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Original Articles Korean Circulation J 2002;;;;32((((10))))::::894-901

신성고혈압쥐에서 Norepinephrine에 의한 혈관수축에 있어

Tyrosine Kinase의 역할

조선대학교 의과대학 생리학교실,1 가정의학교실,2 내과학교실3

제주대학교 의과대학 내과학교실4

염철호1·전제열1·윤평진1·신무경1

조향훈2·장정수2·홍순표3·염충호4

Role of Tyrosine Kinases in Norepinephrine-Induced Vascular Contraction in Renal Hypertensive Rats

Cheol-Ho Yeum, PhD1, Jae-Yeoul Jun, MD1, Pyung-Jin Yoon, PhD1, Moo-Kyoung Shin, MD1, Hyang-Hoon Cho, MD2, Jeong-Soo Jang, MD2, Soon-Pyo Hong, MD3 and Chung-Ho Yeum, MD4 1Department of Physiology, 2Family Medicine and 3Internal Medicine, College of Medicine, Chosun University, Gwangju, 4Department of Internal Medicine, College of Medicine, Cheju National University, Jeju, Korea ABSTRACT

Background and Objectives：Protein tyrosine kinases appear to be involved in the signal transduction mechan-isms, which result in vascular smooth muscle contraction, as well those required in cell growth. The present study was conducted to examine the role of tyrosine kinases in the norepinephrine-induced vascular smooth mus-cle contraction of isolated aortae from two-kidney, one clip (2K1C) hypertensive rats. Materials and Methods：2K1C hypertension was made by clipping the left renal artery of the rats, with age-matched rats receiving a sham treatment serving as controls. Thoracic aortae denuded of endothelium were mounted in tissue baths to measure the isometric tension. Results：The putative tyrosine kinase inhibitors, genistein and tyrphostin 25, significa-ntly inhibited the contractile responses of the aorta to norepinephrine in the control rats, but not in the 2K1C rats. The protein tyrosine phosphatase inhibitor, sodium orthovanadate, selectively potentiated the contractile response to norepinephrine, but only in the controls. Genistein, tyrphostin 25 and sodium orthovanadate did not affect KCl-induced vascular contractions in either the 2K1C or the controls. The vascular contraction elicited by phorbol 12, 13 dibutyrate, in the presence and absence of genistein, did not alter in either the 2K1C or the con-trols. Conclusion：These findings indicate that protein tyrosine kinases participate in the norepinephrineinduced contraction of rat aortic smooth muscle, where the role is attenuated in 2K1C renal hypertension. ((((Korean Circ-ulation J 2002;32 ((((10)))):894-901)))) KEY WORDS：Protein-tyrosine kinase；Muscle, smooth, vascular；Norepinephrine；Hypertension renal.

논문접수일：2002년 7월 29일

심사완료일：2002년 8월 28일

교신저자：염철호, 501-759 광주광역시 동구 서석동 375 조선대학교 의과대학 생리학교실

전화：(062) 230-6411·전송：(062) 232-4943·E-mail：chyum@mail.chosun.ac.kr

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서 론

혈관수축은 세포내 여러가지 내원성효소의 활성화와

관련된 복합적인 조절기전에 의해 야기된다. 즉 혈관활

성물질이 수용체와 결합하면 phospholipase C(PLC)가

활성화되어 세포막 phosphoinositide(PI) 대사가 항진

됨으로써 이차전령이 생성되어 세포내 칼슘농도가 증가

되고 protein kinase C(PKC)가 활성화되어 수축이 유

지됨은 잘 알려져 있다.1)2) 한편 이와는 별도로 세포성

장과 관련된 tyrosine kinase 활성이 단백질 인산화 과

정을 거쳐 근수축을 야기시킴이 시사된 바3) 혈관수축과

혈관 평활근 세포의 성장이 동일한 생화학적 경로를 통

해 유발됨이 제시되었으며4) 실제로 tyrosine kinase 억

제제에 의해 근수축이 억제됨이 여러 연구자에 의해 확

인되었다.5-7)

아드레날린성 수용체에 작용하는 norepinephrine은

PI대사를 촉진시킴으로써 혈관 평활근 수축을 일으키는

것으로 알려져 있으나8) norepinephrine이 평활근 세포

의 증식과정에서 여러가지 단백질 인산화를 유도함이 밝

혀짐으로써9) norepinephrine에 의한 혈관수축에 tyro-sine kinase 활성이 영향을 미칠 수 있음을 시사하고 있

다. 그러나 norepinephrine에 의한 혈관수축에 있어 ty-rosine kinase의 역할에 대해서는 연구자에 따라 의견

이 일치되지 않는 바 tyrosine kinase 억제제가 nore-pinephrine에 의한 혈관수축을 억제시킨다는 보고가 있

는가 하면,6)10)11) norepinephrine 및 이와 유사하게 작

용하는 phenylephrine에 의한 혈관수축이 tyrosine ki-nase 억제제에 의해 영향받지 않는다는 결과4)11)도 보

고되어 있는 실정이다.

고혈압은 혈관구경 변화에 의한 말초저항의 상승과 직

접적으로 관련된 바 혈관 평활근의 증식(hyperplasia)이

나 비대(hypertrophy)는 궁극적으로 고혈압을 유발시

킨다.12) 실제로 자발고혈압쥐(spontaneously hypert-ensive rats, SHR)에서 혈관활성물질에 의한 평활근 세

포의 증식활동이 촉진됨이 시사되었으며13)또한 고혈압

상태에서는 혈관수축 반응이 항진된다.12) 따라서 세포증

식과 관련된 tyrosine kinase 활성이 혈관수축에 부분

적으로 관여한다고 하더라도 고혈압 상태에서는 그 역

할이 달라질 가능성을 배제할 수 없을 듯하다.

본 연구는 norepinephrine에 의한 혈관수축에 tyro-

sine kinase 활성이 관여하는지를 밝히고 나아가서 실

험적으로 유발시킨 two-kidney, one clip(2K1C) 신성

고혈압 흰쥐에서 혈관수축에 대한 tyrosine kinase 역

할이 정상혈압동물과 차이가 있는지 구명하고자 시도하

였다.

재료 및 방법

실험동물

2K1C 신성고혈압의 유발

동일한 조건하에서 번식 사육한 체중 150∼200 g의

흰쥐(Sprague-Dawley, ♂)를 thiopental(40 mg/kg,

IP) 마취하에 개복한 후 좌측 신동맥에 직경 0.2 mm의

silver clip을 장치하고 신속히 봉합하였다. 마취에서 깨

어난 후 사료와 물을 충분히 공급하면서 1주 간격으로

꼬리혈압을 간접법(Harvard 10766)으로 측정하여 고

혈압 유발과정을 확인하였고 4주 후에 사용하였으며 수

축기혈압이 160 mmHg 이하인 경우는 실험대상에서

제외하였다.

정상혈압쥐

신성고혈압쥐와 동일한 조건이나 다만 clip을 장치하

지 않는 군(sham-clipped)을 대조군으로 하였다.

혈관의 등장성 장력기록

적출 흉부 대동맥 혈관을 길이 2∼3 mm의 환상표본

을 만들어 내피층을 제거한 후 15 mL 수조에 매달고

37℃를 유지하면서 95% O2와 5% CO2의 혼합기체를

지속적으로 공급하였다. 동맥환 표본의 한쪽 끝은 수조

하단에 고정하고 반대쪽은 등장성 장력변환기(Grass,

FT03)에 연결하여 그 장력변동을 Polygraph(Grass,

Model 79)상에 기록하였다. 사용한 영양액의 조성은

NaCl 118.3, KCl 4.7, NaHCO3 25, MgCl2 1.2, KH2

PO4 1.2, CaCl2 2.5, glucose 11.1 mM이었으며 pH는

7.4로 유지되도록 하였다. 혈관표본에 2 g의 장력을 주

어 약 1.5∼2시간 평형시키고 장력이 일정하게 되면 먼

저 40 mM KCl(영양액 조성을 KCl 변동양 만큼 NaCl

로 치환시킴)에 대한 수축반응을 확인한 후 본 실험을

시작하였다. 한편 혈관 내피층은 norepinephrine(1 u M)

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으로 수축시킨 후 acetylcholine(10 uM)으로 이완되지

않으면 내피층이 제거된 것으로 간주하였다.

Norepinephrine(10-10∼10-5M), KCl(10-3∼10-1

M)및 phorbol 12, 13 dibutyrate(PDB, 10-10∼10-5.5

M)에 대한 수축반응을 기록하면서 tyrosine kinase 억

제제인 genistein(10 uM)과 tyrphostin 25(10 uM)

및 tyrosine phosphatase 억제제인 sodium orthova-nadate(100 uM)를 각각 30분전 전처치하였다. 더불

어 norepinephrine 수축시에는 β-수용체 차단제인 ti-molol(1 uM)을, KCl 수축시에는 norepinephrine의 신

경성 유리를 방지하기 위하여 phentolamine(1 uM)을

각각 20분전 전처치하였다.10) 고농도 KCl에 의한 삼투

질농도 변화는 동량의 NaCl로 치환하여 수축반응에 영

향이 없음을 확인하였다. 사용된 약물은 genistein과 ty-rphostin은 Biomol 사(미국 펜실베니아주, Plymouth

Meeting)에서 구입하였고 그 외의 시약은 Sigma 사(미

국 미주리주, ST. Louis) 제품이었다. Genistein과 tyr-phostin 및 PDB는 dimethylsulfoxide(DMSO)에 용해

하였고 그 외의 시약은 3차 증류수에 용해하였으며 no-repinephrine 용해시에는 약물의 산화를 방지하기 위

하여 ascorbic acid(2 mg/mL)를 첨가하였다. 수조내

DMSO의 최종농도는 0.04% 이내로 하였다.

분석 및 통계

실험결과는 평균±표준오차로 나타내었으며 norepi-nephrine에 의한 수축반응의 크기는 40 mM KCl 반응

에 대한 %로 표시하였다. EC50값은 pD2치(the mean

of the negative log molar concentration)로 환산하였

다. 각 군간 차이는 ANOVA(analysis of variance) 또

는 unpaired t-test를 이용하여 p<0.05인 경우 통계적

유의성이 있는 것으로 판단하였다.

Fig. 1. Effects of genistein on concentration-response curves for norepinephrine in isolated aorta from (A) 2K1Cand (B) sham-clipped rats. *：p<0.05, compared with corresponding control values. n：indicates number of rings.

Fig. 2. Effects of tyrphostin 25 on concentration-response curves for norepinephrine in isolated aorta from (A) 2K1Cand (B) sham-clipped rats. *：p<0.05, compared with corresponding control values.

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결 과

4주째에 간접법으로 측정한 수축기혈압은 2K1C 고혈

압군(192±7 mmHg, n＝32)에서 대조군(134±6 mm

Hg, n＝34)에 비해 유의하게 높았다(p<0.05). 40 mM

KCl에 의한 수축반응의 크기는 고혈압군(952±28 mg)

Fig. 3. Effects of sodium (sod.) orthovanadate on concentration-response curves for norepinephrine in isolatedaorta from (A) 2K1C and (B) sham-clipped rats. *：p<0.05, compared with corresponding control values.

Fig. 5. Effects of tyrphostin 25 on concentration-response curves for KCl in isolated aorta from (A) 2K1C and (B) sham-clipped rats.

Fig. 4. Effects of genistein on concentration-response curves for KCl in isolated aorta from (A) 2K1C and (B) sham-clipped rats.

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과 대조군(968±25 mg)에서 차이가 없었다.

Norepinephrine 투여시 2K1C 고혈압군과 대조군에

서 용량의존 수축반응을 보였으며 최대수축반응의 크기

가 고혈압군은 대조군에 비해 18.5±2.7% 항진되었다.

Norepinephrine의 수축반응은 tyrosine kinase 억제제

인 genistein을 전처치할 경우 2K1C 고혈압군은 영향

받지 않았으나 대조군은 norepinephrine 10-8M 이상

에서부터 수축반응이 유의하게 억제됨으로써 최대수축

반응의 크기가 29.2±3.8% 약화되었다(Fig. 1). 또 다

른 tyrosine kinase 억제제인 tyrphostin 25에 의해서

도 2K1C 고혈압군에서는 norepinephrine의 수축반응

이 차이를 보이지 않았으나 대조군에서는 10-7M 이상

에서 유의하게 억제됨으로써 genistein 전처치의 경우

와 유사한 양상을 보였다(Fig. 2). Tyrosine phospha-tase 억제제인 sodium orthovanadate를 전처치할 경

우 2K1C 고혈압군은 역시 영향이 없었으나 대조군은

norepinephrine 농도에 따라 수축반응이 유의하게 항진

되면서 최대수축반응의 크기가 21.3±4.5% 강화되었다

(Fig. 3).

KCl에 의한 수축반응은 2K1C 고혈압군과 대조군에

서 용량의존성으로 항진되었으며 최대수축반응의 크기

는 고혈압군(1.10±0.08 g)과 대조군(1.08±0.05 g)

에서 유사하였다. Genistein과 tyrphostin 25 및 sod-ium orthovanadate는 2K1C 고혈압군과 대조군에서

KCl에 의한 수축반응에 영향을 미치지 않았다(Fig. 4-6).

PKC 활성제인 PDB에 의한 수축반응은 2K1C 고혈

압군에서 대조군에 비해 항진됨으로써 최대수축반응의

크기가 63±8.2% 증가되었다. Genistein은 2K1C 고

혈압군과 대조군에서 PDB에 의한 수축반응에 영향을

미치지 않았다(Fig. 7).

Fig. 6. Effects of sodium (sod.) orthovanadate on concentration-response curves for KCl in isolated aorta from (A)2K1C and (B) sham-clipped rats.

Fig. 7. Effects of genistein on concentration-response curves for phorbol 12, 13 dibutyrate (PDB) in isolated aorta from(A) 2K1C and (B) sham-clipped rats.

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2K1C 고혈압군과 대조군에서 각각의 수축반응곡선으

로부터 구한 EC50값을 Table 1에 나타내었다. 대조군

에서 norepinephrine에 의한 수축반응시 genistein 전

처치의 경우를 제외하고는 어느 경우에나 EC50값의 차

이를 보이지 않았다(Table 1).

고 찰

아드레날린성 수용체에 작용하는 norepinephrine은

PLC 활성화에 의해 PI 대사가 항진됨으로써 이차전령

이 생성되어 혈관수축을 유발시키는 것으로 알려져 있으

나8) 본 실험에서 대조군의 경우 norepinephrine에 의한

혈관수축반응은 서로 다른 기전으로 작용하여 tyrosine

kinase 활성을 억제시킨 것으로 알려진14)15) genistein

과 tyrphostin 25에 의해 유의하게 억제됨으로써 nor-epinephrine에 의한 혈관수축반응이 부분적으로 tyro-sine kinase 활성을 매개하여 야기됨을 시사하였다. 이

와 더불어 genistein은 세포내 ATP에 대한 상경적 억

제제로써14) 또한 tyrphostin은 tyrosine kinase에 대한

가성기질(pseudosubstrate)을 억제시킴으로써15) 각각

tyrosine kinase 활성을 억제시킨 것으로 보고된 바 있

다. 또한 norepinephrine의 수축반응이 genistein과 ty-rphostin에 의해 각각 억제양상을 보이지만 EC50값은

genistein 처치 시에만 차이를 보임으로써 이전의 보고10)

와 일치하였다. 나아가서 norepinephrine의 수축반응은

tyrosine phosphatase의 활성을 억제시켜 tyrosine ki-nase 매개반응을 항진시키는 것으로 알려진16)17) sod-ium orthovanadate에 의해 유의하게 강화됨으로써 ty-rosine kinase 활성이 norepinephrine에 의한 수축을

매개함을 재 입증하고 있다.

한편 tyrosine kinase 억제제의 특이성(specificity)

에 대하여 본 실험에서 사용된 농도의 genistein과 tyr-phostin이 다른 효소 즉 myosin light chain kinase6)

나 protein kinase A6)14)15) 및 PKC14)15) 등의 활성에

영향을 미치지 않으면서 특이적으로 tyrosine kinase 활

성을 억제시킴이 확인된 바 있으며 본 연구에서도 ge-nistein은 2K1C 고혈압군이나 대조군에서 PKC 활성제

인 PDB에 의한 혈관수축반응에 영향을 미치지 않았다.

또한 sodium orthovanadate는 활성물질에 의한 반응에

서 선택적으로 tyrosine phosphatase를 억제시킴이 여

러 경로를 통해 보고된 바 있다.16-18) 뿐만 아니라 본 실

험에서 genistein과 tyrphostin 25 및 sodium orthov-anadate가 세포막 탈분극 기전과 관련된 KCl에 의한 혈

관수축반응에는 2K1C 고혈압군이나 대조군에서 전혀

영향을 미치지 않음으로써 이들 약물이 norepinephrine

에 의한 수축반응에 있어 tyrosine kinase 활성에 특이

적으로 작용하였음을 간접적으로 시사하고 있다.

Norepinephrine에 의한 혈관수축반응이 부분적으로

tyrosine kinase 활성을 매개하여 유발됨은 본 실험과

같은 쥐의 대동맥혈관10)이나 기니아 피그의 장간막혈

관6)의 수축반응을 통해 이미 보고된 바 있다. 한편 Sa-ifeddine 등11)은 tyrosine kinase 억제제인 genistein

과 tyrphostin이 norepinephrine에 의한 수축반응을 돼

지의 관상혈관에서는 억제시키나 쥐의 대동맥혈관은 영

향받지 않음을 밝힘으로써 실험동물의 종에 따라 반응

이 달라질 수 있음을 시사하였다. 그러나 그들의 결과는

동일한 종임에도 불구하고 본 실험결과 및 이전의 보고10)와 일치하지 않고 있다. 아마도 이러한 차이는 Saif-eddine 등11)이 tyrosine kinase 억제제를 10분 동안

전처치한 반면에 본 실험에서는 Abebe 등10)의 경우와

마찬가지로 30분 동안 처치한 바 실험방법에 의한 차이

Table 1. Effects of genistein, tyrphostin 25 and sodiumorthovanadate on NE, KCl and PDB-induced contra-ctions in isolated aorta from sham-clipped and two-kidney, one clip (2K1C) rats

Treatment Sham-clipped 2K1C

NE (control) 7.60±0.12 7.86±0.12 Genistein+NE 0..7.24±0.07*† 7.79±0.09 NE (control) 7.73±0.09 7.87±0.13 Tyrphostin 25+NE 7.72±0.08 7.89±0.08 NE (control) 7.77±0.10 7.81±0.11 Sod. orthovanadate+NE 7.92±0.07 7.83±0.12 KCl (control) 1.74±0.02 1.82±0.05 Genistein+KCl 1.81±0.05 1.80±0.02 KCl (control) 1.74±0.03 1.76±0.04 Tyrphostin 25+KCl 1.76±0.04 1.78±0.03 KCl (control) 1.76±0.06 1.75±0.02 Sod. orthovanadate+KCl 1.75±0.05 1.76±0.05 PDB (control) 7.85±0.13 8.13±0.09 Genistein+PDB 7.80±0.10 8.08±0.11 Data are mean±SE of pD2 values for six to eight sep-arate experiments. pD2 denotes EC50 values which are expressed as the negative log molar concentration.NE：norepinephrine, Sod：sodium, PDB：phorbol 12, 13 dibutyrate, *：p<0.05,†：p<0.05, compared with corre-sponding control or 2K1C values, respectively.

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일 가능성을 배제할 수 없을 듯하다. 이와 관련하여 혈

관수축반응 양상은 실험동물의 종 이외에도 혈관의 부

위, 크기 및 실험방법 등에 의해 달라질 수 있음이 시사

된 바 있다.19)

고혈압이나 동맥경화증과 같은 병적 상태에서는 활성

물질에 대한 혈관수축반응이 항진된다고 한 바12) 본 연

구에서도 norepinephrine과 PDB에 의한 수축반응이

2K1C 고혈압군에서 대조군에 비해 비록 EC50값은 차

이가 없었으나 그 크기가 유의하게 항진되었으며 이는

유전성고혈압20)이나 deoxycorticosterone acetate

(DOCA)-salt 고혈압21)22)에서도 확인된 바 있다. 고혈

압상태에서의 수축반응 항진기전으로서는 평활근 세포

내에서 PI대사나 칼슘의 유리 및 PKC 활성화 등이 증

가되는 것으로 알려져 있다.20)21) 따라서 2K1C 고혈압

모델에서도 평활근 세포내의 여러 가지 수축조절기전의

변화가 부분적으로 수축력에 영향을 미쳤을 것으로 추

측된다. 한편 고혈압 상태에서 평활근 자체의 긴장성이

달라질 가능성도 생각할 수 있으나 본 실험에서 수축유

발기전이 다른 KCl에 의한 수축양상은 2K1C 고혈압군

과 대조군에서 차이가 없었으며 이는 다른 연구자23)에

의해서도 확인된 바 있다.

본 실험에서 흥미로운 부분은 norepinephrine에 의

한 혈관수축반응이 genistein과 tyrphostin 25에 의해

대조군에서는 억제되었으나 2K1C 고혈압군에서는 영

향을 받지 않은 결과이다. 이는 tyrosine kinase 활성이

부분적으로 norepinephrine에 의한 수축을 매개한다고

하더라도 신성고혈압 상태에서는 정상혈압인 경우보다

그 역할이 약화됨을 의미하며 sodium orthovanadate

를 전처치한 경우에도 고혈압군에서는 대조군과 달리 수

축양상이 차이를 보이지 않음으로써 그러한 추측을 뒷

받침하고 있다. 고혈압 상태에서 혈관반응에 미치는 ty-rosine kinase 활성과 관련하여 Malloy 등19)은 angio-tensin Ⅱ의 혈관수축반응이 tyrphostin 25에 의해 정

상혈압쥐에서는 억제되나 고혈압쥐에서는 영향받지 않

음을 밝히고 tyrphostin 25의 수축억제효과가 고혈압상

태에서 약화됨을 시사하였으며 tyrphostin에 의한 혈관

이완반응이 고혈압군에서 정상혈압군보다 더 억제된다

는 보고도 있다.24) 또한 본 교실에서도 serotonin의 혈

관수축반응에 대한 genistein의 억제효과가 DOCA-

salt 고혈압 모델에서 대조군에 비해 감소됨을 확인한 바

있다.22)

혈관평활근 세포의 증식이나 비대는 말초저항의 변화

와 관련된 바 고혈압의 지표중 하나이며12) 실제로 고혈

압 상태에서는 세포성장과 관련된 tyrosine kinase 활

성이 증가되고24) 평활근 세포의 증식활동이 촉진된다.13)

또한 2K1C 고혈압 모델에서도 혈관평활근 세포의 비대

가 수반됨이 알려져 있다.25) 본 실험결과를 통하여

2K1C 고혈압군에서 tyrosine kinase 활성이 대조군과

차이가 있는지는 확인할 수 없으나 적어도 norepinep-hrine에 의한 혈관수축반응에 있어 tyrosine kinase 역

할이 대조군에 비해 약화됨을 시사하고 있다. 따라서 이

미 언급한 바와 같이 고혈압상태에서는 평활근 세포내

에서 PI대사20)21)및 이차전령계의 신호전달체계를 통한

수축조절기전26)27)의 변이에 기인하여 수축반응이 항진

된 바 주로 세포성장과 관련된 tyrosine kinase의 역할

이 적어도 혈관수축기전에 있어서는 상대적으로 약화되

었을 가능성을 추측할 수 있다.

본 실험결과를 요약하면 norepinephrine에 의한 혈

관수축반응이 부분적으로 tyrosine kinase 활성을 매개

하여 유발됨을 확인하였으며 평활근수축반응에 대한 ty-rosine kinase 역할은 2K1C 고혈압군에서 대조군에

비해 약화됨을 시사하였다.

요 약

배경 및 목적：

Norepinephrine에 의한 혈관수축반응에 평활근 세포

성장과 관련된 tyrosine kinase 활성이 관여하는지 밝

히고 나아가서 혈관수축에 대한 tyrosine kinase 역할

이 two-kidney, one clip(2K1C) 신성고혈압 모델에

서 차이가 있는지 구명하고자 본 연구를 시행하였다.

방 법：

흰쥐 일측 신동맥에 clip을 장치한 고혈압군과 대조

군의 흉부대동맥을 적출하여 norepinephrine에 의한 혈

관의 등장성장력을 기록하면서 tyrosine kinase 억제제

인 genistein과 tyrphostin 25 및 tyrosine phospha-tase 억제제인 sodium orthovanadate를 전처치하여 그

영향을 양군에서 비교 검토하였다.

결 과：

Norepinephrine의 수축반응은 genistein과 tyrpho-stin 25 전처치에 의해 2K1C 고혈압군은 영향받지 않

았으나 대조군에서는 유의하게 억제되었다. Sodium or-

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thovanadate는 norepinephrine의 수축반응을 2K1C

고혈압군에서 영향을 미치지 않았으나 대조군에서는 유

의하게 항진시켰다. Genistein과 tyrphostin 25 및 so-dium orthovanadate는 2K1C 고혈압군과 대조군에서

KCl의 수축반응에 영향을 미치지 않았다. Protein kin-ase C(PKC) 활성제인 phorbol 12,13-dibutyrate

(PDB)의 수축반응은 2K1C 고혈압군과 대조군에서 ge-nistein에 의해 영향받지 않았다.

결 론：

이상의 실험결과로 보아 norepinephrine에 의한 혈

관수축반응에 tyrosine kinase 활성이 부분적으로 관여

하며 2K1C 신성고혈압 상태에서는 그 역할이 약화될

것으로 사료된다.

중심 단어：티로신 키나제；혈관평활근；노르에피네프

린；신성고혈압.

이 논문은 2001년도 조선대학교 학술연구비의 지원을 받아 연구되었음.

REFERENCES

1) Hathaway DR, March KL, Lash JA, Adam LP, Wilensky RL. Vascular smooth muscle: a review of the molecular ba-sis of contractility. Circulation 1991;83:382-90.

2) Rembold CM. Regulation of contraction and relaxation in arterial smooth muscle. Hypertension 1992;20:129-37.

3) Huganir RL, Greengard P. Regulation of neurotransmitter receptor desensitization by protein phosphorylation. Neuron 1990;5:555-67.

4) Sauro MD, Thomas B. Tyrphostin attenuates platelet-derived growth factor-induced contraction in aortic smooth muscle through inhibition of protein tyrosine kinase (s). J Pharma-col Exp Ther 1993;267:1119-25.

5) Merkel LA, Rivera LM, Colussi DJ, Perrone MH. Inhibition of EGF-induced vasoconstriction in isolated rabbit aortic rings with the tyrosine kinase inhibitor RG50864. Biochem Biophys Res Commun 1993;192:1319-26.

6) Di Salvo J, Steusloff A, Semenchuk L, Satoh S, Kolquist K, Pfitzer G. Tyrosine kinase inhibitors suppress agonist-indu-ced contraction in smooth muscle. Biochem Biophys Res Commun 1993;190:968-74.

7) Toma C, Jensen PE, Prieto D, Hughes A, Mulvany MJ, Aalkjaer C. Effects of tyrosine kinase inhibitors on the con-tractility of rat mesenteric resistance arteries. Br J Pharm-acol 1995;114:1266-72.

8) Heagerty AM, Ollerenshaw JD. The phosphoinositide sign-alling system and hypertension. J Hypertens 1987;5:515-24.

9) Granot Y, Erikson E, Fridman H, van Putten V, Williams B, Schrier RW, Maller JL. Direct evidence for tyrosine and thr-eonine phosphorylation and activation of mitogen-activated

protein kinase by vasopressin in cultured vascular smooth muscle cells. J Biol Chem 1993;268:9564-9.

10) Abebe W, Agrawal DK. Role of tyrosine kinases in norepin-ephrine-induced contraction of vascular smooth muscle. J Cardiovasc Pharmacol 1995;26:153-9.

11) Saifeddine M, Laniyonu A, Yang SG, Hollenberg MD. Ty-rosine kinase inhibitors and the contractile action of angio-tensin-II in vascular tissue. Pharmacol Commun 1992;1: 177-84.

12) Bohr DF, Webb RC. Vascular smooth muscle membrane in hypertension. Annu Rev Pharmacol Toxicol 1988;28:389-409.

13) Paquet JL, Boudouin-Legros M, Marche P, Meyer P. Enha-nced proliferating activity of cultured smooth muscle cells from SHR. Am J Hypertens 1989;2:108-10.

14) Akiyama T, Ishida J, Nakagawa S, Ogawara H, Watanabe S, Itoh N, Shibuya M, Fukami Y. Genistein, a specific inhibi-tor of tyrosine-specific protein kinases. J Biol Chem 1987; 262:5592-5.

15) Gazit A, Yaish P, Gilon C, Levitzki A. Tyrphostins I: synthe-sis and biological activity of protein tyrosine kinase inhibitors. J Med Chem 1989;32:2344-52.

16) Alexander DR. The role of phosphatases in signal transdu-ction. New Biol 1990;2:1049-62.

17) Laniyonu A, Saifeddine M, Ahmad S, Hollenberg MD. Regulation of vascular and gastric smooth muscle contra-ctility by pervanadate. Br J Pharmacol 1994;113:403-10.

18) Inoue R, Waniishi Y, Yamada K, Ito Y. A possible role of tyrosine kinases in the regulation of muscarinic receptor-activated cation channels in guinea pig ileum. Biochem Biophys Res Commun 1994;203:1392-7.

19) Malloy LG, Sauro MD. Tyrosine kinase inhibition supp-resses angiotensin contraction in hypertensive and normot-ensive small resistance arteries. Life Sci 1996;58:PL317-24.

20) Turla MB, Webb RC. Augmented phosphoinositide met-abolism in aortas from genetically hypertensive rats. Am J Physiol 1990;258:H173-8.

21) Mecca TE, Webb RC. Vascular responses to serotonin in st-eroid hypertensive rats. Hypertension 1984;6:887-92.

22) Yeum CH, Jun JY, Choi HS. Role of tyrosine kinases in vas-cular contraction in deoxycorticosterone acetate-salt hype-rtensive rats. Korean J Physiol Pharmacol 1997;1:547-53.

23) Ceron PI, Bendhack LM. Increased contractile response induced with ouabain is abolished by thapsigargin in aorta of renal hypertensive rats. Gen Pharmacol 1997;29:707-12.

24) Sauro MD, Thomas B. Decreased sensitivity of aorta from hypertensive rats to vasorelaxation by tyrphostin. Life Sci 1993;53:PL371-6.

25) Morishita R, Higaki J, Miyazaki M, Ogihara T. Possible role of the vascular renin-angiotensin system in hypertens-ion and vascular hypertrophy. Hypertension 1992;19(Suppl Ⅱ):II62-7.

26) Bohr DF, Dominiczak AF, Webb RC. Pathophysiology of the vasculature in hypertension. Hypertension 1991;18(Suppl Ⅲ):III69-75.

27) Sauro MD, Fitzpatrick DF, Coffey RG. Defective cyclic GMP accumulation in spontaneously hypertensive rat aorta in response to atrial natriuretic factor. Biochem Pharmacol 1988;37:2109-12.