Download - (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 1/59
FARMASI ± FMIPA ± UHAMKA
2011
Priyo Wahyudi
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 2/59
Metode Difusi Agar
Metode Dilusi
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 3/59
Potensi Antimikroba adalah kekuatan suatu antibiotika
dalam menghambat atau membunuh pertumbuhan
mikroba. Satuannya dalam IUmg (iu=international unit)
atau µg/mg
Prinsip ; membandingkan respon mikroba uji yang peka
terhadap percobaan dalam kondisi yang sama terhadap
zat baku pembanding (standar) atau zat uji
Baku standar ; zat/senyawa yg sudah diketahui
kemurnian dan kekuatan / potensinya Cara analisis ;
Metode difusi agar (lempeng)
Metode dilusi (Turbidimetri)
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 4/59
Penetapan potensi antibiotika secara mikrobiologi
merupakan metode penetapan hayati, sebagai jasad
renik digunakan mikroorganisme yang telah diketahui
kemurnian dan kekuatan / potensinya Respon yang diamati ; berupa efek hambatan
terhadap pertumbuhan mikroba uji yang ditentukan
oleh daerah bening (inhibition zone) di sekeliling zat uji
(cara difusi) atau kekeruhan (turbiditas) yg ditimbulkan
oleh pertumbuhan mikroba dalam medium cair (caraturbidimetri) menggunakan tabung reaksi dan
spektrofotometer
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 5/59
1. CARA DIFUSI AGAR
Prinsip ; zat yang akan diuji berdifusi dari
pecadang ke dalam medium agar yg telah
diinokulasi dengan mikroba uji.
Inkubasi selama waktu tt dan kemudian amati
adanya hambatan pertumbuhan mikroba uji dan
di ukur diameter hambatannya Diameter hambatan yang terbentuk
dibandingkan dengan diameter baku standar
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 6/59
2. CARA TURBIDIMETRI
Digunakan media cair, hambatan pertumbuhan
mikroba uji diukur dengan menentukan
kekeruhan (turbiditas) larutan dengan
spektrofotometer
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 7/59
Bahan-bahan yang diperlukan dalam uji potensi
antibiotik:
Mikroba uji
Baku pembanding biologis
Media pertumbuhan
Larutan dapar (penyangga)
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 8/59
Mikroba uji
Mikroba uji harus berasal dari galur murni, dapatmemberikan respon yg bertingkat antara peningkatan
konsentrasi dgn peningkatan daerah hambatannya.
Untuk cara difusi, daerah hambatan yg terbentuk harus
jelas dan mudah diukur. Untuk penetapan cara tabung,
perbedaan kekeruhan pada tingkat dosis tertentu harusterlihat jelas
Baku pembanding biologis (biological reference) ;
Digunakan antibiotik yg telah diketahui kemurnian dan
potensinya secara pasti. Baku pembanding ini
direkomendasikan oleh WHO dan di Indonesia seperti
BPOM, SPI, SPN, SBL (S=standar, B=baku,
P=pembanding, L=lab, I=intern)
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 9/59
Media pembenihan
Media yang digunakan harus mendukung pertumbuhan
mikroba uji dgn baik, tidak boleh mengandung zat yg
bersifat antagonis ataupun yg mempengaruhi aktivitas
antimikroba dari antibiotik yg diperiksa
Larutan dapar
Digunakan untuk melarutkan antibiotik yang akan
diperiksa baik baku pembanding maupun sampel uji.
Pemilihan larutan dapar yang digunakan disesuaikandengan sifat dan stabilitas bahan yabg akan diuji.
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 10/59
Biasanya digunakan 3 tingkatan dosis, baik untuk
sediaan uji (u) atau pembanding (s); u1, u2, u3 dan s1,
s2 , s3
Pengulangan dilakukan msg-msg 2-8x untuk cara difusidan 2-6x untuk cara turbidimetri
Tingkatan dosis harus tetap, misal kenaikan dosis dari
u1 ± u2 = 4/3. jika u1 = 5 µg/mg , u2 = 4/3 x 5 µg/mg =
6,67µg/mg. u3 = 4/3 x 6,67 = 8,89 µg/mg ; begitu juga dengan s1, s2 dan s3
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 11/59
Metode analisis potensi antibiotik secara difusi agar merupakan
cara yang sederhana dan hasil yg diperoleh cukup teliti.
Cara ini mrp cara terpilih dan direkomendasikan oleh
International Collabotrative Study di Swedia dan FDA di ASuntuk pengujian mutu antibiotik
Prinsip penetapannya yaitu mengukur luas hambatan
pertumbuhan mikroba uji yg disebabkan oleh zat baku standar
dan zat yg di uji
Dlm range konsentrasi tt terdapat hub yg linear antarapeningkatan konsentarsi dgn luas daerah hambatan
pertumbuhan mikroba uji
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 12/59
Ingredien / komposisi medium pertumbuhan
Pemilihan medium pertumbuhan
Pengaruh pH
Ukuran inokulum
Stabilitas mikroba uji
Aktivitas antibiotika
Waktu inkubasi
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 13/59
Komposisi ingredien yg umum tdp pada
komposisi pertumbuhan mo adalh ; pepton,
tripton, ekstrak ragi, agar, dan mineral (Ca, Mg,
Fe, NaCl, KH) NaCl mengurangi aktivitas antibiotik gol
aminoglikosida dan menahan aktivitas ferosidin
KH pada uji difusi dapat mempertinggi aktivitasnitrofurantoin atau ampisilin
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 14/59
Pemilihan medium pertumbuhan; dimana diperlukan
persiapan medium yg cocok bagi pertumbuhan mo demikian
pula ketebalan dan konstituen harus merata pada medium
agar
Pengaruh pH terhadap luas daerah hambatan disebabkan
oleh aktivitas antibiotik yg tergantung pada pH medium.
Misalnya aktivitas aminoglikosida diperkuat dalam suasana
asam sedangkan tetrasiklin dalam suasana basa
Jika dalam melarutkan media ; pH yg tinggi diturunkan dgn
menambahkan HCl 0,1N, pH yg rendah dinaikkan dgn
penambahan NaOH 0,1N
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 15/59
Inokulum adalah campuran antara suspensi dan media.
Luas daerah hambatan akan semakin kecil jika inokulum
semakin besar kandungan mikroorganismenya.
Suatu inokulum dikatakan ideal apabila kandunganmikroorganismenya homogen, misal 1-10%
Apabila pertumbuhan yg rapat, dapat menyebabkan
terjadinya penumpukan pada tempat tt
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 16/59
Resistensi mikroba uji terhadap suatu antibiotik dapat
terjadi dalam kondisi pertumbuhan tertentu. Oleh sebab itu
regenerasi mikroba perlu dilakukan secara periodik dan
sewaktu-waktu diuji kemurnian dan kepekaannya.
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 17/59
Untuk mendapatkan daerah hambatan yang baik pada
suatu penetapan, terlebih dahulu perlu ditentukan kadar
hambat minimum (KHM) dari antibiotik yang diuji.
Pengaruh predifusi larutan antibiotik yangg terjadi sebelum
inkubasi harus dihilangkan atau dikurangi dengan cara
pengisian larutan antibiotik ke dalam medium agar
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 18/59
Inkubasi inokulum dilakukan dalam waktu yang optimal,
sehingga keseimbangan antara aktivitas antibiotik dengan
daya tumbuh mikroba dapat menghasilkan daerah
hambatan yang baik untuk pengukuran zona bening yang
muncul sebagai daerah penghambatan pertumbuhan
mikroba, biasanya antara 18-24 jam
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 19/59
Resevoir pada Teknik difusi agar dapat berupa:
Silinder gelas / logam
Cakram kertas (paper disc)
Cetak lobang (punched holes)
Cakram : tempat meletakkan sampel antimikroba yang akan
diuji potensinya pada medium agar yang telah memadat
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 20/59
Antimicrobial drugs are widely used for the
treatment of infectious diseases.
Pathogens should be tested for susceptibility to
individual antibiotics to ensure appropriatechemotherapy. This rigorous approach to
antimicrobial drug treatment is usually applied
only in health care settings.
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 21/59
The standard procedure that assesses antimicrobialactivity is called the Kirby±Bauer method (Figure 24.8).
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 22/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 23/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 24/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 25/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 26/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 27/59
Agar media are inoculated by evenly spreading
a defined density of a suspension of the pure
culture on the agar surface. Filter paper disks
containing a defined quantity of the antimicrobialagents are then placed on the inoculated agar.
After a specified period of incubation, the
diameter of the inhibition zone around each disk
is measured. Table 24.4 presents zone sizes for several antibiotics.
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 28/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 29/59
Antibiograms are periodic reports that indicate
the susceptibility of clinically isolated organisms
to the antibiotics in current local use.
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 30/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 31/59
Explain how to implement current NCCLS
antimicrobial susceptibility testing (AST) and
reporting recommendations.
Describe reliable methods for detectingresistance among:
Enterobacteriaceae
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Enterococcus spp.
Streptococcus pneumoniae and Streptococcus spp.
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 32/59
Describe effective reporting of AST results.
List steps that can be taken to verify AST results
obtained on bacteria isolated from patients.
Discuss NCCLS-recommended QC procedures
and how to trouble-shoot out-of-control QC
results
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 33/59
Which organisms to test?
What methods to use?
What antibiotics to test? How to report results?
How to determine the clinical significance of results?
How to ensure accuracy of results?
Quality control / quality assurance When to call the MD, infection control, public health?
When to ask for help?
Where to go for help?
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 34/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 35/59
Disk diffusion (Kirby Bauer)
Broth micro-dilution MIC
NCCLS reference method
Etest
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 36/59
Disk Diffusion
Test
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 37/59
Select colonies
Prepare inoculum
suspension
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 38/59
Mix well
Standardize inoculum
suspension
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 39/59
Swab plate
Remove sample
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 40/59
Add disks
Incubate overnight
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 41/59
Transmitted Light Reflected Light
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 42/59
Qualitative results
Susceptible
Intermediate ± may respond if infection is at body site
where drug concentrates (e.g. urine) or if higher thannormal dose can be safely given
Resistant
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 43/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 44/59
Endocarditis
Meningitis
Septicemia
Osteomyelitis
Immunosuppressed patients (HIV, cancer, etc.)
Prosthetic devices
Patients not responding despite ³S´
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 45/59
Minimal inhibitory concentration
The lowest concentration of antimicrobial agent
that inhibits the growth of a bacterium
Interpret:
Susceptible
Intermediate
Resistant
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 46/59
Standardize inoculum suspension
Final inoculum concentration
3 ± 5 x 105 CFU/ml
(3 ± 5 x 104 CFU/well)
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 47/59
Microdilution MIC tray
Prepare inoculum
suspension
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 48/59
Dilute & mix inoculum suspension
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 49/59
Pour inoculum into
reservoir and
inoculate MIC tray
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 50/59
Inoculatepurity plate
Incubate overnight
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 51/59
Reflected light Transmitted light
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 52/59
Sub final test suspension to non-selective
medium (after inoculating MIC test)
Streak for isolation (avoid several specimens per
plate - may not reveal contaminants if noisolated colonies)
Examine before reading MIC (usually at 16-20 h)
Re-incubate if antibiogram questionable
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 53/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 54/59
- +
64
32
16
84
2
1
>64
0.5
>64
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 55/59
Staphylococci ± oxacillin, vancomycin, cefoxitin
Enterococci ± vancomycin
³Resistance may be reported any time growth is
observed after a minimum of 16 h incubation´
After minimum of 16 h, read test:
if ³R´, report
If ³S´, re-incubate and read again at 24 h
NCCLS M2 NCCLS M2--A8, M7A8, M7--A6A6
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 56/59
MIC on a stripMIC on a stripabbiodisk .comabbiodisk .com
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 57/59
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 58/59
S. pneumoniaeS. pneumoniae
Penicillin MICPenicillin MIC
=3 =
3 QQg/mlg/ml
5/12/2018 (Mikro) Kuliah 14 Uji Antimikroba Lama - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/mikro-kuliah-14-uji-antimikroba-lama 59/59
Viridans Streptococcus ± penicillin
S. pneumoniae ± penicillin,
cefotaxime/ceftriaxone (sterile sites)
Enterococcus ± vancomycin ³Int´ results
Staphylococcus ± vancomycin zone e14 mm