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Leishmaniasis: lo profundose oculta en la superficie
Felix J. Tapia
Instituto de BiomedicinaFacultad de Medicina
Universidad Central de Venezuela
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Tópicos a tratar:
2) Importancia de la Leishmaniasis
3) Fases de la Regulación Cutánea
4) Patogénesis e Hipótesis de Trabajo
5) Nuestros resultados en el contexto de la Regulación Cutánea
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Importancia de la Leishmaniasis
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Leishmaniasis Tegumentaria en la América precolombina
Nazca 200 AC – 600 DC
Mochica Siglos I-VIII DC
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Leishmaniasis en el Mundo
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Coinfección Leishmaniasis y VIH
![Page 7: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/7.jpg)
Coinfección Leishmania y HIVEl problema de la cuenca Mediterránea
Leishmaniasis es la tercera enfermedad oportunista en individuos infectados con HIV.
La transmisión puede ser a través de intercambio de jeringas entre consumidores de drogas.
Aparición de “nuevos parásitos”: mas virulentos y resistentes a quimioterapia
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Leishmaniasis visceral canina
En zonas endémicas la seroprevalencia es circa 20%. El 50% son asintomáticos.
Los vectores pueden infectarse de perros sintomáticos y asintomáticos.
Sólo los perros sintomáticos son tratados asintomáticos = fuente de transmisión.
Los perros tratados con antimoniales sufren recaídas y reinfección.
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Promastigotes:(procíclicos y metacíclicos)Multiplicación en el intestino de flebótomos
Amastigotes:Multiplicaciónintracelular en fagocitos, liberados al torrente sanguíneo por lisis celular
Picadura del mosquito
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Kamhawi 2006
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Clasificación del Género Leishmania
L e i s h m a n i a ( L . ) V i a n n i a ( V . )
L e i s h m a n i a
Complejodonovani tropica mexicana hertigi braziliensis
EspecieL.(L.) donovani L.(L.) tropica L.(L.) mexicana L.(L.) hertigi L.(V.) braziliensisL.(L.) infantum L.(L.) aethiopica L.(L.) amazonensis L.(L.) deani L.(V.) peruvianaL.(L.) chagasi L.(L.) major L.(L.) pifanoi L.(V.) panamensisL.(L.) archibaldi L.(L.) gerbilli L.(L.) garhami L.(V.) guyanensis
L.(L.) venezuelensis L.(V.) lainsoniL.(L.) aristidesi L.(V.) naiffiL.(L.) enrietti L.(V.) shawi
L.(V.) equatorensis L.(V.) colombiensis
Género
SubGénero
Mendoza, Shaw, Tapia, 1996
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Desarrollo de la infección por Leishmania sp.
Leishmaniasiscutánea crípticaasintomática
Reaccióncutáneasin lesión
Sitio primario de infección
Reacción cutánea menor o ausente
Leishmaniasisvisceral crípticaasintomática
Lesión cutánea única
Leishmaniasisvisceral Kala-Azar L.donovaniL. infantum/L. chagasi
metástasisLeishmaniasis mucocutánea (LMC) L. (V.) braziliensis L. (V.) panamensis
Leishmaniasis cutánea difusa (LCD) L. (L.) amazonensis L. (L.) aethiopica
Leishmaniasis cutánea localizada (LCL) L. (L.) mexicana L. (V.) braziliensis L. (V.) guyanensis
MUERTE
Cura terapéutica
PKDL
Cura expóntanea o terapéutica L. (L.) mexicana L. (V.) braziliensis L. major L. tropica
Douglas Barker
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Leishmaniasis Tegumentaria
C57BL/6IFN-
BALB/cIL-4
LCL
Formas Intermedias
LCM LCI
LCD
DBAIFN / IL-4
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Modelo múrido de Leishmaniasis Cutánea Americana
C57BL/6 BALB/c
Th1IFN-
Th2IL-4
L. mexicanaMHOM/BZ/82/BEL21
Sánchez et al. Acta Micros 1993, 2: 180-187Aguilar-Torrentera et al. Am J Trop Med Hyg 2002, 66: 273–279
Díaz et al. Clin Exp Dermatol 2003, 28: 288-293
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Díaz et al. Clin Exp Dermatol 2003, 28: 288-293
![Page 19: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/19.jpg)
Fases de la Regulación Cutánea
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Fases de la Regulación Cutánea
Activación Inmunoestimulación Fase Efectora
DesafíoCaptura de antígenoMigración
Presentación de antígenoExpansión clonalReclutamiento
RetenciónProliferaciónSupresión
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Inmunopatología cutáneaBrian Nickoloff, 1988
1. Modelo Citotóxico eritema multiforme, enfermedades liquenoides,
leishmaniasis cutánea localizada
2. Modelo Tolerogénico liquen plano, dermatitis por contacto,
leishmaniasis cutáneo difusa
3. Modelo Proinflamatorio psoriasis, leishmaniasis mucocutánea
![Page 22: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/22.jpg)
LCL LCD
Th1
Th1+
Th2 Th2
LMC
MHC-II
ICAM-1
LFA-1
Respuesta Inmunitaria en Leishmaniasis
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epidermis
dermis
Mo
ag
Mo
..
.
granuloma
gangliolinfático
endoteliovascular
IL-4
mastocito
IFN-
NK
Mo
IL-12
T memoria CLA+
QCCL
IL-1TNF-
CCL27
QC
ftapia
E-selectina
CLA+ CCR10
TNF-αIFN-γ
CCL27
CCR10
CLA+CCR10
CCL20
CLA+CCR4
CCL17CCL22
![Page 24: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/24.jpg)
Patogénesis e Hipótesis de Trabajo
![Page 25: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/25.jpg)
LCL LCD
Th1
Th1+
Th2 Th2
LMC
MHC-II
ICAM-1
LFA-1
![Page 26: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 27: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/27.jpg)
Nuestros resultados
en el contexto de la Regulación Cutánea
![Page 28: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/29.jpg)
CD1a CD83 IL-100
250
500
750LCLICLDCL
célu
las/
mm
2
Densidad de Células Dendríticas que expresan CD1a, CD83 yIL-10 en lesiones de leishmaniaisis cutánea americana
Díaz et al., 2002
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IFN- LCI
IL-10 LCI
Citocinas en LCL
![Page 31: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/31.jpg)
Clin Exp Dermatol 2003, 28: 288-293
![Page 32: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/32.jpg)
Densidad de células iNOS positivas en ratones BALB/c y C57BL/6 infectados con L. mexicana
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 120
1500
3000
4500
6000
7500C57BL/6 Control sano
C57BL/6 infectado
BALB/c Control sano
BALB/c infectado
Semanas post infección
célu
las/
mm
2
Díaz et al., 2003
![Page 33: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/34.jpg)
iNOS en granulomas de LCL, ICL y LCD
LCL ICL DCL0
500
1000
1500
iNO
S +
cel
ls/m
m2
![Page 35: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/35.jpg)
iNOS en queratinocitos de LCL
![Page 36: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/36.jpg)
D2SC-1 + amastigotes
3 hr
![Page 37: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/37.jpg)
0
5
10
15
20
25
1hr 3hr 6hr 24hr
1p2p3p+3ptotal
% c
élu
las
infe
c tad
as
tiempo de incubación
Interacción Célula Dendrítica y LeishmaniaD2SC-1 + promastigotes L. (V.) panamensis
![Page 38: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/38.jpg)
Gallo et al. 2005
Péptidos Antimicrobianos
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EucariotesPéptidos catiónicos
CecropinasDefensinasThioninasClase Aminoácidos enriquecidaDerivados de HistonasBeta HairspinProteínas estructurales y funcionalesCathelicidinasThrombocidinas
Péptidos aniónicosDerivados de NeuropéptidosRicos en Ácido AspárticoDipéptidos AromáticosProteínas unidas a Oxigeno
Péptidos Antimicrobianos
![Page 40: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/40.jpg)
Péptido LL-37 en leishmaniasis cutánea difusa
![Page 41: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/41.jpg)
CD de médula ósea infectadas con L.mexicanay el péptido LL-37
sin LL-37 con LL-37
![Page 42: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/42.jpg)
Alteraciones ultraestructurales de promastigotes de Leishmania (L.) mexicana inducidas por el péptido antimicrobiano LL-37
![Page 43: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/43.jpg)
Alteraciones ultraestructúrales de promastigotes de Leishmania (L.) mexicana inducidas por el péptido antimicrobiano LL-37
acidocalcisomas (asterisco)mitocondrias (flecha fina)flagelo (cabeza de flecha)envoltura nuclear (flecha gruesa)envoltura del cinetopato (triángulo)
![Page 44: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/44.jpg)
0 1 2 3 4 50
10
20
30
40
LL 37 (5 g/ml)
Ag + LL-37 (5 g/ml)
Mitosis
Cél
ula
s (%
)
Células Dendríticas infectadas con L.mexicanay el péptido LL-37.Ensayo de linfoproliferación con CFSE
![Page 45: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/45.jpg)
Fases de la Regulación Cutánea
Activación Inmunoestimulación Fase Efectora
DesafíoCaptura de antígenoMigración
Presentación de antígenoExpansión clonalReclutamiento
RetenciónProliferaciónSupresión
![Page 46: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/46.jpg)
Kinetoplastid Biol Dis, 2005 4:2
![Page 47: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/47.jpg)
Progresión de la infección por L (L) mexicana en ratones BALB/c neonatos receptores de células dendríticas de los diferentes grupos experimentales
0 1 2 3 4 5 6 7 80
1
2
3
4
5
-
5x105 promastigotes
1x106 CDs adulto infect adulto
1x106 CDs adulto infect neonato
1x106CDs adulto sano
1x106 CDs neonato sano
Semanas de infección
Gro
sor
alm
ohad
illa
plan
tar
(mm
)
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Densidad de células positivas para IL-4 e IFN- en ratones BALB/c neonatos receptores de células
dendríticas de los diferentes grupos experimentales
AS NS AIEN0
500
1000
1500
2000
2500
3000IL-4
IFN-
célu
las/
mm
2
semana 7
![Page 49: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/49.jpg)
Fases de la Regulación Cutánea
Activación Inmunoestimulación Fase Efectora
DesafíoCaptura de antígenoMigración
Presentación de antígenoExpansión clonalReclutamiento
RetenciónProliferaciónSupresión
![Page 50: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/50.jpg)
![Page 51: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/51.jpg)
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 131
2
3
4
5
6
weeks of infection
foot
pad
thic
knes
s (m
m)
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 131
2
3
4
5
6
2hr stress & healthy
2hr stress & infect8hr stress & infectinfect without stress
Progresión de la infección por L. (L.) mexicana en ratones BALB/c y C57BL/6 sometidos a estrés agudo
![Page 52: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/52.jpg)
0.0 4.0 8.0 12.00
250
500
750
1000
0
1000
2000
0 sem 4 sem 8 sem
weeks of infection
cells
/mm
2
2hr estrés sanos
2hr estrés infectados8hr estrés infectadosSin estrés infectados
Densidad de células de Langerhans en grupos experimentales de BALB/c y C57BL/6
![Page 53: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/53.jpg)
Células de Langerhans Iad+ en epidermis separada de ratones BALB/c infectados con L. (L.) mexicana
No estresado Estresado por 2 hr
![Page 54: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/54.jpg)
1 3 5 9 110
100
200
BALB/c estresado & infectado
BALB/c infectado
Weeks of infection
cells
/mm
2
Densidad de células DC-SIGN positivasen lesiones de ratones BALB/c estresados e infectados con L.mexicana
![Page 55: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/55.jpg)
1 3 5 9 110
1000
2000
3000
BALB/c infectado yestresado
BALB/c infectado
* *
*
*
Densidad de macrófagos MOMA-2 positivos en lesiones de ratones BALB/c infectados con L.mexicana
* p 0.05
cells
/mm
2
Weeks of infection
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1 3 5 9 110
100
200
BALB/c stressed & infect
BALB/c infect
Células TLR-9 positivas en lesiones de ratones BALB/c infectados con L.mexicana5 semanas
cells
/mm
2
Weeks of infection
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Leishmaniasis vesceral cutánea
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Leishmaniasis Visceral Canina
sintomático
asintomático
onicogrifosis
alopecia
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Hígado Bazo Hígado Bazo0
250
500
750
1000Sintomático - Hígado
Sintomático -Bazo
Asintomático -Hígado
Asintomático - Bazo
LDU
(par
ásito
s/10
00nu
clei
)
Carga parasitaria en perros con infección natural por L. infantum/L. chagasi
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asintomáticossintomáticossanos
MHC II CD11c0
1000
2000
3000
célu
las/
mm
2
Células MHC II+ y células dendríticas en hígado y bazo de perros con infección natural por L. infantum/L. chagasi
MHC II CD11c0
1000
2000
3000
hígado bazo
![Page 61: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/61.jpg)
Laboratorio de Biología MolecularInstituto de Biomedicina
Estudiantes:Ysamar Chirinos
Alba QuiñonesMaría del Rosario Ruiz
Fabiola CabreraMaría Alejandra Sarabia
Eliana FigueiraMónica Fernández
Adriana ArbeláezCelsy Hernández
Alejandra Da AlmeidaPedro Salazar
María C. García
Laboratorio:Nilka L. Díaz
Richard RamírezIzaskun Urdanibia
Iraima B. MonsalveMónica SuárezMiguel MarzalLuis González
Colaboradores:Martín A. Sánchez
Zelandia FermínLadys Sarmiento
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Lab
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![Page 63: Leishmaniasis lo profundo se oculta en la superficie](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022042817/559be6e21a28abc04a8b458f/html5/thumbnails/63.jpg)