guia de farmacobotanica y farmacognosia

guia de practicas de farmacobotanica

UNIVERSIDAD NORBERT WIENER

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

CURSO DE FARMACOBOTNICA y FARMACOGNOSIA

GUA DE PRCTICAS

Smallanthus sonchifolius

AUTORES: Q.F. Bertha Jurado Teixeira Q.F. Eva Ramos LLica Q.F. Elizabeth Consuelo Ortega Romero

LIMA, 2014

INTRODUCCIN

La farmacobotnica es la ciencia que estudia las plantas desde diversos enfoques, ya sea de la botnica pura o aplicada. La botnica pura estudia las plantas desde un enfoque terico, desde los aspectos de taxonoma y tambin de la fisiologa y la citogentica de los vegetales. La botnica aplicada est basada en lo anterior y tambin considera los usos prcticos que se le pueden dar a las plantas para lograr su adecuada utilizacin, que pueden ser disciplinas como la forestal la agrcola, la farmacutica y la naturista.

La Farmacognosia es una ciencia que tiene por objeto el estudio cientfico de las drogas naturales de origen vegetal y animal, de sus constituyentes qumicos, principios activos y productos relacionados.

En la presente asignatura se considera como Objetivo General; proporcionar al estudiante los conocimientos bsicos, necesarios para el estudio, investigacin y manejo con calidad de las plantas y de las drogas naturales utilizadas como recursos teraputicos.

Como objeto especfico se tiene en primer lugar que el estudiante desarrolle habilidades y destrezas en el conocimiento de las estructuras internas y externas de las plantas que contribuyan a la identificacin de las mismas y en el manejo y utilizacin de los diferentes Mtodos y Tcnicas Analticas para la extraccin, aislamiento, identificacin y cuantificacin de los principios activos responsables de las acciones farmacolgicas que se encuentran en las drogas; y en segundo trmino motivar el inters del estudiante al estudio e investigacin de las especies vegetales.Con esta gua se pretende contribuir a un mejor desarrollo de las prcticas.

Las autoras.

PRCTICAS DE LABORATORIO

SemanaPrcticaTema

11Elaboracin de diversos cortes y preparados microscpicos para la caracterizacin de las drogas vegetales (Citologa).

22Elaboracin de diversos cortes y preparados para la caracterizacin microscpica de las drogas vegetales (Histologa).

33Reconocimiento de los caracteres macroscpicos en las drogas vegetales (Morfologa).

44Control Botnico en una especie vegetal peruana. Procedimientos de recoleccin, seleccin, secado, almacenamiento y conservacin de drogas. Anlisis de drogas vegetales.

55Control de calidad de drogas vegetales. Ensayos botnicos, Anlisis cualitativo de constituyentes qumicos, tamizaje fitoqumico en extracto acuoso. Preparacin del extracto etanlico.

66Anlisis farmacognstico y tamizaje fitoqumico preliminar en extractos estandarizados. Mtodo de separacin y purificacin de drogas vegetales. Cromatografa en Capa Fina.

77Extraccin e identificacin de carbohidratos simples, oligsidos y polisacridos a partir de drogas naturales. Reacciones generales y particulares de carbohidratos.

8Primera evaluacin de prctica

98Reconocimiento de Compuestos fenlicos simples y compuestos antraquinnicos.

109Reconocimiento de flavonoides, antocianinas y taninos. Valoracin de taninos en drogas vegetales.

1110Extraccin y reconocimiento de aceites esenciales.

1211Drogas con alcaloides de ncleo tropnico, ncleo indlico, oxindlico y ncleo fenantreno. Extraccin cida-alcalina, identificacin, obtencin y valoracin.

1312Investigacin Farmacognstica de los extractos de la planta medicinal estudiada (Anlisis Fitoqumico: Tamizaje fitoqumico, pH, ndice de Refraccin, densidad y cromatografa en capa fina).

1413 Lpidos, identificacin y control de calidad de aceites.

1514Vitaminas liposolubles e hidrosolubles, extraccin, identificacin y cuantificacin.

16Segunda evaluacin de prctica

PRCTICA N 1CARACTERIZACIN MICROSCPICA DE LAS DROGAS VEGETALES.CITOLOGA: CLULA VEGETAL, PARED CELULAR, NCLEO Y COMPONENTES PROTOPLASMTICOS.

MARCO TERICO: El estudio de la estructura interna de las plantas requiere de adecuadas preparaciones microscpicas de muestras que nos permitan la observacin detallada de los diferentes tejidos y estructuras vegetales; stas se elaboran preparando lminas histolgicas de diferentes tipos de cortes hechos en plantas.La clula vegetal presenta entre sus principales caractersticas una estructura celulsica compleja (pared celular) y diferentes componentes no protoplasmticos primarios (substancias que se producen como consecuencia del metabolismo primario) y comprenden a los polisacridos (almidones) as como a los lpidos y protenas de reserva (aleurona), mientras que los denominadas inclusiones celulares (diversas formas drusas, rafidios, maclas, arenilla cristalfera) constituyen las formaciones cristalinas de oxalatos(diversas formas drusas, rafidios, maclas, arenilla cristalfera);todas estas sustancias tienen su importancia farmacognstica en la identidad de la droga vegetal.

COMPETENCIAS:Capacitar al estudiante para que adquiera habilidad en cortes histolgicos en rganos vegetales. Identificar la clula y paredes celulares, los componentes de reserva, almidones y aleurona as como los cristales de oxalato presentes en la clula vegetal.

MATERIAL VEGETAL:F-CV3-3B-2Rev. Junio 2007

1

4F-CV3-3B-2Rev. Junio 2007

Solanum tuberosum papa (tubrculo)Allium cepa cebolla (bulbo)Capsicum pendulum aj amarillo (fruto)Ficus elstica caucho (hoja)Daucuscarota zanahoria (raz)

Zebrina pendula oreja de gato (hoja)Solanum tuberosum papa (tubrculo)Phaseolus vulgarisfrejol(fruto y/o semilla)Opuntia ficus tuna (tallo)

Muestra: races, tallos y hojas

OTROS MATERIALES:Lminas y laminillas, Papel lentePapel higinico, Franela limpiaPlaca petri, gotero, estiletes.Hoja de afeitar nueva.Reactivos: lugol, glicerina, hipoclorito de sodio, safranina, azul de toluidina y otros colorantes

MicroscopiosCmara Fotogrfica

PROCEDIMIENTO:

Preparacin de cortes: Los cortes se realizan a mano alzada, con una hoja de afeitar

a)

b) Cortes que comnmente se hacen en hojas:I. Corte superficial: Se secciona paralelamente a la superficie de la hoja. II. Corte transversal: Se secciona perpendicularmente a la vena media.

c) Cortes que comnmente se hacen en tallos y races. Corte transversal: se hace perpendicular al eje del cilindro del tallo o de la raz. Corte longitudinal: se hace paralelo al eje del cilindro.

Fig. 1. Tipos de corte a mano alzadaConfeccin de una preparacin microscpica:Sobre una lmina portaobjeto se deposita una gota de agua y luego se coloca mediante una pinza o estilete el material a examinar, se recubre el material con una laminilla cubreobjeto.

Observacin de las preparaciones:Colocar su lmina preparada en la platina del microscopio para su observacin, primero con el objetivo de menor aumento (40x) luego en (100x) y despus a mayor aumento (400x).

Corte transversal de tallo

Corte longitudinal

Corte paradermal

Fig. 2. Tipos de cortes usando colorantes

Clulas de epidermis en catfilo de cebollaClula ptrea en fruto de membrillo

Cistolito en hoja de caucho

Inclusiones celulares

Drusas Rafidios

Sustancias de reserva: granos de almidn

A. Papa Solanum tuberosum, B. Arroz Oryza sativa C. Frijol Phaseolus vulgaris D. Maz Zea mays E. Esferocristales de inulinaF.Granos de aleurona

Fig. 3 Citologa e inclusiones citoplasmticas

2. COLORACIN DE LOS CORTES SELECCIONADOSSe usan los cortes ms delgados realizados a mano libre o con micrtomoUna vez realizados los cortes, se recogen en una placa petri con agua destilada; se selecciona bajo la lupa los mejores cortes y se trata con hipoclorito de sodio para su clarificacin. Se debe lavar varias veces.

COLORACIN DIRECTA: SAFRANINA

TCNICA: - Clarificar los cortes con hipoclorito de sodio al 50% hasta que se observen blancos o casi transparentes (segn el material).- Lavar varias veces con agua destilada (5-6 veces).- Pasar por alcohol 70- Colocar con safranina diluida al 15% durante 2-5 minutos segn el material- Lavar con agua destilada- Montar en gelatina-glicerinaLas paredes secundarias lignificadas se tien de color rojo intenso y tambin la cutcula. Los parnquimas toman color rosado.

3. CITOLOGA e INCLUSIONES CITOPLASMTICAS

A. Realizar cortes transversales muy delgados de la parte carnosa del membrillo o aj. Observe a menor aumento las clulas ptreas. A mayor aumento, reconocer lapared secundaria lignificada, el lumen y los canalculos porales.B. Realizar un raspado del tubrculo de papa, semilla de frejol y depositarlo en una lmina con una gota de agua, cubrir con la laminilla y observar con el objetivo de mayor aumento. Identifique los diferentes tipos de granos de almidn: simples y compuestos, con sus estratificaciones e hilio excntrico. A mayor aumento dentro de las clulas algo redondeadas. Se identifican amiloplastos de formas peculiarmente caractersticas luego aadir lugol y sealar lo ocurrido.C. Realizar corte transversal de hoja de sbila y colocar en un portaobjeto, realizar el montaje con una gota de agua.Observe: los rafidios.D. Realice un corte transversal del tallo modificado de tuna o en corte transversal de peciolo de begonia, realice el montaje con una gota de agua.Observe: clulas isodiamtricas conteniendo un agregado cristalino de aspecto asteroideo: la drusa.E. Realice el corte transversal de la raz de zanahoria y montar con una gota de agua. Observar clulas de contorno redondeado en cuyo interior presenta pequeos corpsculos tubulares e irregulares refringentes de color anaranjado (cromoplastos con predominio de carotenoides).F. Corte superficial del envs de las hojas de oreja de gato y hacer el montaje respectivo. Observe clulas de contorno poligonal, unos incoloros y otros de color morado prpura; dicho color se debe a que el contenido vacuolar (vacuoma) est conformado por antocianinas.

RESULTADOS:Hacer esquemas de sus observaciones en la HOJA DE OBSERVACIONES y elaborar el informe de su prctica mediante un PROTOCOLO DE ANLISIS BOTNICO segn Formato.

ACTIVIDAD BIBLIOGRFICA:1. En qu consiste la Herborizacin de muestras vegetales? Desarrolle un mapa conceptual con grficos o dibujos.2. Mencione mediante un cuadro 10 plantas medicinales endmicas o nativas del Per, con los siguientes datos:Nombre ComnNombre CientficoFamiliaUsos MedicinalesTtulo, Autor y ao de publicacin.

1.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

Libros 1.Prez, E. 1999. Introduccin a la Biologa Vegetal. Impresiones David, Lima2.Strasburger. 1994. Botnica. Ediciones Omega S.A. Barcelona.3.Gola G.; Negri G.; Cappelletti C. 1965.Tratado de Botnica Barcelona, 6.Mostacero, J. Taxonoma de las Fanergamas. 2002. tiles del Per. 1ra. Edicin. Lima.7.Greulach V.; Adams A. 1990. Las plantas: introduccin a la botnica moderna. Mxico 9.Reynaud, J. 2002. La flora del farmacutico. Espaa.

Revistas1. Fieldmuseum: http://fm1.fieldmuseum.org/vrrc/2. Flora de China: http://flora.huh.harvard.edu/china/3. Raintree's Tropical Plant Database: http://www.rain-tree.com/plistbot.htm#.Ux9nDD95NPI4. Revista peruana de biologa: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/rpb5. The Plant List: www.theplantlist.org6. Trpicos, Missouri Botanical Garden: www.tropicos.orgHOJA DE OBSERVACIONES DE PRCTICA N 1CARACTERIZACIN MICROSCPICA DE LAS DROGAS VEGETALES. CITOLOGA: CLULA VEGETAL, PARED CELULAR, NCLEO Y COMPONENTES PROTOPLASMTICOS.Dibuje o esquematice sus observacionesFECHA:......./.........../........

MuestraTipo de corte: Observacin












FORMATO: PROTOCOLO DE ANLISIS BOTNICO

Nombre comn:Nombre cientfico:

TEMA:

Analistas:

Fecha: / /

FOTOGRAFAS PLANTA COMPLETA

Nombre cientfico:Familia:

Lugar de Origen:

Habitad:

Lugar de recoleccin:FOTOGRAFAS DE CORTE

Tipo de corte

Coloracin

Aumento

ESQUEMA (DIBUJO A MANO SIN COLOREAR DE LA OBSERVACIN DEL CORTE)

INTERPRETACIN DE RESULTADOS


PRCTICA N 2

HISTOLOGA VEGETAL: Tejidos Meristemticos, Parenquimticos, Mecnicos, Protectores, Conductores y Secretores

MARCO TERICO:

Los tejidos vegetales encargados de la proteccin de la planta se caracterizan especialmente por carecer de espacios intercelulares y conformar una capa uni o pluricelular en la parte externa del rgano vegetal, se diferencian en su origen primario (Epidermis) o secundario (Peridermis). El tejido mecnico est conformado por elcolnquima,de clulas vivas y paredes primarias desigualmente engrosadas y el esclernquima, conformado por clulasmuertas y paredes secundarias lignificadas, uniformemente engrosadas. El xilema es un tejido vascular conformado por clulas muertas y de paredes secundarias lignificadas con unaserie de engrosamientos caractersticos.Los diferentes subproductos del metabolismo celular secundario que se producen en las plantas generalmente se encuentran localizados en clulas y estructuras secretoras en los distintos rganos vegetales, por ejemplo los laticferos y las cavidades secretoras. Los diferentes rganos vegetales presentan una serie de tejidos vegetales que conforman una estructura interna propia del desarrollo en las plantas, los cuales se describen como parte de la caracterizacin botnica de las drogas vegetales.

TEJIDO MERISTEMTICO CAMBIUM MODELO DE CRECIMIENTO SECUNDARIO

TIPOS DE COLNQUIMAA Colnquima angularB Colnquima laminarC Colnquima anularD Colnquima lagunar

TEJIDO SECRETOR A Bolsa olefera esquizgenaB Bolsa olefera lisgenaC Canal secretorD Tubo laticfero no articulado ramificadoE Tubo laticfero articulado no ramificado

HACES CONDUCTORES A Haz conductor colateral cerrado B Haz conductor colateral abierto

TIPOS DE TRICOMASA PluricelularB Cnico unicelular C Glandular largo D Glandular corto E Glandular pluricelularF MixtoG Estrellado H Urticante

COMPETENCIAS:Reconocer y caracterizar los principales Tejidos Meristemticos, Parenquimticos, Mecnicos, Protectores, Conductores y Secretores vegetales de valor diagnstico.

MATERIALES:

Material Vegetal

Raz fresca de Allium cepa cebolla Yemas del tallo de Ricinuscomunis higuerilla Pelargoniumhortorum geranio (hoja) Cucurbita pepo zapallo (tallo)o C. maxima calabaza Citrus aurantium naranja (fruto) Ficus elastica caucho (pecolo) Sambucus peruviana Saco (tallo) Tallo de Helianthus annus girasol Tallo de Zea mays maz Tallo de Phoeniculum vulgare hinojo Fruto de Pyrus sp. pera Hojas de Iris florentina lirio Hojas de Nicotina sp. tabaco, Malva sp. malva, Olea europea olivo, Urtica urens ortiga.

Otros Materiales y Reactivos:Lminas y laminillas, gotero, estiletesHoja de afeitar nueva, papel lente.Safranina. Lugol, Fast Green, verde Janus, Rojo de metilo, azul de toluidina.MicroscopioCmara fotogrfica

PROCEDIMIENTO:

TEJIDO EPIDRMICO:1. Realizar cortes superficiales o paradermal de la hoja de geranio y de lirio, y en cortes paradermal de hoja de olivo, ortiga, malva, geranio, tabaco hacer el montaje en una gota de agua.Observar clulas de contorno sinuoso y la posicin desordenada de los estomas: Adems diferenciar los pelos o Tricomas pluricelularescnicos y los: glandulares en geranio y clulas ordenadas en lirio, con estomas ordenados.

TEJIDO MECNICO2. Realizar cortes transversales del tallo de zapallo o calabaza o hinojo o sauco, hacer el montaje con una gota de safranina y observe: debajo de la epidermis, reconocer clulas de forma polidrica, con engrosamiento en los ngulos y dbilmente teidas: Colnquima angular. En las mismas muestras, por debajo del parnquima se presentan clulas con paredes engrosadas y teidas intensamente, fibras de Esclernquima.

TEJIDO CONDUCTOR O VASCULAR3. Realizar cortes longitudinales y transversaldel tallo de girasol,el montaje en una gota de safranina con fast green o verde janus y observe: el xilema formado por las trqueas con engrosamientos que los tipifican en anillado, espiralado, helicoidal y reticulado. Y los haces vasculares ordenados.

TEJIDO SECRETOR4. Realizar cortes longitudinales del pecolo de la hoja de caucho, preparar el montaje con una gota de agua y observar: amayor aumento clulas alargadas conteniendo ltex: LATICFERO NO ARTICULADO, reconocidos por su contenido de color gris. Y en corte paradermal de cscara de naranja se observar las cavidades lisgenas, y en ptalo de rosa las clulas papilosas.

ESTRUCTURA INTERNA DE TALLO Y HOJA5. Realizar cortes transversales en sauco, hacer el montaje en una gota de safranina.

A mayor aumento reconocer la estructura secundaria de tallo (dicotilednea) y los siguientes tejidos:

- Peridermis (con vestigios de epidermis)- Parnquima cortical clorofiliano- Lber primario (floema esclerosado)- Floema secundario- Cambium vascular- Xilema primario y secundario.- Radios medulares, clulas de parnquima.-Mdula, clulas de parnquima incoloro

RESULTADOS:

Hacer esquemas de sus observaciones en la Hoja de Observaciones y elaborar el informe de su prctica mediante un Protocolo de anlisis botnico segn Formato.

ACTIVIDAD DE INVESTIGACIN BIBLIOGRFICA

1. En qu consiste la Taxonoma vegetal, de un ejemplo.2. Qu funcin realizan los diferentes tipos de tejidos vegetales, grafique y seale el uso mediante un cuadro.

Tipo de TejidoFuncinPresentes en especies vegetales. Nombre comn, cientfico y Familia.


1. ALDAVE, A., MOSTACERO, J. 1998. Botnica Farmacutica, Lima.2. ANGULO, P., DIAZ, F. 1997. La medicina tradicional en el desarrollo de fitomedicamentos, el enfoque etnofarmacolgico. Lima.3. BRACK E., A. 1999. Diccionario enciclopdico de las plantas tiles del Per. Edit. PNUD CBC, Cusco Per.4. CASTILLO, E. 2007. Manual de Fitoterapia. Primera Edicin. Editorial Elsevier. Barcelona.5. CULTURAL. 2005. Atlas de Botnica: El Mundo de las Plantas. USA.6. DIAZ, T. 2004. Curso de Botnica.7. ESAU, K. 2008. Anatoma vegetal. Tercera Edicin. Editorial Omega. Barcelona.8. FAHN, A. 1994. Anatoma vegetal. Edit. Blume, Madrid. 9. FONT QUER, Po 1993. Diccionario Botnica, Edit. Labor, Barcelona. OBSERVACIONES DE LA PRCTICA N 2

HISTOLOGA VEGETAL: Tejidos Meristemticos, Parenquimticos, Mecnicos, Protectores, Conductores y SecretoresMuestraTipo de corte: Observacin


MuestraTipo de corte: ObservacinMuestraTipo de corte: Observacin









Dibuje o esquematice sus observaciones FECHA:......./.........../........

PRCTICA N 3

MORGOLOGA VEGETAL (Raz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y semilla)

MARCO TERICO:La morfologa estudia los rganos de la planta y las partes que los forman. Estos rganos son la raz, el tallo y las hojas que llamamos rganos vegetativos y la flor y el fruto, que son los rganos reproductivos. Las races se pueden clasificar de acuerdo a su origen, al medio en que viven por su forma, por su duracin y por su consistencia.A diferencia de las races, el tallo presenta geotropismo negativo, tiene nudos (lugares donde se originan las hojas) y entrenudos (regiones entre dos nudos consecutivos), yemas (reas del tallo situadas justo por encima del punto de insercin de la hoja apical y axilares) y por lo comn hojas bien desarrolladas.Sus funciones bsicas son de soporte, de conexin de hojas y yemas entre s y con la raz y de conduccin de la savia.

Las funciones primordiales de las hojas son la fotosntesis (cloroplastos) y el intercambio gaseoso (estomas), tambin asume las de proteccin, defensa, reserva y reproductora. Las hojas se clasifican por el borde de la hoja, la forma del limbo, peciolo, vaina y nervadura.La flor es un brote de crecimiento definido con hojas que producen rganos reproductores. De estas hojas, las ms apicales o internas son esporfilos y las ms inferiores o externas son antfilos.Se llama inflorescencia a una ramificacin terminada en flores. Cada una de las ramitas del eje primario o caquis, que sostiene una flor, se llama pedicelo. Cuando solo existe una flor en el pice del tallo o en la axila de una hoja, no hay inflorescencia y entonces se dice que la flor es solitaria, el tipo de inflorescencia tiene importancia para la taxonoma botnica; es caracterstico de cada familia.El fruto es el conjunto de las piezas florales que persisten despus de la fecundacin y acompaan a la semilla generalmente se dice que es el ovario desarrollado y maduro ya que este se engruesa acumulando materias nutritivas y se transforman en fruto y contiene la semilla.La semilla es el medio principal para perpetuar de generacin en generacin la mayora de las plantas (ya que algunas se regeneran vegetativamente) y gran parte de las especies leosas.

COMPETENCIAS:Reconocer y caracterizar los principales rganos de la planta (Raz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y semilla)

MATERIALES:

Diferentes tipos de (Raz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y Semilla)LupasHoja de afeitar ReglasPlacas Petri

PROCEDIMIENTO:Identificar segn las caractersticas morfolgicas los tipos de raz, tallo, hoja, flor, fruto y semilla.

TALLO

TIPOS DE RAZRAZ

TIPOS DE RAZ

HOJAS

FLOR

INFLORESCENCIA

FRUTO

SEMILLA

RESULTADOS:Hacer esquemas de sus observaciones en la Hoja de Observaciones y elaborar el informe de su prctica mediante un Protocolo de anlisis botnico segn Formato PROTOCLO BOTNICO.

ACTIVIDAD DE INVESTIGACIN BIBLIOGRFICA1. De 2 ejemplos de Races, Hojas, Tallos, Flores, Frutos y Semillas con usos medicinales mediante un cuadro.

Nombre Comn Nombre Cientficorgano de la plantaUso medicinal

Referencias Bibliogrficas

1. The Plant List: www.theplantlist.org2. The Plants Database: http://plants.usda.gov/java/3. Trpicos, Missouri Botanical Garden: www.tropicos.org4. Asociacin Latinoamericana de Botnica: http://www.botanica-alb.org/links.php5. Real Jardn Botnico: http://www.rjb.csic.es/jardinbotanico/jardin/index.php?Cab=111&len=esOBSERVACIONES DE LA PRCTICA N 3MORGOLOGA VEGETAL (Raz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y Semilla)MuestraTipo de RazObservacin

MuestraTipo de RazObservacin



MuestraTipo de TalloObservacin




MuestraTipo de hojaObservacin




Dibuje o esquematice sus observaciones FECHA:......./.........../.......

MuestraTipo de FlorObservacin




MuestraTipo de FrutoObservacin




MuestraTipo de SemillaObservacin




PRCTICA N 4CONTROL BOTNICO EN UNA ESPECIE VEGETAL PERUANA A INVESTIGAR

MARCO TERICO:Las plantas constituyen un recurso valioso en los sistemas de salud de los pases en desarrollo. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) ha estimado que ms del 80% de la poblacin mundial utiliza, rutinariamente, la medicina tradicional para satisfacer sus necesidades de atencin primaria de salud y que gran parte de los tratamientos tradicionales implica el uso de extractos de plantas o sus principios activos (Akerele, 1993; Sheldon et al., 1997; Shrestha y Dhillion, 2003; Katewa et al., 2004). De acuerdo a la OMS (1979) una planta medicinal es definida como cualquier especie vegetal que contiene sustancias que pueden ser empleadas para propsitos teraputicos o cuyos principios activos pueden servir de precursores para la sntesis de nuevos frmacos.

Estas plantas tambin tienen importantes aplicaciones en la medicina moderna. Entre otras, son fuente directa de agentes teraputicos, se emplean como materia prima para la fabricacin de medicamentos semisintticos ms complejos, la estructura qumica de sus principios activos puede servir de modelo para la elaboracin de drogas sintticas y tales principios se pueden utilizar como marcadores taxonmicos en la bsqueda de nuevos medicamentos (Akerele, 1993).

La investigacin sobre el uso de plantas medicinales forma parte de la etnobotnica, que ha sido definida como el estudio de las interrelaciones entre los grupos humanos y las plantas (Ford, 1978; Martin, 2001; Gmez-Veloz, 2002). Por su naturaleza interdisciplinaria abarca muchas reas, incluyendo: botnica, qumica, medicina, farmacologa, toxicologa, nutricin, agronoma, ecologa, sociologa, antropologa, lingstica, historia y arqueologa, entre otras; lo cual permite un amplio rango de enfoques y aplicaciones (Alexiades, 1996a; Martin, 2001)

A pesar de todas estas innovaciones, Zent (1999) plantea que la filosofa de la etnobotnica no ha cambiado mucho, pues en la mayora de las investigaciones sobre plantas medicinales se sigue enfatizando la documentacin cientfica de las plantas y sus usos para beneficio casi exclusivo de grandes transnacionales, con poco inters en la dinmica de los sistemas de conocimiento local y en la compensacin a las comunidades nativas. Se requiere entonces de ms trabajo interdisciplinario, de una mayor preocupacin por los aspectos ticos de la comercializacin de medicamentos desarrollados a partir del conocimiento tradicional de ciertos grupos humanos (Prance, 1991) y por el retorno de los resultados obtenidos, en ensayos biolgicos de plantas tropicales, a los pases y grupos humanos que han colaborado en la coleccin de las plantas evaluadas (Ritcher y Carlson, 1998).

COMPETENCIAS:- Realizar el anlisis Botnico Macroscpico de la especie vegetal a investigar, Reconociendo morfolgicamente los diferentes rganos de la especie.- Reconocer y caracterizar los principales rganos de la planta a nivel microscpico mediante cortes histolgicos (Raz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y semilla) con ayuda de la histoqumica.- Realizar el anlisis organolptico de los diferentes rganos de la especie vegetal.

MATERIALES:

Especie vegetal a investigar conlosrganos de laespecie a investigar .LupasHoja de afeitar ReglasPlacas PetriLminas y laminillas, gotero, estiletesHoja de afeitar nueva, papel lente.Safranina. Lugol, Fast Green, verde Janus, Rojo de metilo, azul de toluidina, hipoclorito de Sodio, Etanol al 50% y agua destilada.MicroscopioCmara FotogrficaPROCEDIMIENTO:

1. Realizar el Anlisis Macroscpico, organolptico (olor, sabor, color, textura) de los diferentes rganos de la especie.

Tabla Nro. 1. Anlisis macroscpico, caractersticas organolpticas de Raz, Tallo, Hoja, Flor, Fruto y Semilla

Carcter Organolpticorganode la especie

Color

Olor

Sabor

Textura

Otras Observaciones

Raz

Tallo

Hoja

Flor

Fruto

Semilla

2. Realizar el anlisis microscpico de la especie vegetal a estudiar con ayuda de la histoqumica y identificar los diferentes tipos de tejido presentes en la especie.

Tabla Nro. 2. Anlisis microscpico, Citologa e Histologa de Raz, Tallo, Hoja, Flor, Fruto y Semilla

rgano de la Especie vegetalTipo de CorteHistoqumica (Tcnica de Tincin)Observacin

RazC.T.Fresco, Safranina y Lugol

TalloC.T.C.L.Fresco, Safranina y verde Janus

Fresco, Safranina y verde Janus

HojaC.P.C.T.Fresco, Safranina y Lugol

Fresco, Safranina y verde Janus

FlorC.L.C.P.Fresco, SafraninaLugol

FrutoC.P.C.T.Fresco, Safranina y Lugol

SemillaRaspadoFresco y Lugol


1. Desarrolle un Flujograma de las etapas para realizar un estudio Botnico en especies vegetales con uso medicinal.

Referencias Bibliogrficas

1. SORIA, R., CARHUAPOMA, M. 2005. Manual de prcticas de Botnica General y Sistemtica. Lima2. SOUKUP, J. 1971. Vocabulario de Nombres Vulgares de Plantas Peruanas, Ed. Salesiana, Lima.3. STRASBURGER, E. NOLL, F. 2004. Tratado de Botnica. 35 ed. Ediciones Omega. Barcelona.4. THOMAS-DOMNECH, J.M. 1997. Atlas Temtico de Botnica. Barcelona. 5. TOSCO U. 1993 Atlas de Botnica. Edit. Barcelona.6. VALDIZAN H.; MALDONADO A. 1922. La Medicina Popular Peruana Imp. Torres Aguirre, Lima.7. VALLA, J. 2011. Botnica. Morfologa de las plantas superiores. Primera Edicin. Editorial Hemisferio Sur.8. VENTURA, O. 2010. Las Plantas Aromticas y Medicinales. Primera Edicin. Lima9. VILLAR, U. 2004. Fitoterapia. Primera Edicin. Editorial Acribia. Zaragoza10. WEBERBAUER A. 1945. El Mundo Vegetal de los Andes Peruanos. Ministerio de Agricultura. Lima.11. Flora de China: http://flora.huh.harvard.edu/china/12. Journal of Natural Products: http://www.journalofnaturalproducts.com/ 13. Nature Medicine: http://www.nature.com/nm/index.html14. Phytochemistry: http://www.journals.elsevier.com/phytochemistry/15. Raintree's Tropical Plant Database: http://www.rain-tree.com/plistbot.htm#.Ux9nDD95NPI16. Revista peruana de biologa: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/rpb17. Revistas de investigacin UNMSM: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/

OBSERVACIONES DE LA PRCTICA N 4CONTROL BOTNICO DE LA ESPECIE VEGETAL MEDICINAL MORGOLOGA VEGETAL CITOLOGA e HISTOLOGA, (Raz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y Semilla),

MuestraRazObservacin




MuestraTalloObservacin




MuestrahojaObservacin




Dibuje o esquematice sus observaciones FECHA:......./.........../........

MuestraFlorObservacin




MuestraFrutoObservacin




MuestraSemillaObservacin




PRCTICA N 5

CONTROL DE CALIDAD DE DROGAS VEGETALES.ENSAYOS BOTNICOS, ANLISIS CUALITATIVO DE CONSTITUYENTES QUMICOS, TAMIZAJE FITOQUMICO EN EXTRACTO ACUOSO. PREPARACIN DEL EXTRACTO ETANLICO.

MARCO TERICO:

Las plantas a nivel mundial ocupan un lugar importante en el comercio de medicamentos y en los preparados fitoteraputicos y por ende es necesario garantizar su control de calidad con aplicaciones de tcnicas modernas y el uso de patrones adecuados que den seguridad y eficacia al utilizarlas.Las Farmacopeas describen mtodos de ensayos generales para evaluar o valorar las drogas oficiales.

La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) ha recomendado la realizacin de monografas y la implantacin de normas o especificaciones de calidad, basadas en la experiencia de cada pas, para aquellas drogas no incluidas en las Farmacopeas y que son ampliamente utilizadas en Medicina Tradicional.Para evaluar o valorar las drogas es necesario identificarlas y determinar su calidad y pureza, lo cual se traduce en su valor intrnseco, o lo que es lo mismo, en la cantidad de principios activos presentes en ella.Los ensayos botnicos son importantes y se deben realizar al inicio de la investigacin de la planta medicinal para determinar su identificacin taxonmica y tener la certeza de la planta a investigar.

MedicamentoPlantas medicinales

Materia prima(Frmula magistral)

CONTROL

Seguridad y eficacia

CalidadIdentidad

El Control de Drogas Vegetales involucra:

Ensayos Botnicos:

Control de identidad: Determinacin de sus caractersticas macroscpicas y microscpicas. Determinacin cualitativa de sus principios activos (histoqumico).

Control de calidad: Determinacin cualitativa de sus principios activos. Cuantificacin de sus principios activos. Otras determinaciones cuantitativas Determinacin de su actividad farmacolgica.

Estos ensayos se realizan de acuerdo a las Farmacopeas.

COMPETENCIAS:-Realizar el anlisis botnico macroscpico de la especie vegetal a investigar, reconociendo morfolgicamente los diferentes rganos de la especie.-Reconocer y caracterizar los principales rganos de la planta a nivel microscpico mediante cortes histolgicos (Raz, Tallo, Hojas, Flor, Fruto y semilla) con ayuda de la histoqumica.-Realizar el anlisis organolptico de los diferentes rganos de la especie vegetal.-Preparar el extracto acuoso y etanlico de la especie a investigar para hacer los anlisis cualitativos correspondientes.

MATERIALES:

Especie vegetal a investigar con los rganos de la especie a investigar. Lupas Hoja de afeitar Reglas Placas Petri Lminas y laminillas, gotero, estiletes Hoja de afeitar nueva, papel lente. Safranina. Lugol, Fast Green, verde Janus, Rojo de metilo, azul de toluidina, hipoclorito de Sodio, Etanol al 50% y agua destilada. Microscopio Reactivos para el anlisis cualitativo. (tamizaje fitoquimico)

PROCEDIMIENTO:

1. Realizar el Anlisis macroscpico, organolptico (olor, sabor, color, textura) de los diferentes rganos de la especie.

Tabla Nro. 1. Anlisis macroscpico, caractersticas organolpticas de Raz, Tallo, Hoja, Flor, Fruto y SemillaCarcter Organolpticorganode la especie

Color

Olor

Sabor

Textura

Otras Observaciones

Raz

Tallo

Hoja

Flor

Fruto

Semilla

2. Hacer el Anlisis microscpico de los diferentes rganos de la especie y de la droga vegetal.3. Identificar los principios activos en los cortes histolgicos mediante reacciones histoqumicas.

Tabla Nro. 2. Anlisis microscpico, Citologa e Histologa de Raz, Tallo, Hoja, Flor, Fruto y Semilla

rgano de la Especie vegetalTipo de CorteHistoqumica (Tcnica de Tincin)Presencia de Principios Activos(- Negativo, + leve, ++ moderado y +++ abundante)

RazC.T.Fresco, Safranina y Lugol

TalloC.T.

Fresco, Safranina y Tricloruro de Hierro

HojaC.P.

C.T.Fresco, Safranina y Tricloruro de Hierro

Fresco, Safranina y Tricloruro de Hierro

FlorC.P.Fresco, Safranina

FrutoC.P.C.T.Fresco, Safranina y LugolFresco, Safranina y Lugol

SemillaRaspadoFresco y Lugol

Preparacin del extracto acuoso y etanlico de la especie a investigar para hacer los anlisis cualitativos correspondientes:

1. Preparar el extracto acuoso de 20 g de la especie medicinal en 100 mL de agua destilada y llevar a decoccin en BM por 15 minutos y realizar el tamizaje fitoqumico.

2. Preparar con 20 g de la especie medicinal el extracto etanlico en 100 mL (etanol de 96) en maceracin por 7 das para realizar el tamizaje fitoqumico.

TAMIZAJE FITOQUMICO

El tamizaje fitoqumico o Screening fitoqumico es una de las etapas iniciales de la investigacin fitoqumica, que permite determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes qumicos de la planta, a partir del cual se puede orientar las extracciones y/o el fraccionamiento de los extractos eligiendo los grupos de mayor inters para el investigador.

EXTRACTO ACUOSO:

CARBOHIDRATOS:- Reaccin de MolischGotas de muestra problema + gotas de S. R. de Molisch A (alfa naftol 2% en alcohol), agitar + H2SO4 conc. por las paredes del tuboanillo color violeta. (+) para carbohidratos (azcares).

- Reaccin de AntronaGotas de muestra problema + gotas de S.R. de Antrona (antrona en H2SO4 conc. al 2%) anillo verde. (+) para carbohidratos (azcares).

-Reaccin de Fehling Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Fehling A + gotas S. R. Felhing B+ calor por 5-7 minutos en bao marapp color rojo ladrillo. (+) para carbohidratos (azcares reductores).-Reaccin de BenedictGotas de muestra problema + gotas de S.R. de Benedict + calor por 5-7 minutos en bao marappcolor rojo ladrillo. (+) para carbohidratos (azcares reductores).

-Reaccin de BrownGotas de muestra problema + gotas de S.R. Hidrxido de sodio al 10% + calor hasta obtener coloracin amarilla, luego agregar 1 gota de + cido pcrico 2%, se obtendr una coloracin parda por formacin de cido picrmico. (+) para carbohidratos (azcares reductores).

Compuestos fenlicos:Gotas de muestra problema + gotas de FeCl3 (Sol. al 1% en agua o alcohol) color verde o azul.(+) presencia de compuestos fenlicos, taninos.

TANINOS:-Reaccin de GelatinaGotas de muestra problema + gotas de S.R. gelatinapp blanco (+) Taninos

-Reaccin de Agua de BromoGotas de muestra problema + gotas de agua de bromopp. taninos condensados y no pp taninos hidrolizables. (+) Taninos

AMINOCIDOS Y PROTEINAS-Reaccin de Ninhidrina Gotas de muestra problema + S.R. de Ninhidrina (Ninhidrina al 1% en etanol) + calor BM 10 minutoscolor violceo. (+) Para aminocidos libres y amino grupos (calentar en algunos casos).

FLAVONOIDES-Reaccin de Shinoda Gotas de muestra problema + S.R. Shinoda (Mg metlico + gotas de HClconc). color rojo.(+) presencia de flavonoides, chalconas, auronas; catequina e isoflavona no dan color.

ESTEROIDES Y/O TRITERPENOIDES-Reaccin de Lieberman-Burchard Gotas de muestra problema + S.R. de Lieberman-Burchard (gotas de cloroformo + gotas de anhdrido actico + gotas de H2SO4 conc).color verde, azul, naranja, rojo. (+) presencia de esteroides y triterpenoides.

QUINONAS-Reaccin de Borntrager Gotas de muestra problema + S.R. Borntrager (gotas de hidrxido de sodio 5%)color rojo. (+) quinonas

ALCALOIDES-Reaccin de Dragendorff Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Dragendorff pp naranja o rojo naranja (+) alcaloides (medio ligeramente cido).

-Reaccin de Mayer Gotas de muestra problema + gotas de R. Mayerpp. blanco.(+) alcaloides

-Reaccin de Sonnenschein Gotas de muestra problema (+) alcaloides

-Reaccin de Bertrand Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Bertrand pp blanco (+) alcaloides

ANTOCIANINAS-Reaccin de Rosenheim Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Rosenheim (S.R. Yodo Yodurada)rojo oscuro. (+) antocianinas y flavonoides catquicos.GRUPO CARBONILO-Reaccin de Hidroxilamina Gotas de muestra problema + gotas de S.R. hidroxilaminapp coloreado (+) presencia de grupo carbonilo.

SAPONINAS-Reaccin para Saponinas 1 g de muestra problema + 10 mL de agua destilada. Agitar fuertemente por 1 minutoproduccin de espuma por 15 minutos de 0.5 a 1 cm (+) presencia de saponinas.

GLICSIDOS.-Reaccin de Vainilln sulfrico Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Vainilln sulfricocolor rojizo violceo en anillo de interfase. (+) Glicsidos.

**Los resultados de los tamizajes fitoqumicos nos dan una referencia de la composicin qumica de un planta que se est investigando (no es determinante), lo cual nos ayudar a profundizar en la investigacin al realizar el fraccionamiento y el aislamiento de los constituyentes qumicos.


1. Que anlisis segn las Farmacopeas se realizan para el Control de Calidad de Productos Fitoterapeticos.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Libros:1. Bruneton, J. Farmacognosia Fitoqumica Plantas Medicinales. 3ra. Ed. Acribia, Zaragoza, Espaa 2001.2. Treasse, G., Evans, W. Pharmacognosy. Ed. BailliereTindall, Londres 1994.3. Reynaud, Jol. La flora del farmacutico. Espaa, 2002.4. Lock de Ugaz O. Colorantes naturales. 1ra Edicin. Lima, 1997.5. USP, Pharmacopeia, National Formulary (USP NF).XVII, XIX, XX, XXI, XXII, XXIII, XXIX, XXX.

RevistasJournal of Natural Products USALloydia Asoc. Americana de Farmacognosia de USA.Pharmacognosy Titles Londres InglaterraPhytochemistry Londres - InglaterraBiblioteca virtual EBSCO HOST ResearchDatabases(http://search.ebscohost.com/)Journal of Analytical ChemistryChemical Biology & Drug Desig

RESULTADOS DE LA PRCTICA Nro. 5

A. Realice el anlisis organolptico: Color:Olor: Sabor:

B. Complete el Cuadro segn las Reacciones del Tamizaje fitoqumico

MUESTRA PROBLEMAREACCINRESULTADOSTIPO DE AZUCAR

LEYENDA: (-) Nulo (-) poco (+) Leve (++) moderado (+++) abundante

PRCTICA N 6

ANLISIS FARMACOGNSTICO Y TAMIZAJE FITOQUMICO PRELIMINAR EN EXTRACTOS ESTANDARIZADOS (EXTRACTO ETANLICO)MTODO DE SEPARACIN Y PURIFICACIN DE DROGAS VEGETALES (CROMATOGRAFA EN CAPA FINA)

MARCO TERICO:

EXTRACTO ESTANDARIZADO Y TAMIZAJE FITOQUMICOMuchos principios activos presentan una estructura qumica perfectamente definida, mientras que otros, al formar parte de mezclas complejas resulta difcil determinar cul es el compuesto activo.

La Extraccin obtiene porciones medicinalmente activas a partir de los tejidos de las plantas y animales, de los componentes inertes de los mismos, mediante el uso de solventes selectivos, utilizando procedimientos establecidos y correctamente estandarizados.

Para poder realizar el aislamiento de un principio natural en condiciones ptimas, se debe tener en cuenta una serie de dificultades, inherentes a la propia planta o materia prima como al tipo de compuesto a extraer. Por esta razn la planta se somete a una serie de operaciones previas que facilitan y mejoran el rendimiento de la extraccin.Existen una serie de mtodos que han sido desarrollados y aplicados para una deteccin de los diferentes constituyentes qumicos en las plantas, basadas en la extraccin de stos con solventes apropiados y en la aplicacin de pruebas de coloracin o precipitacin llamado Tamizaje Fitoqumico.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA (CCF o TLC)La cromatografa en capa fina (en ingls thinlayerchromatography o TLC) es una tcnica analtica rpida y sencilla que permite: Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar as, por ejemplo, la efectividad de una etapa de purificacin. Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podran ser idnticas. Si, por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia. Realizar el seguimiento de una reaccin. Es posible estudiar cmo desaparecen los reactivos y cmo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber cundo la reaccin ha acabado. La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una lmina de plstico o aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina capa de adsorbente (fase estacionaria). Entonces, la lmina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o varios disolventes mezclado (eluyente o fase mvil).A medida que la mezcla de disolventes asciende por capilaridad a travs del adsorbente, se produce un reparto diferencial de los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente. Fig. 1. Preparacin de la Cromatografa en Capa Fina

COMPETENCIAS: Realizar el Tamizaje Fitoqumico en el extracto etanlico de la especie a investigar. Realizar el anlisis cualitativo mediante mtodo de separacin: Cromatografa en Capa Fina.

MATERIALES: Extracto etanlico de la Especie vegetal a investigar. Reactivos para el anlisis cualitativo (Tamizaje Fitoqumico) Reactivos para el anlisis cualitativo (Cromatografa en Capa Fina)

PROCEDIMIENTO:

1. Prueba de solubilidad frente a diferentes solventes de menor a mayor polaridad. Filtrar el extracto el extracto etanlico del mtodo de maceracin de 5 a 7 das y colocar 1 mL del extracto fluido o filtrado en cada tubo de vidrio, luego llevarlo a Bao Mara hasta sequedad. Agregar 1 mL del solvente de menor a mayor polaridad (agua destilada, etanol, metanol, acetato de etilo, cloroformo, diclorometano y ter de petrleo) sobre cada tubo del extracto seco. Agitar por 5 minutos hasta disolver el extracto y anotar los resultados.

2. Tamizaje Fitoqumico en el extracto etanlico.Realizar el tamizaje fitoqumico haciendo uso de Reactivos de coloracin y precipitacin para identificar la presencia de los principios bioactivos presentes en el extracto y anotar los resultados en el Cuadro correspondiente.

3. Anlisis cualitativo mediante mtodo de separacin: Cromatografa en Capa Fina. Proceder a colocar el sistema de solvente (acetato de etilo: metanol: agua (100:13.5:10) o Cloroformo: metanol (3:1), colocar una tira de papel filtro para crear el sistema, tapar la cuba. Sembrar el extracto etanlico con ayuda de capilares en los cromatofolios de silica gel F254 en capa de aluminio, luego colocarla placa en la cuba cromatogrfica, observar en luz visible, luz ultravioleta, anotar sus observaciones y luego proceder a revelar la placa con solucin etanolica de Cloruro frrico, vainillin sulfrico o vapores de Iodo. Calcular el Rf: La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la manchaRf = distancia recorrida por el compuesto (X) / distancia recorrida por el eluyente (Y)

Fig. Clculo del Rf

TAMIZAJE FITOQUMICO

METABOLITOREACCINPROCEDIMIENTOREACCIN POSITIVA

CARBOHIDRATOS

Molish(alfa naftol 2% en alcohol)X gotas de MP+ III gotas de Molish agitar+ III gotas de H2SO4 CCAnillo violeta

Antrona(antrona en H2SO4 cc al 2% )X gotas de MP + III gotas de AntronaColoracin verde

Fehling(A: CuSO4; B: tartrato mixto de potasio y sodio (KNaC4H4O64H2O))X gotas de MP + III gotas de Fehling A+ III gotas de Fehling B + calentar en B.MColoracin rojo ladrillo

COMPUESTOS FENLICOSFeCl3X gotas de MP + III gotas de FeCl3 10 % Coloracin verde o azul

TANINOSGelatina X gotas de MP + III gotas de gelatina Precipitado denso blanco

FLAVONOIDES ShinodaX gotas de MP + 1-2 virutas de Mg metlico + III gotas de HCl cc Chalconas, auronas, isoflavanonas: No hay coloracin.Isoflavanonas: Amarillo rojizo.Flavanonoles: Rojo a magenta.Flavonas y flavonoles: Amarillo a rojo

ANTOCIANINAS Y FLAVONOIDES CATQUICOSRosenheim(Sol. Yodo Yodurada)X gotas de MP + III gotas de RosenheimColoracinrojo oscuro

AMINOCIDOS LIBRES Y GRUPOS AMINONinhidrina(0.1% en etanol)X gotas de MP + III gotas de ninhidrina + calentar en B.M 10 min. Coloracin violcea

ALCALOIDESDragendorff(yoduro potsico- bismtico )X gotas de MP + evaporar el solvente B.M + V gotas de HCl 10%+ III gotas de DragendorffPrecipitadonaranja

Mayer (yoduro potsico mercrico)X gotas de MP + evaporar el solvente B.M + V gotas de HCl 10%+ + III gotas de MayerPrecipitado blanco

Bertrand (cido silco-tngstico)X gotas de MP + evaporar el solvente B.M + V gotas de HCl 10%+ + III gotas de BertrandPrecipitado blanco

Sonnenschein(cido fosfomolbdico)X gotas de MP + evaporar el solvente B.M + V gotas de HCl 10%++ III gotas de SonnenscheinPrecipitado amarillo-verdoso

NAFTAQUINONAS, ANTRAQUINONAS Y ANTRANONASBorntrager(NaOH 5%)X gotas de MP + III gotas de BorntragerColoracinroja

TRITERPENOIDES Y ESTEROIDESLieberman-BurchardX gotas de MP + llevar a sequedad en B.M + X gotas de cloroformo+ III gotas de anhdrido actico+ H2SO4 cc en zona (por las paredes de tubo) sin agitar.Esteroides: verde-azul Triterpenoides: rojo-naranja

SAPONINASGeneracin de espuma 1 mL de MP + 5 mL de agua destilada + agitar fuertemente por 1 min.Formacin de 0.5 a 1 cm de espuma estable por 15 min.

GLICSIDOS BaljetX gotas de MP + V gotas de cido pcrico 1 % + V gotas de NaOH al 5 %.Coloracin anaranjada

LACTONAS Legal X gotas de MP + V gotas de denitroprusiato de sodio 0.5% + V gotas de KOH 2N.Coloracin rojo oscuro

CUMARINAS NH4OH cc NaOH 10%X gotas de MP + papel humedecido con NH4OH cc NaOH 10% en boca de tubo + calentar por 5 min a Fluorescencia celeste


1. Que reacciones qumicas se dan en el Tamizaje Fitoqumico.


1. Villar del Fresno, A. Farmacognosia General. Ed. Sntesis, SA. Madrid, Espaa 1999.2. Treasse, G., Evans, W. Pharmacognosy. Ed. BailliereTindall, Londres 1994.3. Gattuso, Gattuso. Manual de Procedimientos para el Anlisis de Drogas en Polvo. 1ra ed. Argentina: Editorial Universidad Nacional de Rosario Urquiza.1999.4. Bruneton, J. Farmacognosia, Fitoqumica, Plantas medicinales 2 Ed. Acribia, Zaragoza, Espaa. 2001.5. Kuklinski, C. Farmacognosia, Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Ed. Omega, Barcelona, Espaa 2003.6. Sharapin N. Fundamentos de Tecnologa de Productos Fitoteraputicos Santa fe Bogota Colombia 2000.7. Miranda M. Mtodos de Anlisis de Drogas y Extractos, Habana Cuba 2002.8. Lock de Ugaz. Investigacin Fitoqumica, Mtodos en el estudio de productos naturales [en lnea]. Per: Editorial Pontificia Universidad Catlica del Per; 1994. [Fecha de acceso 27 de junio de 2013]. URL disponible en: http://books.google.com.pe/books?id=N36g2QOccXkC&pg=PA287&dq=prueba+con+dragendorff&hl=es&sa=X&ei=d7bNUazRHsjX4AS9oYBQ&ved=0CEAQ6AEwBA#v=onepage&q=prueba%20con%20dragendorff&f=false.

PROTOCOLORESULTADOS DE LA PRCTICA Nro. 6

Prueba de solubilidad

SolventesExtracto seco (mg)

Agua destilada

Etanol

Metanol

n-butanol

Acetato de etilo

Diclorometano

Cloroformo

Eter de petrleo

LEYENDA: (-) Insoluble (+) ligeramente soluble (+++) Soluble (+++) Muy soluble

Tamizaje fitoqumico

METABOLITOREACCINCAMBIOS OBSERVADOSRESULTADOS

CARBOHIDRATOSO AZUCARESFehling

COMPUESTOS FENLICOS

FeCl3

TANINOSGelatina

FLAVONOIDES Shinoda

AMINOCIDOS LIBRES Y GRUPOS AMINO

Ninhidrina

ALCALOIDESDragendorff

Mayer

Bertrand

NAFTAQUINONAS, ANTRAQUINONAS Y ANTRANONASBorntrager

TRITERPENOIDES Y ESTEROIDESLieberman-Burchard

SAPONINASGeneracin de espuma

LEYENDA: (-) Nulo (-) poco (+) Leve (++) moderado (+++) abundante Huella CromatogrficaPreparacin de muestra: Pesar 0.1 g de extracto seco y solubilizar en 5 mL de solvente (o sembrar el filtrado del extracto).

Fase estacionaria: Slica gel

Fase mvil:

DeteccinO Revelador:

Esquema de resultado

Calculo de Rf

INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

PRCTICA N 7

EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS SIMPLES Y OLIGSIDOSA PARTIR DE DROGAS NATURALES.REACCIONES GENERALES Y PARTICULARES DE CARBOHIDRATOS

MARCO TERICO:

Glcidos o azcares, son compuestos orgnicos constituidos por carbono, hidrgeno y oxgeno. Constituyen la clase de compuestos que se encuentran en las plantas en mayor cantidad. Son aldehdos o cetonas polihidroxilados; bajo peso molecular, tienen muchas propiedades en comn: son alifticos, pticamente activos, de sabor dulce, muy solubles en agua. Difciles de cristalizar an cuando estn puros. Son importantes en el metabolismo vegetal, son fuente de energa en forma de almidones, sirven para el transporte de energa en forma de sacarosa, intervienen en la formacin de paredes celulares (celulosa) y destacan en el aspecto ecolgico por medio de la relacin planta animal. Se pueden detectar en cantidades muy pequeas, por medio de reactivos cromgenos. Detectados por cromatografa CCF, usando reactivos que contienen fenoles o aminas, como el resorcinol con cido sulfrico o el ftalato de anilina.La CCF y CP, son sustituidos de preferencia por otras tcnicas de separacin, la CC de baja presin, HPLC, cromatografa de gases o electroforesis.

Los azcares no reductores no funcionan con estos reactivos y generalmente se detectan por su rpida oxidacin con per yodato o tetra acetato de plomo.

MONOSACRIDOSosas simples OLIGOSACRIDOSmenos de 10 osas

HOLSIDOS HOMOGNEOSvarias osas osas iguales POLISACRIDOS ms de 10 osas HETEROGNEOS osas diferentesHETERSIDOSosa + aglicn

Clasificacin de Carbohidratos

DROGAS QUE CONTIENEN CARBOHIDRATOS-Disacridos: Sacarosa, lactosa.-Polisacridos: Almidones, dextranos, celulosa, pectinas.-Gomas: Goma arbica, goma tragacanto, goma guar.-Muclagos: Agar, carragaen, alginatos, algas marinas de la costa patagnica.-Monosacridos y derivados: Glucosa, fructosa, manitol, sorbitol, xilitol, lactulosa.

COMPETENCIAS: Capacitar al estudiante para que adquiera habilidad de realizar el anlisis cualitativo y el Tamizaje Fitoqumico en el extracto etanlico de la especie a investigar y en drogas vegetales para determinar la presencia de los Carbohidratos. Identificar y diferenciar los carbohidratos.

MATERIALES y REACTIVOS: Extracto etanlico de la Especie vegetal a investigar. Reactivos para el anlisis cualitativo (Tamizaje Fitoqumico:Molish, Antrona, Fehling, Benedict, Tollens, Selivanoff, NaOH, Fenilhidrazina, Yodo 2.5%, H2SO4 cc, KOH 5%, Etanol absoluto, Ba(OH)2 10%, HCl diluido, Acetato de plomo neutro y bsico, lugol) Otros materiales necesarios (Tubos de ensayo, gradillas, embudo, cocinilla, beackers grande y chicos, baguetas, goteros, pipetas, papel filtro, capsula de porcelana, mechero y balanza) Miel de abeja, Azcar, Papa, Algodn, Manzana, Linaza

PROCEDIMIENTO:

4. Preparacin de las muestras Problema

2.1 Especie a Investigar: Filtrar el extracto hidroalcohlico al 10 o 20% P/V macerado de 7 das de hojas, tallos o semillas de la especie a investigar. Si es muy concentrado diluir 1:10 ml con el solvente donde es soluble el extracto.

2.2 Las Muestras Problemas conteniendo los diferentes tipos de Carbohidratos

Muestra ProblemaPROCEDIMIENTO

AzcarDisolver 2 g en 20 mL de agua destilada

Miel de abejaDisolver 2 g en 20 mL de agua destilada

Papa (ALMIDON)Rallar el tubrculo en un beacker conteniendo agua, luego exprimir a travs de la gasa, recogiendo el lquido en un beacker, dejar sedimentar y lavar por decantacin varias veces. Utilizar la solucin de almidn de papa para las reacciones.

Algodn (CELULOSA)Sin tratamiento

Manzana (PECTINAS)Pesar 2 g de manzana trozada o rallada, secar en estufa x 15 min a 150 C, luego lavar la muestra con 10 mL alcohol 3 veces, Al residuo agregar 10 mL HCl al 10% x 15 minutos. Filtrar y trabajar con la solucin.

Linaza (MUCLAGOS)Pesar 10 gramos de semillas de linaza, agregar 50 mL de agua destilada y someter a ebullicin x 15 minutos, decantar y trabajar con los muclagos de linaza.

5. Tamizaje Fitoqumico en el extracto etanlico. Realizar el tamizaje fitoqumico haciendo uso de Reactivos de coloracin y precipitacin para identificar la presencia de CARBOHIDRATOS presentes en el extracto y anotar los resultados en el Cuadro correspondiente. Realizar el tamizaje Fitoqumico con los extractos acuosos de las Muestras Problemas:Miel de abeja, Azcar, Almidn de Papa, Algodn, Pectinas de Manzana y muclagos de Linaza.

TAMIZAJE FITOQUMICO

Realizar las siguientes reacciones segn el tipo de Muestra Problema

REACCINPROCEDIMIENTOREACCIN POSITIVA

REACCIONES GENERALES

Molish(alfa naftol 2% en alcohol)X gotas de MP+ III gotas de Molish agitar+ III gotas de H2SO4 CCAnillo violeta

Antrona(antrona en H2SO4 cc al 2% )X gotas de MP + III gotas de AntronaColoracin verde - azulada

REACCIN DE AZUCARES REDUCTORESFehling(A: CuSO4; B: tartrato mixto de potasio y sodio (KNaC4H4O64H2O)

X gotas de MP + X gotas de solucin de Fehling+ calentar en B.MPrecipitado rojo ladrillo

Benedict(Citrato de Na + CuSO4 + NaCO3)

X gotas de MP + X gotas de Benedict+ calentar en B.MPrecipitado amarillo-verdoso

Tollens(AgNO3 + NH4OH)X gotas de MP + X gotas de Tollens+ calentar en B.MFormacin de espejo de plata


REACCIONES DE ALDOSAS Y CETOSASSelivanoff(Resorcina + HCl)

X gotas de MP + III gotas de Selivanoff+ calentar en B.MPrecipitado rojo (CETOSA)

REACCIONES DE SACAROSAHerail(1 ml Nitrato cobaltoso + 1 ml NaOH 50%)X gotas de MP + X gotas de solucin Herail

Color violeta -azulada

Pozzi-scott(Molibdato de Amonio 15%)X gotas de MP + X gotas de Reactivo+ H2SO4 cc en zona

Formacin anillo azul

Pelouze(NaOH 10%)X gotas de MP + X gotas NaOH 10% + calentar

Color amarillo

POLISACRIDOS HOMOGNEOS Solucin de yodo 2.5%

X gotas de MP (ALMIDON DE PAPA) + V gotas de Yodo 2.5%

Complejo azul desaparece por calor y reaparece por enfriamiento.

Yodo en cido sulfricoFibras de ALGODN + V gotas lugol, secar + gotas de H2SO4 ccObservar color azul

Solubilidad en H2SO4Fibras de ALGODN + V gotas de H2SO4 ccSoluble

Solubilidad en KOH 5%Fibras de ALGODN + V gotas de KOH 5%Insoluble

POLISACRIDOS HETEROGNEOS

NaOH 3N

X gotas de MP (PECTINAS) + X gotas NaOH 3N

Precipitado amarillo gelatinoso

Formacin de gelX gotas de MP (PECTINAS) + 2.5 mL de alcohol

Formacin de gel incoloro

Acetato de Plomo bsicoX gotas de MP (MUCLAGOS) + V gotas de reactivo

Precipitado gelatinoso blanco

LugolX gotas de MP (MUCLAGOS) + V gotas de reactivo

Presencia de almidones (azul) y dextrinas (rojo)


1. Explique la Reaccin qumica para la determinacin de Carbohidratos mediante el Tamizaje Fitoqumico Mencione 4

2. Mediante una Tabla mencione 8 especies medicinales endmicas o nativas del Per, que contengan Carbohidratos

Nombre ComnNombre CientficoFamiliaFotografaUsos y Tipo de Carbohidrato presentes.

1.2.


1. Bruneton, J. Farmacognosia, Fitoqumica, Plantas medicinales 2 Ed. Acribia, Zaragoza, Espaa. 20012. Gattuso, G. Manual de Procedimientos para el Anlisis de Drogas en Polvo. 1ra ed. Argentina: Editorial Universidad Nacional de Rosario Urquiza.1999.3. Kuklinski, C. Farmacognosia, Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Ed. Omega, Barcelona, Espaa 20034. Miranda M. Mtodos de Anlisis de Drogas y Extractos, Habana Cuba 2002.5. Obregn, L. Maca. Planta medicinal y nutritiva del Per. Lima 1988.6. Sharapin N. Fundamentos de Tecnologa de Productos Fitoteraputicos Santa fe Bogota Colombia 2000.7. Treasse, G., Evans, W. Pharmacognosy. Ed. BailliereTindall, Londres 1994.8. Villar del Fresno, A. Farmacognosia General. Ed. Sntesis, SA. Madrid, Espaa 1999.9. Wallis, T. Manual de Farmacognosia. Ed. Ceosa, Mxico. 1991.10. Libro rojo de plantas endmicas http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/biologia/v13n2/contenido.htm

RESULTADOS DE LA PRCTICA Nro. 7

A. Realice el anlisis organolptico: Color:Olor: Sabor:

B. Complete el Cuadro segn las Reacciones del Tamizaje fitoqumico

MUESTRA PROBLEMAREACCINRESULTADOSTIPO DE AZUCAR



PRCTICA N 8

RECONOCIMIENTO DE COMPUESTOS FENLICOS SIMPLES Y COMPUESTOS ANTRAQUINNICOS.

MARCO TERICO:

Compuestos fenlicos simples Los fenoles simples consisten en un anillo fenlico sustituido por gruposhidroxilos,aldehdicos o carboxlicos, son relativamente raros en plantas. El fenol, catecol (fenol divalente),resorcinol (fenol divalente), floroglucinol (fenol trihidroxilado) y pirogalol han sido reportados raras veces.1 En contraste, la hidroquinona se distribuye en muchas familias y se halla como arbutina (hidroquinona-O-glucsido).Drogas con Compuestos fenlicos

Sauce(Salix alba)rbol caducifolioSalicinaDroga : hojas

Uva ursi(Arctostaphylos uva ursi)Arbusto de hojas perennes, produce bayas rojas.ArbutinaDroga : hojas

Compuestos antraquinnicos Poseen una molcula de azcar unida a un derivado del antraceno. El constituyente qumico representativo es la antraquinona o 9,10-dioxoantraceno. Se encuentra en especies como el ruibarbo, sen, cscara sagrada, etc. Las antraquinonasse utilizan para la fabricacin de colorantes, plaguicidas y aditivos para procesos qumicos de la industria del papel y pulpa. Los extractos de plantas que contienen antraquinonas, son utilizados para cosmticos, alimentos y productos farmacuticos debido a sus propiedades teraputicas y farmacolgicas.Drogas con Compuestos antraquinnicos

Ruibarbo(Rheumpalmatum)Planta herbcea perenne con hojas basales, palmeado-partidas. EmodinaDroga: raizSen (Cassia angustifolia)Arbusto

Sensido A,B,C,D y aloe-emodinaDroga : hojasCscara Sagrada(Rhamnuspurshiana)rbol de 6-12 m, con ramas redondas y pubescentes.Alonas A y B, Droga: corteza

Sbila(Aloe vera)Planta de forma arrosetada, hojas grandes, carnosas, anchas, ssiles, con una fuerte espina en el pice y espinas ms pequeas a lo largo de los mrgenes Las hojas de color verde plido con manchas blancas en la superficie, estriadas; a veces el verde plido cambia a rojizo, exhalan olor caracterstico. En el parnquima se forma un jugo viscoso y espeso de sabor amargo, denominado acbar o aloe, cuyo principio activo es la alona que posee propiedades teraputicas

AlonasAloe-emodinaDroga: hojas

COMPETENCIAS: Capacitar al estudiante para que adquiera habilidad de realizar el anlisis cualitativo y el Tamizaje Fitoqumico en drogas vegetales para determinar la presencia decompuestos fenlicos y antraquinnicos

MATERIALES y REACTIVOS: Extracto etanlico de la Especie vegetal a investigar. Reactivos para el anlisis cualitativo (Tamizaje Fitoqumico) Otros materiales necesarios (Tubos de ensayo, gradillas, embudo, morteros, cocinilla, beackers grande y chicos, Baguetas, goteros, pipetas, papel filtro, capsula de porcelana, mechero y balanza)

PARTE EXPERIMENTALI. Anlisis cualitativo

Fenoles simples Sauce (Salix alba)OBTENCIN DE SALICINA

Extraccin: Pesar 1 g de corteza pulverizada, agregar 20 mL de agua y someter a decoccin por 30 min. Filtrar y concentrar.

IDENTIFICACIN

ReaccinProcedimientoResultado

cido sulfrico 5 mg de salicina + V gotas de H2SO4Coloracin roja

FeCl35 mLde extracto + V gotas de FeCl3Coloracin azul-verde

Rx. Fehling5 mL de extracto + V gotas de Fehling A y B+ calorPrecipitado rojo ladrillo

Uva ursi (Arctostaphylos uva ursi)

OBTENCIN DE ARBUTINA

Extraccin: Pesar 1 g de corteza pulverizada, agregar 10 mL de agua y someter a decoccin por 30 min. Filtrar y concentrar.

IDENTIFICACIN

ReaccinProcedimientoResultado

MicrosublimacinColocar en cpsula, 5 mg de droga en polvo. Cubrir con luna de reloj y calentar hasta desprendimiento gaseoso. Al residuo enfriado agregar:II gotas de NH4OH

Coloracin pardo rojiza

FeCl30.5 mLde extracto + V gotas de FeCl3Coloracin azul-verde

NH4OH conc.0.5 mLde extracto + V gotas de NH4OH conc.Coloracin pardo rojiza

Vainilln clorhdrico0.5 mLde extracto + V gotas de Vainilln clorhdricoColoracin azul

Taninos 0.5 mLde extracto + V gotas de gelatinaPrecipitado blanco

Compuestos antraquinnicos Identificacin Procedimientoruibarbosencscarasagradasbila

MicrosublimacinColocar en cpsula, 5 mg de droga en polvo. Cubrir con luna de reloj y calentar hasta desprendimiento gaseoso. Al residuo enfriado agregar II gotas de NH4OH.

Coloracin roja intensaColoracin roja pardoColoracin naranja-

R. Borntrager1g MP+ 10 mL agua+III gotas de NaOH. Filtrar + X gotas de HClconc. Agregar 2 mL de cloroformo y separar la fase cloroformo y agregar X gotas de NH4OH cc. Agitar

Fase polar:Rojo cerezaFase apolar: amarilloColoracin rosada rojizaFase polar rojo naranjaFase polar:rojo cerezaFase apolar: amarillo

Sol. alcohlica amoniacal 0.5 g de MP+ 5 mL de etanol+ decoccin por 5 min.+V gotas NH4OH cc.

-Coloracin roja pardo--

R. SchontetenmL del ensayo anterior (Sol. alcohlica amoniacal )+ borato de sodio saturado.

---Fluorescencia a luz UV

R. Klunge0.5 g MP+ 5 mL de agua + BM a 40 C x 15 min.+ mg de talco. Filtrar.Al filtrado aadir II gotas de CuSO4 + II gotas de NaCl + 5 mL etanol.

---Coloracin rojo grosella

Iridoides

Muestras Problemas: * Filtrado del extracto de la especie a investigar 10-20% P/V * Macerado alcohlico de Plantagomajor L. (llantn).- pesar 10 g de hojas de llantn. Colocar en un matraz y agregar 50 mL de alcohol de 70. Macerar 48 h.* Decoccin por 10 minutos (Extracto acuoso) de la droga vegetal con Iridoides.

Identificacin de iridoidesProcedimientoResultado

Reaccin con vainillin clorhdricoSembrar en papel filtro 40 veces, previo secado entre cada siembra. Secar y agregar IV gotas de reactivo Vainillnclorhdrico (secar entre gota y gota)Coloracin grosella

CUESTIONARIO

1. Describa el fundamento de las reacciones de coloracin para la identificacin de compuestos fenlicos y antraquinnicos.

2. Mediante una Tabla mencione 10 especies nativas del Per, que presenten compuestos fenlicos y antraquinnicos.

Nombre ComnNombre CientficoFamiliaFotografaUsos y Tipo de compuestos fenlicos y antraquinnicos.

1.2.


1. Kuklinski, C., Farmacognosia., Ed. Omega SA, Barcelona, Espaa (2000)2. Bruneton, J. Farmacognosia Fitoqumica Plantas Medicinales. 3ra. Ed. Acribia, Zaragoza, Espaa (2001) 3. Gibaja Oviedo S. Pigmentos naturales. Quinnicos. Lima (1998).4. Villar Del Fresno, A. Farmacognosia general. Madrid (2010)

PROTOCOLO N 8

COMPUESTOS FENLICOS SIMPLES Y ANTRAQUINNICOS

FECHA.MESA DE TRABAJO .. MUESTRA:RESULTADOSI. ANLISIS CUALITATIVO COMPUESTOS FENLICOS SIMPLES Y ANTRAQUINNICOS

Nro.ReaccinMuestra Problema 1:

Muestra Problema 2:

Observaciones

1cido sulfrico

2FeCl3

3NH4OH conc.

4Vainilln clorhdrico

5Rx. Fehling

6Microsublimacin

7R. Borntrager

8Alcohlica amoniacal

9R. Schonteten

10R. Klunge



PRCTICA N 9

RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES Y TANINOS

MARCO TERICO:

FLAVONOIDES

Los flavonoides son compuestos polifenlicos ubicuos en la naturaleza, se clasifican, de acuerdo a su estructura qumica, en: flavonoles, flavonas, flavanonas, isoflavonas, catequinas, antocianidinas y chalconas. Ms de 4 000 flavonoides han sido identificados muchos de ellos en frutas y verduras. Los flavonoides han despertado un considerable inters por sus potenciales efectos beneficiosos sobre la salud. Se ha reportado actividad antiviral, antialrgica, antiplaquetaria, antitumoral antiinflamatoria, y antioxidantes.Fig.1 Estructura general de flavonoides

Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales dispuestos en un sistema C6-C3-C6, en el que dos anillos aromticos A y B estn unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo C. Los flavonoides pueden hallarse como aglicn o bajo la forma de glicsidos con una o tres unidades de azcar, generalmente en el carbono 3 7, siendo los azcares ms comunes: glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa.Estos compuestos poseen las siguientes caractersticas: solubilidad en agua y etanol, carcter fenlico e intensa absorcin en la regin UV-Vis del espectro por la presencia de sistemas aromticos conjugados.

Extraccin de flavonoidesLos flavonoides (en particular hetersidos) pueden ser degradados por la accin de enzimas, siendo necesario utilizar muestras secas, liofilizadas o congeladas. Para la extraccin, el disolvente se elige en funcin del tipo de flavonoide a extraer. La polaridad es un factor muy importante. Flavonoides de baja polaridad (por ejemplo, las isoflavonas, flavanonas, flavonas metiladas, y flavonoles) se extraen con cloroformo, diclorometano, ter dietlico, o acetato de etilo, mientras que los hetersidos flavonoides y agliconas ms polares se extraen con alcoholes o mezclas de alcohol-agua. En el caso de los hetersidos la presencia de la porcin de azcar incrementa la solubilidad en agua y alcohol, por lo que soluciones hidroalcohlicas son las ms adecuadas.

La mayor parte de las extracciones de especies que contiene flavonoides se realizan por extraccin directa con solventes y tambin pueden ser extrados en Soxhlet, primero con hexano, para eliminar lpidos seguido de acetato de etilo o etanol para extraer compuestos fenlicos, sin embargo este mtodo no es adecuado para compuestos sensibles al calor.

TANINOS

Los taninos son compuestos polifenlicos de peso molecular alto que se encuentran en las plantas superiores, incluyendo muchas plantas utilizadas como alimentos, el peso molecular oscila entre 500 y3 000, de estructura amorfa, sabor astringente y dbilmente cidos. La mayora de ellos solubles en agua; pueden ser amarillos, rojos o marrones, y se localizan en el citoplasma o en las vacuolas de las clulas; conformados principalmente por restos de cido glico unidos a glucosa a travs de enlaces glucosdicos.

Los taninos ingeridos en la dieta pueden afectar la asimilacin de protenas y hierro, al formar complejos insolubles. En las especies vegetales los taninos actan como defensas qumicas que reducen el dao por insectos y mamferos. En medicina, especialmente en Asia (Japn y China), los extractos de especies vegetales que contienen taninos se utilizan como astringentes, diurticos, antiinflamatorios y antispticos.Por su capacidad de precipitar metales pesados y alcaloides (excepto morfina), los taninos se pueden utilizar como antdotos de estas sustancias. Los taninos se utilizan en la industria de colorantes como colorantes catinicos (tanino), y en la produccin de tintas (galato de hierro). En la industria alimentaria los taninos se utilizan para clarificar el vino, la cerveza y jugos de frutas.

Actualmente, los taninos han atrado el inters cientfico, debido a la mayor incidencia de enfermedades como el VIH y varios tipos de cncer. La bsqueda de nuevos compuestos prometedores para el desarrollo de nuevos productos farmacuticos es cada vez ms importante, especialmente por la accin biolgica que se les atribuye.

COMPETENCIAS1. Conoce la importancia de flavonoides y Taninos en Farmacognosia1. Identifica flavonoides y Taninos cualitativamente 1. Cuantificar taninos en muestras de tara (Caesalpinia spinosa)

METODOLOGA 1. Cromatografa en capa fina1. Mtodo volumtrico : Yodometra1. Reacciones de precipitacin 1. Reacciones de coloracin

MATERIAL Y EQUIPOS1. Material de vidrio1. Reactivos de coloracin 1. Material de vidrio1. Estufa 1. Mortero piln

I. Anlisis cualitativo de FLANONOIDES

PARTE EXPERIMENTAL1. Anlisis cualitativo de FLAVONOIDES

Hetersidos flavonoides DROGAREACCINPROCEDIMIENTOREACCIN POSITIVA

Hesperidsido

NaranjaCitrus sinensisFam. RutaceaeH2SO4 ccmg de hesperidina+ gotas de H2SO4 ccColoracin naranja

HCl ccmg de hesperidina+ gotas de HCl ccPrecipitado blanco

HNO3mg de hesperidina+ gotas de HNO3Coloracin pardo rojizo

NaOH 30%mg de hesperidina+ gotas de NaOH 30%Coloracin amarillo naranja

Rutinsido

RudaRuta graveolensFam. RutaceaeWilson(c.borico+citrato de sodio)0.5mLWilson A + 0.5mLWilson B+0.5mL de extracto (30 min. en oscuridad)Coloracin amarilla. Observacin en UV:Fluorescencia verde

Shinoda0.5mL de extracto+ virutas de Mg +gotas HCl ccColoracin rosada

FeCl30.5mL de extracto +gotas FeCl3Coloracin verde

Quercetinsido

CebollaAllium cepa L. Familia Liliaceae

Pb(CH3COO)20.5mL de extracto +gotas Pb(CH3COO)2Precipitado color amarillo

FeCl30.5mL de extracto +gotas FeCl3Coloracin verde en frio, rojo oscuro en caliente

Antociansido

Maz moradoZea Mays LFam. PoaceaeH2SO4 cc

0.5mL de extracto + gotas H2SO4 cc

Coloracin roja

NaOH 30%

0.5mL de extracto + gotas NaOH 30%

Coloracin verde

Preparacin de extractos de Flavonoides y Taninos

Pesar 5 g de droga vegetal, agregar 50 mL de agua destilada y llevar a decoccin x 10 minutos, filtrar. Con el extracto de la droga vegetal que presenta Flavonoides segn bibliografa realizar el Anlisis Cualitativo de Flavonoides y con el extracto de Tara realizar el anlisis cualitativo de Taninos.

1. Anlisis Cualitativo de TANINOS

1. Reaccin de diferenciacin ReactivoProcedimientoReaccin positiva

FeCl3 10%0.5 ml MP + gotas deFeCl3 10%T. hidrolizables: azul

T. condensados: verde

1. Reacciones de identificacin REACTIVOPROCEDIMIENTOREACCIN POSITIVA

FeCl30.5 mL MP+ gotas de FeCl3coloracin azul/verde

K2Cr2O7 5%0.5 mL MP+ gotas de K2Cr2O7 5%pp. pardo

Pb(CH3COO)20.5 mL MP+ gotas de Pb(CH3COO)2pp. blanco lechoso

Agua de cal0.5 mL MP+ gotas de agua de calpp. amarillo plido

KCN 5%0.5 mL MP+ gotas de KCN 5%pp. amarillo

Hipoclorito de sodio0.5 mL MP+ gotas de hipoclorito de sodiocoloracin naranja

K4[Fe(CN)6] + NH4OH0.5 mL MP+ gotas de K4[Fe(CN)6] + gotas de NH4OHcoloracin rojiza

Gelatina0.5 mL MP+ gotas de gelatinapp. blanco

KMnO40.5 mL MP+ gotas de KMnO4pp. pardo

Alcaloide0.5 mL MP+ gotas de alcaloidepp. lechoso blanco

1. Anlisis cuantitativoPesar 1 g de tara, llevar a decoccin con 20 mL de agua destilada. Filtrar, y completar el volumen de 100 mL en fiola y medir 10 mL para la titulacin.

1. 1. Preparacin de patrn GASTO: AYodo 2.5%10 mL solucin de cido tnico 1% + 2mL de NaHCO3+ c.s.p para 20 mL con agua destilada

1. Preparacin del blancoGASTO: BYodo 2.5%2mL de NaHCO3+ c.s.p para 20 mL con agua destilada

1. Preparacin de la muestra GASTO: CYodo 2.5%10 mL solucin nuestra problema+ 2mL de NaHCO3+c.s.p para 20 mL con agua destilada

Nota: El punto final de la valoracin se determina con tiras de papel almidonado (indicador externo), vira a violeta intenso en el punto de equivalencia.

1. Clculos

PATRN =GASTO: ABLANCO =GASTO: B MUESTRA =GASTO: C

A - B0.1 gC - B X

X= contenido de taninos (g) en 10 mL de muestra problema

Nota: expresar los resultados en porcentaje de taninos en la muestra.

CUESTIONARIO

1. Explique el fundamento de la valoracin de taninos realizada en prctica. 1. Mediante una Tabla mencione 10 especies nativas del Per, que presenten flavonoides y Taninos


1. Khanbabaee K, Van Ree T. Tannins: Classication and Denition. Nat. Prod. Rep., 2001; 18. p. 641649. Disponible en: http://siba.unipv.it/farmacia/art/Marrubini/Nat%20Prod%20Rep%202001.pdf [citado 22 de marzo 2013]1. Chung KT,Wong TY,Wei CI,Huang YW,Lin Y. Tannins and human health: areview.Crit Rev Food Sci Nutr.1998 Aug;38(6):421-64.1. Reed JD. Nutritional Toxicology of Tannins and Related Polyphenols in Forage Legumes. J Anim Sci 1995, 73:1516-1528. Disponible en: http://www.journalofanimalscience.org/content/73/5/1516.full.pdf [citado 22 de marzo 2013].1. Hartzfeld PW, Forkner R, Hunter MD, Hagerman AE. Determination of Hydrolyzable Tannins (Gallotannins and Ellagitannins) after Reaction with Potassium Iodate. J. Agric. Food Chem. 2002, 50, 17851790. Disponible en: http://mdhunter.myweb.uga.edu/publications/HAGERMAN.PDF [citado 22 de marzo 2013].1. Clinton C. Plant tannins: A novel approach to the treatment of ulcerative colitis. Nat Med J. 2009; 1:(3). p. 1-3. Disponible en: http://naturalmedicinejournal.net/pdf/nmj_nov09to_clinton.pdf [citado 22 de marzo2013].1. Tamilselvi N, Krishnamoorthy P, Dhamotharan R, Arumugam P, Sagadevan E. Analysis of total phenols,total tannins and screening of phytocomponents in Indigofera aspalathoides (Shivanar Vembu) Vahl EX DC. J. Chem. Pharm. Res., 2012, 4(6):3259-3262. Disponible en: http://jocpr.com/vol4-iss6-2012/JCPR-2012-4-6-3259-3262.pdf [citado 22 de marzo 2013].1. Garro G J et al. Analytical Studies on Tara Tannins. Holzforschung. 1997; 51(3). Disponible en: http://www.fpl.fs.fed.us/documnts/pdf1997/galve97a.pdf [citado 22 de marzo 2013].1. Cabello LI. Monografa para el cultivo de la tara Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze.Perbiodiverso. Lima, Per.20091. U.S. Department of Agriculture. USDA Database for the Flavonoid Content of Selected Foods.March 2003. Disponible en:http://www.nal.usda.gov/fnic/foodcomp/Data/Flav/flav.pdf [citado 22 de marzo 2013]

PROTOCOLO N 09

RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES Y TANINOSHORARIO..FECHA.MESA DE TRABAJO ..RESULTADOS

ANLISIS CUALITATIVO DE FLAVONOIDES

Muestras Problemas

REACCINEstndarHesperidina

EstndarRutina

Droga Vegetal con FlavonoidesDroga Vegetal con Taninos

H2SO4 cc

HCl cc

HNO3

NaOH 30%

Wilson

Shinoda

FeCl3

Pb(CH3COO)2

FeCl3

K2Cr2O7 5%

Agua de cal

KCN 5%

Hipoclorito de sodio

K4[Fe(CN)6] + NH4OH

Zn(CH3COO)2

Gelatina

KMnO4

Braemer



PRCTICA N 10EXTRACCIN Y RECONOCIMIENTO DE ACEITES ESENCIALES.

INTRODUCCIN

Aceites Esenciales

Los aceites esenciales son compuestos formados por sustancias orgnicas voltiles, como alcoholes, cetonas, teres y aldehdos, se producen y almacenan en los canales secretores de las plantas y normalmente son lquidos a temperatura ambiente, y por su volatilidad, son extrados por destilacin en corriente de vapor de agua.

Fuentes: Conferas (pino, abeto), Mirtceas (eucalipto), Rutceas (Citrus spp), Asteraceae (manzanilla), Labiadas (menta, lavanda, tomillo, espliego, romero) y umbelferas (ans, hinojo).Pueden estar en diferentes rganos: raz, rizoma (jengibre), leo (alcanfor), hoja (eucalipto), fruto (ans) y sumidades floridas (clavo de olor).

Propiedades teraputicas: antisptica (conservacin de alimentos), antiespasmdica, expectorante; carminativa y eupptica. Sin embargo a dosis elevadas son txicos, principalmente a nivel del sistema nervioso central y pueden ocasionar alergias e irritacin.

Caractersticas fsicas Los aceites esenciales son voltiles, lquidos a temperatura ambiente (a excepcin del alcanfor y el mentol), recin destilados son incoloros o ligeramente amarillos, de densidad inferior a la del agua. Son solubles en alcohol y disolventes orgnicos (ter, cloroformo), poco solubles en agua pero arrastrables por el vapor de agua. Poseen poder rotatorio e ndice de refraccin caracterstico.

Caractersticas qumicas Los aceites esenciales contienen compuestos:-No terpenoides: sustancias alifticas de cadena corta, sustancias aromticas, sustancias con azufre y sustancias nitrogenadas. -Terpenoides: derivan del isopreno (C5) unidas en cadena, principalmente monoterpenos (C10), sesquiterpenos (C15) y los diterpenos (C20) que pueden ser alifticos, cclicos o aromticos. 1,2

COMPETENCIAS Conoce la extraccin de aceites esenciales Evala las caractersticas fsico-qumicas de los aceites esenciales

METODOLOGA Destilacin por arrastre de vapor Reacciones de coloracin

MATERIAL Y EQUIPOS Equipo de destilacin. Picnmetro Material de vidrio: matraz, beacker, tubos de ensayo, baguetas. Reactivos: cloroformo, acido actico, cido sulfrico. Lmpara ultravioleta Cubas cromatogrficas

PARTE EXPERIMENTAL

Extraccin de Aceites Esenciales

-Expresin en fro: presenta la ventaja de no someter los aceites esenciales a temperaturas elevadas y se toma directamente la muestra problema.

-Destilacin: colocar la muestra problema sobre la criba ubicada a cierta distancia del fondo del alambique, el calentamiento se produce con vapor saturado proveniente de una fuente de calor que componen el equipo, fluye y a presin baja, penetrando a travs del material vegetal, los componentes se volatilizan, y condensan en un refrigerante, se acumulan y se separan el agua del aceite por diferencia de densidad.

I. ANLISIS CUALITATIVO

Anlisis organolptico: Color Olor Sabor Textura

Peso especficoa) Pesar el picnmetro vaco y seco (P)b) Llenar el picnmetro con la MP a 20C por 15 min., ajustar el volumen si es necesario y pesar cuidadosamente (P1)c) Repetir la operacin con agua destilada a 20 C (P2)

El peso especfico a 20 C se calcula de la siguiente manera:

P.E 20 = (P1-P)/(P2-P)

ndice de refraccin a) Calibrar el refractmetro con I gota de agua destilada (inyectable) a 1.333b) Secar el equipo con papel tissuc) Colocar I gota de muestra problema sobre el prisma de medicin y realice la lectura.

Anlisis cromatogrficoFase estacionaria: Cromatofolios de silica gel 60 F254 de 6.5 cm por 2.5 cm Fase mvil: Tolueno: acetato de etilo (9 : 1) Luz UV Revelador: Vainillina Ac. Sulfrico

REACCIONES DE IDENTIFICACIN DE TERPENOS

REACCINPROCEDIMIENTORESULTADO

Lieberman -Buchard

X gotas de MP + llevar a sequedad en B.M + X gotas de cloroformo+ III gotas de anhdrido actico+ H2SO4 cc en zona (por las paredes de tubo) sin agitar.Esteroides: verde -azul Triterpenoides: rojo-naranja

CUESTIONARIO

1. Mediante un diagrama de Flujo esquematice y describa el proceso de control de calidad para aceites esenciales y describa sus anlisis.

2. Qu otras tcnicas de extraccin de aceites esenciales conoce?.


1. Varro, E., Tyler, L. Farmacognosia. Ed. El Ateneo, Bs. As, Argentina (1993)2. Kuklinski, C., Farmacognosia., Ed. Omega SA, Barcelona, Espaa (2000)3. Bruneton, J. Farmacognosia Fitoqumica Plantas Medicinales. 3ra. Ed. Acribia, Zaragoza, Espaa (2001) 4. Bravo Daz, L. Farmacognosia. Ed. Elsevier SA. Madrid, Espaa. (2003)5. Marco,J. Alberto. Qumica de los productos naturales. Aspectos fundamentales del metabolismo secundario. 1a ed. Madrid ( 2006)6. Gibaja Oviedo S. Pigmentos naturales. Quinnicos. Lima (1998).7. Villar Del Fresno, A. Farmacognosia general. Madrid (2010)8. Lpez MT. Los aceites esenciales: Aplicaciones farmacolgicas, cosmticas y alimentarias. OFFARM.2004; 23: (7). 9. Albaladejo QM. El Aceite Esencial de limn producido en Espaa. Contribucin a su evaluacin por Organismos Internacionales. Universidad de Murcia. 1999. Disponible en: http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/11059/Albaladejo.pdf;jsessionid=239F1DE9B45434C34798AEEBF0F07002.tdx2?sequence=1[citado 23 de marzo de 2013]10. Segovia B. et al. Composicin qumica del aceite esencial de Tagetes elliptica Smith chincho y actividades antioxidante, antibacteriana y antifngica. Ciencia e Investigacin 2010; 13(2): 81-86.11. UNIDO, FAO. Herbs, spices and essential oils. Austria, 2005.Disponible en http://www.unido.org/fileadmin/user_media/Publications/Pub_free/Herbs_spices_and_essential_oils.pdf[citado 23 de marzo de 2013]

PROTOCOLO N 10

EXTRACCIN Y RECONOCIMIENTO DE ACEITES ESENCIALES.HORARIO..FECHA.MESA DE TRABAJO ..I. ANLISIS CUALITATIVO ACEITES ESENCIALES

EnsayoResultado

Anlisis organolptico

OlorColorSaborTextura

Peso especifico

ndice de refraccin

REACCIONES DE IDENTIFICACIN

REACCIN

RESULTADO

Lieberman -Buchard


CROMATOGRAFA EN CAPA FINADescripcinRf


PRCTICA N 11

DROGAS CON ALCALOIDES DE NCLEO TROPNICO,INDLICO, OXINDLICO, FENANTRENO.EXTRACCIN CIDA-ALCALINA, IDENTIFICACIN, OBTENCIN Y VALORACIN.

Los alcaloides son sustancias orgnicas nitrogenadas con carcter bsico y mayoritariamente de origen vegetal. Son compuestos orgnicos. Se forman generalmente a partir de aminocidos. De origen vegetal. Sustancias nitrogenadas. Contienen nitrgeno heterocclico. Tienen estructura compleja. Son txicos. Con actividad fisiolgicas incluso a dosis muy bajas. Los alcaloides son un grupo muy heterogneo de compuestos con estructuras muy variadas y generalmente complejas, contienen C, H, N.La mayora de los alcaloides tienen reacciones que se aprovechan para su deteccin. Hay reactivos generales que detectan alcaloides en general y hay otros que detentan un grupo especfico. Estas reacciones se pueden clasificar en reacciones de precipitacin, cristalizacin y de color.

CLASIFICACIN DE ALACALOIDES Alcaloides derivados de ornitina Alcaloides derivados de lisina Alcaloides derivados del triptfano Alcaloides derivados de fenilalanina y tirosina Alcaloides de ncleo purnico o bases xnticas

(Erythroxylum coca coca: cocana)

COMPETENCIAS Extrae los alcaloides a partir de un polvo seco pulverizado por medio cido y alcalino. Identifica cuali-cuantitativamente los alcaloides. Reconoce el origen biolgico de los alcaloides.

MATERIALES

Materiales de vidrios y otros

Baln de 250 mLPera de separacin de 500 mLFiola de 500 mLTubos de ensayo de 10 mLPipetas de 1 mL, 5 mL

Reactivos Agua destilada Acetona Etanol EtilacetonaButanol Alcohol amlico Metanol Cloroformoter etlico ter de petrleo Benceno n-Hexanocido clorhdrico Diclorometano Hidrxido de sodio Hidrxido de amonio Reactivo Dragendorff cido perclrico 0.02 N cido actico glacial Cristal violeta cido clorhdrico Agua destiladaHidrxido de sodio DiclorometanoMetanol CloroformoHidrxido de amonio.

Equipo

Molino manual Agitador con magneto Centrfuga RotavaporPera de bromo Balanza analtica

PROCEDIMIENTO

1. SensorialSe verifica el aspecto, color y olor del polvo fino de acuerdo a las partes de la planta.

2. Fisicoqumico2.1. Prueba de solubilidad Se pesan 10 mg del extracto seco y se introduce en un tubo al cual se le adiciona 1 mL de solvente en orden de polaridad decreciente (agua destilada, metanol, etanol, n-propanol, acetona, acetato de etilo, cloroformo, tolueno, ter)La finalidad del ensayo de solubilidad es determinar el comportamiento del extracto en soluciones de diferente polaridad, permitiendo encontrar el sistema apropiado para el anlisis cromatogrfico.

3. Extraccin y Aislamiento

Muestra en estudioDrogas vegetales que contienen alta cantidad de alcaloides

Proceso de Extraccin Fundamento La extraccin se realiza previamente en un medio cido formando sales de clorhidrato, y posteriormente se alcaliniza con la finalidad de convertir los alcaloides en bases libres y poder extraerlos con un solvente no polar.

Mtodo alcalino: la droga se humedece con agua y se mezcla con cal y amoniaco. Los alcaloides se extraen con solventes orgnicos (ter de petrleo, cloroformo, benceno). La fase orgnica se separa y evapora. El residuo de la droga tambin se puede agitar con agua acidulada, se aade solvente orgnico, luego dejar reposar para su separacin en capas. Las sales de alcaloides estn en la fase acuosa y en la fase orgnica las impurezas.

Mtodo cido, la droga se extrae con agua o alcohol, en medio cido. Se agrega un solvente orgnico, otros productos indeseables se eliminan en la agitacin con cloroformo u otros solventes orgnicos. Luego los alcaloides libres son precipitados por adicin en exceso de bicarbonato de sdico o amoniaco, separndose por filtracin o extraccin con disolventes orgnicos.

Procedimiento:Pesar 5 g de la droga vegetal en un matraz y aadir 50 mL de HCl 10%, someter a BM por 30 agitar, enfriar y filtrar. Transvasar a pera de decantacin y alcalinizar con NH4OH, extraer con cloroformo 3 veces y separar las fases. Concentrar la fase clorofrmica a casi sequedad aadir HCl 10% y reconocer con reacciones generales y especficas.

Cromatografa en capa fina

Sistema de solventes: A. Cloroformo: metanol: cido actico glacial (47.5:47.5:5) Cloroformo: metanol: amoniaco (9:10:1)

Deteccin: Revelador Dragendorff modificado A. 17 g de subnitrato de bismuto, 200 g de cido tartrico csp 800 mL agua. B. 160 g de Yoduro de potasio csp 400 mL de agua. Se mezclan solucin A + Sol B (1:1)

Cromatografa en capa fina de Bases Xnticas MuestraExtracto clorofrmico

EstndarSol. Cafena: 0.1% en cloroformoSol. Teofilina: 0.2 % en amoniacoSol. Teobromina: 0.2 % en hidrxido de sodio

Solventestetracloruro de carbono: cloroformo: metanol (10:90:40)

Revelador vapores de yodo (antes de revelar, calentar la placa)

I. REACCIONES GENERALESRealizar las reacciones generales y particulares


Yodados poliyodatos complejos 0.5 mL del extracto ll

guia de farmacobotanica y farmacognosia

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