atbi-1, a plant homologue of bax inhibitor-1, suppresses bax-induced cell death in yeast and is...
TRANSCRIPT
����� ���������
������� � ��� � � ��� � ��� ������� ���� ������������������� �� ����� �� ����� ��� �� ����� ��������������� � ������ ��� ��� ��� �������
���� �������� ����� �� ���� !���� ��� ������ "����#
���������� �� ���� ��������� ��� � ���� ���� ���� ���� ���� ��
�� ����� �� ������� ����� ������� � ������ �!!!� � �"#�� �$ ������ �!!!%&'�� �����"����� � ()�* +$$ ��,, -�,�$!� �.���/ �%0���#12 �%� %�34%
�������
$������%� �������� ��%� � ��� ����� � �������� ������ �� ��� � � ���� � ��� ��������
� � ��� ���������& '��� �� �� �� ��� �� ��� � ��� �������������� � � �� ��������� ����� �
� � ��� � ����� ��� ������� ���� ������� �� ���� ������ � ����������� ������ � ���� ��������
���� ��� ��� ��� ��� ������� � ��� ���& ���� �� � ������ � � ��� ���� ����� �� ����������
������� � ����� ����� �������%� ���� ���� �������� � ����� ����& ������ �� �� ������ ��� ������
� ���� �� ��� ������ � ������ ��� ���� ��� ��� �� ����� � ������� �� ������� � � ��� ��������
� � � ��� � ����� ���& $������ � � ����� �� ����� ��������� �� ���� ������ � ������ �
��� ��� �������� ���������� � � � �� ��� ���� � �� ��� ��� ��� ��� ������& ����� �������� �
����� � ���� ���������� ��� �� � � ���(��� �������� �� ������ �� ��)����� � � ����*� ������ � �
�����& ' ��%��� ��� ��������� � � ����� ������� �� �����*����� ������� �� ����� �� ����� �������
��� ���� � �������� ��� ���� ��� � ������ ��� � �� �����&
���� ����� �
5��6������ �// ���#7 (5�84 �� � 6���#� �// ��#��//��
"�� ��� #7�# "/� � �� ��#�6��/ ��/� �� #7� ����/�"���#9
��))����#��#��� ��� ������� �����#�� � �) ��/#� �//�/��
��6������% ������� �) #7� ������� : /.� )���/ �)
"��#����9 7��� #������ � #7� "��������� �) �# /���# ���
�) )��� �������� : /.� 7���/�6 ������� (;������9
����49 7��� ����6�� �� ��"��#��# ��6�/�#��� �) 5�8% : /.�
)���/ ������� )�� #��� �� �6����#� �� ��#�6����#� �) �//
���#7 ��� #7� ��#��"/� ��#2��� ������� ��"�����#� �
"���#�/ �#�" �� "����#��6 �� ��7���#��6 5�8 ('����/ �� � %9
����� 0���� �� � %9 ����� ;������9 ����4% �7� ���/�# �) : /.�
#� ��6�/�#� 5�8 �� �������� #7���67 ����#����9 ���� #�
��� ��#�<����9 ��� 7���/�6��� �""��� #� )�� #���
��#�� 7��6���/ � ���� #7��� ���/�#����� �*#�����%
�/#���#�� #���/ ��� "7 ���/�6� �/ �#����� �� "/��#� �7�2
����/���#��� ��#2��� 5�8 �� "/��#� ��� �����/� (0�/ 7���#9
���-4% �7� 7 "�������#��� ���"���� (��49 � �����
)��#��� �) 6���.)��.6��� �����#�� � �� "/��#� #� �� #����9
)��6� ��� ������� 7�� �/�� ���� ��� ����� �� � )��� �) 5�8
(�� 7���6 �� � %9 ���-� � ����� ��� ���#79 ���=4% �/#7��67
�*7���#��� 6���#� ��� �����)����#� � ����� 7��� )��/��
#� ��#� # "/��# 7���/�6��� �) #7� �"�"#�#� �� 7���� 9
����6��6 �*"������#�/ ������ � )������ #7� "����� � �)
)�� #����// ��/�#�� ��"����#� �) #7� �����/��� �"�".
#����� �� 7�67�� "/��#�% '�� �*��"/�9 ������/�6� �/
��#� #��� �) : /.� 7�� ���� ��"��#�� �� 27��# 6��� (;��
�� � %9 ����4 ��� #��� � (8��� �� � %9 ����49 ��� �� ��#
�#����� ������#��#��6 #7� "7���# "� �))� #� �) #7�
�*"������� �) ��"����#� �) #7� ��#�<��� 5�8 �� 7��.
�� �� � ���� ��66��# )�� #����/ �������#��� �) ����
)��#���� ��#2��� #7� �����/ ��� "/��# �// ���#7 "��.
�����%
�����/ �//� #��66���� #� �����6� �"�"#���� �*� �#� #7�
���#7 "��6����� #7���67 � 7����� 7 �) �#���� ��"��.
#�#� "��#����� 3��2� �� ��"����% >�< ��#� � #���#��� �)
���#��#�� ��"���� ����/#� �� #7� "��#��/ #� � #���#��� �)
��2��#���� ��"���� ��� ����/#��# /����6� �) ��#� �/
�//�/�� ����#��#�� (��7��9 ����4% � #��� �9 ��"���./�3�
"��#��/ #� � #���# 7�� ���� ��#� #�� �����6 � ����/.
���� �� �� ��� ��"���.�"� �? ��7���#��� �� ���/��7 �
��� � ��� !��� (�!!!4 +�($49 ,�,@,��
��!!! :/� 32�// � ��� � A#� ,�,
�� #����.���� �� ��9 "�����/ ��"/ ��6 #7� "��#� �"�#��� �)
��"���./�3� "/��# "��#����(�4 �� #��� � 7 "�������#���
�// ���#7 (��/ 5�<� ��� A��9 ���-4% ��2����9 �# 7�� �/��
���� ��66��#�� #7�# 5�8 �� "/��#� �� �� �����#��
#7���67 "��#����� �#7�� #7�� ��"���� (��/���� �� � %9
����4%
>*"������� �) :�* (� "��.�"�"#�#� ������ �) #7� : /.�
)���/ 9 27� 7 7�#������������ �� "�" 2�#7 : /.���/#���
�� � %9 ���,4 )��� � #��� � ����� ����� (��B4 �� #��9
���� �� � "��#��� "7��"7�#���.��"�����# �// ���#7% �7��
��./�3� ���"���� /���/ ������/�� � 6���.�����#��
7 "�������#��� �// ���#7 �� #��� � ��� 2�� �����# 27��
:�* ��/�#��� ��#��#� (/� 3��6 "���"�"#�#� )�� #���4 2���
��/������ � ��B (A� ���� ��� ���#� ���<9 ����4% ����.
�*"������� �� #��� � �) : /.CA9 � �����/��� ��""������
�) �// ���#79 �� �) ��#$% ( �// ���#7 �������/� ���6��#���
�� � %9 ����4 � �������&#���� � ����� 7���/�6 �) : /.CA9
��""������ �// ���#7 ���� �� � �B.: �������#���9 "���.
D��# #���#���# �� ��B ���� �� �� �� � �� ��#��#���.
��"�����# ������ (��#��7��� �� � %9 ����4%
:�* ��)��� � /�#7�/ "7���# "� 27�� �*"������ ��
?����� �� ������6 ���# (0����7�/) �� � %9 ���=� ������
�� � %9 ����� E7� �� � %9 ���=4 ��� �� /���� ���� # "� �/
7�//���3� �) :�*.�����#�� 5�8 �� �����/� ���"�#� #7�
�""����# ����� � �) ��"���� )��� ���#% A�#7�/�# ��.
)����� � :�* �� ���# �� �� ��� ��� � �*"������6 ��#�.
�"�"#�#� : /.� "��#����9 ������#��#��6 #7�# ���#7 ��
��/�3�/ #� �� ��� #� ���.�"� �? #�*� �# % �7��9 ���#
"������� � "�2��)�/ 6���#� #��/ #� �#�� #7� ��/� �/��
�� 7������ �) �// ���#7 �� 7�67�� ��3�� �#��% �2�
6���"� 7��� �� ��#/ ���� ���# #� ���/�#� ��""������� �)
:�*.�����#�� �// ���#7 (0����7�/) �� � %9 ����� C� ���
����9 ���-4% ��� �) #7��� ��""�������9 :�* �7���#��.�
(:.�49 "�����#� �"�"#���� ���� �� � :�* �� 2�// �� �#7��
���#7 ���� ��6 #���#���#� �� 7 �� 6��2#7 )� #�� ��"����.
#��� �� #7� ����#��� �) "��#��� 3����� ��7���#��� (C� ���
����9 ���-4% ���� 2� ��"��# #7� ���/�#��� �) � "/��#
7���/�6�� �) :.�� �#:.�9 ������� )��� � ��))����#��/
� ���� �) "�#7�6�� 7�//��6�� /�����% F� ������#��#�
#7�# ���'$( �� �"��6�/�#�� �� ���"���� #� �#���� ��� ��
)�� #����// ��"/� � :.� �� ��""������6 :�*.���� ��
/�#7�/�# �� ���#%
,�����
�������� � �'$( �� �!� ����# � !����! ���#
#!���� � ���)������� �����������
���&�#���� ��� ���� 6���� 27��� �*"������� 2�� ��.
�� �� �)#�� "�#7�6�� 7�//��6� �� �"� �? �// �"��6�/�#��
�� �� �� ��"�#��/� ��#��� #��� 2��� ���/�#�� � 8�
.�'A5 ���"/� (:� 7�� �� � %9 ���=4% F� ���� � /���� �/
6���.)��.6��� "�#7�� �#�� ��"�����6 �.! "/��#�
(���(��//4 ��� #����6��� �.! "/��#� �*"������6 *�+(
����� �#� ��#��� "����#�� (�.!GG*�+(9 0���# �� � %9 ����4
7�//��6�� 2�#7 ���!#���� �������� "�%����
8�,!!! (8�,!!!4 ��#7�� /� 3��6 �� ��� ��6 #7� �6��#�
�����/�� � 6��� �"�*��(% �7�� �����#��# ��#��� #��� ��
7��� #������ � � ��"�� ��9 �����/� 2�#7�� =7 �)#��
��� �/�#���% ��� ?�6��"���# ��#� #�� �� ����6 �"��6�/�#��
�� ���"���� #� 7�//��6� 2�#7 #7� �����/��# �� #����
�7�2�� �#���6 ��D��� � ����/���# #� � 7���� 6���9 :�*
-����� �& �/��#�/ F �/�6����# �) #7� ���� �� ����� � �� ��D��� �� �) �#:.� (0��:��3 � ������ ������ �'�!-��$4 ��� �#:.� (E��,$,%�4 2�#7 #7�7���� :.� 6��� "���� # (6�G�=$����4%��/�� �7����6 �7�2� ����� � �� ����#�# ��� 7�# 7�� �7����6 �7�2� �������� ����� � �� 7��6��% ������ �����"��� #� #7� � #��/ ����� � �� �) #7�"���� #�� "�/ "�"#���%
,�$ ��#� ������, �# �/%
� :/� 32�// � ��� � A#�9 ��� � ��� !��� � (�!!!49 +�� ,�,@,��
�7���#��.�% �7�� 6��� 2�� ���6���// ���/�#�� �� � #��#��.
�"� �? 6��� #���� ��"# (F�/#�� �� � %9 ����4 ��# 2��
�����D���#/ ������#��#�� #� �� ����/��� �� #7� ��""���.
���� �) :�*.���� �� �// /�#7�/�# �� ���# ��� �����/���
�// /���� (C� ��� ����9 ���-4%
� ���� ���'$(
� )�//./��6#7 ���'$( 2�� ���/�#�� )��� �� �- ��� ���� ��/.!
8� /����� ���#�� #�� )��� "�#7�6�� 7�//��6��
/�����% ��D��� � ���/ ��� �) ���'$( �����/�� �� �"��
������6 )���� �) �$$ �� /��#����9 2�#7 � �� ��#����/�#����6��� �) $��" ��� ,� ��#����/�#�� ��6��� �) ��� �� /��.
#���� (0��:��3 � ������ ������ �'�!-��$4% �7�� �"��
������6 )���� �� ���� � "���� #�� "��#��� �) �$� �����
� ��� ��� �7���� ,�H ����#�# #� 7���� :.� ��� =�H
����/���# ('�6��� �4% � �����# �) ��"�#�� �/6���#7�� )��/��
#� "���� # ������6����/ 27�#7�� �#:.� ��#���� ��* ��
����� #������������ ������� �/#7��67 #7� ���# )�.
������ #�"�/�6 �� � ��* #������������ �"�����6 "��#���
2�#7 ��#7 ��� � #������ /� �#�� �� #7� #���/%
���#7��� �/�# ���/ ��� �# 7�67 �#���6�� �����/�� #7�#
���'$( �� "�����# �� � ���6/� �" 6��� (��#� ��# �7�2�4% �
���� 7 �6����# #7� �- ��� ���� �� /��#��� ��#����� ��.
���/�� �� ����#����/ 7���/�6��9 ���'$� (E��,$,%�49 �7��.
��6 �!H ����#�# #� ���'$( �# #7� �� /�� � �� /���/%
�#����#��6/ 9 #7� ���� �� ����� � �� ��D��� � �*7���#�
��6��? ��#/ 6���#�� ����/���# �� #7� ����* / #������/
��6���� �) #7��� 6���� (=�H ����#�# 9 -,H ����/���# 49 �
)��#��� �/�� ��I� #�� �� :.� ��D��� � �/�6����#�%
57 /�6���#� ���/ ��� �����/� #7�# �#:.� �� ��6��? ��#/
���� ��/�#�� #� #7� �����/��� 7���/�6��� #7�� �#:.�
(��#� ��# �7�2�4%
�/#7��67 ���6���// ��#� #�� �� � ?�6��"���# �"��6�.
/�#�� �����6 #7� ��#��/��7���# �) �� �� ��"�#��/� ��#��� .
#��� � 8�.�'A5 �# ��!���9 ��#7��� �/�# ���/ ���
�7�2�� ��/ � �/�67# ��))����#��/ �� #���� ��"# � ���/�#���
��#2��� � ��"�#��/� ��� �� ��"�#��/� ��#��� #��� �# #7��
#��� "���# ('�6��� ��4% ���'$( 2�� �/�� ���� �� �)#��
7�//��6� 2�#7 #7� ���."7 #�"�#7�6��� ���� ��#��# �)
8�,!!! ('�6��� ��4 ��� .���������� � � ('�6��� ��49
��66��#��6 #7�# #7�� 6��� ���"���� 6�����// #� �� �����/
�������� �) #7� �"�"/��#% >*�����#��� �) #7� ���� #���
"��?/� �) ���'$( �� "/��#� �)#�� 2������6 ������#��#��
#7�# ���'$( �� ��"��/ ���� �� �"�� 2������69 #7��
��66��#��6 � ��/� �� ���"���� #� ��#7 ���#� ��� ����#�
�#���� ('�6��� ��4%
���'$( �!�������� ��/$��#!��# ���� ��� �� �����
�� ��#������ �) �#:.� 2�� )�� #����// ����/�� #� ���.
��/��� :.� 2� ���/ ��� �#� ���/�# #� ��""���� :�*.
���� �� /�#7�/�# �� ���#% �7� ���# �#���� JC��!!�9
��#�����6 )�//./��6#7 ����� :�* ����� ��#��/ �) #7�
6�/� #��� ���� ��/� ���# 0�1(2 "����#�� (K�"��.:�*9
E7� �� � %9 ���=49 "����#�� ���# /�#7�/�# �"�� #����)�� #�
6�/� #��� ��#�����6 ����� (C� ��� ����9 ���-4% �
��/�#��� �) :�* (��� >*"������#�/ "�� ������4 ����/#�� ��
#7� /��� �) #7� ���/�# #� ���� � ���# �// ���#7 �� 6�/� #���
��#�����6 �����%
���'$( 2�� /���� ��#� #7� ���#�#�#��� ���# �*"�������
�� #�� "�>���� (B�6� A��� �� � %9 ���,4 ��� ��#���� ��
��#� JC��!!�% ��������/ /���� 2��� ���/�#�� ����� #7�
�""��"���#� ��/� #��� ��� ����#����� �� 6/� ��� �8
�����% F7�� "�# 7�� ��#� 6�/� #��� "/�#��9 �#:.� 2��
�"��/� �) ��� ���6 ���# )��� :�*.���� �� �// ���#7
('�6��� ,4% K���# �*"������6 :�* ��� ��� ��6 #7� "�>����
/����6 �� #�� �����2��# �// ���#7 ��# :�*9 ��� ��6 ��
��#����/ ��/�#���9 )��/�� #� ���� � #7� �// ���#7 ���"����%
�� ��?�� #7�# #7� ��""������� �) :�* /�#7�/�# 2��
�"� �? �// ����� � �#:.�9 "K>"��.:�* 2�� ��.���/�#��
)��� #7� ��� ��� ���# ��� ��#����)����� ��#� :'�=K.
��8�� �//� (A�2 �� � %9 ����4% � �// ����9 "K>"��.:�* 2��
�"��/� �) ���� ��6 ���# ���#7 �"�� #����)�� #� �����
��#�����6 6�/� #���% �7�� ��#��/ ������#��#�� #7�# #7�
��""������� "7���# "� 2�� ��# #7� ����/# �) � /��� �)
)�� #��� ��#�#��� �� :�* ��# ��� �"� �? �// #� #7� � #���#
�) �#:.�%
�#:.� �/������� �� #������ �������"��� �!�����
�� ���/ �� #7� �*"������� /���/� �) ���'$( �� "/��#�
��"������� �� ��#7�� �� * 6���.��"�����# ���"���� ��
�� ��"����#� ��D����� )�� ������� �����#�� � ��� ��)�� �
���"�����9 2� ���/ ��� #7� ���� #��� �) ���'$( �� ��))����#
6���#� �� 36������% F� ���� #2� ��#��#� �))� #��6 #7�
���"���� �) �"� �? ��� /����� �) * 6���� #� "�#7�6����
-����� +& ���'$( �� ���� �� �"�� "�#7�6�� 7�//��6� �� ��#7 ����/��# ��������/��# ��#��� #���� ��� 2������6%(�4 ���'$( #���� ��"# � ���/�#��� �)#�� "�#7�6�� 7�//��6�% ��#�/ ���2�� ���/�#�� )��� "�#7�6�� 7�//��6�� /����� �# #7� #���"���#����� �#��% ���#��/ /����� 2��� 7�//��6�� 2�#7 �!�� �6�/�%(�4 ���'$( �� ��"��/ �"��6�/�#�� �� ���"���� #� 2������6 ��� ���."�#7�6��� �� #����% 5/��#� 2��� 7�//��6�� 2�#7 �� ����� �� ���L� #��#� 2������6 ����6 )�� �" "������� #� ����6� � /��) �# #7��� �� )���"���#����%
��$�'$( �!�������� ��/$��#!��# �� #���� ,��
� :/� 32�// � ��� � A#�9 ��� � ��� !��� � (�!!!49 +�� ,�,@,��
�#�( (��� ������� �����#�� �� ���#�� �� � %9 ����4 ��� �#�(
(��7�� �� ������� ��� �"#���/�# � 5��3�� �� � %9 ���=4 ��� �
L������#� ���"���� ��#��# ��( ( �����#��� �������#����
'� � �� � %9 ���$4% '�6��� $(�4 �7�2� #7�# #7� ���� #��� �)
���'$( #���� ��"# /���/� 2�� ��# ��6��? ��#/ �))� #�� ��
���3$( ��� �#�( "/��#�% ���'$( ���� #��� 2�� �/�67#/
���� �� �� �#�( "/��#� ��� ����#��#��// ���� �� �� ��(
"/��#� 7�//��6�� 2�#7 8�,!!!(�"�*��(49 �� �7�2� ��
'�6��� $(�4% � ����/�� ���� #��� "�##��� �� �7�2� 27��
8�,!!! �/��� 2�� ���� (��#� ��# �7�2�4% �#����#��6/ 9
��#7��� 7 �������#��� ���� �#�� /�2�� /���/� �) �*"���.
���� �� #7� F�.! � ������ ('�6��� $�49 ���� �#��6 ����
��D��� � �����6�� � )��� #7� ��/.! ������� "����%
.������� �
�"�"#���� ��"�����#� � "�� ��� �) ��#��//�� �// ��/�#���
�� ��/#� �//�/�� ��6������ ��� ����D���#/ �� ����#�#��
� �� 7����� �) �*D����#� ��6�/�#�� ��#��/% �/#7��67
������� �) #7� �*#������ )���/ �) : /.�./�3� "��#����
7��� ���� �� �6����� �� ��"��#��# ��6�/�#��� �) 5�89 �//
���#7 �� �/�� ����/# )��� ��"���.����"�����# "�#72� �
(�7��#�� �� � %9 ����4% � #7�� �#�� 9 ����6 � ��))����#��/
� ���� )�� 6���� ����/��� �� 7 "�������#��� �// ���#7
)�//�2��6 �"� �? �� �6��#��� �����#�� #7���67 #7� *�+(
������� �����#�� � 6���9 2� ����#�?�� ��� 7��� #������
���'$( �� �� �- ��� ���� 7���/�6�� �) #7� 7���� �'$(
6���% ���'$( "����� #� �� �"��6�/�#�� �"�� �� �����/
7�//��6� �� 6�����/9 #7� ���� #��� ����6 �/�67#/ ��.
7�� �� �����6 #7� �"�*��(4*�+( �� ��"�#��/� ��#��� .
#��� /�����6 #� #7� ��% >*"������� �) ���'$( #���� ��"#�
2��� �/�� ��"��/ ���� �� �"�� 2������69 ��66��#��6 �
��/� )�� ���'$( �� ��/�#��� #� ��#7 ���#� ��� ����#� �#����%
�7� ���� �� ����� � �� ��D��� � �) ���'$( 7�� 7�67
����#�# #� 7���� :.�9 ��� �� )�� #����// �"��/� �)
��""������6 ������ :�*.���� �� ���# �// ���#7% �7�� ��9
#� ��� 3��2/��6�9 #7� ?��# ������#��#��� �) � "/��# 6���
����6 ��/� #� ��"/����# � ��"����# �) #7� �����/���
�"�"#�#� �� 7���� % ��� �*"������#� ��""��# �� ��#
/�#���#��� ��"��#� ������#��#��6 #7�# � #�"� �*"�������
�) �����/��� ��"����#� �) #7� �"�"#�#� �� 7����
�� �/� �# �� ��""���� �// ���#7 �� "/��#� (A� ���� ���
���#� ���<9 ����� ��#��7��� �� � %9 ����4%
�#:.� ��� :.� �7�2 �� 7���/�6 #� #7� : /.� )���/ 9 ��
�#7�� "��#���� ��"/� �#�� �� 5�89 �/#7��67 ����./��3��6
�#����� 7��� ������#��#�� #7�# �# �� �# /���# #�������#/
���� ��#�� 2�#7 �����/��� : /.� (C� ��� ����9 ���-4%
:�* 7�� ���� �7�2� #� ���� ��#� "������/ 2�#7 ��#� 7��.
���� �� ���# ��� �����/��� �//� (E7� �� � %9 ���=49 �#
"��/������ �#����� �� :.� ���� �#� #7�# �#� /� �#��� �� ���.
��#� 7������/ ��� �# �� "�����/ ���� ��#�� 2�#7 #7�
����"/���� ��#� �/��% # �� "�����/� #7�# :�* )���� ���
7����/� �� #7� ���# ��#�� ��#� 7������/ ��������9
-����� /& �#:.� �� �"��/� �) ��� ���6 :�*.���� �� /�#7�/�# �) ���#%>�#7�� #7� ��#��/ �� #�� ("�>����4 �� �#:.� �*"������� "/������ 2�����#���� �� ��#� ������������ ����"���� �#���� JC��!!�9 �� JC��!!� ��#�����6 � ��/�#��� �� #7� ������ ��/ 6��� (:�*4 ��� "/�#�� ��6/� ��� (�4 �� 6�/� #��� �8A��.���. (�4 "/�#��% 5/�#�� 2��� "7�#�6��"7��$�� � �)#�� 6��2#7 �# ,!��%
-����� 0& ���'$� � ���/�#��� �� ���� �� �� �#�( ��� ��( "/��#� ��# ��#�#�( "/��#�%��#�/ ��� 2�� ���/�#�� )��� #7� /����� �) "/��#� �# #7� #���� ���� �#��(74 �)#�� 7�//��6� 2�#7 8�,!!!(�"�*��(4 �# � �� ��#��#��� �) �%���!-
)�M�/% (�4 ���'$( � ���/�#��� �)#�� "�#7�6�� 7�//��6� �� �#�(9 ���3$(��� 2�/�.# "� "/��#� �� ��"����% (�4 ���'$( � ���/�#��� �� �#�( ���#7� "����#�/ F�.! � ������ ��� #7� �))� # �) ��( "/��#� �� ��""������6���'$( � ���/�#���% �7� � ��"�� ��6 /�2�� "���/� ��� /�����6 ��#��/� ����6 � 8�.�'A5 ������� "���� 27� 7 ���"/� �� ���#�#�#����*"�������9 ��6���/��� �) "�#7�6�� #���#���#%
,�= ��#� ������, �# �/%
� :/� 32�// � ��� � A#�9 ��� � ��� !��� � (�!!!49 +�� ,�,@,��
/�����6 #� #� 7���� � ��/���� ��� ��6���//� � �)�� #���
(0���� ��� ����9 ���-4% �7��9 :.� (��� � �*#��"�/�#���
�#:.�9 27��� #�"�/�6 �� ����/��4 �� )�� #��� �� �� ���
7����/ "��#��� (C� ��� ����9 ���-4 27� 7 ���#��� #� ��
��#��)���� 2�#7 #7� ���/�# �) :�* #� )��� � )�� #����//
/�#7�/ 7����/ �� #7� ���# ��#� 7�������%
F� 7��� �# #� ��/���# #7� )�� #��� �) �#:.� �� � ����%
�����6��� "/��#� ����.�*"������6 �#:.� ����� ,��
"����#�� ��#��/ 2��� 7��/#7 ��� �7�2�� �� ��#� #��/�
��))���� �� �� #7� #����6 �� ����/�"���# �) #7� �� 27��
��"���� #� #7� 2�/�.# "� *�+( "/��#�% ���'$( #���� ��"#
/���/� �� #����6��� "/��#� 2��� ����/�� #� #7��� �##�����
,7 �)#�� "�#7�6�� 7�//��6� (��#� ��# �7�2�4% # �� /�3�/
#7�# �#:.� �� )�� #��� �� � �� ����� ��)������ ��/�9
"�#��#��#��6 #7� "/��#N� ���/�# #� ���"��� #� ��� ��#���
7 "�������#��� �// ���#7 �/� �#�� �����6 � 6���.)��.6���
��#��� #��� �� 2������6% � #7� ��� �) #7� ����.�*"������6
#����6��� /����9 ����6����� /���/� �) �#:.� �� �/����
�� ��)? ���# #� �*� �#� #7�� )�� #���% F� 7��� ��# �# ����
��/� #� 6�����#� �#��/� ��#������ �#:.� "/��#�9 ��� #7��
�� "���� ��)? �/# 6���� #7�# :.� ��#������ ���� ��
�"�"#���� �� � �� ��#��#���.��"�����# ������ �� #���.
����#/ #����)� #�� �����/��� �// /���� (C� ��� ����9
���-4%
'��#7�� ��""��# )�� �#:.� "/� ��6 � 6�����/ ��/� ��
���"���� #� ���#� �#���� �� �����/�� )��� �#����� �� #7�
L������#�.�������#��� ��( "/��# ��� �/�� �#�( ��� �#�(
"/��#� 27� 7 ��� ��"������� �� #7� ���/�# #� �/� �#
�� �.�"� �? ������� �����#�� � #7���67 �����#� �)
�#�� #���// ����/�� * 6���� (���#� �� � %9 ���-� ���#��
�� � %9 ����4% :�#7 �#�( ��� �#�( "/��#� �7�2�� � �/�67#
���� #��� �� ���'$( #���� ��"# /���/�- �#����#��6/ 9 #7���
��#��#� ��"������ � ������ �) 6���.)��.6��� ��#��.
� #����% ��6�#7�� 2�#7 #7� ���// �� ������ �) �*"�������
���� �� #7� �"�*��(4*�+( ��#��� #���9 #7�� �� ��66��#
� 6�����/ ��/� )�� �#:.� �� "�#7�6�� ���"�����% �7�
� ���/�#��� �) ���'$( 2�� ��6��? ��#/ ��/� �� �� ��(
"/��#� ���� �#��6 #7�# ���� �� �#:.� /���/� �� ��.
#����#� #� #7� ��7�� �� ��� �"#���/�# �7�2� � ��(
"/��#� #� ��)� #��� � ������� )��6�/ "�#7�6���
(�7���� �� � %9 ���-4- ��� � ��� �/�� ����/�#��
���"����� #� 2������69 ��� ���'$( �*"������� �� ��"��/
�"��6�/�#�� �� 2������69 �# 2��/� �""��� #7�# �#:.�
�� 7��� � ���D��#���� ��/� �� ���"����� #� ���#� ���
����#� �#����% ) �#:.� ���� )�� #��� �� � ��""������ �)
�// ���#7 �� "/��#�9 #7� �*"������� "�##���� ��#�������
7��� 2��/� �� �����#��# 2�#7 � "��#��� "/� ��6 �
6�����/ "��#� #��� ��/� �6����# ��6��? ��# ��#���/�
"��#����#����%
�7� 6�����/ ��6��? �� � �) #7�� ������ 7 �� #7�# �#
������#��#�� #7�# ���# �� � "�2��)�/ #��/ )�� 7�#���.
6����� � ������6 �""��� 7�� #� ����#�) "/��# 6����
�"��/� �) )�� #����// ��"/����#��6 ��"����#� �) #7�
�����/��� �"�"#�#� �� 7���� %
$��������� � �������
+���������� &������� ��# �����
���!#���� �������� "�% ���� 8�,!!! ��#�����6 �����/�� �6���� /���� ��#� #7� ����� 7��# ���6� �� #���9 "B�5=� (������ � %9 ���,4 �� 8�,!!!GG���� (����� �� � %9 ����49 2��� ����#���������� ��/� #��� ��� �/#���� 2�#7 �""��"���#� ��#����#� � ����� ����� "�������/ (0���# �� � %9 ����4%K���# �#���� JC��!!�9 :'�=$.��8�� (A�2 �� � %9 ����4 ��#�����6
#7� A>��.���3�� ����� :�*.�� ����6 "/����� K>"��.:�* (C���� ����9 ���-49 2�� ����#����� �� � �#7�#� ���"��# ������(�84 /� 3��6 /�� ��� (�8.A��@4% K���# 2�� #����)����� ����6 #7�A��� ��#7�� (0��#< ��� F����9 ���$49 "/�#�� ��#� �""��"���#���/� #��� �8 ������ (A��@ �� A��@ ���@4 ��� �� ���#�� �# ,!��%JC��!!� 2�� ���� �) K�"��.:�* � #7��� "����� �� �� 7 K58������ #� ��#��� #7� ���6���/ :'�=$.��8�� �#����% K���# "/��.���� 2��� ���/�#�� � �#������ "�� ������%
0�5�� ��# ��������� � ����
�// ���&�#���� � �# "�� �.!9 ��/.!9 F�.!9 #����6��� �.!GG*�+( ��� #7� ��#��#� ���3$(9 �#�(� �#�( ��� ��( 2��� ��2��� A����6#�� '� ��"��# ��� 2��� �����/���� )�� � �� � �# $��%5/��#� 2��� 6��2� ����� �7��#.�� ����#���� �� � ��#��//������������# 7����� (�� 7 /�67#9 ���� �� 9 �!�� ��67#4 )�� �@=2��3� ��)��� ���%8�,!!! ������67# �/#���� 2��� 2��7�� �� � �� �!�� �6�/�
��� �����"����� #� �%�� �!- �/�� )�����6 ���#�M�/ ( )�M�/4 ���!�� �6�/�% �7�� �� #����/ ���"������ 2�� "������� ��?/#��#���� #7� /��) ���*��/ ���)� � ����6 � ��/ ���"����/� � ���6�2�#7��# � ����/�%
����$�61� #��� ��� ���� �&���� �����!���� ��#
���������
�.!GG*�+( /����� 2��� 7�//��6�� �# !9 � ��� �7 2�#7 �� #����/���"������� �) 8�,!!!9 8�,!!!GG�"�*��( �� �!�� �6�/� �/���%��#�/ ��� 2�� �*#�� #�� ����6 � 6�������� 7 ��� 7/�����"�� ����� (A�6����� �� � %9 ��-�4% 8� 2�� � �#7������ � ������� #���� ��"#��� �) �/�6�.�� "����� "�/ �+ ���(5����6�4% �7� 8� 2�� ��6��#�� ����6 +��� ��� ��� ���#7� �����"�����6 ���"#��� (+���G �� 0��0��0�0����0�0,���� ��������00������,�9 ���� �����0��0���0�0����,���� ������00���0��0�����,�4 2��� �����% �7��� "���� #�2��� "��.��"/�?�� ����6 ��� "������ (+���� ��0��0��0�0��.��0�0���,�9 ���� �����0��0���0�0��������,�4% 8�.�'A5 ���"/� 2�� "��)����� ����6 #7� ��� "������ ��#�����6#2� ��/� #��� �� /��#����%� 8� /����� 2�� ���#�� #�� ����6 � ����� 8�
� �#7���� ;�# (�/��#� 74 )��� ��� ���/�#�� )��� ��/.! /�����7�����#�� �!��� �)#�� 8�,!!!(�"�*��(4 7�//��6�% .��� ���".#��� 2��� ����� ��� #7� ����/#��# "���� #� /���� ��#� �E�"(�#��#�6���4% �// �#7�� ��/� �/�� #� 7��D���9 �� /����6 /����� "� 3�6��69 � ������6 ��� ���/�#��� �) )�//./��6#7 ���'$( 2���"��)����� � �����6 #� �#������ "��#� �/�%
� ����#� ��# �����!���
�� �� ��#� 2�� �����#�� �# #7� ���#��#��6 ��0 �) #7� ���'$( 8�)�//�2��6 �/�6��� /��#���.�����#�� ��#�6������ ����6 #7� "��.��� ��.�����0�������00� �0�0��.,�% �7� ��"/�#� ���'$(
��$�'$( �!�������� ��/$��#!��# �� #���� ,��
� :/� 32�// � ��� � A#�9 ��� � ��� !��� � (�!!!49 +�� ,�,@,��
8� 2�� /���� ����� � ���B ,�� "����#�� �� "���:�,,!��.8� ��� ��#���� �� ��#� ��/.! �� ���3$( "/��#� � � ���"/���""��6 #����)����#��� ��#7�� (�/��67 ��� :��#9 ���-4%�����6��� "/��#� 2��� ��/� #�� ����6 6/�)�����#� ��������(���� 7#4 �# ��!�6 /@�%"�>�GG���'$( ���#�� # 2�� ��#����� � /�6�#��� �) #7� ��M
7� ?//�� )��6���# �) ���'$( ��#� ���� ?//�� "�>���� (B�6�A��� �� � %9 ���,4%� ��/�#��� �) :�* 2�� ���#�� � ��/�6�#��6 ����� ��6��#��
K�"��.:�*9 ���#��6 �� ��� #��� :�* 2�#7 � $�� �� /��#��� ��/�#������ ����/#��# )�����7�)#%
��(� ����������
F� #7��3 ��7� ���� )�� #7� ���# �#���� JC��!!� ��� �� 3 ���#�)�� "�>����% F� ��� 6��#�)�/ #� ���� 5��3�� )�� #7� �#�( ��#��#/��� ��� ��7� ������ )�� ��(% 8�.�'A5 "��#� �/� 2��� 3���/ "������� � �% ����� ��� F% 8�����#% �7�� ������ 7 2����""��#�� � #7� ::���%
,���������
������ 1&� ����� �&� ' ��� $&� ����(������ �&2&� .������ �&2& ������(��� 2&$& (���-4 8�))����# ��D�������#� )�� >8�� ��� 8��� ������� �����#�� � 6���� ��?�� �# /���# #2� * 6���.�����#�� ��6��/��6 "�#72� � �� �������"���% ���- ��� ���#-���- ���9 349 �!,!=@�!,��%
������� 5&6&� %�� ��� ' �%��� ,&�&� �� ����7�� �&�&� 8����������.&� !������ �& ��� 8������ ,&"& (���=4 B����/�<�#��� �)��))����#��/ 6��� �*"������� ����6 � ����/ ��#7�� �) ��?�6��"���#��6 ����� �� �'A5G ���/ ��� �) 6��� �*"������������6 "�#�#� #���� ����/�"���#% � ��� - 39 �$�@��,%
5������� 9&�&� ' ��� $&,& ��� ����(������ �&2& (����4 ��*(9 �/� �� �) ���&�#���� ��� ���� #7�# �� ��D����� )�� ������������#�� � #� ��#7 � �� #����/ ��� � )��6�/ "�#7�6��% ���-��� ���#- ���- ���9 3+9 =���@==!�%
5������� �&� 5����� "&� 5��� ��� -&� "����� �& ��� " ������ �&(����4 �#����6�#�/ �// ���#7 �� � �� #7���67 � �� ��#� ��� ��"���.����"�����# "�#72� % �!��- �� - 39 �=�@��!%
5 ���� �&2& ��� ����� �&-& (���-4 '/���/ ��"G � ���"/�?�� ��#7��)�� �6���� #�����.�����#�� #����)����#��� �) �������"���#7�/����% � ��� - �:9 �,�@�$,%
5 ���� "&�& (����4 ���"����G #7� �*� �#������ �) �"�"#����%������- - /+:9 �@�=%
�� � � � ;& ��� <��� $& (���-4 ���"���� ��� "��6������ �//���#7 �� #7� 7 "�������#��� ���"���� �) "/��#� #� "�#7�6���%�!��- ��- =9 ����@��,�%
.� �� �&� 5���������� '&� ��������� 5&� ������ �&� .��%���� �&�<�� ������� 2&"& ��� ����� �� <&-& (����4 8�#� #��� �) �7���/�6�� �) � /.� �� "/��# �//�% ������- �� - �� - >49$��@$=�%
-����� �&� !��% � %�(�� �& ��� ;�������� �& (����4 �// �/��6 #7�2�# 7#�2��G �� #7� ��6�/�#��� �) �"�"#���� ��6�/�#���% 6��.� - �/9 �=$�@�=��%
-���� �&2&-&� ���������� 5&$&� ���� �� 5&1& ��� ������ 2&"& (���$4���&�#���� ��#��#� ��/� #�� )�� �����#�� � #� #7� "7 #�#�*�� �����#��� ��� ��/� �#���/�9 �������#��� #� ��#7 / L������#�9��� �����#��# #� � �� #����/ "�#7�6��% � ��� �� 9 :9 ���@���%
"����� ,&.& ��� 6 ��� ,&�& (���$4 ��67 �)? ��� #����)����#����� ���#% + ��! �� 0������� 8����9 �������� ���������-(��7��#��9 �%�%9 ��%4% �*)���G �*)��� ��������# 5����9 ""% ���@�,$%
"�������� .&"& (���-4 5��6������ �// ���#7 �� "/��# �������G �7�
"��"��� ��� "������ �) �//�/�� ��� ���% ���- *�"- ��������-/:9 ,�,@$�$%
"����� �&,&� " ������ <&� �������� $&� ���*��� &� <����� 2&��������� �&� ������ ,&6& ��� .���� 2&<& (����4 �#�� #��� �) #7��������"��� �5�� 6��� �� ����6 ���/ �"� �? �# ������������#�� �% �������9 +:39 -$,@-$=%
"����� .&,& ��� ,���� 2&5& (���-4 ��#� 7������ ��� �"�"#����%�������9 +=�9 �,!�@�,��%
"�������� 6&� <��� 2& ��� 5��������� �& (����4 � ��/� #��� � �#��)�� 7���� �"�"#���� ��7���#��� ����6 ���#% 8����9 �49 �,!�@�,��%
"�������� 6&� ������� 5& ��� 5��������� �& (���=4 ��/� �)��#� 7������ ��� �.#������/ �������� �� 7�� �) : /.� �� :�*���� �� 6��2#7 �����# ��� ���#�/�# �� �� 7���� �� ���������% 6.�� 1���- /=?9 �=�@���%
"� ��� �&� ��. ���� 2&�& ��� 9 �������� �&2& (����4 :�A.�)���/ ������� ��� #7� ��#� 7������ �� �"�"#����% 0���� ��"-�/9 �-��@����%
'������ �&� ���������� 5&� ��� � & ��� ,���� 2&5& (����4�#�� #���.)�� #��� ���/ ��� �) : /.� "��#���% ���#�? �#��� �) �������� ������� ��"��#��# )�� 7���������<�#��� 2�#7 : /.���� 7�#���������<�#��� 2�#7 :�*% - �� - ����- +>?9 ���=�@���=�%
'���������� �&;&� $��� ,&$& ��� ' �%���� '&, (����4�������&#���� � ����� 6��� ��.� "��L� #� �//� )���"��6������ �// ���#7% ���!��9 /4:9 $�$@$��%
������ ,&6&� ����� �&-&� 9��(�� �&1&� ����� %�� �&,& �������(������ �&2& (���,4 ��/� �/�� ���/ ��� �) �����/�� � 6�������"#� ��� ����#�? �#��� �) � "�#�#��� ��6�/�#�� ��D��� � ����� #� �// 3��2� 5���������� � ���6�� �����/�� �6����% - ������� - �>49 $-��@$-=�%
9� ����� "& (����4 �7� "��#�.�� �6��� : /.� ��� �#� ��/� ����6�/�#��6 �"�"#����% ���- +�#- /9 =�$@=�!%
9� � 6&1&� ��1���� �&� 9������� ,&1&� . � �� 1& ��� � �����,& (����4 �7� "����� �M����� � �) : /.�9 ���+M �/����/��.��"�����# "��#��� 3����� B9 �/��#���� ��� "�, �� ��3��N� ���#��� 27��# 6���% ���&��9 3�9 �@�,%
<�� ���� 5& ��� ����� 5���� �& (����4 :�*.���� �� �// ���#7 ��#��� � �� ����/�� #� #7� 7 "�������#��� ���"����% ���- ��� ���#- ���- ���9 3:9 ���=@��=�%
<��� .&2&� .���� 8& ��� ,���� �&�& (����4 ��/�#��� �) #7��� ����/7���� /��� � ��� �� �) 0� /�� (�/�4 )�� #��� �� ���#%�� 9 ::9 ����@��!=%
< ������� 2&� ����� 2& ��� 6�������� <& (��-�4 �"�������#7�� )�� #7� ���/�#��� �) �� )��� "/��# #������% ��� -������- �:/9 �=@�!%
���������� �&� ���(� 9&�&� ������ �& ��� ;������ @& (����4 �����/ �//.���#7 ��""������� : /.* (A4 ��� ���.� ��7���# �// ���#7 ��#��� � "/��#�% �!��- �� - 39 ���@��-%
;�%��� !&1&� ������� 5&<& ��� 9 �������� �&2& (���,4 : /.�7�#���������<�� �� ���� 2�#7 � �������� 7���/�69 :�*9 #7�#� �/���#�� "��6������ �// ���#7% �� 9 >09 =!�@=��%
���(��� 2&$&� ' ��� $&�&� -� ��� <&1&� -�(� �&� "���� 1&.& ���.������ �&2& (���=4 �7��� #���<�#��� �) ����9 � ��#�#��� ���������"��� ��""������6 �����#�� � #� 5������"��� "�����#� ��"� �?�� � ������/ ��))����# �55 6����% � ��� �� 9 =9 �!,,@�!$=%
,�������� �&'&� �%�%� .&'& ��� .���� 2&<& (���-4 8��� �//� �� #�//#�/��% �!��- :���- � ��� �� - �9 $-!@$-�%
, ���� $&� 6��� 6&� @���� 2&� 1������ �<������ $&<&� 9�((����� 1&�, ��������(� �& ��� '�� �&@& (����4 ��" "�/��G �� 7�".��"�����# �� #����/ ���)� � �""����6� "���� �� � ���!#���� �������� "�% ���� 8�,!!!% ���- ��� ���#-���- ���9 309 ,$��@,$=$%
,�- ��#� ������, �# �/%
� :/� 32�// � ��� � A#�9 ��� � ��� !��� � (�!!!49 +�� ,�,@,��
,���� �� .&$& ��� '����� �&5& (���=4 �/����6� �) �� /��� 8���#� �/�6��� /������/ )��6���#� �����6 �// ���#7 ���� �� � )��6�/ ��)� #��� �� � ����#� #���#���#% � ��� �� 9 =9 ,�,@$!�%
� � �� �&� �������� �&� .��� ���� �&� ��������& $& ���<�%���� �& (����4 �7� ����/�����# �) �#���� "��#����� ���"��#���� ��7���#�� 6���� �� #7� ��6�/�#��� �) "��6������ �//���#7 �� "/��#�% � ��� �� 9 ��9 $,�@$$$%
� ���� �&�&� $����� ��� 9&� �������(�� �&�&� ����������� �&�8 ������� ,&� 5������ �&�& ��� �� �(����� 6&-& (���-4��"���#� L������#�.��"�����# ��� ��/� /�#�.��"�����#��)����.���"���� "�#72� � �� ���&�#���� ��� �����#��/ )�������#�� � #� ���#�� # �� �����/ "�#7�6���% ���- ��� ���#- ���-���9 349 ���!�@�����%
8��� <�� � �&,&� !��� .&� ����� �� � -&� �� ��� �&2&�&� �����
�&-& ��� ���5������ 2&$&"& (���,4 �7���#��� �) #����/�#����/���#��#��� �� #7� ���# ����������� ����"����� �� � )�� #��� �)#7� �#���/�# ��� "���#��� �) 7���"�� �#�� #���� �� #7� ���/�����% - �� - ����- +:=9 =$�,@=$=�%
6����� <&� �������� �&� ������� 2&� <�%��� "& ��� "������� $&(����4 ���#�? �#��� �) � ����/ �������� 7���� 6���9 �>0�%0������9 +=9 ,!�@,!$%
A�� B& ��� ,���� 2&5& (���-4 :�* �7���#��.�9 � �����/����"�"#���� ��""������ ����#�?�� � )�� #����/ � ������6 �� ���#% + - �� 9 �9 ,,�@,$=%
!��� '&� -��(� '&�&� @����� �&�&� ����7��� 1&� '������ �& ��� ,����2&5& (���=4 �#�� #���.)�� #��� ��"������� �) #7� "���"�"#�#� "��#��� :�* �� ���# ��� �����/��� �//�% + - �� �� - �:9=$�$@=�!-%
0��:��3 � ������ ������ �'�!-��$%
��$�'$( �!�������� ��/$��#!��# �� #���� ,��
� :/� 32�// � ��� � A#�9 ��� � ��� !��� � (�!!!49 +�� ,�,@,��