Instituto Tecnolgico de Mazatln ING. BIOQUIMICA Operaciones Unitarias I MC. Juan Luis Sarabia Aparicio Electroforesis en Gel

Instituto Tecnolgico de Mazatln

ING. BIOQUIMICA

Operaciones Unitarias I

MC. Juan Luis Sarabia Aparicio

Electroforesis en Gel

Carnero Lerma Tania Carvajal Portillo Jocelyn Figueroa Diaz LilianaFranco Torres AmayraniLizarraga Duarte Izamary Mazatln, Sin., 30 de Abril 2015

La electroforesis es una tcnica habitual en el laboratorio clnico. Permite separar especies qumicas (cidos nucleicos o protenas) a lo largo de un campo elctrico en funcin de su tamao y de su carga elctrica.Electroforesis en Gel

Es un mtodo de separacin frecuentemente utilizado para analizar fragmentos de ADN generados por enzimas de restriccin, PCR, etc.

El gel es la matriz a travs de la cual viajan las muestras, y sern separadas segn su tamao. Los tamaos pequeos viajarn ms mientras que las molculas ms grandes y ms densas viajarn slo una corta distancia.Almidn. Tcnica barata, fcil y rpida.

Poliacrilamida. Soporte mas usado, de alta resolucin, componente txicos.

Agarosa. Buena resolucin, separacin de molculas grandes.

Tipos de Geles La corriente elctrica de un electrodo repele las molculas, al tiempo que el otro electrodo las atrae. La fuerza de friccin del material de gel acta como tamiz molecular, separando las molculas en funcin de su tamao. Durante la electroforesis, las macromolculas son empujadas a travs de los poros, dependiendo su tasa de migracin por el campo elctrico de los siguientes factores:Fuerza del campoTamao y forma de las molculas Hidrofobicidad relativa de las muestrasFuerza inica y temperatura del tampn en que se desplazan las molculasComo funciona?Tipos de Anlisis Electroforesis

Limite Mvil

De Zona

Esta tcnica, se emplea ampliamente en bioqumica para separar molculas cargadas. Se basa en el desplazamiento de las molculas en ungradiente de pH. Las molculasanfotricas, como losaminocidos, se separan en un medio en el que existe unadiferencia de potencialy un gradiente depH. La regin delnodoes cida y la del ctodo es alcalina. Las sustancias que inicialmente se encuentran en regiones de pH inferior a su punto isoelctrico estarn cargadas positivamente y migraran hacia el ctodo, mientras aqullas que se encuentran en medios con pH ms altos que su punto isoelctrico tendrn carga negativa y migrarn hacia el nodo. La migracin las conducir a una regin donde el pH coincidir con su punto isolctrico, tendrn una carga neta nula y se detendrn. De esta forma las molculas anfotricas se sitan en estrechas bandas donde coincide su punto isoelctrico con el pH.

Isoelectroenfoque

Cuando se ha completado la electroforesis, las molculas ms pequeas han llegado al nodo. Entonces se pueden 'revelar' mediante la adicin de un colorante especfico para hacerlas visibles. Se emplean compuestos como elbromuro de etidio, para los cidos nucleicos, o tincin de plata, azul de coomassie o tincin fluorescente, para las protenas. Asimismo se emplean otros mtodos para visualizar la separacin de la mezcla en el gel. Si el reactivo es fluorescente bajo la luzUV, se puede simplemente hacer una fotografa de la placa bajo dicha luz. Tambin, si las molculas contienen tomosradiactivosse puede efectuar una autorradiografa.Interpretacin de Resultados

EnfermedadesLa electroforesis en gel puede ayudar a los cientficos a identificar genes daados, incluyendo los oncogenes.

Parentesco humanoLa electroforesis en gel puede determinar paternidad, as como establecer vnculos genticos entre grandes grupos de personas, segn lo explica la Universidad de Colorado.

AplicacionesVida animalLa electroforesis en gel ofrece muchos beneficios en campos relacionados con los animales. Los zoolgicos pueden utilizar esta tcnicapara reducir el impacto negativo de la endogamia.

CriminologaLos cientficos tambin pueden utilizar este procedimiento para examinar muestras de tejido que se encuentran en escenas del crimen.

GRACIAS POR SU ATENCION