expression of heat shock protein 27 in prostate cancer cell lines according to the extent of...

EXPRESSION OF HEAT SHOCK PROTEIN 27 IN

PROSTATE CANCER CELL LINES ACCORDING TO THE EXTENT OF MALIGNANCY

AND DOXAZOSIN TREATMENT

Seung Wook LeeJeong Woo LeeJae Hoon ChungJung Ki Jo María Isabel Pérez Palacio

Camilo Ruiz Mejía

INTRODUCTION

HEAT SHOCK PROTEIN 27

It is important in the control of

apoptosis (anti-apoptic agent) in

tumor and cell protection by

interacting with both mitochondrial

dependent and independent

pathways of apoptosis

HSP 27 interacts with caspase 9 pathways , interrupting caspase 3 activation and therefore inhibiting the apoptosis process. `

FUNCTIONS

HSP is related to the folding, activation, trafficking, and

transcriptional activity of most steroid receptors including

androgen receptor

Prostate cancer is becoming an increasingly common disease in men.

PROSTATE CANCER

During the normal aging process, the prostate gland grows , however in prostate cancer, malignant cells proliferate and cause adenocarcinoma

PROSTATE CANCER

Prostate cancer may cause Pain Difficulty

in urinating, Problems during

sexual intercourse Erectile dysfunction Death

PROSTATE CANCER

Many people have been treated successfully however it is as dangerous as any other cancer because of the risk that it may metastasize

PROSTATE CANCER

POSSIBLE TREATMENTSSurgeryRadiation therapyHormone therapyChemotherapy

PROSTATE CANCER

DOXAZOSIN (CARDURA)

Antitumor activity

It has a potent antigrowth effect against androgen

independent human prostate

cells

It is an R1 B adrenoreceptor

antagonist which confers it an

antiproliferative property

RELATIONSHIP

Prostate cancer is a common disease in men today

Possible treatment : Doxazosin

which is used as an anti proliferative in

malignant prostate cells

It can be hindered

by the expression of HSP 27

Who's purpose is to play a role in the regulation of apoptosis acting as an anti apoptotic agent.

GENERAL OBJECTIVE

The objective of this study was to analyze the

expression of HSP 27 in prostate cancer cells both

treated and not treated with Doxazosin.

MÉTODOS Y MATERIALES

SUJETOS

RWPE-1

LNCaP

Pc-3

TSU-Pr1

COLECCIÓN DE CULTIVOS

DE TIPO AMERICANO

SUJETOS

RWPE-1 LNCaP Pc-3 TSU-Pr1

Grupo control

Grupo tratado con 10 o 25 microM de Doxazosina

Grupo de control de vectores

tratado con DMSO

CULTIVO DE CÉLULAS

TSU-Pr1PC-3LNCaPRWPE-

1

Medio nutritivo F12(10% FBS)(Penicilina)

(Estreptomicina) • 37 C• 5% Co2

ANTES DE TRATAMIENTO

FRAGMENTACIÓN DNA

Se realizó esta prueba para analizar la apoptosis en la PC-3 tratada con doxazosina

FRAGMENTACIÓN DNA

Esta es una prueba o método cualitativo para la evaluación de la muerte celular mediante la detección de fragmentos de ADN.

Se basa en la utilización de electroforesis en gel de agarosa.

260 nm

FRAGMENTACIÓN DNA

Una de las características clásicas de la apoptosis es la escisión del ADN genómico en fragmentos oligonucleosomales

La visualización de estos fragmentos puede ayudar a la caracterización de un evento apoptótico.

RT- PCR

Esta prueba se utilizó con el fin de aislar el RNA total.

Se usa RT-PCR cuantitativa para cuantificar mRNA específicos, este análisis permite para una prueba más rápida, con una mayor sensibilidad, es simple y sencilla.

RT- PCR

TUNEL En el articulo se utilizó para analizar el efecto de la doxazosina en la apoptosis de PC-3

TUNEL es un método común para la detección de la fragmentación del ADN que resulta

de cascadas de señalización de apoptosis.

TRATAMIENTO DOXASOZINA

Todas las células fueron tratadas con una dosis letal

media de doxasozina y 0.25 % DMSO como el control.

INMUNOTINCIÓN Se pretendía observar la tinción de HSP27 en cada cultivo celular.

Se utilizó una inmunotinción directa.

Se comparo la intensidad de la tinción en los cuatro cultivos celulares.

INMUNOTINCIÓN

Absorben luz= 200-400 nm (luz

UV).

Emiten= 400-700 nm (luz

visible).

La luz es proporcional a la

cantidad de Ag.

Ag= HSP27.

RESULTADOS

NIVEL DE EXPRESIÓN DE HSP27

NIVEL DE EXPRESIÓN DE HSP27

•INMUNOFLUORECENSIA.

•La tinción para TSU-Pr1 fue la más intensa.

•El orden fue el siguiente:

•RWPE-1 <LNCaP <PC-3 <TSU-Pr1

EXPRESIÓN DE HSP27 EN TRATAMIENTO CON DOXAZOSINA

RT-PCR:

Control 50 %.

CV (DMSO) 60%.

10 µM 110 %.

25 µM 128%.

DOXAZOSIN INDUCE EXPRESIÓN DE HSP27

• INMUNOFLUORESCENCIA DE HSP27:

• Células HSP27 positivas Más intenso 10 µM y 20 µM.

DOXAZOSINA INDUCE APOPTOSIS.

• TUNEL:• La HSP se expresa en células con núcleo condensado

y escaso citoplasma (apoptosis).• Células que expresan HSP27 TUNEL

POSITIVO.

DISCUSSION

36

AUTHOR THEORY RESULTS

Rochi et al. The increase in HSP27 protected the cells in the process of CRPC. YES

Miyake et al. The expression of HSP27 is useful to predict

biochemical recurrence in prostate cancer

YES

37

AUTHOR THEORY RESULTS

Rochi et al. They found that HSP27 played a role as the apoptosis controller. YES

Teimourian et al. After irradiation, there was less viability in cells

that reduced the expression of HSP27,

that in those who didn´t.

YES

CONLUSIONS

CONCLUSIONS

It is important to study the expression of HSP27, because it

gives us a chance to look for new therapeutic options.

Prostate cancer is really common disease, and we need to

investigate more about it.

39

The study of heat shock proteins might give us a

chance to understand the development of tumoral

processes.

If we find new ways of treatment, we might reduce the

mortality level due to prostate cancer.

CAMILO RUIZ MEJÍA

María Isabel Pérez Palacio

BIBLIOGRAFIA

1. Xanthoudakis S., & Nicholson D.W. Heat-shock proteins as death determinants. nature (internet). 2000 (citado marzo 7 de 2014);2:1-9. Disponible en:http://www.nature.com/ncb/journal/v2/n9/fig_tab/ncb0900_E163_F1.html

2. Martínez L.M., Vargas N., Toro A.E., Pamplona A.P., Quevedo E. Biologia Molecular, 7ma edición. Medellín, Colombia: UPB. 2012;31(3): 247-243.

3. Seung W.L.,Jeong W.L., Jae H.C., Jung K.J. Expression of heat shock protein 27 in prostate cancer cell lines according to the extent of malignancy and doxazosin treatment. World J Mens Health; 2014