RFIT-ASY-0124
RFIT-ASY-0125
FilmArray® Respiratory Panel (RP)
Manual de instrucciones
Para su uso con el sistema de carga basado en el vial de inyección
de FilmArray
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD i
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BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD ii
TABLA DE SÍMBOLOS
Los siguientes símbolos pueden aparecer en los componentes del kit FilmArray Respiratory Panel o en este Manual
de instrucciones. Utilice las definiciones siguientes como una pauta para interpretar los símbolos.
Tabla de símbolos
Fabricante
Número de catálogo
Fecha de caducidad
(AAAA-MM-DD)
Consulte las
Instrucciones de uso
Código de lote
(número de lote)
Límite de temperatura
Conformidad de la
Unión Europea
Número de serie
n
Contiene suficiente para
<n> pruebas
Producto sanitario
para diagnóstico
in vitro
Mantener alejado de
la luz del sol
No reutilizar
Daño ocular grave,
cat. 1
Toxicidad aguda,
cat. 4 & Irritación
cutánea, cat. 2
No usar si el embalaje
está dañado
Representante autorizado en la Comunidad Europea
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD iii
ETIQUETADO ELECTRÓNICO
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El código clave del producto (KEY-CODE) se encuentra en la etiqueta exterior del producto al final de la dirección
URL. El código clave (KEY-CODE) para este manual de instrucciones también se incluye a continuación. Además,
puede ponerse en contacto con el servicio de atención al cliente por teléfono, fax, correo electrónico o correo postal
para solicitar una copia en papel.
Kit de 30 y 6 paquetes de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE IVD
(instrucciones de uso)
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Kit de 30 y 6 paquetes de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE IVD
(guía rápida)
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Kit de 30 y 6 paquetes de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE IVD
(hoja de información de seguridad)
https://www.online-ifu.com/ITI0054
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD iv
TABLA DE CONTENIDO
TABLA DE SÍMBOLOS ..................................................................................................................................................................... II
ETIQUETADO ELECTRÓNICO .......................................................................................................................................................... III
TABLA DE CONTENIDO .................................................................................................................................................................. IV
NOMBRE Y USO PREVISTO ............................................................................................................................................................. 2
FILMARRAY RESPIRATORY PANEL ................................................................................................................................................................... 2
RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA....................................................................................................................................... 3
RESUMEN DE ORGANISMOS DETECTADOS ......................................................................................................................................................... 4
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO .................................................................................................................................................................... 6
MATERIALES PROPORCIONADOS ................................................................................................................................................... 7
MATERIALES NECESARIOS PERO NO PROPORCIONADOS ................................................................................................................ 8
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES .................................................................................................................................................. 8
PRECAUCIONES GENERALES ........................................................................................................................................................................... 8
PRECAUCIONES DE SEGURIDAD ...................................................................................................................................................................... 8
PRECAUCIONES EN EL LABORATORIO ............................................................................................................................................................... 9
PRECAUCIÓN RELATIVA A LA NOTIFICACIÓN A LAS AUTORIDADES DE SALUD PÚBLICA EN LOS ESTADOS UNIDOS ............................................................. 11
ALMACENAMIENTO, MANIPULACIÓN Y ESTABILIDAD DE REACTIVOS ........................................................................................... 11
RECOGIDA Y PREPARACIÓN DEL ESPÉCIMEN ................................................................................................................................ 11
PROCEDIMIENTO ......................................................................................................................................................................... 12
PREPARACIÓN DEL CARTUCHO ..................................................................................................................................................................... 12
HIDRATACIÓN DEL CARTUCHO ...................................................................................................................................................................... 12
PREPARACIÓN DE LA MEZCLA DE MUESTRA ..................................................................................................................................................... 13
CARGA DE LA MEZCLA DE MUESTRA .............................................................................................................................................................. 13
PRUEBA DEL CARTUCHO ............................................................................................................................................................................. 14
CONTROL DE CALIDAD ................................................................................................................................................................. 16
CONTROLES DEL PROCESO ........................................................................................................................................................................... 16
SUPERVISIÓN DEL RENDIMIENTO DEL SISTEMA DE PRUEBA ................................................................................................................................. 17
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD v
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS ....................................................................................................................................... 17
INTERPRETACIÓN DEL ENSAYO ...................................................................................................................................................................... 17
INTERPRETACIÓN DEL ORGANISMO ............................................................................................................................................................... 18
INFORME DE LA PRUEBA FILMARRAY RP ........................................................................................................................................................ 20
CAMPO CONTROL ..................................................................................................................................................................................... 20
RESULT SUMMARY (RESUMEN DE RESULTADOS) ............................................................................................................................................. 23
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO ........................................................................................................................................... 24
VALORES ESPERADOS .................................................................................................................................................................. 26
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO ........................................................................................................................................... 30
RENDIMIENTO CLÍNICO ............................................................................................................................................................................... 30
LÍMITE DE DETECCIÓN ................................................................................................................................................................................ 42
REACTIVIDAD ANALÍTICA (INCLUSIVIDAD) ....................................................................................................................................................... 43
ESPECIFICIDAD ANALÍTICA (REACTIVIDAD CRUZADA Y EXCLUSIVIDAD) ................................................................................................................... 55
CONTAMINACIÓN CRUZADA Y ARRASTRE ........................................................................................................................................................ 59
REPRODUCIBILIDAD ................................................................................................................................................................................... 60
REPETIBILIDAD .......................................................................................................................................................................................... 82
INTERFERENCIAS ....................................................................................................................................................................................... 83
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO DE FILMARRAY RP EN FILMARRAY 2.0 Y FILMARRAY TORCH ................................................ 85
COMPARACIÓN CLÍNICA .............................................................................................................................................................................. 85
REPRODUCIBILIDAD ................................................................................................................................................................................... 87
REFERENCIAS............................................................................................................................................................................... 89
INFORMACIÓN DE GARANTÍA ...................................................................................................................................................... 90
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 2
NOMBRE Y USO PREVISTO
FilmArray Respiratory Panel
El FilmArray Respiratory Panel (RP) es una prueba multiplexada de ácido nucleico prevista para utilizar con los
sistemas FilmArray para la detección e identificación cualitativa y simultánea de múltiples ácidos nucleicos de virus y
bacterias respiratorios en frotis nasofaríngeos (FNS) procedentes de individuos con sospecha de infecciones en el
tracto respiratorio. Mediante el FilmArray RP se han identificado los siguientes tipos y subtipos de organismos:
adenovirus, coronavirus 229E, coronavirus HKU1, coronavirus NL63, coronavirus OC43, metapneumovirus humano,
gripe A, gripe A subtipo H1, gripe A subtipo H3, gripe A subtipo H1-2009, gripe B, virus paragripal 1, virus paragripal 2,
virus paragripal 3, virus paragripal 4, rinovirus/enterovirus humano, virus respiratorio sincitial Bordetella pertussis,
Chlamydophila pneumoniae, y Mycoplasma pneumoniae. La detección e identificación de ácidos nucleicos específicos
de virus y bacterias procedentes de individuos que presenten signos y síntomas de una infección respiratoria ayuda al
diagnóstico de la infección respiratoria cuando se usa junto con otra información clínica y epidemiológica. Los
resultados de esta prueba no se deberán usar como la base exclusiva del diagnóstico, del tratamiento o de otras
decisiones de gestión. Los resultados negativos en el marco de una enfermedad respiratoria pueden deberse a
infección por patógenos no detectados mediante esta prueba o bien, que la infección de las vías respiratorias
inferiores no se detecta en un espécimen de frotis nasofaríngeo. Los resultados positivos no descartan una infección
simultánea por otros organismos: el agente o agentes detectados mediante FilmArray RP pueden no ser la causa
precisa de la enfermedad. Cuando se evalúa a un paciente con una posible infección de las vías respiratorias, pueden
ser necesarias pruebas de laboratorio adicionales (p. ej., cultivos de bacterias y virus, inmunofluorescencia y
radiografías).
Debido al bajo número de especímenes positivos recogidos para algunos organismos durante el estudio
clínico prospectivo, las características de rendimiento para Bordetella pertussis, coronavirus 229E,
coronavirus OC43, gripe A H1, gripe A H3, gripe A H1-2009, gripe B, Mycoplasma pneumoniae, virus paragripal
1, virus paragripal 2, y virus paragripal 4 se determinaron principalmente a partir de especímenes clínicos
retrospectivos. Las características de rendimiento para Chlamydophila pneumoniae se determinaron
principalmente mediante especímenes clínicos artificiales.
Debido a la similitud genética entre el rinovirus humano y el enterovirus humano, el FilmArray RP no puede
diferenciarlos con fiabilidad. Un resultado positivo para rinovirus/enterovirus con FilmArray RP deberá confirmarse con
un procedimiento alternativo (p. ej., cultivo celular o análisis de secuencia).
El ensayo FilmArray RP para el coronavirus OC43 puede tener una reacción cruzada con algunos aislados de
coronavirus HKU1. Un resultado positivo doble puede deberse a reactividad cruzada o puede indicar una infección
simultánea.
Las características de rendimiento para la gripe A se determinaron cuando los virus de gripe A H1-2009, A H1 y
A H3 eran los virus de gripe A predominantes en circulación. El rendimiento de detección de la gripe A puede variar si
hay otras cepas de gripe A en circulación, o aparece un nuevo virus de la gripe A. Si se sospecha infección con un
virus de la gripe A nuevo basándose en criterios clínicos y epidemiológicos actuales de cribado recomendados por las
autoridades de salud pública, los especímenes deberán recogerse con las precauciones correspondientes para el
control de infecciones por nuevos virus virulentos de la gripe y enviarse a las autoridades locales o nacionales para su
análisis. No se debe intentar el cultivo del virus en estos casos si no se dispone de una instalación con nivel de
bioseguridad 3+ (BSL 3+) para recibir y cultivar los especímenes.
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RESUMEN Y EXPLICACIÓN DE LA PRUEBA
Los patógenos respiratorios causan enfermedad aguda local y sistémica de gravedad variable. Los casos más graves
se producen en niños, ancianos e individuos inmunocomprometidos. Los síntomas respiratorios pueden incluir tos,
flujo nasal, congestión, fiebre, respiración con dificultad, dolor de cabeza y mialgia. Debido a la similitud de
enfermedades causadas por muchos virus y bacterias, es difícil realizar un diagnóstico basándose exclusivamente en
los síntomas clínicos. La identificación de los agentes causantes potenciales proporciona datos para ayudar al médico
a determinar el tratamiento adecuado para el paciente y la respuesta de la salud pública para confinar la enfermedad.
El cartucho FilmArray RP está diseñado para la detección e identificación simultánea de los siguientes virus y
bacterias de las vías respiratorias superiores: adenovirus, coronavirus 229E, coronavirus HKU1, coronavirus NL63,
coronavirus OC43, gripe A (con subtipado para los genes de la hemaglutinina H1, H1-2009 y H3), gripe B,
metapneumovirus humano, virus paragripal 1, virus paragripal 2, virus paragripal 3, virus paragripal 4, virus
respiratorio sincitial, rinovirus/enterovirus, Bordetella pertussis, Chlamydophila pneumoniae, y Mycoplasma
pneumoniae. En la Tabla 1 se proporciona un resumen de las características de estos organismos.
Tabla 1. Patógenos respiratorios detectados en el FilmArray Respiratory Panel
Organismo (abreviatura)
Clasificación (Tipo genómico)
Estación de mayor incidenciaa
Población afectada con mayor frecuencia
Adenovirus (AdV) Adenovirus (ADN) Desde finales del invierno hasta principios del verano
[1]
Todas las edades, personas inmunocomprometidas
[1]
Coronavirus (CoV) 229E, HKU1, NL63, OC43
Coronavirus (ARN) Invierno, primavera[2-3]
Niños, adultos[2-3]
Enterovirus (EV) Picornavirus (ARN) Verano, principios del otoño [4]
Todas las edades[5]
Rinovirus humano (RNV) Picornavirus (ARN) Otoño, primavera[6]
Todas las edades[6]
Metaneumovirus humano (MPVh)
Paramixovirus (ARN) Invierno, principios del verano[7]
Niños[7]
Gripe A (Gripe A) (subtipos H1, H1-2009 y H3)
Ortomixovirus (ARN) Invierno [8]
Todas las edades
[8], 5-20% de la
población estadounidense[9]
Gripe B (Gripe B) Ortomixovirus (ARN) Invierno [8]
Todas las edades
[8], 5-20% de la
población estadounidense[9]
Virus paragripal 1 (VP1) Paramixovirus (ARN) Otoño, periodicidad de 1-2 años[10]
Bebés, niños pequeños, personas inmunocomprometidas
[10]
Virus paragripal 2 (VP2) Paramixovirus (ARN) Otoño, periodicidad de 1-2 años[10]
Bebés, niños pequeños, personas inmunocomprometidas
[10]
Virus paragripal 3 (VP3) Paramixovirus (ARN) Primavera, verano[10]
Bebés, niños pequeños, personas inmunocomprometidas
[10]
Virus paragripal 4 (VP4) Paramixovirus (ARN) Desconocido Todas las edades[11]
Virus respiratorio sincitial (VRS)
Paramixovirus (ARN) Invierno, varía con la localización geográfica
[12-13]
Niños, adultos mayores[12-13]
Bordetella pertussis Bacteria (ADN) Sin máximo estacional Todas las edades[14]
Chlamydophila pneumoniae
Bacteria (ADN) Sin máximo estacional Niños mayores, adultos jóvenes, personas inmunocomprometidas
[15]
Mycoplasma pneumoniae
Bacteria (ADN) Brotes más frecuentes en verano, con periodicidad de 4–7 años
Niños mayores, adultos jóvenes
[16-17]
a según las estaciones en Norteamérica
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 4
Resumen de organismos detectados
Adenovirus son un grupo diverso de virus de ADN no encapsulados con siete especies (A a G) clasificadas por su
hemaglutinación y aproximadamente 55 serotipos. Todos los serotipos se han asociado con enfermedades en seres
humanos. Los adenovirus de las especies B, C y E causan enfermedad respiratoria aguda. Los brotes se producen en
instalaciones comunitarias, tales como campamentos militares, instalaciones de atención sanitaria a largo plazo y
hospitales pediátricos de cuidados terciarios, debido a las elevadas tasas de transmisión que se producen en
poblaciones cerradas [18-20]. Los adenovirus (especies A, D, F y G) pueden causar una variedad de enfermedades,
entre las que se incluyen cistitis, gastroenteritis y conjuntivitis [1]. Los adenovirus se propagan durante períodos
prolongados de tiempo y persisten sobre las superficies en estado infectivo [20].
Coronavirus 229E, HKU1, NL63, y OC43. Los coronavirus humanos se caracterizaron como patógenos respiratorios
en la década de los 60 del siglo pasado. Inicialmente se caracterizaron dos variantes serológicas (229E y OC43) y,
recientemente, se han identificado dos coronavirus humanos adicionales (HKU1 y NL63) [2, 21-23]. Estos virus están
asociados con mayor frecuencia a infecciones de las vías respiratorias superiores; sin embargo, también se han
detectado en individuos con infecciones de las vías respiratorias inferiores [2-3, 24]. Los coronavirus se han asociado
con difteria y con la reagudización del asma [2, 22]. La infección por coronavirus se produce con más frecuencia en
invierno y parece que existe una periodicidad epidémica de dos a tres años para las cepas 229E y OC43 [3].
Metapneumovirus humano se descubrió en 2001 como patógeno respiratorio en niños [25]. Estudios adicionales
confirmaron infecciones por MPVh en personas de todas las edades [26]. Los metapneumovirus humanos pertenecen
a la familia Paramyxoviridae [7]. La infección de bebés y niños pequeños está asociada frecuentemente a la
bronquiolitis [7]. Los dos genotipos, A y B, pueden estar en circulación a la vez y no parece que existan diferencias en
lo que respecta a la gravedad de la enfermedad [7].
Gripe A y B son virus de ARN que pertenecen a la familia Orthomyxoviridae. Durante la epidemia anual de gripe, el
5-20% de la población se ve afectada por infecciones de las vías respiratorias superiores con una subida rápida de
fiebre [8]. El tipo dominante de virus de la gripe varía frecuentemente debido a deriva antigénica y desplazamiento
antigénico [27]. Durante la temporada de gripe 2009-10, el virus gripe A H1-2009 fue el virus de la gripe predominante
circulante, siendo responsable de aproximadamente el 99% de las infecciones por gripe notificadas [28] (Tabla 2). El
virus de la gripe A se puede subtipar según los genes de la hemaglutinina (H) y la neuraminidasa (N); los subtipos
H1N1 y H3N2 son las cepas que infectan con mayor frecuencia a los seres humanos. Se han asociado una
enfermedad más grave y una mayor mortalidad con el subtipo H3N2 [27]. En la actualidad se dispone de un mínimo
de cuatro medicaciones antivíricas para el tratamiento de la gripe – amantadina, rimantadina, zanamivir y oseltamivir –
con eficacia específica del tipo y farmacorresistencia que procede de la diseminación de nuevas cepas del virus [27,
29]. Las complicaciones derivadas de la neumonía vírica o bacteriana aumentan la mortalidad debido a infecciones
por gripe [30].
Tabla 2. Proporciones de infecciones por gripe en Estados Unidos clasificadas por subtipo (según informe de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de EE. UU.)
Estación de gripe Gripe A
% de gripe A
Gripe B H1 H1-2009 H3
2009-20101,2
99,6% 0,1 99,8 0,1 0,4%
2008-2009 89,4% 13,2 79,9 6,9 10,6%
2007-2008 71% 26,2 0,0 73,8 29%
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Estación de gripe Gripe A
% de gripe A
Gripe B H1 H1-2009 H3
2006-2007 79,2% 62,3 0,0 37,7 20,8%
2005-2006 79,7% 8,1 0,0 91,9 20,3%
1 Estación para la que se han incluido los datos clínicos prospectivos descritos en este prospecto
2 Resultados acumulados desde el 30 de agosto de 2009 al 22 de mayo de 2010
Virus paragripales. Los virus paragripales son virus de ARN que pertenecen a la familia Paramyxoviridae. En la
década de los 50 del siglo pasado, se descubrió que los virus paragripales eran patógenos respiratorios diferentes de
los virus de la gripe [10]. Los virus paragripales se dividen en cuatro tipos desde el punto de vista antigénico y
genético. El tipo 4 está subtipado adicionalmente en A y B [10]. El virus paragripal 1 causa epidemias bienales durante
el otoño. Aproximadamente el 50% de casos de difteria se atribuyen a este virus [10]. El virus paragripal 2 tiene una
periodicidad epidémica de uno a dos años, que se puede alternar con brotes del virus paragripal 1 [10]. Los niños de
menos de seis meses son especialmente susceptibles a la infección por el virus paragripal 3. Los brotes se producen
en las unidades de cuidados intensivos neonatales, y las epidemias se producen con mayor frecuencia en primavera y
verano [10]. La infección por el virus paragripal 4 afecta a todos los grupos de edades y no se ha establecido una
periodicidad de la infección [11].
Virus respiratorio sincitial es un virus de ARN que pertenece a la familia Paramyxoviridae, relacionado con los
metapneumovirus humanos y con el virus paragripal [12]. El VRS es la causa más frecuente de enfermedades
respiratorias graves en los bebés, siendo la bronquiolitis aguda la causa principal de hospitalización [12]. Se está
investigando una asociación entre el asma y la infección por VRS [12]. El tratamiento o profilaxis con un anticuerpo
monoclonal humanizado dirigido contra la proteína de fusión del VRS ha demostrado una reducción de la enfermedad
en bebés con un riesgo elevado [12].
Rinovirus y Enterovirus son virus relacionados con el ARN pertenecientes a la familia Picornavirus [6]. Existen más
de 100 serotipos de rinovirus humano en función de la serología de la proteína de la cápsida [6]. Se ha indicado que el
rinovirus es la causa del “catarro común”, pero también puede estar implicado en el desencadenamiento de ataques
de asma y complicaciones graves [6]. Los enterovirus se han dividido en cuatro especies que incluyen un total de
89 serotipos. Los serotipos se pueden asociar con diferentes manifestaciones clínicas, incluidas enfermedades
respiratorias no específicas en bebés o adultos [5].
Bordetella pertussis es el agente causante de la tosferina o pertussis, una enfermedad que se puede prevenir
mediante vacuna y de la cual se debe notificar a las organizaciones de salud pública [31-32]. B. pertussis es una
bacteria gram-negativa con una elevada tasa de infectividad que se puede tratar con varios antibióticos [14]. Se ha
demostrado que la inmunidad inducida por la vacuna disminuye tras 5-10 años. La tosferina se produce con mayor
frecuencia en niños, pero también en adolescentes y adultos, y se han documentado brotes en poblaciones bien
vacunadas debido a la desaparición de la inmunidad [14, 33]. La mayor mortalidad debida a tosferina se produce en
bebés y ancianos [14]. La enfermedad tosferínica temprana (catarral) es no específica, y los signos clásicos de la
tosferina (tos paroxismal, inspiración 'sibilante', emesis posterior a la tos, así como apnea o cianosis en bebés) no se
producen hasta pasadas aproximadamente 2 semanas tras la aparición de los síntomas iniciales. Se sabe que los
síntomas de la infección por B. pertussis varían en función de numerosos factores, entre los que se incluyen: edad,
inmunización o infección previas, anticuerpos adquiridos de forma pasiva y tratamiento antibiótico [14]. No se ha
definido un máximo estacional para la infección por B. pertussis.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 6
Chlamydophila pneumoniae es una bacteria intracelular estricta que produce infecciones respiratorias agudas y es
una causa frecuente de neumonía adquirida en la comunidad [34-35]. Los brotes se producen en colegios, barracones
militares y residencias de ancianos [36]. No se ha definido un máximo estacional para las infecciones por C.
pneumoniae.
Mycoplasma pneumoniae es un agente causante de neumonía atípica adquirida en la comunidad, frecuentemente
en situaciones de brotes [17, 37]. El período de incubación para la infección por M. pneumoniae es de
aproximadamente 1 a 4 semanas [16]. M. pneumoniae no tiene definida una sesión de mayor incidencia, pero las
epidemias muestran una periodicidad de 3-7 años [37].
Principios del procedimiento
El cartucho FilmArray RP es un sistema cerrado desechable que aloja todos los productos químicos necesarios para
aislar, amplificar y detectar ácido nucleico procedente de múltiples patógenos respiratorios contenidos en un único
espécimen de FNS. El componente de plástico rígido (accesorio) del cartucho FilmArray RP contiene los reactivos en
forma liofilizada. La parte de plástico flexible del cartucho está dividido en segmentos individuales (burbujas plásticas)
en los que, mediante las interacciones con los actuadores y sensores del instrumento FilmArray, se llevan a cabo los
procesos químicos necesarios. El usuario del FilmArray RP introduce la muestra en el cartucho FilmArray RP, coloca
el cartucho en el instrumento/Module FilmArray e inicia la prueba. El resto de las operaciones son automáticas.
Se indica a continuación un resumen general del procedimiento de la prueba:
1. Extraiga el cartucho FilmArray de su envase sellado al vacío. Puesto que las soluciones se extraen del
cartucho FilmArray RP por vacío, es importante mantener los cartuchos en su envase protector hasta el
momento de uso.
2. Coloque el cartucho FilmArray RP en la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho
FilmArray). La FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray) está diseñada
para evitar errores gracias a la provisión de instrucciones y pistas visuales en forma de flechas codificadas por
colores para garantizar que el cartucho se cargue correctamente.
3. Cargue la Hydration Solution (Solución de hidratación) en el cartucho FilmArray RP. Cuando se introduce la
Hydration Solution (Solución de hidratación) en el cartucho se rehidratan los reactivos liofilizados contenidos
en el accesorio del cartucho.
4. Mezcle el espécimen FNS con el Sample Buffer (Tampón para muestra). El Sample Buffer (Tampón para
muestra) contiene los reactivos que inactivan las ARNasas de la muestra y estimulan la unión de los ácidos
nucleicos a perlas magnéticas para su aislamiento.
5. Cargue la mezcla de muestra/tampón en el cartucho FilmArray RP. Un control de proceso incluido en el
accesorio del cartucho se introduce en la muestra. El control de proceso vigila todos los procesos críticos que
se producen en el cartucho.
6. Transfiera el cartucho al instrumento/Module e inicie el análisis. Para ayudar a introducir correctamente
el cartucho en el instrumento, el programa FilmArray proporciona animaciones en la pantalla que ilustran
los pasos necesarios para iniciar la prueba.
7. Visualice los resultados en el informe de la prueba al finalizar la prueba.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 7
Se indica a continuación un resumen de las operaciones y procesos que tienen lugar durante una prueba FilmArray:
1. Purificación del ácido nucleico: la purificación del ácido nucleico tiene lugar en las tres primeras burbujas
plásticas del cartucho. La muestra se lisa por agitación (homogeneización de perlas) y el ácido nucleico
liberado se captura, lava y eluye mediante tecnología de perlas magnéticas. Estas etapas requieren
aproximadamente diez minutos y el ruido del equipo homogeneizador de perlas se percibe como un chirrido
agudo durante el primer minuto de funcionamiento.
2. Transcripción inversa y 1a etapa de la PCR Multiplex: puesto que muchos de los patógenos identificados
mediante el cartucho FilmArray RP son virus de ARN, se realiza una etapa de Transcripción inversa (RT) para
convertir el ARN vírico en ADNc antes de la amplificación. La solución de ácido nucleico purificada se
combina con una mezcla maestra precalentada para iniciar la etapa de RT y el termociclado posterior para la
PCR múltiple. El efecto de la 1a etapa de la PCR es enriquecer los ácidos nucleicos diana presentes en la
muestra.
3. 2a etapa de la PCR: los productos de la 1
a etapa de la PCR se diluyen y mezclan con reactivos de PCR
nuevos que contienen un colorante de ADN fluorescente de intercalación (LCGreen® Plus, BioFire Diagnostics,
LLC). Esta solución se distribuye en la matriz de la 2a etapa de la PCR. Los pocillos individuales de la matriz
contienen los cebadores de los diferentes ensayos (cada uno por triplicado) dirigidos a las secuencias
específicas de ácido nucleico de cada uno de los patógenos detectados, así como para el control del material
de la plantilla. Estos cebadores están „anidados‟ o internalizados en los productos específicos de la 1a etapa
de la reacción múltiple, que potencia tanto la sensibilidad como la especificidad de las reacciones.
4. Análisis de fusión del ADN: después de la 2a de la PCR, la temperatura aumenta lentamente y se controla la
fluorescencia de cada pocillo, que se analiza para generar una curva de fusión. La temperatura a la que funde
cada producto de la PCR específico (temperatura de fusión o Tm) es consistente y predecible, y el programa
FilmArray evalúa automáticamente los datos de los pocillos replicados de cada ensayo para notificar los
resultados. Para una descripción de la interpretación de los datos y de la notificación, consulte la sección
Interpretación de los resultados de este manual.
El programa FilmArray controla el funcionamiento del instrumento/Module, recoge y analiza los datos y genera
automáticamente un informe de la prueba al final del análisis. El proceso completo tarda aproximadamente una
hora. Se pueden encontrar detalles adicionales sobre cada sistema FilmArray en el Manual del usuario apropiado de
FilmArray.
MATERIALES PROPORCIONADOS
Cada kit contiene reactivo suficiente para ensayar 30 o 6 especímenes:
Cartuchos FilmArray RP envasados individualmente
Frascos de Sample Buffer (Tampón para muestra) de un solo uso (1,0 ml)
Hydration Injection Vials (Viales de inyección de hidratación) (1,5 ml) precargados de un solo uso (azul)
Sample Injection Vials (Viales de inyección de muestra) de un solo uso (rojo)
Transfer Pipettes (Pipetas de transferencia) envasadas individualmente
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MATERIALES NECESARIOS PERO NO PROPORCIONADOS
Sistema FilmArray que incluye:
FilmArray, FilmArray 2.0 o FilmArray Torch y programa
FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray)
ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES
Precauciones generales
1. Exclusivamente para uso de diagnóstico in vitro.
2. La venta de este dispositivo está restringida a un médico o por orden de un médico, o a un laboratorio clínico.
Su uso está restringido a un médico o por orden de un médico.
3. Un profesional sanitario correctamente formado deberá interpretar cuidadosamente los resultados del
FilmArray RP junto con los signos y síntomas del paciente y los resultados de otras pruebas diagnósticas.
4. Los cartuchos FilmArray RP son de uso exclusivo con los sistemas FilmArray.
5. Las características de rendimiento de FilmArray RP solo se han determinado con especímenes de frotis
nasofaríngeos (FNS).
6. Compruebe siempre la fecha de caducidad del cartucho y no la utilice tras pasar su fecha de caducidad.
7. Los cartuchos de FilmArray se conservan al vacío en envases envueltos individualmente. Para mantener la
integridad del vacío del cartucho y su adecuado funcionamiento, asegúrese de que haya un instrumento/Module
FilmArray disponible y en estado operativo antes de desenvolver y cargar cartuchos.
8. La tos ferina es una dolencia infecciosa que, en EE. UU., se debe notificar en todo el país. Si se detecta
Bordetella pertussis notifíquelo a las autoridades sanitarias locales o nacionales.
Precauciones de seguridad
1. Lleve el Equipo de Protección Individual (EPI) adecuado, incluido (pero sin limitarse a) guantes desechables
exentos de polvo y batas de laboratorio. Proteja la piel, los ojos y las membranas mucosas. Cambie de
guantes frecuentemente cuando manipule reactivos o especímenes.
2. Manipule todos los especímenes y materiales residuales como si pudieran transmitir agentes infecciosos. Siga
las directrices de seguridad, como las detalladas en CDC/NIH Biosafety in Microbiological and Biomedical
Laboratories [38], en el documento M29 del CLSI Protection of Laboratory Workers from Occupationally
Acquired Infections [39], o en otras guías apropiadas.
3. Siga los procedimientos de seguridad de su institución para manipular muestras biológicas.
4. Si se sospecha infección con un virus de la gripe A nuevo basándose en criterios clínicos y epidemiológicos
actuales de cribado recomendados por las autoridades de salud pública, los especímenes deberán recogerse
con las precauciones correspondientes para el control de infecciones por nuevos virus virulentos de la gripe y
enviarse a las autoridades sanitarias locales o nacionales para su análisis. No se debe intentar el cultivo del
virus en estos casos si no se dispone de una instalación con nivel de bioseguridad 3+ (BSL 3+) para recibir y
cultivar los especímenes.
5. Elimine los materiales utilizados en este ensayo, incluyendo reactivos, especímenes y viales de tampón
usados según la legislación nacional, regional o local.
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6. El Sample Buffer (Tampón para muestra) ha recibido las siguientes clasificaciones: Toxicidad aguda
(Categoría 4), Lesión ocular grave (Categoría 1), e Irritación cutánea (Categoría 2). De acuerdo con esto, el
Sample Buffer (Tampón para muestra) es peligroso si se ingiere, produce daños oculares graves y causa
irritación cutánea. Deberán seguirse las siguientes precauciones:
Lleve guantes protectores/protección ocular/protección facial.
SI SALPICA EN LOS OJOS: lave los ojos cuidadosamente con agua durante varios minutos. Retire
las lentes de contacto, si se llevan puestas y es fácil hacerlo. Continúe lavando el ojo. Busque
atención médica.
SI SE INGIERE: llame a un CENTRO TOXICOLÓGICO o a un médico si no se siente bien.
Consulte la Ficha de datos de seguridad (SDS) FilmArray Respiratory Panel para obtener más información.
7. El Sample Buffer (Tampón para muestra) formará compuestos y humos peligrosos si se mezcla con lejías u
otros desinfectantes.
ADVERTENCIA: Nunca agregue lejía al Sample Buffer (Tampón para muestra) ni a los residuos de
muestras.
8. La lejía, un desinfectante recomendado, es corrosiva y puede ocasionar una irritación grave o lesiones
oculares o cutáneas. Los vapores o nieblas pueden irritar las vías respiratorias. La lejía es peligrosa si se
ingiere o se inhala. Se recomiendan las siguientes medidas de primeros auxilios.
Contacto ocular: mantenga el ojo abierto y lávelo con agua durante 15-20 minutos. Retire las lentes
de contacto después de 5 minutos y continúe lavando el ojo. Busque atención médica.
Contacto cutáneo: enjuague inmediatamente la piel con agua abundante durante al menos 15 minutos.
Si aparece irritación, busque atención médica.
Ingestión: no induzca el vómito. Beba un vaso de agua. Si aparece irritación, busque atención médica.
Para más información, consulte la Ficha de datos de seguridad (SDS) que sea adecuada.
Precauciones en el laboratorio
1. Evitar la contaminación biológica
Debido a la naturaleza sensible del FilmArray RP, es importante protegerlo de la contaminación de la zona de
trabajo siguiendo esta guía:
Los trabajadores del laboratorio pueden estar infectados por los patógenos respiratorios habituales y
contaminar inadvertidamente la muestra que se está procesando. Para evitarlo, el procesamiento de los
especímenes y la carga de los cartuchos deberá llevarse a cabo en una cabina de bioseguridad. Si no se
utiliza una cabina de bioseguridad durante la preparación de los especímenes, deberá utilizarse una caja
hermética (p. ej., una estación de trabajo AirClean PCR), una máscara antisalpicaduras (p. ej., Bel-Art
Scienceware Splash Shields), o una protección facial completa.
En la preparación de los especímenes y la carga de cartuchos no se deberá utilizar una cabina de
bioseguridad que se haya utilizado para realizar cultivos víricos y bacterianos.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 10
Antes de procesar un espécimen, limpie correctamente tanto la zona de trabajo como la FilmArray Pouch
Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray) con un limpiador adecuado, como por ejemplo
lejía al 10% recientemente preparada o un desinfectante similar. Para evitar la acumulación de residuos y
la posible inhibición de la PCR, pase un trapo con agua sobre la superficie desinfectada.
Algunas vacunas acelulares de Bordetella pertussis (es decir, Pentacel®, Daptacel
®, y Adacel
®) incluyen
ADN que se puede detectar mediante la PCR. La contaminación de los especímenes o los materiales de
ensayo con la vacuna puede ocasionar resultados falsos positivos de B. pertussis. No se deberán recoger
ni procesar especímenes en zonas que hayan estado expuestas a material de vacuna de B. pertussis y se
deberán tomar precauciones especiales durante la recogida y manipulación de especímenes para evitar la
contaminación (http://www.cdc.gov/pertussis/clinical/diagnostic-testing/diagnosis-pcr-bestpractices.html).
Los especímenes y los cartuchos deberán manipularse uno por uno.
Use guantes limpios para retirar los materiales de las bolsas de embalaje a granel y vuelva a sellar las
bolsas de embalaje a granel cuando no se estén usando.
Cambie de guantes y limpie la zona de trabajo cada vez que prepare un espécimen de un paciente
diferente.
Los trabajadores del laboratorio que presenten síntomas respiratorios activos (secreciones nasales, tos)
deberán llevar una mascarilla quirúrgica convencional (o equivalente) y deberán evitar tocar la mascarilla
durante la preparación de los especímenes.
2. Evitar la contaminación por amplicones
Una preocupación frecuente en los ensayos basados en la PCR es la aparición de resultados falsos positivos
producidos por la contaminación del área de trabajo por un amplicón de la PCR. Puesto que el cartucho
FilmArray RP es un sistema cerrado, el riesgo de contaminación por amplicones es bajo, siempre que los
cartuchos permanezcan intactos tras la finalización de la prueba. Siga la siguiente guía para evitar la
contaminación por amplicones:
Deseche los cartuchos usados en un recipiente para materiales con riesgo biológico adecuado
inmediatamente después de completar la prueba.
Evite la manipulación excesiva de los cartuchos tras la prueba.
Evite exponer los cartuchos a bordes afilados, o cualquier objeto que pueda ocasionar una perforación.
ADVERTENCIA: Si se observa líquido en el exterior de un cartucho, tanto el líquido como el
cartucho deben confinarse inmediatamente y desecharse en un recipiente para materiales con
riesgo biológico. El instrumento/Module y la zona de trabajo deben descontaminarse como se
describe en el Manual del usuario de FilmArray.
NO REALICE PRUEBAS ADICIONALES HASTA QUE LA ZONA SE HAYA DESCONTAMINADO.
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Precaución relativa a la notificación a las autoridades de salud pública en los Estados Unidos
La normativa loca, estatal y federal sobre notificación de enfermedades notificables se actualiza continuamente e
incluye numerosos organismos para vigilancia e investigación de brotes [40-41]. Además, los Centros para el
Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) recomiendan que cuando se detecten patógenos de
enfermedades notificables mediante una prueba diagnóstica de cultivo independiente (CIDT), el laboratorio deberá
facilitar la obtención de los materiales clínicos o de aislamiento para remitirla al laboratorio de salud pública
adecuado para ayudar en la detección del brote y en las investigaciones epidemiológicas. Los laboratorios son
responsables de cumplir la normativa de su estado y/o localidad y deberán consultar la lista de laboratorios de
salud pública locales y/o estatales para obtener directrices sobre el envío de aislados y/u de muestras clínicas.
ALMACENAMIENTO, MANIPULACIÓN Y ESTABILIDAD DE REACTIVOS
1. Guarde el kit de prueba, incluidos los tampones y los cartuchos de reactivos, a temperatura ambiente
(15–25 ºC). NO REFRIGERAR.
2. Evite el almacenamiento de los materiales cerca de salidas de calefacción o refrigeración, o de la luz solar
directa.
3. Compruebe siempre la fecha de caducidad y no utilice los reactivos una vez pasada la fecha de caducidad
impresa en el cartucho o kit.
4. Todos los componentes del kit se deben almacenar y usar juntos. No use componentes de un kit con los de
otro kit.
5. No extraiga los cartuchos de su envase hasta que la muestra esté lista para la prueba. Una vez que se ha
abierto el envase del cartucho, este deberá cargarse lo antes posible (en un plazo de aproximadamente
30 minutos).
6. Una vez que se ha cargado el cartucho, la prueba deberá comenzar lo antes posible (en un plazo de 60 minutos).
RECOGIDA Y PREPARACIÓN DEL ESPÉCIMEN
Esta sección describe los requisitos de recogida, preparación y manipulación del espécimen que ayudarán a
garantizar resultados precisos de la prueba.
Recogida de frotis nasofaríngeos: los especímenes de FNS se deberán recoger según la técnica
normalizada y colocarse inmediatamente en un medio de transporte para virus (VTM).
Volumen mínimo de muestra: para el análisis se requieren – 0.3 ml (300 μl) de muestra.
Transporte y almacenamiento: los especímenes introducidos en el VTM deberán procesarse y ensayarse lo
antes posible. Si se requiere almacenamiento, los especímenes introducidos en el VTM se pueden mantener a
temperatura ambiente (18–30 ºC) durante hasta 4 horas, a temperatura de nevera (2-8 °C) durante hasta
3 días, o a temperatura de congelador (<-15 °C) durante hasta 30 días.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 12
PROCEDIMIENTO
Consulte la Guía rápida de utilización del FilmArray Respiratory Panel, el vídeo de formación para el FilmArray
o el Manual del usuario de FilmArray adecuado para ver representaciones más detalladas y pictóricas de estas
instrucciones.
Cuando se manipulan los cartuchos y los especímenes se deben utilizar guantes y demás Equipos de Protección
Individual (EPI). Solo debe introducirse un cartucho FilmArray RP a la vez. Una vez introducido el cartucho,
deberá transferirse rápidamente al instrumento/Module para iniciar la prueba. Una vez finalizada la prueba,
el cartucho deberá desecharse en un recipiente para materiales con riesgo biológico.
Preparación del cartucho
1. Limpie cuidadosamente la zona de trabajo y la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del
cartucho FilmArray) con lejía al 10% recientemente preparada (o un desinfectante adecuado), seguido por un
aclarado con agua.
2. Extraiga el cartucho FilmArray RP de su envase herméticamente cerrado rasgando o cortando el envase
exterior ranurado y abriendo el recipiente de aluminio protector.
3. Coloque el cartucho FilmArray en la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho
FilmArray). Para hacerlo, sujete el cartucho de forma que la etiqueta del código de barras esté hacia arriba y
se pueda leer y a continuación deslice la parte de la película flexible del cartucho dentro de la estación de
carga. En la configuración correcta, los puertos de entrada de ambos extremos de la pieza de plástico rígido
del cartucho estarán orientados hacia arriba y las etiquetas de color rojo y azul del cartucho estarán alineadas
con las flechas de color rojo y azul situadas en la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del
cartucho FilmArray).
4. Coloque un Hydration Injection Vial (Vial de inyección de hidratación) con un tapón de color azul en el pocillo
azul de la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray).
5. Coloque un Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) con un tapón de color rojo en el pocillo rojo
de la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray).
Hidratación del cartucho
1. Gire y suba el Hydration Injection Vial (Vial de inyección de hidratación) dejando el tapón azul en el pocillo de
la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho).
2. Introduzca la punta de la cánula en el puerto del cartucho situado directamente bajo la flecha azul de la
FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray). Muévala hacia delante
enérgicamente con un movimiento firme y rápido hasta escuchar un “pop” y sienta una disminución en la
resistencia. El volumen correcto de líquido se extraerá del cartucho mediante vacío.
NOTA: Si el sello del envase al vacío del envoltorio del cartucho está dañado, todavía se
puede utilizar el cartucho. Intente hidratar el cartucho siguiendo los pasos a continuación.
Si la hidratación es satisfactoria, continúe la prueba. Si la hidratación falla, deseche el
cartucho y utilice un cartucho nuevo para analizar la muestra.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 13
3. Compruebe que el cartucho ha quedado hidratado.
4. Baje la etiqueta del código de barras y compruebe que el fluido ha entrado en los pocillos de reactivo (situados
en la base de la pieza rígida de plástico del cartucho). Pueden verse burbujas pequeñas de aire. Si el cartucho
no queda hidratado (los reactivos secos tienen el aspecto de aglomerados de color blanco), repita el paso 2
para comprobar que el sello del puerto está roto o coja un cartucho nuevo y repita los pasos a partir del paso 2
de la sección Preparación del cartucho.
Preparación de la mezcla de muestra
1. Sujete el frasco del Sample Buffer (Tampón para muestra) de manera que la punta mire hacia arriba.
2. Pellizque suavemente la pestaña plastificada situada en el lateral del frasco hasta que se rompa el precinto.
3. Invierta el frasco sobre el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) con un tapón de color rojo y
recoloque el pulgar y el índice para sujetar la parte inferior del frasco. Dispense el Sample Buffer (Tampón
para muestra) apretando lentamente pero con fuerza y, a continuación, vuelva a apretar. Apretar el frasco más
veces generará demasiadas burbujas. Esto es algo a evitar.
4. Mediante la Transfer Pipette (Pipeta de transferencia) proporcionada en el kit de ensayo, extraiga muestra
(FNS en VTM) hasta la tercera línea (aproximadamente 0,3 ml). Añada la muestra al Sample Injection Vial
(Vial de inyección de muestra) de color rojo. Cierre bien la tapa del Sample Injection Vial (Vial de inyección de
muestra).
5. Retire el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) de la FilmArray Pouch Loading Station (Estación
de carga del cartucho FilmArray) e invierta suavemente el vial al menos tres veces para mezclar.
6. Vuelva a poner el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) en la FilmArray Pouch Loading Station
(Estación de carga del cartucho FilmArray).
Carga de la mezcla de muestra
1. Gire lentamente el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) para aflojarlo de su tapón de color rojo
y espere 3-5 segundos. Suba el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra), dejando el tapón de
color rojo en el pocillo de la FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray).
2. Introduzca la punta de la cánula en el puerto del cartucho situado directamente bajo la flecha roja de la
FilmArray Pouch Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray). Muévala hacia delante
enérgicamente con un movimiento firme y rápido hasta que escuche un “pop” y sienta una disminución en la
resistencia. El volumen correcto de líquido se extraerá del cartucho mediante vacío.
3. Compruebe que la muestra se ha cargado. Deslice hacia abajo la etiqueta con el código de barras para ver si
el líquido ha entrado en el pocillo de reactivos situado junto al puerto de carga de la muestra. Si el cartucho no
puede extraer muestra del Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra), el cartucho deberá
desecharse. Coja un cartucho nuevo y repita los pasos a partir del Paso 2 de la sección Preparación del
cartucho.
NOTA: Tenga mucho cuidado y evite tocar la punta durante la manipulación, ya que
puede introducir contaminación.
NOTA: NO utilice la Transfer Pipette (Pipeta de transferencia) para mezclar la muestra tras
introducirla en el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra).
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4. Deseche el Sample Injection Vial (Vial de inyección de muestra) y el Hydration Injection Vial (Vial de inyección
de hidratación) en un recipiente adecuado para materiales con riesgo biológico.
5. Registre la Sample ID (ID de la muestra) en la zona prevista para ello en la etiqueta del cartucho (o pegue una
Sample ID [ID de la muestra] provista de código de barras) y extraiga el cartucho de la FilmArray Pouch
Loading Station (Estación de carga del cartucho FilmArray).
Prueba del cartucho
El programa FilmArray incluye instrucciones paso a paso en pantalla que guiarán al operador para realizar una
prueba. A continuación se ofrecen breves instrucciones para los sistemas FilmArray, FilmArray 2.0 y FilmArray
Torch. Consulte el Manual del usuario de FilmArray adecuado para conocer instrucciones más detalladas.
FilmArray y FilmArray 2.0
1. Compruebe si el sistema FilmArray está encendido y el programa se ha iniciado.
2. Abra la tapa de un instrumento disponible (si aún no está abierta).
3. Introduzca el cartucho en el instrumento.
Coloque el cartucho de forma que la matriz esté a la derecha con la película dirigida hacia abajo en el
instrumento FilmArray. Las etiquetas roja y azul del cartucho deberán estar alineadas con las flechas roja y
azul del instrumento FilmArray. El cartucho hará clic al introducirse en su sitio Si se ha introducido
correctamente, el código de barras será visible y la etiqueta de la parte superior del cartucho se podrá leer. El
instrumento y el programa deberán detectar el cartucho introducido correctamente antes de continuar con el
próximo paso.
4. Escanee el código de barras del cartucho FilmArray mediante el lector de código de barras.
La identificación del cartucho (Lot Number [Número de lote] y Serial Number [Número de serie]), el Pouch
Type (Tipo de cartucho) y el Protocol (Protocolo) están preprogramados en el código de barras rectangular
situado en el cartucho FilmArray. La información se introducirá automáticamente al escanear el código de
barras. Si no es posible escanear el código de barras, el Lot Number (Número de lote), el Serial Number
(Número de serie) el Pouch Type (Tipo de cartucho) y el Protocol (Protocolo) del cartucho se pueden
introducir manualmente en los campos correspondientes a partir de la información proporcionada en la
etiqueta del cartucho. Para reducir los errores de introducción de datos, se recomienda que la información del
cartucho se introduzca escaneando el código de barras.
5. Introduzca la Sample ID (ID de la muestra). La Sample ID (ID de la muestra) se puede introducir manualmente,
o bien escanearse mediante el lector de código de barras si se utiliza una Sample ID (ID de la muestra)
incluida en un código de barras.
NOTA: Si el cartucho no se desliza con facilidad al interior del instrumento, deslice
suavemente la tapa del instrumento hacia atrás para garantizar que está completamente
abierta.
NOTA: El código de barras no se puede escanear antes de colocar el cartucho en el
instrumento.
NOTA: Una luz de color verde constante en la parte delantera del instrumento indica que
está disponible.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 15
6. Si es necesario, seleccione y/o confirme un protocolo en la lista desplegable Protocol (Protocolo).
7. Introduzca un nombre de usuario y una contraseña en los campos Name (Nombre) y Password (Contraseña).
8. Cierre la tapa del instrumento FilmArray.
9. Haga clic en el botón Start Run (Iniciar prueba) en la pantalla.
Tras iniciarse la prueba, la pantalla muestra una lista de las etapas que el instrumento está llevando a cabo y
el número de minutos que faltan para finalizar la prueba.
10. Tras finalizar la prueba, siga las instrucciones de la pantalla para abrir el instrumento y extraer el cartucho.
11. Deseche inmediatamente el cartucho en un recipiente para materiales con riesgo biológico.
12. Los resultados se muestran automáticamente en la sección de informe de la pantalla.
Seleccione Print (Imprimir) para imprimir el informe, o bien Save (Guardar) para guardar el informe en
un archivo.
FilmArray Torch
1. Asegúrese de que el sistema FilmArray Torch esté encendido.
2. Seleccione un Module disponible en la pantalla táctil.
3. Escanee el código de barras del cartucho de FilmArray mediante el lector de código de barras.
La identificación del cartucho (Lot Number [Número de lote] y Serial Number [Número de serie]), el Pouch
Type (Tipo de cartucho) y el Protocol (Protocolo) están preprogramados en el código de barras rectangular
situado en el cartucho de FilmArray. La información se introducirá automáticamente al escanear el código
de barras. Si no es posible escanear el código de barras, el Lot Number (Número de lote), el Serial Number
(Número de serie) el Pouch Type (Tipo de cartucho) y el Protocol (Protocolo) del cartucho se pueden
introducir manualmente en los campos correspondientes a partir de la información proporcionada en la
etiqueta del cartucho. Para reducir los errores de introducción de datos, se recomienda que la información
del cartucho se introduzca escaneando el código de barras.
4. Introduzca la Sample ID (ID de la muestra). La Sample ID (ID de la muestra) se puede introducir manualmente,
o bien escanearse mediante el lector de código de barras si se utiliza una Sample ID (ID de la muestra)
con código de barras.
5. Introduzca el cartucho en el Module.
Asegúrese de que la etiqueta del accesorio del cartucho quede plana sobre la parte superior del cartucho,
no doblada. Al insertar el cartucho, el Module lo introducirá dentro de la cámara.
6. Si es necesario, seleccione y/o confirme un protocolo en la lista desplegable Protocol (Protocolo).
7. Introduzca un nombre de usuario y una contraseña de operador y, a continuación, seleccione Next (Siguiente).
NOTA: El ruido del equipo homogeneizador de esferas se percibe como un ruido
(chirrido) agudo durante el primer minuto de funcionamiento.
NOTA: El color de fuente del nombre de usuario y la contraseña es rojo hasta que
el nombre de usuario sea reconocido por el programa.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 16
8. Revise la información introducida sobre la prueba en la pantalla. Si es correcta, seleccione Start Run
(Iniciar prueba).
Tras iniciarse la prueba, la pantalla muestra una lista de los pasos que el instrumento está llevando a cabo
y el número de minutos que faltan para finalizar la prueba.
9. Al final de la prueba, el estado del Module cambia a Finished (Finalizado) y se expulsará parcialmente
el cartucho.
10. Seleccione el Module con estado Finished (Finalizado) en la Dashboard (Consola del instrumento) para
ver el informe.
Seleccione Print (Imprimir) para imprimir el informe, o bien Save (Guardar) para guardar el informe en un
archivo.
11. Saque el cartucho del Module y tírelo inmediatamente a un recipiente para materiales con riesgo biológico.
CONTROL DE CALIDAD
Controles del proceso
Se han incluido dos controles del proceso en cada cartucho:
1. RNA Process Control (Control de proceso de ARN)
El ensayo RNA Process Control (Control de proceso de ARN) se dirige a un transcripto de ARN procedente de
la levadura Schizosaccharomyces pombe. La levadura se encuentra en el cartucho en forma liofilizada y se
rehidrata cuando se carga la muestra. El material de control experimenta todas las etapas del proceso de la
prueba, incluyendo la lisis, la purificación del ácido nucleico, la transcripción inversa, la 1a etapa de la PCR, la
2a etapa de la PCR y la fusión del ADN. Un resultado de control positivo indica que todas las etapas
realizadas en el cartucho FilmArray RP fueron correctas.
2. PCR2 Control (Control PCR2)
El ensayo PCR2 Control (Control PCR2) detecta un ADN diana que está liofilizado en los pocillos de la matriz
junto con sus correspondientes cebadores. Un resultado positivo indica que la 2a etapa de la PCR fue correcta.
Ambos ensayos de control deben ser positivos para que la prueba se considere como aprobada. Si uno de los
controles no es correcto, el campo Controls (Controles) del informe de la prueba (esquina superior derecha) mostrará
el mensaje Failed (Fallido) y los resultados se mostrarán como Inválido. Si hay un fallo en los controles, la muestra se
debe analizar de nuevo en un cartucho nuevo.
NOTA: El ruido del equipo homogeneizador de esferas se percibe como un ruido
(chirrido) agudo durante el primer minuto de funcionamiento.
NOTA: Una vez extraído el cartucho, el informe se puede ver solamente mediante
la función Browse Runs (Explorar pruebas).
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Supervisión del rendimiento del sistema de prueba
Es posible calcular la tendencia de los valores Tm procedentes de los ensayos de RNA Process Control (Control de
proceso de ARN) y del PCR2 Control (Control PCR2) y mantener registros como es habitual en la práctica
normalizada del control de calidad en laboratorios [42-43]. El programa FilmArray determinará automáticamente un
fallo de prueba si la Tm del RNA Process Control (Control de proceso de ARN) y del PCR2 Control [Control PCR2]
está fuera del intervalo de valores aceptable (80,6-84,6 para el RNA Process Control (Control de proceso de ARN) y
74,5-78,5 para el PCR2 Control [Control PCR2]). Deberá investigarse cualquier variación en la tendencia. Póngase en
contacto con el soporte técnico para obtener ayuda con los valores que estén fuera de intervalo.
Las buenas prácticas de laboratorio recomiendan realizar con regularidad controles externos tanto positivos como
negativos. Utilice medio de transporte para virus como control negativo externo y muestras positivas anteriormente
caracterizadas o muestras negativas enriquecidas con organismos bien caracterizadas como controles externos
positivos. Los controles externos deben usarse de acuerdo con los organismos acreditadores adecuados, según sea
aplicable.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
El programa FilmArray analiza e interpreta automáticamente los resultados del ensayo y muestra los resultados finales
en un informe de la prueba (consulte la Guía rápida de utilización del FilmArray Respiratory Panel para ver un ejemplo
de un informe de la prueba). Se describen a continuación los análisis realizados mediante el programa FilmArray y los
detalles del informe de la prueba.
Interpretación del ensayo
Cuando haya finalizado la 2a etapa de la PCR, el instrumento/Module FilmArray lleva a cabo un análisis de alta
resolución de fusión del ADN sobre los productos de la PCR y mide la señal de fluorescencia generada en cada
pocillo (para obtener más información, consulte el Manual del usuario apropiado de FilmArray. El programa FilmArray
realiza a continuación varios análisis y asigna un resultado final al ensayo.
Análisis de las curvas de fusión. El programa FilmArray evalúa la curva de fusión del ADN para cada pocillo de la
matriz de la 2a etapa de la PCR para determinar si aparece en dicho pocillo un producto de la PCR. Si el perfil de
fusión indica la presencia de un producto de la PCR, entonces el programa de análisis calcula la temperatura de
fusión (Tm) de la curva. El valor de la Tm se compara a continuación de nuevo con el intervalo de RM esperado para
el ensayo. Si el programa determina que la fusión es positiva y que el pico de fusión está comprendido en el intervalo
de Tm específico del ensayo, la curva se considera positiva. Si el programa determina que la fusión es negativa o no
está en el intervalo de Tm adecuado, la curva se considera negativa.
Análisis de réplicas. Una vez identificadas las curvas de fusión, el programa evalúa las tres réplicas de cada ensayo
para determinar el resultado del ensayo. Para que un ensayo se considere positivo, al menos dos de las tres curvas
de fusión asociadas al ensayo deben considerarse positivas y la Tm de al menos dos de las tres curvas positivas debe
ser similar (en 1°C). Los ensayos que no cumplen estos criterios se consideran negativos.
NOTA: Las tendencias de los dos ensayos de control (RNA Process Control [Control de proceso de
ARN] y PCR2 Control [Control PCR2]) se deberán rastrear en gráficas de control independientes, ya
que los valores de Tm esperados para ambos controles son diferentes.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 18
Interpretación del organismo
Para la mayoría de organismos detectados por el FilmArray RP, el organismo se considera Detected (Detectado) si un
único ensayo correspondiente es positivo. Por ejemplo, el metapneumovirus humano tendrá como resultado del
informe de la prueba Human Metapneumovirus Detected (Metapneumovirus humano detectado) si al menos dos de
las tres réplicas de uno de los ensayos de metapneumovirus humano tiene picos de fusión positivos similares con
valores de la Tm comprendidos dentro del intervalo de Tm específicos del ensayo. Los resultados de la prueba para
adenovirus, el grupo de rinovirus/enterovirus humano y gripe A dependen de la interpretación de los resultados de
varios ensayos. Se indican a continuación la interpretación y las pruebas de seguimiento para estos tres resultados:
Grupo de rinovirus/enterovirus
El cartucho FilmArray RP contiene seis ensayos diferentes (HRV1, HRV2, HRV3, HRV4, Entero 1, Entero 2)
para la detección de rinovirus/enterovirus. Aunque estos virus son muy diferentes, están estrechamente
relacionados entre sí. Por tanto, los seis ensayos no son realmente capaces de diferenciar entre rinovirus y
enterovirus. El programa FilmArray interpreta cada uno de los seis ensayos independientemente (como se ha
descrito anteriormente) y los resultados se combinan en un resultado de la prueba final para el virus o los
virus. Si alguno de los seis ensayos es positivo, el resultado del informe de la prueba será Human
Rhinovirus/Enterovirus Detected (Rinovirus/enterovirus humano detectado). Si los seis ensayos son negativos,
el resultado del informe de la prueba será Human Rhinovirus/Enterovirus Not Detected (Rinovirus/enterovirus
humano no detectado). Un resultado positivo para rinovirus/enterovirus humano con FilmArray RP deberá
confirmarse con un procedimiento alternativo (p. ej. cultivo del virus o análisis de secuencia).
NOTA: A pesar de sus nombres, los ensayos HRV (1-4) y Entero (1-2) no son específicos para la detección
del rinovirus o enterovirus humano, específicamente. No se pueden utilizar los resultados individuales del
ensayo para diferenciar entre estos dos virus.
Adenovirus
El cartucho FilmArray RP contiene dos ensayos diferentes (Adeno, Adeno2) para la detección de adenovirus.
El programa FilmArray interpreta cada uno de estos ensayos independientemente (como se ha descrito
anteriormente) y los resultados se combinan en un resultado de la prueba final para el virus. Si cualquiera o
ambos ensayos son positivos, el resultado del informe de la prueba será Adenovirus Detected (Adenovirus
detectado). Si ambos ensayos Adeno y Adeno2 son negativos, el resultado del informe de la prueba será
Adenovirus Not Detected (Adenovirus no detectado).
Gripe A
Los ensayos del FilmArray RP están diseñados tanto para detectar la gripe A como para diferenciar entre los
subtipos de hemaglutinina que aparecen frecuentemente. Para llevarlo a cabo, el FilmArray RP usa dos
ensayos para la gripe A, (FluA-pan-1 y FluA-pan-2) y tres ensayos de subtipado dirigidos al gen de
la hemaglutinina (FluA-H1-pan, FluA-H1-2009 y FluA-H3). El ensayo FluA-H1-pan está diseñado para detectar
tanto la gripe A H1 como la variante de la gripe A H1-2009. Cada uno de los ensayos individuales se
interpreta de forma independiente (como se ha descrito anteriormente) y el resultado de la prueba notificado
para la gripe A está basado en los resultados combinados de los cinco ensayos, como se detalla en la Tabla 3.
En general, la gripe A se considera Detected (Detectado) si al menos uno de los dos ensayos FluA-pan es
positivo y un ensayo de subtipado también es positivo. Si ninguno de los ensayos FluA-pan es positivo, pero
uno de los ensayos de subtipado es positivo, entonces el resultado se considera Equivocal (Dudoso) para ese
subtipo específico y la muestra se debe volver a analizar. Si uno de los ensayos FluA-pan es positivo y
ninguno de los ensayos de subtipado es positivo, el resultado es Equivocal (Dudoso) para la gripe A, y el
espécimen se debe volver a analizar. Todos los resultados Equivocal (Dudoso) se deben volver a analizar.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 19
Tabla 3. Posibles resultados del ensayo para la gripe A y su correspondiente interpretación
Ensayo
Resultado final
Ensayos
FluA-pan
(n=2)
FluA-H1-
pan
FluA-H1-
2009 FluA-H3
Se requiere
seguimiento
Influenza A Not Detected
(Gripe A no detectado) Negativo Negativo Negativo Negativo
Ninguno Influenza A H1 (Gripe A H1) ≥1 positivo Positivo Negativo Negativo
Influenza A H3 (Gripe A H3) ≥1 positivo Negativo Negativo Positivo
Influenza A H1-2009
(Gripe A H1-2009) ≥1 positivo
Cualquier
resultado Positivo Negativo
Influenza A H1 and
Influenza A H3
(Gripe A H1 y Gripe A H3)
≥1 positivo Positivo Negativo Positivo
Las
infecciones
múltiples son
posibles,
pero rarasa,
repita la
prueba para
confirmar el
resultado b
Influenza A H1-2009 and
Influenza A H3
(Gripe A H1-2009 y Gripe A H3)
≥1 positivo Cualquier
resultado Positivo Positivo
Influenza A (no subtype detected)
(Gripe A [ningún subtipo
detectado])
2 positivos Negativo Negativo Negativo Véase más
adelante
Influenza A Equivocal
(Gripe A dudoso) 1 positivo Negativo Negativo Negativo
Repita la
prueba
Influenza A H1 Equivocal
(Gripe A H1 dudoso) Negativo Positivo Negativo Negativo
Influenza A H3 Equivocal
(Gripe A H3 dudoso) Negativo Negativo Negativo Positivo
Influenza A H1-2009 Equivocal
(Gripe A H1-2009 dudoso) Negativo
Cualquier
resultado Positivo Negativo
a El sistema FilmArray RP puede detectar simultáneamente varios virus de la gripe contenidos en la vacuna de la gripe
nasal FluMist® (consulte la sección “Interferencias” más adelante).
b Múltiples positivos repetidos deberán confirmarse adicionalmente mediante otras pruebas de subtipado para la gripe
autorizadas por el organismo federal estadounidense responsable de fármacos y alimentos (FDA).
Gripe A (ningún subtipo detectado)
Si ambos ensayos FluA-pan son positivos, pero ninguno de los ensayos de subtipado de la hemaglutinina es
positivo, entonces la interpretación es Influenza A (no subtype detected) (Gripe A [ningún subtipo detectado]).
Este resultado puede suceder si el título de virus en el espécimen es bajo y no se detecta en el ensayo de
subtipado. Este resultado también podría indicar la presencia de una nueva cepa de la gripe A. En ambos
casos, se debe volver a repetir la prueba de la muestra en cuestión. Si la segunda prueba proporciona un
resultado diferente, vuelva a realizar una prueba más para garantizar el resultado. Si la prueba adicional
proporciona el mismo resultado, entonces debe verificarse el funcionamiento de los cartuchos RP realizando
un análisis con los materiales de control externo adecuados (muestras positivas conocidas de la gripe A H1,
gripe A H3 y gripe A H1-2009), así como una prueba de un control negativo para determinar la contaminación
del producto de la PCR. Si el FilmArray RP identifica con precisión los controles externos y negativos,
póngase en contacto con las autoridades sanitarias correspondientes para realizar una prueba de
confirmación.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 20
Informe de la prueba FilmArray RP
El informe de la prueba FilmArray RP se muestra automáticamente al finalizar una prueba, e incluye tres secciones, el
Run Summary (Resumen de la prueba), el Results Summary (Resumen de resultados) y los Run Details (Detalles de
la prueba) (consulte la Guía rápida de utilización del FilmArray Respiratory Panel para ver un ejemplo del informe de
la prueba). El informe de la prueba se puede guardar en un archivo o bien imprimirse.
La sección Run Summary (Resumen de la prueba) del informe de la prueba proporciona la Sample ID (ID de la
muestra), la hora y fecha de la prueba, los resultados de los controles y un resumen general de los resultados de la
prueba. Todas las dianas con resultados Detected (Detectado) o Equivocal (Dudoso) se relacionarán en el
correspondiente campo del resumen. Si todas las pruebas fueron negativas, entonces se mostrará None (Ninguno) en
el campo Detected (Detectado). Los controles se relacionan como Passed (Aprobado), Failed (Fallido) o Invalid
(Inválido). Consulte la sección Campo Control que se encuentra más adelante para ver más información acerca de la
interpretación de los controles y del seguimiento adecuado si se produce un fallo de control.
La sección Results Summary (Resumen de resultados) del informe de la prueba relaciona los resultados de cada
diana ensayada en el panel. Los resultados posibles son Detected (Detectado), Not Detected (No detectado),
Equivocal (Dudoso) o Invalid (Inválido). Consulte la sección Results Summary (Resumen de resultados) que se
encuentra más adelante para ver más información acerca de la interpretación de los resultados de la prueba, del
seguimiento adecuado si se producen resultados Invalid (Inválido) o Equivocal (Dudoso). Los resultados ensayo-por-
ensayo para cada diana están disponibles en una 2a página opcional del informe. Para acceder a la 2
a página del
informe, seleccione el botón Details (Detalles) situado en la parte inferior de la pantalla de informes, o bien pulse en
Print All (Imprimir Todo) para obtener un informe impreso. La 2a página del informe proporciona los resultados de cada
ensayo, sin tener en cuenta los resultados de los controles del cartucho.
La sección Run Details (Detalles de la prueba) proporciona información adicional sobre la prueba, que incluye:
información del cartucho (Tipo, Número de lote y Número de serie), Run status (Estado de la prueba) (Completed
[Completado], Incomplete [Incompleto], Aborted [Detenida], Instrument Error [Error del instrumento], Instrument
Communication Error [Error de comunicación del instrumento], o Software Error [Error de programa]), los protocolos
utilizados para realizar la prueba, la identidad del operador que ha realizado la prueba y el instrumento usado para
llevarla a cabo.
Tras finalizar la prueba, es posible editar la Sample ID (ID de la muestra). Si esta información ha cambiado, se
agregará al informe de la prueba una sección adicional denominada Change History (Historial de cambios). Esta
sección de Change History (Historial de cambios) relaciona el campo que ha variado, la entrada original, la entrada
revisada, el operador que ha realizado el cambio y la fecha en la que fue realizado. La Sample ID (ID de la muestra)
es el único campo del informe que se puede cambiar.
Campo Control
El campo Control del informe de la prueba se mostrará como Passed (Aprobado), Failed (Fallido) o Invalid (Inválido).
El campo Control mostrará Passed (Aprobado) solamente si la prueba se ha completado correctamente (sin errores
del instrumento ni del programa) y los ensayos de control del cartucho (RNA Process Control [Control del proceso de
ARN] y PCR2 Control [Control PCR2]) se realizaron correctamente. El campo Control mostrará Failed (Fallido) si la
prueba se ha completado correctamente (sin errores del instrumento ni del programa), pero uno o ambos de los
ensayos de control del cartucho fueron fallidos (0 o 1 réplicas de positivo para cada uno de los controles, cada uno de
los cuales se analiza por triplicado). Si el resultado del control es Failed (Fallido), entonces el resultado de todas las
pruebas del panel se muestran como Invalid (Inválido) y el espécimen debe volver a analizarse en un nuevo cartucho.
La Tabla 4 proporciona un resumen y una explicación de los posibles resultados del control y las acciones de
seguimiento.
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FilmArray vigila cada prueba para garantizar que el instrumento funciona dentro de las especificaciones y para
detectar errores de hardware y del programa que puedan comprometer la precisión del informe de la prueba.
Si el instrumento detecta un estado fuera de las especificaciones, o un error significativo, detendrá automáticamente
la prueba. Si esto sucede, o si el usuario detiene la prueba, entonces el campo Control del informe mostrará Invalid
(Inválido) y todos los resultados de las pruebas en el Result Summary (Resumen de resultado) también se mostrarán
como Invalid (Inválido). Para determinar la razón por la que una prueba no ha conseguido completarse, anote los
códigos específicos de error que se muestren en la pantalla y consulte los Run Status (Estado de la prueba) en la
sección Run Details (Detalles de la prueba) del informe. El Run Status (Estado de la prueba) mostrará Incomplete
(Incompleto), Aborted (Detenida), Software Error (Error de programa), Instrument Error (Error del instrumento), o
Instrument Communication Error (Error de comunicación del instrumento). Consulte el Manual del usuario FilmArray o
póngase en contacto con el Soporte técnico para recibir ayuda. El espécimen deberá volverse a analizar tras corregir
el error o usando un instrumento/Module FilmArray alternativo.
Tabla 4. Interpretación del Campo Control en el informe de la prueba de FilmArray RP
Resultado del control Explicación Acción requerida Resultado
Passed (Aprobado)
La prueba se ha completado correctamente
Y
Ambos controles del cartucho fueron correctos
Ninguno Notifique los resultados proporcionados en el informe de la prueba
Failed (Fallido) La prueba se ha completado correctamente
PERO
Al menos uno de los controles del cartucho ha fallado.
Repita la prueba con un cartucho nuevo.
Acepte los resultados de la prueba repetida. Si el error persiste, póngase en contacto con el Soporte técnico para recibir ayuda.
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Resultado del control Explicación Acción requerida Resultado
Invalid (Inválido)
Los controles son inválidos debido a que la prueba ha fallado.
(Habitualmente, se trata de un error de hardware o del programa)
Anote los códigos de error mostrados durante la prueba en el campo Run Status (Estado de la prueba) en la sección Run Details (Detalles de la prueba) del informe Consulte el Manual del usuario de FilmArray adecuado o póngase en contacto con el Soporte técnico para recibir ayuda.
Tras solucionar el error, repita la prueba, o bien repita la prueba con otro instrumento.
Si el error se ha producido en los primeros 30 segundos de la prueba, se puede usar el mismo cartucho para la repetición de la prueba (en un plazo de 60 minutos desde la carga del cartucho) con el mismo instrumento/Module o con otro, según esté disponible.
Si el error se produce más adelante en la prueba, o no está seguro cuando se ha producido el error, vuelva a la muestra original para cargar un nuevo cartucho. Repita la prueba con el nuevo cartucho en el mismo instrumento/Module o en otro, según esté disponible.
Acepte los resultados válidos de la prueba repetida. Si el error persiste, póngase en contacto con el Soporte técnico para recibir ayuda.
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Result Summary (Resumen de resultados)
Los resultados de la prueba para los organismos incluidos en FilmArray RP se proporcionan en dos ubicaciones del informe. La sección Result Summary (Resumen de resultados) proporciona una lista completa de los resultados de la prueba. Los resultados posibles incluyen Detected (Detectado), Not Detected (No detectado), Equivocal (Dudoso) e Invalid (Inválido). Los resultados Positivo (Detected) (Detectado) y Equivocal (Dudoso) también se muestran en la sección Run Summary (Resumen de la prueba). La Tabla 5 proporciona una explicación de cada interpretación y el seguimiento necesario para obtener un resultado final.
Tabla 5. Interpretación de los resultados incluidos en el informe de la prueba de FilmArray RP
Resultado del organismo
Explicación Acción
Detected (Detectado)
La prueba se ha completado correctamente
Y
Los controles del cartucho son correctos (Passed [Aprobado])
Y
Los ensayos del organismo fueron POSITIVOS (es decir, se cumplen los requisitos de un resultado positivo descritos en la sección anterior Interpretación del ensayo)
Notifique los resultados.
Not Detected (No detectado)
La prueba se ha completado correctamente
Y
Los controles del cartucho son correctos (Passed [Aprobado])
Y
Los ensayos del organismo fueron NEGATIVOS (es decir, no cumplen los requisitos de un resultado positivo descritos en la sección anterior Interpretación del ensayo)
Notifique los resultados.
Equivocal (Dudoso)
(Gripe A solamente)
La prueba se ha completado correctamente
Y
Los controles del cartucho son correctos (Passed [Aprobado])
Y
La combinación de resultados positivos y negativos del ensayo para la gripe A no permitió llegar a ninguna conclusión (consulte la Tabla 3)
Vuelva a ensayar el espécimen original con un cartucho nuevo y notifique los resultados de la prueba repetida.
Invalid (Inválido) Los controles del cartucho no son correctos (Failed [Fallido])
O
La prueba no fue correcta (Run Status [Estado de la prueba] mostrado como: Aborted [Detenida], Incomplete [Incompleto], Instrument Error [Error del instrumento], Software Error [Error de programa] o Instrument Communication Error [Error de comunicación del instrumento])
Consulte la Tabla 4, Interpretación del Campo Control del informe de la prueba FilmArray para recibir instrucciones.
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LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
• Solo se debe usar con prescripción
• El rendimiento de FilmArray Respiratory Panel solamente se ha determinado en los sistemas FilmArray, FilmArray 2.0 y FilmArray Torch.
• Esta prueba es cualitativa y no proporciona un valor cuantitativo del virus y/o bacteria(s) detectado(s) en el espécimen.
• El comportamiento de la prueba se ha evaluado para su uso exclusivo con especímenes de procedencia humana.
• Esta prueba no se ha validado para ensayar especímenes distintos al frotis nasofaríngeo (FNS).
• El comportamiento de esta prueba no se ha determinado en individuos inmunocomprometidos.
• El comportamiento de la prueba no se ha determinado para pacientes que carecen de signos y síntomas de infección respiratoria.
• Los resultados de esta prueba deberán correlacionarse con el historial clínico, datos epidemiológicos y otros datos disponibles para el médico responsable de la evaluación del paciente.
• Pueden persistir in vivo ácidos nucleicos víricos y bacterianos independientemente de la viabilidad del organismo. La detección de diana(s) de organismo(s) no implica que los correspondientes organismos sean infecciosos o sean los agentes causantes de los síntomas clínicos.
• La detección de ácidos nucleicos víricos y bacterianos depende de la correcta recogida, manipulación, transporte, almacenamiento y preparación del espécimen. Si no se observan los procedimientos correctos en alguno de estos pasos, se pueden producir resultados incorrectos. Existe un riesgo de valores falsos positivos o valores falsos negativos resultantes de especímenes incorrectamente recogidos, transportados o manipulados.
• Un resultado negativo de FilmArray RP no excluye la posibilidad de infección vírica o bacteriana. Se pueden producir resultados negativos de la prueba debidos a la presencia de variantes de secuencia en la región a la que se dirige el ensayo, a la presencia de inhibidores, errores técnicos, mezclado de la muestra, o una infección causada por un organismo no detectado por el panel. Los resultados de la prueba también pueden verse afectados debido a tratamiento antivírico/antibacteriano concurrente, o bien a niveles de organismos del espécimen que se encuentran por debajo del límite de detección de la prueba. Los resultados negativos de esta prueba no se deberán usar como la base exclusiva del diagnóstico, del tratamiento o de otras decisiones de gestión. Los resultados negativos en el marco de una enfermedad respiratoria pueden deberse a infección por patógenos no detectados mediante la prueba o bien que la infección de las vías respiratorias inferiores no se detecta en un espécimen de frotis nasofaríngeo.
• Los valores predictivos positivos y negativos son fuertemente dependientes de la prevalencia. Los resultados falsos negativos también son más probables durante un máximo de actividad cuando la prevalencia de la enfermedad es elevada. Los resultados falsos positivos también son más probables en los períodos en que la prevalencia es de moderada a baja.
• La contaminación por los organismos y por los amplicones puede ocasionar resultados erróneos para la prueba. Debe prestarse atención especial a las Precauciones en el laboratorio indicadas en la sección Advertencias y precauciones.
• Existe un riesgo de valores falsos positivos como resultado de la contaminación cruzada entre organismos diana, sus ácidos nucleicos o su producto amplificado o debido a señales no específicas del ensayo.
• La reactividad cruzada con organismos de las vías respiratorias diferentes a los relacionados en la sección Especificidad analítica siguiente pueden ocasionar resultados erróneos.
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• El ensayo FilmArray RP para adenovirus puede mostrar una detección variable con serotipos no respiratorios de la especies A, D, F y G.
• Los ensayos de subtipado FilmArray RP para la gripe A solo se dirigen al gen de la hemaglutinina de la gripe A. FilmArray RP no detecta ni diferencia el gen de la neuraminidasa de la gripe A.
• La especificidad clínica fue establecida cuando la gripe A H1-2009 era el virus de la gripe A predominante en circulación. Cuando aparezcan otros virus de la gripe A, la especificidad clínica puede variar.
• Debido al bajo número de especímenes positivos recogidos para algunos organismos durante el estudio clínico prospectivo, las características de rendimiento para Bordetella pertussis, coronavirus 229E, coronavirus OC43, gripe A H1, gripe A H3, gripe A H1-2009, gripe B, Mycoplasma pneumoniae, virus paragripal 1, virus paragripal 2, y virus paragripal 4, se determinaron principalmente a partir de especímenes clínicos retrospectivos. Las características de rendimiento para Chlamydophila pneumoniae se determinaron principalmente mediante especímenes clínicos artificiales. El rendimiento de esta prueba no se ha establecido para vigilar el tratamiento de las infecciones estacionales de gripe A H1, A H3, A H1-2009 o VRS.
• El rendimiento de esta prueba no se ha determinado en la criba de sangre o hematoderivados para determinar la presencia de la gripe A H1, A H3 o A H1-2009 estacional.
• El rendimiento de esta prueba no se ha determinado con medicamentos potencialmente interferentes para el tratamiento de los virus de la gripe o del resfriado. El efecto de las sustancias interferentes solo se ha evaluado para las relacionadas en la etiqueta. La interferencia debida a sustancias diferentes de las descritas en la sección “Interferencia” siguiente puede llevar a resultados erróneos.
• El rendimiento de FilmArray RP no se ha determinado en individuos que hayan recibido recientemente la vacuna de la gripe. La administración reciente de una vacuna nasal contra la gripe puede causar resultados falsos positivos para la gripe A y/o la gripe B.
• Debido a la similitud genética entre el rinovirus humano y el enterovirus humano, el FilmArray RP no puede diferenciarlos con fiabilidad. Un resultado positivo para rinovirus/enterovirus con FilmArray RP deberá confirmarse con un procedimiento alternativo (p. ej. cultivo celular o análisis de secuencia).
• El ensayo del coronavirus OC43 puede reaccionar de forma cruzada con el coronavirus HKU1. Como resultado, cuando HKU1 y OC43 se detectan en el espécimen del mismo paciente, el resultado se puede deber a reactividad cruzada del ensayo. También es posible una infección simultánea con ambos virus.
• El FilmArray RP puede no ser capaz de distinguir entre cepas víricas existentes y las nuevas variedades que puedan aparecer. Por ejemplo, FilmArray RP puede detectar gripe A H3N2v (reconocida por primera vez en agosto de 2011), pero no será capaz de distinguir esta variante de la gripe A H3N2 estacional.
• Los resultados de FilmArray RP para el ensayo B. pertussis pueden no concordar con resultados de los ensayos para Bordetella realizados mediante PCR que tienen como diana las secuencias de inserción multicopia (IS481) debido a las diferencias en la sensibilidad y la especificidad. IS481 es una diana multicopia y está presente en varias especies de Bordetella (B. pertussis, B. holmesii y B. bronchiseptica). El ensayo FilmArray RP para B. pertussis tiene como diana la región del promotor de una única copia del gen de la toxina tosferínica y está diseñado para tener una elevada especificidad para la detección de B. pertussis. Aunque no se ha observado reactividad cruzada con especies de Bordetella en el estudio clínico o en la prueba de especificidad analítica de una variedad de cepas a 1 x 10
6 UFC/ml, se pueden producir casos de
reactividad cruzada con niveles mayores (por encima de 1 x 106 UFC/ml) o con variantes de secuencia raros
de otras especies de Bordetella tales como B. bronchiseptica y B. parapertussis.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 26
VALORES ESPERADOS
NOTA: Los valores esperados presentados en esta sección se obtuvieron antes de añadir un segundo ensayo para
adenovirus al FilmArray RP.
En la primera fase del estudio clínico prospectivo con FilmArray RP, se recogieron 853 especímenes de frotis
nasofaríngeos (FNS) candidatos, que se ensayaron en tres centros de EE. UU. entre diciembre de 2009 y mayo de
2010. Se llevó a cabo una segunda fase del estudio clínico prospectivo con FilmArray RP para obtener especímenes
positivos adicionales para los virus paragripales 1, 2 y 4. Durante el máximo estacional anticipado de la temporada de
los virus paragripales 1 y 2 (de septiembre de 2010 hasta enero de 2011), se recogieron otros 264 especímenes
candidatos, que se ensayaron en dos de los tres centros. El número y porcentaje de casos positivos determinados por
el FilmArray RP calculados por centro de prueba o por grupo de edad se presentan en las siguientes tablas:
Tabla 6. Resumen de valores esperados (determinados por el FilmArray RP) por centro para la primera fase de la evaluación clínica prospectiva (diciembre 2009–mayo 2010)
Organismo
Global (n=853) Centro 1 (n=275) Centro 2 (n=333) Centro 3 (n=245)
Número Valor esperado
Número Valor
esperado Número
Valor esperado
Número Valor
esperado
Adenovirus 38 4,5% 5 1,8% 11 3,3% 22 9,0%
Gripe A 11 1,3% 10 3,6% 1 0,3% 0 0%
Gripe A H1 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
Gripe A H3 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
Gripe A H1-2009 11 1,3% 10 3,6% 1 0,3% 0 0%
Gripe B 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
Virus paragripal 1 1 0,1% 0 0% 0 0% 1 0,4%
Virus paragripal 2 0 0% 0 0% 0 0% 0 0%
Virus paragripal 3 33 3,9% 1 0,4% 1 0,3% 31 12,7%
Virus paragripal 4 8 0,9% 0 0% 4 1,2% 4 1,6%
Virus respiratorio sincitial 139 16,3% 4 1,5% 86 25,8% 49 20,0%
Coronavirus 229E 14 1,6% 5 1,8% 3 0,9% 6 2,4%
Coronavirus HKU1 25 2,9% 9 3,3% 13 3,9% 3 1,2%
Coronavirus NL63 23 2,7% 4 1,5% 9 2,7% 10 4,1%
Coronavirus OC43 8 0,9% 2 0,7% 6 1,8% 0 0%
Metapneumovirus humano 94 11,0% 12 4,4% 41 12,3% 41 16,7%
Rinovirus/enterovirus humano
225 26,4% 36 13,1% 92 27,6% 97 39,6%
Bordetella pertussis 4 0,4% 2 0,7% 1 0,3% 1 0,4%
Chlamydophila pneumoniae 1 0,1% 0 0% 0 0% 1 0,4%
Mycoplasma pneumoniae 2 0,2% 2 0,2% 0 0% 0 0%
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Tabla 7. Resumen de valores esperados (determinados por el FilmArray RP) por centro para la segunda fase de la evaluación clínica prospectiva (septiembre 2010–enero 2011)
Organismo
Global (n=264) Centro 2 (n=180) Centro 3 (n=84)
Número Valor
esperado Número
Valor esperado
Número Valor esperado
Adenovirus 15 5,7% 11 6,1% 4 4,6%
Gripe A 5 1,9% 0 0% 5 6,0%
Gripe A H1 0 0% 0 0% 0 0%
Gripe A H3 5 1,9% 0 0% 5 6,0%
Gripe A H1-2009 0 0% 0 0% 0 0%
Gripe B 1 0,4% 1 0,6% 0 0%
Virus paragripal 1 1 0,4% 0 0% 1 1,1%
Virus paragripal 2 9 3,4% 4 2,2% 5 5,7%
Virus paragripal 3 5 1,9% 0 0% 5 5,7%
Virus paragripal 4 2 0,7% 1 0,6% 1 1,1%
Virus respiratorio sincitial 31 11,7% 11 6,1% 20 23,8%
Coronavirus 229E 0 0% 0 0% 0 0%
Coronavirus HKU1 0 0% 0 0% 0 0%
Coronavirus NL63 1 0,4% 1 0,6% 0 0%
Coronavirus OC43 11 4,2% 1 0,5% 10 11,9%
Metapneumovirus humano 4 1,5% 0 0% 4 4,6%
Rinovirus/enterovirus humano 125 47,3% 91 50,6% 34 39,1%
Bordetella pertussis 3 1,1% 3 1,6% 0 0%
Chlamydophila pneumoniae 0 0% 0 0% 0 0%
Mycoplasma pneumoniae 2 0,8% 1 0,5% 1 1,2%
Tabla 8. Resumen de valores esperados (determinados mediante FilmArray RP) por grupo de edad para la primera fase de la evaluación clínica prospectiva (diciembre 2009–mayo 2010)
Organismo Total
(Valor esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años
Adenovirus 38 (4,5%) 32 2 3 1
Gripe A 11 (1,3%) 1 1 7 2
Gripe A H1 0 (0%) 0 0 0 0
Gripe A H3 0 (0%) 0 0 0 0
Gripe A H1-2009 11 (1,3%) 1 1 7 2
Gripe B 0 (0%) 0 0 0 0
Virus paragripal 1 1 (0,1%) 0 1 0 0
Virus paragripal 2 0 (0%) 0 0 0 0
Virus paragripal 3 33 (3,9%) 31 1 0 1
Virus paragripal 4 8 (0,9%) 7 1 0 0
Virus respiratorio sincitial 139 (16,3%) 127 3 4 5
Coronavirus 229E 14 (1,6%) 6 2 5 1
Coronavirus HKU1 25 (2,9%) 12 1 8 4
Coronavirus NL63 23 (2,7%) 17 2 2 2
Coronavirus OC43 8 (0,9%) 4 0 2 2
Metapneumovirus humano 94 (11,0%) 76 4 10 4
Rinovirus/enterovirus humano 225 (26,4%) 161 24 29 11
Bordetella pertussis 4 (0,4%) 2 1 0 1
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Organismo Total
(Valor esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años
Chlamydophila pneumoniae 1 (0,1%) 1 0 0 0
Mycoplasma pneumoniae 2 (0,2%) 0 0 2 0
Tabla 9. Resumen de valores esperados (determinados mediante FilmArray RP) por grupo de edad para la segunda fase de la evaluación clínica prospectiva (septiembre de 2010–enero de 2011)
El número y porcentaje de casos de infección simultánea determinados por el FilmArray RP calculados por grupo de
edad se presentan en las siguientes tablas:
Tabla 10. Resumen de valores esperados (infecciones simultáneas determinadas por el FilmArray RP) por grupo de edad para la primera fase de la evaluación clínica prospectiva (diciembre de 2009–mayo de 2010)
Infección simultánea Total (Valor
esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años
VRH/VE + VRS 21 (2,46%) 20 0 1 0
VRH/VE + AdV 8 (0,94%) 8 0 0 0
VRH/VE + VP3 8 (0,94%) 7 1 0 0
VRH/VE + MPVh 7 (0,82%) 7 0 0 0
MPVh + VRS 4 (0,47%) 4 0 0 0
VRH/VE + CoV NL63 4 (0,47%) 3 0 1 0
CoV HKU1 + MPVh 3 (0,35%) 3 0 0 0
Organismo Total
(Valor esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años
Adenovirus 15 (5,7%) 15 0 n/a n/a
Gripe A 5 (1,9%) 4 1 n/a n/a
Gripe A H1 0 (0%) 0 0 n/a n/a
Gripe A H3 5 (1,9%) 4 1 n/a n/a
Gripe A H1-2009 0 (0%) 0 0 n/a n/a
Gripe B 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
Virus paragripal 1 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
Virus paragripal 2 9 (3,4%) 9 0 n/a n/a
Virus paragripal 3 5 (1,9%) 5 0 n/a n/a
Virus paragripal 4 2 (0,7%) 2 0 n/a n/a
Virus respiratorio sincitial 31 (11,7%) 30 1 n/a n/a
Coronavirus 229E 0 (0%) 0 0 n/a n/a
Coronavirus HKU1 0 (0%) 0 0 n/a n/a
Coronavirus NL63 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
Coronavirus OC43 11 (4,2%) 9 2 n/a n/a
Metapneumovirus humano 4 (1,5%) 4 0 n/a n/a
Rinovirus/enterovirus humano 125 (47,3%) 118 7 n/a n/a
Bordetella pertussis 3 (1,1%) 3 0 n/a n/a
Chlamydophila pneumoniae 0 (0%) 0 0 n/a n/a
Mycoplasma pneumoniae 2 (0,8%) 2 0 n/a n/a
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 29
Infección simultánea Total (Valor
esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años
CoV HKU1 + VRH/VE 3 (0,35%) 1 0 2 0
CoV HKU1 + VRS 3 (0,35%) 3 0 0 0
CoV NL63 + MPVh 3 (0,35%) 3 0 0 0
CoV NL63 + VRS 3 (0,35%) 3 0 0 0
MPVh + VP3 3 (0,35%) 3 0 0 0
AdV + VRH/VE + VP3 2 (0,23%) 2 0 0 0
CoV OC43 + VRS 2 (0,23%) 2 0 0 0
CoV HKU1 + CoV OC43 2 (0,23%) 0 0 1 1
VRH/VE + VP4 2 (0,23%) 2 0 0 0
AdV + MPVh 1 (0,12%) 1 0 0 0
AdV + VP3 1 (0,12%) 1 0 0 0
AdV + VRS) 1 (0,12%) 1 0 0 0
AdV + CoV NL63 1 (0,12%) 1 0 0 0
AdV + VRS + CoV 229E 1 (0,12%) 1 0 0 0
AdV + HRV/EV + B. pertussis 1 (0,12%) 1 0 0 0
AdV + C. pneumoniae 1 (0,12%) 1 0 0 0
CoV 229E + VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0
CoV 229E + CoV NL63 +
VRH/VE+VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0
CoV 229E + VRH/VE 1 (0,12%) 1 0 0 0
CoV HKU1 + VRH/VE + VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0
CoV NL63 + MPVh + VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0
HRV/EV + B. pertussis 1 (0,12%) 1 0 0 0
VRH/VE + VP1 1 (0,12%) 0 1 0 0
MPVh + VP4 1 (0,12%) 1 0 0 0
VP4 + VRS 1 (0,12%) 1 0 0 0
Tabla 11. Resumen de valores esperados (infecciones simultáneas determinadas por el FilmArray RP) por grupo de edad para la segunda fase de la evaluación clínica prospectiva (septiembre de 2010–enero de 2011)
Infección simultánea Total
(Valor esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años
VRH/VE + VRS 6 (2,2%) 6 0 n/a n/a
VRH/VE + AdV 6 (2,2%) 6 0 n/a n/a
CoV OC43 + VRH/VE 5 (1,9%) 5 0 n/a n/a
VRH/VE + VP2 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
VRH/VE + VP3 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
VRH/VE + VP4 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
MPVh + VRS 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
Gripe B + VRS 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
AdV + CoV OC43 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
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Infección simultánea Total
(Valor esperado) ≤ 5 años 6-21 años 22-49 años ≥ 50 años
CoV OC43 + MPVh 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
CoV OC43 + VRS 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
HRV/EV + B. pertussis 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
PIV2 + M. pneumoniae 1 (0,4%) 1 0 n/a n/a
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Rendimiento clínico
NOTA: Los datos de rendimiento clínico presentados en la primera parte de esta sección se obtuvieron antes de
añadir un segundo ensayo para adenovirus al FilmArray RP. Los datos de un estudio comparativo que demuestra la
eficacia de un FilmArray RP modificado (que contiene un segundo ensayo para adenovirus) en comparación con el
FilmArray RP se presentan a partir de la página 34.
El rendimiento clínico del FilmArray RP se determinó mediante un estudio clínico prospectivo en dos fases. La primera
fase del estudio clínico prospectivo se llevó a cabo en tres centros clínicos estadounidenses durante un plazo de seis
meses (diciembre de 2009 a mayo de 2010). La segunda fase del estudio clínico prospectivo se llevó a cabo en dos
de los tres centros durante un plazo adicional de cinco meses (septiembre de 2010 a enero de 2011) en un intento de
conseguir mayor detección de varios organismos de baja prevalencia (es decir, PIV1, PIV2 y PIV4) durante el máximo
estacional anticipado para PIV1 y PIV2. Fueron invitados a participar sujetos con signos y síntomas de infección
respiratoria. Tras obtener el consentimiento informado, se recogieron muestras de FNS para las pruebas tanto en
FilmArray como en el comparador. Un total de 857 sujetos fueron inicialmente inscritos en la temporada respiratoria
2009/2010 (Fase 1) y 4 se retiraron. La Tabla 12 proporciona un resumen de la información demográfica de los 853
sujetos que participaron en la primera fase del estudio prospectivo. Se inscribieron otros 287 sujetos en la temporada
respiratoria 2010/2011 (Fase 2) y se omitió el análisis de 20 especímenes debido a un almacenamiento incorrecto de
los especímenes antes de la prueba. Otros 3 especímenes fueron también excluidos del análisis por falta del
protocolo clínico necesario asociado a los resultados válidos de mezclas de controles externo. La Tabla 12B
proporciona un resumen de los 264 sujetos restantes.
Tabla 12. Resumen demográfico para el estudio clínico prospectivo con FilmArray RP
A. De diciembre de 2009 hasta mayo de 2010 B. De septiembre de 2010 hasta enero de 2011
Un espécimen de FNS procedente de cada sujeto se ensayó en el FilmArray RP. El rendimiento del FilmArray RP se
evaluó comparando el resultado de la prueba FilmArray RP para cada componente del panel con los métodos
adecuados comparador(es)/de referencia mostrados en la Tabla 13.
Sexo Número de sujetos Sexo Número de sujetos
Varón 449 (53%) Varón 151 (57%)
Mujer 404 (47%) Mujer 113 (43%)
Edad Número de sujetos Edad Número de sujetos
≤5 484 (57%) ≤5 240 (91%)
6-21 95 (11%) 6-21 24 (9%)
22-49 190 (22%) 22-49 0 (0%)
≥50 84 (10%) ≥50 0 (0%)
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Tabla 13. Métodos de referencia/comparador(es) usados para evaluar el rendimiento del FilmArray RP
Virus Método(s) de
referencia/comparativos
Adenovirus
Cultivo del virus seguido por identificación de DFA
a
Gripe A
Gripe B
Virus paragripal 1
Virus paragripal 2
Virus paragripal 3
Virus respiratorio sincitial
Subtipado de gripe A H1 Cultivo del virus seguido por una prueba
mediante PCR del cultivo del virus con confirmación de secuencia bidireccional
b
Subtipado de gripe A H3
Subtipado de gripe A H1-2009
Virus paragripal 4
Rinovirus humano
2 pruebas mediante PCR de especímenes del paciente con confirmación de secuencia
bidireccional c
Enterovirus humano
Coronavirus 229E
Coronavirus HKU1
Coronavirus NL63
Coronavirus OC43
Metapneumovirus humano
Bordetella pertussis
Chlamydophila pneumoniae
Mycoplasma pneumoniae
a El rendimiento de FilmArray RP para detectar AdV, gripe A, gripe B, VP1, VP2, VP3, o VRS, respectivamente, se
comparó con cultivos del virus seguido por identificación mediante anticuerpo fluorescente. Se consideraron como
positivos “verdaderos” cualquier muestra que diera un resultado positivo en el cultivo vírico seguido por la prueba DFA. Se
consideraron como negativos “verdaderos” cualquier muestra que diera un resultado negativo en el cultivo vírico seguido
por la prueba DFA.
b El rendimiento del FilmArray RP para detectar gripe A H1, A H3, A H1-2009, o VP4, respectivamente, se comparó con
cultivos del virus seguido por un ensayo mediante PCR validado analíticamente con confirmación de secuencia
bidireccional. Los ensayos de comparación están diseñados para amplificar una secuencia diferente de la amplificada en
el ensayo o ensayos FilmArray. Ninguno de los ensayos comparadores mediante PCR solapó ninguna secuencia de
amplicón usada en FilmArray, aunque la diana fuera el mismo gen. Se consideraron positivos “verdaderos” para gripe A
H1, A H3, o A H1-2009, respectivamente, cualquier muestra con un resultado positivo para gripe A según el cultivo vírico y
con datos de la secuencia bidireccional que cumplían los criterios de aceptación predefinidos de calidad correspondiente a
las correspondientes secuencias del subtipo depositadas en la base de datos del National Center for Biotechnology
Information (NCBI) GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov) con valores E aceptables. Se consideraron negativos “verdaderos”
para gripe A H1, A H3, o A H1-2009, respectivamente, cualquier muestra con un resultado negativo para gripe A según el
cultivo vírico, o cualquier muestra con un resultado positivo para gripe A según el cultivo vírico, pero con un resultado
negativo en el correspondiente ensayo específico del subtipo mediante PCR. Se consideraron positivos "verdaderos” para
VP4 cualquier muestra para la cual se obtuvieran datos de secuenciación bidireccional correspondientes a las secuencias
deI VP4 depositadas en la base de datos NCBI GenBank a partir del análisis del material del cultivo del virus. Se
consideraron negativos “verdaderos” para VP4 cualquier muestra cuyo análisis del material del cultivo del virus con el
ensayo mediante PCR específico de VP4 validado analíticamente sea negativo.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 32
c El rendimiento del FilmArray RP para detectar HRV, EV, CoV 229E, CoV HKU1, CoV NL63, CoV OC43, hMPV, B.
pertussis, C. pneumoniae, o M. pneumoniaerespectivamente, se comparó con un algoritmo predeterminado que usaba
métodos comparadores compuestos. Los métodos están compuestos por dos ensayos mediante PCR analíticamente
validados seguidos por secuenciación bidireccional. Los ensayos de comparación están diseñados para amplificar una
secuencia diferente de la amplificada en el ensayo o ensayos FilmArray. Ninguno de los ensayos comparadores mediante
PCR solapó ninguna secuencia de amplicón usada en FilmArray, aunque la diana fuera el mismo gen. Se consideraron
positivos “verdaderos” cualquier muestra para la cual se obtuvieran datos de secuenciación bidireccional con los criterios
de aceptación predefinidos de calidad criterios de aceptación correspondientes a las secuencias específicas del
organismo depositadas en la base de datos NCBI GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov) con valores E aceptables. Se
consideraron negativos “verdaderos” cualquier muestra que haya obtenido un valor negativo en ambos ensayos de
comparación mediante PCR.
Un total de 853 especímenes se evaluaron para adenovirus, gripe A, gripe B, virus paragripal 3, virus respiratorio
sincitial, coronavirus HKU1, coronavirus NL63, metapneumovirus humano y rinovirus/rnterovirus humano en la primera
fase del estudio. Un total de 1117 especímenes se evaluaron para virus paragripal 1, virus paragripal 2, virus
paragripal 4, coronavirus 229E, coronavirus OC43, B. pertussis, C. pneumoniae, y M. pneumoniae en las fases
primera y segunda del estudio. (Durante la segunda fase del estudio clínico prospectivo solamente se realizarán los
métodos de referencia/comparación para virus paragripal 1, virus paragripal 2, virus paragripal 4, coronavirus 229E,
coronavirus OC43, B. pertussis, C. pneumoniae, y M. pneumoniae en todos los especímenes y se utilizaron para
calcular el rendimiento.) La sensibilidad clínica o Coincidencia de porcentaje positivo (PPA) se calculó como el
100% x (PV / PV + NF). Un Verdadero Positivo (VP) indica que tanto el FilmArray RP como el método comparador
tuvieron un resultado positivo para este organismo especifico y un Falso Negativo (FN) indica que el resultado del
FilmArray fue negativo mientras que el resultado del comparador fue positivo. La especificidad, o Coincidencia de
porcentaje negativo (NPA), se calculó como el 100% x (NV / NV + PF). Un Verdadero Negativo (VN) indica que tanto
el FilmArray RP como el método comparador tuvieron un resultado negativo y un Falso Positivo (FP) indica que el
resultado del FilmArray RP fue positivo mientras que el resultado del comparador fue negativo. Se calculó en intervalo
de confianza exacto binomial bilateral del 95%. Los resultados se resumen en la Tabla 14.
Tabla 14. Sensibilidad y especificidad clínica, o Coincidencia de porcentaje positivo (PPA) y Coincidencia de porcentaje negativo (NPA) para el estudio clínico prospectivo con FilmArray RP
Organismo Sensibilidad IC 95% Especificidad IC 95%
Adenovirus 24/27a
88,9% 70,8 – 97,7% 812/826b
98,3% 97,2 – 99,1%
Gripe A 9/10 90,0% 55,5–99,8% 841/843c 99,8% 99,2 –100%
Gripe A H1 0/0 n/a n/a 853/853 100% 99,6 – 100%
Gripe A H3 0/0 n/a n/a 853/853 100% 99,6 – 100%
Gripe A H1–2009 8/9 88,9% 51,8 – 99,7% 841/844c
99,6% 99,0 – 99,9%
Gripe B 0/0 n/a n/a 853/853 100% 99,6 – 100%
Virus paragripal 1 1/1 100% n/a 1115/1116d
99,9% 99,5–100%
Virus paragripal 2 7/8e,g
87,4% 47,4–99,7% 1107/1109f,g
99,8% 99,4–100%
Virus paragripal 3 23/24h
95,8% 78,9–99,9% 819/829i
98,8% 97,8 – 99,4%
Virus paragripal 4 9/9 100% 66,4–100% 1107/1108j
99,9% 99,5–100%
Virus respiratorio sincitial 52/52 100% 93,2 – 100% 714/801k
89,1% 86,8 – 91,2%
Organismo PPA IC 95% NPA IC 95%
Coronavirus 229E 12/12 100% 73,5 – 100% 1103/1105l 99,8% 99,4 – 100%
Coronavirus HKU1 23/24 95,8% 78,9 – 99,9% 827/829m
99,8% 99,1 – 100%
Coronavirus NL63 23/24 95,8% 78,9 – 99,9% 829/829 100% 99,6 – 100%
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Coronavirus OC43 14/14 100% 76,8 – 100% 1098/1103n,o
99,6% 99,0 – 99,9%
Metapneumovirus humano 88/93 94,6% 87,9 – 98,2% 754/760 99,2% 98,3 – 99,7%
Rinovirus/enterovirus humano 190/205 92,7% 88,2 – 95,8% 613/648 94,6% 92,6 – 96,2%
Bordetella pertussis 6/6 100% 54,1 – 100% 1110/1111 99,9% 99,5 – 100%
Chlamydophila pneumoniae 1/1 100% n/a 1116/1116 100% 99,7 – 100%
Mycoplasma pneumoniae 4/4 100% 39,8 – 100% 1113/1113 100% 99,7 – 100% a El FilmArray RP detectó adenovirus en 1/3 especímenes falsos negativos al realizar la prueba por segunda vez. El
adenovirus en el espécimen vuelta a analizar fue identificado como especie C mediante análisis bidireccional de la
secuencia. Los adenovirus en los dos especímenes falsos negativos restantes fueron identificados como especie C y
especie B. b Se identificaron adenovirus en 13/14 especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la secuencia. Diez
fueron identificados como especie C, dos como especie B y uno como especie E. c Los virus de la gripe A (subtipo H1-2009) fueron identificados en 3/3 especímenes falsos negativos (2/2 falsos positivos
en comparación con los cultivos de gripe A en solitario) mediante análisis de secuencia con un ensayo alternativo. d
VP1 se identificó en este espécimen mediante análisis bidireccional de la secuencia. e
El virus VP2 no fue detectado en el único espécimen falso negativo mediante análisis por PCR. f El virus VP2 fue detectado en ambos especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la secuencia.
g Dos especímenes adyacentes (un falso positivo y un falso negativo) se pueden haber intercambiado en la prueba con el
método de referencia de cultivo del virus según evidencia el análisis bidireccional de la secuencia de estos especímenes. h
El FilmArray RP detectó VPG3 en el único espécimen falso negativo al realizar la prueba por segunda vez. i Se identificaron virus VPG3 en 10/10 especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la secuencia. j Se detectó un virus VP4 en este espécimen de FNS falso positivo mediante análisis bidireccional de la secuencia aunque
no fue detectado en el cultivo del virus. k Se identificaron virus VRS en 83/87 especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la secuencia.
l CoV 229E se identificó mediante análisis bidireccional de la secuencia en 1/2 especímenes falsos positivos, usando un
ensayo alternativo. m
Los virus CoV HKU1 fueron identificados en 2/2 especímenes falsos positivos mediante análisis bidireccional de la
secuencia, usando un ensayo alternativo. n CoV OC43 se detectó en 2/5 especímenes falsos positivos usando un ensayo alternativo con análisis bidireccional de la
secuencia. o Se determinó que 2/5 falsos positivos eran productos de reacciones cruzadas procedentes de la amplificación de virus
CoV HKU1 con los cebadores del ensayo CoV OC43.
El FilmArray RP detectó un total de 94 infecciones mixtas en la primera fase de la evaluación clínica prospectiva
realizada entre diciembre de 2009 y mayo de 2010 (853 especímenes ensayados y analizados). Esto representa 18%
del total de especímenes positivos (94/524). Ochenta y siete (87/94; 92,6%) fueron infecciones dobles, 6 (6/94; 6,3%)
fueron infecciones triples y uno fue una infección cuádruple (1/94; 1,1%). El número total de resultados de ensayo que
comprendían estas infecciones simultáneas fue de 189. La infección simultánea simple más frecuente fue
rinovirus/enterovirus humano con el virus respiratorio sincitial (20/94; 21,1%). Estos virus fueron los más prevalentes
entre la población analizada. De las 94 infecciones simultáneas, 54 contuvieron uno o más organismos que no se
habían detectado con los métodos de referencia/de comparación, es decir, discrepancia de la infección simultánea.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 34
Tabla 15. Diferentes combinaciones de infecciones simultáneas detectadas por el FilmArray RP en la primera fase del ensayo clínico prospectivo (diciembre de 2009 a mayo de 2010)
Diferentes combinaciones de infecciones simultáneas Detectadas por el FilmArray RP
To
tal
Infe
cc
ion
es
sim
ult
án
eas
Número de discrepantes
Infecciones simultáneasa
Organismo(s) discrepante(s)a
Organismo 1
Organismo 2
Organismo 3
Organismo 4
AdV B. pertussis VRH/VE 1 1
AdV/B. pertussis
AdV VRH/VE VP3 2 2 AdV (2)
AdV CoV 229E VRS 1 1 AdV; RSV
AdV C. pneumoniae 1 0
AdV CoV NL63 1 1 AdV
AdV MPVh 1 1 AdV; MPVh
AdV VRH/VE 8 2 AdV; VRH/VE
AdV VP3 1 1 VP3
AdV VRS 1 1 VRS
CoV 229E VRS 1 0
B. pertussis VRH/VE 1 1 VRH/VE
CoV 229E CoV NL63 VRH/VE VRS 1 1 VRS; CoV 229E
CoV 229E VRH/VE 1 0
CoV HKU1 VRH/VE VRS 1 1 VRS
CoV HKU1 CoV OC43 2 2
CoV OC43 (2)b
CoV HKU1 MPVh 3 0
CoV HKU1 VRH/VE 3 0
CoV HKU1 VRS 3 1 VRS
CoV NL63 MPVh VRS 1 1 VRS
CoV NL63 MPVh 3 0
CoV NL63 VRH/VE 4 1 VRH/VE
CoV NL63 VRS 3 2 VRS (2)
CoV OC43 VRS 2 2 VRS(2) CoV OC43 (2)
MPVh VRH/VE 7 3 MPVh (2); VRH/VE (1)
MPVh VP3 3 1 VP3
MPVh VP4 1 1 MPVh
MPVh VRS 4 4 MPVh (1); VRS (3)
VRH/VE VP1 1 1 VP1
VRH/VE VP3 8 6 VRH/VE (3); VP3 (3)
VRH/VE VP4 2 0
VRH/VE VRS 21 16 VRH/VE (8); VRS (13)
VP4 VRS 1 0
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Total de infecciones simultáneas 94 54 65/200 (32,5%)
Total de infecciones dobles 87 47 55/178 (30,9%)
Total de infecciones triples 6 6 8/18 (44,4%)
Total de infecciones cuádruples 1 1 2/4 (50%) a Se ha definido una infección simultánea discrepante o un organismo discrepante como aquella infección o aquel organismo
detectado por FilmArray RP, pero no detectado en los métodos de referencia/comparadores, o por una discrepancia en la
investigación mediante análisis bidireccional de la secuencia. Sesenta y cinco (65) organismos en 54 de las 94 infecciones
simultáneas no fueron detectadas por los métodos de referencia/comparadores. Cuarenta y cuatro (44) se investigaron mediante
análisis bidireccional de la secuencia con un ensayo alternativo; en 37 casos, el ensayo de investigación identificó correctamente el
organismo en el espécimen. b
Ambos resultados discrepantes de CoV O43 fueron falsos positivos debido a reactividad cruzada entre el ensayo CoV OC43 con
los virus CoV HKU1 de los especímenes.
Tabla 16. Diferentes infecciones simultáneas adicionales detectadas por los métodos de referencia/comparadores, pero no por el FilmArray RP, en la primera fase del ensayo clínico prospectivo (diciembre de 2009 a Mayo 2010)
aEsta tabla incluye solamente infecciones simultáneas diferentes que se detectaron por los métodos de
referencia/comparadores, pero no por el FilmArray RP; el resto de infecciones simultáneas detectadas por los métodos de
referencia/comparadores ya fueron incluidos en la tabla anterior.
Tabla 17. Infecciones mixtas detectadas por FilmArray RP en la primera fase (diciembre de 2009 a mayo de 2010) y la segunda fase (septiembre de 2010 a enero de 2011) del ensayo clínco prospectivo y prevalencia de organismos individuales en infecciones mixtas
Combinaciones de organismos Número de muestras positivas
Porcentaje de muestras
totales ensayadas
(n/1117)
Organismo Número de infecciones
mixtas
Prevalencia en infecciones mixtas (n/121)
VRH/VE + VRS 27 2,40% VRH/VE 82 68%
AdV + VRH/VE 14 1,30% VRS 59 49%
VRH/VE + VP3 9 0,80% AdV 24 20%
MPVh + VRH/VE 7 0,60% MPVh 25 21%
CoV OC43 + VRH/VE 5 0,50% VP3 15 15%
MPVh + VRS 5 0,40% CoV NL63 13 11%
CoV NL63 + VRH/VE 4 0,40% CoV OC43 12 10%
CoV HKU1 + MPVh 3 0,30% CoV HKU1 12 10%
Diferentes combinaciones de infecciones simultáneas
a T
ota
l
Infe
ccio
nes
sim
ult
án
eas
Número de infecciones simultáneas discrepantes
Organismo(s) discrepante(s)
Organismo 1 Organismo 2
CoV 229E VRH/VE 1 1 VRH/VE (1)
MPVh VRH/VE 3 3 MPVh (2); VRH/VE (1)
VRH/VE VRS 1 1 VRH/VE (1)
Total de infecciones simultáneas 5 5
Total de infecciones dobles 5 5
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Combinaciones de organismos Número de muestras positivas
Porcentaje de muestras
totales ensayadas
(n/1117)
Organismo Número de infecciones
mixtas
Prevalencia en infecciones mixtas (n/121)
CoV HKU1 + VRH/VE 3 0,30% VP4 5 4%
CoV HKU1 + VRS 3 0,30% CoV 229E 4 3%
CoV NL63 + MPVh 3 0,30% B. pertussis 3 2%
CoV NL63 + VRS 3 0,40% VP2 2 2%
CoV OC43 + VRS 3 0,30% C. pneumoniae 1 1%
MPVh + VP3 3 0,30% Gripe B 1 1%
VRH/VE + VP4 3 0,30% M. pneumoniae 1 1%
AdV + VRH/VE + VP3 2 0,20% VP1 1 1%
AdV + VRS) 1 0,20%
CoV HKU1 + CoV OC43 2 0,20%
HRV/EV + B. pertussis 2 0,10%
AdV + B. pertussis + HRV/Entero 1 0,10%
AdV + C. pneumoniae 1 0,10%
AdV + CoV 229E + VRS 1 0,10%
Adenovirus + CoV NL63 1 0,10%
Adenovirus + CoV OC43 1 0,10%
Adenovirus + MPVh 1 0,10%
Adenovirus + VP3 1 0,10%
CoV 229E + CoV NL63 + VRH/VE + VRS 1 0,10%
CoV 229E + VRH/VE 1 0,10%
CoV 229E + VRS 1 0,10%
CoV HKU1 + VRH/VE + VRS 1 0,10%
CoV NL63 + MPVh + VRS 1 0,10%
CoV OC43 + MPVh 1 0,10%
MPVh + VP4 1 0,10%
VRH/VE + VP1 1 0,10%
VRH/VE + VP2 1 0,10%
Gripe B + VRS 1 0,10%
VP4 + VRS 1 0,10%
PIV2 + M. pneumoniae 1 0,10%
Un total de 1117 especímenes clínicos prospectivos fueron probados y analizados durante la primera fase y la
segunda fase de la evaluación clínica prospectiva (temporada respiratoria 2009/2010 y temporada respiratoria
2010/2011). De las 1117 especímenes clínicos prospectivos analizados, 94,6% (1057/1117) de estos especímenes
proporcionaron resultados válidos en el primer intento (es decir, en el primer cartucho cargado). Se obtuvieron
resultados inválidos, o no se obtuvieron resultados, para los restantes 60 especímenes (5,4%) (sin resultados para
24 especímenes debido a pruebas incompletas; 36 especímenes fueron no válidos debido a fallos en el control del
cartucho). De las 24 pruebas incompletas, 3 fueron detenidas por los usuarios (0,3%); 6 fueron debidas a errores
relacionados con el programa (0,6%) y 15 fueron debidas a errores del instrumento (1,3%). Cincuenta y siete (57) de
las 60 especímenes inicialmente fallidos (sin resultados o con resultados inválidos) dieron resultados válidos tras una
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 37
segunda prueba simple con un nuevo cartucho/muestra. Los tres (3) especímenes restantes fueron fallidos en el
segundo intento (2 debido a controles fallidos del cartucho, 1 debido a un error del instrumento), pero dieron
resultados válidos al volver a repetir la prueba con otro cartucho/muestra.
Se observó una única fuga procedente de un cartucho (1/1244 cartuchos cargados; 0,08%) durante la primera fase de
la evaluación clínica prospectiva. Tras el descubrimiento de la fuga, el operador siguió los procedimientos de
descontaminación recomendados y llevó a cabo una vigilancia de la contaminación realizando una prueba con un
frotis de la zona que rodeaba el instrumento. No se detectó contaminación. No se observaron fugas de cartuchos en la
segunda fase de la evaluación clínica prospectiva.
Prueba de especímenes preseleccionados archivados
Algunos organismos, como la gripe, bien no se encontraron en el estudio clínico prospectivo o tenían una baja
prevalencia. Para complementar los resultados del estudio clínico prospectivo, se llevó a cabo una evaluación de
especímenes preseleccionados archivados. Los especímenes fueron FNS archivados que se seleccionaron porque
anteriormente habían dado un resultado positivo para uno de los siguientes organismos: Adenovirus, Bordetella
pertussis, coronavirus 229E y OC43, enterovirus, gripes A H1, H1-2009, y H3, gripe B, Mycoplasma pneumoniae, y los
virus paragripales 1-4. Antes de realizar la prueba en el FilmArray RP, se confirmó la presencia (o ausencia en los
especímenes negativos) de los organismos esperados en cada uno de los especímenes mediante ensayos con PCR
específicos del organismos seguidos por secuenciación bidireccional. Los especímenes se organizaron en “paneles
de prueba” y se distribuyeron al azar de forma que los usuarios que realizaban las pruebas FilmArray RP no recibieron
información con respecto al resultado esperado de la prueba. Cada panel contenía especímenes conocidos por ser
positivos y especímenes conocidos por ser negativos para el organismo específico en evaluación, lo que permite el
cálculo de una Coincidencia de porcentaje positivo (PPA) y una Coincidencia de porcentaje negativo (NPA). Un
resumen de la información demográfica disponible de las muestras ensayadas se proporciona en la Tabla 18 y los
resultados de las pruebas FilmArray se presentan en la Tabla 19.
Tabla 18. Resumen de los datos demográficos del estudio de especímenes archivados mediante el FilmArray RP
Total de especímenes 668
Sexo
Mujer (%) 217 (32,5%)
Varón (%) 217 (32,5%)
Desconocidoa
234 (35%)
Edad
Prom. 13
Mediana 7
Mín. 0,5
Máx. 91
Intervalo de edad
≤5 239 (35,8%)
6-21 112 (16,8%)
22–49 42 (6,3%)
≥50 47 (7%)
≥5b 3 (0,4%)
Desconocidoa 225 (33,7%)
a No se proporcionó información demográfica para los especímenes procedentes de una fuente. Puesto que los
especímenes procedían de un hospital pediátrico, se entiende que el intervalo de edad de los especímenes fue de <1 año a 21 años. b
Una fuente proporcionó la categoría de edad “menos de 5 años de edad o igual/mayor de 5 años de edad”
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Tabla 19. Resumen de los datos de rendimiento del estudio de especímenes archivados mediante el FilmArray RP
Organismo
Coincidencia de porcentaje positivo (PPA)
Coincidencia de porcentaje negativo (NPA)
PV/PV +NF
Porcentaje IC 95% NV/NV+PF Porcentaje IC 95%
Adenovirus
27/27a
100% 87,2 – 100% 28/28 100% 87,7 – 100%
B. pertussis
53/56b
94,6% 85,1 - 98,9% 56/58c
96,5% 88,1 - 99,6%
Coronavirus 229E
13/13 100% 75,3 – 100% 45/47d
95,7% 85,5 - 99,5%
Coronavirus OC43
24/24 100% 85,8 – 100% 33/36e
91,7% 77,5 - 98,2%
Enterovirus
22/23f
95,7% 78,0 - 99,9% 90/90 100% 96,0 – 100%
Gripe A H1
32/32g
100% 89,1 – 100% 127/127 100% 97,1 – 100%
Gripe A H1–2009
34/34h
100% 89,7 – 100% 125/125 100% 97,1 – 100%
Gripe A H3
54/54i
100% 93,4 – 100% 105/105 100% 96,5 – 100%
Gripe B
30/30j
100% 88,4 – 100% 129/129 100% 97,2 – 100%
M. pneumoniae
54/64k
84,4% 73,1 - 92,2% 58/65l
89,2% 79,1 - 95,6%
Virus paragripal 1 34/35m
97,1% 85,1 - 99,9% 94/94 100% 96,2 – 100%
Virus paragripal 2 28/28n
100% 87,6 – 100% 101/101 100% 96,4 – 100%
Virus paragripal 3 36/36
100% 90,3 – 100% 93/93 100% 96,1 – 100%
Virus paragripal 4 11/11o
100% 71,5 – 100% 6/6 100% 54,1 – 100%
a De los 28 especímenes de AdV recibidos para analizar, el estado del organismo de un (1) espécimen no se pudo
confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional y se excluyó del
análisis posterior. b Dos (2) especímenes positivos para B. pertussis fueron originariamente identificados por el laboratorio de origen como
negativos para B. pertussis, pero inesperadamente se descubrió que eran positivos mediante la PCR específica del
organismo seguido por secuenciación bidireccional. Ambos especímenes dieron negativo cuando se analizaron en el
FilmArray y se descubrió que ambos eran negativos para B. pertussis durante la investigación de discrepancias en la
prueba de confirmación. c Diez (10) especímenes negativos para B. pertussis fueron inicialmente identificados por el laboratorio de origen como
positivos para B. pertussis, pero esto no se pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por
secuenciación bidireccional. Dos (2) de estos especímenes dieron positivo cuando se analizaron en el FilmArray y se
descubrió que ambos eran positivos para B. pertussis durante la investigación de discrepancias en la prueba de
confirmación. Se descubrió que dos (2) muestras positivas según el laboratorio de origen contenían B. holmesii; ambas
muestras proporcionaron el resultado negativo esperado cuando se analizaron con el FilmArray RP. d
Un (1) espécimen negativo para CoV 229E fue identificado inicialmente por el laboratorio de origen como positivo para
CoV 229E, pero esto no se pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación
bidireccional. Este espécimen fue positivo cuando se analizó con el FilmArray RP. e
Cuatro (4) especímenes negativos para CoV OC43 fueron identificados inicialmente por el laboratorio de origen como
positivos para CoV OC43, pero esto no se pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por
secuenciación bidireccional. Dos (2) de estos especímenes fueron positivos cuando se analizaron con el FilmArray RP. f De los 30 especímenes de enterovirus recibidos para análisis, el estado del organismo de 7 especímenes no se pudo
confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis
posterior. g De los 37 especímenes de gripe A H1 recibidos para análisis, el estado del organismo de 5 especímenes no se pudo
confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis
posterior. h
De los 37 especímenes de grupo-2009 A H1 recibidos para análisis, el estado del organismo de 2 especímenes no se
pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del
análisis posterior. Una muestra adicional fue excluida debido a un resultado inválido en FilmArray.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 39
i De los 58 especímenes de gripe A H3 recibidos para análisis, el estado del organismo de 4 especímenes no se pudo
confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis
posterior. j De los 36 especímenes de gripe B recibidos para análisis, el estado del organismo de 5 especímenes no se pudo
confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis
posterior. Una muestra adicional fue excluida debido a un resultado inválido en FilmArray. k Los resultados de Ct obtenidos durante la prueba de confirmación mediante PCR de las 10 muestras que no fueron
detectadas por FilmArray indicaron una baja cantidad del organismo en la muestra (intervalo Ct 34,3-38,7) posiblemente
resultado de la degradación de la muestra durante el almacenamiento de estos especímenes archivados. l Veintidós (22) especímenes negativos para M. pneumoniae fueron inicialmente identificadas por el laboratorio de origen
como positivas para M. pneumoniae, pero esto no se pudo confirmar mediante la PCR específica del organismo seguido
por secuenciación bidireccional. Siete (7) de estos especímenes fueron positivos cuando se analizaron con el
FilmArray RP. m
De los 38 especímenes de VP1 recibidos para análisis, el estado del organismo de 3 especímenes no se pudo confirmar
mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis posterior. n
De los 29 especímenes de VP2 recibidos para análisis, el estado del organismo de 1 espécimen no se pudo confirmar
mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis posterior. o
De los 13 especímenes de VP4 recibidos para análisis, el estado del organismo de 2 especímenes no se pudo confirmar
mediante la PCR específica del organismo seguido por secuenciación bidireccional, y se excluyeron del análisis posterior.
Prueba de especímenes artificiales de C. pneumoniae
No estaban disponibles para su ensayo especímenes de FNS archivados que anteriormente hubieran dado positivo
en el análisis de C. pneumoniae. Por tanto, se utilizaron especímenes artificiales de C. pneumoniae como sucedáneos
de especímenes clínicos para probar la sensibilidad y especificidad del ensayo FilmArray RP para C. pneumoniae.
Especímenes residuales que se habían recogido durante la evaluación clínica prospectiva se enriquecieron con
C. pneumoniae en niveles clínicamente relevantes (o no se enriquecieron; 50 de cada). El estado del organismo de
cada espécimen artificial fue ciego para los usuarios que analizaron los especímenes.
Tabla 20. Datos del rendimiento en FilmArray RP para especímenes artificiales de C. pneumoniae
Organismo
Coincidencia de porcentaje positivo (PPA)
Coincidencia de porcentaje negativo (NPA)
PV/PV +NF
Porcentaje IC 95% NV/NV+PF Porcentaje IC 95%
C. pneumoniae
50/50
100% 92,9–100%
50/50
100% 92,9–100%
Estudio clínico de comparación (FilmArray RP modificado comparado con el FilmArray RP original)
El FilmArray RP original fue modificado con la adición de un segundo ensayo para adenovirus para mejorar la
capacidad del dispositivo para detectar adenovirus. Para demostrar el rendimiento del FilmArray RP modificado,
se llevó a cabo un estudio de comparación mediante el análisis de 222 especímenes sin identificar de frotis
nasofaríngeos archivados recogidos entre 2008 y 2011 en EE. UU. (en al menos 8 ubicaciones geográficamente
diferentes) y en Escocia (en al menos 1 ubicación) tanto con el FilmArray RP original como con el FilmArray RP
modificado. El FilmArray RP modificado detectó un total de 26 especímenes de adenovirus, de estos solamente 15
fueron detectados por el FilmArray RP original, demostrando una tasa de detección superior en un 73% del FilmArray
RP modificado en este estudio clínico de comparación. Para los restantes 19 organismos del panel, el rendimiento fue
aparentemente equivalente entre las versiones de FilmArray RP original y modificada.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 40
Tabla 21. Comparación del rendimiento entre el FilmArray RP modificado y el FilmArray RP original usando especímenes
archivados
Analito Concordancia positiva Concordancia negativa
orig + mod +
orig + mod -
PPA IC 95% orig - mod -
orig - mod +
NPA IC 95%
Adenovirus 15 0 100%
(15/15) 78,2–100% 196 11
a
94,7% (196/207)
90,7–97,3%
CoV 229E 6 0 100% (6/6)
54,1–100% 216 0 100%
(216/216) 98,3–100%
CoV HKU1 8 0 100% (8/8)
63,1–100% 214 0 100%
(214/214) 98,3–100%
CoV NL63 15 1 b
93,8% (15/16)
69,8–99,8% 206 0 100%
(206/206) 98,2–100%
CoV OC43 13 0 100%
(13/13) 75,3–100% 208 1
c 99,5% (208/209)
97,4– 100%
MPVh 10 0 100%
(10/10) 69,2–100% 209 3
d 98,6% (209/212)
95,9–99,7%
VRH/VE 57 4 e 93,4%
(57/61) 84,0–98,2% 158 3
e 98,1% (158/161)
94,6–99,6%
Gripe A 36 0 100%
(36/36) 90,3–100% 184 1
f
99,5% (184/185)
97,0–100%
Gripe A H1 9 0 100% (9/9)
66,4–100% 213 0 100%
(213/213) 98,3–100%
Gripe A H1-2009
15 0 100%
(15/15) 78,2–100% 205 1
f 99,5% (205/206)
97,3–100%
Gripe A H3 13 0 100%
(13/13) 75,3–100% 209 0
100% (209/209)
98,3–100%
Gripe B 10 0 100%
(10/10) 69,2–100% 212 0
100% (212/212)
98,3–100%
VRS 21 0 100%
(21/21) 83,9–100% 201 0
100% (201/201)
98,2–100%
VP1 11 0 100%
(11/11) 71,5–100% 211 0
100% (211/211)
98,3–100%
VP2 8 0 100% (8/8)
63,1–100% 214 0 100%
(214/214) 98,3–100%
VP3 18 0 100%
(18/18) 81,5–100% 204 0
100% (204/204)
98,2–100%
VP4 6 0 100% (6/6)
54,1–100% 214 2 g 99,1%
(214/216) 96,7–99,9%
B. pertussis 25 1 h 96,2%
(25/26) 80,4–99,9% 196 0
100% (196/196)
98,1–100%
C. pneumoniae
1 0 100% (1/1)
n/a 221 0 100%
(221/221) 98,3–100%
M. pneumoniae
0 0 n/a n/a 222 0 100%
(222/222) 98,4–100%
orig = FilmArray RP original, mod = FilmArray RP modificado, PPA = Concordancia de porcentaje positivo, NPA = Concordancia de porcentaje negativo, IC = Intervalo de confianza. a
Se confirmó mediante análisis bidireccional de la secuencia que 10/11 de las detecciones de AdV adicionales realizadas por el FilmArray RP modificado contenían AdV; estos AdV fueron identificados por secuenciación como AdVC2, AdVC5, AdVC6, AdVE4 y un serotipo indeterminado. Un espécimen no se pudo secuenciar debido a los bajos niveles de analito.
b Se descubrió un solo espécimen positivo para CoV NL63 cuando se analizó con el cartucho RP original, pero no con el cartucho
RP modificado. El espécimen se había identificado anteriormente como positivo para B. pertussis y el laboratorio original no lo había analizado para CoV NL63. Este espécimen anteriormente ensayado usando el cartucho original fue negativo para CoV NL63. No hubo especímenes suficientes para llevar a cabo la investigación de discrepancias. Se sospecha que la baja carga de virus pudo haber causado este resultado falso.
c La discrepancia acerca del Coronavirus OC43 fue debida a reactividad cruzada entre el ensayo OC43 y el virus HKU1 que fue
detectado en el cartucho RP modificado y no en el cartucho RP original.
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d 2/3 especímenes discrepantes de metapneumovirus humano fueron confirmados mediante análisis bidireccional de la
secuencia. Se sospecha que la baja carga de virus es la responsable de haber evitado la detección mediante la secuenciacion del otro espécimen. e
0/7 especímenes discrepantes de rinovirus/enterovirus humano fueron confirmados mediante análisis bidireccional de la secuencia. Se sospecha que la baja carga de virus es la responsable de haber evitado la detección mediante la secuenciacion. f Un único espécimen que contenía gripe A H1-2009 proporcionó resultados dudosos en el cartucho RP original, pero fue
detectado por el cartucho modificado. g El virus paragripal 4 fue confirmado en ambos especímenes discrepantes mediante análisis bidireccional de la secuencia.
h B. pertussis fue confirmado en el espécimen discrepante mediante análisis bidireccional de la secuencia.
Para complementar los datos de especímenes archivados de organismos de baja prevalencia y para proporcionar
datos adicionales sobre el rendimiento de adenovirus específicamente para AdVC2 y AdVC6, se analizó un conjunto
de 44 especímenes artificiales (FNS enriquecidos) (10 AdVC2, 10 AdVC6, 10 C. pneumoniae, y 14 M. pneumoniae) y
con el FilmArray RP modificado como con el FilmArray RP original. El estado del organismo de cada espécimen
artificial fue ciego para los usuarios que analizaron los especímenes. El FilmArray RP modifiado detectó los
20 especímenes de adenovirus enriquecidos, mientras que el FilmArray RP original no detectó ninguno de los
especímenes de adenovirus enriquecidos. El FilmArray RP modificado también detectó otro adenovirus en el fondo de
un espécimen enriquecido con C. pneumoniae. El rendimiento fue aparentemente equivalente entre el FilmArray RP
modificado y el FilmArray RP original para C. pneumoniae y M. pneumoniae.
Tabla 22. Datos de comparación clínica entre el FilmArray RP modificado y el FilmArray RP original para 44 especímenes
artificiales
Organismo
Concordancia positiva Concordancia negativa
orig + mod +
orig + mod -
PPA IC 95% orig - mod -
orig - mod +
NPA IC 95%
Adenovirus (AdVC2 y AdVC6)
0 0 n/a n/a 23 21a 52,3%
(23/44) 36,7–67,5%
C. pneumoniae
8 1 88,9% (8/9)
51,8–99,7% 35 0 100%
(35/35) 90,0–100%
M. pneumoniae
14 0 100%
(14/14) 76,8–100% 30 0
100% (30/30)
88,4–100%
orig = FilmArray RP original, mod = FilmArray RP modificado, PPA = Concordancia de porcentaje positivo, NPA = Concordancia de porcentaje negativo, IC = Intervalo de confianza. a
Además de los diez especímenes enriquecidos con AdVC6 y los diez especímenes enriquecidos con AdVC2, el FilmArray RP modificado también detectó un adenovirus en el fondo de un espécimen que había sido enriquecido conC. pneumoniae. Esta detección fue confirmada mediante análisis bidireccional de la secuencia como AdVC2.
Los adenovirus detectados en especímenes archivados se clasificaron por grupos de serotipos mediante análisis bidireccional de la secuencia. Combinados, los datos de comparación de los especímenes archivados y artificales demuestran la detección mejorada de AdVC2, AdVC5, AdVC6, AdVE4 mediante el FilmArray RP modificado comparado con el FilmArray RP original.
Tabla 23. Detecciones por serotipo de adenovirus mediante el FilmArray RP modificado y el FilmArray RP original en
especímenes archivados y artificiales
Adenovirus (Serotipado mediante PCR)
Número de especímenes positivos para adenovirus
(detectados según el FilmArray RP modificado)
Detecciones mediante el FilmArray RP original
AdVC1 8 8/8 (100%)
AdVC2
15 a
2/15 (13%)
AdVC5 2 1/2 (50%)
AdVC6 16 a
1/16 (6%)
AdVB3 1 1/1 (100%)
AdVE4 3 2/3 (67%)
Serotipo de AdV desconocido 2 0/2 (0%)
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 42
a Diez especímenes de AdVC2 y diez especímenes de AdVC6 se realizaron de forma artificial enriqueciendo estos virus
en especímenes de FNS. Un AdVC2 también fue detectado, y su secuencia fue confirmada, en el fondo de un espécimen enriquecido con C. pneumoniae.
Límite de detección
La sensibilidad analítica o Límite de detección (LoD) de los organismos FilmArray RP se determinó mediante el
análisis de diluciones limitantes de cultivos o especímenes clínicos cuantificadas. El LoD se define como la menor
concentración a la que el organismo se detecta de una forma consistente (detección en ≥95% de las muestras
analizadas). La concentración del límite de detección (LoD) de cada analito de FilmArray RP incluido en la Tabla 24
se ha confirmado con la detección en, al menos, 19/20 réplicas (≥ 95 %) en los sistemas FilmArray y FilmArray 2.0.
El sistema FilmArray Torch detectó estos mismos analitos con un límite de detección (LoD) de 1x (según FilmArray 2.0)
con una tasa de ≥ 95 % (n = 20).
Tabla 24. LoD para los organismos detectados por FilmArray RP
Organismo Cepa Concentración del LoD
Adenovirusa
AdVC1
100 TCID50/mla
AdVC2
AdVE4
AdVC6
Coronavirus 229E ATCC VR-740 4 TCID50/ml
Coronavirus HKU1b Espécimen clínico
a 1,9 x 10
6 copias de ARN/ml
Coronavirus NL63 NR-470 5 TCID50/ml
Coronavirus OC43 ATCC VR-759 600 TCID50/ml
Enterovirus Echovirus 6 30.000 TCID50/mlc
Metapneumovirus humano hMPV-16, IA10-2003 (Tipo A1)
2 TCID50/ml
Rinovirus humano Tipo 1A 1 TCID50/ml
Gripe A H1N1 A/Brisbane/59/07 200 TCID50/ml
A/New Caledonia/20/99 2000 TCID50/ml
Gripe A H1-2009 A/SwineNY/03/2009 100 TCID50/ml
Gripe A H3N2 A/Wisconsin/67/2005 5 TCID50/ml
A/Port Chalmers/1/73 50 TCID50/ml
Gripe B B/FL/04/06
60 TCID50/ml B/Taiwan/2/62
Virus paragripal 1 Tipo 1 500 TCID50/ml
Virus paragripal 2 Tipo 2 10 TCID50/ml
Virus paragripal 3 Tipo 3 10 TCID50/ml
Virus paragripal 4 Tipo 4 (subtipo A) 5000 TCID50/ml
Virus respiratorio sincitial Tipo A 2 TCID50/ml
Bordetella pertussis A639 4000 UFC/ml
Chlamydophila pneumoniae TW183 3000 copias de ADN/ml
Mycoplasma pneumoniae M129 (Tipo 1) 30 TCID50/ml
a El límite de detección (LoD) de adenovirus de 100 TCID50/ml se confirmó mediante el FilmArray RP (v1.7) modificado.
El límite de detección (LoD) de adenovirus de FilmArray RP original fue de 300 TCID50/ml.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 43
b Coronavirus HKU1 se evaluó usando un espécimen clínico que contenía una carga elevada de coronavirus HKU1. El
espécimen se cuantificó mediante PCR en tiempo real frente a una curva patrón del transcrito sintético del ARN del
coronavirus HKU1 para obtener la cuantificación del ácido nucleico vírico en el espécimen (copias de ARN/ml). c El LoD de enterovirus (30.000 TCID50/ml representa la sensibilidad de los ensayos Entero1 y Entero2. Se puede obtener
un resultado positivo para rinovirus/enterovirus humano a concentraciones 100 veces inferiores (300 TCID50/ml) basadas
en la detección del virus con una combinación de 6 ensayos relevantes (HRV1-4, Entero1, y Entero2).
NOTA: La mayor parte de los virus volvieron a crecer y se cuantificaron en TCID50 (50% de la dosis infecciosa en
tejido cultivado) para determinar el LoD. La unidad TCID50 es una medida de la infectividad o citotoxicidad en lugar
del número de organismos o copias de ácido nucleico. La variabilidad en TCID50/ml puede que no refleje con
precisión las diferencias en la sensibilidad relativa de detección entre diferentes organismos o diferentes cepas del
mismo organismo.
Reactividad analítica (Inclusividad)
La reactividad analítica de los ensayos FilmArray RP se evaluó con un panel de inclusividad que consiste en
cepas/aislados que representan la diversidad genética, temporal, y geográfica del FilmArray RP: 33 adenovirus,
6 coronavirus (1 229E, 3 HKU1, 1 OC43, y 1 NL63), 10 metapneumovirus humano, 12 enterovirus, 14 rinovirus,
22 gripe A (incluyendo 10 gripe A H1, 3 gripe A H1-2009, y 9 gripe A H3), 11 gripe B, 12 virus paragripal (3 PIV1,
2 PIV2, 3 PIV3, y 4 PIV4), 6 virus respiratorio sincitial, 9 Bordetella pertussis, 4 Chlamydophila pneumoniae, y
9 Mycoplasma pneumoniae. Cada cepa se analizó inicialmente en una matriz simulada de muestra FNS en o cerca
del LoD (mediante el FilmArray RP original salvo que se indique otra cosa). Se probaron concentraciones más altas si
el organismo no se pudo detectar al LoD. Cada una de las 148 cepas analizadas en este estudio fueron detectadas
por el FilmArray RP.
Para algunos organismos, se llevó a cabo un análisis adicional de datos clínicos y análisis in silico de las secuencias
de la base de datos de la NCBI, con el fin de complementar el análisis del panel de inclusividad.
Adenovirus
Los ensayos de inclusividad de adenovirus se realizaron sobre 33 aislados de adenovirus que representaban
22 serotipos diferentes pertenecientes a las especies A-F. Cada aislado se ensayó a una concentración del LoD
(100 TCID50/ml) usando el FilmArray RP modificado. Si no se detectó un aislado de adenovirus al LoD, se repitió
el análisis a 10x LoD. Los aislados no detectados a 10x LoD (1000 TCID50/ml) se marcaron como No detectado,
sin embargo, se pudo observar cierta reactividad en algunos serotipos cuando estaban presentes en una muestra
a niveles más altos.
La Tabla 25 proporciona resultados de inclusividad para serotipos respiratorios que pertenecen a las especies B,
C, y E. El FilmArray RP fue diseñado para detectar todas las especies/serotipos respiratorios del adenovirus.
AdVB55 y AdVC57 son los únicos serotipos respiratorios que no fueron evaluados en la prueba de inclusividad.
La información disponible de la secuencia para estos serotipos indica una correspondencia perfecta con los
cebadores del ensayo de adenovirus FilmArray RP y se predice una detección eficaz a 1x LoD.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 44
Tabla 25. Resultados de la prueba de inclusividad para adenovirus - Serotipos respiratorios
Especie Serotipo Aislado Concentración
detectada
Multiplicidad de LoD
detectados
B
3 Zeptometrix #0810062CF 100 TCID50/ml 1x
7a Zeptometrix #0810021CF 100 TCID50/ml 1x
7d2 Iowa/2001 100 TCID50/ml 1x
7h Iowa/1999 100 TCID50/ml 1x
11 Wisconsin/2005 100 TCID50/ml 1x
14 Missouri/2005 100 TCID50/ml 1x
16 ATCC VR-17 100 TCID50/ml 1x
21 Missouri/2005 100 TCID50/ml 1x
34 Texas/2005 100 TCID50/ml 1x
35 ATCC VR-718 100 TCID50/ml 1x
50 ATCC VR-1602 100 TCID50/ml 1x
C
1 Zeptometrix #0810050CF 100 TCID50/ml 1x
2
New York/2004 100 TCID50/ml 1x
ATCC VR-846 100 TCID50/ml 1x
Aislado clínico #266153 100 TCID50/ml 1x
Aislado clínico #266161 100 TCID50/ml 1x
Aislado clínico #266213 100 TCID50/ml 1x
5 Zeptometrix #0810020CF 100 TCID50/ml 1x
6
Colorado/2005 100 TCID50/ml 1x
ATCC VR-6 100 TCID50/ml 1x
Aislado clínico #274924 100 TCID50/ml 1x
Aislado clínico #274948 100 TCID50/ml 1x
Aislado clínico #275032 100 TCID50/ml 1x
E 4a South Carolina/2004 100 TCID50/ml 1x
4p3 New Jersey/2005 100 TCID50/ml 1x
La Tabla 26 proporciona resultados de inclusividad para serotipos no respiratorios que pertenecen a las
especies A, D y F. La sensibilidad de la detección de adenovirus no respiratorios variará.
Tabla 26. Resultados de la prueba de inclusividad para adenovirus - Serotipos no respiratorios
Especie Serotipo Aislado Concentración
detectada Multiplicidad de LoD detectados
A
12 ATCC VR-863 No detectadoa
18 ATCC VR-19 No detectadoa
31 Zeptometrix #0810073CF 1000 TCID50/ml 10x
Db
8 Zeptometrix #0810069CF 100 TCID50/ml 1x
20 Zeptometrix #0810115CF 100 TCID50/ml 1x
37 Zeptometrix #0810119CF 100 TCID50/ml 1x
F 40 Zeptometrix #0810084CF No detectado
a
41 Indiana/2004 100 TCID50/ml 1x
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 45
a Los serotipos de adenovirus AdVA12, AdVA18 y AdVF40 no fueron detectados cuando se analizaron a 10x LoD
(TCID50/ml). b
La especie de adenovirus D comprendía más de 30 serotipos diferentes.
Información complementaria sobre la reactividad de adenovirus (datos clínicos procedentes de FilmArray RP original y
modificado):
Un subconjunto de especímenes clínicos prospectivos y retrospectivos archivados con resultado positivo en
FilmArray RP para adenovirus se sometió a PCR y a análisis bidireccional de la secuencia. El análisis BLAST de
los datos de las secuencias obtenidos de una región del exón del gen de adenovirus identificó la
especie B (serotipos 3, 3+11p, 7, 16 y 21), la especie C (serotipos 1, 2, 5 y 6), y la especie E (serotipo 4) en estos
especímenes clínicos. Las especies A, D, F y G (frecuentemente asociadas con conjuntivitis y gastroenteritis) no
fueron identificadas entre los especímenes clinicos.
Coronavirus 229E, HKU1, OC43 y NL63
Tabla 27. Resultados de las pruebas de inclusividad para coronavirus
Coronavirus Cepa / Aislado Concentración detectada
Multiplicidad de LoD
Detectado
229E ATCC VR-740 4 TCID50/ml 1x
HKU1
Espécimen clínico #1120 2,08 x 10
6
Copias de ARN/mlb
1,1x
Espécimen clínico #6123 1,41 x 10
4 TCID50/ml
a
~1,9 x 106 copias de ARN/ml
b
1x
Espécimen clínico #6213
(Tipo B)c
1,9 x 106 copias de ARN/ml
b 1x
NL63 Recursos BEI NR-470 50 TCID50/ml 1x
OC43 ATCC VR-759 600 TCID50/ml 1x
a El virus incluido en el Espécimen clínico n.º 6123 se hizo crecer en cultivo y se cuantificó (TCID
50/ml) mediante ensayo de
infectividad. b La cuantificación del ARN vírico incluido en los especímenes clínicos que contenían coronavirus HKU1 se llevó a cabo
usando RT-PCR en tiempo real frente a una curva patrón generada a partir de una plantilla de ARN sintético. c La clasificación del Coronavirus HKU1 Espécimen clínico n.º 6213 (Tipo B) fue determinada mediante análisis bidireccional
de la secuencia del gen de la nucleocápsida (N).
Metapneumovirus humano
Tabla 28. Resultados de las pruebas de inclusividad para el metapneumovirus humano
Subtipo ID de la cepa
Concentración
detectada
Multiplicidad de LoD
detectados
A1 9 IA3-2002 2 TCID50/ml 1x
16 IA10-2003 2 TCID50/ml 1x
A2 20 IA14-2003 2 TCID50/ml 1x
27 IA27-2004 2 TCID50/ml 1x
B1 3 Peru2-2002 2 TCID50/ml 1x
5 Peru3-2003 2 TCID50/ml 1x
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Subtipo ID de la cepa
Concentración
detectada
Multiplicidad de LoD
detectados
13 IA7-2003 2 TCID50/ml 1x
18 IA18-2003 2 TCID50/ml 1x
B2 8 Peru6-2003 2 TCID50/ml 1x
22 IA16-2003 2 TCID50/ml 1x
Rinovirus y enterovirus humano
Las pruebas de inclusividad analítica evaluaron la reactividad de los ensayos VHR y Entero del FilmArray RP con
25 serotipos individuales que representaban diferentes especies, incluyendo las especies A-D de enterovirus y
las especies A y B de rinovirus.
Tabla 29. Resultados de las pruebas de inclusividad para rinovirus / enterovirus humano
Especie Cepa / Serotipo
Concentración
detectada
Multiplicidad de LoDa
detectados
Enterovirus A
Coxsackievirus A10
ATCC VR-168 30.000 TCID50/ml 1x
Enterovirus 71 ATCC VR-1432
1:30.000 dilución de una solución madre
n/a
Enterovirus 71 9.400 TCID50/mlb <1x
Enterovirus B
Coxsackievirus A9 9.400 TCID50/mlb <1x
Coxsackievirus B3 30.000 TCID50/ml 1x
Coxsackievirus B4 30.000 TCID50/ml 1x
Echovirus 6 30.000 TCID50/ml 1x
Echovirus 9 9.400 TCID50/mlb <1x
Echovirus 11 300.000 TCID50/ml 10x
Enterovirus C
Coxsackievirus A21 /Kuykendall
ATCC VR-850 30.000 TCID50/ml 1x
Coxsackievirus A24 DN-19
ATCC VR-583 30.000 TCID50/ml 1x
Enterovirus D Enterovirus 68 (F02-3607 corn)
ATCC VR-1197 30.000 TCID50/ml 1x
Rinovirus A
A1 1 TCID50/ml 1x
A2 (HGP)
ATCC VR-482 10 TCID50/ml 10x
A7 (68-CV11)
ATCC VR-1601 1 TCID50/ml 1x
A16 (11757)
ATCC VR-283 10 TCID50/ml 10x
A34 (137-3)
ATCC VR-507 1 TCID50/ml 1x
A57 (Ch47)
ATCC VR-1600 100 TCID50/ml 100x
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Especie Cepa / Serotipo
Concentración
detectada
Multiplicidad de LoDa
detectados
A77 (130-63)
ATCC VR-1187 1 TCID50/ml 1x
A85 (50-525-CV54)
ATCC VR-1195 10 TCID50/ml 10x
Rinovirus B
B3 (FEB)
ATCC VR-483 1 TCID50/ml 1x
B14 (1059)
ATCC VR-284 1 TCID50/ml 1x
B17 (33342)
ATCC-282 100 TCID50/ml 100x
B27 (5870)
ATCC VR-1137 1 TCID50/ml 1x
B42 (56822)
ATCC VR-338 10 TCID50/ml 10x
B83 (Baylor 7)
ATCC VR-1193 1 TCID50/ml 1x
a El LoD para enterovirus usado en este estudio fue 30.000 TCID50/ml. El LoD para rinovirus fue 1 TCID50/ml.
b Las cepas fueron analizadas por debajo de la concentración LoD para enterovirus LoD debido a una menor concentración
del virus en el fluido de cultivo.
Información complementaria sobre la reactividad de rinovirus/enterovirus humano (datos clínicos y análisis in silico):
Además de las pruebas de inclusividad analítica, se llevó a cabo un análisis BLAST sobre los datos de las
secuencias obtenidas a partir de especímenes clínicos prospectivos y retrospectivos archivados que dieron
positivo en la prueba mediante FilmArray para rinovirus/enterovirus humano. En los especímenes clínicos se
identificaron las siguientes especies y subtipos:
Especie de enterovirus A: Enterovirus serotipo 71
Coxsackievirus A2 y A6
Especie de enterovirus B: Echovirus serotipos 3, 6, 7, 11, 15, 21 y 30
Coxsackievirus B1, B3 y A9
Enterovirus serotipos 81 y 88
Especie de Rhinovirus A: Rinovirus humano serotipos 1B, 8, 9,10, 13, 19, 21, 22, 23, 28, 30, 32, 34, 38, 39,
40, 46, 47, 49, 51, 54, 56, 58, 59, 61, 62, 66, 68, 75, 77, 78, 80, 82, 98 y 100
Especie de Rhinovirus B: Rinovirus humano serotipos 27, 69, 83 y 91
Rinovirus especie C: Al menos 3 cepas individuales y 12 aislados diferentesa
aEl rinovirus humano especie C (también conocida como enterovirus especie D) no se clasificó en serotipos.
El enterovirus especie C incluye los tipos 1-3 del virus de la poliomielitis. La reactividad simulada de los ensayos
FilmArray RP para rinovirus/enterovirus humano con secuencias de enterovirus especie C y virus de la
poliomielitis se generó mediante un enfoque bioinformático. El alineamiento de las secuencias de cebadores del
ensayo con las secuencias listadas en GenBank indicó que el ensayo FilmArray RP puede reaccionar con los
tipos 1, 2 y 3 del virus de la poliomielitis, proporcionando un resultado de rinovirus/enterovirus humano.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 48
Tabla 30. Reactividad simulada de los ensayos VRH y entero de FilmArray RP con secuencias del virus de la poliomielitis
Cepa GenBank ID Resultado simulado en FilmArray RP
Poliovirus humano 1 cepa CHN8264c/GZ/CHN/2004 FJ769385 Rinovirus/enterovirus humano
Poliovirus humano 2, genoma completo AY177685 Rinovirus/enterovirus humano
Poliovirus humano 3 cepa IRA10853, genoma completo EU684056 Rinovirus/enterovirus humano
Gripe A
Tabla 31. Resultados de las pruebas de inclusividad para aislados humanos de gripe A
Tipo Cepa
Concentración
detectada
Multiplicidad de LoD
detectados
Gripe A
H1
A/Brisbane/59/07 200 TCID50/ml 1x
A/Solomon Islands/3/2006 200 TCID50/ml 1x
A/Hawaii/15/01
CDC#2001701117 1:300
a n/a
A/New Caledonia/20/99 200 TCID50/ml 1x
A1/Denver/1/57 200 TCID50/ml 1x
A/Mal/302/54 200 TCID50/ml 1x
A1/FM/1/47 200 TCID50/ml 1x
A/Weiss/43 200 TCID50/ml 1x
A/PR/8/34 2000 TCID50/ml 10x
A/NWS/33 200 TCID50/ml 1x
Gripe A
H1-2009
A/SwineNY/01/2009 100 TCID50/ml 1x
A/SwineNY/02/2009 100 TCID50/ml 1x
A/SwineNY/03/2009 100 TCID50/ml 1x
Gripe A
H3
A/Brisbane/10/07 5 TCID50/ml 1x
A/Wisconsin/67/2005 5 TCID50/ml 1x
A/NewYork/55/2005
CDC#2005705561 1:300.000
a n/a
A/Victoria/3/75 5 TCID50/ml 1x
A/Port Chalmers/1/73 5 TCID50/ml 1x
A/Aichi/2/68 50 TCID50/ml 10x
A/Hong Kong/8/68 5 TCID50/ml 1x
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 49
Tipo Cepa
Concentración
detectada
Multiplicidad de LoD
detectados
Alice (vaccine) A/England/42/72
ATCC VR-776 5 TCID50/ml 1x
MRC-2 Cepa recombinante
ATCC VR-777 5 TCID50/ml 1x
a La cepa no se volvió a cultivar ni a titular. Se usaron diluciones del cultivo/títulos originales procedentes de CDC.
El título de HA para A/Hawaii/15/01 es desconocido y el título de HA para A/NewYork/55/2005 fue 256.
Información complementaria sobre reactividad para cepas de gripe de origen humano, porcino y aviar (datos de pruebas
analíticas y análisis in silico):
Los virus de la gripe A se clasifican por hospedador y subtipo, una combinación de tipos de H (hemaglutinina) y N
(neuraminidasa). Ocasionalmente, cepas de la gripe no humana se tranfieren a hospedadores humanos. Algunas
cepas de gripe porcina y aviar se probaron o analizaron mediante bioinformática para determinar su reactividad
con los ensayos de la gripe A y de subtipado incluidos en el FilmArray RP. Los ensayos gripe A (FluA-pan1 y
FluA-pan2) fueron diseñados para reaccionar con todas las cepas de la gripe A. Los ensayos de subtipado de la
gripe A incluidos en el FilmArray RP (FluA-H1-pan, FluA-H1-2009 y FluA-H3) fueron diseñados para reaccionar
con subtipos específicos HA, con un interés especial en las cepas de hospedadores humanos. En ensayo FluA-
H1-2009 fue diseñado para ser específico de la variante pandémica humana del virus H1N1 de origen porcino que
apareció en 2009.
Las pruebas de aislados víricos o de ácidos nucleicos procedentes de cultivos víricos indicaron que los ensayos
de la gripe A y de subtipado incluidos en FilmArray RP reaccionan con algunas cepas de origen porcino y aviar tal
como se esperaba (Tabla 32)
Tabla 32. Resultados de las pruebas de inclusividad con algunos aislados de la gripe A de origen porcino y aviar
Hospedador Subtipo Aislado / Cepa
Concentración de
la prueba
FilmArray
Resultado
Porcino H1N1 Influenza A/Swine/1976/31 ~1 x 10
6 EID50/ml
Gripe A H1a
H1N1 Influenza A/Swine/Iowa/15/30 ~1 x 107
EID50/ml
Aviar H1N2 Kilbourne F63
A/NWS/34 (HA) x A/Rockefeller Institute/5/57 (NA)b
14,8 ng de ARN Gripe A H1
a No se observó reactividad con el ensayo de subtipado H1-2009 u otros ensayos del FilmArray RP.
b Se obtuvo ARN purificado y cuantificado de un cultivo de gripe aviar procedente de Recursos BEI.
Las pruebas de laboratorio de las cepas de la gripe A fueron complementadas con predicciones de la reactividad
in silico usando bioinformática y alineamientos de secuencias entre los cebadores del ensayo FilmArray RP y las
secuencias de gripe A de origen humano, porcino y aviar. Para cada cepa, se evaluaron varias (3) GenBank IDs,
correspondientes a los segmentos génicos a los que se dirigen los ensayos FilmArray RP (matrix [MA], no
estructural [NES] y de hemaglutinina [HA]). Se determinó la reactividad simulada en función del número y
ubicación de emparejamientos incorrectos en la región diana.
Basándose en este análisis, se prevé que las cepas relacionadas en la Tabla 33 reaccionen con los ensayos de
gripe A y de subtipado H1 o H3 en FilmArray RP tal como se indica.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 50
Tabla 33. Reactividad simulada de los ensayos de gripe A en FilmArray para cepas de origen humano, porcino y aviar.
Hospedador Subtipo Aislado / Cepa GenBank ID
Resultado de FilmArray simulado
Humano
H1N1 A/California/UR06-0393/2007(H1N1)
CY026540
Gripe A H1
CY026543
CY026539
H1N2 A/New York/297/2003(H1N2)
CY002668
CY002665
CY002664
H1-2009 A/Aalborg/INS133/2009(H1N1)
CY063606 Gripe A H1-
2009 CY063610
CY063607
H3N2 A/Boston/38/2008(H3N2)
CY044581
Gripe A H3
CY044584
CY044580
A/(H3N2)va A/Pennsylvania/09/2011(H3N2)
JN655537
JN655534
JN655538
Porcino
H1N1 A/swine/Wisconsin/1/1971(H1N1)
CY022414
Gripe A H1
CY022417
CY022413
H1N2 A/swine/Hong Kong/NS857/2001(H1N2)
GQ229348
GQ229350
GQ229347
Aviar
H3N1 A/blue-winged teal/ALB/452/1983(H3N1)
CY004635
Gripe A H3
CY004638
CY005940
H3N5 A/mallard/Netherlands/2/1999(H3N5)
CY060261
CY060264
CY060265
H3N7 A/northernshoveler/California/HKWF1367/2007(H3N7)
CY033372
CY033375
CY033376
H3N8 A/American black duck/Washington/699/1978(H3N8)
GU052299
GU052302
GU052300 aLa variante del virus H3N2 de origen porcino fue identificada en especímenes de origen humano en 2011. Todas las
secuencias disponibles en GenBank (a fecha del 12 de diciembre de 2011) fueron evaluadas y se proporciona en esta tabla un
único representante individual. Se prevé que todos los aislados cuyas secuencias estaban disponibles generen un resultado de
gripe A H3 en su análisis con el FilmArray RP.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 51
Se prevé que las cepas de origen humano, porcino y aviar relacionadas en la Tabla 34 reacciones solamente con los ensayos de gripe A (FluA-pan1 y FluA-pan2) del FilmArray RP proporcionando un resultado Gripe A (ingún subtipo detectado).
Tabla 34. Reactividad simulada de los ensayos de gripe A en FilmArray para cepas de origen humano, porcino y aviar.
Hospedador Subtipo Cepa GenBank ID Reactividad
simulada en FilmArray RP
Humano
H2N2 A/Albany/20/1957(H2N2)
CY022013
Gripe A (ningún subtipo
detectado)
CY022014
CY022017
H5N1
A/Cambodia/R0405050/2007(H5N1)
HQ200572
HQ200573
FJ225472
A/Hong Kong/486/97(H5N1)
AF084281
AF255368
AF115289
H7N2 A/New York/107/2003(H7N2)
EU587368
EU587373
EU587374
H7N3 A/Canada/rv504/2004(H7N3)
CY015006
CY015007
CY015010
H7N7 A/Netherlands/219/03(H7N7)
AY340089
AY342422
AY338459
H9N2 A/Hong Kong/1073/99(H9N2)
AJ404626
AJ278647
AJ278649
Porcino
H1N2 A/swine/Sweden/1021/2009(H1N2)
GQ495135
GQ495136
GQ495132
H5N1 A/swine/East Java/UT6010/2007(H5N1)
HM440124
HM440111
HM440123
Aviar
H2N2
A/chicken/New York/13828-3/1995(H2N2)
CY014822
CY014825
CY014821
A/Japan/305/1957(H2N2)
CY045804
CY014977
CY014980
A/Korea/426/1968(H2N2)
CY031595
CY031596
CY031599
H3N2 A/American black duck/North Carolina/ 675-075/2004(H3N2)
GU051135
GU051136
GU051137
H3N6 A/American black duck/New Brunswick/25182/2007(H3N6)
CY047696
CY047697
CY047700
H4N6 A/blue-winged teal/Minnesota/ Sg-00043/2007(H4N6)
CY063977
CY063978
CY063981
H5N1 A/rook/Rostov-on-Don/26/2007(H5N1)
EU814503
EU814504
EU814507
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 52
Hospedador Subtipo Cepa GenBank ID Reactividad
simulada en FilmArray RP
A/turkey/VA/505477-18/2007(H5N1)
GU186509
GU186510
GU186513
A/chicken/Bangladesh/1151-10/ 2010(H5N1)
HQ156765
HQ156766
HQ156764
H5N2 A/duck/Pennsylvania/10218/1984(H5N2)
AB295603
AB286120
AB286652
H5N3 A/duck/Singapore/F119/3/1997(H5N3)
GU052802
GU052803
GU052805
H6N1 A/duck/PA/486/1969(H6N1)
EU743286
EU743287
EU743289
H6N2 A/mallard/Czech Republic/ 15902-17K/2009(H6N2)
HQ244430
HQ244433
HQ244434
H7N7 A/mallard/Korea/GH171/2007(H7N7)
FJ750872
FJ959087
FJ959090
H9N2 A/turkey/Wisconsin/1/1966(H9N2)
CY014663
CY014664
CY014667
H10N7 A/chicken/Germany/N/1949(H10N7)
GQ176136
GQ176135
GQ176132
H11N9 A/duck/Memphis/546/1974(H11N9)
CY014691
GQ257441
CY014687
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 53
Gripe B
Tabla 35. Resultados de la prueba de inclusividad para la gripe B
Cepa Concentración detectada
Multiplicidad de
LoD detectados
B/FL/04/06 60 TCID50/ml 1x
B/Ohio/01/2005
CDC#2005743348 1:3.000.000
a n/a
B/Florida/07/04 60 TCID50/ml 1x
B/Malaysia/2506/04 600 TCID50/ml 10x
B/Hong Kong/5/72 ATCC VR-823 60 TCID50/ml 1x
B/Taiwan/2/62 ATCC VR-295 60 TCID50/ml 1x
B/Maryland/1/59 ATCC VR-296 600 TCID50/ml 10x
B/GL/1739/54 ATCC VR-103 60 TCID50/ml 1x
B/Allen/45 ATCC VR-102 6000 EID50/ml n/a
B/Lee/40ATCC VR-101 60 TCID50/ml 1x
B/Brigit Recombinant ATCC VR-786 60 TCID50/ml 1x
a La cepa no se volvió a cultivar ni a titular. Se usaron diluciones del cultivo/títulos originales procedentes de CDC.
El título de HA para B/Ohio/01/2005 fue 128.
Virus paragripales
Tabla 36. Resultados de la prueba de inclusividad para los virus paragripales
Tipo Cepa o fuente Concentración
Multiplicidad de
LoD detectados
VP1
Zeptometrix #0810014CF 500 TCID50/ml 1x
C-35 ATCC VR-94 500 TCID50/ml 1x
C39 BEI NR-3226 500 TCID50/ml 1x
VP2 Zeptometrix #0810015CF 10 TCID50/ml 1x
Greer ATCC VR-92 10 TCID50/ml 1x
VP3
Zeptometrix #0810016CF 10 TCID50/ml 1x
C-243 ATCC VR-93 500 TCID50/ml 50x
NIH 47885 BEI NR-3233 100 TCID50/ml 10x
VP4 A
M25 ATCC VR-1378 5000 TCID50/ml 1x
Zeptometrix #0810060CF 5000 TCID50/ml 1x
B CH-19503 ATCC VR-1377 5000 TCID50/ml 1x
Zeptometrix #08010060BCF 5000 TCID50/ml 1x
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 54
Virus respiratorio sincitial
Tabla 37. Resultados de la prueba de inclusividad para el virus respiratorio sincitial
Tipo Cepa o fuente
Concentración
detectada
Multiplicidad de
LoD detectados
A
Zeptometrix #0810040ACF 2 TCID50/ml 1x
A/A2 ATCC VR-1540 2 TCID50/ml 1x
A/Long ATCC VR-26 2 TCID50/ml 1x
B
B/9320 ATCC VR-955 2 TCID50/ml 1x
B/Wash18537/62 ATCC VR-1580 2 TCID50/ml 1x
B/WV/14617/85 ATCC VR-1400 2 TCID50/ml 1x
Bordetella pertussis
Tabla 38. Resultados de la prueba de inclusividad para Bordetella pertussis
Cepa Concentración detectada Multiplicidad de LoD
detectados
A639 4000 UFC/ml 1x
E431 4000 UFC/ml 1x
F ATCC 8467 4000 UFC/ml 1x
5 [17921] ATCC 9340 4000 UFC/ml 1x
18323 [NCTC 10739] ATCC 9797 4000 UFC/ml 1x
10-536 ATCC 10380 4000 UFC/ml 1x
CNCTC Hp 12/63 [623] ATCC 51445 4000 UFC/ml 1x
Tohama I ATCC BAA-589
(cepa de la vacuna) 4000 UFC/ml 1x
MN2531 ATCC BAA-1335 4000 UFC/ml 1x
Chlamydophila pneumoniae
Tabla 39. Resultados de la prueba de inclusividad para Chlamydophila pneumoniae
Cepa Concentración detectada Multiplicidad de
LoD detectados
AR-39 ATCC 53592 3000 copias/ml 1x
CDC/CWL-029 VR-1310 3000 copias/ml 1x
CM-1 ATCC VR-1360 3000 copias/ml 1x
TW183 ATCC VR-2282 3000 copias/ml 1x
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 55
Mycoplasma pneumoniae
Tabla 40. Resultados de la prueba de inclusividad para Mycoplasma pneumoniae
Tipo Cepa Concentración detectada Multiplicidad de
LoD detectadosb
Tipo 1
M129 30 TCID50/ml 1x
M129-B7
ATCC 29342 300 UCC/ml
a 10x
PI 1428
ATCC 29085 3000 UCC/ml 100x
Tipo 2
FH strain [NCTC 10119]
ATCC 15531 300 UFC/ml
c n/a
[Mac]
ATCC 15492 300 UCC/ml 10x
No determinado
[M52]
ATCC 15293 300 UCC/ml 10x
[Bru]
ATCC 15377 30.000 UCC/ml 1000x
Mutant 22
ATCC 39505 30 UCC/ml 1x
UMTB-10G
ATCC 49894 300 UCC/ml 10x
a UCC= unidad de cambio de color. Tanto el TCID50 como UCC se determinaron según el método de Reed-Muench.
La cuantificación en UCC/ml se consideró equivalente al TCID50/ml en términos de cuantificación. b Tras las pruebas de inclusividad, todos los aislados de M. pneumoniae anteriormente cuantificados en UCC/ml se volvieron a
evaluar por PCR en tiempo real frente a una curva patrón con el LoD de la cepa (M129, TCID50/ml). Basándose en la
cuantificación molecular relativa, todos los aislados fueron detectados a niveles <1x–10x LoD, en lugar de 1-1000x LoD
determinados mediante UCC/ml. ATCC 49894, ATCC 15293, ATCC 29342 y ATCC 39505 fueron detectados en o por debajo
de 1x LoD, mientras que ATCC 15492, ATCC 29085 y ATCC 15377 fueron detectados entre 1-10x LoD. c Este ha sido el único aislado de M. pneumoniae el panel capaz de formar colonias en placa y fue cuantificado en UFC/ml.
Especificidad analítica (Reactividad cruzada y exclusividad)
La posible reactividad cruzada entre los ensayos incluidos en el FilmArray RP fue evaluada analizando muestras
FNS simuladas que contenían elevadas concentraciones de los organismos respiratorios del panel (de decenas a
miles de veces superiores al LoD). Las pruebas de exclusividad se realizaron con el FilmArray RP modificado,
salvo donde se indica. No se observó reactividad cruzada con las cepas y concentraciones relacionadas en la
Tabla 41.
NOTA: El ensayo del coronavirus OC43 puede reaccionar de forma cruzada con algunas cepas del coronavirus
HKU1 cuando está presente en la muestra a elevadas concentraciones.
Tabla 41. Resultados de la prueba de reactividad cruzada con organismos del FilmArray RP
Virus o bacteria Tipo / Cepa
Concentración de la
prueba Multiplicidad de LoD analizados
Adenovirus AdVC1 1,00x105 TCID50/ml 1000x
Coronavirus
229E
ATCC VR-740 5,67x10
3 TCID50/ml 1418x
HKU1a
Espécimen clínico 42/08 1,34x10
8 copias/ml 70x
NL63
NR-470 5,67x10
3 TCID50/ml 1134x
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 56
Virus o bacteria Tipo / Cepa
Concentración de la
prueba Multiplicidad de LoD analizados
OC43
ATCC VR-759 7,30x10
4 TCID50/ml 122x
Metapneumovirus
humano
Tipo A1 MPVh-16
IA10-2003 A1 8,17x10
3 TCID50/ml 4085x
Rinovirus/enterovirus
humano
Echovirus 6 3,40x106 TCID50/ml 113x
Rinovirus A1 5,67x103 TCID50/ml 5670x
Gripe A
H1N1
A/Brisbane/59/07 1,00x105 TCID50/ml 500x
A/New Caledonia/20/99b 1,00x10
5 TCID50/ml 500x
A/PR/8/34b 1,00x10
6 TCID50/ml 5000x
A1/FM/1/47b 4,70x10
3 TCID50/ml 24x
A/NWS/33b 4,70x10
3 TCID50/ml 24x
A1/Denver/1/57b 4,70x10
3 TCID50/ml 24x
A/Solomon Islands/3/2006 b
1,39x104 TCID50/ml 70x
A/Weiss/43b 4,70x10
3 TCID50/ml 24x
A/Mal/302/54b 1,39x10
4 TCID50/ml 70x
Gripe A
H1-2009 A/SwineNY/03/2009 8,40x10
4 TCID50/ml 840x
Gripe A
H3N2
A/Wisconsin/67/2005 8,17x103 TCID50/ml 1634x
A/Victoria/3/75b 4,70x10
3 TCID50/ml 940x
A/Port Chalmers/1/73b 5,67x10
3 TCID50/ml 1134x
A/Aichi/2/68b 1,00x10
5 TCID50/ml 20.000x
A/Hong Kong/8/68b 1,00x10
5 TCID50/ml 20.000x
A/Aliceb 4,70x10
3 TCID50/ml 940x
A/MRC 2b 8,17x10
3 TCID50/ml 1634x
A/Brisbane/10/07b 8,17x10
3 TCID50/ml 1634x
Gripe B
B/FL/04/06 1,67x104 TCID50/ml 278x
B/Lee/40b 8,17x10
3 TCID50/ml 136x
B/Taiwan/2/62b 5,03x10
4 TCID50/ml 838x
B/GL/1739/54b 8,17x10
3 TCID50/ml 136x
B/Maryland/1/59b 8,17x10
3 TCID50/ml 136x
B/Florida/07/04b 1,00x10
5 TCID50/ml 1667x
B/Malaysia/2506/04b 5,67x10
3 TCID50/ml 95x
B/Allen/45b 1,00x10
5 TCID50/ml 1667x
B/HongKong/5/72b 8,17x10
3 TCID50/ml 136x
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 57
Virus o bacteria Tipo / Cepa
Concentración de la
prueba Multiplicidad de LoD analizados
B/Brigitb 3,50x10
4 TCID50/ml 583x
Virus paragripales
Tipo 1 1,39x104 TCID50/ml 28x
Tipo 2 1,6x104
TCID50/ml 1670x
Tipo 3 1,00x105 TCID50/ml 10.000x
Tipo 4A 5,67x103 TCID50/ml
c 1,13x
c
Virus respiratorio
sincitial
A 1,39x104 TCID50/ml 6950x
B 2,14x104 TCID50/ml 10.700x
Bordetella pertussis
E431b
1,00x106 UFC/ml 250x
A639
ATCC 8467b
ATCC 9797b
ATCC 51445b
ATCC BAA-589b
ATCC 9340b
ATCC 10380b
ATCC BAA-1335b
Chlamydophila
pneumoniae TW183 2,42x10
5 copias/ml 81x
Mycoplasma
pneumoniae
M129 1,88x105 TCID50/ml 6267x
ATCC 15531b 4,27x10
5 UFC/ml n/a
ATCC 15293b
1,00x106
UCC/ml 33.333x
ATCC 15377b
ATCC 15492b
ATCC 29085b
ATCC 29342b
ATCC 39505b
ATCC 49894b
a No se observó reactividad cruzada entre el aislado de coronavirus HKU1 y el ensayo del coronavirus OC43 para la
concentración analizada Sin embargo, en el conjunto de datos clínicos, 2 especímenes mostraron reactividad cruzada entre el
ensayo OC43 y el virus HKU1 contenido en el espécimen. b
Se llevó a cabo una prueba de exclusividad con el FilmArray RP original. c
El virus paragripal 4A no se pudo analizar a concentraciones elevadas debido al título relativamente bajo del cultivo del virus almacenado.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 58
El potencial del FilmArray RP para reaccionado de forma cruzada con organismos no pertenecientes al sistema
FilmArray RP fue evaluado mediante análisis de un panel de exclusividad constituido por 26 bacterias, 6 virus y
1 levadura. Estos organismos fueron seleccionados por su relación con los organismos incluidos en FilmArray RP,
su relevancia clínica (causan síntomas respiratorios o representan la flora nasofaríngea) o tienen una elevada
prevalencia entre la población (p. ej. el virus del herpes simple). Se enriqueció una matriz de muestra negativa con
las bacterias o los hongos a una concentración de 106 UFC/ml y los virus a una concentración entre 10
4 -
105 TCID50/ml, o la mayor concentración posible. El FilmArray RP no reaccionó de forma cruzada con los
organismos del panel de exclusividad relacionados en la Tabla 42.
Tabla 42. Panel de exclusividad no FilmArray RP – No se observó reactividad cruzada con el organismo relacionado
Virus Cepa / Aislado
Bocavirus Espécimen clínico
Citomegalovirus (CMV) AD-169 (VR-538)
Virus de Epstein-Barr (VEB) B95-8
Virus del herpes simple Tipo 1
Virus del sarampión Edmonston
Paperas Zeptometrix # 0810079CF
Levadura Cepa / Aislado
Candida albicans Zeptometrix #0801504
Bacteria Cepa / Aislado
Bordetella bronchisepticaa Aislado clínico
Bordetella holmesii F061
Bordetella parapertussisa A747
Chlamydia trachomatis D-UW3
Corynebacterium diptheriae ATCC14779
Escherichia coli O157:H7
Haemophilus influenzae MinnA
Lactobacillus acidophilus Cepa de tipo
Lactobacillus plantarum 17-5
Legionella longbeacheae Long Beach 4
Legionella micdadei Tatlock
Legionella pneumophilia Philadelphia
Moraxella catarrhalis Ne 11 (cepa de tipo)
Mycobacterium tuberculosis H37Ra-1
Mycoplasma hominis ATCC 23114
Mycoplasma genitalium ATCC 33530
Neisseria elongate Cepa de tipo
Neisseria gonorrhoeae ATCC 700825
Neisseria meningitidis M1027 (cepa de tipo)
Pseudomonas aeruginosa Zeptometrix #0801519
Staphylococcus aureus COL
Staphylococcus epidermidis RP62A
Streptococcus pneumoniae Tipo 59
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 59
Virus Cepa / Aislado
Streptococcus pyogenes Zeptometrix #0801512
Streptococcus salivarius ATCC 13419
Ureaplasma urealyticum ATCC 27618
a Aunque no se ha observado en este estudio, el ensayo Bordetella pertussis de FilmArray RP puede tener una reacción
cruzada con cepas de B. bronchiseptica y B. parapertussis que tengan un pseudogen de la toxina tosferínica (consulte la
sección Limitaciones).
Pruebas complementarias de exclusividad analítica para cepas de gripe de origen aviar:
Se llevó a cabo una prueba adicional de exclusividad analítica (mediante el FilmArray RP original) bien con
aislados vivos o ARN genómico purificado de cepas de gripe A de hospedador aviar con los siguientes resultados:
Tabla 43. Resultados de las pruebas de exclusividad de virus o ácido nucleico procedentes de aislados de la gripe A de origen aviar
Hospedador Subtipo Aislado / Cepa Concentración de
la pruebaa
Resultado de FilmArray
Aviar
H2N2
A/Japan/305/57 3,3 ng de ARN
Gripe A (ningún subtipo
detectado)
Kilbourne F38 A/Korea/426/68 (HA, NA) x A/Puerto Rico/8/34
6,3 ng de ARN
H5N1 A/Vietnam/1203/2004 R-H5 N/Ab
H5N2 A/duck/Pennsylvania/10218/84 2,5 ng de ARN
H5N3 Kilbourne F181
A/duck/Singapore/645/97 247 ng de ARN
H7N2 A/NewYork/107/2003 N/A
b
H7N3 A/Mallard/Netherlands/12/2000 N/A
b
H10N7 A/chicken/Germany/N/49 68 ng de ARN
a Se obtuvo ARN purificado y cuantificado de cultivos de gripe aviar procedentes de Recursos BEI
b Título de virus HA almacenados procedentes de CDC = 128. Se analizaron veinte microlitros de virus almacenado.
Información complementaria sobre la exclusividad para el coronavirus SARS:
Se llevó a cabo un análisis in silico de la secuencia del virus del SARS (GenBank ID NC_004718.3) frente a los
cebadores de cada uno de los 4 ensayos para coronavirus del FilmArray RP. Cuando los cebadores del ensayo
del coronavirus no-SARS se alinearon con la correspondiente secuencia diana del virus SARS, cada cebador
contenía al menos 6 emparejamientos erróneos. Según los alineamientos, no se prevé reactividad entre el virus
SARS y los 4 ensayos para coronavirus del FilmArray RP.
Contaminación cruzada y arrastre
Para evaluar la contaminación cruzada o arrastre, se introdujeron muestras fuertemente positivas (Tabla 41) y se
analizaron una junto a otra con otras muestras fuertemente positivas que contenían diferentes organismos. No se
observaron resultados falsos positivos, indicando que el diseño del sistema y las prácticas recomendadas para
manipular la muestra son eficaces para evitar el arrastre.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 60
Reproducibilidad
Se llevó a cabo un estudio de reproducibilidad multicéntrico para determinar la reproducibilidad entre centros y
global del FilmArray RP. Las pruebas de reproducibilidad se realizaron en tres centros de prueba usando el
FilmArray RP original y un panel de doce especímenes FNS simulados enriquecidos con varias combinaciones de
organismos en tres niveles de prueba diferentes: positivo intermedio (3X LoD), positivo bajo (1X LoD) y negativo
alto (LoD/10). Se prevé que el nivel de la prueba de negativo alto genere resultados positivos en
aproximadamente 20-80% de las muestras analizadas. Cada día de prueba, dos operarios de cada centro
analizaron dos alícuotas de especímenes en dos instrumentos FilmArray diferentes (seis especímenes por
operador por instrumento por día). Cada espécimen fue analizado cuatro veces al día durante cinco días en los
tres centros de prueba, con un total de 60 pruebas por organismo y concentración. En el estudio de
reproducibilidad se utilizaron un total de 26 lotes de reactivos y 20 instrumentos FilmArray. Los resultados Positivo,
Dudoso, Negativo y los datos Tm para cada organismo se resumen en las tablas siguientes:
Tabla 44. Resumen de resultados de coincidencia positiva, coincidencia negativa y Tm para el análisis de reproducibilidad de
organismos en un único ensayo
Adenovirus AdVC1
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
c
900 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,74 0,24 83,33 - 84,26
Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 84,23 0,21 83,95 - 84,60
Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,76 0,28 83,03 - 84,13
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 83,93 0,36 83,03 - 84,60
Positivo bajo (1X LoD)
c
300 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,42 0,28 83,01 - 83,98
Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,90 0,26 83,54 - 84,30
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,62 0,38 83,05 - 84,64
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 83,64 0,39 83,01 - 84,64
Negativo altob
(LoD/10)c
30 TCID50/ml
Centro A 18/20 2/20 90,0% 68,3% – 98,8% 83,33 0,26 83,02 - 83,76
Centro B 16/20 4/20 80,0% 56,3% – 94,3% 83,71 0,30 82,93 - 84,29
Centro C 10/20 10/20 50,0% 27,2% – 72,8% 83,26 0,31 82,61 - 83,86
Todos los
centros 44/60 16/60 73,3% 60,3% – 83,9% 83,43 0,38 82,61 - 84,29
Negativo
Centro A 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro B 0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C 0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% – 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 61
c Las pruebas de reproducibilidad se llevaron a cabo antes de la modificación del panel para incluir un segundo ensayo de
adenovirus. Las concentraciones de prueba y diferentes LoD reflejan el LoD para adenovirus antes de la modificación del panel (300 TCID50/ml).
Coronavirus 229E ATCC VR-740
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
12 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
81,20 0,20 80,81 - 81,47
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
81,80 0,32 81,35 - 82,18
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
81,35 0,34 81,03 - 82,13
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,37 0,40 80,81 - 82,18
Positivo bajo (1X LoD)
4 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
81,19 0,21 80,83 - 81,66
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
81,62 0,25 81,12 - 82,08
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
81,09 0,32 80,30 - 81,56
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,31 0,38 80,30 - 82,08
Negativo altob
(LoD/10)
0,4 TCID50/ml
Centro A
14/20 6/20 70% 45,7% -,88,1%
81,06 0,22 80,72 - 81,43
Centro B
7/20 13/20 35% 15,4% -,59,2%
81,54 0,24 81,15 - 82,08
Centro C
11/20 9/20 55% 31,5% -,76,9%
81,17 0,24 80,70 - 81,68
Todos los
centros 32/60 28/60 53,3%
40,0% -,66,3%
81,25 0,34 80,70 - 82,08
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Coronavirus HKU1 Tipo B
(Espécimen clínico 6123) Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,61 0,23 75,37 - 76,02
Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 76,02 0,26 75,58 - 76,33
Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,49 0,32 74,96 - 75,90
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 62
Coronavirus HKU1 Tipo B
(Espécimen clínico 6123) Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
5,7 x 106 copias
de ARN/ml Todos los centros
60/60 0/60 100% 94,0% -100% 75,69 0,41 74,96 - 76,33
Positivo bajo (1X LoD)
1,9 x 10
6 copias
de ARN/ml
Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,47 0,22 74,96 - 75,79
Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,89 0,20 75,59 - 76,12
Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 75,35 0,30 74,83 - 75,81
Todos los centros
60/60 0/60 100% 94,0% -100% 75,55 0,40 74,83 - 76,12
Negativo altob
(LoD/10)
1,9 x 105 copias
de ARN/ml
Centro A 15/20 5/20 75,0% 50,9% -,91,3% 75,51 0,28 75,06 - 75,90
Centro B 17/20 3/20 85,0% 62,1% -,96,8% 75,85 0,22 75,26 - 76,23
Centro C 19/20 1/20 95,0% 75,1% – 99,9% 75,33 0,22 74,98 - 75,59
Todos los centros
51/60 9/60 85,0% 73,4% – 92,9% 75,55 0,38 74,98 - 76,23
Negativo
Centro A 0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B 0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C 0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los centros
0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Coronavirus NL63 Recursos BEI NR-470
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
15 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,21 0,31 79,64 - 80,90
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,55 0,33 79,99 - 81,03
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,04 0,25 79,67 - 80,62
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,29 0,40 79,64 - 81,03
Positivo bajo (1X LoD)
5 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,08 0,25 79,57 - 80,42
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,40 0,24 79,98 - 80,89
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,88 0,27 79,36 - 80,40
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,12 0,38 79,14 - 80,89
Negativo altob
(LoD/10)
0,5 TCID50/ml
Centro A
13/20 7/20 65,0% 40,8% -,84,6% 80,08 0,34 79,21 - 80,82
Centro B
14/20 6/20 70,0% 45,7% -,88,1% 80,36 0,30 79,98 - 80,91
Centro C
10/20 10/20 50,0% 27,2% -,72,8% 79,91 0,26 79,24 - 80,30
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 63
Coronavirus NL63 Recursos BEI NR-470
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Todos los
centros 37/60 23/60 61,7% 48,2% -,73,9% 80,11 0,39 79,21 - 80,91
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Coronavirus OC43 ATCC VR-759
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
1800 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,98 0,23 80,53 - 81,36
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,39 0,25 81,04 - 81,82
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,20 0,26 80,60 - 81,55
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,17 0,32 80,53 - 81,82
Positivo bajo (1X LoD)
600 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,82 0,26 80,29 - 81,25
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,31 0,24 80,95 - 81,85
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,07 0,37 80,40 - 81,58
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,07 0,38 80,29 - 81,85
Negativo altob
(LoD/10)
60 TCID50/ml
Centro A
18/20 2/20 90,0% 68,3% -,98,8% 80,86 0,24 80,49 - 81,25
Centro B
14/20 6/20 70,0% 45,7% -,88,1% 81,29 0,28 80,92 - 81,81
Centro C
16/20 4/20 80,0% 56,3% -,94,3% 81,04 0,32 80,11 - 81,45
Todos los
centros 48/60 12/60 80,0% 67,7% -,89,2% 81,07 0,36 80,11 - 81,81
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 64
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
1/180 179/180 99,4% 96,9% –100%
Todos los
centros 1/540 539/540 99,8% 99,0% -100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Metapneumovirus humano
MPVh-16 (Tipo A1) Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
6 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,61 0,23 77,06 - 77,90
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,07 0,28 77,67 - 78,61
Centro C
19/20 1/20 95,0% 75,1% -,99,9% 77,73 0,21 77,45 - 78,11
Todos los
centros 59/60 1/60 98,3% 91,1% -100% 77,82 0,36 77,06 - 78,61
Positivo bajo (1X LoD)
2 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,39 0,21 77,04 - 77,79
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,88 0,22 77,37 - 78,11
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,60 0,24 77,16 - 77,99
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 77,62 0,35 77,04 - 78,11
Negativo altob
(LoD/10)
0,2 TCID50/ml
Centro A
17/20 2/20 85,0% 62,1% -,96,8% 77,34 0,20 77,05 - 77,59
Centro B
19/20 6/20 95,0% 75,1% -,99,9% 77,76 0,22 77,06 - 78,11
Centro C
12/20 4/20 60,0% 36,1% -,80,9% 77,37 0,29 76,74 - 77,79
Todos los
centros 48/60 12/60 80,0% 67,7% -,89,2% 77,50 0,35 76,74 - 78,11
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 65
Gripe B
B/FL/04/06 Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
180 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,47 0,26 79,88 - 80,93
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,88 0,31 80,30 - 81,30
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,36 0,32 79,78 - 80,80
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,56 0,40 79,78 - 81,30
Positivo bajo (1X LoD)
60 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,44 0,27 80,00 - 80,92
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,79 0,29 80,40 - 81,33
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,34 0,22 79,77 - 80,81
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,51 0,37 79,77 - 81,33
Negativo altob
(LoD/10)
6 TCID50/ml
Centro A
12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 80,42 0,32 79,84 - 80,90
Centro B
10/20 10/20 50,0% 27,2% -,72,8% 80,78 0,25 80,40 - 81,17
Centro C
8/20 12/20 40,0% 19,1% -,64,0% 80,30 0,21 79,79 - 80,69
Todos los
centros 30/60 30/60 50,0% 36,8% -,63,2% 80,50 0,36 79,79 - 81,17
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Virus paragripal 1 Zeptometrix # 0810014CFN
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
1500 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,86 0,26 78,42 - 79,25
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,32 0,28 78,83 - 79,78
Centro C
19/20 1/20 95,0% 75,1% -,99,9% 78,50 0,28 78,02 - 78,87
Todos los
centros 59/60 1/60 98,3% 91,1% -100% 78,91 0,50 78,02 - 79,78
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 66
Virus paragripal 1 Zeptometrix # 0810014CFN
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo bajo (1X LoD)
500 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,60 0,31 77,99 - 79,05
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,93 0,26 78,31 - 79,36
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,50 0,38 77,90 - 79,16
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 78,67 0,40 77,90 - 79,36
Negativo altob
(LoD/10)
50 TCID50/ml
Centro A
15/20 5/20 75,0% 50,1% -,91,3% 78,54 0,25 78,10 - 78,94
Centro B
15/20 5/20 75,0% 50,1% -,91,3% 78,94 0,25 78,52 - 79,36
Centro C
13/20 7/20 65,0% 41,0% -,84,6% 78,41 0,35 77,87 - 79,02
Todos los
centros 43/60 17/60 71,7% 58,6% -,82,6% 78,61 0,42 77,79 - 79,36
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Virus paragripal 2 Zeptometrix #0810015CF
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
30 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,63 0,36 83,01 - 84,39
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 84,06 0,40 83,44 - 84,79
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,88 0,32 83,13 - 84,28
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 83,85 0,42 83,01 - 84,79
Positivo bajo (1X LoD)
10 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,56 0,28 82,94 - 84,08
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 84,00 0,31 83,52 - 84,63
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 83,79 0,32 82,92 - 84,25
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 83,78 0,37 82,92 - 84,63
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 67
Virus paragripal 2 Zeptometrix #0810015CF
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Negativo altob
(LoD/10)
1 TCID50/ml
Centro A
12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 83,43 0,34 82,71 - 83,96
Centro B
12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 83,91 0,31 83,43 - 84,56
Centro C
11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 83,71 0,36 82,91 - 84,30
Todos los
centros 35/60 25/60 58,3% 44,9% -,70,9% 83,69 0,41 82,71 - 84,56
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Virus paragripal 3 Zeptometrix #0810016CF
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
30 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,17 0,36 80,71 - 81,86
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,48 0,35 81,03 - 81,89
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,94 0,28 80,63 - 81,37
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 81,22 0,41 80,63 - 81,89
Positivo bajo (1X LoD)
10 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,97 0,36 80,36 - 81,52
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 81,35 0,26 80,93 - 81,79
Centro C
17/20 3/20 85,0% 62,1% -,96,8% 80,86 0,28 80,10 - 81,21
Todos los
centros 57/60 3/60 95,0% 86,1% -,99,0% 81,08 0,40 80,10 - 81,79
Negativo altob
(LoD/10)
1 TCID50/ml
Centro A
10/20 10/20 50,0% 27,2% -,72,8% 80,99 0,26 80,30 - 81,34
Centro B
7/20 13/20 35,0% 15,4% -,59,2% 81,29 0,28 80,61 - 81,77
Centro C
5/20 15/20 25,0% 8,7% -,49,1% 80,84 0,24 80,41 - 81,24
Todos los
centros 22/60 38/60 36,7% 24,6% -,50,1% 81,05 0,34 80,30 - 81,77
Negativo Centro
A 0/180 180/180 100% 98,0% –100%
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 68
Virus paragripal 3 Zeptometrix #0810016CF
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Virus paragripal 4a Zeptometrix #0810060CF
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
15.000
TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,70 0,30 77,36 - 78,10
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 78,09 0,56 77,48 - 78,74
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,73 0,40 77,05 - 78,21
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 77,82 0,47 77,05 - 78,74
Positivo bajo (1X LoD)
5000 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,11 0,28 76,64 - 77,68
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,65 0,41 76,73 - 78,71
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,23 0,38 76,81 - 78,20
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 77,33 0,46 76,64 - 78,71
Negativo altob
(LoD/10)
500 TCID50/ml
Centro A
4/20 16/20 20,0% 5,7% -,43,7% 77,07 0,26 76,63 - 77,58
Centro B
5/20 15/20 25,0% 8,7% -,49,1% 77,59 0,27 77,05 - 78,00
Centro C
11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 77,24 0,30 76,62 - 77,84
Todos los
centros 20/60 40/60 33,3% 21,7% -,46,7% 77,29 0,40 76,62 - 78,00
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 69
b Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Virus respiratorio sincitial Tipo A
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
6 TCID50/ml
Centro A
60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,44 0,35 79,46 - 80,83
Centro B
60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,86 0,25 80,41 - 81,56
Centro C
60/60 0/60 100% 94,0% -100% 80,39 0,33 80,08 - 80,91
Todos los
centros 180/180 0/180 100% 97,8% -100% 80,58 0,40 79,46 - 81,56
Positivo bajo (1X LoD)
2 TCID50/ml
Centro A
40/40 0/40 100% 91,2% –100% 79,82 0,50 78,93 - 80,62
Centro B
40/40 0/40 100% 91,2% –100% 80,40 0,46 79,47 - 81,03
Centro C
40/40 0/40 100% 91,2% –100% 80,13 0,47 79,13 - 80,79
Todos los
centros 120/120 0/120 100% 97,0% -100% 80,10 0,57 78,93 - 81,03
Negativo altob
(LoD/10)
0,2 TCID50/ml
Centro A
18/20 2/20 90,0% 68,3% -,98,8% 79,63 0,50 78,72 - 80,72
Centro B
17/20 3/20 85,0% 62,1% -,96,8% 80,12 0,50 79,26 - 80,89
Centro C
11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 79,97 0,57 78,83 - 80,84
Todos los
centros 46/60 14/60 76,7% 64,0% -,86,6% 79,90 0,58 78,72 - 80,89
Negativo
Centro A
0/120 120/120 100% 97,0% –100%
Centro B
0/120 120/120 100% 97,0% –100%
Centro C
0/120 120/120 100% 97,0% –100%
Todos los
centros 0/360 360/360 100% 99,0% -100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 70
Bordetella pertussis A639
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
12.000 UFC/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,36 0,36 87,46 - 89,05
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,81 0,29 88,26 - 89,20
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,34 0,18 87,97 - 88,58
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 88,50 0,38 87,46 - 89,20
Positivo bajo (1X LoD)
4000 UFC/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,39 0,28 87,73 - 88,96
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,64 0,31 88,07 - 89,20
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 88,22 0,28 87,74 - 88,67
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 88,42 0,34 87,73 - 89,20
Negativo altob
(LoD/10)
400 UFC/ml
Centro A
16/20 4/20 80,0% 56,3% -,94,3% 88,41 0,34 87,86 - 89,36
Centro B
12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 88,70 0,32 88,33 - 89,29
Centro C
12/20 8/20 60,0% 36,1% -,80,9% 88,26 0,28 87,52 - 88,71
Todos los
centros 40/60 20/60 66,7% 53,3% -,78,3% 88,46 0,37 87,52 - 89,36
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Chlamydophila pneumoniae
TW183 Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
9000 copias/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,65 0,29 78,94 - 79,99
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 80,27 0,30 79,88 - 80,82
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,73 0,23 79,42 - 80,09
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 79,92 0,45 78,94 - 80,82
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 71
Chlamydophila pneumoniae
TW183 Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo bajo (1X LoD)
3000 copias/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,63 0,27 79,03 - 80,09
Centro B
19/20 1/20 95,0% 75,1% -,99,9% 80,15 0,28 79,68 - 80,62
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 79,61 0,30 78,84 - 80,09
Todos los
centros 59/60 1/60 98,3% 91,1% -100% 79,79 0,42 78,84 - 80,62
Negativo altob
(LoD/10)
300 copias/ml
Centro A
11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 79,55 0,25 79,25 - 80,08
Centro B
14/20 6/20 70,0% 45,7% -,88,1% 80,02 0,29 79,66 - 80,72
Centro C
10/20 10/20 50,0% 27,2% -,72,8% 79,61 0,29 79,16 - 80,21
Todos los
centros 35/60 25/60 58,3% 44,9% -,70,9% 79,72 0,38 79,16 - 80,72
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Mycoplasma pneumoniae Tipo 1- M129
Nº. Positivo
Nº. Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Promedio Tm
%CV Tm
Intervalo de Tm
observado
Positivo intermedio (3X LoD)
90 TCID50/ml
Centro A
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,42 0,29 77,04 - 77,71
Centro B
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,94 0,33 77,59 - 78,30
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,83 0,28 77,44 - 78,12
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100% 77,75 0,38 77,04 - 78,30
Positivo bajo (1X LoD)
30 TCID50/ml
Centro A
19/20 1/20 95,0% 75,1% -,99,9% 77,55 0,30 77,05 - 78,00
Centro B
17/20 3/20 85,0% 62,1% -,96,8% 77,96 0,33 77,36 - 78,37
Centro C
20/20 0/20 100% 83,2% – 100% 77,68 0,39 76,65 - 78,10
Todos los
centros 56/60 4/60 93,3% 83,8% -,98,2% 77,73 0,40 76,65 - 78,37
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 72
Negativo altob
(LoD/10)
3 TCID50/ml
Centro A
5/20 15/20 25,0% 8,7% -,49,1% 77,58 0,31 76,72 - 78,01
Centro B
4/20 16/20 20,0% 5,7% -,43,7% 78,01 0,27 77,67 - 78,45
Centro C
11/20 9/20 55,0% 31,5% -,76,9% 77,76 0,34 77,04 - 78,09
Todos los
centros 20/60 40/60 33,3% 21,7% -,46,7% 77,78 0,38 76,72 - 78,45
Negativo
Centro A
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro B
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Centro C
0/180 180/180 100% 98,0% –100%
Todos los
centros 0/540 540/540 100% 99,3% - 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Tabla 45. Resumen de resultados de coincidencia positiva, coincidencia negativa y Tm para el análisis de reproducibilidad de
organismos en ensayo múltiple
Resumen de concordancia de reproducibilidad para el enterovirus (rinovirus/enterovirus humano)
Enterovirus Echovirus 6 (Especie B) Nº.
Positivo Nº.
Negativo
% Concordancia con
el resultado esperado
a IC 95%
Positivo intermedio (3X LoD)
90.000 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los centros
60/60 0/60 100% 94,0% -100%
Positivo bajo (1X LoD)
30.000 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los centros
60/60 60/60 100% 94,0% -100%
Negativo altob
(LoD/10)
3000 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los centros
60/60 0/60 100% 94,0% -100%
Negativo
Centro A 0/60 60/60 100% 94,0% -100%
Centro B 0/60 60/60 100% 94,0% -100%
Centro C 0/60 60/60 100% 94,0% -100%
Todos los centros
0/180 180/180 100% 97,8% -100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 73
Resumen de la reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para enterovirus
Ensayo Enterovirus
Echovirus 6 (Especie B)
Promedio
Tm
% CV
Tm
Intervalo de Tm
observado
Entero 1
Positivo intermedio
3x LoD
90.000 TCID50/ml
Centro A 87,12 0,24 86,79 - 87,73
Centro B 87,51 0,30 86,99 - 88,05
Centro C 86,98 0,33 86,37 - 87,64
Todos los
centros 87,18 0,39 86,37 - 88,05
Positivo bajo
1x LoD
30.000 TCID50/ml
Centro A 87,00 0,33 86,17 - 87,64
Centro B 87,36 0,29 86,80 - 87,85
Centro C 86,81 0,35 86,15 - 87,41
Todos los
centros 87,05 0,42 86,15 - 87,85
Negativo alto
0,1x LoD
3000 TCID50/ml
Centro A 86,89 0,29 86,06 - 87,40
Centro B 87,34 0,31 86,67 - 87,86
Centro C 86,67 0,29 85,97 - 87,30
Todos los
centros 86,96 0,44 85,97 - 87,86
Entero 2
Positivo intermedio
3x LoD
90.000 TCID50/ml
Centro A 87,09 0,28 86,68 - 87,73
Centro B 87,47 0,30 86,82 - 88,00
Centro C 86,93 0,36 86,16 - 87,64
Todos los
centros 87,14 0,41 86,16 - 88,00
Positivo bajo
1x LoD
30.000 TCID50/ml
Centro A 86,98 0,30 86,28 - 87,53
Centro B 87,34 0,28 86,89 - 87,82
Centro C 86,77 0,35 86,05 - 87,52
Todos los
centros 87,02 0,41 86,05 - 87,82
Negativo alto
0,1x LoD
3000 TCID50/ml
Centro A 86,86 0,29 86,17 - 87,54
Centro B 87,26 0,35 86,59 - 87,94
Centro C 86,65 0,27 86,27 - 87,20
Todos los
centros 86,92 0,42 86,17 - 87,94
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 74
HRV4
Positivo intermedio
3x LoD
90.000 TCID50/ml
Centro A 85,70 0,31 85,21 - 86,18
Centro B 86,19 0,30 85,35 - 86,77
Centro C 85,59 0,34 84,91 - 86,19
Todos los
centros 85,81 0,44 84,91 - 86,77
Positivo bajo
1x LoD
30.000 TCID50/ml
Centro A 85,45 0,26 84,81 - 86,06
Centro B 85,87 0,24 85,44 - 86,36
Centro C 85,32 0,40 84,69 - 86,26
Todos los
centros 85,54 0,40 84,69 - 86,36
Negativo alto
0,1x LoD
3000 TCID50/ml
Centro A 85,37 0,26 84,80 - 86,04
Centro B 85,82 0,23 85,43 - 86,23
Centro C 85,22 0,22 84,82 - 85,58
Todos los
centros 85,46 0,39 84,80 - 86,23
Resumen de concordancia de reproducibilidad para el rinovirus (rinovirus/enterovirus humano)
Rinovirus humano A1 Nº.
Positivo Nº.
Negativo
% Concordancia
con el resultado esperado
a IC 95%
Positivo intermedio (3X LoD)
3 TCID50/ml
Centro A 60/60 0/60 100% 94,0% -100%
Centro B 60/60 0/60 100% 94,0% -100%
Centro C 60/60 0/60 100% 94,0% -100%
Todos los
centros 180/180 0/180 100% 97,8% -100%
Positivo bajo (1X LoD)
1 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los
centros 60/60 0/60 100% 94,0% -100%
Negativo altob
(LoD/10)
0,1 TCID50/ml
Centro A 40/40 0/40 100% 91,2% -100%
Centro B 40/40 0/40 100% 91,2% -100%
Centro C 32/40 8/40 80,0% 64,4% -,91,0%
Todos los
centros 112/120 8/120 93,3% 87,3% -,97,1%
Negativo
Centro A 0/60 60/60 100% 94,0% -100%
Centro B 0/60 60/60 100% 94,0% -100%
Centro C 0/60 60/60 100% 94,0% -100%
Todos los
centros 0/180 180/180 100% 97,8% -100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 75
Resumen de la reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para rinovirus
Ensayo Rinovirus humano
A1
Promedio
Tm
% CV
Tm
Intervalo de Tm
observado
HRV1
Positivo intermedio
3x LoD
3 TCID50/ml
Centro A 83,79 0,44 83,25 - 85,09
Centro B 84,06 0,31 83,43 - 84,56
Centro C 83,68 0,23 83,22 - 84,09
Todos los
centros 83,84 0,38 83,22 - 85,09
Positivo bajo
1x LoD
1 TCID50/ml
Centro A 83,71 0,29 83,07 - 84,35
Centro B 84,07 0,34 83,44 - 84,66
Centro C 83,93 0,34 83,24 - 84,71
Todos los
centros 83,90 0,37 83,07 - 84,71
Negativo alto
0,1x LoD
0,1 TCID50/ml
Centro A 83,56 0,28 83,02 - 84,26
Centro B 83,91 0,34 83,22 - 84,52
Centro C 83,76 0,31 83,04 - 84,48
Todos los
centros 83,74 0,36 83,02 - 84,52
HRV2
Positivo intermedio
3x LoD
3 TCID50/ml
Centro A 83,33 0,48 82,55 - 84,67
Centro B 83,65 0,29 83,11 - 84,17
Centro C 83,30 0,28 82,70 - 83,77
Todos los
centros 83,42 0,41 82,55 - 84,67
Positivo bajo
1x LoD
1 TCID50/ml
Centro A 83,28 0,31 82,57 - 83,86
Centro B 83,66 0,36 83,02 - 84,37
Centro C 83,52 0,39 82,82 - 84,29
Todos los
centros 83,48 0,40 82,57 - 84,37
Negativo alto
0,1x LoD
0,1 TCID50/ml
Centro A 83,17 0,34 82,42 - 83,88
Centro B 83,58 0,36 82,80 - 84,31
Centro C 83,37 0,33 82,51 - 83,92
Todos los
centros 83,37 0,40 82,42 - 84,31
HRV3
Positivo intermedio
3x LoD
3 TCID50/ml
Centro A 82,73 0,53 81,99 - 83,94
Centro B 83,25 0,36 82,49 - 83,88
Centro C 82,89 0,43 82,10 - 83,88
Todos los
centros 82,96 0,51 81,99 - 83,94
Positivo bajo
1x LoD
1 TCID50/ml
Centro A 82,67 0,49 81,76 - 83,65
Centro B 83,24 0,44 82,40 - 84,08
Centro C 83,07 0,41 82,13 - 83,76
Todos los
centros 82,98 0,54 81,76 - 84,08
Negativo alto
0,1x LoD
Centro A 82,68 0,50 81,78 - 83,67
Centro B 83,21 0,46 82,18 - 84,37
Centro C 82,97 0,42 81,85 - 83,64
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 76
Ensayo Rinovirus humano
A1
Promedio
Tm
% CV
Tm
Intervalo de Tm
observado
0,1 TCID50/ml Todos los
centros 82,96 0,52 81,78 - 84,37
HRV4
Positivo intermedio
3x LoD
3 TCID50/ml
Centro A 83,81 0,38 83,28 - 84,98
Centro B 84,14 0,34 83,43 - 84,83
Centro C 83,80 0,25 83,44 - 84,20
Todos los
centros 83,90 0,37 83,28 - 84,98
Positivo bajo
1x LoD
1 TCID50/ml
Centro A 83,79 0,31 83,18 - 84,45
Centro B 84,08 0,31 83,55 - 84,61
Centro C 84,04 0,38 83,35 - 84,93
Todos los
centros 83,94 0,37 83,18 - 84,93
Negativo alto
0,1x LoD
0,1 TCID50/ml
Centro A 83,58 0,26 83,11 - 84,05
Centro B 83,88 0,31 83,34 - 84,49
Centro C 83,86 0,27 83,24 - 84,58
Todos los
centros 83,76 0,33 83,11 - 84,58
Resumen de concordancia de reproducibilidad para la gripe A H1
Gripe A H1N1 A/Brisbane/59/07 Nº.
Positivo Nº.
Dudoso Nº.
Negativo
% Concordancia con
el resultado esperado
a IC 95%
Positivo intermedio (3X LoD)
600
TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los centros
60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%
Positivo bajo (1X LoD)
200
TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 19/20 1/20 0/20 95,0% 75,1% -,99,9%
Centro C 17/20 2/20 1/20 85,0% 62,1% – 96,8%
Todos los centros
56/60 3/60 1/60 93% 83,8% – 98,2%
Negativo alto
(LoD/10)b
20
TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 17/20 2/20 1/20 85,0% 62,1% – 96,8%
Centro C 14/20 5/20 1/20 70,0% 45,7% -,88,1%
Todos los centros
51/60 7/60 2/60 85,0% 73,4% -,92,9%
Negativo
Centro A 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro B 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro C 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Todos los centros
0/540 0/540 540/540 100% 99,3% – 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 77
b Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Resumen de reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para la gripe A H1
Ensayo Gripe A H1N1
A/Brisbane/59/07 Promedio
Tm % CV Tm
Intervalo de Tm observado
FluA- pan1
Positivo moderado 3x LoD 600 TCID50/ml
Centro A 84,67 0,24 84,27 - 85,12
Centro B 85,10 0,24 84,78 - 85,56
Centro C 84,64 0,34 83,76 - 85,23
Todos los centros
84,80 0,37 83,76 - 85,56
Positivo bajo 1x LoD 200 TCID50/ml
Centro A 84,57 0,27 84,17 - 85,31
Centro B 85,01 0,28 84,59 - 85,75
Centro C 84,68 0,26 84,16 - 85,18
Todos los centros
84,75 0,34 84,16 - 85,75
Negativo alto 0,1x LoD 20 TCID50/ml
Centro A 84,27 0,26 83,85 - 84,81
Centro B 84,75 0,23 84,29 - 85,32
Centro C 84,46 0,35 83,89 - 85,48
Todos los centros
84,48 0,37 83,85 - 85,48
FluA- pan2
Positivo moderado 3x LoD 600 TCID50/ml
Centro A 80,42 0,25 79,78 - 80,63
Centro B 80,85 0,27 80,39 - 81,26
Centro C 80,31 0,28 79,89 - 80,72
Todos los centros
80,52 0,39 79,78 - 81,26
Positivo bajo 1x LoD 200 TCID50/ml
Centro A 80,36 0,23 79,99 - 80,73
Centro B 80,80 0,21 80,42 - 81,15
Centro C 80,52 0,22 80,19 - 80,89
Todos los centros
80,57 0,32 79,99 - 81,15
Negativo alto 0,1x LoD 20 TCID50/ml
Centro A 79,91 0,37 79,15 - 80,41
Centro B 80,49 0,30 79,67 - 80,83
Centro C 80,10 0,35 79,56 - 80,73
Todos los centros
80,17 0,45 79,15 - 80,83
FluA- H1-pan
Positivo moderado 3x LoD 600 TCID50/ml
Centro A 78,79 0,25 78,31 - 79,25
Centro B 79,20 0,31 78,30 - 79,57
Centro C 78,76 0,39 77,79 - 79,25
Todos los centros
78,91 0,42 77,67 - 79,57
Positivo bajo 1x LoD 200 TCID50/ml
Centro A 78,77 0,25 78,42 - 79,34
Centro B 79,20 0,27 78,72 - 79,67
Centro C 78,80 0,25 78,30 - 79,26
Todos los centros
78,93 0,36 78,30 - 79,67
Negativo alto 0,1x LoD 20 TCID50/ml
Centro A 77,65 0,33 77,15 - 78,21
Centro B 78,18 0,45 77,47 - 79,26
Centro C 77,93 0,49 77,43 - 79,04
Todos los centros
77,92 0,51 77,15 - 79,26
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 78
Resumen de concordancia de reproducibilidad para la gripe A H1-2009
Gripe A H1-2009 A/Swine NY/03/2009 Nº.
Positivo Nº.
Dudoso Nº.
Negativo
% Concordancia con
el resultado esperado
a IC 95%
Positivo intermedio (3X LoD)
300 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los centros
60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%
Positivo bajo (1X LoD)
100 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los centros
60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%
Negativo altob
(LoD/10)
10 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 19/20 1/20 0/20 95,0% 75,1% -,99,9%
Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los centros
59/60 1/60 0/60 98,3% 91,1% – 100%
Negativo
Centro A 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro B 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro C 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Todos los centros
0/540 0/540 540/540 100% 99,3% – 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Resumen de reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para la gripe A H1-2009
Ensayo Gripe A H1-2009
A/Swine NY/03/2009 Promedio
Tm % CV Tm
Intervalo de Tm observado
FluA- pan1
Positivo moderado 3x LoD 300 TCID50/ml
Centro A 84,67 0,24 84,27 - 85,12
Centro B 85,10 0,24 84,78 - 85,56
Centro C 84,64 0,34 83,76 - 85,23
Todos los centros
84,80 0,37 83,76 - 85,56
Positivo bajo 1x LoD 100 TCID50/ml
Centro A 84,57 0,27 84,17 - 85,31
Centro B 85,01 0,28 84,59 - 85,75
Centro C 84,68 0,26 84,16 - 85,18
Todos los centros
84,75 0,34 84,16 - 85,75
Negativo alto 0,1x LoD 10 TCID50/ml
Centro A 84,27 0,26 83,85 - 84,81
Centro B 84,75 0,23 84,29 - 85,32
Centro C 84,46 0,35 83,89 - 85,48
Todos los centros
84,48 0,37 83,85 - 85,48
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 79
Ensayo Gripe A H1-2009
A/Swine NY/03/2009 Promedio
Tm % CV Tm
Intervalo de Tm observado
FluA- pan2
Positivo moderado 3x LoD 300 TCID50/ml
Centro A 80,62 0,20 80,31 - 80,83
Centro B 81,01 0,17 80,70 - 81,36
Centro C 80,69 0,23 80,19 - 81,02
Todos los centros
80,81 0,32 80,19 - 81,36
Positivo bajo 1x LoD 100 TCID50/ml
Centro A 80,39 0,29 79,87 - 80,73
Centro B 80,91 0,27 80,20 - 81,24
Centro C 80,30 0,17 80,05 - 80,61
Todos los centros
80,62 0,44 79,87 - 81,24
Negativo alto 0,1x LoD 10 TCID50/ml
Centro A 80,43 0,27 80,08 - 81,03
Centro B 80,72 0,27 80,11 - 81,14
Centro C 80,41 0,34 79,86 - 80,82
Todos los centros
80,54 0,34 79,86 - 81,14
FluA- H1-pan
Positivo moderado 3x LoD 300 TCID50/ml
Centro A 78,87 0,40 78,20 - 79,56
Centro B 79,44 0,35 78,94 - 79,99
Centro C 78,62 0,43 77,92 - 79,44
Todos los centros
78,97 0,58 77,92 - 79,99
Positivo bajo 1x LoD 100 TCID50/ml
Centro A 78,37 0,30 77,89 - 79,24
Centro B 78,90 0,37 78,21 - 79,76
Centro C 78,16 0,25 77,83 - 78,69
Todos los centros
78,47 0,51 77,78 - 79,76
Negativo alto 0,1x LoD 10 TCID50/ml
Centro A 78,34 0,37 77,90 - 79,37
Centro B 78,83 0,37 77,99 - 79,68
Centro C 78,08 0,27 77,68 - 78,51
Todos los centros
78,40 0,53 77,68 - 79,68
FluA- H1-2009
Positivo moderado 3x LoD 300 TCID50/ml
Centro A 78,73 0,24 78,31 - 79,14
Centro B 79,20 0,24 78,84 - 79,67
Centro C 78,54 0,30 77,89 - 78,92
Todos los centros
78,81 0,44 77,89 - 79,67
Positivo bajo 1x LoD 100 TCID50/ml
Centro A 78,64 0,26 78,10 - 79,14
Centro B 79,03 0,25 78,53 - 79,48
Centro C 78,49 0,24 78,12 - 78,82
Todos los centros
78,71 0,39 78,10 - 79,48
Negativo alto 0,1x LoD 10 TCID50/ml
Centro A 78,60 0,28 77,90 - 79,04
Centro B 79,00 0,23 78,52 - 79,36
Centro C 78,52 0,28 78,10 - 78,93
Todos los centros
78,70 0,38 77,90 - 79,36
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 80
Resumen de concordancia de reproducibilidad para la gripe A H3
Gripe A H3N2 A/Wisconsin/67/2005
Nº. Positivo
Nº. Dudoso
Nº. Negativo
% Concordancia con el resultado esperado
a IC 95%
Positivo intermedio (3X LoD)
15 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los
centros 60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%
Positivo bajo (1X LoD)
5 TCID50/ml
Centro A 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro B 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Centro C 20/20 0/20 0/20 100% 83,2% – 100%
Todos los
centros 60/60 0/60 0/60 100% 94,0% -100%
Negativo altob
(LoD/10)
0,5 TCID50/ml
Centro A 3/20 11/20 6/20 15,0% 3,2% -,37,9%
Centro B 4/20 12/20 4/20 20,0% 5,7% -,43,7%
Centro C 3/20 8/20 9/20 15,0% 3,2% -,37,9%
Todos los
centros 10/60 31/60 19/60 16,7% 8,3% -,28,5%
Negativo
Centro A 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro B 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Centro C 0/180 0/180 180/180 100% 98,0% -100%
Todos los
centros 0/540 0/540 540/540 100% 99,3% – 100%
a Los resultados esperados para los elementos del panel “Positivo intermedio”, del panel “Positivo bajo” y del panel “Negativo alto”
fueron positivos. El resultado esperado para los elementos del panel “Negativo” es negativo. b
Las muestras fuertemente negativas están dirigidas para que sean positivas el 20-80% del tiempo.
Resumen de reproducibilidad de la Tm (por ensayo) para la gripe A H3
Ensayo Gripe A H3N2
A/Wisconsin/67/2005 Promedio
Tm % CV Tm
Intervalo de Tm observado
FluA- pan1
Positivo moderado 3x LoD 15 TCID50/ml
Centro A 85,33 0,26 84,79 - 85,73
Centro B 85,48 0,42 84,91 - 86,27
Centro C 85,06 0,38 84,50 - 85,40
Todos los centros
85,36 0,38 84,50 - 86,27
Positivo bajo 1x LoD 5 TCID50/ml
Centro A 84,95 0,41 84,19 - 86,03
Centro B 85,31 0,31 84,79 - 86,02
Centro C 84,83 0,26 84,37 - 85,25
Todos los centros
85,03 0,41 84,19 - 86,03
Negativo alto 0,1x LoD 0,5 TCID50/ml
Centro A 84,91 0,39 84,22 - 85,60
Centro B 85,24 0,30 84,78 - 85,77
Centro C 84,86 0,27 84,48 - 85,33
Todos los centros
85,01 0,37 84,22 - 85,77
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 81
Ensayo Gripe A H3N2
A/Wisconsin/67/2005 Promedio
Tm % CV Tm
Intervalo de Tm observado
FluA- pan2
Positivo moderado 3x LoD 15 TCID50/ml
Centro A 79,75 0,25 79,51 - 79,99
Centro B 79,94 0,30 79,40 - 80,37
Centro C 79,60 0,24 79,14 - 79,86
Todos los centros
79,81 0,33 79,14 - 80,37
Positivo bajo 1x LoD 5 TCID50/ml
Centro A 79,42 0,31 79,00 - 80,30
Centro B 79,69 0,35 79,14 - 80,29
Centro C 79,25 0,20 78,82 - 79,59
Todos los centros
79,45 0,37 78,82 - 80,30
Negativo alto 0,1x LoD 0,5 TCID50/ml
Centro A 79,22 0,35 78,64 - 79,75
Centro B 79,59 0,29 79,05 - 79,99
Centro C 79,24 0,20 78,84 - 79,54
Todos los centros
79,35 0,36 78,64 - 79,99
FluA- H3
Positivo moderado 3x LoD 15 TCID50/ml
Centro A 82,58 0,35 81,87 - 83,01
Centro B 82,89 0,19 82,60 - 83,11
Centro C 82,44 0,33 81,98 - 82,81
Todos los centros
82,62 0,39 81,87 - 83,11
Positivo bajo 1x LoD 5 TCID50/ml
Centro A 82,32 0,29 81,88 - 82,69
Centro B 82,69 0,34 82,16 - 83,32
Centro C 82,21 0,25 81,76 - 82,73
Todos los centros
82,39 0,41 81,67 - 83,32
Negativo alto 0,1x LoD 0,5 TCID50/ml
Centro A 82,28 0,36 81,71 - 82,91
Centro B 82,61 0,29 82,17 - 83,05
Centro C 82,20 0,23 81,87 - 82,57
Todos los centros
82,37 0,36 81,71 - 83,05
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 82
Repetibilidad
Los resultados de repetibilidad del FilmArray RP se evaluaron con el FilmArray RP original repitiendo las pruebas
realizadas con las mismas 12 especímenes analizados en el estudio de reproducibilidad, minimizando todas las
fuentes posibles de variabilidad. Las pruebas de repetibilidad dentro de un mismo centro se llevaron a cabo en el
Centro C durante 12 días de pruebas. Cada día, los 12 especímenes se analizaron 4 veces por 2 operarios en
2 instrumentos FilmArray.
Tabla 46. Resumen de resultados de concordancia positiva para las pruebas de repetibilidad
Resultado del organismo
Positivo moderado Positivo bajo Negativo alto
(3x LoD) (1x LoD) (0,1x LoD)
Nº. positivo/ Total
% Resultados positivos
Nº. positivo/ Total
% Resultados positivos
Nº. positivo/ Total
% Resultados positivos
Adenovirusa 48/48 100% 48/48 100% 34/48 70,8%
Coronavirus 229E 48/48 100% 48/48 100% 19/48 39,6%
Coronavirus HKU1 48/48 100% 48/48 100% 44/48 91,7%
Coronavirus NL63 48/48 100% 48/48 100% 27/48 56,3%
Coronavirus OC43 48/48 100% 47/48 97,9% 33/48 68,8%
Metapneumovirus humano 47/48 97,9% 48/48 100% 32/48 66,7%
Enterovirus 48/48 100% 48/48 100% 48/48 100%
Rinovirus humano 144/144 100% 47/48 97,9% 83/96 86,5%
Gripe A H1 48/48 100% 43/48b 89,6%
b 39/48
c 81,3%
c
Gripe A H1-2009 48/48 100% 48/48 100% 47/48d 97,9%
d
Gripe A H3 48/48 100% 48/48 100% 7/48e 14,6%
e
Gripe B 48/48 100% 48/48 100% 25/48 52,1%
Virus paragripal 1 47/48 97,9% 48/48 100% 32/48 66,7%
Virus paragripal 2 48/48 100% 47/48 97,9% 27/48 56,3%
Virus paragripal 3 48/48 100% 41/48 85,4% 14/48 29,2%
Virus paragripal 4 48/48 100% 48/48 100% 26/48 54,2%
Virus respiratorio sincitial 144/144 100% 96/96 100% 32/48 66,7%
Bordetella pertussis 48/48 100% 48/48 100% 27/48 56,3%
Chlamydophila pneumoniae 48/48 100% 46/48 95,8% 18/48 37,5%
Mycoplasma pneumoniae 48/48 100% 47/48 97,9% 19/48 39,6%
% Positivo (para todos los organismos)
por nivel de prueba
1102/1104 99,8%
942/960 98,1%
599/960 62,4%
a Las pruebas de repetibilidad se llevaron a cabo antes de la modificación del panel para incluir un segundo ensayo de adenovirus.
Las concentraciones de prueba y diferentes LoD reflejan el LoD para adenovirus antes de la modificación del panel (300 TCID50/ml). b Los cinco (5) resultados no positivos para gripe A H1 en el LoD incluyen: (1) resultado Negativo, (1) Gripe A H1 dudoso y
(3) Gripe A dudoso. c Los nueve (9) resultados no positivos para gripe A H1 en el 0,1 x LoD incluyen: (1) resultado Negativo, (3) Gripe A (sin subtipo
detectado), (1) Gripe A H1 dudoso y (4) Gripe A dudoso. d
Un (1) resultado Influenza A H1-2009 Equivocal (Gripe A H1-2009 dudoso) en el nivel de prueba 0,1 x LoD. e Los cuarenta y dos (42) resultados no positivos para gripe A H3 en el 0,1 x LoD incluyen: (18) resultados negativos (sin subtipo
detectado), (2) Gripe A (sin subtipo detectado) (15) Gripe A H3 dudoso, y (7) Gripe A dudoso.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 83
Interferencias
Se evaluaron las sustancias que pudieran estar presentes en las muestras de FNS o introducidas durante la
manipulación de la muestra para determinar su potencial de interferir con el rendimiento del ensayo. Se
enriquecieron cuatro mezclas diferentes que contenían organismos FilmArray RP en una matriz de muestra
simulada FNS (varios FNS) (células epiteliales humanas en VTM) a 5x sus LoD respectivos. Cada muestra
se analizó con el FilmArray RP original en presencia de cada una de las sustancias potencialmente interferentes
incluidas en la Tabla 47. Se encontró que ninguna de las sustancias analizadas competía o interfería con los
ensayos de control o de los organismos incluidos en el FilmArray RP.
Tabla 47. Lista de sustancias potencialmente interferentes evaluadas (no se observó interferencia ni inhibición)
Sustancias endógenas Microorganismos competidores/interferentes
Sangre humana (con citrato sódico) (1% v/v) Virus respiratorio sincitial A 2,8 x 104 TCID50/ml
Mucina (glándula submaxilar bovina) (1% v/v) Rinovirus humano 1,1 x 104 TCID50/ml
ADN genómico humano: 0,2 ng/l Gripe A H1-2009 1,0 x 105 TCID50/ml
2 ng/l Staphylococcus aureus 1,0 x 106 UFC/ml
20 ng/l Neisseria meningitidis 1,0 x 106 UFC/ml
Corynebacterium diptheriae 1,0 x 106 UFC/ml
Sustancias exógenas
Pulverización nasal salina con conservantes (1% v/v) Pomada analgésica (1% p/v)
Pulverización descongestiva nasal (Oximetazolina HCl) (1%v/v)
Vaselina (1% p/v)
Tobramicina (0,6 mg/ml) Tabaco sin humo (1% p/v)
Mupirocina (2% p/v) FluMist® Vacuna nasal contra la gripe (2009-2010)
Sustancias específicas de la técnica
Reactivos de laboratorio:
Medio de transporte de
virus: Frotis:
Lejía (1%, 2%, 5% v/v) Remel M4 Copan 168C (rayón / vástago de aluminio torcido)
Paños desinfectantes Remel M4-RT Copan FloQ (nylon flocado / vástago de plástico)
Etanol (7% v/v) Remel M5 Copan 175KS01 (poliéster / vástago de plástico)
DNAzap (1% v/v) Remel M6 Millipore 519CS01M (nylon flocado / vástago de plástico)
RNaseOut (1% v/v) Copan UTM
La evaluación del sistema FilmArray RP no se llevó a cabo usando especímenes FNS clínicos obtenidos de
individuos que hubieran recibido recientemente la vacuna nasal contra la gripe Flumist®
(MedImmune,
Gaithersburg, MD). Sin embargo, se realizaron pruebas analíticas (usando el FilmArray RP original) con muestras
simuladas que contenían diferentes concentraciones de la formulación del material de vacuna 2009-2010. Los
ensayos FilmArray RP reaccionaron con el material vírico de la gripe A H1, gripe A H3 y gripe B incluido en la
vacuna (Tabla 48). No se observó reactividad cruzada con otros ensayos FilmArray RP no de la gripe.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 84
Tabla 48. Evaluación de la vacuna nasal FluMist® como sustancia potencialmente interferente
FluMist 2009-2010
Ad
en
ovir
us
Co
ron
avir
us 2
29E
Co
ron
avir
us H
KU
Co
ron
avir
us N
L63
Co
ron
avir
us O
C43
Meta
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us/e
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Gripe A
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Vir
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ara
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1
Vir
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Vir
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pal
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hil
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pn
eu
mo
nia
e
Myco
pla
sm
a
pn
eu
mo
nia
e
(% v/v) H1 H1-
2009 H3
10% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -
1% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -
0,1% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -
0,01% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -
0,001% - - - - - - - + - + + - - - - - - - -
0,0001% - - - - - - - - - Equiva + - - - - - - - -
0,00001% - - - - - - - - - - + - - - - - - - -
0,000001% - - - - - - - - - - - - - - - - - - - a Resultado dudoso para gripe A H3
Análisis de posibles interferencias procedentes de medicamentos
Se analizó el conjunto de datos clínicos procedente del FilmArray RP original para determinar evidencias de los
efectos de medicamentos potencialmente interferentes (medicamentos con receta o sin receta) administrados o
tomados por la población del estudio. En caso de producirse una interferencia clínicamente significativa debido a un
medicamento, se esperaría que la tasa de detección del organismo entre la población medicada sea inferior que entre
la población no medicada. Este efecto no se observó en el conjunto de datos clínicos. Se detectaron uno o más
organismos por los métodos de referencia/comparados en 118 de 257 (45,9%) individuos no medicados. El FilmArray
RP identificó correctamente todos los organismos en 112 (94,9%) de estos individuos. Se detectaron uno o más
organismos por los métodos de referencia/comparados en 342 de los 596 (57,4%) individuos medicados. El FilmArray
RP identificó correctamente todos los organismos en 331 (96,8%) de estos individuos. La Tabla 49 relaciona los
medicamentos administrados o tomados por la población inscrita en el estudio (autonotificados y/o registrados en los
datos de paciente).
Tabla 49. Listado de medicamentos administrados/tomados durante la evaluación clínica FilmArray RP
Acetaminofeno Clindamicina Lansoprazol Fenobarbital
Albuterol Co-trimoxazol Levalbuterol Fenilefrina
Alendronato
Gotas/jarabes para la tos
(varios medicamentos
sin receta)
Levotiroxina Pilocarpina
Alprazolam Ciproheptadina Lisinopril Pravacol (Pravastatina)
Amoxicilina Deferasirox Loperamida Prednisolona
Amoxicilina/Ácido
clavulánico Dextrometorfano Loratadina Prednisona
Azitromicina Dextrometorfano
hidrobromuro Lorazepam Propranolol
Baclofeno Diphenhidramina Metoclopramida Pseudoefedrina
Benzonatato Doxilamina succinato Metolazona Ranitidina
Betametasona Soluciones de electrolito Metoprolol Gotas/pulverización de
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 85
(sales de rehidratación) solución salina nasal
(varios medicamentos sin
receta)
Brimonidina Enoxaparina Midazolam Salmeterol
Budesonida Eszopiclona Montelukast Simeticona
Budesonida/Formoterol
fumarato dihidrato Fentanilo Naproxeno Sirolimus
Bupropion hidrocloruro Fluticasona Nizatidina Espironolactona
Carvedilol Furosemida Omeprazol Temazepam
Cefdinir Gabapentina Oseltamivir Tiotropio
Cefepima Gemfibrozilo Oxibutinina Ursodiol
Ceftriaxone Guaifenesina Pancrelipasa Valaciclovir
Cefrazol Hydrocodona Pantoprazol Vancomicina
Cetirizina Ibuprofeno Penicilina
Vitaminas/Multivitaminas/
Minerales (varios
medicamentos sin receta)
Clorfeniramina maleato Inderal (Propranolol) Pentamidina Voriconazol
Ciprofloxacino Isosorbida
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO DE FILMARRAY RP EN FILMARRAY 2.0 Y FILMARRAY TORCH
Se llevaron a cabo estudios clínicos y no clínicos para establecer que las características de rendimiento
de FilmArray RP, incluido el límite de detección (LoD) (consulte la sección Límite de detección anterior),
la coincidencia de porcentaje positivo y la coincidencia de porcentaje negativo, así como la reproducibilidad,
son equivalentes en los sistemas FilmArray y FilmArray 2.0. Otros estudios no clínicos demuestran características
de rendimiento similares en los sistemas FilmArray Torch.
NOTA: Los FilmArray Torch Modules son instrumentos FilmArray 2.0 que se han re-configurado como un sistema
apilado para mejorar el rendimiento en espacios de trabajo más pequeños.
Comparación clínica
Se llevó a cabo un estudio de comparación clínica con especímenes anteriormente obtenidos durante la evaluación
clínica prospectiva de FilmArray RP y complementados con otros especímenes archivados procedentes de
instalaciones médicas y laboratorios de referencia externos para aumentar el número de especímenes analizados
para analitos de baja prevalencia. Se seleccionaron un total de 102 especímenes de forma que cada analito
estuvo representado de 3 a 5 veces. Cada espécimen se descongeló y se ensayó usando los sistemas FilmArray
y FilmArray 2.0. La coincidencia de porcentaje positivo (PPA) global entre los sistemas fue 96,8%, y el límite
inferior del intervalo de confianza de 95% (IC 95%) bilateral se encontró en el 92,0%. La coincidencia de porcentaje
negativo (NPA) global entre los sistemas fue 99,8%, y el límite inferior del intervalo de confianza de 95% (IC 95%)
bilateral se encontró en el 99,5%.
BioFire Diagnostics, LLC Manual de instrucciones de FilmArray Respiratory Panel (RP) CE-IVD 86
Tabla 50. Resultados de analito obtenidos en el estudio de comparación clínica entre sistemas FilmArray
Analito FilmArray 2.0 / FilmArray
PPA % IC 95% NPA % IC 95%
Virus
Adenovirus 5/5 100% 47,8-100% 97/97 100% 96,3-100%
Coronavirus 229E 5/5 100% 47,8-100% 97/97 100% 96,3-100%
Coronavirus HKU1 6/6 100% 54,1-100% 95/96 99% 94,3-100%
Coronavirus NL63 6/6 100% 54,1-100% 96/96 100% 96,2-100%
Coronavirus OC43 4/5 80% 28,4-99,5% 97/97 100% 96,3-100%
Metapneumovirus humano 5/5 100% 47,8-100% 97/97 100% 96,3-100%
Rinovirus/enterovirus humano 9/10 90% 55,5-99,7% 91/92 98,9% 94,1-100%
Gripe A 16/16 100% 79,4-100% 86/86 100% 95,8-100%
Gripe A H1 3/3 100% 29,2-100% 99/99 100% 96,3-100%
Gripe A H1-2009 6/6 100% 54,1-100% 96/96 100% 96,2-100%
Gripe A H3 7/7 100% 59-100% 95/95 100% 96,2-100%
Gripe B 5/5 100% 47,8-100% 97/97 100% 96,3-100%
Virus paragripal 1 7/7 100% 59-100% 95/95 100% 96,2-100%
Virus paragripal 2 6/6 100% 54,1-100% 95/96 99% 94,3-100%
Virus paragripal 3 6/6 100% 54,1-100% 96/96 100% 96,2-100%
Virus paragripal 4 5/6 83,3% 35,9-99,6% 96/96 100% 96,2-100%
Virus respiratorio sincitial 8/8 100% 63,1-100% 94/94 100% 96,2-100%
Bacteria
Bordetella pertussis 4/4 100% 39,8-100% 97/98 99% 94,4-100%
Chlamydophila pneumoniae 3/3 100% 29,2-100% 99/99 100% 96,3-100%
Mycoplasma pneumoniae 5/6 83,3% 35,9-99,6% 96/96 100% 96,2-100%
Concordancia global 121/125 96,8% 92,0-99,1% 1911/1915 99,8% 99,5-99,9%
Se calculó el rendimiento del sistema para el análisis de 102 especímenes en cada plataforma. Para el FilmArray,
se realizaron un total de 108 pruebas, de las que se completaron 104 (96,3%; 104/108). Se produjeron dos fallos
de prueba debidos al programa (1,9%) y otros dos errores debidos al instrumento (1,9%). No se observaron fallos
en el control. Dos especímenes se volvieron a ensayar por obtener un resultado Gripe A „dudoso‟. Para el
FilmArray 2.0, se realizaron un total de 103 pruebas. Todas se completaron (100%; 103/103). No se observaron
fallos en el control. Un espécimen se volvió a ensayar por obtener un resultado Gripe A „dudoso‟.
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Reproducibilidad
Se llevó a cabo un estudio de reproducibilidad multicéntrico para determinar la reproducibilidad entre centros
y global de FilmArray RP en sistemas FilmArray 2.0. Los ensayos de reproducibilidad se realizaron en tres centros
de ensayo usando muestras de FNS artificiales, cada una de ellas enriquecida con combinaciones de cuatro
analitos RP diferentes, representando los tipos de organismos detectados por el panel (bacterias, virus de ADN
y virus de ARN). Cada analito fue evaluado a tres concentraciones diferentes (negativo, positivo bajo y positivo
moderado). Se obtuvieron resultados negativos para aquellos ensayos cuyas muestras no fueron enriquecidas
con el organismo correspondiente (la muestra no contenía analito).
Los datos incluyeron 90 réplicas por analito e incorporaron una gama de variación potencial introducida por
8 operarios diferentes, 3 lotes de cartuchos diferentes, y 11 instrumentos FilmArray 2.0 diferentes configurados en
tres sistemas multi-instrumento diferentes. Análogamente a la reproducibilidad del FilmArray RP en el FilmArray
(Tablas 44-45 anteriores), la concordancia de porcentaje (%) para los valores esperados Detectado, No detectado
o N/A fue 95,6% o mejor y la desviación estándar en la Tm fue 0,5 ˚C o menos en todos los ensayos.
Tabla 51. Resumen de resultados de reproducibilidad en el FilmArray 2.0
Analito ensayado Concentración
ensayada
Resultado esperado de
la prueba
% Concordancia con el resultado esperado
Centro/sistema Total (Intervalo de confianza
de 95%) A B C
Bordetella pertussis
Cepa A639 Zeptometrix
0801459
Positivo moderado 3× LoD
1,2x104 UFC/ml
Detectado 30/30 100%
29/30 96,7%
30/30 100%
89/90 98,9%
(94,0-100%)
Positivo bajo 1× LoD
4x103 UFC/ml
Detectado 30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
Negativo No detectado 30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
Adenovirus Especies C Serotipo 1 Zeptometrix 0810050CF
Positivo moderado 3× LoD
3,0x102 TCID50/ml
Detectado 29/30 96,7%
30/30 100%
28/30 93,3%
89/90 98,9%
(94,0%-100%)
Positivo bajo 1× LoD
1,0x102 TCID50/ml
Detectado 30/30 100%
30/30 100%
29/30 96,7%
89/90 98,9%
(94,0%-100%)
Negativo No detectado 30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
Gripe A H1N1-2009 A/SwineNY/03/2009
Zeptometrix 0810109CFN
Positivo moderado 3× LoD
3,0x102 TCID50/ml
Detectado 30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
Positivo bajo 1× LoD
1,0x102 TCID50/ml
Detectado 30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
Negativo No detectado 30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
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Analito ensayado Concentración
ensayada
Resultado esperado de
la prueba
% Concordancia con el resultado esperado
Centro/sistema Total (Intervalo de confianza
de 95%) A B C
Virus respiratorio sincitial
Tipo A
Zeptometrix 0810040ACF
Positivo moderado 3× LoD
6,0 TCID50/ml Detectado
30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
Positivo bajo 1× LoD
2,0 TCID50/ml Detectado
30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
Negativo No detectado 30/30 100%
30/30 100%
30/30 100%
90/90 100%
(96,0-100%)
Se realizó una evaluación de reproducibilidad de FilmArray RP en los sistemas FilmArray Torch. Se analizaron muestras artificiales que contenían cada analito de FilmArray RP en niveles positivos bajos [límite de detección (LoD) de 1x según FilmArray 2.0] en tres sistemas FilmArray Torch completos (12 FilmArray Torch Modules por sistema) durante cinco días (30 réplicas por analito y sistema para 90 réplicas en total por analito). La concordancia con los resultados con estado Detected (Detectado) esperados en los sistemas FilmArray Torch fue del ≥ 95,6% para cada analito de FilmArray RP y la concordancia con los resultados negativos esperados [con estado Not Detected (No detectado)] fue del 100% para cada analito.
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