Articles :

SNAP-25 Modulation of Calcium Dynamics underlies Differences in GABAergic and Glutamatergic ResponsivenessTo Depolarisation

Claudia Verderio & Michella Mateolli

Neuron,Vol 4, 599-610, February 19,2004

Physiological processes :

MemoryLearningOrientation

Pathological processes :EpilepsyIschemiaAlzheimer

HIPPOCAMPUS

CA1

CA3 HILUS

Vm Stimulation

Tranche d`Hippocampe

Excitation

GABA

Interneurones(10 %)

Inhibition

GLUTAMATE

Pyramidal cells90%

Deux types de neurones

Cellule pyramidales Interneurone GABAergic

Révélation experimentale spécifique

V-GAT Transporteur vésiculaire du GABA

GADEnzyme de synthèse du GABA(glutamin acid decarboxylase)

V-GLUTTransporteur vésiculaire du Glutamate

10 ms

rs 10-90%,

Whole cell recording

What is a synaptic current ?

sIPSC

What is a synaptic current ?

sEPSC

Glu

glutamatergic activity GABAergic activity

sEPSCsIPSC

mEPSCmIPSC

Spontanés

PA

Ca 2+ Fusion Sans PA Na+

Miniatures +TTX

Fusion Sans PA Ca 2+

Na+xx

PA

Syst-ecto Ab

Syst-ecto Ab :AC anti synaptotagmin

KCL 10-50 mMStimulation chimique pour depolariser les neurones

TTX : Tetrodotoxin Bloque les canaux Na+ dependants

APV :100 microMBlocage des recepteurs NMDA actives par le glutamate

CNQX :20 microMBlocage des recepteurs AMPA/KA actives par le glutamate

Bicuculline : 20 microMBlocage des recepteurs GABAa actives par le GABA

Indications supplementaire

Pour l’article :

Détermination de la concentration intra cytoplasmique de Ca2+

Utilisation d’un colorant sensible au Ca2+ :

ex. Magfura, Aequorin J : faible affinité au Ca2+: 10-4 MMesure de la fluorescence émise après stimulation

a Fluorescence image of a presynaptic terminal injected with n-aequorin-J. When the presynaptic fibre is fully loaded, it is continuously stimulated at 10 Hz for 10 s.

Quanta stablemicrodomain

Absence de

stimulation

Microdomains of high calcium concentration in a presynaptic terminal

Adapted from Llinas R, Sugimori M, Silver RB (1992) Science 256, 677-679, with permission

Docking : interaction spécifique de différentes protéines

Palade, 1970: reconnaissance spécifique entre la membrane vésiculaire et plasmatique

Rothman et al. Bases moleculaire de cette interaction specifique Purification des plusieurs proteines essentielles pour les processus de docking et de fusion

Fusion : processus dependant de l`ATP et du Ca2+

Adapted from Calakos N, Scheller H (1996) Synaptic vesicle biogenesis, docking and fusion: a molecular description, Physiolog. Rev. 76, 1-29, with permission.

Machinerie de la libération

Blocage de l`exocytose par les differentes toxines

TeNT : Tetanus neurotoxinBoTNs: Botulinum neurotoxin

TeTN et BoTN/BClivage selectif de R-Snare Synaptobrevin/Vamp

BoNT/A ou EProteolyse Q-SNARE SNAPE 25

Indications supplementaire

Fura 2 :Colorant sensible au Ca2+

Ryanodine (1microM) et cyclopiazonic acid (30 microM)Bloquant du recepteur Ryanodine sur RE et de la pompe Ca2+ SERCA

TTX : Tetrodotoxin Bloque les canaux Na+ dependants

APV :100 microMBlocage des recepteurs NMDA actives par le glutamate

CNQX :20 microMBlocage des recepteurs AMPA/KA actives par le glutamate

Bicuculline : 20 microM & PicrotoxinBlocage des recepteurs GABAa actives par le GABA