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1/3

3 0 2 B u l l . K o r e a n C h e m . S o c . 2 0 0 6 , V o l . 2 7 , N o . 2 N o t e s

S a m p l e P r e p a r a t i o n f o r H e a d s p a c e G C A n a l y s i s o f R e s i d u a l S o l v e n t s

i n H y a l u r o n i c A c i d D e r i v a t i v e F i b e r

H o o n j o o K i m ,

, , * , a

D o n g m i n K i m ,

J e o n g S o o Y a n g ,

a n d C h a n - W h a K i m

P h a r m a c e u t i c a l A n a l y s i s T e a m , L G l i f e S c i e n c e s , L t d . / R & D P a r k , D a e j e o n 3 0 5 - 3 8 0 , K o r e a

*

E - m a i l : k i m h o o n j o o a @ h a n m a i l . n e t

G r a d u a t e S c h o o l o f L i f e S c i e n c e s a n d B i o t e c h n o l o g y , K o r e a U n i v e r s i t y , S e o u l 1 3 6 - 7 0 1 , K o r e a

R e c e i v e d N o v e m b e r 1 0 , 2 0 0 5

K e y W o r d s : H e a d s p a c e g a s c h r o m a t o g r a p h y , M e t h o d v a l i d a t i o n , R e s i d u a l s o l v e n t , H y a l u r o n i c a c i d d e r i v a -

t i v e , H y d r o l y s i s

H y a l u r o n i c a c i d ( H A ) i s a l i n e a r p o l y s a c c h a r i d e b u i l t f r o m

r e p e a t i n g d i s a c c h a r i d e s o f a l t e r n a t i n g D - g l u c u r o n i c a c i d a n d

N - a c e t y l - D - g l u c o s a m i n e .

1

H A c a n b e i s o l a t e d f r o m b i o -

l o g i c a l s o u r c e s s u c h a s v i t r e o u s h u m o r , h u m a n u m b i l i c a l

c o r d a n d r o o s t e r a n d h e n c o m b .

2

H A h a s b i o c o m p a t i b i l i t y

a n d i t s a v e r a g e m o l e c u l a r w e i g h t i s u s u a l l y s e v e r a l m i l l i o n .

3

H A i s v e r y v i s c o u s i n a q u e o u s s o l u t i o n b e c a u s e o f i t s

m o l e c u l a r c o n f o r m a t i o n .

4

D u e t o i t s v i s c o e l a s t i c p r o p e r t i e s ,

H A i s u s e d i n t h e m e d i c a l a p p l i c a t i o n s a s o p h t h a l m o l o g y ,

d e r m a t o l o g y , o s t e o a r t h r i t i s , u r o l o g y a n d w o u n d h e a l i n g .

5

H A d e r i v a t i v e h a s a n i m p r o v e d r h e o l o g i c a l p r o p e r t y

w i t h o u t l o s i n g n a t u r a l b i o c o m p a t i b i l i t y o f H A . B e c a u s e H A

d e r i v a t i v e i s w a t e r - i n s o l u b l e o r s l o w l y d i s p e r s i b l e i n h u m a n

b o d y , i t l a s t s m u c h l o n g e r t h a n H A i n h u m a n b o d y .

6

T h e r e f o r e , H A d e r i v a t i v e s h a v e b e e n w i d e l y d e v e l o p e d a s

p o s t - o p e r a t i v e a d h e s i o n - p r e v e n t i n g f i l m s o r g e l s ,

7

m a t e r i a l s

f o r w r i n k l e t r e a t m e n t ,

8

m a t e r i a l s f o r s o f t t i s s u e a u g m e n t a -

t i o n ,

9

m a t e r i a l s f o r t h e a r t h r i t i s t r e a t m e n t ,

1 0

v e h i c l e s f o r d r u g

d e l i v e r y ,

1 1 , 1 2

e t c . I n t h i s s t u d y , a H A d e r i v a t i v e f i b e r i s

o b t a i n e d f r o m a m i d e r e a c t i o n o f c h i t o s a n a n d H A u s i n g

N

-

( 3 - D i m e t h y l a m i n o p r o p y l ) -

N '

- e t h y l c a r b o d i i m i d e ( E D C )

h y d r o c h l o r i d e a n d

N

- h y d r o x y s u c c i n i m i d e ( N H S ) .

1 3

H A

d e r i v a t i v e f i b e r i s t u r n e d i n t o H A d e r i v a t i v e g e l i n w a t e r .

H e a d s p a c e g a s c h r o m a t o g r a p h y ( H S - G C ) m e t h o d h a s

b e e n u s e d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f r e s i d u a l s o l v e n t s i n

p h a r m a c e u t i c a l c o m p o u n d s .

1 4 - 2 4

D i r e c t i n j e c t i o n o f a n a l y t e s

e v a p o r a t e d t h r o u g h e q u i l i b r a t i o n b e t w e e n l i q u i d ( o r s o l i d )

p h a s e a n d g a s p h a s e t o G C s y s t e m m i n i m i z e d t h e c o n t a m i -

n a t i o n o f G C s y s t e m a n d t h e d e t e r i o r a t i o n o f G C c o l u m n .

2 5

I n a d d i t i o n , t h e a u t o m a t i o n o f e q u i l i b r i u m a n d i n j e c t i o n

p r o c e d u r e r e d u c e d a n a l y s i s t i m e a n d i m p r o v e d r e p r o d u c i -

b i l i t y i n i n j e c t i o n p r o c e d u r e .

I n t h i s s t u d y , H A d e r i v a t i v e f i b e r w a s h y d r o l y z e d b y

h y a l u r o n i d a s e ( H A s e ) i n b u f f e r s o l u t i o n f o r t h e m i n i m i -

z a t i o n o f v a r i a t i o n i n t h e v i s c o s i t y o f H A d e r i v a t i v e f i b e r i n

w a t e r r e s u l t i n g i n t h e h i g h e r e x t r a c t i o n o f r e s i d u a l s o l v e n t s

f r o m t h e g e l m a t r i x . H A s e i s a n e n z y m e t h a t r a n d o m l y

h y d r o l y z e s t h e l i n k a g e b e t w e e n t h e

N

- a c e t y l - D - g l u c o s a m i n e

a n d t h e D - g l u c u r o n a t e r e s i d u e s i n H A .

2 6

T h e h y d r o l y s i s r a t e

i s d e p e n d e n t o n p H a n d c o n c e n t r a t i o n o f H A s e . I n t h i s s t u d y

v i s c o s i m e t r i c a s s a y w a s a p p l i e d b e c a u s e i t w a s a s i m p l e a n d

r a p i d m e t h o d f o r t h e m e a s u r e m e n t o f a c t i v i t y o f H A s e .

T h e a i m o f t h i s s t u d y i s t o d e v e l o p e f f i c i e n t s a m p l e

p r e p a r a t i o n m e t h o d f o r H S - G C a n a l y s i s o f r e s i d u a l s o l v e n t s

i n H A d e r i v a t i v e f i b e r . C o m p a r e d t o d i r e c t e x t r a c t i o n o f

r e s i d u a l s o l v e n t s f r o m H A d e r i v a t i v e f i b e r , t h e e x t r a c t i o n

t h r o u g h t h e h y d r o l y s i s o f H A d e r i v a t i v e f i b e r b y H A s e g a v e

m o r e c o m p l e t e a n d h i g h e r r e p r o d u c i b l e q u a n t i f i c a t i o n o f

r e s i d u a l s o l v e n t . T o v a l i d a t e H S - G C a n a l y s i s m e t h o d o f

r e s i d u a l s o l v e n t s , s p e c i f i c i t y , l i m i t s o f d e t e c t i o n a n d q u a n t i -

f i c a t i o n , l i n e a r i t y , a c c u r a c y a n d p r e c i s i o n a r e i n v e s t i g a t e d i n

t h e s t u d y .

E x p e r i m e n t a l S e c t i o n

S a m p l e a n d s t a n d a r d s . E t h a n o l w a s o b t a i n e d f r o m

M e r c k ( M e r c k 6 4 2 7 1 , D a r m s t a d t , G e r m a n y ) . I s o p r o p a n o l ,

a c e t o n e a n d 2 - m e t h y l - 2 - p r o p a n o l (

t

- b u t a n o l ) w e r e o b t a i n e d

f r o m A l d r i c h ( S i g m a - A l d r i c h 1 4 5 0 8 , S t . L o u i s , M O , U S A ) .

A l l s o l v e n t w e r e o f

9 9 . 5 % p u r i t y . W a t e r w a s p u r i f i e d b y

M i l l i Q - p l u s ( M i l l i p o r e , B e d f o r d , M A , U S A ) . S o d i u m p h o s -

p h a t e m o n o b a s i c a n h y d r o u s a n d s o d i u m h y d r o x i d e w e r e

p u r c h a s e d f r o m A l d r i c h a n d h y d r o c h l o r i c a c i d w a s o b t a i n e d

f r o m W a k o ( W a k o p u r e c h e m i c a l I n d u s t r i e s , L t d . O s a k a ,

J a p a n ) t o p r e p a r e b u f f e r s o l u t i o n s . H A s e u s e d t o c l e a v e H A

d e r i v a t i v e w a s o b t a i n e d f r o m S i g m a .

H e a d s p a c e g a s c h r o m a t o g r a p h y . T h e a n a l y s e s w e r e

p e r f o r m e d o n a n A g i l e n t 6 8 9 0 g a s c h r o m a t o g r a p h y ( A g i l e n t ,

P a l o A l t o , C A , U S A ) e q u i p p e d w i t h a n A g i l e n t 7 6 9 4 h e a d -

s p a c e s a m p l e r a n d a f l a m e - i o n i z a t i o n d e t e c t o r . T h e i n j e c t o r

t e m p e r a t u r e w a s 1 4 0 C a n d d e t e c t o r t e m p e r a t u r e w a s 2 4 0

C . C o l u m n w a s H P - 1 ( 1 0 0 % d i m e t h y l p o l y s i l o x a n e , 3 0 m

0 . 5 3 m m I D , 3 . 0 m d . f . C a p i l l a r y ) . S p l i t r a t i o o f i n j e c t i o n

w a s 1 : 1 0 . O v e n t e m p e r a t u r e w a s m a i n t a i n e d a t 4 0 C f o r 1 5

m i n , t h e n r a i s e d a t a r a t e o f 2 0 C / m i n t o 2 4 0 C , m a i n t a i n e d

f o r 5 m i n . T o t a l r u n t i m e w a s 3 0 m i n . H e l i u m g a s w a s u s e d

a s a c a r r i e r g a s a t a c o n s t a n t f l o w r a t e o f 1 . 5 m L / m i n .

H e a d s p a c e o v e n t e m p e r a t u r e w a s 9 0 C . T h e t e m p e r a t u r e s

o f t h e s a m p l e v a l v e a n d t r a n s f e r l i n e w e r e 1 1 0 C a n d 1 3 0

C , r e s p e c t i v e l y . G C c y c l e t i m e w a s 3 8 m i n . T h e t i m e s o f

e q u i l i b r i u m a n d p r e s s u r e i n t h e h e a d s p a c e v i a l w e r e 2 0 a n d

0 . 2 m i n , r e s p e c t i v e l y . B o t h t i m e s o f s a m p l e l o o p f i l l a n d

l o o p e q u i l i b r i u m w e r e 0 . 0 5 m i n . S a m p l e i n j e c t i o n t i m e w a s

a

C u r r e n t a d d r e s s : D e v e l o p m e n t C e n t e r , C J P h a r m a c e u t i c a l R e s e a r c h

I n s t i t u t e , C J C o r p . , I c h o n , G y e o n g g i 4 6 7 - 8 1 2 , K o r e a

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2/3

N o t e s B u l l . K o r e a n C h e m . S o c . 2 0 0 6 , V o l . 2 7 , N o . 2 3 0 3

1 . 0 m i n . T h e s a m p l e u n i t w a s e q u i p p e d w i t h a 1 . 0 m L o f

i n j e c t i o n l o o p . T h e h e a d s p a c e s a m p l e r u n i t s , a s a m p l e l o o p ,

n e e d l e a s s e m b l y a n d t r a n s f e r l i n e w e r e m a d e o f f u s e d s i l i c a -

m i n e d s t a i n l e s s s t e e l t o a v o i d a c o m m o n p r o b l e m s u c h a s

c a r r y o v e r f r o m t h e p r e v i o u s i n j e c t i o n .

P r o c e d u r e .

S t a n d a r d s t o c k s o l u t i o n s o f r e s i d u a l s o l v e n t s

w e r e p r e p a r e d b y d i l u t i n g s t a n d a r d o f r e s i d u a l s o l v e n t s i n

w a t e r . S t a n d a r d s o l u t i o n s o f r e s i d u a l s o l v e n t s w e r e p r e p a r e d

b y d i l u t i n g s t a n d a r d s t o c k s o l u t i o n s o f r e s i d u a l s o l v e n t s

u s i n g H A s e s o l u t i o n . I n t e r n a l s t a n d a r d s o l u t i o n w a s p r e p a r -

e d b y d i l u t i n g t - b u t a n o l i n w a t e r . T o p r e p a r e H A s e s o l u t i o n ,

H A s e w a s d i s s o l v e d t o t h e c o n c e n t r a t i o n o f 0 . 5 m g / m L i n

0 . 2 M p h o s p h a t e b u f f e r s o l u t i o n o f p H 5 . 0 . S a m p l e s o l u t i o n

w i t h o u t r e s i d u a l s o l v e n t s f o r a c c u r a c y s t u d y w a s p r e p a r e d

b y s w e l l i n g H A d e r i v a t i v e f i b e r i n H A s e s o l u t i o n b y 2 . 0 m g /

m L f o l l o w e d b y i n c u b a t i n g i t i n w a t e r b a t h a t 3 7 0 . 1 C f o r

2 h o u r s .

R e a l s a m p l e s o l u t i o n w a s p r e p a r e d : t h e r e a l s a m p l e o f H A

d e r i v a t i v e f i b e r i n 2 0 m L o f h e a d s p a c e v i a l w a s s w e l l e d b y

9 . 0 m L o f H A s e s o l u t i o n t o 2 . 0 m g / m L ( w / v ) a n d t h e n 1 . 0

m L o f i n t e r n a l s t a n d a r d s o l u t i o n w a s a d d e d . T h e r e s u l t i n g

r e a l s a m p l e w a s i n c u b a t e d i n w a t e r b a t h a t 3 7

0 . 1 C f o r 2

h o u r s .

R e s u l t s a n d D i s c u s s i o n

M e t h o d v a l i d a t i o n .

T h e m e t h o d v a l i d a t i o n w a s d o n e b y

e v a l u a t i n g s p e c i f i c i t y , l i m i t o f d e t e c t i o n a n d q u a n t i t a t i o n ,

l i n e a r i t y , a c c u r a c y , r e p e a t a b i l i t y , a v e r a g e c o n t e n t a n d

m e t h o d p r e c i s i o n o f r e s i d u a l s o l v e n t s a s w a s i n d i c a t e d i n t h e

I n t e r n a t i o n a l C o n f e r e n c e o n H a r m o n i z a t i o n ( I C H ) g u i d e l i n e

Q 2 B V a l i d a t i o n o f A n a l y t i c a l P r o c e d u r e s : M e t h o d o l o g y .

2 7

F o r t h e s p e c i f i c i t y , e t h a n o l , a c e t o n e a n d i s o p r o p a n o l w e r e

u s e d a s r e s i d u a l s o l v e n t s i n H A d e r i v a t i v e f i b e r w h i l e

t

-

b u t a n o l w a s u s e d a s a n i n t e r n a l s t a n d a r d . T h e b a s e l i n e

s e p a r a t i o n o f r e s i d u a l s o l v e n t s a n d i n t e r n a l s t a n d a r d w a s

d o n e b y t h e H S - G C c o n d i t i o n s ( r e s u l t s n o t s h o w n ) .

T h e l i m i t s o f d e t e c t i o n ( L O D s ) o f r e s i d u a l s o l v e n t s i n H A

d e r i v a t i v e f i b e r w e r e d e t e r m i n e d b a s e d o n s i g n a l - t o - n o i s e

r a t i o o f 3 : 1 : e t h a n o l 0 . 0 2 % ( w / w ) , a c e t o n e 0 . 0 0 5 % a n d

i s o p r o p a n o l 0 . 0 1 % .

T a b l e 1 s h o w s l i m i t s o f q u a n t i t a t i o n s ( L O Q s ) , l i n e a r i t y

a n d a c c u r a c y . L O Q s o f r e s i d u a l s o l v e n t s w e r e d e t e r m i n e d

b a s e d o n s i g n a l - t o - n o i s e r a t i o 1 0 : 1 . T h e l i n e a r i t y w a s

d e t e r m i n e d a t s e v e n l e v e l s i n t h e r a n g e b e t w e e n L O Q a n d

8 . 0 % ( w / w ) . T h r e e r e p l i c a t e s w e r e p e r f o r m e d a t e a c h l e v e l .

T h e c a l i b r a t i o n c u r v e s w e r e o b t a i n e d w i t h t h e a v e r a g e o f

p e a k a r e a r a t i o s o f t h r e e r e p l i c a t e s . A l l o f t h e c o r r e l a t i o n

c o e f f i c i e n t s ( R

2

) w e r e h i g h e r t h a n 0 . 9 9 9 9 a n d t h e c a l i b r a t i o n

c u r v e s w e r e l i n e a r w i t h i n t h e r a n g e . T h e a c c u r a c y w a s

e v a l u a t e d b y t h e r e c o v e r i e s o f r e s i d u a l s o l v e n t s s p i k e d i n

s a m p l e s o l u t i o n w i t h o u t r e s i d u a l s o l v e n t s . T h e r e c o v e r y

r e s u l t s o f s o l u t i o n s s p i k e d a t c o n c e n t r a t i o n l e v e l o f 2 . 0 , 4 . 0

a n d 6 . 0 % ( w / w ) a r e a l s o s u m m a r i z e d i n T a b l e 1 : t h e

r e c o v e r i e s o f r e s i d u a l s o l v e n t s w e r e r a n g e d b e t w e e n 9 5 . 1

a n d 1 0 2 . 8 % .

R e p e a t a b i l i t y w a s e v a l u a t e d u s i n g 4 . 0 % o f s a m p l e s p i k e d

w i t h r e s i d u a l s o l v e n t s a s s h o w n i n T a b l e 2 . T h e r e l a t i v e

s t a n d a r d d e v i a t i o n s ( R S D s ) w e r e : 1 . 7 % f o r e t h a n o l , 0 . 4 % f o r

a c e t o n e , a n d 1 . 5 % f o r i s o p r o p a n o l w h i c h w e r e b e l o w t h e

U S P m a n d a t e d l i m i t o f 1 5 % R S D f o r o r g a n i c v o l a t i l e

i m p u r i t i e s a n a l y s i s .

2 8

M e t h o d p r e c i s i o n s w e r e a l s o e v a l u a t e d

b y R S D v a l u e s o f t h e r e s i d u a l s o l v e n t i n a r e a l s a m p l e ( T a b l e

2 ) . T h e e s t i m a t e d c o n t e n t v a l u e s o f i s o p r o p a n o l a n d a c e t o n e

w e r e b e l o w L O D s w h i l e t h e c o n t e n t s o f e t h a n o l w e r e h i g h e r .

I t w a s s u p p o s e d t h a t t h e c o n t e n t s o f i s o p r o p a n o l a n d a c e t o n e

w e r e l o w e r b e c a u s e t h e y w e r e u s e d i n t h e m i d d l e o f r e a c t i o n

o f H A w i t h c h i t o s a n a n d E D C / N H S w h i l e e t h a n o l w a s u s e d

t o w a s h H A d e r i v a t i v e f i b e r i n a f i n a l s t e p o f p r o c e s s e s .

F r o m c o m p a r i s o n w i t h m e t h o d I , m e t h o d I I g a v e t h e h i g h e r

T a b l e 1 . L i n e a r i t y a n d a c c u r a c y o f r e s i d u a l s o l v e n t s

S o l v e n t

L i n e a r i t y A c c u r a c y ( n = 1 8 )

R a n g e ( % )

a

R

2

S l o p e I n t e r c e p t R e c o v e r y ( % ) A v e r a g e R S D ( % )

E t h a n o l 0 . 0 8 - 8 . 0 0 . 9 9 9 9 6 0 1 7 4 . 5 6 1 . 2 4 7 1 9 5 . 1 - 1 0 1 . 1 9 8 . 7 2 . 0

A c e t o n e 0 . 0 2 - 8 . 0 0 . 9 9 9 9 9 5 6 1 . 2 2 0 . 0 0 4 1 9 7 . 8 - 1 0 2 . 6 9 9 . 5 1 . 2

I s o p r o p a n o l 0 . 0 4 - 8 . 0 0 . 9 9 9 9 9 1 9 3 . 2 7 0 . 3 7 4 1 9 7 . 4 - 1 0 2 . 8 1 0 0 . 1 1 . 3

a

T h e r a n g e o f l i n e a r i t y w a s L O Q 8 . 0 % b a s e d o n a s a m p l e p r e p a r e d a t a c o n c e n t r a t i o n o f 2 m g / m L .

T a b l e 2 . R e p e a t a b i l i t y i n s p i k e d s a m p l e a n d a v e r a g e c o n t e n t a n d m e t h o d p r e c i s i o n o f r e s i d u a l s o l v e n t s i n r e a l s a m p l e

S o l v e n t s

R e p e a t a b i l i t y

( n = 1 0 )

A v e r a g e c o n t e n t a n d m e t h o d p r e c i s i o n ( w / w % , n = 6 )

M e t h o d I

a

M e t h o d I I

b

0 d a y 0 d a y 7 d a y l a t e r

I n t e r m e d i a t e

p r e c i s i o n

R S D ( % )

R S D

( % )

A v e r a g e

C o n t e n t ( % )

R S D

( % )

A v e r a g e

C o n t e n t ( % )

R S D

( % )

A v e r a g e

C o n t e n t ( % )

R S D

( % )

E t h a n o l 1 . 7 1 . 4 2 3 . 4 2 . 2 7 . 7 2 . 1 5 . 3 3 . 7

A c e t o n e 0 . 4 < 0 . 0 0 5 < 0 . 0 0 5 < 0 . 0 0 5

I s o p r o p a n o l 1 . 5 < 0 . 0 1 0 < 0 . 0 1 0 < 0 . 0 1 0

a

M e t h o d p r e c i s i o n w i t h o u t c l e a v a g e o f r e a l s a m p l e .

b

M e t h o d p r e c i s i o n w i t h c l e a v a g e o f r e a l s a m p l e .

8/12/2019 B060227_302

3/3

3 0 4 B u l l . K o r e a n C h e m . S o c . 2 0 0 6 , V o l . 2 7 , N o . 2 N o t e s

c o n t e n t o f e t h a n o l a n d t h e m u c h l o w e r R S D . I t w a s

s u p p o s e d t h a t h y d r o l y s i s o f H A d e r i v a t i v e g e l b y H A s e

l e s s e n e d t h e v i s c o e l a s t i c p r o p e r t y o f H A d e r i v a t i v e g e l

r e s u l t i n g i n i m p r o v e d e x t r a c t i o n o f r e s i d u a l s o l v e n t s f r o m

t h e g e l m a t r i x . B e c a u s e H A d e r i v a t i v e g e l p r o d u c e d t h r o u g h

m i x i n g o f H A d e r i v a t i v e f i b e r w i t h w a t e r i n h e a d s p a c e v i a l

h a d t h e d i v e r s i t y i n t h e m o r p h o l o g y a n d v i s c o s i t y , t h e

p a r t i t i o n c o e f f i c i e n t s o f r e s i d u a l s o l v e n t s b e t w e e n t h e g e l

m a t r i x a n d w a t e r w e r e a l s o d i v e r s e . T h e r e f o r e , h y d r o l y s i s o f

H A d e r i v a t i v e f i b e r b y H A s e w a s a n e f f i c i e n t m e t h o d f o r

m i n i m i z a t i o n o f d e v i a t i o n i n p a r t i t i o n c o e f f i c i e n t s . T h e

i n t e r m e d i a t e p r e c i s i o n o f 3 . 7 % o b t a i n e d f r o m R S D v a l u e s o f

0 a n d 7 d a y s i n m e t h o d I I i n d i c a t e d t h a t t h i s m e t h o d h a d

g o o d r e p e a t a b i l i t y .

R e a l s a m p l e a n a l y s i s . T h e r e s i d u a l s o l v e n t s i n s i x r e a l

s a m p l e s w e r e d e t e r m i n e d u s i n g t h e o p t i m i z e d m e t h o d a s

s h o w n i n T a b l e 3 . T h e c o n t e n t s o f e t h a n o l w e r e r a n g e d f r o m

2 . 3 a n d 3 . 2 % . T h e c o n t e n t s o f i s o p r o p a n o l a n d a c e t o n e w e r e

b e l o w L O D o r L O Q a s d e s c r i b e d a b o v e .

C o n c l u s i o n s

H A d e r i v a t i v e f i b e r w a s h y d r o l y z e d u s i n g H A s e f o r h e a d -

s p a c e g a s c h r o m a t o g r a p h i c a n a l y s i s o f r e s i d u a l s o l v e n t s o f

e t h a n o l , a c e t o n e a n d i s o p r o p a n o l i n H A d e r i v a t i v e f i b e r .

T h i s s t u d y s h o w e d t h a t t h e d e v e l o p e d m e t h o d h a d s p e c i f i -

c i t y , l i n e a r i t y , a c c u r a c y a n d p r e c i s i o n . I n a d d i t i o n , i t d e m o n -

s t r a t e d t h a t H S - G C c o u p l e d w i t h m a t r i x - b r e a k i n g m e t h o d

s u c h a s h y d r o l y s i s w a s a v a i l a b l e f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f

r e s i d u a l s o l v e n t s i n a m a t r i x l i k e H A d e r i v a t i v e f i b e r .

R e f e r e n c e s

1 . L a u r e n t , T . C . ; F r a s e r , J . R . E . F A S E B J . 1 9 9 2 , 6 , 2 3 9 7 .

2 . A S T M I n t . v o l . 1 3 . 0 1 , 2 0 0 3 , F 2 3 4 7 - 0 3 .

3 . L a u r e n t , T . C . I n C h e m i s t r y a n d M o l e c u l a r B i o l o g y o f t h e

I n t e r c e l l u l a r M a t r i x ; B a l a z s , E . A . , E d . ; A c a d e m i c : L o n d o n , 1 9 7 0 :

p p 2 8 1 - 3 0 4 .

4 . P a y a n , E . ; J o u z e a u , J . Y . ; L a p i c q u e , F . ; M u l l e r , N . ; N e t t e r , P . I n t . J .

B i o c h e m . 1 9 9 3 , 2 5 , 3 2 5 .

5 . L a p k , L . J r . ; L a p k , L . ; S m e d t , S . D . ; C h a b r e e k , D . P . C h e m .

R e v . 1 9 9 8 , 9 8 , 2 6 6 3 .

6 . L a u r e n t , T . C . T h e C h e m i s t r y , B i o l o g y a n d M e d i c a l A p p l i c a t i o n s

o f H y a l u r o n a n a n d i t s D e r i v a t i v e s ; P o r t l a n d P r e s s , L t d . : L o n d o n ,

1 9 8 8 .

7 . H a n e y , A . F . ; D o t y , E . F e r t i l . S t e r i l . 1 9 9 8 , 7 0 , 1 4 5 .

8 . R e i n m l l e r , J . A e s t h e t i c . S u r g . J . 2 0 0 3 , 2 3 , 3 0 9 .

9 . M a n n a , F . ; D e n t i n i , M . ; D e s i d e r i , P . ; P i t , O . D . ; M o r t i l l a , E . ;

M a r a s , B . J . E u r . A c a d . D e r m a t o l . V e n e r e o l . 1 9 9 9 , 1 3 , 1 8 3 .

1 0 . B a l a z s , E . A . ; B l a n d , P . A . ; D e n l i n g e r , J . L . ; G o l d m a n , A . I . ;

L a r s e n , N . E . ; L e s h c h i n e r , E . A . ; L e s h c h i n e r , A . ; M o r a l e s , B .

B l o o d C o a g l u l a t i o n F i b r i n o l y s i s 1 9 9 1 , 2 , 1 7 3 .

1 1 . L a r s e n , N . E . ; B a l a z s , E . A . A d v . D r u g D e l i v e r y R e v . 1 9 9 1 , 7 ,

2 7 9 .

1 2 . L u o , Y . ; K i r k e r , K . R . ; P r e s t w i c h , G . D . J . C o n t r o l . R e l e a s e 2 0 0 0 ,

6 9 , 1 6 9 .

1 3 . M o o n , T . S . ; K i m , J . H . ; L e e , J . Y . ; M i n , B . H . ; C h o , K . Y . P C T

I n t . A p p l . W O 2 0 0 4 / 0 1 1 5 0 3 A l , 2 0 0 4 .

1 4 . C a m a r a s u , C . C . ; S z t s , M . M . ; V a r g a , G . B . J . P h a r m . B i o m e d .

A n a l . 1 9 9 8 , 1 8 , 6 2 3 .

1 5 . R a g h a n i , A . R . J . P h a r m . B i o m e d . A n a l . 2 0 0 2 , 2 9 , 5 0 7 .

1 6 . C a m a r a s u , C . C . J . P h a r m . B i o m e d . A n a l . 2 0 0 0 , 2 3 , 1 9 7 .

1 7 . C o r a n , S . A . ; G i a n n e l l i n i , V . ; F u r l a n e t t o , S . ; M a s s i m o , B . A . ;

P i n z a u t i , S . J . C h r o m a t o g r . A 2 0 0 1 , 9 1 5 , 2 0 9 .

1 8 . R o c h e l e a u , M . J . ; T i t l e y , M . ; B o l d u c , J . J . C h r o m a t o g r . B 2 0 0 4 ,

8 0 5 , 7 7 .

1 9 . L e g r a n d , S . ; D u g a y , J . ; V i a l , J . J . C h r o m a t o g r . A 2 0 0 3 , 9 9 9 , 1 9 5 .

2 0 . Z h a o , R . S . ; L a o , W . J . ; X u , X . B . T a l a n t a 2 0 0 4 , 6 2 , 7 5 1 .

2 1 . K l i c k , S . ; S k l d , A . J . P h a r m a . B i o m e d . A n a l . 2 0 0 4 , 3 6 , 4 0 1 .

2 2 . S n o w , N . H . ; S l a c k , G . C . T r e n d s A n a l . C h e m . 2 0 0 2 , 2 1 , 6 0 8 .

2 3 . B H y m e r , C . P h a r m a . R e s . 2 0 0 3 , 2 0 , 3 3 7 .

2 4 . I o f e e , B . V . ; V i t e n b e r g , A . G . H e a d - S p a c e A n a l y s i s a n d R e l a t e d

M e t h o d s i n G a s C h r o m a t o g r a p h y ; J o h n W i l e y & S o n s , I n c . : N e w

Y o r k , 1 9 8 4 : p p 2 3 - 2 4 .

2 5 . K o l b , B . ; E t t r e , L . S . S t a t i c H e a d s p a c e - G a s C h r o m a t o g r a p h y :

T h e o r y a n d P r a c t i c e ; W i l e y - V C H : N e w Y o r k , 1 9 9 7 ; p p 3 - 4 .

2 6 . D e m e e s t e r , J . ; V e r c r u y s s e , K . P . I n P h a r m a c e u t i c a l E n z y m e s ;

L a u w e r s , A . ; S c h a r p , S . , E d s . ; M a r c e l D e k k e r , I n c . : N e w Y o r k ,

1 9 9 7 ; p p 1 5 5 - 1 8 6 .

2 7 . I C H G u i d a n c e f o r I n d u s t r y , Q 2 B V a l i d a t i o n o f A n a l y t i c a l

P r o c e d u r e s : M e t h o d o l o g y , F e d e r a l R e g i s t e r ; F D A : R o c k v i l l e ,

M D , 1 9 9 7 ; v o l . 6 2 .

2 8 . T h e U n i t e d S t a t e s P h a r m a c o p e i a 2 7 , 2 n d S u p p l . ; P h a r m a c o p e i a l

C o n v e n t i o n , I n c . : R o c k v i l l e , M D , 2 0 0 4 ; p p 3 3 1 6 - 3 3 2 5 .

T a b l e 3 . T h e r e s i d u a l s o l v e n t c o n t e n t s i n r e a l s a m p l e s ( w / w % , n = 2 )

S a m p l e I I I I I I I V V V I

E t h a n o l 2 . 8 0 . 0 6 3 . 2 0 . 0 1 2 . 9 0 . 0 3 2 . 3 0 . 0 1 2 . 7 0 . 0 1 2 . 4 0 . 0 8

A c e t o n e < 0 . 0 0 5

a

< 0 . 0 0 5 < 0 . 0 0 5 < 0 . 0 0 5 < 0 . 0 0 5 < 0 . 0 0 5

I s o p r o p a n o l < 0 . 0 1

b

< 0 . 0 1 < 0 . 0 1 < 0 . 0 4

c

< 0 . 0 4 < 0 . 0 4

a b

b e l o w l i m i t o f d e t e c t i o n .

c

b e l o w l i m i t o f q u a n t i t a t i o n .