lp 8,9 - diagnosticul in infectie cu virusuri hepatitice
Post on 27-Jan-2016
17 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
ORIENTAREA DIAGNOSTICA IN
HEPATITE VIRALE
1. Tablou clinic
2. Teste biochimice • Markerii necrozei hepatocitare (transaminaze, LDH)
• Markeri colestaza (FAL, GGT, bilirubina)
• Markeri ai incapacitatii de sinteza la nivel hepatic (proteine serice, colesterol, trigliceride)
3. Date epidemiologice: cale transmitere, contact infectant, per. incubatie, vaccinuri
4. Diagnostic etiologic = detectia markerilor virali: • antigene virale (Ag)
• anticorpi antivirali (Ac)
• acid nucleic viral
A “Infectioasa”
“Serica”
HEPATITA
VIRALA
Transmitere
Enterica
Transmitere
Parenterala
E
“NANB”
B D
C
EPIDEMIOLOGIE
Virusuri hepatitice F,G…
Coxackie, EBV, CMV, arbovirusuri
McCallum-1942
1989-Choo
Simptome
AgHBe
ADN/VHB
anti-HBe
anti-HBc totali
anti-HBc IgM anti-HBs AgHBs
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 100
Infectia acuta cu VHB
evolutie spre vindecare
Saptamini post expunere
IgM anti-HBc
Total anti-
HBc
HBsAg
Acute
(6 months)
HBeAg
Chronic
(Years)
anti-HBe
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 Years
Weeks after Exposure
Infectia cronica cu VHB
Tehnica ELISA “sandwich” 1. Incubare ser pacient 1h la 37ºC 2. Spalare 3. Incubare CONJUGAT 60min la 37ºC 4. Spalare 5. Incubare SUBSTRAT 20 min la t.camerei 6. Solutie de stopare 7. Citire la spectrofotometru => D.O., MN, MP,
C.O.
ELISA de detectie a Ag
virale
Ag HBs
Anti HBs
Anti HBs cuplat
cu enzima =
CONJUGAT
SUBSTRAT
+
(1) Monitorizarea evolutiei naturale /sub tratament a
hepatitei virale B Riscul de ciroza/CHP creste cu nivelul VL, atat pt persoanele AgHBe negative,
cat si pt cele AgHBe pozitive
(2) Initiere tratamentului pt hepatita cronica B
Tratamentul este initiat pe baza
» PBH
» VL
» Transaminaze serice
La persoanele AgHBe negative, iv >10.000 copii/ml
indica infectie activa (marker de infectivitate virala).
(3)Criterii de evaluare a raspunsului
la terapie in hepatita cronica VHB
Virusologice
• Mentinerea nedetectabila a ADN-VHB plasmatic
• Seroconversie sustinuta la antiHBe la pacientii AgHBe pozitivi
• Eliminarea AgHBs seroconversie anti HBs
Biochimice:
• normalizarea sustinuta a nivelului transaminazelor
Histologice:
• reducerea stadiului de fibroza sau absenta progresiei
• reducerea activitatii necro-inflamatorii
anti-HBs
Symptoms
ALT Elevated
Total anti-HDV
IgM anti-HDV + IgM anti HBc
HDV RNA
HBsAg
Coinfectia HBV - HDV
Timp dupa expunere
Titru
Jaundice
Symptoms
ALT anti-HDV + anti HBc IgG
IgM anti-HDV
HDV RNA
HBsAg
Suprainfectia HBV - HDV
Timp dupa expunere
Titru
ORIENTAREA DIAGNOSTICA IN
HEPATITE
1. Tablou clinic
2. Teste biochimice• Markerii necrozei hepatocitare (transaminaze, LDH)
• Markeri colestaza (FAL, GGT, bilirubina)
• Markeri ai incapacitatii de sinteza la nivel hepatic (proteine serice, colesterol, trigliceride)
3. Date epidemiologice: cale transmitere, contact infectant, per. incubatie, vaccinuri
4. Diagnostic etiologic = detectia markerilor virali:
• antigene virale (Ag)
• anticorpi antivirali (Ac)
• acid nucleic viral
A“Infectioasa”
“Serica”
HEPATITA
VIRALA
Transmitere
Enterica
Transmitere
Parenterala
E
“NANB”
B D
C
EPIDEMIOLOGIE
Virusuri hepatitice F,G…
Coxackie, EBV, CMV, arbovirusuri
McCallum-1942
1989-Choo
Hepatita B•Hepatita acuta
•Hepatita cronica persistenta
•Hepatita cronica agresiva» Ciroza hepatica
» Carcinom hepato-celular
ALGORITM
Simptome
AgHBe
ADN/VHB
anti-HBe
anti-HBc totali
anti-HBc IgM anti-HBsAgHBs
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 100
Infectia acuta cu VHB
evolutie spre vindecare
Saptamini post expunere
IgM anti-HBc
Total anti-
HBc
HBsAg
Acute
(6 months)
HBeAg
Chronic
(Years)
anti-HBe
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 Years
Weeks after Exposure
Infectia cronica cu VHB
Tehnica ELISA “sandwich”
1. Incubare ser pacient 1h la 37ºC
2. Spalare
3. Incubare CONJUGAT 60min la 37ºC
4. Spalare
5. Incubare SUBSTRAT 20 min la t.camerei
6. Solutie de stopare
7. Citire la spectrofotometru => D.O., MN, MP,
C.O.
ELISA de detectie a Ag
virale
Ag HBs
Anti HBs
Anti HBs cuplat
cu o enzima =
CONJUGAT
SUBSTRAT
+
Mortalitatea datorata bolilor hepatice
0.8%o / an la cei mono-infectati VHB
14.2%o / an la cei co-infectati HIV - VHB
(1) Monitorizarea evolutiei naturale /sub tratament a
hepatitei virale BRiscul de ciroza/CHP creste cu nivelul VL, atat pt persoanele AgHBe negative,
cat si pt cele AgHBe pozitive
(2) Initiere tratamentului pt hepatita
cronica BTratamentul este initiat pe baza
» PBH
» VL
» Transaminaze serice
La persoanele AgHBe negative, iv >10.000 copii/ml
indica infectie activa (marker de infectivitate virala).
(3)Criterii de evaluare a raspunsului
la terapie in hepatita cronica VHB
Virusologice
• Mentinerea nedetectabila a ADN-VHB plasmatic
• Seroconversie sustinuta la antiHBe la pacientii AgHBe pozitivi
• Eliminarea AgHBs seroconversie anti HBs
Biochimice:
• normalizarea sustinuta a nivelului transaminazelor
Histologice:
• reducerea stadiului de fibroza sau absenta progresiei
• reducerea activitatii necro-inflamatorii
anti-HBs
Symptoms
ALT Elevated
Total anti-HDV
IgM anti-HDV + IgM anti HBc
HDV RNA
HBsAg
Coinfectia HBV - HDV
Timp dupa expunere
Titru
Jaundice
Symptoms
ALTanti-HDV + anti HBc IgG
IgM anti-HDV
HDV RNA
HBsAg
Suprainfectia HBV - HDV
Timp dupa expunere
Titru
Diagnosticul infecţiei VHC TESTE EXEMPLE APLICATII COMENTARII
SEROLOGICE ELISA de detectie Ac anti VHC RIBA / Western
Blot
Nu pot diferenţia între o infecţie acută, cronică sau vindecată
ELISA-sensibilitate
mare, în populaţii cu risc scăzut de infecţie are valoare predictivă mică
MOLECULARE TESTE CALITATIVE RT-PCR
Diagnosticul infectiei active
Detecţia timpurie a infectiei O singură determinare negativă-neconcludentă
TESTE CANTITATIVE -Rt-PCR -b-DNA
Aprecierea rezultatelor terapiei
Nu exclude diagnosticul infecţiei
TESTE DE GENOTIPARE
Secvenţiere nucleotidică, RFLP, LiPA
Genotipuri Subtipuri Qvasispecii
Apreciază durata tratamentului şi prognosticul răspunsului virusologic susţinut
Patternul serologic al infectiei VHC acute cu vindecare
Symptoms +/-
Time after Exposure
anti-HCV
ALT
Normal
0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4
Years Months
HCV RNA
Ac anti VHC
ALT
Patternul serologic al infectiei VHC care cronicizeaza
Symptoms +/-
Time after Exposure
anti-HCV
ALT
Normal
0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4
Years Months
HCV RNA
ALT
Ac anti VHC
Diagnosticul infecţiei VHC TESTE EXEMPLE APLICATII COMENTARII
SEROLOGICE ELISA RIBA / Western Blot
Nu pot diferenţia între o infecţie acută, cronică sau vindecată
ELISA-sensibilitate mare, în populaţii cu risc scăzut de infecţie are valoare predictivă mică
MOLECULARE TESTE
CALITATIVE
RT-PCR
Diagnosticul
infectiei active
Detecţia timpurie a infectiei
O singură determinare negativă-neconcludentă
TESTE
CANTITATIVE
-RT-PCR
-b-DNA
Aprecierea
rezultatelor
terapiei – (RVS-
răspunsul virusologic
sustinut
Nu exclude diagnosticul
infecţiei
TESTE DE
GENOTIPARE
Secvenţiere nucleotidică, RFLP, LiPA
Genotipuri
Subtipuri
Qvasispecii
Apreciază durata tratamentului şi prognosticul
Anti-HCV / HCV RNA Interpretare clinică
Anti-HCV negativ, HCV-RNA
negativ •Absenţa infecţiei VHC
Anti-HCV pozitiv, HCV-RNA pozitiv
•Infecţie VHC acută sau cronică
(activă)
Anti-HCV negativ, HCV-RNA pozitiv
•Infecţie acută recentă în care nu
a avut loc încă seroconversia
•Infecţie cronică la un pacient
imunosupresat
Anti-HCV pozitiv + HCV RNA negativ • Infecţie vindecată
• Viremie cu nivel redus sau fluctuantă, intermitent negativă
0
1
2
3
4
5
6
7
8
-6 0 6 4 12 36 42 48 54 60 66 72 78
Timp (saptamani)
AR
N V
HC
(U
I/
mL)
scadere 2 log
Limita de
detectie
IFN+RBV
Recadere dupa
oprirea tratamentului
Recadere in timpul tratamentului Nonresponderi
Succesul terapeutic in hepatita cronica C
Raspunsul virusologic sustinut (RVS)
RVS
TRATAMENT
RVR EVR EoT
LiPA Line Probe Assay – genotipare
Hibridizare cu sonde moleculare cu specificitate pentru regiuni conservate din cadrul genotipurilor si subtipurilor
evidentierea profilului specific unui genotip prezent in ampliconii din 5’NTR si core.
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 saptamana
simptomatologie
ALT
IgM
IgG
VHA in MF
Infectie
Viremie
EVOLUTIA MARKERI DE INFECTIE VHA
HEPATITA A NU CRONICIZEAZA!!
Diagnostic hepatita acuta A = detectie Ac anti VHA IgM (ELISA de captura)
Ac anti VHA IgG = vindecare sau vaccinare
ELISA de detectie anticorpi de clasa IgM
ELISA de captura
Anti-IgM
IgM
Ag marcat
enzimatic =
conjugat
ETAPE
1. Incubare ser pacient 1h la 37ºC
2. Spalare
3. Incubare conjugat 30 min la 37ºC
4. Spalare
5. Incubare substrat 20 min la t. camerei
6. Citire la spectrofotometru – DO, CO
Utilizarea metodelor moleculare in
infectiile virale:
HIV, hepatite, papilomavirusuri
• infectia HIV
• infectia VHB – Monitorizarea evolutiei naturale /sub tratament a hepatitei virale B
– Initierea tratamentului pt hepatita cronica B
• infectia VHC – Diagnosticul infectiei active + Aprecierea rezultatelor terapiei
– GENOTIPARE - apreciază durata tratamentului şi prognosticul
• infectia HPV – Detectia ADN HPV (PCR)
– GENOTIPARE – genotipuri “high risk” si “low risk”
Diagnosticul infecţiei VHCTESTE EXEMPLE APLICATII COMENTARII
SEROLOGICE ELISA de
detectie Ac anti
VHC
RIBA / Western
Blot
Nu pot
diferenţia
între o
infecţie acută,
cronică sau
vindecată
ELISA-sensibilitate
mare, în populaţii cu risc
scăzut de infecţie are
valoare predictivă mică
MOLECULARE TESTE
CALITATIVE
RT-PCR
Diagnosticul
infectiei active
Detecţia timpurie a infectiei
O singură determinare
negativă-neconcludentă
TESTE
CANTITATIVE
-Rt-PCR
-b-DNA
Aprecierea
rezultatelor
terapiei
Nu exclude diagnosticul
infecţiei
TESTE DE
GENOTIPARE
Secvenţiere
nucleotidică,
RFLP, LiPA
Genotipuri
Subtipuri
Qvasispecii
Apreciază durata
tratamentului şi prognosticul
răspunsului virusologic
susţinut
Patternul serologic al infectiei VHC acute cu vindecare
Symptoms +/-
Time after Exposure
anti-HCV
ALT
Normal
0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4
YearsMonths
HCV RNA
Ac anti VHC
ALT
Patternul serologic al infectiei VHC
care cronicizeaza
Symptoms +/-
Time after Exposure
anti-HCV
ALT
Normal
0 1 2 3 4 5 6 1 2 3 4
YearsMonths
HCV RNA
ALT
Ac anti VHC
Diagnosticul infecţiei VHCTESTE EXEMPLE APLICATII COMENTARII
SEROLOGICE ELISA
RIBA / Western Blot
Nu pot diferenţia între o
infecţie acută, cronică
sau vindecată
ELISA-sensibilitate mare, în
populaţii cu risc scăzut de
infecţie are valoare predictivă
mică
MOLECULARE TESTE
CALITATIVE
RT-PCR
Diagnosticul
infectiei active
Detecţia timpurie a
infectiei
O singură determinare
negativă-neconcludentă
TESTE
CANTITATIVE
-RT-PCR
-b-DNA
Aprecierea
rezultatelor
terapiei – (RVS-
răspunsul
virusologic
sustinut
Nu exclude diagnosticul
infecţiei
TESTE DE
GENOTIPARE
Secvenţiere
nucleotidică,
RFLP, LiPA
Genotipuri
Subtipuri
Qvasispecii
Apreciază durata
tratamentului şi
prognosticul
Anti-HCV / HCV RNA Interpretare clinică
Anti-HCV negativ, HCV-RNA
negativ
•Absenţa infecţiei VHC
Anti-HCV pozitiv, HCV-RNA
pozitiv
•Infecţie VHC acută sau cronică
(activă)
Anti-HCV negativ, HCV-RNA
pozitiv
•Infecţie acută recentă în care nu
a avut loc încă seroconversia
•Infecţie cronică la un pacient
imunosupresat
Anti-HCV pozitiv + HCV RNA negativ
• Infecţie vindecată
• Viremie cu nivel redus sau fluctuantă, intermitent negativă
0
1
2
3
4
5
6
7
8
-6 0 6 4 12 36 42 48 54 60 66 72 78
Timp (saptamani)
AR
N V
HC
(U
I/
mL)
scadere 2 log
Limita de
detectie
IFN+RBV
Recadere dupa
oprirea tratamentului
Recadere in timpul tratamentuluiNonresponderi
Succesul terapeutic in hepatita cronica C
Raspunsul virusologic sustinut (RVS)
RVS
TRATAMENT
RVR EVR EoT
LiPA Line Probe Assay –genotipare
Hibridizare cu sonde moleculare cu specificitate pentru regiuni conservate din cadrul genotipurilor si subtipurilor
evidentierea profilului specific unui genotip prezent in ampliconii din 5’NTR si core.
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13saptamana
simptomatologie
ALT
IgM
IgG
VHA in MF
Infectie
Viremie
EVOLUTIA MARKERI DE INFECTIE VHA
HEPATITA A NU CRONICIZEAZA!!
Diagnostic hepatita acuta A = detectie Ac anti VHA IgM (ELISA de captura)
Ac anti VHA IgG = vindecare sau vaccinare
ELISA de detectie anticorpi de clasa IgM
ELISA de captura
Anti-IgM
IgM
Ag marcat
enzimatic =
conjugat
ETAPE
1. Incubare ser pacient 1h la 37ºC
2. Spalare
3. Incubare conjugat 30 min la 37ºC
4. Spalare
5. Incubare substrat 20 min la t. camerei
6. Citire la spectrofotometru – DO, CO
Utilizarea metodelor moleculare in
infectiile virale:
HIV, hepatite, papilomavirusuri
• infectia HIV
• infectia VHB – Monitorizarea evolutiei naturale /sub tratament a hepatitei virale B
– Initierea tratamentului pt hepatita cronica B
• infectia VHC – Diagnosticul infectiei active + Aprecierea rezultatelor terapiei
– GENOTIPARE - apreciază durata tratamentului şi prognosticul
• infectia HPV– Detectia ADN HPV (PCR)
– GENOTIPARE – genotipuri “high risk” si “low risk”
top related