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Le Virus de l’Hépatite Delta:Virus et Marqueurs
Dr. Elyanne Gault
Laboratoire de MicrobiologieHôpital Ambroise ParéBoulogne-Billancourt
Virus satellite du Virus de l’Hépatite B
Maladies graves du foie, aiguës ou chroniques
Diagnostic difficile
Traitement par l’Interféron- partiellement efficace
Le Virus de l’Hépatite Delta
Le virus de l’Hépatite Delta
(Bonino, J Virol, 1986; Wang, Nature, 1986; Ryu, J Virol 1993)
Ag HBs(Virus de l’hépatite B)
HDVVirus défectif
Satellite d’HBV
sHD LHD
1977: Mario Rizzetto
1-1679
sens génomique
ARN 1679 ntcirculaire - polarité négative
Le génome viral
Homologie 70%
1679-1
sens antigénomique
ARN antigénomique
1598 1012
ORF
ARNm sHD
ARNm LHD
LHD
sHD
aa30 51
site de
polymérisation
torsadé
8866
signal de
localisation
nucléaire
riche en aabasiques
14697
site de
fixation
à l’ARN
riche enarginines
214195
signal
d’assemblage
sited’isoprénylation
DOMAINES
FONCTIONS
Les protéines du VHD
Transcription
Réplication
NOYAU
R
CYTOPLASME
Le cycle de réplication HDV
AgHBs
Hépatocyte
ADN cccHBV
AgHBs
GOLGI/RE
Le cycle de réplication HDV
Récepteur hépatocyte non identifié (idem HBV…)
HBV (AgHBs) est indispensable à la réplication de HDVMAIS la réplication de HBV est inhibée par la réplication de HDV
In vivo - modèles animaux et patients)In vitro - sHD et LHD répriment les gènes des promoteurs
Enh1 et Enh2 de HBV- LHD active le gène de d’inhibition de réplication de HBV MxA
Rôle différencié des protéines deltasHD active la réplication viraleLHD inhibe la réplication virale mais permet la maturation
des virions et la production de particules infectieuses
Le cycle de réplication HDV
Réplication via enzymes cellulaires (RNA pol)Pas d’action des inhibiteurs d’enzymes virales
Inhibition de la réplication de HBV (LHD)Pas d’action des inhibiteurs du HBV (Lamivudine)
Nécessité d’un niveau suffisant d’AgHBs Rôle potentiel des inhibiteurs de l’ADN ccc de HBV(Toxicité mitochondriale de la Clévudine)
Etape finale clé (isoprénylation, interaction Ag HBs)Rôle potentiel des inhibiteurs de l’isoprénylation
Intérêt du Ténofovir à définir
Diversité génétique du virus de l’hépatite delta
Répartition géographique de l’infection chronique par HBV
2 à 7% - moyenne
> 8% - forte
< 2% - faible
Prévalence de l’AgHBs
Prévalence de l’infection par HDV
Faible endémie Endémie Moyenne Forte endémieTrès faible endémie< 10% 10 à 20% 20 à 60% > 60%
Abbas 2010
HDV-5
HDV-6
HDV-7HDV-8
Variabilité génétique de HDV
0.1
PERU
VNZD8349
VNZD8624
VNZD8375
SOMALIA
ETHIOPIA
LEBANON
NAURU
TK6HDV
TK5HDV
US2
CAGLIARI
HDViran
ITALY
W5
W15
US1
TK7HDV
TK3HDV
TAIWCHAO
TWD2667
CHINA
DFR45dFr1986dFr2158dFR2072DFR644
dFr2005DFR73DFR47DFR910DFR48dFr2139
TAIWU
AF209859
MIYAKO
L215
JAPAN
TAIWLEE
TW2476
PT26
PT62
YAKOUSK6
HDV-3
HDV-1
HDV-2b
HDV-2a
SOMALIA
ETHIOPIA LEBANON
NAURU TK6HDVTK5HDVUS2CAGLIARI
HDViranITALYW5W15
US1TK7HDV
TK3HDVTAIWCHAOTWD2667
CHINA
PERU
VNZD8349VNZD8624VNZD8375
DFR45dFr1986dFr2158
dFR2072DFR644
dFr2005
DFR73
DFR47
DFR910
DFR48
dFr2139 TAIWUAF209859
MIYAKOL215
JAPAN TAIWLEETW2476
PT26YAKOUSK6PT62
Distance : Kimura-2
100
100
9069100
95
100
Maximum de parcimonie
100100
9989
100
100
100
95
100100
100
100
100
100 100
100
100
100
100
100
100
99
100100
100
HDV-4HDV-2
HDV-1
HDV-3
NIGERIA
NIGER
CHAD
CENTRAL AFRICAN REPUBLIC
S U D A N
CAMEROON
SÃO
TO
MÉ
GABON
C O
N G
O
Z A I R E
BURKINA FASO
BE
NIN
TO
GO
GH
ANA
IVORYCOAST
LIBERIA
SIERRALEONE
GUINEAGUINEA- BISSAU
MAURITANIA
SENEGALGAMBIA
M A L IWESTERN S
AHARA MOROCCO
A L G E R I A
TU
NIS
IA
L I B Y AEGYPT
ETHIOPIA
S O
M A
L I
A
KENYA
UGANDA
MA
LA
WI
M O
Z A
M B
I Q
U E
M A
D A
G A
S C
A R
ZIMBABWE
BOTSWANA
SWAZILAND
LESOTHO
SOUTH AFRICA
NAMIBIA
ANGOLA
Z A M B I A
EQU.GUINEA
RWANDA
TANZANIA
COMOROS
DJIBOUTI
MAOTTE
MAURITIUS
RÉUNION
NORTHATLANTIC
OCEAN
MEDITERRANEAN SEA
GULF OF
ADEN
BURUNDIINDIAN
OCEAN
dFr48dFr45 dFr1986dFr2066
dFr910dFr489dFr2180
dFr73dFr2055dFr2204dFr2301dFr2154
dFr47dFr2317
dFr1843dFr2458
dFr2005 dFr2401
dFr1972dFr69
dFr1953
dFr1594SOUTH
ATLANTICOCEAN
dFr48
dFr2020dFr2502
dFr2072
dFr644
HDV-5
HDV-7HDV-6
HDV-8
100% des isolats HDV-5, -6, -7 et -8 correspondent à des patients nés en Afrique
Variabilité génétique de HDV
Variabilité génétique de HDV
NIGERIA
NIGER
CHAD
CENTRAL AFRICAN REPUBLIC
S U D A N
CAMEROON
GABON
C O
N G
O
Z A I R E
BURKINA FASO
BE
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TO
GO
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IVORYCOAST
LIBERIA
SIERRALEONE
GUINEAGUINEA- BISSAU
MAURITANIA
SENEGALGAMBIA
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AHARA MOROCCO
A L G E R I A
TU
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ETHIOPIA
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SWAZILAND
LESOTHO
SOUTH AFRICA
NAMIBIA
ANGOLA
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RWANDA
TANZANIA
COMOROS
DJIBOUTI
MAOTTE
MAURITIUS
RÉUNION
NORTHATLANTIC
OCEAN
MEDITERRANEAN SEA
GULF OF
ADEN
BURUNDIINDIAN
OCEAN
SOUTHATLANTIC
OCEAN
GABON
EQU.GUINEA
Makuwa et al, J Clin Microbiol 2008
16% femmes enceintes AgHBs+sont infectées par HDVHDV-8 plus fréquent que HDV-1
I
Janvier 2003 - Août 2006 650 échantillons
HDV-8 (0.5%)HDV-6 (2%)
HDV-5 (15.5%)
HDV-7 (3.5%)
HDV-1 (78.5%)
Epidémiologie de HDV en France (CNR)
Afrique du Sud (n=1)Algérie (n=7)Angola (n=1)
Bénin (n=1)Burkina Faso (n=3)
Cameroun (n=74)Cap Vert (n=1)Comores (n=1)
Congo Brazzaville (n=10)Cote d’Ivoire (n=46)
Égypte (n=8)Gabon (n=6)
Gambie (n=1)Ghana (n=2)
Guinée / Guinée Bissau (n=17)Madagascar (n=4)
Mali (n=45)Maroc (n=9)
Mauritanie (n=14)Mayotte (n=3)
Niger (n=1)Nigeria (n=2)
République de Centre Afrique (n=32)République Démocratique du Congo (n=4)
Sénégal (n=18)Sierra Léone (n=1)
Tchad (n=5)Togo (n=4)
Tunisie (n=7)
54,2% Afrique (n=328)
Albanie (n=1)Bulgarie (n=1)Georgie (n=8)Grèce (n=1)Kosovo (n=1)Moldavie (n=4)Roumanie (n=18)Russie (n=7)Serbie (n=2)Turquie (n=16)
9,8% Europe de l’Est (n=59)
Espagne (n=7)France (n=146)Italie (n=21)Portugal (n=6)Suisse (n=2)
30,1% Europe de l’Ouest (n=182)
Mongolie (n=3)Vietnam (n=9)
1,9% Asie (n=12)
Antilles (n=2)Colombie(n=1)Australie (n=1)
Inconnue (n=20)
4% Autres (n=24)
Caractéristiques des patients suivis en France (2001-2006)n=605
- Homme (70,6%) - Age médian: 40 ans (14ans à 83ans)- Pays de naissance:
Europe de l’Ouest :FranceItalieEspagneSuissePortugal
Inconnu
Asie :MongolieVietnam
Europe de l’Est :RoumanieRussieMoldavieTurquieSerbieBulgarieGeorgieKosovo
Afrique :Afrique du SudAlgérieAngolaBéninBurkina FasoCamerounCap VertComoresCongo (Brazzaville)Cote d’IvoireÉgypteGabonGambieGhanaGuinéeMadagascarMaliMarocMauritanieMayotteNigerNigeriaRépub.CentrafriqueRépub. D. CongoSénégalTchadTunisie
Evolution de l’origine géographique des patients infectés par HDV entre 2001 et 2006
2001n=127
2002n=101
2003n=43
2004n=65
2005n=171
2006n=110
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
HDV-1
HDV-5
2001n=127
2002n=101
2003n=43
2004n=65
2005n=171
2006n=110
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
HDV-6, -7, -8
Evolution des génotypes HDV entre 2001 et 2006
Epidémiologie de HDV en France
Circulation de virus d’origine africaineEmergence de nouveaux génotypes en France
Pouvoir pathogène des variants par rapport aux virus HDV-1
Diagnostic moléculaire des variants
Association des variants HDV avec certains génotypes HBV (co-spéciations?)
Origine géographique de HDV?
Marqueurs diagnostics de l’infection par HDV
Diagnostic de l’Hépatite delta
MARQUEURS DISPONIBLES
SérologieAg delta sérique (pas de valeur diagnostique)Ac anti-delta totaux (dépistage)IgM anti-delta (infection aiguë, réplication)
Marqueurs moléculaires (techniques « maison »)Recherche qualitative de l’ARN delta (sérum)Quantification de l’ARN delta (sérum)
Infection aiguë résolutive
IgM anti-Delta
IgG Anti-HD
Hépatite aiguë
ARN Delta
Ag Delta
Primo-infection
IgM anti-Delta
Hépatite aiguë
IgG Anti-HD
ARN Delta
Primo-infection Hépatite chronique
Infection chronique
Indications: dépistage
PORTEURS CHRONIQUES de l’ Ag HBs :PENSER AU DEPISTAGE DU DELTA
(Ac anti-delta totaux)
IgG Anti-HD
Hépatite chronique
Dépistage positif
IgG Anti-HD
ARN Delta
IgM anti-Delta
Marqueurs du suivi thérapeutique
PCR Qualitative (à Avicenne) :Technique maison « consensus » pour tous les génotypes connusSeuil de sensibilité 100 copies/mL
PCR Quantitative:Technique maison « consensus » pour tous les génotypes connusSeuil de sensibilité 100 copies/mL - Linéarité: 103 à 109 copies/mL
Apport essentiel des techniques moléculaires
Intérêt secondaire des IgMMoins sensible que la PCR (faux négatifs) et moins spécifique de la réplication virale (faux positifs)Kits ELISA commerciaux
Suivi quantitatif de l’Ag HBsZachou et al, Liver Int, 2009; Manesis et al, Antiviral Therapy, 2007
Recherche de l’ARN viral intra-hépatique
Cible: Ag deltaNon conservé entre les génotypes
Plateforme Cobas
Efficacy of Peginterferon alpha-2b in Chronic Hepatitis delta: Relevance of Quantitative RT-PCR for Follow-UpC. Castelnau, F. Le Gal, M.P. Ripault, E. Gordien, M. Martinot, N. Boyer, B. Pham , P. Bedossa, P. Dény, P. Marcellin, E. Gault Hepatology, 2006, 4: 728-735
Service d’HépatologieInserm U481
Hôpital BeaujonP. Marcellin, C. Castelnau
Protocoles thérapeutiques
OBJECTIFS
- Evaluer l’efficacité et la tolérance d’un traitement de 12 mois par Interferon-PEG -2b chez 14 patients porteurs d’une hépatite chronique B-D.
- Evaluer l’intérêt de la quantification de l’ARN-VHD dans le suivi et la réponse virologique
PCR HDV qualitative et quantitative - Avant mise sous traitement
-Au cours du traitement- Au cours du suivi post-thérapeutique
n=1412 mois PEG-Interferon 2b
43% non répondeurs
43% répondeurs
14% répondeurs-rechuteurs
RESULTATS
5
M41T0 M6 M18M12 M24
2
3
4
1
7
2
3
4
5
6
8
Profils de réponse au traitement: REPONDEURS
Charge virale(log10 copies/mL sérum)
Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL
ALT (xN)
1
2
3
4
22
M30T0 M6 M18M12 M24
7
2
3
4
5
6
8
Charge virale(log10 copies/mL sérum)
Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL
ALT (xN)
Profils de réponse au traitement:REPONDEURS - RECHUTEURS
ARN intra-hépatique?
M30T0 M6 M18M12 M24
7
2
3
4
5
6
8
1
2
3
4
5
Charge virale(log10 copies/mL sérum)
Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL
ALT (xN)
Profils de réponse au traitement: NON REPONDEURS
M30T0 M6 M18M12 M24
1
2
3
4
8
7
2
3
4
5
6
8
Charge virale(log10 copies/mL sérum)
Seuil de sensibilité: 2 log10 copies/mL
ALT (xN)
Profils de réponse au traitement: REPONDEURS LENTS
ARN intra-hépatique?
M30T0 M6 M18M12 M24
PEG-IFN Lamivudine
7
2
3
4
5
6
9
1
2
3
4
22
HDV-RNA
HBV-DNA
ALAT
Treatment of chronic delta hepatitis with lamivudine vs lamivudine+interferon vs interferonC. Yurdaydin, et alJ Viral Hep, 2008, 15: 314-321
Etude multicentrique (Turquie)C. Yurdaydin
Protocoles thérapeutiques
39 patients (17 LAM, 14 LAM-IFN, 8 IFN)Suivi par PCR semi-quantitative (seuil de
détection 100000copies/mL)
Aucun intérêt à utiliser la lamivudine, même en association avec IFN
Resolution of chronic hepatitis delta after 1 year of combined therapy with PEG-IFN, tenofovir and emtricitabineMansour W, Ducancelle A, Le Gal F, Le Guillou-Guillemette H, Abgueguen P, Pivert A, Calès P, Gordien E, Lunel F
J Clin Virol 2009
Case report
Protocoles thérapeutiques
Homme 47 ans DagestanCV HBV >9 log UI/mL
CV HDV 5.6 log copies/mLAssociation PEG-IFN + tenofovir + emcitrabine (Viread)
Clairance virale + séroconversion HBs après 10 mois de traitement
Profil virologique de 25 patients
Suivi longitudinal de 25 patients (1 pvt / 6 mois)
Conclusions
Hépatite delta n’est pas une maladie en voie de disparitionAttention aux populations migrantes :Afrique, Asie centrale, Europe de l’Est
Utiliser le diagnostic moléculairePour détecter les infections actives (tests qualitatifs)Pour suivre l’efficacité d’un traitement (Test quantitatif)
Variabilité génétique de HDV20% des patients suivis en France ont génotype 5 à 8Les tests moléculaires qui ne tiennent pas compte de la
variabilité génétique risquent de rendre des « faux négatifs »
Traitement de l’hépatite deltaIFN-alfaPlace du Ténofovir si réplication de HBV