efektifitas ekstrak phaleria macrocarpa, kemoterapi...
TRANSCRIPT
-
i
EFEKTIFITAS EKSTRAK PHALERIA MACROCARPA, KEMOTERAPI DAN KOMBINASI KEDUANYA DALAM MENINGKATKAN
EKSPRESI CASPASE 3 DAN INDEKS APOPTOSIS PADA KARSINOMA EPIDERMOID
Studi Eksperimental In Vivo Pada Mencit Swiss Yang diberi
Neoadjuvant Paclitaxel dan Cisplatin
EFFECTIVENESS EXTRACT PHALERIA MACROCARPA, CHEMOTHERAPY AND BOTH COMBINATION IN INCREASING EXPRESSION CASPASE 3 AND
APOPTOSIS INDEX IN EPIDERMOID CARCINOMA
In vivo experimental study in Swiss mice which given neoadjuvant paclitaxel and cysplatin
Tesis
Untuk memenuhi persyaratan mencapai derajat Sarjana S2
Megister Ilmu Biomedik
Helmi Sastriawan 22010110400059
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS DIPONEGORO
SEMARANG 2015
-
i
TESIS
EFEKTIFITAS EKSTRAK PHALERIA MACROCARPA, KEMOTERAPI
DAN KOMBINASI KEDUANYA DALAM MENINGKATKAN EKSPRESI CASPASE 3 DAN INDEKS APOPTOSIS PADA
KARSINOMA EPIDERMOID
Oleh :
Helmi Sastriawan 22010110400059
Telah dipertahankan di depan Tim Penguji pada tanggal 29 April 2015
dan dinyatakan telah memenuhi syarat untuk diterima
Menyetujui, Pembimbing
Pembimbing I Pembimbing II
dr. M. Thohar Arifin, Sp.BS, PhD dr. Djoko Handojo, SpB, SpB(K) Onk
NIP. 197404141999031013 NIP. 194811191978021001
Mengetahui :
Ketua Program Studi Magister Ilmu Biomedik
Fakultas Kedokteran UNDIP
dr. Achmad Zulfa Juniarto, M.Si.Med, Sp.And, PhD
NIP.197006081997021001
-
RIWAYAT HIDUP SINGKAT
A. IDENTITAS
Nama : dr. Helmi Sastriawan
NIM Magister Biomedik : 22010110400059
Tempat/Tgl. Lahir : Nanga Serawai, 1 September 1980
Agama : Islam
Jenis kelamin : Laki-laki
Status : Belum Menikah
Alamat : Jl.Parit H. Husin II, Komplek Meranti Indah Blok A
No.2 Ponianak
RIWAYAT PENDIDIKAN
1. SD Negeri 2, Nanga Serawai : lulus tahun 1992
2. SMP Negeri, Nanga Serawai : lulus tahun 1995
3. SMA Negeri 1, Pontianak : lulus tahun 1998
4. FK UNDIP Semarang, Jawa Tengah : lulus tahun 2005
5. PPDS I Bedah FK UNDIP, Semarang, Jawa Tengah
6. Magister Ilmu Biomedik Pasca Sarjana UNDIP, Semarang, Jawa Tengah
B. RIWAYAT PEKERJAAN
PNS Universitas Tanjungpura Pontianak (tahun 2008-sekarang)
-
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahirabbil’alamin. Puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT atas
limpahan rahmat dan anugerah-Nya, sehingga dapat menyelesaikan penelitian dengan judul
“EFEKTIFITAS EKSTRAK PHALERIA MACROCARPA, KEMOTERAPI DAN
KOMBINASI KEDUANYA DALAM MENINGKATKAN EKSPRESI CASPASE 3
DAN INDEKS APOPTOSIS PADA KARSINOMA EPIDERMOID”.
Penelitian ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar derajat
sarjana S2 Ilmu Biomedik Program Pasca Sarjana Fakultas Kedokteran Universitas
Diponegoro Semarang.
Dalam kesempatan ini, saya menyampaikan ucapan terima kasih dan penghargaan
yang setinggi-tingginya kepada :
1. dr. M. Thohar Arifin, Sp.BS, PhD, selaku pembimbing penelitian I, yang telah
memberikan inspirasi, bimbingan, waktu, tenaga, pikiran, serta ilmu, sehingga
penelitian ini dapat diselesaikan.
2. dr. Djoko Handojo, SpB, SpB(K) Onk sebagai pembimbing II yang dengan sabar
mengarahkan, memberikan inspirasi, bimbingan, waktu, tenaga, pikiran, serta ilmu,
sehingga penelitian ini dapat diselesaikan.
3. Prof. Sudharto P, MES,PhD, mantan Rektor Universitas Diponegoro Semarang.
4. Prof. Dr. Yos Johan Utama, SH, MH, Rektor Universitas Diponegoro Semarang.
5. Prof. Dr. Ir. Purwanto, DEA., Ketua Program Pasca Sarjana Universitas Diponegoro
Semarang.
6. dr. Endang Ambarwati, SpRM(K), mantan Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Diponegoro Semarang.
-
7. Prof. Dr. dr. Tri Nur Kristina, DMM, Mkes, Dekan Fakultas Kedokteran Universitas
Diponegoro Semarang.
8. dr. Achmad Zulfa Juniarto, M.Si.Med, SpAnd, PhD, Ketua Program Studi Magister
Ilmu Biomedik Program Pasca Sarjana Universitas Diponegoro Semarang.
9. Prof. Dr. dr. Suprihati,MSc, SpTHT-KL(K), Ketua Komisi Etik Penelitian Kesehatan
Fakultas Kedokteran UNDIP/RSUP Dr.Kariadi Semarang.
10. dr. Sahal Fatah, SpB, SpBTKV, Kepala Bagian Bedah dan Ketua Program Studi PPDS
I Bedah Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro/RSUP dr. Kariadi Semarang.
11. Seluruh Staf pengajar Bagian Ilmu Bedah Fakultas Kedokteran Universitas
Diponegoro.
12. Guru-guru Program Studi Magister Ilmu Biomedik Program Pascasarjana Universitas
Diponegoro Semarang.
13. Tim penguji dan nara sumber yang telah dengan sabar berkenan memberi masukan,
arahan dalam penelitian dan penulisan tesis ini.
14. Semua rekan residen dan seluruh karyawan Bagian Bedah FK UNDIP, karyawan
Program Studi Magister Ilmu Biomedik UNDIP yang telah membantu selama
penelitian dan penyusunan tesis ini berlangsung.
15. Ucapan terima kasih khusus kepada orang tua, kakak dan adik tercinta yang telah
memberikan dukungan untuk keberhasilan studi saya.
-
Saya menyadari bahwa penelitian ini masih jauh dari sempurna, karena itu diharapkan
kritik dan saran demi kesempurnaan penelitian ini. Saya berharap penelitian ini dapat berguna
bagi masyarakat serta memberi sumbangan bagi perkembangan ilmu kedokteran khusussnya
dalam bidang Onkologi. Akhir kata saya mohon maaf yang sebesar-besarnya atas segala
kesalahan dan kekhilafan, sengaja maupun tidak selama menyelesaikan penelitian ini.
Semarang, April 2015
Helmi Sastriawan
-
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ……...................................................................................... i
LEMBAR PENGESAHAN TESIS ........................................................................ ii
PERYATAAN .......................................................................................................... iii
RIWAYAT HIDUP .................................................................................................. iv
KATA PENGANTAR .............................................................................................. v
DAFTAR ISI ……………....................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................... xi
DAFTAR TABEL …………..................................................................................... xii
DAFTAR GRAFIK …………................................................................................... xiii
DAFTAR LAMPIRAN ……................................................................................... xiv
DAFTAR SINGKATAN ......................................................................................... xv
ABSTARAK ............................................................................................................ xvii
ABSTRACT ............................................................................................................ xviii
BAB 1 PENDAHULUAN ...................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ……...................................................................................... 1
1.2 Perumusan Masalah ……….......................................................................... 5
1.3 Tujuan Penelitian ……….............................................................................. 5
1.3.1 Tujuan Umum................................................................................................ 5
1.3.2 Tujuan Khusus ……...................................................................................... 5
1.4 Manfaat Penelitian ……................................................................................ 6
1.5 Orisinalitas Penelitian ……........................................................................... 6
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA …….................................................................... 8
-
2.1 Karsinoma Epidermoid Kulit ……................................................................ 8
2.1.1 Epidemiologi ……......................................................................................... 8
2.1.2 Etiologi …….................................................................................................. 9
2.1.3 Gambaran Klinis ……................................................................................... 9
2.1.4 Stadium Klinis ……….................................................................................. 10
2.1.5 Penatalaksanaan …….................................................................................... 11
2.1.6 Monitoring ……............................................................................................ 14
2.2 Sistem Imun dan Respon Imunologik terhadap Sel Kanker …................. 14
2.2.1 Enzim Caspase ............................................................................................. 17
2.2.2 Apoptosis …….............................................................................................. 20
2.3 Phaleria macrocarpa …….............................................................................. 24
BAB 3 KERANGKA TEORI DAN HIPOTESIS ............................................... 28
3.1 Kerangka Teori ............................................................................................. 28
3.2 Kerangka Konsep .......................................................................................... 29
3.3 Hipotesis ....................................................................................................... 29
BAB 4 METODE PENELITIAN ……................................................................... 30
4.1 Desain Penelitian ………............................................................................. 30
4.2 Populasi dan Sampel …................................................................................. 31
4.2.1 Populasi …..................................................................................................... 31
4.2.2 Sampel …....................................................................................................... 31
4.3 Waktu dan Lokasi Penelitian ….................................................................... 32
4.4 Variabel Penelitian ….................................................................................... 33
4.5 Analisis Data …............................................................................................. 34
4.6 Bahan dan Alat ….......................................................................................... 35
4.7 Pelaksanaan Penelitian ….............................................................................. 38
-
4.8 Alur Kerja ....................... ............................................................................. 39
4.9 Prosedur Pemeriksaan …............................................................................... 39
4.10 Cara Pengumpulan Data …........................................................................... 43
4.11 Persyaratan Etik …........................................................................................ 43
BAB 5 HASIL PENELITIAN ….…..…................................................................. 44
5.1 Hasil ………………..................................................................................... 45
5.2 Uji Statistik …………................................................................................... 50
BAB 6 PEMBAHASAN ………..……................................................................... 56
BAB 7 SIMPLAN DAN SARAN ………................................................................ 60
7.1 Simpulan ………........................................................................................... 61
7.2 Saran ……..................................................................................................... 62
DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 63
-
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1 Mekanisme molekuler apoptosis .......................................................... 22
Gambar 2 Kerangka Teori ..................................................................................... 28
Gambar 3 Kerangka Konsep .............................................................................. 29
Gambar 4 Skema Rancangan Penelitian ............................................................... 31
Gambar 5 Skema Alur Kerja Penelitian .............................................................. 39
Gambar 6 Skema hasil penelitian …………......................................................... 45
Gambar 7 Gambaran histopatologi ekspresi caspase 3 .......................................... 46
Gambar 8 Gambaran histopatologi apoptosis ....................................................... 47
Gambar 9 The extrinsic and intrinsic pathways of apoptotic ................................. 58
Gambar 10 The pathways of apoptosis ................................................................. 60
-
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel 1 Penelitian tentang Phaleria macrocarpa ................................................... 7
Tabel 2 Klasifikasi caspase ................................................................................... 17
Tabel 3 Pembagian kelompok penelitian ............................................................ 30
Tabel 4 Defenisi operasional ….. ......................................................................... 33
Tabel 5 Deskriptif data ekspresi caspase 3 …....................................................... 48
Tabel 6 Deskriptif data indeks apoptosis ….. ...................................................... 49
Tabel 7 Deskriptif dan normalitas data ekspresi caspase 3 ................................... 50
Tabel 8 Uji Kruskal Wallis ekspresi caspase 3 ..................................................... 50
Tabel 9 Uji Mann Whitney ekspresi caspase 3 ……………. ................................. 51
Tabel 10 Deskriptif dan normalitas data indeks apoptosis .................................... 52
Tabel 11 Uji Kruskal Wallis indeks apoptosis ......................................................... 52
Tabel 12 Uji Mann Whitney indeks apoptosis ….................................................... 53
Tabel 13 Deskriptif dan normalitas data ekspresi caspase 3
dan indeks apoptosis ............................................................................. 54
Tabel 14 Korelasi Spearman indeks apoptosis terhadap ekspresi caspase 3 .......... 54
-
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Ethical Clearance …. ………………………................................................. 69
Lampiran 2. Hasil analisis data caspase 3 dengan SPSS .................................................... 70
Lampiran 3. Hasil analisis data indeks apoptosis dengan SPSS ......................................... 75
Lampiran 4. Hasil analisis korelasi caspase 3 dan indeks apoptosis dengan SPSS ............ 80
Lampiran 5. Spesifikasi caspase 3 (CPP32) Ab-4 …………............................................... 81
Lampiran 6. Cara pemeliharaan dan dekapitasi hewan coba ………........................... 82
Lampiran 7. Dokumentasi dan hasil penelitian ……………….......……........................ 83
-
DAFTAR SINGKATAN
ADP Adenosine di phosphate
AIF Apoptosis inducing factor
Apaf-1 Apoptotic protease activation factor-1
Bak B cell lymphoma 2 antagonist/killer
Bax Bcl-2 associated X protein
Bcl-2 Basal cell lymphoma 2
Bcl-XL Basal cell lymphoma extra large
Bid BH3 interacting domain death agonist
CARD Caspase recruitment domain
CTL Cytotocic T Lymphocyte
DEDs Death effector domains
DISC Death induced signaling complex
DNA Deoxyribonuceic acid
DR Death receptor
FADD Fas-associated death domains
FasL Fas ligan
FLICE FADD-like IL-1 converting enzyme
HE Hematosiklin-eosin
IFN-γ Interferon- γ
IL Interleukin
MAPK Mitogen activated protein kinase
NF-KB Nuclear factor kappa B
NK Natural killer
-
PARP Poly adenosine-5 diphosphate-ribose polymerase
PTP Permeability transition pore
ROS Reactive oxygen species
RTKs Receptor tirosin kinase
SIRS Sistem informasi rumah sakit
SKRT Survei kesehatan rumah tangga
SPSS Statistical product and service solution
Th T helper
TNF Tumor necrosis factor
TNFR Tumor necrosis factor receptor
UICC Union Internationale Contra Le Cancer
XIAP X inhibitor of apoptosis proteins
WHO World Health Organization
DMBA 9, 12-dimethyl-1,2-benzanthracene
TPA 12-o-tetradecanoylphorbol-13-acetate
TUNEL Terminal Deoxynucleotidyl Transferase-mediated dUTP-biotin nick and
labeling
-
DAFTAR GRAFIK
Halaman
Grafik 1 Box plot Ekspresi caspase 3 ………………....................................................... 48
Grafik 2 Box plot Indeks apoptosis ............................................................................... 49
Grafik 3 Data dan hasil uji Mann Whitney ekspresi caspase 3 …...................................... 51
Grafik 4 Data dan hasil uji Mann Whitney indeks apoptosis ............................................. 53
-
ABSTRAK
Latar belakang : Penatalaksanaan karsinoma epidermoid kulit dengan kemoterapi relatif mahal dan seringkali terdapat efek toksis yang dapat merusak organ vital manusia. Phaleria macrocarpa merupakan tanaman obat yang digunakan sebagai anti kanker yang dipercaya mempengaruhi pertumbuhan tumor khususnya dalam hal apoptosis. Tujuan : Membuktikan efektifitas ekstrak phaleria marcocarpa, kemoterapi paclitaxel-cisplatin dan kombinasi keduanya sebagai neoadjuvant terhadap peningkatan ekspresi caspase 3 dan indeks apoptosis pada karsinoma epidermoid kulit pada mencit Swiss. Metode : Penelitian ini menggunakan mencit jantan strain Swiss, setelah dilakukan induksi sel karsinoma epidermoid, randomisasi kedalam 4 kelompok, K (kontrol), P1 (phaleria macrocarpa 0,0715 mg/hari). P2 (Paclitaxel 175 mg/m2 dan cisplatin 50 mg/m2), P3 (kombinasi phaleria macrocarpa dan kemoterapi). Ekspresi caspase 3 diperiksa dengan pengecatan imunohistokimia menggunakan Caspase 3 Ab-4 rabbit polyclonal antibody dan pemeriksaan indeks apoptosis dilakukan dengan pengecatan Tunel, kemudian dihitung menggunakan metode Aihara M et al. Hasil : Peningkatan ekspresi caspase 3 sesuai urutan dari besar ke kecil terlihat pada kelompok P3, P2 dan P1 dengan hasil yang bermakna (p
-
ABSTRACT
Background Epidermoid carcinoma ( squamous cell carcinoma) is a malignant proliferation of epidermal keratinocytes,which is the most type of epidermal cells, and is one of skin cancer that is often found. Chemotherapy management of skin epidermoid cancer is relatively expensive and often have toxic effects that may impair the function of some vital human organs. Phaleria macrocarpa is a kind of medicinal plants used as a anticancer treatment, and is believed can interfere tumor growth especially in terms of apoptosis. Objective To prove the effectiveness of extracts Phaleria marcocarpa, paclitaxel-cisplatin chemotherapy and neoadjuvant combination of both as to the increase in caspase 3 expression and apoptosis index in epidermoid carcinoma of the skin in Swiss mice. Method This study used male mice swiss strain, after the induction of epidermoid carcinoma cells, randomized into 4 groups, K (control), P1 (Phaleria macrocarpa 0,0715 mg/day). P2 (paclitaxel 175 mg/m2 and cisplatin 50 mg/m2), P3 (combination Phaleria macrocarpa and chemotherapy). The expression of Caspase 3 examined by immunohistochemical staining using the Caspase 3 Ab-4 rabbit polyclonal antibody and examination of apoptotic index is done by using Tunel staining, were then calculated using the method of Aihara M et al. Results Increased expression of caspase 3 in the order from higher to lower can be seen in group P3, P2 and P1 with significant results (p