dengue - laboratorio

DengueDiagnostico de laboratorio

Clasificación revisada de dengue

Dengue severo1. Fuga plasmática de gran

volumen que conduce a:• Shock (SSD)• Acumulación de líquidos con

SDRA2. Hemorragia severa clasificada por un médico3. Falla severa de órganos Hígado: AST o ALT ≥ 1000 SNC: trastornos de la

conciencia Corazón u otro órgano

Dengue probable Vive/ ha viajado a áreas endémicas de dengue mas fiebre y dos de los siguientes criterios:- Náuseas /vómitos- Exantema- Dolor y malestar- Prueba de torniquete (+)- Leucopenia-Y cualquier signo de alarma

Laboratorio: Dengue confirmado (de importancia cuando no hay fuga capilar)

Dengue severoDengue ± signos de alarma

Signos de alarma* •Dolor espontáneo o a la

palpación del abdomen• Vómitos persistentes• Acumulación clínica de

líquidos• Sangrado de mucosas• Letargia o irritabilidad• Hepatomegalia > 2cm• Laboratorio: incremento

del hto. asociado a disminución del conteo de

plaquetas •Requiere monitoreo estricto e • intervención médica

2

+

Dengue Exámenes esenciales

• Hemograma completo

• Hematocrito

• Plaquetas

Dengue Exámenes complementarios

• Albúmina y proteínas séricas

• Aminotransferasas

• Eritrosedimentación

• NU y creatinina

• Examen general orina

DengueExámenes específicos

Diagnostico individual •Confirmación de casos•Diagnostico diferencial•Manejo clínico

Soporte de vigilancia •Detección temprana•Circulación de cepas•Estudios de incidencia•Caracterización de cepas


• Cultivo

• Biología molecular

• Serologia

• Hemaglutinación

• Inhibición de la hemaglutinación

• Inmunofluorescencia


• Cultivo

• Los tres primeros días

• Diez mililitros de sangre total

• Colocar en hielo, refrigerar a menos 4°C

• Conservar a -20-70 °C

Dengue laboratorio Aislamiento viral

• Inoculación intratecal en ratón RN• Inoculación cultivos celulares de mamíferos• Inoculación intra toráxica de mosquitos adultos• Inoculación en células de mosquitos


• Inoculación intracerebral en ratón– Inconvenientes:

• Alto costo

• Tiempo largo para aislar

• Baja sensibilidad


• Cultivos celulares en mamíferos– Con frecuencia pasos múltiples

• Inconvenientes


Ventajas cultivo en células de mosquito– Alta sensibilidad– Fáciles de mantener– Crecen a temperatura ambiente– Se mantienen por 14 días en el medio

DengueExámenes de laboratorio

Efecto citopáticoCultivo normal


Biología molecular– Diagnostico viral de dengue

– Identificación de serotipos

– Vigilancia molecular

– Caracterización genética


Biología molecular

• Reacción en cadena de Polimerasa (PCR)– Demostración de infecciones concurrentes– Diagnostico retrospectivo– Clasificación rápida en genotipos y sub-

grupos geográficos– Niveles de viremia


Muestras para serologia• Inhibición de la hemaglutinación (IH)• Inmunofluorescencia (IF)• Inmunoensayo enzimático (ELISA)

– Sensibilidad ELISA de captura IgM: 90-97%– Falsos positivos 2%– Se elevan y duran mas en infección primaria– En la infección secundaria se elevan menos y pueden

estar ausentes


• ELISA IgG identifican infección primaria y secundaria por dengue

• Durante la infección 1ª : 7°-10° día• Durante infección 2ª : elevados desde la

fase aguda y mucho mas en la convalecencia

• ELISA: proteínas no estructurales 1 (NS1)


• ELISA de captura de IgM

– Sensibilidad: 92%

– Especificidad: 98%

– Coincidencia con IH: 94%


Muestras para serologia

• Primera desde el 5° día de la enfermedad

• Segunda 2-3 semanas despues de la primera

• Enviar al laboratorio preferentemente a

-20°C o en su defecto a 4 °C

Infección por DengueComportamiento del virus, T°, y Acs.

-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 21 23 25 28

6

4

2

4140393837

20480

5100

12020

VIREMIALog/mlNS1Ag

T° ( °C)

Anticuerpos

Días

IgM IgG

-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 21 23 25 28

6

4

2

640

12020

20480

5100

12020

VIREMIAlog/ml, NS1 Ag

IgM Ac

HI antibodies1rio

HIAntibodies2rio

Días

Comportamiento de los marcadores para el diagnóstico

virus virus

Infección por dengue: respuesta inmune

Infecciónprimaria

InfecciónSecundaria

-2 0 5 60 (6m)

tiempo en días (meses)

NS1 IgMNS1

IgM

14

IgG

20nm

Dengue. Interpretación de resultados frente a la infección (2)

Laboratorio Muestra Clasificación de caso

Títulos de Ac. elevados

IgM positiva

Una sola muestra suero o plasma

Probable

Seroconversión

Cuadruplicación de los títulos

Muestra pareada suero o plasma

Confirmado

Aislamiento (+)

Prueba de Ag. (+)

PCR (+)

Muestra en la fase aguda o crónica de la infección (suero, tejido, LCR, sangre total)

Confirmado

Interpretación de resultados de laboratorio frente a la infección (3)

Laboratorio Muestra Clasificación de casos

Ventajas y desventajas

Serología •Título de anticuerpos • Anticuerpos IgM (+)

• Una sola muestra (suero o plasma)

Probable Ventajas:

1. Toma de muestra fácil

2. Identifica la circulación de agentes infecciosos recientes

Desventajas:

1. No confirma la infección actual

•Seroconversión• Cuadruplicación de titulo de anticuerpos

•Muestra pareada (suero o plasma)

Confirmado Ventajas:

1. Confirmación del caso

Desventajas:

1. Rechazo de parte del paciente

2. Costo elevado (toma de muestra y pruebas de laboratorio)

3. Requiere mas tiempo

• Pruebas de antígeno (+)• Aislamiento viral (+)• PCR (+)

•Muestras en la fase aguda o crónica de la infección (suero, tejidos, LCR, sangre total)

Confirmado Ventajas:

1. Confirmación del caso

2. Genotipificación, vacunas, pruebas, etc.

Desventajas:

1. Costo elevado (pruebas de laboratorio)

Muchas gracias

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