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AGRADECIMIENTOS
• Elena Sukhacheva, Manager global Scientific Affairs Hematology; Beckman Coulter (Switzerland)
• Àngels Doñate, Beckman Coulter Barcelona
• Juan Gimeno, Beckman Coulter Barcelona
Congreso Nacional Laboratorio Clínico
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Primer paso analítico: HematimetríaCriterios de revisión y validación de hemogramas
Datos hemograma
OBJETIVO: identificar patología hematológica y observación del frotis de sangre periférica
CytoDiffCongreso Nacional Laboratorio Clínico
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CBC/DiffResult
Normal WBC
Result
Validation
Reporting
Abnormal WBC
Result
Slidemaking Slide Staining
Manual Count Reporting
Pathology Review
Reporting
25%
75%
2%
“WORK FLOW” LABORATORIO HEMATIMETRÍA
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Marker Cellular Expression
CD36-FITC Monocitos, ERIs, Plaquetas
CD2-PE Linfocitos T, LGG (células NK), blastos LA-T
CD294-PE Eosinófilos, Basófilos, Linfocitos T activados
CD19-ECD Linfocitos B, blastos LA-B
CD16-PC5Neutrófilos, Monocitos pro inflamatorios (anormales), linfocitos T/NK CD16-positivos
CD45-PC7 Todos los leucocitos
Reactivo CytoDiff (6-marcadores, 5-colores)
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Ba
Classifier
B-Cell
Classifier
Non-WBC
Classifier
Mo
Classifier
IG-EO
Classifier LyT
Classifier
BlastOther
Classifier
Eo
Classifier Im Mo
Classifier
B Blast
Classifier Mo±
Classifier
Ly ±
Classifier
Ne
Classifier
El algoritmo CytoDiff propone una selección poblacional celular sencilla que facilita lainterpretación de resultados. 13 histogramas secuenciales conforman el diagramafinal reduciendo la complejidad.
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From CD19 gate From LyT&NK gate From IG & Eo gate
From Mo gateFrom CD36 gate
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Morphological population
Immunological populations
Pathological populations
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Region/Gate name Description
Xt T-Blasts
Xb B-blasts
Xn non-T and non-B Blasts
Xm Monoblasts
T+ CD16+ T and NK lymphocytes
T- CD16-negative T and NK lymphocytes
Mo+ Pro-inflammatory monocytes (CD16+)
Mo- Non-inflammatory monocytes (CD16-)
Información en % y # de las poblaciones celulares leucocitarias detectadasCongreso Nacio
nal Laboratorio Clínico 2018
CytoDiff populations Cytology populations
B ly = B-lymphocytes CD16 negative T/NK-lymphocytes CD16 positive T/NK lymphocytes
Lymphocytes
Mo=Monocytes CD16neg + Monocytes CD16pos
Monocytes
CD16pos SSChigh neutrophils Mature Neutrophils
Eosinophils Eosinophils
Basophils Basophils
CD16neg SSChigh immature granulocytes Immature granulocytes
Blasts=B-cell precursor +T-cell precursor +
Non B and non T precursor +Mono precursor
Blast cells
Estos parámetros nos aportan: 1. Información adicional para el diagnóstico y tratamiento del paciente2. Test de selección de patología como paso previo a paneles de citometria
especializados3. Inmunomonitorización (control celular de la sepsis, control inmunológico de la
aplicación de drogas inmunosupresoras e inmunoterapia)Congreso Nacional Laboratorio Clínico
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¿en qué puede contribuir?
• Aporta información adicional de elevada especificidad enpacientes con sospecha de enfermedad hematológica; laHematimetría suele ser el primer contacto del paciente con elproceso diagnóstico.
• En el seguimiento de pacientes con patología hematológicaconocida; detección de células anormales y/o inmaduras.
• Complementar los algoritmos diagnósticos basados en reglasexpertas de Hematimetria y ampliar/contrastar la informacióndel frotis de sangre periférica.Congreso Nacio
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• El objetivo del estudio es comparar la identificación decélulas patológicas mediante la observación al microscopioóptico como método de referencia en el primer estadiodiagnóstico en el laboratorio de rutina y la detecciónmediante citometría de flujo WBC-Diferencial
• Se han estudiado hasta el momento 500 pacientes en losque el análisis del frotis de sangre periférica es requerido(reglas expertas, algoritmos diagnósticos, alarmas internasy/o criterios numéricos del hemograma).
• Se han incluido también pacientes Hematológicos yOncológicos en seguimiento.
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¿Cuándo hacemos Cytodiff?
• Linfocitosis absoluta; linfocitosis relativa (valorarel hemograma con alarmas y gráficas)
• Monocitosis absoluta (valorar evolución, historiaclínica del paciente)
• Pediátricos con alarmas y/o gráfico anormal• Gráfico anormal (no separación poblaciones
leucocitarias; mala distribución de laspoblaciones)
• Pancitopenia• Casos control
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0102030405060708090
100
UTILIDAD DE CYTODIFF:RESULTADOS POR PATOLOGIA
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VALORACIÓN INICIAL DEL ESTUDIO
• Estudiamos 75.000 hemogramas de pacientes deAtención Primaria
• 5.5% aparece alarma Abnormal Lympho
• 1.2% aparece alarma Atypical Lympho
• 2% de las muestras presentan Linfocitosis absoluta(>4.500 células)
• Se realizan frotis por diferentes reglas expertas yalgoritmos diagnósticos en un 3-5% del total demuestras.
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GRUPO PACIENTES SOSPECHA SLP• Estudio sobre 100 pacientes con sospecha de SLP (alarma,
linfocitosis, gráficos)
CONDICIÓN OBSERVADA N (sobre 100 pacientes)
LEUCOCITOSIS (>12.500X103/µl) 55
LINFOCITOSIS RELATIVA (>45%) 73
LINFOCITOSIS ABSOLUTA (>4.5X103/µl) 77 (Ẋ=11.6)
MONOCITOSIS ABSOLUTA (>1.000X103/µl) 40
LINFOCITOSIS Y MONOCITOSIS 36
ALARMAS EN EL HEMOGRAMA 78
ALARMA %
Abnormal Lympho 60
Atypical Lympho 20
Blasts/Abnormal Lympho? 14
Blasts? 6
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100 PACIENTES SOSPECHA DE SLP
FSP
PRUEBAS COMPLEMENTARIAS(INMUNOFENOTIPO,
ASPIRADO MO,SEROLOGIA)
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LINFOCITOSISALARMAS HEMOGRAMA
GRÁFICOS ALTERADOS
FROTIS SANGRE PERIFÉRICA
PRUEBAS COMPLEMENTARIAS(INMUNOFENOTIPO,
ASPIRADO MO…)
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Paciente de 65 años de edad, mujer, control por DM II linfocitosis progresiva de dosaños de evolución y citología de aspecto reactivo en anteriores revisiones del frotis.En el hemograma: linfocitosis de 6x103/µl; alarma Abnormal Lympho.
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Linfocitosis absoluta citológicamente de aspecto maduro, con alguna célulade citoplasma abundante y de carácter probablemente reactivo.Escasas sombras celulares. Se recomiendan controles evolutivos.Congreso Nacio
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CytoDiff, sugiere población de predominio T (CD19 débil) y algunas célulasNK. Inmunofenotipo básico SLP: 78% CD3, 14% CD19 y 7% CD56. BUENA CORRELACIÓN ENTRE CYTODIFF E INMUNOFENOTIPO (citología)Congreso Nacio
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Paciente de 60 años de edad, varón, con amputación extremidad IAntecedentes de Hemorragia rectal auto limitada. Absceso periungueal. Ligero MEG e insomnio. Control ordinario en Medicina Familiar.En el hemograma: linfocitos de 1.1 x103/µl; monocitosis de 15.2 x103/µl; sin alarmas.
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Linfocitosis absoluta con monocitopenia; CYTODIFF con presencia de población depredominio B pero con cluster celular de morfología atípica, ausencia de monocitos.Inmunofenotipo SLP, población CD19 75%, CD4 68%, CD8 28% y CD3 13%. Monoclonal.ES NECESARIO AMPLIAR ESTUDIO INMUNOFENOTIPO SLP (TRICOLEUCEMIA). Congreso Nacio
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Paciente de 41 años de edad, varón, sin antecedentes de interés. Acude a urgencias por fiebre y MEG de dos semanas de evolución. Motivo consulta: edemas en EEII.Leucocitosis con linfocitosis y monocitosis; alteración del gráfico de dispersión.Anemia y trombopenia. LEUCOCITOSIS+ANEMIA+TROMBOPENIA. Alarma Blasts?
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HEMATOLOGICALDISORDER
BLASTS FLAG % BLASTS CELLAVISION
% BLASTS CYTODIFF
AML SI 2 7
AML SI 71 91
AML-QT SI 1,3 1,81
AML-QT SI 33,5 38,6
AML final QT NO 0 0
AML DX SI 20 19,64
AML DX SI 45,5 35,29
SMD SI 11 15
SMD SI 3 4
SMD NO 1 1
MPD-MF SI 1 1
MPD-MF SI 1 1
MPD-MF SI 1 1
MPD-MF SI 18 17
MPD-MF SI 7 10
MPD-TE SI 27 31
CORRELACIÓN CIFRA BLASTOS(MICROSCOPIO vs CYTODIFF)
.Existe buena correlación
.Los resultados son mejores amenor cifra de células
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PRUEBAS COMPLEMENTARIAS(INMUNOFENOTIPO,
ASPIRADO MO…)
????
LINFOCITOSISAbnormal LymphoGráfico anormal
CYTODIFF:CD19%= 2.34NO BLASTOS
CYTODIFF:CD19%= 3.63NO BLASTOS
LINFOCITOSISAbnormal LymphoGráfico anormal
????
¿CYTODIFF ANTES?
¿CYTODIFF DESPUÉS?
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Normal WBC
Result
CBC/DiffResult
Validation Reporting
Abnormal WBC
Result
Pathology Review
25%
Remisol Middleware
Reflex CytoDiff Test
Analyze onFC 500
20%
CytoDiff Result
5%
Manual Diff
1%
+
ETAPA INTERMEDIA Y COMPLEMENTARIAA LA REVISIÓN CITOLÓGICA DE LAS
MUESTRAS PATOLÓGICAS
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60 FSP SUGESTIVOS SLPC30 FSP MORFOLÓGICAMENTE NORMALES
(8 linfocitosis progresivas; control evolutivo)4 FSP ASPECTO REACTIVO
(1 paciente con Mononucleosis Infecciosa)6 FSP SUGESTIVOS LGG
(100)
FROTIS SANGRE PERIFÉRICA
CYTODIFF CD19% >15: 40 PACIENTESCYTODIFF CD19% <15: 60 PACIENTES
LINFOCITOSISAbnormal LymphoGráfico anormal
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CYTODIFF CD19% >15: 40 PACIENTES CYTODIFF CD19% <15: 60 PACIENTES
30 NORMALES4 POBLACIÓN T+
8 POBLACIÓN T/NK1 LAM
43 PACIENTES40 SLPC
43 NO SLPC
¿17?
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8 SLPC CYTODIFF NORMAL PARA CD19%2 MONONUCLEOSIS
1 MONOCITOSIS MADURA1 TUMOR SÓLIDO
1 HIV1GM-MM
INMUNOFENOTIPO CITOMETRIA:
48 SLPC TIPO B8 SLP CD56
3 SLPT1 LAM
4 LINFOCITOSIS POLICLONAL B(64 PACIENTES)
30 LINFOCITOSIS MONOCLONAL B (LLC)6 LINFOCITOSIS MONOCLONAL B NO LLC
3 TRICOLEUCEMIAS2 LINFOMAS FOLICULARES
4 LEZM3 LDCGB
2 SD SEZARY1 SLPT
¿14?
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En conclusión:
CYTODIFF permite incrementar la especificidad y ampliarla información del diferencial leucocitario del analizadorhematológico en el diagnóstico de patología relacionadacon esta serie.
Se obtiene información útil en la orientación diagnósticade muestras que deben ser analizadas por citometría deflujo específica, aportando mayor seguridad y objetividada la citología del frotis de SP.
El análisis de las muestras es sencillo y rápido por que suuso resulta ágil en laboratorios de Hematología de rutina.
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