Development and validation of areversed-phase HPLC method

forsimultaneous analysis ofbutylhydroxyanisol, simvastatin and itsimpurities

in tablet dosage forms

Ringkasan Sebuah sederhana, cepat, dan sensitif metode RP-HPLC

menggunakan fotodioda array yang detectionwas Dikembangkan dan divalidasi

sertifikat untuk penentuan simultan butylated andsimvastatin TIK dengan Kotoran

dalam bentuk tablet. Pemisahan kromatografi WS Dicapai pada aPhenomenex

Hypersil kolom (250 × 4,6 mm, 5µm) menggunakan fase gerak asetonitril-

sodiumacetate (12 mM) buffered menjadi 4,2 dengan asam asetat glasial. Laju

aliran WS 1,7 mL / menit, dan deteksi theUV pada 238 nm Apakah Dibuat untuk

simvastatin dan Kotoran Its dan pada 290 nm untuk butylhy-droxyanisol. Sistem

kesesuaian puncak Pertanian solusi untuk identifikasi pengotor WS generatedin-

situ menggunakan sans Setiap standar referensi pengotor. Metode divalidasi

sertifikat WS Menurut ICH Q2 (R1) pedoman, dan Kriteria penerimaan untuk

akurasi, presisi, linearitas, spesifisitas, ketahanan, LOD, LOQ dan, Apakah

dimasukkan ke dalam semua kotak. Selain itu, hasil obtainedby Reproducibility

22 Resmi Obat Kontrol Laboratorium (OMCL) dari Direktorat Eropa Were

Memuaskan. Senyawa-senyawa yang dipilih untuk validasi pengotor berdasarkan

Mereka Apakah ditemukan Pendant lama termand Mempercepat studi stabilitas

dilakukan-out pada beberapa tablet dari formulasi Maroko andother pasar. Metode

Digambarkan WAS kuat dan Terapan sukses dalam controllaboratories kualitas

untuk analisis rutin untuk ditentukan dan butylated dengan simvastatin dosis

tablet itsimpurities bahagia bentuk.

Abstrak: Sebuah metode sederhana, cepat dan sensitif untuk high-performance-

Mance detektor photodiode digabungkan ke kromatografi cair dikembangkan dan

divalidasi untuk déterminationsimultanée dari Butylated dan simvastatin dengan

kotoran dalam pemisahan kromatografi comprimés.La dilakukan dengan

menggunakan kolom Hyper-sil Phenomenex (250 4.6 mm, 5? m) menggunakan

fase gerak yang terdiri dari campuran sodium asetat acétonitrileet sampai 12 mM,

pH disesuaikan dengan 4,2 dengan laju alir 1,7 mL / menit. The simvasta-tine dan

kotoran yang terdeteksi pada 238 nm dan terdeteksi butilhidroksianisol A290 nm.

Solusi dari sistem yang digunakan untuk mengidentifikasi kepatuhan Pengotor

étépréparée tanpa menggunakan referensi internal pengotor standar. Metode

étévalidée menurut ICH pedoman Q2 (R1); dan kriteria penerimaan dalam hal

akurasi, presisi, linearitas, spesifisitas, ketahanan, LD, dan LQ bertemu. Namun,

repro-ducibility dari hasil tingkat 22 kontrol laboratorium resmi médicamentsau

Direktorat Eropa cukup memuaskan. Validasi Pemilihan kotoran telah faitl'objet

didasarkan pada kotoran yang terbentuk selama dipercepat stabilitas longterme

dan tablet dari Maroko dan pasar luar negeri. Méthodeprésentée adalah kuat dan

berhasil diterapkan dalam pengendalian mutu rutin untuk dosagedu butylated dan

simvastatin dengan kotoran besar di tablet. © 2014 Elsevier Masson SAS. All

rights reserved.

Pendahuluan

Pendahuluan

Simvastatin (SIM) (Gbr. 1) Yang dimaksud dengan Kimia (1S-(1?,3?,7?,8?

(2S*,4S*),8??))-1,2,3,7,8,8a-hexahydro-3,7-dimethyl-8-(2(tetrahydro-4-ydroxy-6-

oxo-2H-pyran-2-yl)ethyl)-1-naphtalenyl-2,2-dimethylbutanoate, organisme dalam

prodrugactivated Setelah enzimatik Hidrolisis. SIM? Bentuk asam Hydroxy

bertindak sebagai inhibitor dari tahun 3-hydroxy-3-methylglutaryl koenzim A

reduktase Terutama Semua yang DIGUNAKANDI pengobatan

hiperkolesterolemia primer [1,2] .SIM adalah untuk itu diperoleh dari rute sintetis

yang berbeda oleh Addinga kelompok metil ke lovastatin molekul (bahan awal)

semua yang biosynthetically Diproduksi dari Berbagai filamen-semua jamur [3,4].

Mekanisme reaksi tahapan routesrequire melindungi pelindung dan deprotecting

--Lain functionalitiesin lovastatin molekul yang mengarah ke munculnya Kotoran

severaland berbeda [5-13]. Butilhidroksianisol (BHA) (Gambar 1). Tahun

antioksidan adalah campuran dari Terdiri dari senyawa organik twoisomeric, 2-

tert-butyl-4-hydroxyanisoleand 3-tert-butyl-4-hydroxyanisole [14] Sering

Digunakan oksidasi toprevent simvastatin tablet di [15,16]. Beberapa metode

HPLC analitis untuk Mengukur SIM secara atau dalam kombinasi dengan bahan

Phar-maceutical --Lain aktif (API) di beens productshave farmasi melaporkan

tentang [17-28]. Namun, terbatas-telah-menjadi tekad methodsfor BHA

melaporkan tentang [17,18,26,29] .Selain, tinjauan literatur yang tersedia pada

studi pengotor SIM Terungkap Bahwa enam kromatografi akurat mea-surements

dengan resolusi tinggi spektrometer massa [30-35] Apakah melaporkan tentang

untuk karakterisasi produk farmasi impuritiesin SIM, Semua yang, bagaimanapun

stabilitas indi-cating lakhs baik. Sejauh ini, untuk pengetahuan kita sekarang, dua

metode HPLC-UV untuk stabilitas menunjukkan indikasi determiningSIM dan Its

Kotoran-telah-telah dilaporkan tentang pejabat-resmi di farmakope utama [17-20]

dan Dalam Beberapa artikel yang dipublikasikan [36-39]. Pertama Metode HPLC-

UV gradien DIADOPSI di thefour farmakope utama [17-20] dan [36]

dipekerjakan aspecific dimensi kolom C18 dan standar mahal dan

specificreference untuk solusi sistem kesesuaian. Metode HPLC-UV isokratik

sec-ond WS melaporkan tentang oleh A. Malenovic [37-39] dan Concerned

berturut-turut dengan pemisahan, vali-dation dan ketahanan SIM dan Kotoran Its

dalam jumlah besar drugsubstance, menggunakan tujuan-netic electroki

mikroemulsi fase gerak yang kompleks . Semua tentang metode HPLC-UV

dilaporkan untuk penentuan werevalidated hanya dari SIM dan specificimpurities

Its, tetapi tidak BHA; Pertanian dan troublesomemobile Entah tahap atau kolom

dan referensi standar khusus, maka kesulitan untuk analisis rutin. Utama

objectiveof pekerjaan saat WS untuk Mengembangkan tunggal, cepat gradien

HPLC andeasy-fotodioda-array (PDA) detektor stabil-ity menunjukkan metode

indikasi untuk penentuan simultan dari BHA di hadapan Simand dari degradasi

utama SIM andprocess Kotoran dalam bentuk tablet komersial. The devel-oped

metode sertifikat divalidasi WS MENURUT ke Q2 ICH (R1) [40] Q3A (R2) [41]

dan Q3B (R2) [42] rekomendasi, usinga kolom konvensional dan fase gerak, sans

penggunaan eksternal ofany standar referensi pengotor untuk peakidentification

Baik maupun untuk solusi sistem kesesuaian. Setelah metode theanalytical

berhasil divalidasi sertifikat, seperti yang terlihat bythe hasil OMCLs, It Bisa Jadi

Mudah Diimplementasikan di laboratorium kontrol qual-ity batch rilis dan

stabilitas testingpurposes untuk kuantitatif BHA, SIM dan itu Kotoran.

eksperimental

Kimia dan reagen

SIM dan lovastatin (Imp-E) referensi kimia stan-dards (CRS) Apakah untuk itu

diperoleh dari Direktorat Eropa forthe Kualitas Obat Dideklarasikan dengan

99,1% dan 99,5% kemurnian, masing-masing (Gambar 1) standar ketidakmurnian

SIMhydroxy acid (Imp-A) referensi (Gambar. 1) dan anhydro SIM (Imp-C)

(Gambar 1). Apakah Disediakan dari LGC-Inggris dengan 95% dan 96,2%

kemurnian Menyatakan, masing-masing. Semua standar Apakah Pertanian

asreceived. The 99,4% kemurnian di rumah bekerja standardBHA WS Dihitung

dengan pendekatan keseimbangan massa. AcetonitrileHPLC kelas WS untuk itu

diperoleh dari Sigma-Aldrich (Jerman), hidrogen peroksida, dan natrium klorida

hydroxidewere asam Disediakan oleh Merck KGaA, (Jerman), natrium acetatewas

Diperoleh dari Riedel-de Haeri (Jerman), asam glacialacetic disediakan oleh

Scharlan (Spanyol) dan sulfuricacid WS membeli ini dari Fluka (Jerman). Air WS

pra-dikupas in situ dengan menyaring air suling pada filter

polyvinylchloridemembrane.

Bentuk sediaan farmasi dan API

Enam belas SIM bisnis formulasi tablet Semua yang wereused untuk studi

stabilitas dipercepat Apakah Anda membeli pasar fromMoroccan (5 merek) serta

dari coun-coba pasar --Lain (4 merek dari Inggris, 1 merek membentuk Perancis,

Yunani, India dan Portugal dan 3 merek dari Spanyol) sampel API .Twelve dari

sumber yang berbeda dan batcheswere Disediakan dari Merck Sharp Artemis

Biotech, Bel-mac, Biocon, Biogal Farmasi, Rambaxy, Zhejiang, dan perusahaan

produsen Microlabs Apakah Pertanian untuk assessthe metode selektivitas.

instrumentasi

Sistem kromatografi terdiri dari Waters 2695pump, Autosampler dan Waters 2998

DAD. Sebuah sistem chro-matographic kedua Agilent 1100 series kuaterner

pumpequipped dengan detektor G1313A Autosampler Thermostat andG1314A

PDA WS Pertanian untuk mengevaluasi presisi interme-diate. Sistem kontrol,

pengumpulan data dan Pengolahan Data Apakah Capai menggunakan software

Chemstation EmpowerTMand Waters data perangkat lunak kromatografi, dan

stres ringan respectively.Thermal dipercepat stabilitas studieswere yang dilakukan

dalam suhu dan kelembaban stabilitychamber KBF-720 (Binder-USA), dan

photostability di cham-ber KBF (Binder-USA), masing-masing. The ditimbang

XP26and neraca analitik AG / 285 (Mettler Toledo) Apakah DIGUNAKANDI

pekerjaan ini MENURUT senyawa tertimbang quan-tity.

Persiapan sampel dan standar solusi kerja

Persiapan larutan penyangga dan campuran pelarut buffer asetat (12 mM) WS

Disiapkan oleh Pembubaran sekitar 1 g natrium asetat dalam satu liter ofwater.

PH larutan ini WS-disesuaikan dengan 4.20 ± 0.05with asam asetat glasial dan

gasnya di bawah vakum. Campuran pelarut dengan WS Disiapkan 35:65 (v / v)

penyangga Volume ratioof asetat dan asetonitril, masing-masing.

Persiapan uji, standar, kesesuaian sistem dan sampel plasebo

Semua sampel dan larutan standar yang diperlukan untuk SIM, BHA

andimpurities senang Apakah Dipersiapkan seperti yang dijelaskan dalam bagian

fol-melenguh. Setiap Solusi Disiapkan, telah diambil dan disaring melalui

portionwas 0.45 ~ m membran selulosa porositas Milliporeregenerated dalam

botol HPLC, dan 50µL aliquot Apakah Disuntik Ke tahun autosampler atas sistem

HPLC tahun.

Persiapan uji dan pengotor standar

Solusi Standar Apakah Disusun oleh Pembubaran zat standar dalam campuran

pelarut dan disonikasi selama 20 menit toobtain solusi Memiliki konsentrasi

sekitar 15 and3? G / mL SIM dan BHA masing-masing. The pengotor larutan

standar WS Disiapkan oleh Mentransfer 5 mL SIM larutan standar uji untuk 10

mL labu ukur untuk obtaina Mengandung larutan 15µg / mL (1% dari sampel

pengotor nominal).

Persiapan sampel uji dan pengotor

Dua puluh tablet Apakah dihancurkan menjadi bubuk halus dan tahun Akurat

Ditimbang porsi setara bubuk 75 mg SIM diambil pada 50 mL labu ukur untuk

mempersiapkan BHA uji dan solusi sampel pengotor. Sekitar 30 mL campuran

pelarut WS Ditambahkan ke labu ini dan dicampur dengan bantuan USG dan

dikocok selama 20 menit. Kemudian dibuat hingga volume dengan campuran

pelarut dan dicampur dengan shakingand intermiten disentrifugasi pada 3000 rpm

selama 5 menit untuk mendapatkan informal solusi yang jelas. SIM solusi bahagia

sampel Apakah Disusun oleh satu mililiter diencerkan pengotor dari larutan

sampel dengan campuran pelarut untuk memberikan konsentrasi akhir 15 sim µg/

mL.

Persiapan sistem Kesesuaian

Solusinya WS, didirikan untuk Pastikan Itu Validitas identifikasi dan resolusi

perantara puncak puncak Apakah dipertahankan setiap kali digunakan. Itu

Contained BHA, SIM dan itu dua Kotoran utama (Imp-A dan Imp-C) yang

dihasilkan in situ oleh degradasi buatan. Konsentrat Asam sulfat ditemukan WS

Akan Memproduksi memadai untuk simvastatin Kotoran, karena mudah untuk

menghidrolisis untuk imp-A dan mengalami reaksi dehidrasi dengan gugus

fungsional alkohol untuk Menghasilkan Imp-C.

Persiapan sampel Placebo

Dua jenis sampel plasebo Apakah Disusun oleh pencampuran Angka yang

berbeda dari eksipien Sering Digunakan di SIM formulasi tablet. Para Angka

eksipien Pertanian dalam perumusan plasebo WS berdasarkan persentase rata-rata

disimpulkan dari SIM Mereka yang ditemukan dalam formulasi tablet. The

compo-sition jenis pertama, bernama pengotor plasebo Pertanian pengujian assay

forimpurity WS untuk itu diperoleh dengan mencampur SIM (500 mg), laktosa

(3250 mg), selulosa (400 mg), pregelatinised pati jagung (625 mg), BHA (1 mg ),

magnesium stearat (50 mg), asam askorbat (125 mg), asam sitrat (62,5 mg), talk

(37,5 mg), povidone (200 mg), silika koloid (25 mg), oksida besi merah dan

kuning (5 mg ), titanium dioksida (20 mg), dan sekitar (25 mg) untuk glikol,

triasetin, polydextrose, sorbitol, nila, dan quinoline kuning. Jenis kedua, bernama

plasebo senang untuk studi pengujian konten WS Disiapkan seperti pertama sans

Menambahkan senyawa SIM dan BHA.

validasi metode

Metode baru Dikembangkan didirikan sertifikat untuk spesifisitas, presisi,

linearitas, akurasi, batas deteksi dan batas qualitation (LOD dan LOQ) dan

ketahanan divalidasi Menurut ICH Q2 (R1) pedoman [40] menggunakan kolom

konvensional dan fase gerak Termasuk tahun in-situ larutan campuran untuk

identifikasi puncak kesesuaian sistem.

Kekhususan dan stres studi stabilitas

Kekhasan metode HPLC Dikembangkan WS yang dilakukan di hadapan tiga

Kotoran tersedia (Imp-A, Imp-C dan Imp-E) dan dua jenis plasebo. Selain itu,

degradasi stres pengotor Dilakukan pada Kedua plasebo dan API sampel untuk

Menunjukkan pemisahan efektif merendahkan Apakah porsi yang tidak

terpisahkan dari studi kekhususan. Disengaja degradasi ICH Q1A, [43] telah

dicoba oleh kondisi stres sinar UV (254 nm), panas (100◦C) Hidrolisis asam (HCl

1N dan 36N H2SO4), basa (NaOH 1N), dan oksidasi (1% H2O2) (Tabel 1).

Kromatogram sampel Stres Apakah Dievaluasi untuk kemurnian puncak SIM

menggunakan detektor PDA dan perangkat lunak Waters Pemberdayaan. Selain

itu, selektivitas metode untuk --Kain Kotoran potensial WS untuk itu diperoleh

dengan menguji sampel 'dikutip API nilai ditandai (bagian: farmasi bentuk

sediaan dan API).

Studi stabilitas dipercepat

Stabilitas Diformulasikan Produk WS Belajar di bawah kondisi dipercepat untuk

Memberikan indikasi tahun profil pengotor Itu mungkin timbul dari perubahan

dalam proses pembuatan API atau SIM eksipien ketidakcocokan. Tablet

Komersial Sixteen dihitung sebelumnya 'dikutip (bagian: bentuk sediaan farmasi

dan API) dan terkena Apakah Disimpan di ruang iklim selama 6 bulan di 40◦C

2◦C ± dan 75 ± 5% kelembaban relatif MENURUT yang Q1A ICH (R2) pedoman

[43 ]. Sampel Apakah Ditarik dari ruang iklim dan Analisa berkala (0, 1, 2, 3, 4,

5, 6 bulan) untuk konten dan pengotor profil SIM dan BHA.

Linearitas dan Rentang

Kurva kalibrasi untuk SIM dan BHA Apakah Dilakukan dengan menyuntikkan

tujuh dan delapan solusi secara terpisah Disiapkan meliputi Rentang 0,75-22,5? G

/ mL dan dari 0,8-7,5? G / mL konsentrasi metode analisis, masing-masing.

Rentang yang dipilih untuk SIM dan BHA senang WS dilakukan untuk

mengambil Ke rekening berkisar dicakup oleh metode uji dan BHA / SIM

persentase variabilitas dalam produk akhir, masing-masing.

Untuk produk (Imp-A, Imp-C dan Imp-E) kenajisan, linearitas WS diuji melalui

pengenceran larutan standar saham mereka untuk mendapatkan informal tujuh

solusi dengan konsentrasi berkisar 0,75-22,5? G / mL (LOQ 1,5%) untuk setiap

senyawa konsentrasi metode analisis (1,5 mg / mL). Suntikan Apakah Made

Untuk Setiap konsentrasi dalam rangkap tiga dan daerah puncak dengan

konsentrasi Data WS Dilakukan oleh kuadrat-analisis regresi linier. Koefisien

korelasi, kemiringan, Y-intercept, Target% Y-intercept (Y-intercept × 100 / target

konsentrasi seluas 1%) dan standar deviasi residual relatif dari kurva kalibrasi

Apakah Ditentukan.

akurasi

Akurasi metode untuk SIM dan BHA WS Dievaluasi dalam rangkap tiga di

tingkat konsentrasi telah Sami dalam studi linearitas diperkaya bahagia plasebo

sampel dengan SIM dan BHA. Metode akurasi untuk pengotor WS Ditentukan

dalam rangkap tiga dengan spiking Imp-A, Imp-C dan Imp-E pada tingkat

konsentrasi di Sámi pengotor plasebo seperti dalam uji linearitas. Pemulihan WS

Dihitung saat Added Setiap tingkat konsentrasi untuk semua senyawa

menggunakan standar tahun eksternal senyawa korespondensi Disiapkan pada

konsentrasi analitis. Individu dan berarti persen Penerimaan, persentase relatif

standar deviasi (RSD%) dan nilai-nilai confidence interval Apakah Dihitung.

presisi

Pengulangan dari metode uji WS diperiksa dengan melakukan enam tes

independen di happy day Sami Sami pada sampel plasebo berduri pada

konsentrasi nominal 15 dan 3? G / mL dengan SIM dan BHA masing-masing.

Pengulangan metode Pengotor WS diperiksa dengan analisis enam kali lipat dari

sampel plasebo dibubuhi kenajisan Imp-A, Imp-C dan Imp-E pada konsentrasi

15? G / mL. The% RSD dari enam hasil Untuk Setiap senyawa WS Dihitung.

Variasi antar dan intra-hari dan analis variasi Apakah Belajar untuk menentukan

presisi menengah dari metode Usulan. Ketepatan menengah WS Dievaluasi

dengan mengulangi prosedur pada tiga hari berturut-turut oleh analis yang

berbeda, pada dua instrumen yang berbeda di laboratorium Sami (n = 18). Selain

itu, metode Reproducibility WS diperiksa oleh laboratorium resmi obat kontrol 22

adalah pengujian sampel umum (CTS) untuk studi pemantauan pasar. The CTS

terdiri dari tablet bisnis dengan SIM dan BHA Menyatakan senang, masing-

masing, 20 mg dan 0,04 mg dan sekitar 0,27% Contained, 0,05% dan 0,15% dari

Imp-A, Imp-C dan Imp-E, masing-masing.

Batas deteksi dan batas kuantisasi

LOD dan LOQ untuk SIM dan Kotoran Apakah Ditentukan pada rasio signal-to-

noise dari 3: 1 dan 10: 1, masing-masing, dengan menyuntikkan serangkaian

solusi encer dengan konsentrasi dikenal. Studi presisi WAS aussi dilakukan-out di

tingkat LOQ dengan menyuntikkan enam persiapan Individu SIM, Imp-A, Imp-C

dan Imp-E dan Menghitung RSD% dari Daerah.

robustness

Bertekad untuk ketahanan, kromatografi eksperimental standar Apakah rusak

keadaan sengaja diubah dan resolusi perantara BHA dan Imp-A dan SIM puncak

dan itu erat puncak yang berdekatan dalam larutan kesesuaian sistem Apakah

Dievaluasi. Laju aliran WS berubah sebesar 0,2 mL / menit, persentase asetonitril

pada awal dan titik akhir dari gradien sebesar 5%, dengan 2 nm deteksi panjang

gelombang, pH buffer 4,0-4,4, konsentrasi penyangga 10,8-13,2 mM dan kolom

belajar di 25◦C WS suhu dan 35◦C.

Hasil dan Diskusi

Pengembangan metode dan optimasi

Dalam rangka untuk Pastikan Itu Sistem kesesuaian persiapan solusi WAS

direproduksi, Volume asam sulfat konsentrasi simvastatin dan waktu reaksi

Apakah Ditambahkan dioptimalkan. Hasil terbaik WS Dicapai dengan

Menambahkan 0,3 ml 36 N H2SO4 25 mL volumetrik labu Mengandung 20 mL

larutan dari 1 mg / mL SIM dalam asetonitril dan Stres selama satu jam.

Kemudian, 5 mL larutan dari Stres dan Ditarik Apakah Ditambahkan ke 5 ml

150? Solusi G / mL BHA.

Kondisi Apakah kromatografi solusi kesesuaian sistem dioptimalkan dengan

maksud untuk indikasi stabilitas-menunjukkan Mengembangkan metode uji untuk

penentuan simultan dari BHA, SIM dan Its Kotoran pemisahan dan penentuan.

Parameter Apakah Diselidiki fasa diam, pH penyangga, deteksi panjang

gelombang, komposisi perubahan kekuatan ion organik, tingkat, suhu kolom, dan

profil gradien mengalir. Program gradien yang berbeda dikombinasikan dengan

penyesuaian yang berbeda dari parameter menggunakan --Lain Phenomenex

Hypersil C18 5? M × 250 mm 4.6 mm tahap stasioner Apakah Diselidiki. Hasil

yang memuaskan untuk itu Apakah diperoleh Ketika Sebuah program gradien WS

ditetapkan seperti dijelaskan pada Tabel 2, suhu kolom dipertahankan pada WS

30◦C dengan laju alir 1,7 mL / menit, volume injeksi 50? L dan panjang

gelombang deteksi ditetapkan pada 238 WS nm untuk SIM dan Kotoran Its dan

pada 290 nm untuk BHA. Sebuah kromatogram khas sistem solusi kesesuaian

untuk itu diperoleh dengan metode ini ditunjukkan Dikembangkan pada Gambar.

2.

Di sisi --Lain, sebagai metode analisis yang Ditujukan untuk penggunaan rutin di

laboratorium kontrol kualitas, dan untuk Memfasilitasi pelaksanaan ik, memiliki

beberapa jumlah ukuran dan klasifikasi (C18) kolom Sami Apakah disaring untuk

seleksi kolom alternatif. Hasil Terindikasi Bahwa untuk itu diperoleh hanya enam

antara delapan diuji Apakah kolom yang sesuai (Tabel 3).

Stabilitas solusi dalam SIM WS Ditentukan oleh meninggalkan sampel dan solusi

standar dalam termos volumetrik rapat tertutup pada suhu kamar selama 48

Standar dan solusi sampel Apakah diperiksa dengan Menganalisa pada 6 interval

h, baru Against standar Disiapkan. Assay (%) dari SIM dan BHA percobaan

stabilitas solusi WS SELAMA Dalam ± 1% hingga 48 jam dan variabilitas dalam

estimasi Kotoran SIM WS Dalam ± 20% sampai dengan 12 jam, di luar periode

Jumlah 12 ha cukup Imp peningkatan WS-A. Hasil Menunjukkan Bahwa Standar

serta solusi sampel mantap Apakah hingga 48 jam untuk pengujian dan sampai 12

jam untuk kenajisan pengujian disimpan pada suhu kamar Ketika.

Studi degradasi Paksa

Semua sampel degradasi paksa Apakah Dianalisis tahun pada konsentrasi awal

1,5 mg / mL SIM dengan kondisi detektor HPLC-PDA tersebut.

Hasil studi degradasi paksa Menunjukkan Bahwa penurunan yang signifikan WS

Diamati dalam semua sampel yang diuji (Tabel 1). Ketika sampel Apakah

Dikenakan Kedua HCl (Gbr. 3g) dan NaOH (Gambar. 3f) kondisi stres Hidrolisis,

produk utama degradasi SIM WS Imp-A. Di bawah H2SO4 Hidrolisis (Gbr. 3),

dua Major Kotoran (Imp-A dan Imp-C) dengan tiga puncak yang tidak diketahui

ekstra Muncul di 2.13, 3.21 dan 11.95 menit, masing-masing. Thermal kondisi

stres sampel satu bubuk selama 24 jam aussi-berpengaruh tahun SIM pada

stabilitas; Hampir 15% dari terdegradasi dan SIM Jumlah Were Apakah Disertai

dengan penampilan beberapa puncak degradasi Termasuk dua Kotoran utama

(Imp-C dan dimer), dan sekelompok kecil puncak diketahui perantara rentang

waktu retensi 2 dan 8 menit (Gambar. 3d ). Stres peroksida Menunjukkan

Penurunan sedikit dalam SIM sekitar 5% dan mengarah pada pembentukan The

dikenal Imp-A dan enam Kotoran diketahui pada 2,8, 3,9, 4,2, 4,6, 5.6 dan 5.9

menit, masing-masing (Gambar. 3c). Hasil stres showe degradasi SIM

dreasonable photolytic dengan persentase penurunan 12% dan adanya dua

Terungkap produk degradasi diketahui pada 4.17 dan 4.57 menit, masing-masing

(Gambar. 3b).

A Top konfirmasi lebih lanjut dari Kotoran bernama WS dilakukan-oleh

Menganalisis murni Imp-A, Imp-C dan Imp-E standar dan Ph Eur CRS untuk

identifikasi puncak.

Dalam setiap sampel Ditegaskannya, sudut kemurnian puncak WS ditemukan

Menjadi kurang dari ambang kemurnian (Tabel 2) Semua yang Terindikasi SIM

Itu puncak homogen.

Studi degradasi Dipercepat

Seperti ditunjukkan dalam Gambar. 4, hasil stabilitas dipercepat Menunjukkan

Bahwa SIM dan BHA dalam semua merek Apakah secara bertahap terdegradasi

dengan waktu pada tingkat yang berbeda. Degradasi ini WS Ditemani 120% dan

150% peningkatan Imp-A dan Imp-C pada akhir bulan keenam dalam beberapa

formulasi. Itu Ditemukan aussi Itu Beberapa formulasi BERPENGALAMAN

memiliki sedikit Peningkatan sans tujuan pengotor dimer Melebihi ICH pelaporan

Q3B Ambang batas (0,1%) [42]. Terbesar senang Imp-A dan Imp-C, Imp-E dan

dimer Kotoran Apakah 1,40%, 2,90%, 1% dan 0,09%, masing-masing.

Berdasarkan Kotoran ditemukan di Mempercepat degradasi dan berusia tablet

sampel dan Menurut para Q3B ICH (R2) [42] dan ICH Q3A (R2) [41] pedoman

pelaporan dan identifikasi Ambang batas untuk dosis harian maksimum 80 mg,

validasi pengotor WS metode yang dilakukan adalah Kotoran degradasi (Imp-A

dan Imp-C) dan proses kenajisan (Imp-E).

validasi metode

kekhususan

Dalam penelitian ini, kromatogram untuk itu diperoleh dari dua jenis plasebo dan

semua sampel dianalisis Stres DISEBUTKAN Sebelumnya Menunjukkan

kurangnya gangguan pada elusi puncak SIM dan BHA. Selain itu, selektivitas WS

terbukti dari kromatogram untuk itu diperoleh pada API-ini-telah dihitung

sebelumnya Sampel dianalisis Semua yang, menunjukkan lebih dari 15 Bahwa

puncak pengotor dengan spektrum yang sama UV-VIS sebagai SIM Apakah

terdeteksi dan dipisahkan. Oleh karena itu, Dikonfirmasi kekuatan selektivitas

metode ini.

presisi

The% RSD isi SIM, BHA, Imp-A, Imp-C dan Imp-E dalam studi pengulangan

WS Dalam 0,66%, 1,07%, 0,66%, 0,56% dan 0,84%, masing-masing. Results for

presisi menengah Apakah Dalam 0,77%, 1,15% dan 0,92%, 0,96% dan 1,77%,

masing-masing. Reproducibility untuk itu diperoleh 22 OMCLs WS 1,4 dan 2,8%

untuk SIM dan BHA, masing-masing, andless dari 16%, 17% dan 25 untuk Imp-

A, Imp-C dan Imp-E, masing-masing. Hasil ini Menunjukkan Bahwa metode

tersebut tepat (Tabel 4).

akurasi

Hasil studi akurasi dari plasebo berduri Ditunjukkan pada Tabel 5 Hasil

eksperimen dari SIM, BHA dan Kotoran akurasi Terungkap Itu Sendiri

Penerimaan berkisar antara 98 persen sampai 102%, berarti persen Penerimaan

bervariasi dari 99,6% ke 100,5% dengan RSD kurang dari 2%. Terbesar

kepercayaan 95% pemulihan selang semua senyawa berduri berkisar 99,1-

101,4%. Hasil ini Diindikasikan Itu Usulan HPLC-PDA detektor WS Cukup

metode yang akurat untuk penentuan Diselidiki SIM, BHA, dan SIM Kotoran

(Imp-A, Imp-C dan Imp-E) di tablet farmasi.

Linearitas dan Rentang

Linearitas kalibrasi plot untuk metode uji WS untuk itu diperoleh selama rentang

kalibrasi diuji dari SIM, BHA dan Kotoran. Nilai koefisien korelasi mendekati

satu Apakah (lebih dari 0.999)% Y mencegat target dan standar deviasi residual

relatif ditemukan kurang dari Menjadi 1% dan 2%, masing-masing. Parameter

karakteristik untuk persamaan regresi disajikan pada Tabel 4.

Kurva linearitas Dibangun di jajaran dari 0,05% to1.5% untuk Kedua Kotoran dan

SIM Apakah Pertanian untuk MEMBANGUN para RRF sebagai rasio slop Untuk

Setiap pengotor Untuk Itu dari SIM. The SRR pada 238 nm ditemukan BE 1.00,

1.00 dan 0.99for Imp-A, Imp-C dan Imp-E, masing-masing. Tunjukkan rentang

konsentrasi mengakibatkan cocok untuk menguji linearitas pada tingkat Biasanya

Diamati untuk BHA, SIM dan formulasi farmasi impuritiesin mereka.

Batas deteksi dan kuantitasi

LOD dan LOQ nilai untuk Kotoran simvastatin Apakah 0,02% (0.03? G / mL)

dan 0,05% (0075? G / mL), masing-masing (Tabel 4). Ketepatan pada konsentrasi

LOQ Imp-A, Imp-C dan Imp-E Apakah di bawah 10% (Tabel 4) Diindikasikan

Bahwa Metode cukup sensitif untuk penentuan konsentrasi yang sangat kecil dari

produk Kotoran WS.

robustness

Dalam semua kondisi kromatografi sengaja bervariasi rusak resolusi perantara

BHA dan Imp-A dan SIM puncak dan itu erat puncak yang berdekatan WS Lebih

Besar dari 2,9 dan 1,5, masing-masing, Menggambarkan kekokohan metode.

ConclusionIn

makalah ini adalah Menentukan sensitif, kuat dan terdefinisi dengan baik

stabilitas menunjukkan indikasi HPLC-fotodioda metode array detektor untuk

penentuan BHA dan SIM di hadapan staf itu hydroxy acid (Imp-A), anhydro

(Imp-C) produk degradasi dan Its proses levostatin terkait pengotor (Imp-E)

dalam bentuk tablet bisnis WS dijelaskan. Hasil yang memuaskan untuk itu

Apakah diperoleh dari validasi metode oleh program studi pemantauan pasar

OMCLs andproven. Metode selular WS Dilakukan dengan kolom konvensional

dan tahap Membutuhkan dan hanya tahun dalam sistem rumah kesesuaian untuk

identifikasi pengotor puncak menggunakan sans Kotoran Setiap standar eksternal.

Metode Digambarkan Bisa Diterapkan berhasil untuk pemantauan serta Kotoran

forcontent penentuan SIM dan BHT dalam rilis batch yang rutin dan pengujian

stabilitas tujuan praktis.

Pengungkapan tujuan

Para penulis menyatakan tidak ada konflik Bahwa Mereka Telah Mengenai artikel

ini menarik.

Ucapan Terima Kasih

Penulis Ingin berterima kasih kepada Prof Maliki sadik dari bahasa Inggris

linguistik Departemen Fakultas Sastra dan Ilmu Manusia - Ain Chock, untuk

revisi bahasa Inggris dari naskah. Para penulis mengucapkan terima kasih kepada

LNCM untuk mensponsori pekerjaan ini dan semua analisis aussi ilmuwan di

LNCM Dukungan mereka dari studi ini