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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA

AGROINDUSTRIAL

Alumnos:

Alvarado Yupanqui, Luis Miguel

Tacanga Carhuallay, David

García Rosas, Arturo

Docente:

Ing. Guillermo Linares Lujan

Curso:

Biotecnología de los P.A.I.

Ciclo: IX “A”

TRUJILLO – PERÚ

2015

[ DETERMINACIÓN DE BIOMASA ] 16 de abril de 2015

ING. AGROINDUSTRIAL Página 2

DETERMINACIÓN DE BIOMASA

Método de Recuento En Cámara De Neubauer, Peso Seco Turbidimetría

I. INTRODUCCIÓN

En la agroindustria y en sus aplicaciones es importante conocer el número de

microorganismos presentes en una muestra. Este conocimiento puede ser utilizado

en estudio de curvas de crecimiento, análisis de alimentos, preparaciones de

inóculos para fermentación, etc.

Un parámetro clave en el modelado y monitoreo del funcionamiento de plantas de

agroindustriales dedicadas a procesos de fermentación, panificación entre otros en

donde se utilicen inóculo es la concentración de biomasa. Biomasa es un término

general que se refiere a los microorganismos presentes en un sistema. Existen

muchas maneras de medir la concentración de biomasa, como por ejemplo masa,

volumen, extensión linear de filamentos, dispersión de luz, conteo de células u

organelos. Existen diferentes métodos para cuantificar el número de

microorganismos o peso (biomasa) de células microbianas en un cultivo; los

métodos pueden ser directos e indirectos.

Entre los directos se puede mencionar a la determinación de peso seco y el recuento

de células en cámara de Neubauer.

La determinación de peso seco es un método de cuantificación muy utilizado en

cultivos de gran densidad, sobre todo para hongos y levaduras. Como los cultivos

se someten a varios procesos (filtración, lavado, secado) se pueden causar pérdidas

importantes de biomasa y errores en la cuantificación. El método de cuenta directa

en cámara tiene la ventaja de ser muy rápido y económico, aunque no se pueden

distinguir las células viables y no viables. Se puede calcular el número de

microorganismos en una muestra a partir del volumen de la cámara y de las

diluciones de la muestra que sean necesarias. Sin embargo, tiene el inconveniente

de que la observación y cuantificación se dificultan en células muy pequeñas (1 – 5

μm) o en poblaciones de baja densidad debido al pequeño volumen de muestra que

se utiliza (0.1 – 0.2 mm3) (Aquiahuati, 2004).



Entre los indirectos podemos mencionar a Turbidimetría y Nefelometría las cuales

nos permiten obtener aproximadamente la cantidad de biomasa de una muestra.

II. OBJETIVOS

Determinar la concentración de células por conteo en cámara de Neubauer.

Expresándolas en unidades de células/mL.

Determinar la biomasa presente en una solución de levadura mediante diferentes

métodos de determinación de biomasa.

Aprender y conocer los métodos más empleados en la determinación de biomasa.

Comparar estadísticamente los valores de concentración obtenidos; de manera

general y manera aleatoria, mediante los métodos de variabilidad y desviación

estándar.

III. MARCO TEÓRICO

A) Métodos directos de determinación de biomasa: Se basan en el número de

células o en el peso celular, dentro de estos métodos podemos distinguir a los

siguientes:

1. Métodos gravimétricos

1.1 Peso húmedo

Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego de la

separación de las células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil para

grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente queda

atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad

de líquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de células

bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio intercelular que aporta

entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación celular.

Para corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda retenida

en el espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se utilizan



soluciones de polímeros no iónicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el

espacio intercelular pero no pueden atravesar las paredes bacterianas.

1.2 Peso seco

La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse en términos

de peso seco por unidad de volumen, ya sea como sólidos en suspensión totales

(SST) o sólidos en suspensión volátiles (SSV). Las células se separan del líquido

bien por centrifugación bien por filtración. Se expresan en g.m.s/mL.

La principal desventaja de estas técnicas es que su determinación incluye no sólo

microorganismos activos sino microorganismos muertos, material inerte, polímeros

extracelulares y materia orgánica adsorbida. Además, no puede aplicarse cuando

los sustratos a degradar son insolubles. Los métodos gravimétricos son simples,

pero consumen bastante tiempo y son poco reproducibles. A la vez este método este

método los componentes volátiles de las células pueden perderse en el secado y

puede existir alguna degradación. También la muestra seca pude recobrar humedad

durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene humedad relativa alta.

2. Métodos microscópicos de recuento celular en cámaras

Existen diversos tipos de cámaras para el recuento de microorganismos tales como

la cámara de Neubauer. Thoma, Bürker, Ttirk, Fuchs-Rosenthal, Mal assez, Petroff

H ttrser, etc. El recuento de microorganismos se realiza en la cuadrícula central de

la cámara y se multiplica por la profundidad, obteniéndose el número de

microorganismos por unidad de volumen (número de células/ml, generalmente).

El recuento de microorganismos en cámaras no es un método muy exacto debido a

las irregularidades en la distribución de la muestra. Además, pueden confundirse

las células con otras formas orgánicas e inorgánicas existentes en el medio y no

permite distinguir células vivas de células muertas.



CÁMARA DE NEUBAUER

Es un instrumento utilizado en medicina y biología para realizar el recuento de

células en un medio líquido, que puede ser un cultivo celular, sangre, orina, líquido

cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc. (Ames & Cañedo, 2004).

Figura 1.Cámara de Neubauer comercial.

Esta cámara de contaje está adaptada al microscopio de campo claro o al de

contraste de fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente

deprimidas y que en el fondo de las cuales se ha marcado con la ayuda de un

diamante una cuadrícula de dimensiones conocidas. Se cubre la cámara con un

cubrecámaras que se adhiere por simple tensión superficial.

Luego se introduce el líquido a contar, al que generalmente se ha sometido a una

dilución previa con un diluyente, por capilaridad entre la cámara y el cubrecámara;

puesto que tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos simultáneamente. Para

contar las células se observa el retículo al microscopio con el aumento adecuado y

se cuentan las celulas.

Con base en la cantidad de células contadas, conociendo el volumen de líquido que

admite el campo del retículo, se calcula la concentración de células por unidad de

volumen de la muestra líquida inicial.



La fórmula de valoración del número de células (válida universalmente) es la

siguiente: Partículas por mL=(partículas contadas) / (superficie contada (mm²) x

profundidad de la cámara(mm) x dilución) (Castillo, 2004).

En el retículo central, la cámara de Neubauer posee un cuadrado primario que

contiene nueve cuadrados secundarios cada uno de ellos divididos a su vez en 16

cuadrados terciarios, el cuadrado central contiene 25 cuadrados, cada uno de ellos

dividido a su vez en 16 cuadrados cuaternarios. En los bordes de este cuadrado

central se cuentan los hematíes, utilizando sólo los cuadrados de los bordes del

terciario central y uno de los centrales.

Ventajas

equipo sencillo

rapidez para obtener los resultados

facilidad para observar la morfología de los microorganismos presentes.

Desventajas

No se diferencian los microorganismos vivos de los muertos,

Es tedioso

No es útil para recuento de poblaciones con baja concentración de bacterias.

No se usa en hifas o mohos.

EL COEFICIENTE DE VARIACIÓN

Es una medida que se emplea fundamentalmente para:

1. Comparar la variabilidad entre dos grupos de datos referidos a distintos sistemas

de unidades de medida. Por ejemplo, kilogramos y centímetros.

2. Comparar la variabilidad entre dos grupos de datos obtenidos por dos o más

personas distintas.

3. Comparar dos grupos de datos que tienen distinta media.



4. Determinar si cierta media es consistente con cierta varianza.

El Coeficiente de Variación muestral se denota y se define como:

𝑪𝑽𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂𝒍 =𝑺

�̅�∗ 𝟏𝟎𝟎 (�̅� ≠ 𝟎)

DESVIACIÓN ESTÁNDAR

La desviación estándar o desviación típica es la raíz cuadrada de la varianza. Es decir la

raíz cuadrada de la media de los cuadrados de las puntuaciones de desviación. Esta

medida se representa por .

𝑺𝟐 =𝟏

𝒏∑(𝑿𝒊 − �̅�)𝟐

𝒏

𝒊=𝟏

Así la varianza es la media de los cuadrados de las diferencias entre cada valor de

la variable y la media aritmética de la distribución.

Aunque esta fórmula es correcta, en la práctica interesa realizar inferencias poblacionales,

por lo que en el denominador en vez de n, se usa n-1 (Corrección de Bessel) Esta ocurre

cuando la media de muestra se utiliza para centrar los datos, en lugar de la media de la

población.

𝑺𝟐 =∑ (𝑿𝒊 − �̅�)𝟐𝒏

𝒊=𝟏

𝒏 − 𝟏

http://es.wikipedia.org/wiki/Variable_(matem%C3%A1ticas)

http://es.wikipedia.org/wiki/Media_aritm%C3%A9tica

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Correcci%C3%B3n_de_Bessel&action=edit&redlink=1



IV. MATERIALES Y MÉTODO

A. Materiales

4.1.1 Materiales biológicos

Levadura

Agua destilada

4.1.2 Material de laboratorio

Tubos de ensayo

Láminas cubreobjetos

Vaso de precipitación

Pipeta

4.1.3 Equipos

Microscopio

Balanza electrónica

Cámara de Neubauer

Espectrofotómetro

B. Metodología

a) Para determinación utilizando cámara de Neubauer.

PASO 1. Preparación de la muestra.

Dependiendo del tipo de muestra a medir, se ha de habrá de preparar una muestra

con una concentración apta para su recuento.



Figura 2. Preparación de la muestra.

PASO 2. Introducción de la muestra en la cámara de Neubauer

Figura 3. Introducción de la muestra en la cámara de Neubauer

PASO 3. Preparación y enfoque del microscopio.

Figura 4. Células viables para conteo.



Figura 5. Orden de conteo en zig-zag.

Figura 6.Los sectores de conteo en la cámara de Neubauer.

PASO 4. Cálculo de la concentración.

𝒄𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 (𝒄𝒆𝒍

𝒎𝑳) =

𝒏ú𝒎𝒆𝒓𝒐 𝒅𝒆 𝒄é𝒍𝒖𝒍𝒂𝒔

𝒗𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 (𝒎𝑳)

b) Para determinación de Peso Húmedo

Se tomaron muestras de 5 mL de la solución inicial y se colocaron en tres

tubos de ensayos previamente pesados.

Luego los tubos son llevados a la centrifuga donde se hacen girar a 4 000

RPM, por un tiempo de 10 minutos.

Luego pasamos a pesar cada tubo de ensayo en la balanza analítica, anotamos

los pesos y luego promediamos.



c) Para determinación de Peso Seco

Se tomaron muestras de 5 mL de la solución inicial y se colocaron en cuatro

tubos de ensayos previamente pesados.

Los tubos de ensayo son llevados a la centrifuga donde se hacen girar a 4 000

RPM, por un tiempo de 10 minutos.

Luego pasamos a pesar cada tubo de ensayo en la balanza analítica y

anotamos los pesos.

Posteriormente, se llevan los tubos a estufa, a una temperatura de 105 ºC por

un tiempo promedio de 3 horas.

Pasado el tiempo anotaremos, los pesos y luego pasamos a sacaremos un

promedio.

Las ecuaciones que se determinarán son:

𝑃𝑒𝑠𝑜 𝐻ú𝑚𝑒𝑑𝑜 (𝑔𝑚𝐻

𝑚𝐿)

= (𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑇𝑢𝑏𝑜 + 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝐻ú𝑚𝑒𝑑𝑎) − (𝑃𝑒𝑠𝑜 𝐼𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑇𝑢𝑏𝑜)

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (= 5𝑚𝐿)

𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑆𝑒𝑐𝑜 (𝑔𝑚𝑆

𝑚𝐿) =

(𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑇𝑢𝑏𝑜 + 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑆𝑒𝑐𝑎) − (𝑃𝑒𝑠𝑜 𝐼𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑇𝑢𝑏𝑜)

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (= 5𝑚𝐿)

Hallaremos el coeficiente de Variabilidad de las 4 repeticiones.



MUESTRA ORIGINAL

4 tubos de ensayo previamente

pesados e identificados, para

luego agregar a cada tubo 5 mL de

muestra original.

CENTRIFUGADO

ESCURRIDO

ESTUFA

Los tubos pasan por un proceso de

centrifugado a 4000 RPM por un tiempo

de 10 minutos.

Se somete un escurrido para separar las

células que fueron sometidas a

centrifugación. Obteniendo el peso de

muestra húmeda/ mL de muestra original.

Para la determinar el peso seco la muestra

anterior se somete a un proceso de secado,

colocando dichas muestras a la estufa a

una temperatura de 105°C x 3 horas.

Obteniendo el peso de muestra seca/ mL

de muestra original.

Figura 7. Esquema de Método Peso Húmedo y Peso Seco.



d) Turbidimetría

La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de

una suspensión y cuantifica la luz residual transmitida. Estudios teóricos y

experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de

bacterias, independientemente del tamaño celular, tienen casi la misma absorbancia

por unidad de concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones

diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco,

independientemente del tamaño celular del microorganismo. Sin embargo, se

encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC (Unidad

Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas son

diferentes. Por esta razón, para estimar el número de microorganismos totales o el

número de microorganismos viables de una suspensión bacteriana debe realizarse

una "curva de calibración" con cada tipo de microorganismo, sólo de esta forma es

posible relacionar Absorbancia (Densidad Óptica) con el número de

microorganismos totales o con UFC.

Figura 8. Absorbancia en función de la concentración celular bacteriana



K: constante que varía con la longitud de onda utilizada y representa la inversa del

peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de

la absorbancia (1/W0).

Peso seco: Concentración celular bacteriana expresada en unidades de peso seco

(µg/ml-mg/ml).

La relación directa entre la absorbancia y el peso seco sólo se aplica para

suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una

absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley

de Beer. Sin embargo, el inconveniente de utilizar suspensiones diluidas puede

involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel de

absorción.

Figura 9. Absorbancia en función del Figura 10. Absorbancia en

Peso Seco función del número de m.o.s



Para Determinación de Turbidimetría

Se preparó una solución acuosa con levadura, a partir de la cual se procedió

a preparar diluciones ( 1/100, 5/100000, 1/3, 1/10, 1/1, 3/1, M.O )

Con todas las diluciones y muestra original se procedió a colocarlas uno por

uno enceldas para leer la absorbancia en el espectrofotómetro.

Con estos datos se pasó a realizar las siguientes graficas absorbancia vs peso

seco, absorbancia vs peso húmedo y absorbancia vs conteo celular.

Figura 11. Metodología de turbidimetría

5/100000 1/3 1/1 3/1



V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

5.1 MÉTODOS CÁMARA DE NEUBAUER

Según Rodríguez et al (2005), los métodos para estimar el número de

microorganismos medirán la cantidad de células. Los métodos que cuantifican la

cantidad de células son útiles principalmente para enumerar organismos como

bacterias o levaduras, mientras los que miden la masa o actividad celular pueden

utilizarse para todos los microorganismos, incluidos los hongos filamentosos, en

los que es difícil cuantificar las células individuales. Según lo expuesto por el autor

en nuestra práctica hicimos el conteo de levaduras por mililitro, para la

determinación de su biomasa utilizando métodos directos.

Tabla 1. Número de células y análisis estadístico de la muestra analizada

utilizando la Cámara de Neubauer

METÓDO CÁMARA DE NEUBAUER

Células Promedio 252.78

Concentración de Levaduras/mL 6.3 × 107

Desviación Estándar 33.481

Coeficiente De Variación 13.245

Según Unam (1986), en la técnica de conteo de células hay que tener en cuenta que

en esta técnica uno de los factores que afecta la observación de las células de

levadura es la correcta dilución de la muestra empleada se puede decir que si

durante el conteo se observan aproximadamente 69 células la muestra se encuentra

muy concentrada, mientas que si se observan menos de 20 células, la muestra se

encuentra muy diluida. En nuestra experiencia se observó las células sin dificultad

lo que permite obtener un resultado más confiable.

La concentración de levaduras (levaduras/mL) encontradas, por el método de

conteo directo en la cámara de Neubauer fue de 6.3x107 Células de levaduras/mL.

Los datos encontrados después del conteo nos arrojan valores promedios de 252.78



levaduras, con una desviación estándar de 33.481, por consiguiente un coeficiente

de variación de 13.245%.

Podemos observar que el coeficiente de variabilidad es 13.245 %

aproximadamente; esto nos indica el grado de variabilidad o dispersión que existe

entre los datos. Según Núñez (1992) si CV es menor o igual que 20% se dice que

el promedio es representativo, o que los datos son homogéneos y si el CV es mayor

al 20%, el promedio no es representativo de los datos, o los mismos no son

homogéneos, es por ello que afirmamos que los datos son homogéneos y el método

de recuento en microscopio utilizando la cámara de Neubauer es adecuado para la

determinación de biomasa. En nuestro caso tomamos como referencia un CV

menor a 30% para aceptar los datos.

Muñoz (2007), el conteo en la cámara de Neubauer debe efectuar en los 25

cuadrantes de la cámara, hasta obtener un número de 300 células con el fin de tener

una confianza del conteo del 90% en nuestro caso por motivos de tiempo no se

puedo efectuar el conteo de todos estos, se tomó datos de 9 de ellos estos datos

pueden verificarse en la tabla de anexos; a pesar de ello se obtuvo un CV aceptable

debido a que todos estos cuadrantes presentaban similar número de células.

Es importante contar en total 10 cuadrados, cinco en cada cámara, es decir de la

cámara de arriba y la de abajo (Aquiahuati, 2004).



Tabla 2. Conteo celular de la muestra original y de cada dilución

Figura 12. Relación de absorbancia vs. Conteo de células (Cel/mL)

Según Rodríguez, et al (2005), nos señala que para que sean visibles las trazas de

turbidez es necesario más de un millón de células por ml., como para ser medida por un

espectrofotómetro. Por lo que la turbidimetría no es un método útil para medir la

contaminación de líquidos para un número relativamente pequeño de bacterias y o

levaduras.

Tubos Diluciones Concentración Conteo Celular

(Cel/mL) Absorbancia

Tubo 1 1/100 0.01 631944.4444 0.035

Tubo 2 5/100000 0.00005 3159.722222 0.049

Tubo 3 1/10 0.1 6319444.444 0.374

Tubo 4 1/3 0.333333333 21064814.81 0.798

Tubo 5 1/1 1 63194444.44 1.21

Tubo 6 3/1 3 189583333.3 1.511

Tubo 7 Muestra Original - 63194444.44 1.653

y = 8E-09x + 0.4293R² = 0.5864

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

1.8

2

0 50000000 100000000 150000000 200000000

Ab

sorb

anci

a

Conteo de células (Cel/mL)



Se comprobó en la práctica con éxito, en el experimento, ya que tanto la muestra original

analizada como la muestra tienen una cantidad considerable de células; además, todas las

muestras de concentraciones diferentes se leyeron 550 nm de longitud de onda, cercano

a 540 nm, (longitud de onda comúnmente utilizada para la determinación de crecimiento

por el método de turbidimetría en las investigaciones).



VI. CONCLUSIONES

Se determinó la biomasa presente en una solución de levadura utilizando la

cámara de Neubauer y se expresó en unidades de células/ml obteniéndose un

resultado de 6.95x107, con un promedio de 252.78 células por cada cuadro de 0,2

mm x 0,2mm y un coeficiente de variabilidad de 13.245 % aproximadamente.

Se aprendió y conoció los métodos más empleados en la determinación de

biomasa.

Se Comparó estadísticamente los valores de concentración obtenidos; de manera

general y manera aleatoria, mediante los métodos de variabilidad y desviación

estándar.

VII. RECOMENDACIONES

Para realizar un recuento en cámara de Neubauer se recomienda agitar bien

la dilución con el fin de tener una muestra más homogénea y al momento de

colocar la muestra sobre la cámara tener la precaución para no derramarla

sobre la placa cubreobjetos de tal manera que el conteo sea el adecuado.

Calibrar el espectrofotómetro antes de tomar las medidas, ya que este pudo

haber sido utilizado con otras sustancias en experimentos anteriores.

El llenado en las celdas de Neubauer se debe hacer correctamente para evitar

que se pierda parte de la muestra.

Se recomienda calibrar bien el microscópio, con la finalidad de poder

observar de manera más clara las levaduras, de esta forma facilitaremos el

conteo de las células.

Mirar en el microscópio y contabilizar bien las células, las cuales no se

tomarán las células que estén en la derecha del cuadro ni las de la parte

inferior del mismo cuadro, ya que ellas formaran parte del siguiente cuadro.



Una inadecuada distribución de la muestra sobre la superficie del

portaobjetos puede ocasionar serios errores.

VIII. BIBLIOGRAFÍA

Arnáiz,C., Isac,L. Y Lebrato, J. (2000).Determinación de la biomasa en procesos

biológicos. Sevilla.

Aquiahuati M. (2004), Manual de Prácticas: Laboratorio de Microbiología Celular,

Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa, Departamento de

Biotecnología, 1era Edición, Pág. 63-68.

Muñoz, A. (2007). Microbiología. Madrid: Editorial Paraninfo.

Nuñéz, A. (1992). Estadística Basíca para planificación. Madrid: Siglo XXI

Editores.

Rodríguez, E., Gamboa, M., Hernández, F. García, J. (2005). Bacteriología

General: Principios y prácticas de laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica.



ANEXOS

Cálculos para determinar la cantidad de unidades de levaduras/ml:

𝑵º 𝒍𝒆𝒗𝒂𝒅𝒖𝒓𝒂𝒔/𝒎𝒍 = 252.78 levaduras

0.2 x 0.2 x 0.1 mm3

𝑵º 𝒍𝒆𝒗𝒂𝒅𝒖𝒓𝒂𝒔/𝒎𝒍 = 252.78 levaduras

4 x 10−3mm3

𝑵º𝒍𝒆𝒗𝒂𝒅𝒖𝒓𝒂𝒔/𝒎𝒍 =63195 levaduras

mm3x

1000 mm3

1 ml

𝑵º𝒍𝒆𝒗𝒂𝒅𝒖𝒓𝒂𝒔

𝒎𝒍= 6.31 x 107

levaduras

ml



ANEXO 1 .Fotos de los pasos a seguir para determinar la biomasa.

Figura 1. Suspensión de levadura en

agua destilada desconocido.

Figura 2. Toma de muestra de la

suspensión de levadura.

Figura 3. Unas gotas de la muestra

tomada se colocan sobre la cámara de

Neubauer.

Figura 4. Observación en el

microscopio.



CUESTIONARIO

1. Hacer una comparación entre el método de cámara de Neubauer y el

método de peso seco.

Cámara de Neubauer Método de peso seco

- La medición es directa

- Es muy tedioso, y tiene el inconveniente de

que la observación y cuantificación se

dificultan en células muy pequeñas (1 – 5 μm)

o en poblaciones de baja densidad debido al

pequeño volumen de muestra que se utiliza

(0.1 – 0.2 mm3) (Aquiahuati, 2004).

- Tiene la ventaja de ser muy rápido y

económico, aunque no se pueden distinguir las

células viables y no viables.

- No es muy sensible, se necesitan al menos

106 bacterias/mL para que sean observadas al

microscopio.

- La medición es indirecta

- Es un método de cuantificación muy

utilizado en cultivos de gran densidad, sobre

todo para hongos y levaduras.

- El peso seco (contenido de sólidos) de las

células bacterianas que se encuentran en una

suspensión se obtiene por el secado de un

volumen en un horno a 105°C hasta peso

constante.

- Como los cultivos se someten a varios

procesos (filtración, lavado, secado) se

pueden causar pérdidas importantes de

biomasa y errores en la cuantificación.