effects of c-reactive protein on bone cells

7/26/2019 Effects of C-reactive Protein on Bone Cells

1/33

Efects o C-

reactive protein onbone cells

In-Jin Cho, Kyoung Hee Choi, Chi Hyuk Oh, You CheolHang,In-Kyung Jeong, Kyu Jeung !hn, Ho-Yeon Chung

"epart#ent o En$ocrinology an$ %etabolis#, Kyung Hee&niversity 'chool o %e$icine, 'eoul, (epublic o Korea

Kamila


2/33

Ob)etivo

'e evaluar* el eecto $irecto $e la C(+ en la re#o$el$el hueso, al investigar la $ierenciacin $e los osteoc

y osteoblastos en procesos in vitro.


3/33

+alabras Clave

C- (eactive protein

oll- like receptor

Osteoclast

Osteoblast


4/33

Intro$uccin

(e#o$elacin $el hueso Osteoporosis

Osteoclastos in.a#acin in$uce per$i$a $el h

(!/K0(!/K1 Osteoclasto g2nesis y (3 (esorcin

I/41!%!CIO/ CitoK +ro In.a#atorias /4-5 y I1-6 "ierenciaci

ener#e$a$es

1(s 7 (!/K Inicio respuesta in.a#atoria


5/33

C(+

(eactante $e ase agu$a

8ra$o $e in.a#acin

9%arca$or $e in.a#acin aterosclerosis

:%"; bone #ineral $ensity, riesgo $e racturas


6/33

%ateriales y %2to$os

Cultivo $e c2lulas y trata#iento con C(+

Cells (!< =>?3@ $e ratones #onocito0#acrago lAnea !

"%E%76B 'uero 4etal :ovino7 6penicilina0strepto#ic

Ca#bio ca$a = $Aas

!t#osera hD#e$a con CO= a F@Gc"I4E(E%CI!CIO/ O'EOC1!'O'; cells se#bra$as en a%E% a 636Bcells0pocillo

> placas por pocillo cultiva$os en @Bng0#1 (!/K1 por F-


7/33

%ateriales y %2to$os

Cells %CFF-E6 !c3 !scorbico sin a%E%, suple#enta$o con 6B 4penicilina0strepticina

"I4E(E/CI!CIO/; Bug0#1 ac !scorbico7 6B#% b gliceroosato

+C( agrega$o $e #anera si#ultanea a los cultivos con los actores $$ierenciacin, co#o (!/K1, !c !scorbico y b 8+

O+!+C -L seMal 1(34ue $isuleto en cloroor#o, aliNui$a$o y evapora$o en poliproleno enpara cultivar cells3

!l#acena$o a -BGC y precalenta$o a F@GC por FB#in antes $el trata

4ue aMa$i$o 6h antes Nue el +C(3


8/33

'e re#ueve la en$otoina $el C(+

High- capacity en$otiin re#oval co#lu#ns y ptrp $e resina

incin $e la 4osatasa Pci$a tartrato resistente

1ava$as con +:' y #eQcla$as con citrato, acetona7 F3@

or#al$ehi$o por 6 #in(!+; leukocyte aci$ phosRphatase tartrateresistant aci$phosphatasa kit

1ava$as con agua $estila$a y (!+ positive cells #ultinuclea%/Cs FL


9/33

Ensayos $e la alcalina osatasa y la or#acin $e n$ulos en hueso

!1+ evalua la $ieernciacion te#prana $e osteoblastos por #ar

leucocitarios $e !1+%CFF-E6 cell; 6? $Aas, actores $ierenciantes7 $ierentes $os+C(!1+ evalua$a por hi$rolisis $e p- nitroenil + a + nitrophenol

!bsorbancia; ?Bn# co#para$o con uno stan$ar$3

"ia =; prueba con +C( evalua$a con tincin !MiQarin re$ '

7@ etanol 6h a ?GCCubierto con

!liQarin re$ so$iu# #onosulonat3 FB#in, en)uaga$os3

"epositos $e calcio; 6B#% osato $e so$io7 6B bufer a pH @!bsorbancia @Bn#


10/33

!isla#iento $el (/!

(eactivo (IQol

Cells; lisa$as en el plato con el reactivo

Etraccion cloroor#o; !(/ recubierto con ase acuosa y precipico# isopropenol y $ietilpriocarbonato lava$o con @ etanol-

!nalisis $e la epresin $e genes

(eaccion reversa $e transcripsion $e la ca$ena poli#erasa (-+C6ug(/!7 oligo$7 pre#eQcla (-+C( a ?=GC >B#in

Ceba$ores $e la ca$ena; secuencias y con$iciones


11/33


12/33

!nalisis


13/33

(esulta$os


14/33

Efectoinhibitorio d

la CRP en ladiferenciaci

deosteoclastos osteoblastos

-L osteoclas


15/33

Actividad ALP


16/33

Formacin nodulardel hueso


17/33

Ceo


18/33

"eter#inar#ecanis#o eectoinhibitorio %!+K

K$


19/33

K$e'upe


20/33

K$e'upe

por

CPR


21/33

xC


22/33

vs C+(T UAa in.a#atoria citok vs (!/rToll I!

o+!C -L C+


23/33

o cambios en el tratamiento de PCR en R$


24/33

o cambios en el tratamiento de PCR en R$


25/33

is#o trata#iento Nue en c

(I4 con o


26/33

is#o trata#iento Nue en c

(I4 con oIFNb tambin si


27/33

Co#paracin o

T"&a no f#e detecta

Eectos L 1( en osteoc


28/33

Eectos -L 1( en osteoc


29/33

"iscusin

Ener#e$a$es $e in.a#acin crnica es asocia$a aper$i$as $el hueso3

CitoNuinas in.a#atorias; I16, I1>, I16@ y/4T"ierenciacion osteoclasto

Uia Osteoprotegerina0(!/K0(!/K1 /4T -L $ierenciacin osteoblastos precursores

"esbalance; per$i$a $e integracin $el hueso

+C(; in.a#acin, patolgica o no3


30/33

"iscusin

+C(;X$ierenciacin osteoclastos en cells (!< =>?3in$uci$as a (!/K1 7 supri#io genes especiScos $eosteoclasto (!+, %% y la vAas $e seMaliQacin catK y %!+K -L Osteoclastogenesis %!+K

XOsteoblastos genes y $ierenciacin; (un=, ostericatenina en cell %CFF-E6

+C( 7L solo citoNuinas +(Oin.a#atorias enin.a#acionesZ

+C( #e$ia respuestas in.a#atorias 7L /4a o I1> 1(


31/33

"iscusin

1(?; reconoci#iento $e liposacari$os3

Osteoc y b; 1(= y ?

C(+; exresin IFNb vs! oxPAC"

Ademas sintesis rot IFNb en #C$%$&'( con PC)aunNue es su seccrecion

1a inhibicin $e las 1( por la o+!C, restauro la inhibicin pparte $e la C+( en la osteoclasto g2nesis3

C+( actDa en el hueso por la vAa $e seMaliQacin $e 1( $e #in vitro3


32/33

Conclusin

El estu$io, sA $e#ostr la relacin $irecta $e la C(+ ec2lulas $el hueso por la vAa $e seMaliQacin 1( in vitr


33/33

effects of c-reactive protein on bone cells

Documents