igf-i blockade arteaga 1989

8/6/2019 IGF-I Blockade Arteaga 1989

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B l o c k a d eo f t h e Type I Soma tomed in R e c e p t o r I n h i b i t sGrowtho f Human B r e a s t Cance r C e l l s i nA t h y m i cMiceC a r l o s L .A r t e a g a , L i b b e yJ . K i t t e n ,E s t e r B . C o r o n a d o ,Steven J a c o b s , * F r e d e r i c k C . K u l l ,J r . , *D . C r a i gA l l r e d , tand C . K e n tOsbo rneD i v i s i o no fMe d i c a lOn c o l o g yan d t D e p a r t m e n to f P a t h o l o g y,U n i v e r s i t yo f Te x as H e al thS c i e n c eC e n t e ra t S a nAn t o n i o ,S a nAn t o n i o ,Te x a s 7 8 2 8 4 ;a n d *We l l c om eRe s e a r c hL a b o r a t o r i e s ,B u r r o u g h sWe l l c om eC o . ,R e s e a r c hT r i an g l e P a rk ,N o r t h C a ro li n a2 7 7 0 9

A b s t r a c t

I n s u l i na n d i n s u l i n - l i k eg r ow t h f a c t o r s( I G I s )s t i m u l a t et h eg r ow t ho fh u m a nb r e a s tc an c e r c e l l si n v it ro .T h e t ype I s o -ma t om e d i nr e c e p t o r( S R )e x p r e s s e di nt h e s ec e l l smay med i a t et h eg r ow t he f f e c t so f t h e s ep e p t i d e s .We h a v e e x am i n e dt h er o l eo f t h i sr e c e p t o ro n h u m a nb r e a s tc a n c e r g r ow t hw i t hamono c l o n a la n t i b o d y( a - I R - 3 )t h a tb l o c k st h er e c e p t o rb i n d i n gd om a i na n d i n h i b i t sI G F - I - i n d u c e dg r o w t h .a - I R - 3 i n h i b i t e dc l o n a lg r ow t hi nv i t r oa n d b l o ckedt h em i t o g e n i ce f f e c to fe x o g -e n o u sI G F - Ii n b o t hMCF-7 a n dMDA-231b r e a s tc a n c e r c e l ll i n e s .A n t i b o d y - i n d u c e db l o c k a d eo ft h et ype I SR a l s oi n h i b -i t e dt h ee s t r o g e n - i n d e p e n d e n tMDA-231c e l l sg r o w i n gi nv i v oi n n u d em i c e ,b u tg r ow t ho f t h ee s t r o g e n - d e p e n d e n tMCF-7c e l l sw a s u n a f f e c t e d .I G I s a r e i m p o r t a n tg r o w t hr e g u l a t o r so fMDA-231b r e a s tc a n c e r c e l l s .B l o c k a d eo ft h i sg r ow t hs t i m u -l a t o r yp a t h w a ymay p r o v i d ea n e wt r e a tm e n t s t r a t e g y .

I n t r o d u c t i o n

I n s u l i na n d i n s u l i n - l i k eg r ow t hf a c t o r s( I G F s ) 's t i m u l a t et h ep r o l i f e r a t i o no fc u l t u r e dhuman b r e a s tc a n c e r c e l l s(1 - 6 ) .R e -c e n t l y ,b r e a s tc a n c e r c e l l sh a v eb e e nr e p o r t e dt o s y n t h e s i z ea n ds e c r e t eI G Fa c t i v i t i e si n t ot h e c u l tu r em e d i u m( 5 - 7 ) ,s u g g e s t -

i n gt h a tt h e s ep o l y p e p t i d e scou l d f u n c t i o na s b o t h e n d o c r i n ea n d a u t o c r i n e / p a r a c r i n eg r ow t hr e g u l a t o r s( 8 ) .I n e s t r o g e nr e -c e p t o r( E R ) - p o s i t i v ec e l l s ,t h ee x p r e s s i o na n d s e c r e t i o no f b o t hI G F t y p eI - a n d I I - l i k ep r o t e i n sa r e i n c r e a s e db y e s t r o g e nl e a d i n gt o t h ep o s s i b i l i t yt h a tt h e yc o n t r i b u t et o e s t r o g e n - i n -du c e dg r ow t h( 6 ,9 ) .

I t i s a s s u m e dt h a tI G F - I s t i m u l a t e st h eg r ow t ho f b r e a s t

T h i s w o r kw a s p r e s e n t e di n p a r ta t t h e7 0 t h A n n u a lMe e t i n go ft h eE n d o c r i n eS o c i e t yi n New O r l e a n s ,LA , 1 9 8 8 ,a n d p u b l i s h e di n a b -s t r a c tf o rm i n t h e1 9 8 8Me e t i n gP r o c e e d i n g s ,p . 1 9 1 .

D r .A r t e a g a ' sc u r r e n ta d d r e s si s D i v i s i o no fMed i c a lOnco l o g y,Va n d e r b i l tU n i v e r s i t y ,VA Med i c a lC e n t e r ,1 3 1 02 4 t hAv e n u eS o u t h ,

N a s h v i l l e ,TN 3 7 2 1 2 .Ad d r e s sr e p r i n tr e q u e s t st oD r . O s b o r n e ,D e p a r t m e n to f Med i c i n e ,

D i v i s i o no f O n c o l o g yU n i v e r s i t yo f T ex asHea l t h S c i e n c eC e n t e r a tS a nA n t o n i o ,7 7 0 3F l o y dCu r lD r i v e ,S anAn t o n i o ,TX 7 8 2 8 4 - 7 8 8 4 .

R e c e i v e d f o rp u b l i c a t i o n1 6Ma r c h1 9 8 9a n d i nr e v i s e d f o r m1 7J u l y1 9 8 9 .

1 .A b b r e v i a t i o n su s e di nt h i sp a p e r :E G F ,e p i d e rm a lg r ow t hf a c t o r ;E R ,e s t r o g e nr e c e p t o r ;I G F , i n s u l i n - l i k eg r ow t hf a c t o r ;IMEM, i m p r o v e dminimum e s s e n t i a lm e d i u m ;S R , s om a t om e d i nr e c e p t o r .

c a n c e r c e l l sv i at h et ype I s om a t om e d i nr e c e p t o r ( S R ) ,a l s ok n o w na st h eI G F - Ir e c e p t o r( 5 - 7 ) .A s s h o w ni no t h e rs y s t e m s ,t h i sr e c e p t o rmay a l s omed i a t es o m eo f t h em i t o g e n i ce f f e c t so fI G F - I Ia n d i n s u l i n( 1 0 - 1 5 ) .Fu r t h e rmo r e ,b r e a s tc a n c e r t i s s u ef r om p a t i e n t se x h i b i t sh i g h e rI G F - I b i n di n g t hana d j a c e n tn o r m a l t i s s u e( 1 6 )s u g g e s t i n ga l i n kb e t w e e nt y p eI SR a n db r e a s te p i t h e l i a lc e l lt r a n s f o r m a t i o n .I f t h e s ep e p t i d e sa r ei m -p o r t a n te n d o c r i n eo r a u t o c r i n e / p a r a c r i n eg r ow t h r e g u l a t o r st h e n b l o c k a d eo f t h i sr e c e p t o rm i g h t i n h i b i tb r e a s tc a n c e rg r o w t h .I n t h ep r e s e n ts t u d yw eh a v e i n v e s t i g a t e dt h ee f f e c tof

b l o ckade o ft h et ype I SR o n c u l t u r e dhuman b r e a s tc a n c e rc e l l sg r o w ni nv i t r oa n d i nv i v oa ss u b c u t a n e o u st u m o r si nt h ea t h ym i cn u d emo u s e .

Methods

C e l l s ,h o r m o n e s ,a n da n t i b o d i e s .T h eMCF-7 l i n ew a ss u p p l i e db yD r .M . L i p p m a n( N a t i o n a lC a n c e rI n s t i t u t e )a n d t h eMDA-231 l i n ew a so b t a i n e df r om t h eA me ri c an T yp eCu l t u r e C o l l e c t i o n( R o c k v i l l eM D ) .C e l l swe r e c u l t u r e da n d p a s s a g e da sp r e v i o u s l yd e s c r i b e d( 1 7 ) .Human r e c omb i n a n tI G F - Iw a s p u r c h a s e d f r om Amgen B i o l o g i c a l s( T h o u s a n dO ak s , C A ).2 5 1 I - I G F - I( s p a c t2 , 1 2 5C i / mm o l )w a so b t a i n e df r om t h eAm e r s h a mC o r p .( A r l i n g t o nH e i g h t s ,I L ) .

a - I R - 3a n t i b o d yi sa m o u s emon o c l o n a lI g G ,p r e p a r e da f t e ri m m u -n i z a t i o nw i t hp a r t i a l l yp u r i f i e di n s u l i nr e c e p t o r sf r omhuman p l a c e n t a( 1 8 ) .T h i sa n t i b o d ys p e c i f i c a l l yb l o c k st y p eI SR b i n d i n g( 1 8 ,1 9 ) .T h em o u s e m on o cl on a la - I R -1 a n t i b o d y ,wh i c hr e c o g n i z e sa n o n b i n d i n gd om a i no ft h e i n s u l i nr e c e p t o ra n d h as n o b i o l o g i ca c ti v i t y ( 1 2 ,1 9 ) ,w a s u s e d a s a c o n t r o l .P u r i f i e da n t i b o d yp r e p a r a t i o n sc o n t a i n e dn od e t e c t a b l ee n d o t o x i n( < 0 . 3p g / f u gb y t h eL im u l u sa m e b al y s a t et e s t ) .

B i n d i n gs t u d i e s .B r e a s tc ance r c e l l swe r e g r o w ni n 2 4 - w e l lt i s s u ec u l t u r ep l a t e s( C o r n i n gG l a s sWo r k s ,C o r n i n g ,N Y ) .O n c ec o n f l u e n tt h emono l a y e r sw e r ew a s h e dw i t hb i n d i n gb u f f e r( i m p r o v e dminimume s s e n t i a lm e d i u m[ I M EM ] ,0 . 1 %BSA ,2 5 mM H e p e s[ G i b c oLabo r a -t o r i e s ,G r a n dI s l a n d ,NY ] ,pH 7 . 4 )a n d i n c u b a t e dw i t h 4 0 pM ' 2 5 I -I G F - Ip l u sv a r i o u sc o n c e n t r a t i o n sof u n l a b e l e da - I R - 3o r I G F - I ,f o r9 0m i na t r o o m t e m p e r a t u r e .Mono l a y e r sw e r e t h en w a s h e dt h r e et i m e sw i t hc o l dPBS / 0 .1 %BSAa n d s o l u b i l i z e dw i t h0 . 5N NaOH, a n d c e l l -a s s o c i a t e dr a d i o a c t i v i t yw a sme a s u r e di n a gamma c o u n t e r .

I n v i t r og r o w t he x p e r i m e n t s .F o r a n c h o r a g e - i n d e p e n d e ng r ow t he x p e r i m e n t s ,a s i n g l e - c e l ls u s p e n s i o no f 5 X 1 0 3c e l l sw a s c l on edi n0 . 8 %a g a r o s ea sp r e v i o u s l yd e s c r i b e d( 1 7 )w i t hd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i oo f a - I R - 3 o r a - I R - l .T h e d i s h e swe r e i n c u b a t e di n a 5% C O 2a tm o -s p h e r ea t 3 7 Ca n d c o l o n i e s(me a s u r e d2 5 0 u m )w e r ec o u n t e du s i n ga n i m a g ea n a l y z e r( Om n i c o nmod e lI I ,B a u s c h& L o m b ,I n c . ,Roc h e s -t e r ,N Y ) .F o r mon o l a y e rg r ow t he x p e r i m e n t s ,3 0 X 1 0 3c e l l sp e rw e l lwe r e p l a t e di n 2 4 - w e l lt i s s u ec u l t u r e p l at e si n I M EMs u p p l em e n t e dw i t h5% f e t a lc a l fs e r u m( F C S ) .A f t e r2 4 h , t h emedium w a sr e m o v e da n d r e p l a c e dw i t h p h e n o lr e d - f r e es e r u m - f r e eI M EMa l o n e o r w i t hI G F - I , a - IR - 3 ,or b o t h .M e d i u mw i t hh o r m o n ea n d / o r a n t i b o d yw a se x c h a n g e deve r y 2 d .C e l lc o u n t sw e r ed e t e rm i n e da f t e rs u s p e n d i n gt h ec e l l sw i t h 1 mM ED TA5 d a f t e rp l a t i n g .

I n v i v oe x p e r i m e n t s .3 - w k - o l df ema l e a t h ym i cm i c e ( H a r l a nS p r a g u e - D a w l e y ,Mad i s o n ,W I )w e r e i n o c u l a t e di n t h ef l a n kj u s tc au -

1 4 1 8 Ar t e aga e t al .

J .C l i n .I n v e s t . T h eAme r i c a nS o c i e t yf o rC l i n i c a lI n v e s t i g a t i o n ,I n c .0 0 2 1 - 9 7 3 8 / 8 9 / 1 1 / 1 4 1 8 / 0 6$ 2 . 0 0Vo l u m e8 4 ,N o v e m b e r1 9 8 9 ,1 4 1 8 - 1 4 2 3


2/6

Ta b l eL E f f e c to f a - I R - 3a n da - I R - ion A n c h o r a g e - i n d e p e n d e n tG r o w t ho fB r e a s tC a n c e rC e l l s

MCF-7 MDA-231

P B S 1 9 4 2 4 1 0 9 8 2 8a - I R - 3

1 . 0nM 1 1 5 3 8 8 2 7 9 11 0nM 5 5 7 5 5 0 3 71 0 0nM 3 4 1 0 4 8 8 5 7

a - I R - I

1 0 0nM 2 0 5 2 1 1 1 6 0 1 4 1

A s i n g l e - c e l ls u s p e n s i o no f 5 X 1 0 3c e l l sw a sc l oned i n0 . 8 %a g a r o s ec o n t a i n i n gIMEM, 1 0%c a l fs e r um , a n d 1 0mM H e p e s .Co l o n i e sme a s u r i n g2 5 0 l smwe r ec o u n t e da sd e s c r i b e di nMe t h o d sa f t e r1 0 - 1 4d .Va lue s a r et h em e a n S Eo ft r i p l i c a t ed e t e r m i n a t i o n s .

d a lt ot h ef o r e l i m bw i t h 1 0 7l o gp h a s eMCF-7or MDA-231c e l l s .Tw i c ewe e k l y i n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o n sof P B S ,a - I R - 3 ,o r a - I R - 1 w e r es t a r t e ds i m u l t a n e o u s l ya n d c o n t i n u e df o r4 - 5 w k.A l lm i c ei n o c u l a t e dw i t hM C F - 7c e l l sa n d s o m ew i t ht h eM D A - 2 3 1c e l l sr e c e i v e da 0 . 2 5 -mg 1 7 f 3 - e s t r a d i o lp e l l e t( I n n o v a t i v eR e s e a r c h ,To l e d o ,OH) i m p l a n t e ds u b c u t a n e o u s l yi n t h ei n t e r s c a p u l a rr e g i o n .Tumor d i a m e t e r sw e r eme a s u r e da t r e g u l a ri n t e r v a l sa n d t u m o rv o l u m ei nc u b i cm i l l i m e t e r sw a sc a l c u l a t e db y t h ef o r m u l a :v o l u m e= ( w i d t h ) 2X l e n g t h / 2 .A t t h ee n d o f t h ee x p e r i m e n t s ,m i c ew e r e s a c r i f i c e db y c e r v i c a ld i s l o c a t i o na n d b l oo d w a sc o l l e c t e df r oma s e c t i o n e da x i l l a r ya r t e r y .T u m o r sw e r er em o v e d ,f o r m a l d e h y d e - f i x e d ,s e c t i o n e d ,a n d s t a i n e dw i t hh ema t o xy -l i na n d e o s i n .T u m o r swe r e a l s os t a i n e df o rk e r a t i n ,c y t o k e r a t i n ,e p i -t h e l i a lm e m b r a n ea n t i g e n ,c a r c i n o e m b r i o n i ca n t i g e n ,a n dc o l l a g e n .

I G F - Il e v e l sa n d t y p eI SR b l o c k i n ga c ti v i t y i nm o u s es e r u m .T od e t e r m i n ei mmu n o r e a c t i v eI G F - I l e v e l s ,s e r u mw a s pooled f r om s i xe s t r o g e n - s u p p l e m e n t e dMCF-7 t umo r - b e a r i n gm i c e ,a n d f roms i xm i c ew i t hMDA-231 t umo r s . I G F - Il e v e l swe r ed et er mi n e d b yRI A a sd e s c r i b e d( 2 0 ) .To d e t e rm i n et y p e I SR b l o c k i n ga c t i v i t y,m o u s es e r u mw a so b t a i n e d3 d a f t e rt h el a s ti n t r a p e r i t o n e a la d m i n i s t r a t i o no f P B Sore i t h e ra n t i b o d y .C o n f l u e n tmono l a y e r so fMCF-7 or MDA-231c e l l si n2 4 - w e l lp l a t e swe r ep r e i n c u b a t e dw i t ha 1 : 1 0d i l u t i o no f m o u s es e r u mf o r2 h a t 4 C ,a n d t h e n w a s h e dw i t hb i n d i n gb u f f e r .T h emono l a y e r sw e r e t h e n i n c u b a t e di n b i n d i n gb u f f e rw i t h 4 0 pM ' 2 5 I - I G F - If o r9 0m i na t r o o mt e m p e r a t u r e ,a n dc e l l - a s s o c i a t e dr a d i o a c t i v i t yd e t e rm i n e da sa b o v e .T h e n u m b e ro f c o u n t s pe r m i n u t eb o u n dw a sc omp a r e dt ot h a tb o u n dt o c e l l sp r e i n c u b a t e dw i t hc o n t r o ls e r u ma n de x p r e s s e da s

p e r c e n ti n h i b i t i o no f b i n d i n g .E a c hs am p l eo f m o u s es e ru m w a st e s t ei n d i v i d u a l l yi n t r i p l i c a t ew e l l s .

R e s u l t s

B i n d i n ge x p e r i m e n t s .I nb o t h b r e a s tc a n c e r c e l ll i n e scompe t i

t i v eb i n d i n gs t u d i e sa n d S c a t c h a r da n a l y s i sd em o n s t r a t e dt h aa - I R - 3w a smore p o t e n t t h a n t h e n a t i v eh o r m o n ei ni n h i b i tb i nd i n g o f' 2 5 I - I G F - I( d a t an o t s h o w n ) .T h e s e b i n d i n gda t ar e v e a l e da Kd o f 0 . 6nM ( M C F - 7 )a n d 2 . 1nM (MDA-231 )f ot h er e c e p t o r a n t i b o d yc o m p a r e dw i t h 2 . 9a n d 4 . 2nM f oI G F - I .a - I R -1 ,a t a c o n c e n t r a t i o no f 1 3 0nM , h a d n o e f f e c tonl a b e l e dI G F - Ib i n d i n g .

I n v i t r og r ow t he xp e r imen t s .S i n c ea - I R- 3 w a sa n e f f e c ti n h i b i t o ro f b i n d i n gt o t h et y p e I S R , we n e x t d e t e rm i n ew h e t h e rt h i sa n t i b o d y -m e d i a t e dr e cep to r b l o c k a d e c o u l d i nh i b i tt h eg r o w t ho f b r e a s tc a n c e r c e l l si n v i t r o .An c h o r a g e - id e p e n d e n tg r ow t ho f b o t h l i n e sw a s i n h i b i t e dr e p r o d u c i bb ya - I R - 3 i n a d o s e - d e p e n d e n tf a s h i o n( Ta b l e I ) .A m a x i m a le ff e c tw a s ob s er v ed w i th 1 00nM a - I R - 3 ,t h ec o n c e n t r a t i o naw h i c hm a x i m a li n h i b i t i o no f r e c e p t o rb i n d i n gw a s a l s oobs e r v e d .T h e a - I R -1 c o n t r o la n t i b o d yh a d n o i n h i b i t o r ye f f eo n c o l o n yg r o w t h .

S i n c ec o l o n y f o r m a t i o ni n v i t r or e q u i r e sg r o w t hi n s e r u ms u p p l em e n t e dm e d i u m ,w h i c hc o n t a i n sI G F - I ,t h ei m p o r t a n co f e n d o g e n o u s l ys e c r e t e dI G F - l i k e a c t i v i t i e sas a u t o c r i ng r ow t h f a c t o r sc o u l d n o t b e a s s e s s e d .He n c e , t h ee f f e c t soe x o g e n o u sI G F - Ia n d a - I R - 3 o n mo n o l a y e rg r ow t hi n s e r u mf r e emedium w e r e d e t e rm i n e d( Ta b l e I I ) .I G F - I s t i m u lp r o l i f e r a t i o no f b o thc e l ll i n e s ,a n d t h i se f f e c tw a si n h i b i t eba - I R - 3 .I n t h ea b s e n c eo f I G F - I ,n e i t h e ra - I R - 3 n o r a - I R -i n h i b i t e dt h eg r ow t hof t h e s ec e l l s .I n s o m ee x p e r im e n t sa - I R -h a d a mo d e s ts t i m u l a t o r ye f f e c to n c e l l sg r o w i n gi n s e r um - f r em e d i u m .

I n v i v oe x p e r i m e n t s .A t h y m i cm i c ew e r e i n o c u l a t e dw i tMCF-7 or MDA-231 c e l l s .I n t r a p e r i t o n e a la n t i b o d yt r e a tm e nw a s s t a r t e ds imu l t a n e o u s l ya n d c o n t i n u e d t w i c ewee k l y f o4 - 5 w k.A f t e r2 - 3wk e a ch c e l ll i n ep r o d u c e da p a l p a b l et u m oma s s .D e s p i t et h ef a c tt h a ta - I R - 3 i n h i b i t e d c l o n a lg r o w t hoMCF-7 c e l l si n v i t r o ,t h e a n t i b o d yd i d n o t b lockg r o w t hot h e s ec e l l si n v i v o .I n c o n t r a s t ,i n v i v o g r o w t ho f MDA-23c e l l sw a s ma r k e d l yi n h i b i t e d( F i g .1 a n d Ta b l e I I I ) .I d e n t i

Ta b l eI I .E f f e c to fTy p e1 SR Blockadeo n I G F - I - i n d u c e dG r o w t ho fHuman Brea s t C a n c e rC e l l s

MCF-7 MDA-231

E x p .No . I E x p .No . 2 Exp . No . I Exp . N o . 2

X 1 0 - 3c e l l s X 1 0 - 3c e l l s

Con t r o l 1 8 5 1 2 1 9 1 1 2 6 4 5 2 1 8 1 7a - I R - 3( 1 0 0n M ) 2 1 5 1 2 2 2 6 1 4 9 1 1 3 2 2 4 2 1I G F - I( 1 3nM) 3 3 7 3 4 3 6 0 1 2 1 8 1 3 4 1 3 1 6I G F - I+ a - I R - 3 2 4 9 1 2 2 4 1 1 5 1 3 6 1 1 2 6 3 1 1a - I R - I( 1 0 0n M ) ND 1 7 2 1 1 ND 2 2 9 1 4I G F - I+ a - I R - I ND 3 6 2 2 1 ND 3 9 2 1 1

I n s u l i n - l i k eG r o w t hF a c t o r Ty p eI Recep to rB l o c k a d ei nC a n c e rG r o w t hI n h i b i t i o n 1 4

B r e a s tc a n c e r c e l l swe r eg r o w ni n p h e n o lr e d - f r e e ,s e r u m - f r e eI M EMa l on e o r w i t h I G F - I ,a - I R - 1 ,a - I R - 3 ,o r b o t h h o r m o n ea n d a n t i b o d y .Me-d i u mw i t hh o r m o n ea n d / o r a n t i b o d ywas e x c h a ng e deve r y 2 d .C e l lc o u n t sw e r e d e t e rm i n e da f t e rs u s p e n d i n gt h e c e l l sw i t h 1 mM EDTAond a y 5 .Va l u e s r e p r e s e n tm e a n s S Eo f t r i p l i c a t ed e t e r m i n a t i o n sf r om tw o s e p a r a t ee x p e r i m e n t s .N D ,n o t d o n e .


3/6

MD A - 2 3 1c

9 0E

0

E2

0

5 10 152025 305 1015 20 2530 35

D a y s D a y s

F i g u r e1 .E f f e c tof t y p e I SR a n t i b o d yt r e a t m e n t on g r ow t ho fMCF-7 ( l e f t )a n dMDA-231 ( r i g h t )t u m o r si n a t h ym i cm i c e .3 - w k -o l df ema l ea t h y m i cm i c ew e r e i n o c u l a t e ds u b c u t a n e o u s l yw i t h 1 0 7l o g - p h a s eM C F - 7o r M D A - 2 3 1c e l l s .Tw i c ew e e k l yi n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o n sw i t h( o )P B So r ( e )5 0 01 A gof a - I R - 3a n t i b o d yw e r e s t a r t e ds i m u l t a n e o u s l ya n d c o n t i n u e df o r4 - 5 w k . Tumor d i ame t e r sw e r eme a s u r e da t r e g u l a ri n t e r v a l sa s s p e c i f i e di nMe t h o d s .E a c hd a t ap o i n tr e p r e s e n t st h em e a n S Eof s i xm i c e .

r e s u l t swe r e o b s e r v e di n t w o s e p a r a t ed u p l i c a t ee x p e r i m e n t s .E s t r o g e nt r e a tm e n to fm i c ec a r r y i n gMDA-231 t u m o r sh a d n oe f f e c to n t u m o rg r o w t h ,a n d i t d i d n o t p r e v e n t i n h i b i t i o nb ya - I R - 3( n o ts h o w n ) .

T h ei n h i b i t o r ye f f e c to n t h eE R - n e g a t i v eMDA-231 t u m o r sw a s d o s e d e p e n d e n t( F i g .2 , l e f t ) .A m a x i m a le f f e c tw a s o b -s e r v e dw i t h5 00 u g per i n j e c t i o no f a - I R - 3 .A t t h i sd o s e ,t h et u m o r t a k er a t ew a s o n l y5 0 %( o n l yt h r e eo f s i xi n o c u l a t e dm i c ef o rm e da s m a l lp a l p a b l et umo r )( Ta b l eI I I ) .I n t e r m e d i a t el e v e l so fi n h i b i t i o nw e r eo b s e r v e dw i t hd o s e sr a n g i n gb e t w e e n2 a n d 2 0 0M gpe r i n j e c t i o n .T h e a - I R -1 c o n t r o la n t i b o d y( F i g .2 , r i g h t )h a d n oe f f e c to n MDA-231 t u m o r g r ow t h i n d o s e s

r a n g i n gf r om2 t o 2 0 0M g .

3 . 0 5x

2 . 5 -

E

1 E. 0 -

0 . 5 -

0 . 0 - C-

D a y s D a y s

F i g u r e2 .E f f e c to f a - I R - 3 a n d a - I R -1 o n g r ow t ho f MDA-231t um o r si n a t h ym i cm i c e .MDA-231 c el l sw e r e i m p la n t edi na t h ym i cm i c ea sd e s c r i b e di n F ig .1 a n d i n j e c t e dt w i c eweek l yi n t r a p e r i t o n e -a l l yf o r5 wk w i t h PBS ( . ) o rw i t h d i f f e r e n tdo s e s o f a - I R - 3( l e f t )o ra x - I R - l 1( r i g h t ) ;5 0 0M~g( o ) ,2 00 , u g( t x ) ,2 0 y g( i n ) ,a n d 2 y g( o ) .E a c hd a t a p o i n tr e p r e s e n t st h eean-SE f s i xm i c e .

Tumor s e c t i o n ss t a i n e dw i t h h ema t o x y l i na n d e o s i nr e -v e a l e d m a r k e df i b r o s i s ,t u m o rc el l l os s ,a n d t h ea p p e a r a n c eo fn u m e r o u s s p i n d l e - s h a p e d c e l l s i n t h e a - I R - 3 - t r e a t e dMDA-231 tumors b u t n ot i n t h e c o n t r o l st r e a t e dw i t h c - I R - l( F i g .3 ) .M o s t of t h es p i n d l e - s h a p e dc e l l swe r e c y t o l o g i c a l l ym a l i g n a n ta n d s t a i n e df o re p i t h e l i a lma r k e r s( k e r a t i n ,c y t o k e r -a t a , e p i t h e l i a lm e m b r a n ea n t i g e n ,a n d c a r c i n o em b r i o n i can -t i g e n ) ;s o m ew e r e c y t o l o g i c a l l yb e n i g n , l a cked e p i t h e l i a lmark e r s , a n dwe r ec o n s i s t e n tw i t hm o u s ef i b r o b l a s t s .A m o n o -n u c l e a rc e l li n f i l t r a t ew a sn o t o b s e r v e di na n y o f t h es e c t i o n s .At r i - e l a s t i ns t a i nr e v e a l e dma r k e dd e p o s i t i o no f c o l l a g e ni n t h eA - I R - 3 - t r e a t e dMDA-231 t u m o r s ( n o ts h o w n ) .T h e s e h i s t o -

l o g i cc h a n g e swe r e

n o t p r e s e n ti nt h e

MCF-7 t um o r s f r o m

Ta b l eI I I .I n h i b i t i o no fBr e a s t T u m o rFo rm a t i o na n dG r ow t hi nN u d eM i c eTr e a t e dw i t ha - I R - 3a n d a - I R - I

Ty p e I SRb l o c k i n ga c t i v i t y

C e l ll i n e Tr e a tm e n t D o s e Tumor f o r m a t i o n * Tumor s i z e Tumor w e i g h t i n s e r u m

Ag mm3 mg %

MCF-7 P B S - 6 / 6 3 8 1 7 0 ND 0a - I R - 3 5 0 0 6 / 6 4 3 4 1 4 9 ND 6 6 0 . 8

MDA-231 P B S - 6 / 6 2 7 3 2 8 1 7 7 2 6 0a - I R - 3 2 6 / 6 1 1 3 4 0 7 7 1 8 2 3 3

2 0 6 / 6 1 2 7 2 3 7 5 1 1 5 4 0 . 7

2 0 0 5 / 6 9 8 2 0 8 9 1 1 5 7 0 . 65 0 0 3 / 6 3 7 1 4 4 1 1 0 5 9 1

a - I R -1 2 6 / 6 2 3 4 3 7 1 7 9 2 6 02 0 6 / 6 2 3 4 4 9 1 5 5 3 1 02 0 0 6 / 6 2 8 0 4 0 1 9 8 4 8 3 1

A t h ym i cm i c ew e r e i n o c u l a t e dw i t hMCF-7 or MDA-231 c e l l s .T r e a t m e n tw i t h PBS or a n t i b o d yw a ss t a r t e ds i m u l t a n e o u s l ya n d c o n t i n u e dt w i c eweek lyt h e r e a f t e rf o r4 ( M C F - 7 )o r 5 ( M D A - 2 31 )w k , a tw h i c ht i me t u m o rf o r m a t i o n ,v o l um e ,w e i g h t ,a n d h i s t o l o g yw e r ee v a l u a t e d .Tod e t e rm i n es e r u mt y p e I SR b l o c k i n ga c t i v i t y ,c o n f l u e n tmon o l a y e r sof MCF-7 or MDA-231c e l l sw e r e p re i n c ub a t edw i t h a 1 : 1 0d i l u t i o no fmouse s e r um ,wa s h e d ,a n d t h e n i n c u b a t e dw i t h ' 2 5 I - I G F - Ia sd e s c r i b e di nMe t h o d s .T h e n u m b e rof c o u n t s p e r m i n u t eb o u n dw a s c o m p a r e dt ot h a tb o u n dt o c e l l sn o t p r e i n c u b a t e dw i th s e r u ma n d e x p r e s s e da spe r c en t i n h i b i t i o no f b i n d i n g .E a c h i n d i v i d u a lm o u s es e r u ms am p l ew a st e s t e di n t r i p l i c a t ew e l l s .A l lda t a a r e p r e s e n t e da s t h e meanSE o f s i xa n ima l spe r e a ch d o s e .ND , n o t d o n e . * Number o f a n i m a lsi nw h i c ht u m o r sf o rm e dpe r t o t a ln u m b e ro f a n i m al si n o c u l a t e dw i t h t u m o rc e l l s .

1420 A r t e a g a e t a l .


4/6

t 7 5

.J'J;sO44 t t

F i g u r e3 .H i s t o l o g yo f a - I R -l - a n d a - I R - 3 - t r e a t e dM D A - 2 3 1t u m o r s .Nude m i c ewe r e i m p l a n t e dw i t hM D A - 2 3 lc e l l sa n d i n j e c t e di n t r a p e r i tn e a l l yt w i c eweek lyf o r5 wk w i t h2 0 0 , go f a - I R - 1 ( A a n d C ) o r 5 0 0 j go f a - I R - 3 a n ti b o dy ( Ba n dD ) .O n d a y 3 5 ,t u m o r sw e r e r e mo v e d,f o r m ad e h y d e - f i x e d ,s e c t i o n e d ,a n d s t a i n e dw i t h h ema t o x y l i na n d e o s i n .Up p e rpan e l s w e r ep h o t o g r a p h e da t X 1 2 5a n d l ow e r pan e l s a t X 1 , 0 0 0 .

m i c e t r e a t e dw i t h e i t h e ra - I R - 3 o r a - I R -1 .A comp l e t e n e c -r o p s y i n t h ec o n t r o la n d a - I R - 3 t r e a t e dm i ce w a so t h e r w i s en o rma l .

I G F - I l e v e l sa n d t y p eI SR b l o c k i n ga c t i v i t y i nm o u s es e r u m . D i f f e r e n c e si n t h e i n h i b i t o r ye f f e c t so f a - I R - 3 o nMCF-7 a n dMDA-231 t u m o r swe r e n o t d u e t o d i f f e r e n c e s i ne i t h e rt ype I SR b l o c k i n ga c t i v i t yor i n I G F - Il e v e l si nm o u s es e r um .A s s h o w ni nTa b l e I I I ,t ype I SR b l o c k i n ga c t i v i t yw a sn o t de t e c t e d i n s e r u m f rom m i cew i t h e i t h e rMCF-7 o rMDA-231 t u m o r st r e a t e dw i t hPBS or a - I R -1 .I n c o n t r a s t ,t h em i c et r e a t e dw i t h a - I R - 3e x h i b i t e ds i g n i f i c a n td o s e - d e p e n d e n tr e c e p t o rb l o c k i n ga c t i v i t yi n t h e i rs e r um .S i m i l a rl e v e l so f r e -cep to r b l o c k i n ga c t i v i t yw e r e a c h i e v e d i n m i c ew i t h e i t h e rMCF-7 o r MDA-231 t u m o r s t r e a t e dw i t h 5 0 0 j i go f a - I R - 3 .S t i l l ,g r ow t hof t h eMCF-7 t u m o r sw a sn o t a f f e c t e d .

I mm u n o r e a c t i v eI G F - I l e v e l sw e r e a l s os i m i l a ri n b o t hg r o u p so f m i c e .I G F - Il e v e l s ,b y R I A ,w e r e6 5 a n d 6 8 n g / m li npoo l ed s e r af r om e s t r o g e n - s u p p l emen t e dMCF-7 t umo r - b e a r -i n gm i c ea n d f r omm i c ew i t hMDA-231 t umo r s , r e s p e c t i v e l y(Me r ime e ,T .J . ,p e r s o n a lc omm u n i c a t i o n ) .

D i s c u s s i o n

I nt h i ss t u d yw eh a v er epo r t ed t h ee f f e c to f b l o c k a d eof t h et ypeI SR o n i n v i t r oa n d i n v i v og r ow t ho f human b r e a s tc a n c e r

c e l l s .T h i s r e c e p t o rmay med i a t e a t l ea s tp a r t i a l l yt h emi t o -g e n i ce f f e c to f i n s u l i n ,I G F - I ,a n d I G F - I Io n t h e s ec e l l s .I n t h ep r e s e n c e o f s e r um , a n c ho ra g e- i n d ep en d e n t g r o w t ho f b o t hMCF-7 a n d MDA-231 c e l ll i n e sw a s i n h i b i t e db y a - I R - 3 . As i m i l a ri n h i b i t o r ye f f e c tb y t h i sa n t i b o d yo n mon o l a y e rg r o w t ho f MCF-7 c e l l si n medium c o n t a i n i n gc a l fs e r u m h a s b e e nr e p o r t e d( 2 1 ) .U n d e rs e r u m - f r e ec o n d i t i o n s ,a n t i b o d y - i n d u c er e c e p t o rb l o ckadee i t h e rh a d n o n e t e f f e c to r i n s o m ee x p e rm e n t ss l i g h t l ys t i m u l a t e dg r o w t h ,t h e r e b ym a k i n gi td i f f i c u l tt oe v a l u a t e t h ep o s s i b l ea u t o c r i n er o l eo f s e c r e t e dI G F - l i k ea c t i v it i e so n b r e a s tc a n c e r c e l lp r o l i f e r a t i o nb ym e a n so f t h i smod e l .T h e m e c h a n i s m sme d i a t i n gt h i sm i l d s t i m u l a t o r ye f f e c t ,a l s oo b s e r v e di n C h i n e s eh am s t e ro v a r y c e l l st r a n s f e c t e dw i t h t h eI G F - Ir e c e p t o r( 2 2 ) ,a r ec u r r e n t l yu n c l e a r .H ow e v e r ,u t i l i z i nap a n e lo f f i v ea d d i t i o n a lhuman b r e a s tc a n c e rc e l ll i n e s ,we h a v en o t o b s e r v e dg r ow t hs t i m u l a t i o n( o ri n h i b i t i o n )w i t h a l p h aI R - 3 u n d e rs e r u m - f r e ec o n d i t i o n s( A r t e a g a ,C .L . ,a n d C .K .O s b o r n e, m an u s c r i p ts u b m i t t e df o rp u b l i c a t i o n ) .

I n t h en u de m ou s emode l , a n t i b o d y - i n d u c e db l o c k a d eo ft h et ype I SR i n h i b i t e dg r ow t ho f t h ee s t r o g e n - i n d e pMDA-231 c e l l si n a d o s e - d e p e n d e n tf a s h i o n .I t s e e m su n l i k et h a tt h ei n h i b i t o r ye f f e c to f a - I R - 3w a sme d i a t e db y mo d u l a -t i o no f t h e h o s timmune m e c h a n i s m si n t h e s ea t h ym i cm i c es i n c eg r ow t hi n h i b i t i o nw a sn o t o b s e r v e dw h e na c o n t r o la n t ib o d yw a sa d m i n i s t e r e d ,a n ds i n c ea mo n o n u c l e a rc e l li n f i l t r aw a sn o t o b s e r v e di n a n y o f t h et u m o rh i s t o l o g i cs e c t i o n s .

I n s u l i n - l i k eG r ow t hFac t o r Ty p eI Recep t o rBlockadei nC a n c e rG r ow t hI n h i b i t i o n1 4 2 1

.44

i


5/6

De s p i t es i m i l a rl e v e l so f type I SR b l o c k i n ga c t i v i t ya n d o fi mm u n o r e a c t i v eI G F - I l e v e l si n s e r u mf r o m m i c ei n o cu l a t e dw i t hMCF-7c e l l s ,g r o w t ho f t h eMCF-7 t u m o r sw a su n a f f e c t e db y t r e a tm e n t w i t h t h e a n t i - r e c e p t o r a n t i b o d y .T h e r e a r e s e v -e r a lp o s s i b l ee x p l a n a t i o n sf o r t h e l o s so f s e n s i t i v i t yo f t h eMCF-7 c e l l st o a - I R - 3w h e ng r o w ni n v i v o .F i r s t ,i t i sp o s s i b l et h a te s t r o g e ni s t h ema j o rg r o w t hf a c t o rf o rt h eE R - p o s i t i v eMCF-7 c e l l sa n d t h a ti t se f f e c t so v e r r i d et h o s emed i a t e db y t h eI G F s . I t i s a l s op o s s i b l et h a to t h e re s t r o g e n - i n d u c e dg r ow t hp r om o t i n ga c t i v i t i e s( i . e . ,e p i d e r m a l g r o w t hf a c t o r[ E G F ] - l i k ep e p t i d e s )( 2 3 ,2 4 )m a d eb y t h eM C F - 7c e l l sc om p e n s a t ef o rt h et ype I S Rb l o c k a d e .E x p e r i m e n t su s i n gc omb i n a t i o n so fa n t i -b o d i e sa g a i n s td i f f e r e n tg r ow t hf a c t o r so r t h e i rr e c e p t o r smaya d d r e s st h a tp o s s i b i l i t y.S e c o n d l y ,i t i s c o n c e i v a b l et h a tt h eMCF-7c e l l sl o s et h et y p eI SR i nv i v o .How e v e r ,r e c e n tr e p o r t si n d i c a t ea s t i m u l a t o r ye f f e c to fe x o g e n o u sI GF - I o nMCF-7t u m or g row thi n n u de m i ce( 2 3 ) ,s u g g e s t i n gt ha t t h e s ec e l l sma i n t a i nt h e i rt ype I s om a t om e d i nr e c e p t o r si nv i v o .F u r t h e r -more , b r e a s tc a n c e r c e l l sf r om p a t i e n tb i o p s i e sa l s oe x p r e s st ype I s oma t ome d i nr e c e p t o r s( 1 6 ) .T h i r d l y ,i t i sp o s s i b l et h a te s t r o g e ns u p p l e m e n t a t i o ni n d u c e da ma r k e di n c r e a s ei n I G F - Is e c r e t i o nb yo t h e rmouse o r g a n s ,a n d t h a tt h i ss e c r e t i o nw a sa b l et o c oun t e r a c t t h ei n h i b i t o r ye f f e c to fa - I R - 3 .Howe v e r ,wef o u n dn o d i f f e r e n c ei n s e r u m r e c e p t o rb l o c k i n ga c t i v i t yor i ns e r u m I G F - I l e v e l sb e t w e e nm i c e r e c e i v i n ge s t r o g e ns u p p l e -me n t a t i o na n d t h o s et h a tw e r e e s t r o g e n - d e p r i v e d .Moreove r,t h eM D A - 2 3 1c e l l ss e c r e t ec o n s t i t u t i v e l yh i g h e rl e v e l so fa nI G F - I - l i k ep r o t e i n( 3 )a n d a r es t i l li n h i b i t e db yt h et ype I SRa n t i b o d y .F i n a l l y ,e s t r o g e ns u p p l e m e n t a t i o nd i dn o t p r e v e n tt h eg r ow t hi n h i b i t i o nof MDA-231 t u m o r s i nv i v o .

I n s u mm a r y ,t h e s es t u d i e ss h o wt h a ta n t a g o n i s mo f t h et ype I S Rw i t ha n a n t i b o d yi n h i b i t sg r o w t ho fhuman b r e a s tc a n c e r c e l l si nv i t r o .I na d d i t i o n ,i n a n a t h y m i cmouse m o d e l ,r e c e p t o rb l o ckadei n h i b i t si nv i v og r ow t ho ft h ee s t r o g e n - i n d e -

p e n d e n tM D A - 2 3 1

b r e a s tc a n c e r

c e l l s ,s u g g e s t i n gt h a tI G F s

may b e i m p o r t a n ti nv i v og r ow t hr e g u l a t o r sf o rs o m ehumanb r e a s tc a n c e r s .T h ep o t e n t i a lt o x i c i t yo fi nv i v ob lo ckadeo ft h et y p eI SR w i l lr e q u i r ea d d i t i o n a ls t u d i e s .T h i s t o x i c i t yc o u l dn o t b e a s s e s s e di nt h i smod e ls i n c et h ea n t i b o d ydoes n o t c r o s sr e a c tw i t hm o u s er e c e p t o r s .T h i si st h ef i r s tr e p o r td emon s t r a t -i n gt h a ti n t e r r u p t i o no fa p o l y p e p t i d eg r o w t hf a c t o rp a t hw a yi nv i v oc an a l t e rg r ow t ho f b r e a s tc a n c e r .O t h e r r e p o r t sh a v es h o w nt h a ti nv i v ob lo ckadeo ft h eEGF r e c e p t o r( 2 5 )o r a n t i -b o d yn e u t r a l i z a t i o no fb o m b e s i n( 2 6 ) ,a p o s s i b l ea u t o c r i n eg r ow t hf a c t o r ,c a n i n h i b i tg r o w t ho fo t h e rt u m o r s .T h e s ed a t as u g g e s tt h a ta n t a g o n i s mo fp o l y p e p t i d eg r o w t hf a c t o r smayo f f e ra new s t r a t e g yf o r" e n d o c r i n e "t h e r a p yo fb r e a s tc a n c e r .

Acknowledamen t sWe t h a n kD r .T h o m a sJ .Mer imee ,U n i v e r s i t yo f F l o r i d a, G a i n es v i l l e,f o rt h eR I Ao fI G F - Ii nmouse s e r u m .T h es e c r e t a r i a la s s i s t a n c eo fMr s .P am e l aR e n d e ri sg r e a t l ya p p r e c i a t e d .

T h i s s t u d yw a s s u p p o r t e db y N a t i o n a lI n s t i t u t e so fHe a l t h g r a n t sRO I C A - 3 0 2 5 1( C . K . O . )a n d P 01 3 0 1 9 5 ( C . K . O . )a n d a Ve t e r a n sAdm i n i s t r a t i o nA s s o c i a t eI n v e s t i g a t o rCa r e e r D e v e l o pm e n tAw a r d( D r .A r t e a g a ) .

R e f e r e n c e s

1 .O s b o r n e ,C .K . ,G . B o l a n ,M . E .Mon a c o ,a n dM . E .L i p pma n .1 9 7 6 .Hormone r e s p o n s i v ehuman b r e a s tc a n c e r i n l o n g - t e r mt i s s u ec u l t u r e :e f f e c to fi n s u l i n .P r o c .N a t l .A c a d .S c i .U SA .7 3 : 4 5 3 6 - 4 5 4 0 .

2 .G r o s s ,G .E . ,D .H . Bo l d t ,a n dC .K . O s b o r n e .1 9 8 4 .P e r t u r b a t i o nb y i n s u l i no f human b r e a s tc a n c e r c e l lc y c l ek i n e t i c s .C a n c e rR e s .4 4 : 3 5 7 0 - 3 5 7 5 .

3 . F u r l a n e t t o ,R. W . ,a n d J . N . D i C a r l o .1 9 8 4 .S om a t o m e d i n - Cr e c e p t o r sa n dg r o w t he f f e c t si n human b r e a s tc a n c e r c e l l sma i n t a i n e di n l o n gt e r m t i s s u ec u l t u r e .C a n c e rR e s .4 4 : 2 1 2 2 - 2 1 2 8 .

4 . M y a l ,Y . ,R. P . C . S h i u ,B . B h a u m i c k ,a n d M . B a l a .1 9 8 4 .R e c e p t o rb i n d i n ga n dg r o w t h - p r o m o t i n ga c t i v i t yo fi n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o r si n human b r e a s tc a n c e r c e l l s( T 4 7 D )i n c u l t u r e .C a n c e rR e s .4 4 : 5 4 8 6 - 5 4 9 0 .

5 .Hu f f ,K .K . ,D . Kau fman ,K. H . G a b b a y ,E .M . S p e n c e r ,M .E .L i p p m a n ,a n dR .B .D i c k s o n .1 9 8 6 .S e c r e t i o no fa n i n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o r - I - r e l a t e dp r o t e i nb yh u m a nb r e a s tc a n c e r c e l l s .C a n c e rR e s .4 6 : 4 6 1 3 - 4 6 1 9 .

6 .C o r o n a d o ,E . ,K. Ramasha rma ,C .H . L i ,L .Ki t t e n ,M .M a r s h a l l ,S .F u q u a ,a n dK. O s b o r n e .1 9 8 8 . I n s ul i n - l i k eg r o w t hf a c t o rI I( I G F - I I ) :a p o t e n t i a la u t o c r i n eg r o w t hf a c t o rf o rhuman b r e a s tc a n c e r . P r o c .Am.A s s o c .C a n c e rR e s .2 9 : 2 3 7 .( A b s t r . )

7 .M i n u t o ,F . ,P .D e lMo n t e ,A . B a r r e c a ,A . N i c o l i n ,a n dG . G i o r -d a n o .1 9 8 7 .P a r t i a lc h a r a c t e r i z a t i o nof s om a t om e d i nC - l i k ei m m u n o -r e a c t i v i t ys e c r e t e db yb r e a s tc a n c e rc e l l si nv i t r o .Mol .Ce l l .E n d o c r i n o l5 4 :1 7 9 - 1 8 4 .

8 .D i c k s o n ,R. B . ,a n d M .E .L i p p m a n .1 9 8 7 .E s t r o g e n i cr e g u l a t i o no fg r o w t ha n d p o l y p e p t i d eg r o w t hf a c t o r s e c re t i oni n h u m a nb r e a s tc a r c i n o m a .E n d o c r .R e v .8 : 2 9 - 4 3 .

9 .Hu f f ,K. K . ,C .K n a b b e ,R .L i n d s e y,D . K a u f m a n ,D . B r o n z e r t ,M . E .L i p p m a n ,a n d R .B .D i c k s o n .1 9 8 8 .Mu l t i h o rmo n a lr e g u l a t i o no fi n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o r - I - r e l a t e dp r o t e i ni nMCF-7 human b r e a s tc a n c e r c e l l s .Mo l .E n d o c r i n o l .2 : 2 0 0 - 2 0 8 .

1 0 .Y u ,K . - T. ,a n d M . P . C z e c h .1 9 8 4 .T h e t y p eI i n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o rr e c e p t o rm e d i a t e st h er a p i de f f e c to fmu l t i p l i c a t i o ns t i m -u l a t i n ga c t i v i t yon m e m b r a n et r a n s p o r ts y s t e m si nr a ts o l e u sm u s c l e .J .B i o l .C h em .2 5 9 : 3 0 9 0 - 3 0 9 5 .

1 1 .V a nWyk ,J .J . ,D .C .G r a v e s ,S .J .C a s e l l a ,a n dS .J a c o b s .1 9 8 5 .E v i d e n c ef r om mon o c l o n a la n t i b o d ys t u d i e st h a ti n s u l i ns t i m u l a t e sd e o x y r i b o n u c l e i ca c i ds y n t h e s i st h r o u g ht h et y p eI s om a t om e d i nre -c e p t o r .J . C l i n .E n d o c r i n o l .M e t a b .6 1 : 6 3 9 - 6 4 3 .

1 2 .F l i e r ,J . S . ,P . U s h e r ,a n d A. C .Mo s e s . 1 9 8 6 .Mo n o c l o n a l

a n t i b o d yt o t h et y p eI i n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o r( I G F - I )r e c e p t o rb l o c k sI G F - Ir e c e p t o r - m e d i a t e dDNA s y n t h e s i s :c l a r i f i c a t i o no ft h em i t o g e n i cme c h a n i s m so f I G F - Ia n d i n s u l i ni n h u m a ns k i nf i b r o b l a s t s .P r o c .Na t l .A c a d .S c i .USA .8 3 : 6 6 4 - 6 6 8 .

1 3 .C a t a n e s e ,V .M . ,F .G r i g o r e s c u ,G . L .K i n g ,a n d R .C .K a h n .1 9 8 6 .T h e human e r y t h r o c y t ei n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o rI r e c e p t o r :c h a r a c t e r i z a t i o na n d d emon s t r a t i o no f l i g a n d - s t imu l a t e da u t o p h o s -p h o r y l a t i o n .J . C l i n .E n d o c r i n o l .Me t a b .6 2 : 6 9 2 - 6 9 9 .

1 4 .F u r l a n e t t o ,R. W . ,J . N . D iC a r l o ,a n d C .Wi s e h a r t .1 9 8 7 .T h et y p eI I i n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o rr e c e p t o rdoe s n o t med i a t ed e o x y r i b on u c l e i ca c i ds y n t h e s i si n human f i b r o b l a s t s .J . C l i n .E n d o c r i n o lMe t a b .6 4 : 1 1 4 2 - 1 1 4 9 .

1 5 .E w t o n ,D . Z . ,S .L .F a l e n ,a n d J . R . F l o r i n i .1 9 8 7 .T h e t y p eI Ii n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o r( I G F )r e c e p t o rha s l ow a f f i n i t yf o rI G F - Ia n a l o g s :p l e i o t y p i ca c t i o n so fI G F so n my o b l a s t sa r e a p p a r e n t l yme -d i a t e db yt h et y p eI r e c e p t o r .En d o c r i n o l o g y.1 2 0 : 1 1 5 - 1 2 3 .1 6 .P e k o n e n ,F . ,S .P a r t a n e n ,T . M a k i n e n ,a n d E . - M .R u t a n e n .1 9 8 8 .R e c e p t o r sf o re p i d e r m a lg r o w t hf a c t o ra n d i n s u l i n - l i k eg r o w t hf a c t o rI a n d t h e i rr e l a t i o nt o s t e r o i dr e c e p t o r si n human b r e a s tc a n c e r .C a n c e rR e s .4 8 : 1 3 4 3 - 1 3 4 7 .

1 7 .A r t e a g a ,C . L . ,A. K . Ta n d o n ,D . D . Von Ho f f ,a n d C .K .O s b o r n e .1 9 8 8 .T r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r, B :p o t e n t i a la u t o c r i n eg r o w t hi n h i b i t o ro fe s t r o g e nr e c e p t o r - n e g a t i v ehuman b r e a s tcance rc e l l s .C a n c e rR e s .4 8 : 3 8 9 8 - 3 9 0 4 .

1 8 .Ku l l ,F .C . ,S .J a c o b s ,Y. - F .S u ,M . E .S v o b o d a ,J . J .Van Wyk ,a n d P .C u a t r e c a s a s .1 9 8 3 .Mo n o c l o n a la n t i b o d i e st o r e c e p t o rf o ri n s u -l i na n d s om a t om e d i n - C .J . B i o l .C h em .2 5 8 : 6 5 6 1 - 6 5 6 6 .

1 9 .J a c o b s ,S . ,S .C o o k ,M. E .S v o b o d a ,a n d J . J .Van Wyk .1 9 8 6 .I n t e r a c t i o nof t h emo n o c l o n a la n t i b o d i e sa l p h a - I R - Ia n d a l p h a - I R -

1 4 2 2 Ar t e agae t a L


6/6

w i t h i n s u l i na n d s o m a t o m e d i n - Cr e c e p t o r s .E n d o c r i n o l o g y .1 1 8 : 2 2 3 -2 2 6 .

2 0 .Me r im e e ,T .J . ,J .Z a p f ,B .H e w e l e t t ,a n d L .L .C a v a l l i - S f o r z a .1 9 8 7 .I n s u l i n - l i k eg r ow t hf a c t o r si n p y gm i e s :t h er o l eo f p u b e r t y i nd e t e rm i n i n gf i n a ls t a t u r e .N . E n g l .J .Me d .3 1 6 : 9 0 6 - 9 1 1 .

2 1 .R o h l i k ,Q . T . ,D . A. A d a m s ,F .C .K u l l ,a n dS .J a c o b s .1 9 8 7 .Ana n t i b o d yt o t h er e c e p t o rf o ri n s u l i n - l i k eg r ow t hf a c t o r - I i n h i b i tst h eg ro w th o fMCF-7 c e l l si n t i s s u ec u l t u r e .B i o c h em .B i o p hy s . R e s .C o m -m u n . 1 4 9 : 2 7 6 - 2 8 1 .

2 2 .S t e e l e - P er k i n s , G . ,J .Tu r n e r , J .C .E d m a n ,J .H o r i ,S .B .P i e r c e ,C .S t o v e r ,W. J .R u t t e r ,a n dR. A . Ro th . 1 9 8 8 .E x p r e s s i o na n dc h a r a c -t e r i z a t i o no f a f u n c t i o n a lhuman i n s u l i n - l i k eg r ow t hf a c t o rI r e c e p t o r .J .B i o l .C h em .2 6 3 : 1 1 4 8 6 - 1 1 4 9 2 .

2 3 .D i c k s o n ,R. B . ,M .E .M cM a n a w a y ,a n dM . E .L i p pm a n .1 9 8 6 .

E s t r o g e n - i n d u c e df a c t o r so f b r e a s tc a n c e r c e l l sp ar t i al l y r e p l a c ee s t r o -g e n t o p r omo t et u m o rg r o w t h .S c i e n c e(Wa s h .D C ) .2 3 2 : 1 5 4 0 - 1 5 4 3 .

2 4 .B a t e s ,S .E . ,N . E .Da v i d s o n ,E .M .Va l v e r i u s ,C .E . F r e t e r ,R. B .D i c k s o n ,J .P .Ta m ,J .E .K u d l o w,M .E .L i p pm a n ,a n dD . S .S a l o m o n .1 9 8 8 .E x p r e s s i o no f t r a n s f o rm i n gg r ow t hf a c t o ra l pha a n d i t sm e s s e n -g e rr i b o n u c l e i ca c i di nhuman b r e a s tc a n c e r :i t sr e g u l a t i o nb ye s t r o g ea n d i t sp o s s i b l ef u n c t i o n a ls i g n i f i c a n c e .Mo l .E n d o c r i n o l .2 : 5 4 3 - 5 5 5 .

2 5 .Ma s u i ,H . ,T .K a w a m o t o ,J . D . S a t o ,B .Wo l f ,G . S a t o ,a n d J .Men d e l s o h n .1 9 8 4 .G r o w t hi n h i b i t i o no f human t u m o rc e l l si n a t h y -m i cm i c e b y a n t i - e p i d e r m a lg r ow t hf a c t o rr e c e p t o rmon o c l o n a la n t i -b o d i e s .C a n c e rR e s .4 4 : 1 0 0 2 - 1 0 0 7 .

2 6 .C u t t i t t a ,F . ,D . N .Ca r n e y,J .M u l s h i n e ,T .W. Moo d y,J . F e -d o r k o ,A. F i s c h l e r ,a n dJ .D . M i n n a .1 9 8 5 .Bomb e s i n - l i k ep e p t i d e sc a nf u n c t i o na sa u t o c r i n eg r ow t hf a c t o r si nhuman s m a l l - c e l ll u n gc a n c e r.Na t u r e( L o n d . ) .3 1 6 : 8 2 3 - 8 2 6 .

I n s u l i n - l i k eG r ow t hF a c t o r Ty p eI Recep to rBlockadei nC a n c e rG r ow t hI n h i b i t i o n1423

igf-i blockade arteaga 1989

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