N. HABCHI(1), J. TROUILLAS(2), P. CHEVALIER(2) N. HABCHI(1), J. TROUILLAS(2), P. CHEVALIER(2)

((1) : Laboratoire  d’endocrinologie FSB-USTHB, Alger , Algérie1) : Laboratoire  d’endocrinologie FSB-USTHB, Alger , Algérie(2) : Laboratoire d’histologie et d’embryologie moléculaires (INSERM U842) de Lyon, France.(2) : Laboratoire d’histologie et d’embryologie moléculaires (INSERM U842) de Lyon, France.E.E.Mail: Mail: nawelmedbio@yahoo.frnawelmedbio@yahoo.fr

INTRODUCTIONINTRODUCTION

Le maintien de l’intégrité cellulaire est primordial Le maintien de l’intégrité cellulaire est primordial pour la réalisation d’un examen anatomo-pour la réalisation d’un examen anatomo-pathologique (1). pathologique (1).

Depuis son introduction par Ferdinand Blum en Depuis son introduction par Ferdinand Blum en 1893, le formol est devenu le fixateur de référence 1893, le formol est devenu le fixateur de référence pour la préservation des tissus pour une observation pour la préservation des tissus pour une observation microscopique ultérieure, mais il a été classé microscopique ultérieure, mais il a été classé "cancérigène du groupe 1" par le Centre "cancérigène du groupe 1" par le Centre International de Recherche sur le Cancer (CIRC). International de Recherche sur le Cancer (CIRC).

OBJECTIFS OBJECTIFS

Mon travail s’intègre dans un projet visant à testerMon travail s’intègre dans un projet visant à tester la substitution du formol pour les études la substitution du formol pour les études

immunohistochimiques, voir idéalement son immunohistochimiques, voir idéalement son remplacement par de nouveaux fixateurs. remplacement par de nouveaux fixateurs.

L’objectif de notre travail est deL’objectif de notre travail est de : montrer les : montrer les méthodes d’optimisation de la phase pré-analytique méthodes d’optimisation de la phase pré-analytique au sein du laboratoire d’anatomie pathologique, au sein du laboratoire d’anatomie pathologique, comparer les effets de la fixation par trois types de comparer les effets de la fixation par trois types de fixateurs actuellement utilisés dans les laboratoires fixateurs actuellement utilisés dans les laboratoires sur le contenu et l’intégrité des tissu, connaitre les sur le contenu et l’intégrité des tissu, connaitre les causes de la difficulté de lecture des lames causes de la difficulté de lecture des lames histologiques.histologiques.

MATERIEL ET METHODESMATERIEL ET METHODESLieu de l’expérimentationLieu de l’expérimentation

HCA: services neurochirurgie, endocrinologie et anatomie pathologique;HCA: services neurochirurgie, endocrinologie et anatomie pathologique;IPA: laboratoire de bio pathologie; IPA: laboratoire de bio pathologie;

Hôpital Neurologique de Lyon, Hôpital Neurologique de Lyon, Laboratoire d’embryologie et d’histologie moléculaire de Lyon INSERM U842 Lyon.Laboratoire d’embryologie et d’histologie moléculaire de Lyon INSERM U842 Lyon.

PrélèvementsPrélèvements

Pièces d’exèrese chirurgicale proviennent : -Labo d’Anatomie Pathologique d’HCA,

-Labo d’histologie et d’embryologie moléculaires (INSERM U842) de Lyon,

fixés dans trois types de fixateurs:FORMOL TAMPONNÉ À 10%FORMOL ACÉTIQUE LIQUIDE DE BOUIN-HOLLANDE

Bouin HollandeBouin HollandeBouin HollandeBouin Hollande FormolFormol AcétiqueFormolFormol AcétiqueFormol Tamponné 10%

Figure 1: Comparaison d’identification par réaction IHC des cellules prolactiniques d’un prolactinome fixé au formol tamponné à 10% à celle des prolactinomes fixés au formol acétique et au Bouin Hollande ; Objectif X40.

FAFA BHFT FA

RESULTATS

DISCUSSIONDISCUSSION

Liq Bouin Hollande++Liq Bouin Hollande++

Formol Acétique ++++++++Formol Acétique ++++++++

Formol -

NH2-

NH2 Méthylol CH2OH

H+H+

Réunissent molécules protéiques

Aldéhyde Gr Amine

Dénature les protéines

Dénature les protéines

Gène Fixation

=COV

EVALUATION DE TROIS SUBSTITUTS DU FORMOLEVALUATION DE TROIS SUBSTITUTS DU FORMOLEVALUATION DE TROIS SUBSTITUTS DU FORMOLEVALUATION DE TROIS SUBSTITUTS DU FORMOL

Une équipe Une équipe DE L'ÉCOLE VÉTÉRINAIRE AGROALIMENTAIRE DE NANTESDE L'ÉCOLE VÉTÉRINAIRE AGROALIMENTAIRE DE NANTES a a évalué la possibilité de substituer le formol dans les laboratoires d'anatomie évalué la possibilité de substituer le formol dans les laboratoires d'anatomie pathologique. Trois substituts aux compositions représentatives des différentes pathologique. Trois substituts aux compositions représentatives des différentes solutions sur le marché solutions sur le marché (Acide acétique, glyoxal, mélange d'acide acétique/glyoxal) (Acide acétique, glyoxal, mélange d'acide acétique/glyoxal) ont ont été testé en comparaison au été testé en comparaison au formol formol sursur un panel de 10 tissus biologiques d'animaux un panel de 10 tissus biologiques d'animaux ..

Une équipe Une équipe DE L'ÉCOLE VÉTÉRINAIRE AGROALIMENTAIRE DE NANTESDE L'ÉCOLE VÉTÉRINAIRE AGROALIMENTAIRE DE NANTES a a évalué la possibilité de substituer le formol dans les laboratoires d'anatomie évalué la possibilité de substituer le formol dans les laboratoires d'anatomie pathologique. Trois substituts aux compositions représentatives des différentes pathologique. Trois substituts aux compositions représentatives des différentes solutions sur le marché solutions sur le marché (Acide acétique, glyoxal, mélange d'acide acétique/glyoxal) (Acide acétique, glyoxal, mélange d'acide acétique/glyoxal) ont ont été testé en comparaison au été testé en comparaison au formol formol sursur un panel de 10 tissus biologiques d'animaux un panel de 10 tissus biologiques d'animaux ..

BOVIN FEMELLE ADULTE CHIEN MALE ADULTE CHIENNE FEMELLE ADULTEoENCEPHALE TESTICULES TUMEUR MAMAIRE oESTOMACoFOIEoINTESTINo MUSCLE FESSIERo OS DES COTESo PEAU

BOVIN FEMELLE ADULTE CHIEN MALE ADULTE CHIENNE FEMELLE ADULTEoENCEPHALE TESTICULES TUMEUR MAMAIRE oESTOMACoFOIEoINTESTINo MUSCLE FESSIERo OS DES COTESo PEAU

Leurs résultats démontrent que tous les substituts utilisés possèdent des qualités de fixation suffisantes pour une observation histologique et permettent de

proposer le diagnostic de routine après coloration HES. LE SUBSTITUT À BASE DE GLYOXAL PERMET D'OBTENIR DES PRÉPARATIONS HISTOLOGIQUES COMPARABLES À CELLES

OBSERVÉES AVEC LE FORMOL, ASSURANT MÊME UNE MEILLEURE QUALITÉ DE FIXATION SUR CERTAINS TISSUS TEL QUE LE TISSU

OSSEUX (2).

Leurs résultats démontrent que tous les substituts utilisés possèdent des qualités de fixation suffisantes pour une observation histologique et permettent de

proposer le diagnostic de routine après coloration HES. LE SUBSTITUT À BASE DE GLYOXAL PERMET D'OBTENIR DES PRÉPARATIONS HISTOLOGIQUES COMPARABLES À CELLES

OBSERVÉES AVEC LE FORMOL, ASSURANT MÊME UNE MEILLEURE QUALITÉ DE FIXATION SUR CERTAINS TISSUS TEL QUE LE TISSU

OSSEUX (2).

L 'évaluation des substituts s’est faite sur la base des caractéristiques des prélèvements lors des étapes de macroscopie, de microtomie,

de coloration ( HES et colorations spécifiques) et d’immunomarquage.

L 'évaluation des substituts s’est faite sur la base des caractéristiques des prélèvements lors des étapes de macroscopie, de microtomie,

de coloration ( HES et colorations spécifiques) et d’immunomarquage.

Chaque prélèvement a été immerge immédiatement dans un des quatre fixateurs:

Exell plus à base de glyoxalRCL2 à base d’acide acétiqueHistofix à base d e glyoxal et d’acide acétique Formol à 4%

Chaque prélèvement a été immerge immédiatement dans un des quatre fixateurs:

Exell plus à base de glyoxalRCL2 à base d’acide acétiqueHistofix à base d e glyoxal et d’acide acétique Formol à 4%

CONCLUSION CONCLUSION Il ressort de la comparaison de nos résultats avec la littérature que Il ressort de la comparaison de nos résultats avec la littérature que

les difficultés d’interprétation des observations peuvent être les difficultés d’interprétation des observations peuvent être secondaires à divers artéfacts relatifs au mode de fixation et qu’il secondaires à divers artéfacts relatifs au mode de fixation et qu’il y a nécessité de répondre à la mise en place de mesures de y a nécessité de répondre à la mise en place de mesures de protection et des normes de sécurité dans les nos laboratoires protection et des normes de sécurité dans les nos laboratoires afin de minimiser les risques associés à l'utilisation du formol.afin de minimiser les risques associés à l'utilisation du formol.

Chaque laboratoire devra évaluer la possibilité de substituer le Chaque laboratoire devra évaluer la possibilité de substituer le formol en fonction des techniques qu' il utilise courammentformol en fonction des techniques qu' il utilise couramment

REFERENCES [1] GARAUD J.C. AND ROUSSEL G. 2007. Immunohistochimie en microscopie photonique et

électronique :Théorie et pratique, IHC.odt.:182.

[2] GUIGAND.L, LEDIVIN.M, FERNANDEZ.B, MASSOUNNEAU.J, CHEREL.Y, LARCHET.TH.2010. Evaluation de trois substituts du formol sur la fixation de s tissus biologiques d animaux.HISTOTECH,23,nº1,p.11 à 24.