
(http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/ManualdeFun
damentosyTecnicasdeAnalisisdeAlimentos_6501.pdf)
MATERIALES Y MÉTODO
MATERIALES Y REACTIVOS
Hidroxilamina
Sal de Mohr
Solución reguladora de acetato
amoniacal
O-fenantrolina
Agua destilada
Matraz aforado de 250 ml
Matraz aforado de 50 ml
Espectrofotómetro
Hígado
Espátula, vidrio de reloj
Capsula de porcelana
Crisol
Mechero
Bureta
Pinzas para crisol
MÉTODO
Se realizaron tres laboratorios para
calibrar los quipos y materiales, para
definir la longitud de onda a trabajar y
para realizar un barrido espectral en los
cuatro equipos a trabajar, para determinar
la sensibilidad del método y por último la
determinación de hierro en la muestra
problema.
Procedimiento:
Laboratorio No 1 de Orto- Fenantrolina
Este laboratorio se llevo a cabo con el fin
de fijar la longitud de onda de trabajo y
determinar la absorbancia de 10
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
concentraciones conocidas en 4 equipos
diferentes.
Pesar 0,35g de sal de Mohr
2ml HCl
Aforar a un balón de 250ml
Preparar un sln de 200ppm
A partir de la anterior sln
Preparar una sln de 10ppm
Distribuir en 10 balones a
concentraciones diferentes
A cada concentración
Adicionar 1ml de hidroxilamina
10ml sln reguladora
4ml Orto- fenantrolina
Aforar con H2O 50ml
Almacenar en oscuridad 10min
Leer absorbancia
Laboratorio No 2 Orto-Fenantrolina
Este laboratorio se tomaron 4 muestras a
diferentes concentraciones se realizo
lecturas de absorbancia a una longitud de
onda de 500nm para posteriormente
determinar la sensibilidad del método.
Por otro lado se procedió a preparar la
muestra problema para la determinación
de hierro.
Pesar 0,175g de sal de Mohr
2ml HCl
Aforar a un balón de 250ml
Preparar un sln de 5 ppm
A partir de la anterior sln
Distribuir en 4 balones a concentraciones
diferentes
A cada concentración
Adicionar 1ml de hidroxilamina
10ml sln reguladora
4ml Orto- fenantrolina
Aforar con H2O 50ml
Almacenar en oscuridad 10min
Leer absorbancia
Preparación de la muestra
Muestra
Homogeneizar
Pesar X g en un crisol
Carbonizar en mechero
Calcinar 600°C
Obtener cenizas blancas
Laboratorio No 3 Orto-Fenantrolina
Determinación de hierro en la muestra
problema
Muestra calcinada
Enfriar
Adicionar 5ml HCl y 1ml HNO3
concentrados
Transferir a una capsula de porcelana
Evaporar a sequedad
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
Adicionar 3ml HCl
Evaporar a sequedad
Adicionar aprox
20ml de H2O
Diluir a 50ml
*Tomar alícuota de 10ml*
Desarrollar color completando a vol. de
50ml
Leer absorbancia
*La alícuota depende de la
muestra*
RESULTADOS Y ANÁLISIS DE
RESULTADOS
Inicialmente y como se muestra en el
procedimiento, se tomó una muestra
patrón de sal de Mohr para realizar el
barrido espectral cuyos datos fueron los
siguientes:
BARRIDO ESPECTRAL SAL DE MOHR
1ppm
TABLA 1
CONCENTRACION:
1ppm
λ ABSORBANCIA
400 0,029
430 0,053
460 0,066
490 0,072
520 0,073
610 -0,003
640 0,013
670 0,013
700 0,013
En la grafica No 1 se observan los datos
de absorbancia a diferentes longitudes de
onda realizadas en la primera práctica, en
donde claramente el espectro muestra la
longitud de onda de máxima absorbancia
que esta a 520 nm.
Grafica 1
Con la longitud de onda definida solo se
dio lectura de absorbancia a las primeras
cinco concentraciones en el visible, puesto
que las 10 concentraciones se
distribuyeron por grupos.
A a 520 nm
TABLA 2: (5/10) concentraciones de la sal
y sus respectivas absorbancias.
CONCENTRACION
SAL ppm
ABSORBANCIA
1 0,073
0,5 0,039
0,2 0,037
0,1 0,031
0,02 0,031
Una vez evaluada la longitud de onda
analítica se unieron los datos de
absorbancia de los respectivos equipos y
se construyeron las respectivas curvas de
Ringbom.
CURVA DE RINGBOM HITACHI:
A continuación se mostraran las graficas
correspondientes de cada uno de los
equipos utilizados en el laboratorio.
GRAFICA 2: ABSORTANCIA Vs LOG DE
LA CONCENTRACIÓN
-0,02
0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,1
0 200 400 600 800A
BSO
RB
AN
CIA
LONGITUD DE ONDA
BARRIDO ESPECTRAL
400
430
460
490
520
610
640
670
Comentario [JB1]: EL PUNTO DE COLOR AMARILLO INDICA LA REGIÓN DE MAXIMA ABSORBANCIA ( 520 nm).
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
GRAFICA 3: % TRANSMITANCIA Vs LOG
DE LA SAL
GRÁFICA 4: RESIDUOS
GRAFICA 5: ABSORBANCIA Vs
CONCENTRACIÓN
CURVA DE RINGBOM BECKMAN
GRAFICA 6: ABSORTANCIA Vs LOG DE
LA CONCENTRACIÓN
GRAFICA 7: % TRANSMITANCIA Vs LOG
DE LA SAL
0,0010,0020,0030,0040,0050,0060,0070,0080,0090,00
100,00
-2,10-1,80-1,50-1,20-0,90-0,60-0,300,000,300,600,901,201,50
10
0-%
T
LOG [ ]
HITACHI: 100-%T vs lOG [sal de mohr]
0,00
20,00
40,00
60,00
80,00
100,00
-2,00 -1,00 0,00 1,00 2,00
%T
LOG [ ]
HITACHI: %T vs LOG [sal de mohr]
-0,40
-0,20
0,00
0,20
0,40
0,60
0,00 0,50 1,00 1,50
A-A
'
A'
HITACHI: GRAFICA DE RESIDUOS
0,36
0,37
0,38
0,40
0,43
0,50
0,54
0,71
y = 0,0705x + 0,3622R² = 0,6814
0
0,5
1
1,5
0 5 10 15 20
AB
SOR
BA
NC
IACONCENTRACIÓN
HITACHI: A Vs C
0,0010,0020,0030,0040,0050,0060,0070,0080,0090,00
100,00
-2,10-1,80-1,50-1,20-0,90-0,60-0,300,000,300,600,901,201,50
100-
%T
LOG [ ]
BECKMAN: 100-%T vs lOG [sal de mohr]
Comentario [JB2]: Los datos de color rojo son los que no cumplen la ley de Beer.
Comentario [JB3]: La gráfica de residuos nos muestra la dispersión de los datos, los más alejados son los que no cumplen la ley de Beer.
Comentario [JB4]: Esta es la gráfica con los datos que no cumplen la Ley de Beer
Comentario [JB10]: ESTE EQUIPO PRESENTA UNA DESVIACIÓN MUCHO MAYOR EN TODOS SUS DATOS EN COMPARACIÓN CON LOS OTROS TRES. PUEDE DEBERSE A UNA MALA CALIBRACIÓN DEL EQUIPO ANTES DE USARSE O AL MANEJO DE LAS CONCENTRACIONES O DE TRAZAS PRESENTES EN LAS MUESTRAS A ANALIZAR.
Comentario [JB5]: Los puntos coloreados corresponden a las desviaciones a la ley de Beer.
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
GRÁFICA 8: RESIDUOS
GRAFICA 9: ABSORBANCIA Vs
CONCENTRACIÓN
CURVA DE RINGBOM SPECTRONIC 20
GRAFICA 10: ABSORTANCIA Vs LOG DE
LA CONCENTRACIÓN
GRAFICA 11: % TRANSMITANCIA Vs LOG
DE LA SAL
GRÁFICA 8: RESIDUOS
GRAFICA 13: ABSORBANCIA Vs
CONCENTRACIÓN
0,00
20,00
40,00
60,00
80,00
100,00
-2,00 -1,00 0,00 1,00 2,00
%T
LOG [ ]
BECKMAN: %T vs LOG [sal de mohr]
-0,20-0,15-0,10-0,050,000,050,100,150,200,250,300,350,400,450,50
0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40 1,60 1,80
A-A
'
A'
BECKMAN: GRAFICA DE RESIDUOS
y = 0,1095x + 0,0909R² = 0,9047
0
0,5
1
1,5
2
0 5 10 15 20
AB
SOR
BA
NC
IA
CONCENTRACIÓN
BECKMAN: A Vs C
0,0010,0020,0030,0040,0050,0060,0070,0080,0090,00
100,00
-2,10-1,80-1,50-1,20-0,90-0,60-0,300,00 0,30 0,60 0,90 1,20 1,50
10
0-%
T
LOG [ ]
SPECTRONIC 20: 100-%T vs lOG [sal de mohr]
0,00
20,00
40,00
60,00
80,00
100,00
120,00
-2,00 -1,00 0,00 1,00 2,00
%T
LOG [ ]
SPECTRONIC 20: %T vs LOG [sal de mohr]
-0,20-0,15-0,10-0,050,000,050,100,150,200,250,300,350,400,450,50
0,000,200,400,600,801,001,201,401,601,80
A-A
'
A'
SPECTRONIC 20: GRAFICA DE RESIDUOS
Comentario [JB6]: AL IGUAL QUE LAS OTRAS GRAFICAS, LOS PUNTOS COLOREADOS REPRESENTAN LAS DESVIACIONES A LA LEY DE BEER.
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
CURVA DE RINGBOM SHIMADZU
GRAFICA 14: ABSORTANCIA Vs LOG DE
LA CONCENTRACIÓN
GRAFICA 15: % TRANSMITANCIA Vs LOG
DE LA SAL
GRÁFICA 16: RESIDUOS
GRAFICA 17: ABSORBANCIA Vs
CONCENTRACIÓN
CURVA DE CALIBRACIÓN DE LAS GRÁFICAS DE LOS 4 EQUIPOS
A partir de las curvas de Ringbom, se realizaron las curvas de calibración en donde se
muestran únicamente los datos; en este caso, las concentraciones que si cumplen la Ley de
Beer, para ello se calcula la ecuación de la recta, en donde se espera que el valor de r sea
muy próximo a 1.
DATOS
y = 0,1186x + 0,0856R² = 0,8845
-0,5
0
0,5
1
1,5
2
0 5 10 15 20
AB
SOR
BA
NC
IA
CONCENTRACIÓN
SPECTRONIC 20: A Vs C
0,010,020,030,040,050,060,070,080,090,0
100,0
-2,10-1,80-1,50-1,20-0,90-0,60-0,300,000,300,600,901,201,50
10
0-%
T
LOG [ ]
SHIMADZU: 100-%T vs lOG [sal de mohr]
0,0
20,0
40,0
60,0
80,0
100,0
120,0
-2,00 -1,00 0,00 1,00 2,00
%T
LOG [ ]
SHIMADZU: %T vs LOG [sal de mohr]
-2,0E-01-1,5E-01-1,0E-01-5,0E-020,0E+005,0E-021,0E-011,5E-012,0E-012,5E-013,0E-013,5E-014,0E-014,5E-015,0E-01
0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00 1,20 1,40 1,60 1,80
A-A
'
A'
SHIMADZU: GRAFICA DE RESIDUOS
y = 0,1095x + 0,102R² = 0,9066
0,00E+00
5,00E-01
1,00E+00
1,50E+00
2,00E+00
0 5 10 15 20
AB
SOR
BA
NC
IA
CONCENTRACIÓN
SHIMADZU: A Vs C
Comentario [JB7]: CONCENTRACIONES QUE NO CUMPLEN LA LEY DE BEER
Comentario [JB8]: CONCENTRACIONES EN DONDE NO SE CUMPLE LA LEY DE BEER
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
CURVA DE CALIBRACION BECKMAN
Concentración Absorbancia
0,02 0,031
0,1 0,031
2,5 0,456
5 0,883
10 1,475
CURVA DE CALIBRACION SHIMADZU
Concentración Absorbancia
1 0,175
2 0,38
2,5 0,436
10 1,431
CURVA DE CALIBRACION HITACHI
Concentración Absorbancia
0,2 0,22
10 1,032
15 1,356
CURVA DE CALIBRACIÓN SPECTRONIC
20
Concentración Absorbancia
0,02 0,013
0,1 0,017
2 0,475
5 1
10 1,602
00,10,20,30,40,50,60,70,80,9
11,11,21,31,41,51,61,71,8
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
AB
SOR
BA
NC
IA
CONCENTRACIÓN
SHIMADZU: A vs C
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
0 5 10 15 20
AB
SOR
BA
NC
IA
CONCENTRACIÓN
HITACHI: A vs C
-0,10
0,10,20,30,40,50,60,70,80,9
11,11,21,31,41,51,61,71,8
-1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
AB
SOR
BA
NC
IA
CONCENTRACIÓN
BECKMAN: A vs C
-0,2-0,1
00,10,20,30,40,50,60,70,80,9
11,11,21,31,41,51,61,71,8
-1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
AB
SOR
BA
NC
IA
CONCENTRACIÓN
SPECTRONIC 20: A vs C
Comentario [JB9]: EL SPECTRONIC, SHIMADZU Y BECKMAN PRESENTARON MAYOR LINEALIDAD, ES DECIR UNA MENOR DESVIACIÓN EN LOS DATOS EN COMPARACION CON EL HITACHI, SIENDO LOS DOS ULTIMOS LOS QUE PRESENTARON MAYOR NUMERO DE CONCENTRACIONES EN DONDE SE CUMPLIA LA LEY DE BEER.
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
TABLA 3: DATOS CURVA DE RINGBOM CON
CEN
TRA
CIÓN
MARCA DEL EQUIPO Y
RESPECTIVAS
ABSORBANCIAS TRANSMITANCIAS %
LO
G [
SAL
] ABSORTANCIA A' A-A'
(ppm
)
HIT
AC
HI
BE
CK
MA
N
SHI
MA
DZ
U
SPEC
TRO
NIC
20
HI
TA
CH
I
BE
CK
MA
N
SHI
MA
DZ
U
SPEC
TRO
NIC
20
DA
TO
S
HI
TA
CH
I
BE
CK
MA
N
SHI
MA
DZ
U
SPEC
TRO
NIC
20
HI
TA
CH
I
BE
CK
MA
N
SHI
MA
DZ
U
SPEC
TRO
NIC
20
HI
TA
CH
I
BE
CK
MA
N
SHI
MA
DZ
U
SPEC
TRO
NIC
20
0,02 0,05
0,0
31
8,7
1E-
03 0,013
89
,1
3
93,
11
98,
0 97,05
-
1,7
0
10
,8
7
6,8
9 2,0 2,95
0,
36
0,0
9
0,1
0 0,09
-
0,
31
-
0,0
6
-
8,0
E-
02 -0,08
0,1
0,13
2
0,0
31
9,2
1E-
03 0,017
73
,7
9
93,
11
97,
90 96,16
-
1,0
0
26
,2
1
6,8
9
2,1
0 3,84
0,
37
0,1
0
0,1
1 0,10
-
0,
24
-
0,0
7
-
8,9
E-
02 -0,08
0,2 0,22
0,0
37
0,0
24 0,022
60
,2
6
91,
83
94,
62 95,06
-
0,7
0
39
,7
4
8,1
7
5,3
8 4,94
0,
38
0,1
1
0,1
2 0,11
-
0,
16
-
0,0
7
-
8,6
E-
02 -0,09
0,5
0,52
1
0,0
39
0,0
86 0,031
30
,1
3
91,
41
82,
04 93,11
-
0,3
0
69
,8
7
8,5
9
17,
96 6,89
0,
40
0,1
4
0,1
6 0,15
0,
12
-
0,1
1
-
5,9
E-
02 -0,11
1
0,97
8
0,0
73
0,1
75 0,026
10
,5
2
84,
53
66,
83 94,19
0,0
0
89
,4
8
15,
47
33,
17 5,81
0,
43
0,2
0
0,2
1 0,20
0,
55
-
0,1
3
-
2,9
E-
02 -0,18
2
0,41
3
0,4
18
0,3
8 0,475
38
,6
4
38,
19
41,
69 33,50
0,3
0
61
,3
6
61,
81
58,
31 66,50
0,
50
0,3
1
0,3
2 0,32
-
0,
09
0,1
1
5,8
E-
02 0,15
2,5
0,61
5
0,4
56
0,4
36 0,456
24
,2
7
34,
99
36,
64 34,99
0,4
0
75
,7
3
65,
01
63,
36 65,01
0,
54
0,3
6
0,3
8 0,38
0,
08
0,0
9
5,5
E-
02 0,08
5
0,86
6
0,8
83
0,9
8 1
13
,6
1
13,
09
10,
47 10,00
0,7
0
86
,3
9
86,
91
89,
53 90,00
0,
71
0,6
4
0,6
5 0,68
0,
15
0,2
5
3,0
E-
01 0,32
10
1,03
2
1,4
75
1,4
31 1,602
9,
29
3,3
5
3,7
1 2,50
1,0
0
90
,7
1
96,
65
96,
29 97,50
1,
06
1,1
9
1,2
0 1,27
-
0,
03
0,2
9
1,7
E-
01 0,34
15
1,35
6
1,4
43
1,4
68 1,523
4,
41
3,6
1
3,4
0 3,00
1,1
8
95
,5
9
96,
39
96,
60 97,00
1,
41
1,7
3
1,7
4 1,86
-
0,
06
-
0,2
9
-
3,9
E-
01 -0,33
TABLA 4: DATOS PARA GRAFICAR
CURVA DE RINGBOM Y CALIBRACION
En la tabla No 4 se observan los datos de
absorción correspondiente para el
segundo laboratorio.
Para poder determinar la sensibilidad del
método se tomaron cuatro muestras con
diferentes concentraciones y se leyeron
en el equipo de marca Beckman a 500
nm.
CON
CEN
TRA
CION
A a
500
nm
%T AB
SO
RT
AN
LO
G [
]
A' A-A' ∆ABS
ORBA
NCIA
S
ppm CIA
0,1 0,0
07
98,
40
1,6
0
-1 0,
2
3
-
0,23
0,032
0,2 0,0
39
91,
41
8,5
9
-
0,7
0
0,
2
3
-
0,19
0,069
0,5 0,1
08
77,
98
22,
02
-
0,3
0
0,
2
4
-
0,13
0,11
1 0,2
18
60,
53
39,
47
0 0,
2
4
-
0,02
GRAFICA 18: TRANSMITANCIA Vs LOG DE LA SAL
DE MOHR
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
GRAFICA 19: ABSORBANCIA Vs LOG DE LA SAL
DE MOHR
En las graficas anteriores 18 y 19 se
puede observar que las concentraciones
utilizadas cumplen la ley de Beer, puesto
que estos valores no tienen ningún dato
anómalo, sino valores con una distribución
lineal lo que indica que no están sujetos a
errores sistemáticos, esto se puede
observar en la ecuación de la recta
mostrada en la siguiente gráfica.
CALCULO DE SENSIBILIDAD
ó
TABLA 5: DATOS PARA DETERMINAR
SENSIBILIDAD DEL MÉTODO
CONCENTRACIO
N ppm
A a 500
nm
∆ABSORBAN
CIAS
0,1 0,007 0,032
0,2 0,039 0,069
0,5 0,108 0,11
1 0,218
Ecuación de la recta:
a=-0,011
b= 0,231
r= 0,9989
PENDIENTE = 0,231
A esta concentración el equipo va a
generar un cambio en la lectura de
absorbancia
LIMITES DE DETECCION Y
CUANTIFICACIÓN
Para determinar los limites de detección y
cuantificación se tomo una solución de 0
ppm.
TABLA 6: ABSORBANCIAS DEL BLANCO
A 0 ppm
-0,019
-0,037
-0,039
-0,038
-0,033
DESVIACIÓN ESTANDAR =0,0083
COEFICIENTE DE VARIACIÓN
=
C.V=
= 0,25
Para la cantidad mínima detectable y
cuantificable se obtuvieron los datos así
LD=0,0107ppm siendo la mínima cantidad
de analito que puede ser detectado y
LC=0,358ppm limite donde empieza a ser
cuantificable.
0,00
50,00
100,00
150,00
-1,5 -1 -0,5 0
TRA
NSM
ITA
NC
IA
LOG [ SAL DE MOHR]
TRANSMITANCIA Vs LOG [ SAL DE MOHR]
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
-1,5 -1 -0,5 0AB
SOR
TAN
CIA
LOG [SAL DE MOHR]
ABSORTANCIA Vs LOG[SAL DE MOHR]
y = 0,2308x - 0,0109R² = 0,9978
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0 0,5 1 1,5abso
rban
cia
a 5
00
nm
concentración sal de mohr
A Vs C a 500 nmComentario [JB11]: Los datos presentados en esta gráfica corresponden a los de la tabla numero 4; aquí podemos observar mediante la ecuación de la recta que no hay desviaciones aparentes a la Ley de Beer.
Comentario [JB12]: PARA DETERMINAR LA SENSIBILIDAD SE TOMA EL VALOR MENOR DE LOS ∆ABSORBANCIAS
Comentario [JB13]: Como se puede observar (siguiendo el hipervínculo), el valor de sensibilidad es mucho menor al limite de cuantificación, por lo tanto no es necesario regresar al laboratorio a preparar soluciones más próximas, puesto que con las que se trabajaron fueron las adecuadas para generar sensibilidad en el equipo.
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
Si se observa que existe coherencia con la
sensibilidad del método pues el dato de
sensibilidad esta dentro del rango de los
límites de detección y cuantificación esto
significa que la realización del método fue
la adecuada
PRECISION
TABLA 7: DATOS DE ABSORBANCIA DEL PATRON (SAL DE MOHR)
A a
[0,5ppm]500
nm
0,139
0,128
0,13
0,134
0,159
0,157
0,156
DESTAN:
0,014
PROMEDIO:
0,143
El método fue preciso en un 9%.
CARTA DE CONTROL
TABLA 8: DATOS DE LA CARTA DE CONTROL
x+3d 0,184
x+2d 0,171
x+d 0,157
x 0,143
x-d 0,130
x-2d 0,116
x-3d 0,102
La carta de control indica las zonas en las
que el método resulta confiable, si se sale
de las zonas de confiabilidad se necesitará
volver al laboratorio y realizar la práctica
de nuevo.
CANTIDAD DE HIERRO EN LA MUESTRA:
Para la determinación hierro, se utilizo
hígado de res.
Peso de la muestra= 0,536 g
TABLA 9. ABSORBANCIA DE LA
MUESTRA A 500nm
N° DE
REPLICAS
A a
500nm
1 0,035
2 0,036
3 0,037
4 0,038
5 0,038
6 0,038
7 0,039
8 0,039
9 0,039
10 0,039 PROMEDIO DE
A 0,0378
Absorbancia = 0,0378
Como conocemos el valor de A entonces
se despeja C
í
0,100
0,110
0,120
0,130
0,140
0,150
0,160
0,170
0,180
0,190
1 2 3 4 5 6 7 8 9
CARTA DE CONTROL
x+3d
x+2d
x+d
x
x-d
x-2d
x-3d
IRON DETERMINATION IN A SAMPLE OF LIVER WITH ORTHOPHENANTHROLINE
Sin embargo el resultado fue muy bajo, tan
solo de 0,0000197 mg, lo que indicaría
que el pedazo de hígado utilizado no
contiene casi hierro.
EXACTITUD
E=
El hígado de cerdo tiene 10,2 mg de hierro
por cada 100 gramos y el hígado de
ternera tiene 7,9 mg. cada 100 gramos. El
de hígado de res el cual fue utilizado en la
práctica tiene 6,0 mg. de hierro cada 100
gramos. (FENNEMA, 1993)
CONCLUSIONES
El mal manejo de un equipo puede
conllevar a resultados poco
precisos y exactos, por ello es
necesario que antes de usarse, se
calibre con un blanco, y si es
necesario que este proceso se haga
más de dos veces debe realizarse
para mayor confiabilidad.
En la determinación de hierro, el
complejo rojo-naranja que se forma
es un quelato de tres moléculas de
fenantrolina por átomo de Fe
(ferroína). La solución coloreada
obedece a la ley de Beer, su
intensidad es independiente del pH
entre 3 y 9, aunque un pH ácido
(2,9 - 3,4) asegura un rápido
desarrollo del color por esto es
importante la adición de HCl y
HNO3. (Skoog,2001)
Cualquiera de estos oxidantes
fuertes, cianuro, nitrito, fosfatos,
cromo, zinc, cobalto y cobre,
bismuto, el cadmio, el mercurio, el
molibdato y la plata precipitan la
fenantrolina. La adición de un
exceso de hidroxilamina elimina los
errores causados por exceso de
reactivos oxidantes.(Skoog, 2001)
La presencia de iones metálicos, es
necesario utilizar exceso de
fenantrolina, aunque también se
puede realizar una extracción.
Para evitar la existencia de
cantidades de materia orgánica o
colorante, es mejor evaporar la
muestra, llevar el residuo a
combustión seca suave, y volver a
disolver en ácido. La presencia de
cantidades excesivas de materia
orgánica puede hacer necesaria una
digestión.
El procedimiento del método de la
fenantrolina tiene cierta limitación
en su aplicabilidad, ha de evitarse
un almacenamiento prolongado o la
exposición a la luz.
BIBLIOGRAFÍA
BOUMANS, H., Van Gaalen, M.C.M.,
Grivell, L.A. y Berden, A. 1997.
Differential Inhibition of the Yeast
bc1 Complex by Phenanthrolines
and Ferroin. The Journal of
Biological Chemistry. 272, 2,
19753-19760.(PDF)
FENNEMA O.; Química de
alimentos; Acribia, segunda edición;
España 1993.
HART F. L; Análisis moderno de los
alimentos; Acribia. Zaragoza
(España), 1991.
Skoog D.A, West D.M. 2001.
Química analítica, séptima edición,
Mc Graw Hill. México.
Skoog D.A, Holler J.F, Nieman
T.A.2001. Principios de análisis
instrumental, quinta edición, Mc
Graw Hill/ Interamericana
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