UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERAFACULTAD DE INGENIERA AMBIENTALMICROBIOLOGIA AMBIENTAL

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

INDICE:

I. OBJETIVOS ................................................... 2

II. FUNDAMENTO TEORICO ............... 2

III. MATERIALES DE LABORATORIO ........................................... 4

IV. PROCEDIMIENTO ......................... 5

V. RESULTADOS Y OBSERVACIONES .. 5

VI. DISCUSIONES .................................................. 6

VII. CONCLUSIONES ................................ 7

VIII. RECOMENDACIONES ................... 7

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS . 8

X. ANEXO CUADRO INSTRUMENTOS DE LABORATORIO 8

XI. ANEXO - NORMAS DE SEGURIDAD ............. 14

XII. ALGUNOS SIMBOLOS DE SEGURIDAD 15

I. OBJETIVOS: Reconocimiento de los materiales de laboratorio de microbiologa. Aprender a realizar el proceso de desinfeccin y esterilizacin de los materiales. Aprender y aplicar las normas de seguridad.

II. FUNDAMENTO TEORICO:Los microorganismos pueden ser eliminados, inhibidos o muertos por agentes qumicos, fsicos o procesos fsicos. Actualmente se dispone de una gran variedad de tcnicas y agentes que actan de manera diferente y cada uno tiene su aplicacin y lmite de uso. Algunos de estos procesos son:1. Esterilizacin:

La esterilizacin consiste en la destruccin completa de todos los microorganismos, incluidas las formas resistentes como las esporas bacterianas, virus sin envoltura (no lpidos) y hongos. Ello puede conseguirse mediante esterilizacin fsica, esterilizacin gaseosa y esterilizacin qumica.

Los esterilizantes fsicos, como el calor hmedo y el calor seco son los mtodos de esterilizacin ms usados para la mayora de los materiales, con excepcin de los termosensibles o los que poseen componentes qumicos txicos o voltiles. a) Esterilizacin por Calor Hmedo (Vapor bajo Presin):

Este mtodo se emplea para esterilizar desechos biolgicos peligrosos y objetos termoestables; con este fin se utiliza un autoclave, que bsicamente es una gran olla de presin. El calor hmedo bajo la forma de vapor saturado a una atmosfera de presin ( 1,05 kg/cm2 = 15 psi [lb/pie2]), provoca la desnaturalizacin irreversible de las enzimas y las protenas estructurales, el tipo de esterilizador de vapor ms comn en el laboratorio microbiolgico es el de desplazamiento por gravedad.

b) Esterilizacin por Calor Seco:

Este mtodo requiere un periodo de exposicin ms prolongado (1,5 3 horas) que el calor hmedo y temperaturas superiores (160 180 grados centgrados), se utilizan estufas de calor seco para esterilizar elementos como material de vidrio, aceite, vaselina o polvos.

El esterilizante gaseoso utilizado ms a menudo es el xido de etileno, aunque es muy eficiente, se trata de una sustancia inflamable, explosiva y cancergena y existen unas estrictas regulaciones que restringen su utilizacin. Los vapores de perxido de hidrgeno tambin constituyen unos esterilizantes eficaces como consecuencia de la naturaleza oxidante del gas. El perxido de hidrgeno se utiliza para la esterilizacin de instrumentos.

Tambin existen esterilizantes qumicos como el cido paraactico y el glutaraldehido. El cido paraactico es un agente oxidante con actividad excelente y origina productos secundarios no txicos (p. ej., cido actico y oxgeno).Por el contrario, la utilizacin de

glutaraldehdo supone diversos problemas de seguridad, por lo que se deben tomar siempre precauciones al manipular este compuesto qumico.

2. Desinfeccin:

Los microorganismos tambin pueden ser destruidos mediante procedimientos de desinfeccin, aunque los ms resistentes pueden sobrevivir. Existe un cierto grado de confusin entre esterilizacin y desinfeccin. Ello se debe a que los procesos de desinfeccin se han dividido en varios grados (alto, intermedio y bajo). La desinfeccin de alto grado por regla general posee una eficacia semejante a la de la esterilizacin, mientras que las esporas pueden sobrevivir tras una desinfeccin de grado intermedio; asimismo, numerosos microorganismos pueden seguir siendo viables despus de una desinfeccin de bajo grado.

Los desinfectantes de alto grado se utilizan para objetos empleados en procedimientos invasivos que no pueden soportar los mtodos de esterilizacin (p. ej., ciertos tipos de endoscopios, los instrumentos quirrgicos de plstico u otros componentes que no se pueden someter a la accin del autoclave).

Los desinfectantes de grado medio (p. ej., alcoholes, compuestos yodados, compuestos fenlicos) se utilizan para la limpieza de superficies o instrumentos en los que es poco probable la contaminacin por esporas bacterianas o microorganismos con un alto grado de resistencia.

Los desinfectantes de grado bajo (p. ej., compuestos de amonio cuaternario) se utilizan para tratar instrumentos y dispositivos que no revisten una gran importancia.

III. MATERIALES DE LABORATORIO:

- Mechero Bunsen -Gradillas-Placas de Petri - Pinzas para tubo de ensayo -Pinzas para crisol-Asas de siembra

-Bagueta -Termmetro-Balanzas

-Malla de asbesto -Escobillas-Pipetas de vidrio y plstico -Probeta -Cubreobjetos-Asas de Digralsky

-Aceite de inversin -Portaobjetos-Vasos de precipitados

-Cubre objetos -Crisol-Matraces

-Fiola -Tubos de ensayo-Plancha de calentamiento

-Matraz Erlenmeyer -Vaso de precipitado-Estufa de incubacin

-Gotero - Esptula -Horno de Pasteur

-Mortero -Asa de kolle -Autoclave

-Encendedor -Mechero de alcohol-Frigorfico

-Microscopio ptico -Contador de colonias -Pera de succin

-Pizeta -Buretas

IV. PROCEDIMIENTO: El proceso que debemos seguir es el siguiente (a pesar que no lo hicimos):

Lavar los materiales de vidrio (tubo de ensayo, matraz, vaso, etc.). Escurrir y enjuagar con agua destilada. Volver a dejar escurrir el material sobre una toalla (no por otro medio) Envolver los materiales con papel craf, luego atar con un pabilo un conjunto de tubos de ensayo, el matraz , vaso y etc. y colocarlas dentro del recipiente metlico con tapa. Y colocarlos en el horno a 180C por 2 horas aproximadamente.

V. RESULTADOS Y OBSERVACIONES:Debido a que en este laboratorio solo hemos obtenido informacin oralmente, tengo 1 observacin:

Se logr comprender el uso adecuado de cada material de laboratorio para obtener buenos resultados en las siguientes prcticas.

Pude notar que al desinfectar y esterilizar los materiales nos da una mayor certeza de que al preparar un medio de cultivo, este no est contaminado.

Tener conocimiento de las normas de seguridad para evitar accidentes al momento de realizar cada practica de laboratorio y asi evitar cualquier tipo de accidente.

Tambin tener conocimiento de los diferentes smbolos de peligro en qumico en un laboratorio.

VI. DISCUSION DE RESULTADOS:

Las tcnicas de esterilizacin y desinfeccin son muy utilizados al momento de realizar trabajos de laboratorio, pero estas tcnicas tienen distintos mtodos los cuales cada uno es ms eficiente que otro, pero hay que tener en consideracin que para cada objetivo especfico, existe un mtodo de esterilizacin o desinfeccin especifico, en nuestro caso se utiliz la esterilizacin con un mtodo fsico de vapor a presin, ya que el calor mata a los microorganismos porque coagula sus protenas cuando se encuentran en una zona atmsfera hmeda, y en el caso del mtodo de desinfeccin usado fue el de alto grado debido a que se desinfectaron tambin unos instrumentos de plstico (probeta), el cual se estropeara por esterilizacin.

Se observ sobre la mesa todos los materiales de laboratorio que usaremos en todas las prcticas y se habl del uso de cada uno , pero no se hablaron de sus restricciones o peligros.

Si los materiales no se desinfectan o esterilizan bien, nuestros resultados analticos presentarn un error.

Obviamente si no tenemos en cuenta las normas de seguridad, podran ocurrir accidentes.

Si al momento de autoclavar o desinfectar, no empleamos el tiempo mnimo de esterilizacin los microorganismos podran quedar vivos.

Y si empleamos ms del tiempo mximo, el cultivo morira.

VII. CONCLUSIONES:

Aprend a reconocer los materiales y saber los nombres de los materiales de laboratorio as como su respectivo uso.

Aprend a usar los mtodos de desinfeccin y esterilizacin, en este caso fue el mtodo de desinfeccin por gas hmedo.

Gracias a este primer laboratorio, se tom en cuenta ciertas normas de seguridad con el fin de evitar cualquier accidente dentro del laboratorio.

Aprendimos a reconocer algunos smbolos de peligro qumico para tener un conocimiento mnimo de la peligrosidad de cada compuesto que utilicemos.

Llegamos a entender los equipos e instrumentos de laboratorio para desarrollar las prcticas en un laboratorio de microbiologa con responsabilidad como Ingenieros Ambientales que seremos.

VIII. RECOMENDACIONES:

Tener siempre en cuenta las normas de seguridad en el laboratorio.

Tratar de colocar las baguetas despus de desinfectar en un contenedor y no sobre la mesa ya que se contaminaran de nuevo.

Abrir las placas de Petri de manera adecuada.

Cuando se coloquen los materiales al horno, hacerlo con mucho cuidado y con sus respectivos guantes para no quemarse.

Saber los movimientos de diseminacin de la esptula.

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

Murray, Patrick R.; Rosenthal, Ken s. ; Pfaller, Michael A. MICROBIOLOGA MDICA. Sexta edicin. Elsevier, Espaa, 2009. Pginas 89-94.

Mara de los Angeles Aquiahuatl Ramos; Mara de Lurdes Prez. MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL. Editorial Universidad Autnoma Metropolitana. Pginas 13-16.

Alonso Urmeneta y otros: MANUAL DE PRACICAS DE MICROBIOLOGIA. Segunda edicin. Editorial Masson. Pginas 1 y 2.

X. ANEXO CUADRO INSTRUMENTOS DE LABORATORIO.

Grfico NombreDescripcin

Balanza Analtica Es un aparato que tiene una gran sensibilidad, algunas tienen hasta 1 diezmilsima de sensibilidad.

Autoclave Es un equipo que se utiliza para la esterilizacin de material, tanto de limpio como contaminado, que se basa en la produccin de vapor contenido a altas presiones.

Cintas de pHEs una cinta que permite medir el pH de las sustancias cualitativamente por medio de una escala de colores.

Incubadora Se Usa para mantener a una temperatura constante los cultivos microbiolgicos, y asegurar el crecimiento de los microorganismos.

Horno Se usa para secar el material de vidrio usado en el laboratorio, y guardar el material esterilizado.

FrigorficoSe usa para almacenar material limpio y conservar los microorganismos. Tambin se emplea para conservar reactivos que requieren bajas temperaturas.

Contador de Colonias Se utiliza para aumentar la vista de las colonias en la placa de Petri, con el fin de facilitar la identificacin microscpica y el conteo.

Plancha de calentamiento Es un aparato que permite calentar sustancias.

Bao Mara Es un aparato que se utiliza para des gelificar los medios de cultivo y mantenerlos a una temperatura constante.

Gradilla. Utensilio que sirve para colocar tubos de ensayo. Este utensilio facilita el manejo de los tubos de ensayo.

Pinzas para crisolPermiten sujetar crisoles

Pinzas para tubo de ensayo. Permiten sujetar tubos de ensayo

Bagueta Estn hechos de varilla de vidrio y se utilizan para agitar o mover sustancias..

Asa de siembras Se usan para inocular muestras o bacterias puras en los medios de cultivo.

Pera de succin Se usa para absorber lquidos a travs de pipetas.

Pipetas Pasteur Se usan para tomar pequeos volmenes de sustancias.

Portaobjetos Se usan para depositar en ellos las muestras a observar al microscopio.

Cubreobjetos Se usan para cubrir las muestras que estn sobre el portaobjetos.

Placas de PetriSe usan para contener los medios de cultivo donde posteriormente se realiza la siembra.

Crisol Permite realizar calentamiento de sustancias a altas temperaturas.

Esptula Permite tomar sustancias qumicas y medios de cultivo.

Mechero bunsen Son utensilios metlicos que permiten calentar sustancias.

Mortero de porcelana. Se utilizan para triturar materiales de poca dureza y los de gata para materiales que tienen mayor dureza.

Termmetro Es un utensilio que permite medir la temperatura que tienen algunas sustancias .

Malla de asbesto Son usadas cuando no se requiere calentamiento a fuego directo, el asbesto es buen aislante del calor.

Escobillas Para el lavado del material de vidrio.

Fiola Son de vidrio que permiten realizar soluciones valoradas, los hay de diversas medidas .

Pipetas. Este material existe en dos presentaciones: Pipetas aforadas. Pipetas volumtricas. Las primeras permiten medir diversos volmenes segn la capacidad de esta, las segundas no estn graduadas y slo permiten medir un volumen nico.

Probeta. Este material permite medir volmenes, las hay de vidrio y de plstico y de diferentes capacidades.

Frasco gotero. Permite contener sustancias que se necesitan agregar en pequeas cantidades.

Vasos de precipitado

Permite calentar y contener sustancias

Matraces Son recipientes de vidrio, esfricos, de fondo redondo, provistos de un cuello, sirven para calentar lquidos. Hay balones con cuello ms largo y soldado a l un tubo estrecho inclinado ligeramente hacia abajo (balones de destilacin).

Pizeta Es un recipiente que se utiliza para contener agua destilada, este utensilio facilita la limpieza de electrodos.

Tubos de ensayo Estos utensilios sirven para hacer experimentos o ensayos los hay en varias medidas y pueden ser de vidrio o de plstico.

TrpodeAparato de 3 patas que sirve para estabilizar un objeto.

Microscopio compuestoSirve para ver especialmente objetos translucidos.

Asas de DigralskySe utilizan para la extensin de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri.

XI. ANEXO - NORMAS DE SEGURIDAD:

El uso de la bata de laboratorio es indispensable para asistir a la prctica. No se debe comer, fumar, ni beber en el laboratorio.

Mantenga la mesa libre de todo lo que no sea esencial.

Limpiar y desinfectar la superficie de mesones antes y despus del trabajo del da.

Lave sus manos con agua y jabn carbnico antes y despus de cada prctica. Luego asegure de frotarse las manos con alcohol.

Llevar registro de sus anlisis indicando: Tipo de muestra, procedencia, fecha, tipo de siembra o mtodo, cultivos empleados y resultados obtenidos. No pipetear con la boca.

El material a examinar debe tocarse exclusivamente con instrumentos estriles.

Flamear el asa antes y despus de usarla.

uso adecuado y cuidadosamente de los mecheros Bunsen.

Descarte todo el material usado en recipientes destinados para tal fin por ningn motivo en los desages o lavatorios.

Tenga cuidado con las preparaciones teidas ya que puede salpicar colorantes a mesones y pisos.

Tener en consideracin la ficha de seguridad de cada insumo qumico a usar.

Al final de la prctica dejar el lugar limpio y ordenado.

XII. ALGUNOS SIMBOLOS DE PELIGRO: