Page 1 Page 1 University of Wollongong University of Wollongong Research Online Penelitian Online University of Wollongong Thesis Collection University of Wollongong Koleksi Tesis University of Wollongong Thesis Collections University of Wollongong Koleksi Tesis 1999 1999 Bioactive molluscan resources and their Bioaktif molluscan sumber daya dan mereka conservation: biological and chemical studies on konservasi: studi biologi dan kimia pada the egg masses of marine molluscs massa telur moluska laut Kirsten Benkendorff Kirsten Benkendorff University of Wollongong University of Wollongong Research Online is the open access institutional repository for the Online penelitian adalah akses terbuka kelembagaan repositori untuk University of Wollongong. Universitas Wollongong. For further information contact Manager Untuk informasi lebih lanjut hubungi Manager Repository Services: morgan@uow.edu.au. Repository Jasa: morgan@uow.edu.au. Recommended Citation Fitur Citation Benkendorff, Kirsten, Bioactive molluscan resources and their conservation: Biological and chemical studies on the egg masses of Benkendorff, Kirsten, sumber daya molluscan bioaktif dan konservasi mereka: dan kimia studi Biologi pada massa telur marine molluscs, PhD thesis, Department of Biological Sciences, Department of Chemistry, University of Wollongong, 1999. moluska laut, PhD tesis, Departemen Ilmu Biologi, Departemen Kimia, University of Wollongong, 1999. http://ro.uow.edu.au/theses/278 http://ro.uow.edu.au/theses/278 Page 2 Page 2 NOTE CATATAN This online version of the thesis may have different page formatting and pagination from Versi online dari tesis mungkin memiliki format halaman yang berbeda dan pagination dari the paper copy held in the University of Wollongong Library. salinan kertas diadakan di Universitas Wollongong Perpustakaan. UNIVERSITY OF WOLLONGONG University of Wollongong COPYRIGHT WARNING PERINGATAN HAK CIPTA You may print or download ONE copy of this document for the purpose of your own Anda dapat mencetak atau download SATU salinan dokumen ini untuk tujuan Anda sendiri research or study. penelitian atau studi. The University does not authorise you to copy, communicate or Universitas tidak mengizinkan Anda untuk menyalin, berkomunikasi atau otherwise make available electronically to any other person any copyright material sebaliknya menyediakan elektronik kepada orang lain setiap material hak cipta contained on this site. terkandung di situs ini. You are reminded of the following: Anda diingatkan berikut:

Copyright owners are entitled to take legal action against persons who infringe their Pemilik hak cipta berhak untuk mengambil tindakan hukum terhadap orang yang melanggar mereka copyright. hak cipta. A reproduction of material that is protected by copyright may be a copyright Sebuah reproduksi bahan yang dilindungi oleh hak cipta mungkin hak cipta infringement. pelanggaran. A court may impose penalties and award damages in relation to offences Pengadilan dapat mengenakan denda dan kerusakan penghargaan sehubungan dengan tindak and infringements relating to copyright material. dan pelanggaran yang berkaitan dengan materi hak cipta. Higher penalties may apply, and higher denda yang lebih tinggi mungkin berlaku, dan lebih tinggi damages may be awarded, for offences and infringements involving the conversion of kerusakan dapat diberikan, untuk pelanggaran dan pelanggaran yang melibatkan konversi material into digital or electronic form. materi ke dalam bentuk digital atau elektronik. Page 3 Page 3 BIOACTIVE MOLLUSCAN RESOURCES BIOAKTIF MOLLUSCAN SUMBER DAYA AND THEIR CONSERVATION: DAN KONSERVASI MEREKA: Biological and Chemical Studies on the Egg Masses of Studi Biologi dan Kimia di Misa Telur Marine Molluscs Marine Moluska * A thesis submitted in fulfilment of the * Sebuah tesis disampaikan dalam pemenuhan requirement for the award of the degree persyaratan untuk pemberian gelar DOCTOR OF PHILOSOPHY DOKTER FILSAFAT from dari UNIVERSITY OF WOLLONGONG University of Wollongong by oleh KIRSTEN BENKENDORFF Kirsten BENKENDORFF , B.Sc. , B.Sc. Hons. Hons. Department of Biological Sciences Departemen Ilmu Hayati Department of Chemistry Departemen Kimia March, 1999 Maret, 1999 Page 4 Page 4 II II The edge of the sea is a strange and beautiful place. Tepi laut adalah tempat yang aneh dan indah. Rachael Carson Rachael Carson Certainly Divinity is here in these shells in their humble form of life. Tentu Divinity ada di sini dalam kerang dalam bentuk sederhana hidup mereka. Frank Lloyd Wright Frank Lloyd Wright By Tyre the old, with ocean-plunder, A netful, brought to land. Dengan Tirus yang lama, dengan laut-penjarahan, A netful, dibawa ke tanah. Robert Browning Robert Browning Page 5 Page 5 III III

Dedicated to my Grandmother, Jutta Benkendorff Didedikasikan untuk Nenek saya, Jutta Benkendorff For inspiring me to take a philosophical approach to evolution, Untuk mengilhami saya untuk mengambil pendekatan filosofis untuk evolusi, And my parents, Robin and Peter Benkendorff Dan saya orang tua, Robin dan Peter Benkendorff For endless support and encouragement. Untuk dukungan tanpa henti dan dorongan. Page 6 Page 6 IV IV Thesis Declaration Tesis Deklarasi This thesis contains no material that has been accepted for the award of any other Tesis ini tidak berisi materi yang telah diterima untuk pemberian lain degree or diploma at any University, and to the best of my knowledge contains no gelar atau diploma di setiap Universitas, dan sejauh pengetahuan saya tidak berisi material previously published or written by another person, except where due materi sebelumnya diterbitkan atau ditulis oleh orang lain, kecuali karena reference is made in the text of the thesis. referensi dibuat dalam teks tesis. Page 7 Page 7 VV Acknowledgments Ucapan Terima Kasih I am indebted to Dr Andy Davis and Prof. John Bremner from the University of Saya berterima kasih kepada Dr Andy Davis dan Prof Yohanes Bremner dari Universitas Wollongong for supervising this project. Wollongong untuk mengawasi proyek ini. I would like to especially thank Dr Andy Davis Saya ingin mengucapkan terima kasih terutama Dr Andy Davis (Department of Biological Sciences) for initially suggesting that I study the egg masses (Departemen Ilmu Biologi) untuk awalnya menyatakan bahwa saya mempelajari massa telur of marine molluscs. moluska laut. Having never before studied in the marine environment, Andys Karena belum pernah sebelumnya belajar di lingkungan laut, Andy knowledge of marine biology has greatly assisted me during this project. pengetahuan tentang biologi kelautan telah sangat membantu saya dalam proyek ini. Andy has Andy memiliki also significantly improved my understanding of experimental design, as well as juga secara signifikan meningkatkan pemahaman saya tentang rancangan percobaan, serta providing enthusiasm, encouragement and valuable comments throughout the memberikan semangat, dorongan dan komentar berharga di seluruh research project. proyek penelitian. I am also extremely grateful to Prof. John Bremner (Department of Saya juga sangat berterima kasih kepada Prof Yohanes Bremner (Departemen Chemistry) for agreeing to take on a biology student and making available his Kimia) atas persetujuan untuk mengambil seorang mahasiswa biologi dan membuat tersedia nya knowledge of organic and natural products chemistry. pengetahuan tentang alam produk kimia dan organik. John's advice has been nasihat John telah

essential to some aspects of this research project and his comments on all aspects of penting untuk beberapa aspek dari proyek penelitian dan komentarnya pada semua aspek the study have been valuable and are much appreciated. Penelitian telah berharga dan sangat dihargai. Sincere thanks are extended to my parents for, in the words of my mother, providing a terima kasih yang tulus diberikan kepada orang tua saya untuk, dalam kata-kata ibu saya, "menyediakan good set of genes but perhaps more importantly, for providing the perfect baik set gen "tapi mungkin lebih penting, untuk memberikan yang sempurna environment in which to grow and learn. lingkungan di mana untuk tumbuh dan belajar. I would also like to thank the rest of my family, Saya juga ingin mengucapkan terima kasih kepada seluruh keluarga saya, particularly Carlo Pisanu, for being supportive and accepting my asocial behaviour terutama Carlo Pisanu, karena mendukung dan menerima perilaku asosial saya over the last few years. selama beberapa tahun terakhir. I am grateful to Dr. Bill Rudman, Mr Ian Loch and Dr. Winston Ponder from the Saya berterima kasih kepada Dr Bill Rudman, Bapak Ian Loch dan Dr Winston Ponder dari Australian Museum, for assisting me with species identification and for generally Museum Australia, untuk membantu saya dengan identifikasi spesies dan untuk umum improving my knowledge of marine molluscs. meningkatkan pengetahuan saya tentang moluska laut. I have also appreciated the Saya juga menghargai Page 8 Page 8 VI VI opportunity to access the wonderful resources (specimens and literature) that are kesempatan untuk mengakses sumber daya yang luar biasa (spesimen dan sastra) yang available in the Malacology Department of the Australian Museum. tersedia di Departemen Malacology Museum Australia. I am grateful to Dr. John Korth from the University of Wollongong (UOW, Chemistry Saya berterima kasih kepada Dr John Korth dari University of Wollongong (UOW, Kimia Department) for assisting me on the GC/MS. Departemen) untuk membantu saya di GC / MS. Thanks also to Dr. Renate Griffiths from Terima kasih juga kepada Dr Griffiths Renate dari the Department of Chemistry (UOW) for performing the conformational search on Departemen Kimia (UOW) untuk melakukan pencarian konformasi pada Tyriverdin in the SPARTAN modelling program. Tyriverdin dalam pemodelan program SPARTAN. Darren Saunders (Department of Darren Saunders (Departemen Biological Sciences, UOW) kindly cultured the human lymphoma cells that were use in Biological Sciences, UOW) mohon berbudaya sel limfoma manusia yang digunakan dalam this project and explained the methods used for cytotoxicity testing. proyek ini dan menjelaskan metode yang digunakan untuk pengujian sitotoksisitas. My appreciation is apresiasi saya extended to Mr. George Gray and Dr. Alistair Lochhead from Southern Pathology, diperpanjang untuk Mr George Gray dan Dr Alistair Lochhead dari Southern Patologi,

Wollongong, NSW, for the use of the cytospin and light microscope/camera Wollongong, NSW, untuk penggunaan cytospin dan mikroskop cahaya / kamera equipment. peralatan. Dr. David Muir from the Royal North Shore Hospital kindly provided two Dr David Muir dari Royal North Shore Hospital baik disediakan dua strains of Candida albicans and Dr Jeremy Carson from the Fish Health Unit, strain Candida albicans dan Dr Jeremy Carson dari Unit Kesehatan Ikan, Department of Primary Industry and Fisheries, Tasmania, provided the strains of Departemen Perindustrian Primer dan Perikanan, Tasmania, asalkan alunan marine pathogens. laut patogen. I would like to further thank Dr Andy Davis, for providing the egg masses of a subtidal Saya ingin berterima kasih kepada Dr Andy lebih lanjut Davis, untuk menyediakan massa telur dari subtidal nudibranch, a terrestrial snail and several Mediterranean molluscs. nudibranch, siput darat dan beberapa moluska Mediterania. The assistance of Bantuan Dr Manual Ballesteros (University of Barcelona, Spain) in the collection of the egg Dr Manual Ballesteros (University of Barcelona, Spanyol) dalam koleksi telur masses from Spurilla neopolitana and Ceratostoma erineceum is also appreciated. massa dari neopolitana Spurilla dan erineceum Ceratostoma juga dihargai. The Australian specimens collected for this study were authorised under a general Australia spesimen dikumpulkan untuk penelitian ini telah disetujui di bawah umum scientific permit for the collection of marine invertebrates outside ilmiah izin untuk pengumpulan invertebrata laut luar Page 9 Page 9 VII VII reserve areas in the waters of NSW (reference no. F95/269). cadangan daerah di perairan NSW (tidak ada referensi F95/269.). This license was Lisensi ini adalah authorised in accordance with the provisions of Section 37 of the Fisheries berwenang sesuai dengan ketentuan Pasal 37 dari Perikanan Management Act 1994. Manajemen Act 1994. The provision of an Australian Postgraduate Award from the Australian Government, Pemberian Award Pascasarjana Australia dari Pemerintah Australia, as well as a Supplementary Postgraduate Scholarship from the Australian Flora and serta Beasiswa Pascasarjana Tambahan dari Australia dan Flora Fauna Research Centre (AFFRC), the Bioactive Molecules Research Centre and the Fauna Research Centre (AFFRC), Pusat Penelitian Molekul bioaktif dan Environmental Research Institute at the University of Wollongong is greatly Lingkungan Lembaga Penelitian di University of Wollongong sangat appreciated. dihargai. I would also like to thank the members of the AFFRC and John Saya juga ingin mengucapkan terima kasih kepada anggota AFFRC dan John Bremner's research group for interesting discussions. Bremner riset kelompok untuk diskusi yang menarik. My most sincere thanks to all Saya yang paling tulus terima kasih kepada semua Kirsten Benkendorff, 1999 Kirsten Benkendorff, 1999 Page 10 Page 10 VIII VIII Abstract Abstrak

Chemical prospecting for pharmaceuticals in natural organisms (bioprospecting) can Prospek kimia untuk obat-obatan pada organisme alam (bioprospecting) dapat be used as a tool for the conservation of biological diversity. digunakan sebagai alat untuk konservasi keanekaragaman hayati. However, bioprospecting Namun, bioprospecting can only be considered compatible with conservation if it is conducted in an hanya dapat dianggap kompatibel dengan konservasi jika dilakukan dalam environmentally sustainable manner. lingkungan secara berkelanjutan. In order to prevent the overcollection of Dalam rangka mencegah overcollection dari vulnerable organisms it is essential to gain an understanding of the local distribution organisme rentan sangat penting untuk memperoleh pemahaman tentang distribusi lokal and abundance of the target organisms. dan kelimpahan organisme target. In this study, the egg masses of intertidal Dalam studi ini, massa telur intertidal molluscs were targeted as a novel source of biologically active compounds. moluska menjadi sasaran sebagai sumber baru dari senyawa aktif biologis. Surveys of Survei the molluscan fauna were conducted on 13 intertidal reefs along the Wollongong fauna molluscan dilakukan pada tanggal 13 terumbu intertidal sepanjang Wollongong Coast, New South Wales, Australia. Coast, New South Wales, Australia. In total, 161 species of intertidal molluscs were Secara total, 161 jenis moluska intertidal adalah found and the benthic egg masses from 47 species were identified. ditemukan dan massa telur bentik dari 47 spesies diidentifikasi. Only 31% of these Hanya 31% dari molluscs have been previously recorded from intertidal surveys in the region and 66% moluska telah direkam sebelumnya dari survei surut di wilayah ini dan 66% of the species may be regarded as regionally rare. dari spesies dapat dianggap sebagai regional langka. Repeated surveys of the 13 reefs Berulang survei dari 13 terumbu revealed that the species diversity recorded in a single inventory was representative of mengungkapkan bahwa keragaman spesies yang dicatat dalam inventaris tunggal wakil the cumulative diversity detected. keragaman kumulatif terdeteksi. 'Hotspots' of molluscan diversity were found on the 'Hotspot' keanekaragaman molluscan ditemukan di northern side of two large headlands (Bass Point and Bellambi Point), which are sisi utara dua tanjung besar (Bass Point dan Bellambi Point), yang characterised by a high habitat complexity and shelter from strong wave action. ditandai dengan kompleksitas habitat yang tinggi dan berlindung dari aksi gelombang kuat. Three selective pressures could potentially lead to the evolution of chemical defence in Tiga tekanan selektif berpotensi dapat menyebabkan evolusi pertahanan kimia di molluscan egg masses: predation, disease and surface fouling. molluscan telur massa: pemangsaan, penyakit dan fouling permukaan. Marine molluscs may Moluska laut mungkin rely on a range of alternative strategies to protect their egg masses from predators, mengandalkan berbagai strategi alternatif untuk melindungi massa telur mereka dari predator, including physical protection in leathery egg capsules, camouflage and rapid termasuk perlindungan fisik pada kapsul telur kasar, kamuflase dan cepat

embryonic development, as well as behavioural mechanisms, such as brooding and embrio pengembangan, serta mekanisme perilaku, seperti merenung dan the deposition of large aggregated egg masses. pengendapan besar massa telur agregat. Predator feeding trials provided percobaan makan Predator disediakan evidence of chemical defence in five out of eight species that were tested. bukti pertahanan kimia di lima dari delapan spesies yang diuji. On the Pada other hand, observational studies provided no evidence to suggest that molluscan egg sisi lain, studi observasional memberikan bukti yang menunjukkan bahwa telur molluscan Page 11 Page 11 IX IX masses are chemically defended against surface fouling by macroorganisms. massa secara kimiawi dipertahankan terhadap pengotoran permukaan dengan macroorganisms. A range rentang A of macrophytes and epizooites were observed on the surface of both gelatinous egg dari tumbuhan dan epizooites diamati pada permukaan kedua telur berlendir masses and leathery egg capsules. massa dan kapsul telur kasar. Nevertheless, the overall incidence of fouling was Namun demikian, kejadian keseluruhan fouling adalah low, probably because of their ephemeral nature and the fact that most molluscs rendah, mungkin karena alam fana mereka dan kenyataan bahwa sebagian moluska deposit egg masses on the underside of boulders. deposit telur massa di bawah batu. Disease appears to be a significant selective pressure leading to the evolution of Penyakit tampaknya merupakan tekanan selektif yang signifikan menuju evolusi chemical defence in molluscan egg masses. kimia pertahanan di massa telur molluscan. Two assays were used to screen the egg Dua tes digunakan untuk layar telur masses of marine molluscs for antimicrobial activity against human and marine massa dari moluska laut untuk aktivitas antimikroba terhadap manusia dan laut pathogens; a modified version of the traditional Zone of Inhibition assay and the patogen, sebuah versi modifikasi dari Zona Hambat assay tradisional dan Fluorescein Diacetate assay. Fluorescein Diacetate assay. These two assays have small sample requirements and Kedua tes memiliki persyaratan sampel kecil dan thus it was possible to screen the egg masses of 42 molluscs and four polychaetes. sehingga memungkinkan untuk layar massa telur dari 42 moluska dan empat polychaetes. Antimicrobial activity against at least one human pathogen was found in the egg aktivitas antimikroba terhadap setidaknya satu patogen manusia ditemukan di telur masses of 36 species, including two polychaetes and a wide range of molluscs. massa dari 36 spesies, termasuk dua polychaetes dan berbagai moluska. The The egg masses from a number of species clearly lose activity during embryonic telur massa dari sejumlah spesies jelas kehilangan aktivitas selama embrio development. pembangunan. The antimicrobial activity also appears to be greater in the internal Aktivitas antimikroba juga tampaknya lebih besar di internal matrix, rather than on the outer surfaces of molluscan egg masses. matriks, bukan pada permukaan luar dari massa telur molluscan. Surface bacteria Permukaan bakteri

could be responsible for the observed activity in some species but are unlikely to be bisa bertanggung jawab untuk kegiatan diamati pada beberapa spesies tetapi tidak mungkin the source of antimicrobial agents in leathery egg capsules, or the gelatinous egg sumber agen antimikroba dalam kapsul telur kasar, atau telur agar-agar ribbons of Aplysia spp. pita spp Aplysia. The egg masses of Dicathais orbita and Aplysia juliana were Telur massa dari orbita Dicathais dan Juliana Aplysia adalah found to inhibit ecologically significant marine bacteria, as well as Gram negative and ditemukan bakteri signifikan menghambat laut ekologis, serta Gram negatif dan Gram positive human pathogenic bacteria and the yeast Candida albicans . Bakteri Gram positif patogen manusia dan ragi Candida albicans. The compounds responsible for the antimicrobial activity in the egg masses of the Semakin senyawa antimikroba bertanggung jawab atas kegiatan pada telur massa common muricid Dicathais orbita were isolated using bioassay-guided fractionation. umum muricid orbita Dicathais diisolasi menggunakan panduan fraksinasi bioassay. These were then identified by mass spectrometry and proton nuclear magnetic Ini kemudian diidentifikasi dengan spektrometri massa dan proton nuklir magnet Page 12 Page 12 XX resonance spectroscopy. spektroskopi resonansi. Three antimicrobial compounds were characterised Tiga senyawa antimikroba dikarakterisasi (tyrindoleninone, tyriverdin and 6-bromoisatin) and these are all known precursors to (Tyrindoleninone, tyriverdin dan 6-bromoisatin) dan ini semua prekursor diketahui the ancient dye Tyrian Purple. pewarna kuno Tyrian Purple. Tyrindoleninone is the most abundant volatile organic Tyrindoleninone adalah yang paling melimpah organik volatile compound found in the fresh eggs and this compound was shown to be toxic to senyawa yang terdapat dalam telur segar dan senyawa ini terbukti menjadi racun bagi bacteria at a concentration of 1mg/ml. bakteri pada konsentrasi 1mg/ml. As the eggs develop, most of the Sebagai telur berkembang paling, dari tyrindoleninone is converted into tyriverdin, which was found to be effectively tyrindoleninone diubah menjadi tyriverdin, yang ditemukan untuk secara efektif bacteriostatic at 0. bakteriostatik pada 0. 5 g/ml but was not cytotoxic at 1 mg/ml. 5 g / ml tetapi tidak sitotoksik pada 1 mg / ml. This compound is Senyawa ini considered to be a useful new drug lead. dianggap sebagai obat petunjuk baru berguna. The 6-bromoisatin, which is likely to be an 6-bromoisatin, yang kemungkinan akan menjadi oxidative artefact derived from the other precursors, exhibited mild cytolytic activity oksidatif artefak yang berasal dari prekursor lain, menunjukkan aktivitas cytolytic ringan against a range of bacteria. terhadap berbagai bakteri. As the larvae began hatching, most of the tyriverdin was Sebagai larva mulai menetas, sebagian besar tyriverdin itu converted into Tyrian Purple in the egg masses. dikonversi menjadi Tyrian Purple in massa telur. Tyrian Purple did not exhibit any Tyrian Purple tidak menunjukkan adanya significant antimicrobial activity, although it is highly insoluble in aqueous media. aktivitas antimikroba signifikan, meskipun sangat tidak larut dalam media air.

Nevertheless, these studies provide evidence for a chemical ripening process in the Namun demikian, penelitian ini memberikan bukti untuk pematangan proses kimia dalam egg masses of Dicathais orbita , which may provide a means of avoiding autotoxicity to telur massa orbita Dicathais, yang dapat menyediakan sarana untuk menghindari autotoxicity the larvae during hatching. larva selama penetasan. Extracts from the egg masses of 23 molluscs were then examined for the precursors Ekstrak dari massa telur 23 moluska kemudian diperiksa untuk prekursor of Tyrian Purple, as well as other potential antimicrobial agents, using gas dari Tyrian Ungu, serta lainnya agen antimikroba yang potensial, dengan menggunakan gas chromatography/ mass spectrometry. kromatografi / spektrometer massa. The egg masses from six species of Muricidae Massa telur dari enam jenis Muricidae were found to contain the precursors of Tyrian Purple. ditemukan mengandung precursor Tyrian Purple. However, these compounds Namun, senyawa were not found in the egg masses of species from any other family. tidak ditemukan di massa telur spesies dari keluarga lainnya. A range of other Berbagai lainnya related indoles, as well as di- and tribromoimidazoles/pyrazoles were also found in the terkait indoles, serta di-dan tribromoimidazoles / pyrazoles juga ditemukan di egg masses of the Muricidae. telur massa Muricidae. Most of these compounds have not been previously Sebagian besar senyawa ini sebelumnya belum pernah described from a natural source and they could all contribute to the observed dijelaskan dari sumber alam dan mereka semua bisa berkontribusi pada diamati antimicrobial activity in the muricid egg masses. aktivitas antimikroba dalam telur muricid massa. The egg masses of the Aplysiidae Massa telur dari Aplysiidae were found to contain some bioactive polychlorinated hydrocarbons and a range of ditemukan mengandung beberapa hidrokarbon Polychlorinated bioaktif dan berbagai Page 13 Page 13 XI XI long chain unsaturated fatty acids. rantai panjang asam lemak tak jenuh. Halogenated compounds were not found in the egg halogenasi senyawa tidak ditemukan pada telur masses of any other species, although fatty acids could be partly responsible for the massa dari spesies lain, meskipun asam lemak bisa sebagian bertanggung jawab atas observed antimicrobial activity in most of the gelatinous egg masses. Aktivitas antimikroba diamati di sebagian besar massa telur gelatin. A high diversity Sebuah keragaman yang tinggi of volatile organic compounds was found in the molluscan egg masses, but further senyawa organik yang mudah menguap ditemukan di massa telur molluscan, tetapi lebih lanjut work is required to identify the active components. kerja diperlukan untuk mengidentifikasi komponen aktif. Clearly, bioprospecting can contribute to conservation through the development of Jelas, bioprospecting dapat berkontribusi untuk konservasi melalui pengembangan comprehensive species inventories. komprehensif spesies persediaan. Bioprospecting can be conducted with minimal Bioprospecting dapat dilakukan dengan minimal

impact on the environment and the discovery of novel bioactive compounds provides dampak terhadap lingkungan dan penemuan senyawa bioaktif baru menyediakan an incentive for conservation. insentif bagi konservasi. All marine molluscs that deposit benthic egg masses Semua laut moluska bahwa deposit massa telur benthik have potential pharmaceutical value and therefore an effort should be made to memiliki nilai potensi farmasi dan oleh karena itu upaya harus dilakukan untuk conserve both them and their natural habitats. menghemat baik mereka dan habitat alami mereka. Bass Point would be an appropriate site Bass Point akan menjadi situs yang sesuai for an intertidal protected area in the Wollongong region. untuk kawasan lindung di wilayah pasang surut Wollongong. Page 14 Page 14 XII XII Table of Contents Daftar isi Acknowledgments Ucapan Terima Kasih VV Abstract Abstrak VIII VIII CHAPTER 1 BAB 1 11 MOLLUSCAN RESOURCES AND CONSERVATION MOLLUSCAN SUMBER DAN KONSERVASI 1.1 1.1 General introduction Pengenalan umum 11 1.2 1.2 Molluscan resources Molluscan sumber daya 22 1.2.1 The diversity of resources. 1.2.1 Keragaman sumber daya. 22 1.2.2 Bioactive molluscan resources. 1.2.2 sumber daya molluscan bioaktif. 33 1.3 1.3 The biorational approach to drug discovery Pendekatan biorasional untuk penemuan obat 77 1.3.1 The biorational approach. 1.3.1 Pendekatan biorasional. 77 1.3.2 Egg masses as targets for drug discovery. 1.3.2 Telur massa sebagai target untuk penemuan obat. 99 1.3.3 Molluscan reproductive strategies. 1.3.3 strategi Molluscan reproduksi. 10 10 1.4 1.4 Bioprospecting Bioprospecting 14 14

1.4.1 Conservation and bioprospecting. 1.4.1 Konservasi dan bioprospecting. 14 14 1.4.2 The ethics of bioprospecting. 1.4.2 Etika bioprospecting. 15 15 1.4.3 Is bioprospecting environmentally sustainable? 1.4.3 Apakah bioprospecting lingkungan yang berkelanjutan? 16 16 1.4.4 Requirements for sustainable bioprospecting. 1.4.4 Persyaratan untuk berkelanjutan bioprospecting. 17 17 1.5 1.5 Molluscan conservation Molluscan konservasi 20 20 1.5.1 The conservation status of marine molluscs. 1.5.1 Status konservasi moluska laut. 20 20 1.5.2 Habitat protection. 1.5.2 Habitat perlindungan. 21 21 1.6 1.6 Structure of this study Struktur penelitian ini 22 22 CHAPTER 2 BAB 2 25 25 MOLLUSCAN DIVERSITY: SPECIES INVENTORIES AND HABITAT MOLLUSCAN DIVERSITY: SPESIES PERSEDIAAN DAN HABITAT ASSESSMENT PENILAIAN 2.1 2.1 Introduction Pengantar 25 25 2.1.1 Species diversity, species rarity and conservation implications. 2.1.1 Keanekaragaman jenis, spesies langka dan implikasi konservasi. 25 25 Page 15 Page 15 XIII XIII 2.1.2 Intertidal reefs and the determinants of species 2.1.2 Intertidal terumbu karang dan faktor-faktor penentu spesies diversity. keanekaragaman. 28 28 2.1.3 Species inventories and rapid biodiversity 2.1.3 Spesies persediaan dan keanekaragaman hayati cepat assessment. penilaian. 31 31 2.1.4 Molluscs of the Illawarra Coast. 2.1.4 Moluska of the Coast Illawarra. 33 33 2.2 2.2 Objectives Tujuan 38 38 2.3 2.3

Methods Metode 38 38 2.3.1 Study sites. 2.3.1 Studi situs. 38 38 2.3.2 Surveys. Survei 2.3.2. 43 43 2.3.3 Habitat quality. 2.3.3 Habitat kualitas. 47 47 2.3.4 Statistical analysis. 2.3.4 Analisis statistik. 50 50 2.4 2.4 Results Hasil 52 52 2.4.1 Species list of intertidal molluscs in the Wollongong 2.4.1 Spesies daftar moluska pasang surut di Wollongong region. wilayah. 52 52 2.4.2 Comparisons to previous surveys. 2.4.2 Perbandingan untuk survei sebelumnya. 59 59 2.4.3 Natural reefs vs. artificial reefs. 2.4.3 Alam vs terumbu karang buatan. 61 61 2.4.4 Egg laying habitats. 2.4.4 habitat bertelur. 61 61 2.4.5 Spatial and temporal variation in molluscan diversity. 2.4.5 variasi spasial dan temporal dalam keragaman molluscan. 64 64 2.4.6 Molluscan diversity and the physical environment. 2.4.6 Molluscan keanekaragaman dan lingkungan fisik. 68 68 2.5 2.5 Discussion Diskusi 72 72 2.5.1 Molluscan diversity and distribution in the 2.5.1 Molluscan keragaman dan distribusi di Wollongong region. Wollongong wilayah. 72 72 2.5.2 Species rarity and implications for resource 2.5.2 Spesies langka dan implikasi untuk sumber daya management. manajemen. 73 73 2.5.3 Molluscan breeding habitats. 2.5.3 habitat pembiakan Molluscan. 78 78 2.5.4 Molluscan diversity and the physical environment. 2.5.4 Molluscan keanekaragaman dan lingkungan fisik. 80 80

2.5.5 Methods for assessing intertidal molluscan diversity. 2.5.5 Metode untuk menilai keragaman molluscan pasang surut. 82 82 2.5.6 Intertidal management recommendations. 2.5.6 rekomendasi manajemen Intertidal. 89 89 2.6 2.6 Conclusion Kesimpulan 90 90 CHAPTER 3 BAB 3 93 93 DEFENCE AGAINST PREDATION AND MACRO FOULING ON MOLLUSCAN EGG PERTAHANAN TERHADAP predasi dan LUMUT MAKRO PADA TELUR MOLLUSCAN MASSES MASSA 3.1 3.1 Introduction Pengantar 93 93 Page 16 Page 16 XIV XIV 3.1.1 Marine predators and predation on molluscan 3.1.1 Kelautan predator dan predator molluscan egg masses. telur massa. 93 93 3.1.2 Adaptations to predation: Behavioural and 3.1.2 Adaptasi predasi: Perilaku dan physiological defence. fisiologis pertahanan. 95 95 3.1.3 Physical defence against predation. 3.1.3 Fisik pertahanan terhadap pemangsaan. 96 96 3.1.4 Chemical defence mechanisms. 3.1.4 Kimia mekanisme pertahanan. 97 97 3.1.5 Predator feeding trials for assessing the role of 3.1.5 percobaan makan Predator untuk menilai peran chemical defence. kimia pertahanan. 98 98 3.1.6 Macro fouling. 3.1.6 Makro fouling. 101 101 3.2 3.2 Objectives Tujuan 104 104 3.3 3.3 Methods Metode 104 104 3.3.1 Field and laboratory observations. 3.3.1 Field dan pengamatan laboratorium. 104 104

3.3.2 Collection and maintenance of predators. 3.3.2 Pengumpulan dan pemeliharaan predator. 105 105 3.3.3 Collection and preparation of egg material. 3.3.3 Pengumpulan dan persiapan bahan telur. 107 107 3.3.4 Preparation of artificial feeding disks. 3.3.4 Penyusunan disk makan buatan. 107 107 3.3.5 Crab feeding experiments. 3.3.5 Kepiting makan percobaan. 109 109 3.3.6 Isopod feeding experiments. 3.3.6 Isopod makan percobaan. 110 110 3.3.7 Starfish feeding trials 3.3.7 percobaan makan Starfish 111 111 3.3.8 Field feeding trials 3.3.8 Lapangan percobaan makan 112 112 3.3.9 Statistical analysis 3.3.9 Analisis statistik 113 113 3.4 3.4 Results Hasil 115 115 3.4.1 Defensive strategies against predation. 3.4.1 defensif strategi terhadap predasi. 115 115 3.4.2 Chemical defence: Crab feeding trials. 3.4.2 Kimia pertahanan: percobaan makan Kepiting. 119 119 3.4.3 Chemical defence: Isopod feeding trials. 3.4.3 Kimia pertahanan: percobaan makan Isopod. 120 120 3.4.4 Chemical defence: Field feeding trials. 3.4.4 Kimia pertahanan: uji coba lapangan makan. 124 124 3.4.5 Starfish feeding trial. 3.4.5 percobaan pemberian pakan Starfish. 125 125 3.4.6 Physical defence. 3.4.6 Fisik pertahanan. 127 127 3.4.7 Macrofouling. 3.4.7 Macrofouling. 128 128 3.5 3.5 Discussion Diskusi 131 131 3.5.1 Defensive strategies against predation. 3.5.1 defensif strategi terhadap predasi. 131 131 3.5.2 Chemical defence and artificial feeding trials. 3.5.2 Kimia pertahanan dan uji coba makanan buatan. 134 134

3.5.3 Physical defence against predation. 3.5.3 Fisik pertahanan terhadap pemangsaan. 139 139 3.5.4 Macrofouling on molluscan egg masses. 3.5.4 Macrofouling pada massa telur molluscan. 140 140 3.6 3.6 Conclusion Kesimpulan Page 17 Page 17 XV XV CHAPTER 4 BAB 4 143 143 ANTIMICROBIAL ACTIVITY IN MOLLUSCAN EGG MASSES ANTIMIKROBA KEGIATAN DI MASSA TELUR MOLLUSCAN 4.1 4.1 Introduction Pengantar 143 143 4.1.1 The need for novel antibiotics. 4.1.1 Kebutuhan untuk antibiotik novel. 143 143 4.1.2 Antimicrobial activity in molluscs and molluscan 4.1.2 antimikroba kegiatan di moluska dan molluscan egg masses. telur massa. 144 144 4.1.3 Assays for detecting antimicrobial activity. 4.1.3 pengujian untuk mendeteksi aktivitas antimikroba. 147 147 4.1.4 Microfouling and symbiosis. 4.1.4 Microfouling dan simbiosis. 155 155 4.2 4.2 Objectives Tujuan 157 157 4.3 4.3 Methods Metode 158 158 4.3.1 Collection and preparation of egg material. 4.3.1 Pengumpulan dan persiapan bahan telur. 158 158 4.3.2 Maintenance and preparation of microbial cultures. 4.3.2 Pemeliharaan dan persiapan kultur mikroba. 162 162 4.3.3 Zone of Inhibition assay. 4.3.3 Zona assay Inhibisi. 164 164 4.3.4 The Fluorescein Diacetate (FDA) assay. 4.3.4 The Fluorescein Diacetate (FDA) assay. 165 165

4.3.5 Antimicrobial (cell lysis/ cell stasis) assay. 4.3.5 antimikroba (sel lisis / stasis sel) assay. 167 167 4.3.6 Microfouling and symbiosis. 4.3.6 Microfouling dan simbiosis. 168 168 4.4 4.4 Results Hasil 168 168 4.4.1 Antimicrobial activity in benthic invertebrate egg 4.4.1 aktivitas antimikroba dalam telur invertebrata benthik masses. massa. 168 168 4.4.2 Antimicrobial properties at different stages of 4.4.2 antimikroba properti di berbagai tahap development. pembangunan. 169 169 4.4.3 Zone of Inhibition assay. 4.4.3 Zona assay Inhibisi. 172 172 4.4.4 Fluorescein Diacetate assay. 4.4.4 Fluorescein Diacetate assay. 178 178 4.4.6 Antimicrobial (cell stasis/lysis) activity. 4.4.6 antimikroba (stasis sel / lisis) kegiatan. 186 186 4.4.7 Epibiosis and microfouling. 4.4.7 Epibiosis dan microfouling. 191 191 4.5 4.5 Discussion Diskusi 192 192 4.5.1 Antibiotics in invertebrate egg masses. 4.5.1 Antibiotik dalam massa telur invertebrata. 192 192 4.5.2 The resource potential of molluscan antibiotics. 4.5.2 Potensi sumber daya antibiotik molluscan. 195 195 4.5.3 Developmental changes in antimicrobial properties. 4.5.3 Pembangunan perubahan sifat antimikroba. 197 197 4.5.4 Localisation of the antimicrobial components and 4.5.4 Lokalisasi komponen antimikroba dan autotoxicity. autotoxicity. 199 199 4.5.5 Properties of the antimicrobial components. 4.5.5 Properties dari komponen antimikroba. 202 202 4.5.6 Screening methods for detecting antimicrobial activity. 4.5.6 Metode Skrining untuk mendeteksi aktivitas antimikroba.

204 204 4.5.7 Epibiosis and symbiosis. 4.5.7 Epibiosis dan simbiosis. 208 208 Page 18 Page 18 XVI XVI 4.6 4.6 Conclusion Kesimpulan 210 210 CHAPTER 5 BAB 5 213 213 ISOLATION AND CHARACTERISATION OF THE ANTIMICROBIAL COMPOUNDS ISOLASI DAN Karakterisasi DARI SENYAWA ANTIMIKROBA FROM THE EGG MASS OF DICATHAIS ORBITA DARI MASSA TELUR DARI Orbita DICATHAIS 5.1 5.1 Introduction Pengantar 213 213 5.2 5.2 Objectives Tujuan 219 219 5.3 5.3 Methods Metode 219 219 5.3.1 Collection and extraction of egg masses. 5.3.1 Pengumpulan dan ekstraksi massa telur. 219 219 5.3.2 Analysis of the crude extract. 5.3.2 Analisis ekstrak kasar. 220 220 5.3.3 Isolation and identification of antimicrobial 5.3.3 Isolasi dan identifikasi antimikroba components. komponen. 221 221 5.3.4 Antimicrobial testing. 5.3.4 Antimicrobial pengujian. 222 222 5.3.5 Cytotoxicity testing. 5.3.5 pengujian sitotoksisitas. 223 223 5.4 5.4 Results Hasil 224 224 5.4.1 Analysis of the crude egg extracts. 5.4.1 Analisis ekstrak telur mentah. 224 224 5.4.2 Antimicrobial activity. 5.4.2 aktivitas antimikroba. 229 229 5.4.3 Cytotoxicity of tyriverdin. 5.4.3 sitotoksisitas dari tyriverdin. 231 231 5.5 5.5 Discussion Diskusi

238 238 5.5.1 Antimicrobial compounds from the egg mass of 5.5.1 senyawa antimikroba dari massa telur Dicathais orbita . Dicathais orbita. 238 238 5.5.2 Tyriverdin a novel drug lead. 5.5.2 Tyriverdin - memimpin obat baru. 241 241 5.6 5.6 Conclusion Kesimpulan 248 248 CHAPTER 6 BAB 6 251 251 VOLATILE ORGANIC COMPOUNDS IN MOLLUSCAN EGG MASSES ATSIRI DI MASSA SENYAWA ORGANIK TELUR MOLLUSCAN 6.1 6.1 Introduction Pengantar 251 251 6.1.1 Indole derivatives from muricids. 6.1.1 Indole turunan dari muricids. 253 253 6.1.2 Other bioactive halogenated compounds from 6.1.2 Lain senyawa bioaktif halogenasi dari molluscs. moluska. 255 255 6.1.3 Nonhalogenated bioactive compounds from molluscs. 6.1.3 senyawa bioaktif Nonhalogenated dari moluska. 259 259 6.1.4 Metabolites from molluscan egg masses. 6.1.4 Metabolit dari massa telur molluscan. 260 260 6.1.5 Chemical diversity and dereplication. 6.1.5 Kimia keragaman dan dereplication. 264 264 6.2 6.2 Objectives Tujuan Page 19 Page 19 XVII XVII 6.3 6.3 Methods Metode 266 266 6.3.1 Specimen collection and sample preparation. 6.3.1 spesimen koleksi dan persiapan sampel. 266 266 6.3.2 Derivatisation procedure. 6.3.2 Derivatisation prosedur. 267 267 6.3.3 Gas chromatography/mass spectrometry analyses. 6.3.3 Kromatografi gas spektrometri massa analisis /. 267 267

6.3.4 Antimicrobial activity of identified egg constituents. 6.3.4 antimikroba kegiatan konstituen telur diidentifikasi. 268 268 6.4 6.4 Results Hasil 270 270 6.4.1 Brominated compounds in muricid egg masses. 6.4.1 Brominated senyawa dalam massa telur muricid. 270 270 6.4.2 Other related compounds from muricid egg masses. 6.4.2 Senyawa lainnya terkait dari massa telur muricid. 277 277 6.4.3 Halogenated compounds from Aplysiidae egg 6.4.3 halogenasi senyawa dari telur Aplysiidae masses. massa. 279 279 6.4.4 Fatty acids and methyl esters. 6.4.4 Asam lemak dan ester metil. 284 284 6.4.5 Other volatile components of molluscan egg masses. 6.4.5 Komponen lain volatile massa telur molluscan. 286 286 6.4.6 Antimicrobial activity of some common egg 6.4.6 aktivitas antimikroba beberapa telur yang umum metabolites. metabolit. 294 294 6.5 6.5 Discussion Diskusi 296 296 6.5.1 Bioactive compounds from muricid egg masses. 6.5.1 senyawa bioaktif dari massa telur muricid. 296 296 6.5.2 Bioactive metabolites in Aplysiidae egg masses. 6.5.2 bioaktif metabolit di massa telur Aplysiidae. 301 301 6.5.3 Bioactive metabolites from other molluscan egg 6.5.3 bioaktif metabolit dari telur molluscan lain masses. massa. 304 304 6.6 6.6 Conclusion Kesimpulan 307 307 CHAPTER 7 BAB 7 GENERAL DISCUSSION DISKUSI UMUM 309 309 BIOACTIVE MOLLUSCAN RESOURCES AND CONSERVATION BIOAKTIF MOLLUSCAN DAN KONSERVASI SUMBER DAYA

7.1 7.1 Biodiversity and bioresources Keanekaragaman Hayati dan bioresources 309 309 7.2 7.2 The biorational approach to drug discovery Pendekatan biorasional untuk penemuan obat 312 312 7.3 7.3 An interdisciplanary approach Pendekatan interdisciplanary 314 314 7.4 7.4 Sustainable bioprospecting Bioprospecting Berkelanjutan 317 317 7.5 7.5 Bioprospecting and conservation Bioprospecting dan konservasi 319 319 7.6 7.6 Management recommendations Rekomendasi manajemen 321 321 7.7 7.7 Conclusion Kesimpulan 323 323 REFERENCES DAFTAR PUSTAKA 325 325 CHAPTER 1: APPENDIX 1 BAB 1: LAMPIRAN 1 383 383 Page 20 Page 20 XVIII XVIII Appendix 1.1 Lampiran 1.1 383 383 Appendix 1.2 Lampiran 1.2 390 390 CHAPTER 2: APPENDIX 2 BAB 2: LAMPIRAN 2 397 397 Appendix 2.1 Lampiran 2.1 398 398 Appendix 2.2 Lampiran 2.2 431 431 Appendix 2.3 Lampiran 2.3 441 441 CHAPTER 4: Appendix 4 BAB 4: Lampiran 4 445 445 Appendix 4.1 Lampiran 4.1 445 445 Appendix 4.2 Lampiran 4.2 446 446

Appendix 4.3 Lampiran 4.3 448 448 CHAPTER 6: Appendix 6 BAB 6: Lampiran 6 451 451 Appendix 6.1 Lampiran 6.1 452 452 Appendix 6.2 Lampiran 6.2 515 515 Appendix 6.3 Lampiran 6.3 526 526 Appendix 6.4 Lampiran 6.4 527 527 Appendix 6.5 Lampiran 6.5 531 531 Appendix 6.6 Lampiran 6.6 534 534 Appendix 6.7 Lampiran 6.7 551 551 Appendix 6.8 Lampiran 6.8 553 553

Biosintesis terpenoid drimane di moluska dorid: Peran Penting 7-deacetoxyolepupuane dalam dua jenis nudibranch Dendrodoris Biosintesis terpenoid drimane di moluska dorid: Peran Penting 7-deacetoxyolepupuane KESAWAN doa jenis dan nudibranch Dendrodoris Pembelian Pembelian $ 41,95 $ 41,95

Referensi dan bacaan lebih lanjut mungkin tersedia untuk artikel ini. Referensi dan Bacaan Lanjut Tersedia lebih mungkin untuk Suami artikel. Untuk melihat referensi dan bacaan lebih lanjut Anda harus membeli artikel ini. Untuk Melihat referensi dan Bacaan Lanjut Harus lebih anda membeli artikel Suami. Angelo Angelo Fontana Fontana Sesuai Author Contact Information,, E-mail Penulis korespondensi, Maria Letizia Ciavatta, Tomofumi Miyamoto, Maria Letizia Ciavatta, Tomofumi Miyamoto 1, Aldo Spinella 1, Spinella Aldo 2 dan Guido Cimino 2 dan Guido Cimino Istituto per La Chimica di Molecole di Interesse Biologico Istituto per La Chimica di Molecole di Interesse Biologico 3 del CNR, Via Toiano 6, 80072 Arco Felice, Napoli, Italia. 3 del CNR, Via Toiano 6, 80072 Felice Arco, Napoli, Italia. Diterima 11 Januari 1999; Diterima 11 Januari 1999; direvisi 26 Februari 1999; direvisi 26 Februari 1999; diterima 11 Maret 1999. diterima 11 Maret 1999. ;; Tersedia online 24 Juni 1999. online 24 Juni 1999 Tersedia. Abstrak Abstrak Dijelaskan dalam makalah ini adalah biosintesis drimanes defensif di nudibranch dorid. Dijelaskan KESAWAN makalah Suami adalah biosintesis drimanes defensif di dorid nudibranch. Dua populasi geografis yang berbeda moluska termasuk dalam genus Dendrodoris telah dipelajari. Dua Yang berbeda Secara Geografis populasi moluska termasuk genus KESAWAN Dendrodoris telah dipelajari. Sintesis de novo dari 7-deacetoxyolepupuane (2) telah ditunjukkan oleh prekursor radiolabelled pada kedua jenis. The sintesis de novo 7-deacetoxyolepupuane (2) ditunjukkan prekursor Dibuat telah radiolabelled PADA jenis dan kedua. Hasil penelitian konsisten dengan peran penting dari 2 dalam pembentukan drimanes lain baik dalam mantel dan di massa telur dari moluska. Hasil konsisten Peran PENELITIAN parts Artikel Baru Dari 2 pembentukan KESAWAN drimanes Baik KESAWAN Jumlah rak dan di massa Telur Dari moluska. The drimane baru 6--acetoxypolygodial (7) dilaporkan dari kulit ekstrak arborescens Dendrodoris Pasifik. Yang Baru drimane 6--acetoxypolygodial (7) dilaporkan Dari ekstrak kulit arborescens Dendrodoris Pasifik. Strukturnya penjelasan dicapai dengan spektroskopi NMR.

Strukturnya penjelasan dicapai Artikel Baru spektroskopi NMR. Grafis Grafis Abstrak Abstrak Makalah ini melaporkan studi tentang biosintesis terpenoid drimane di nudibranch dorid. Makalah Suami melaporkan studi biosintesis terpenoid Tentang drimane dorid di nudibranch. Percobaan dengan 14 C berlabel prekursor mendukung peran penting dari 2 dalam pembentukan drimanes lain baik di dalam mantel dan di massa telur dari moluska. Percobaan Artikel Baru 14 C prekursor berlabel mendukung Peran parts Dari 2 KESAWAN pembentukan drimanes lain Baik di KESAWAN mantel dan di.

Bioaktif compound dari telur molusca

Abstrak Prospek kimia untuk obat-obatan pada organisme alam (bioprospecting) dapat digunakan sebagai alat untuk konservasi keanekaragaman hayati. Namun, bioprospecting hanya dapat dianggap kompatibel dengan konservasi jika dilakukan dalam lingkungan secara berkelanjutan. Dalam rangka mencegah overcollection dari organisme rentan sangat penting untuk memperoleh pemahaman tentang distribusi lokal dan kelimpahan organisme target. Dalam studi ini, massa telur intertidal moluska menjadi sasaran sebagai sumber baru dari senyawa biologis aktif. Survei fauna molluscan dilakukan pada tanggal 13 terumbu intertidal sepanjang Wollongong Coast, New South Wales, Australia. Secara total, 161 jenis moluska intertidal adalah ditemukan dan massa telur bentik dari 47 spesies diidentifikasi. Hanya 31% dari moluska telah direkam sebelumnya dari survei surut di wilayah ini dan 66% dari spesies dapat dianggap sebagai regional langka. Berulang survei dari 13 terumbu mengungkapkan bahwa keragaman spesies yang dicatat dalam inventaris tunggal wakil keragaman kumulatif terdeteksi. 'Hotspot' keanekaragaman molluscan ditemukan di sisi utara dua tanjung besar (Bass Point dan Bellambi Point), yang ditandai dengan kompleksitas habitat yang tinggi dan berlindung dari aksi gelombang kuat. Tiga tekanan selektif berpotensi dapat menyebabkan evolusi pertahanan kimia di molluscan telur massa: pemangsaan, penyakit dan fouling permukaan. Moluska laut mungkin mengandalkan berbagai strategi alternatif untuk melindungi massa telur mereka dari predator, termasuk perlindungan fisik pada kapsul telur kasar, kamuflase dan cepat embrio pengembangan, serta mekanisme perilaku, seperti merenung dan pengendapan besar massa telur agregat. percobaan makan Predator disediakan bukti pertahanan kimia di lima dari delapan spesies yang diuji. Pada sisi lain, studi observasional memberikan bukti yang menunjukkan bahwa telur molluscan massa secara kimiawi dipertahankan terhadap pengotoran permukaan dengan macroorganisms. Rentang A dari tumbuhan dan epizooites diamati pada permukaan kedua telur berlendir massa dan kapsul telur kasar. Namun demikian, kejadian keseluruhan fouling adalah rendah, mungkin karena alam fana mereka dan kenyataan bahwa sebagian moluska deposit telur massa di bawah batu. Penyakit tampaknya merupakan tekanan selektif yang signifikan menuju evolusi kimia pertahanan di massa telur molluscan. Dua tes digunakan untuk layar telur massa dari moluska laut untuk aktivitas antimikroba terhadap manusia dan laut patogen, sebuah versi modifikasi dari uji Zona tradisional Inhibisi dan Fluorescein Diacetate assay. Kedua tes memiliki persyaratan sampel kecil dan sehingga memungkinkan untuk layar massa telur dari 42 moluska dan empat polychaetes. Aktivitas antimikroba terhadap setidaknya satu patogen manusia ditemukan di telur massa dari 36 spesies, termasuk dua polychaetes dan berbagai moluska. The telur massa dari sejumlah spesies jelas kehilangan aktivitas selama embrio pembangunan. Aktivitas antimikroba juga tampaknya lebih besar di internal matriks, bukan pada permukaan luar dari massa telur molluscan. Permukaan bakteri bisa bertanggung jawab untuk kegiatan diamati pada beberapa spesies tetapi tidak mungkin sumber agen antimikroba dalam kapsul telur kasar, atau telur agar-agar

pita spp Aplysia. Telur massa dari orbita Dicathais dan Juliana Aplysia adalah ditemukan untuk menghambat bakteri laut secara ekologis, serta Gram negatif dan Gram positif patogen bakteri manusia dan ragi Candida albicans. Yang bertanggung jawab untuk aktivitas antimikroba dalam telur massa senyawa umum muricid orbita Dicathais diisolasi menggunakan fraksinasi bioasai-petunjuk. Ini kemudian diidentifikasi dengan spektrometri massa dan proton nuklir magnet spektroskopi resonansi. Tiga senyawa antimikroba dikarakterisasi (tyrindoleninone, tyriverdin dan 6-bromoisatin) dan ini semua prekursor diketahui pewarna kuno Tyrian Purple. Tyrindoleninone adalah yang paling melimpah organik volatile senyawa yang terdapat dalam telur segar dan senyawa ini terbukti menjadi racun bagi bakteri pada konsentrasi 1mg/ml. Sebagai telur berkembang paling, dari tyrindoleninone diubah menjadi tyriverdin, yang ditemukan untuk secara efektif bakteriostatik pada 0. 5 mg / ml tetapi tidak sitotoksik pada 1 mg / ml. Senyawa ini dianggap memimpin obat baru yang bermanfaat. 6-bromoisatin, yang kemungkinan akan menjadi oksidatif artefak yang berasal dari prekursor lain, menunjukkan aktivitas cytolytic ringan terhadap berbagai bakteri. Sebagai larva mulai menetas, sebagian besar tyriverdin itu dikonversi menjadi Tyrian Purple in massa telur. Tyrian Purple tidak menunjukkan adanya aktivitas antimikroba signifikan, meskipun sangat tidak larut dalam media air. Namun demikian, penelitian ini memberikan bukti untuk proses kimia pemasakan pada telur massa orbita Dicathais, yang dapat menyediakan sarana untuk menghindari autotoxicity larva selama penetasan. Ekstrak dari massa telur 23 moluska kemudian diperiksa untuk prekursor dari Tyrian Ungu, serta lainnya agen antimikroba yang potensial, dengan menggunakan gas kromatografi / spektrometer massa. Massa telur dari enam jenis Muricidae ditemukan mengandung precursor Tyrian Purple. Namun, senyawa tidak ditemukan di massa telur spesies dari keluarga lainnya. Berbagai lainnya terkait indoles, serta di-dan tribromoimidazoles / pyrazoles juga ditemukan di telur massa Muricidae. Sebagian besar senyawa ini sebelumnya belum pernah dijelaskan dari sumber alam dan mereka semua bisa berkontribusi pada diamati aktivitas antimikroba dalam telur muricid massa. Massa telur dari Aplysiidae ditemukan mengandung beberapa hidrokarbon Polychlorinated bioaktif dan berbagai rantai

panjang asam lemak tak jenuh. Halogenasi senyawa tidak ditemukan pada telur massa dari spesies lain, meskipun asam lemak bisa sebagian bertanggung jawab atas Aktivitas antimikroba diamati di sebagian besar massa telur gelatin. Sebuah keragaman yang tinggi senyawa organik yang mudah menguap ditemukan di massa telur molluscan, tetapi lebih lanjut kerja diperlukan untuk mengidentifikasi komponen aktif. Jelas, bioprospecting dapat berkontribusi untuk konservasi melalui pengembangan komprehensif spesies persediaan. Bioprospecting dapat dilakukan dengan minimal dampak terhadap lingkungan dan penemuan senyawa bioaktif baru menyediakan insentif bagi konservasi. Semua laut moluska bahwa deposit massa telur benthik

memiliki nilai potensi farmasi dan oleh karena itu upaya harus dilakukan untuk menghemat baik mereka dan habitat alami mereka. Bass Point akan menjadi situs yang sesuai untuk kawasan lindung di wilayah pasang surut Wollongong. 1999

Bioactive molluscan resources and their conservation: biological and chemical studies on the egg masses of marine molluscsKirsten BenkendorffUniversity of WollongongResearch Online is the open access institutional repository for the University of Wollongong. For further information contact Manager Repository Services: morgan@uow.edu.au.

Recommended

University of Wollongong

Research Online

ORIGINAL ARTIKELABSTRAK

Marine moluska dari Muricidae keluarga adalah sumber obat homeopati Murex, yang digunakan untuk mengobati kisaran kondisi, termasuk kanker. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengevaluasi dalam bioaktivitas massa telur vitro ekstrak Australia muricid Dicathais orbita, dibandingkan dengan obat Murex, melawan kanker manusia dan sel-sel limfoma. Cair kromatografi ditambah dengan spektrometri massa (LC-MS) digunakan untuk mengkarakterisasi komposisi kimia dari ekstrak dan obat homeopati, dengan fokus pada indoles brominasi biologis aktif. MTS (garam tetrazolium) pengujian digunakan kolorimetri untuk menentukan efek pada viabilitas sel, sedangkan nekrosis dan induksi apoptosis diteliti menggunakan flow cytometry (propidium iodida dan Annexin-V pewarnaan, Resp.). Sel diobati dengan konsentrasi yang

bervariasi (1-0.01mg/mL) minyak mentah dan semi-murni ekstrak atau preparat (encer 1M dan terkonsentrasi 4mg/mL) dari obat Murex (4 jam). Obat Murex menunjukkan sedikit aktivitas biologis terhadap mayoritas jalur sel diuji. Sebaliknya, telur orbita D. ekstrak menurun secara signifikan viabilitas sel di sebagian besar jalur sel karsinoma. Arus cytometry mengungkapkan ekstrak ini menyebabkan nekrosis pada sel-sel kanker kolorektal HT29, sedangkan apoptosis diinduksi dalam sel Jurkat. Temuan ini menyoroti potensi biomedis dari Muricidae ekstrak di pengembangan terapi alami untuk pengobatan tumor neoplastik dan limfoma.1. Pengantar Banyak metabolit sekunder memiliki biologi laut kegiatan dengan implikasi untuk aplikasi sebagai antibiotik, antiparasit, antivirus dan antikanker [1-4]. Laut moluska merupakan sumber setidaknya empat struktural yang berbeda antikanker agen, yang saat ini dalam tahap II dan III uji klinis [5, 6]. The Muricidae (Neogastropoda: Mollusca) adalah keluarga kosmopolitan dari laut predator gastropoda yang secara historis dikenal karena produksi dari (Gambar 1) pewarna ungu kuno Tyrian. Pewarna utama pigmen, 6,6-dibromoindigotin? (Gambar 1 (a)) adalah yang pertama produk alami laut dilaporkan dalam literatur dan telah menarik kepentingan ilmiah substansial [7-11]. Tyrian ungu dihasilkan dari sekresi kelenjar hypobranchial moluska ini, setelah serangkaian enzimatik, oksidatif dan reaksi fotokimia [9, 11] dari ester kolin prekursor garam sulfat tyrindoxyl [9, Gambar 1 (b)]. Tyrian Ungu dan prekursor antara perusahaan indole brominasi (Angka 1 (c) -1 (e)) juga ditemukan dalam massa telur muricid [8, 11-13], di mana mereka dianggap kimiawi membela mengembangkan larva terhadap infeksi mikroba. Pendahuluan studi tentang ekstrak massa telur menganjurkan intermediate prekursor memiliki aktivitas antikanker [11, 14], di samping dengan aktivitas antibakteri yang telah dijelaskan sebelumnya [8]. Ini unik metabolit sekunder bioaktif dalam kimia kelas alkaloid indol dari mana 60% dari semua obat berasal [3]. Prekursor menengah brominasi 6-bromo-2methylthioindolin-3-satu (tyrindoleninone, Gambar 1 (c)) telah telah diidentifikasi sebagai obat antikanker memimpin berguna dengan jelas spesifisitas terhadap sel-sel limfoma (LC50 4 pM) dibandingkan dengan yang baru diisolasi, sel-sel mononuklear manusia (LC50 195 pM) [14]. Namun, sintesis zat ini memiliki telah bermasalah karena ketidakstabilan dan oksidasi cepat

dari prekursor dan produk akhir. Namun demikian, nomor yang terkait dengan derivatif isatin diganti telah disintesis dan diuji untuk aktivitas antikanker terhadap berbagai manusia lini sel kanker [14]. The isatins disintesis termasuk 6 bromoisatin (Gambar 1 (f)), sebuah oksidatif alam dengan-produk Tyrian ungu sintesis, yang juga ditemukan dalam Muricidae telur massa [8, 12]. Brominasi ditemukan untuk meningkatkaN Gambar 1: Australianmuricid Dicathais orbita digambarkan dengan kapsul telur yang baru diletakkan, yang merupakan sumber biologis aktif sekunder metabolit. (a) 6,6-Dibromoindigotin, (b) garam sulfat tyrindoxyl, di mana X = ester kolin, (c) tyrindoleninone; (d) tyrindoleninone; (e) tyriverdin, (f) 6-bromoisatin dan (g) 6,6-dibromoindirubin.

aktivitas antikanker ini isatins dan selektivitas lebih besar adalah diidentifikasi terhadap sel leukemia dan limfoma di payudara, garis kanker prostat dan kolorektal sel [14]. sekresi Dye [10] dan ekstrak dari hypobranchial [9] dan reproduksi kelenjar muricids laki-laki [15] telah juga telah ditunjukkan untuk mengandung isomer struktural Tyrian ungu, 6,6-dibromoindirubin? (Gambar 1 (g)). Bioassayguided fraksinasi sekresi kelenjar hypobranchial memiliki diidentifikasi isomer ini sebagai inhibitor protein kinase manjur [16, 17]. Dengan selektif menargetkan glikogen sintase kinase3 (GSK-3), indirubin senyawa ini efektif menghambat proliferasi sel [16, 17]. Indirubin derivatif juga telah terbukti dapat menghambat Stat3 sinyal, mendorong apoptosis di payudara manusia dan sel-sel kanker prostat [18]. Mereka juga menekan tumor necrosis factor (TNF)-induced NFkB aktivasi pada leukemia manusia dan adenokarsinoma paru-paru sel [19] dan signifikan di blok proliferasi karsinoma paru-paru, lambung karsinoma dan sel fibrosarcoma baris [20]. Selanjutnya, 5-metil-indirubin menampilkan antitumor kegiatan di paru-paru, ginjal dan prostat dalam model vivo untuk kanker manusia [21]. Terutama, indirubin juga telah diidentifikasi sebagai bahan aktif dalam tradisional Cina obat herbal Danggui Luhui Wan digunakan untuk mengobati leukemia [22]. Selanjutnya obat Murex (purpurea) (homeopati disebut sebagai "obat Murex") juga berasal dari pewarna sekresi dari Muricidae dan telah digunakan sejak tahun 1800-an [23]. Obat Murex terdaftar di Bahan homeopati Medica untuk digunakan terhadap berbagai

"Masalah perempuan" termasuk kanker rahim dan payudara [24, 25]. Dalam kebanyakan kasus ada sedikit data ilmiah yang tersedia untuk mendukung aktivitas biologis obat homeopati dan hanya sedikit telah diuji untuk keamanan dan keefektifan penggunaan metodologi yang ketat [26, 27]. Namun demikian, beberapa homeopati obat-obatan baru-baru ini telah diuji dan terbukti memiliki anti-kanker efek (misalnya, [28] dan referensi di dalamnya). The jelas aktivitas biologis ekstrak organik berasal dari yang Muricidae (lihat [8, 11, 16, 29]; Gambar 1) menunjukkan bahwa ada juga mungkin ada beberapa dasar kimia pada homeopati penerapan obat Murex. Di sini kita menyelidiki senyawa hadir dalam Murex obat dan membandingkannya dengan sekunder brominasi metabolit diidentifikasi pada ekstrak kasar yang diperoleh dari telur massa orbita Dicathais, spesies umum Muricidae terletak di sepanjang pantai beriklim Australia dan Selandia Baru [30]. A semi-murni ekstrak juga disiapkan dari massa telur mentah untuk berkonsentrasi Tyrian ungu prekursor, dalam tyrindoleninone tertentu (Gambar 1 (c)). The anti-proliferasi dan efek sitotoksik minyak mentah dan semipurified telur ekstrak, serta obat Murex adalah dibandingkan pada berbagai manusia, limfoma karsinoma dan normal mononuklear sel.

3. Hasil 3.1. Analisis Kimia. LC-MS analisis chloroformsoluble ekstrak dari massa telur orbita D. mengungkapkan lima puncak sesuai dengan indoles brominasi (Gambar 2). Yang dominan senyawa hadir dalam ekstrak kasar (Gambar 2 (a)) membukukan puncak HPLC di 6,4 menit dan ion utama pada m / z 224, 226, yang dapat dikaitkan dengan ion pseuomolecular [MH] + 6-bromoisatin (Gambar 1 (f), massa molekul 225, 227 untuk Br79, Br81). Lain puncak dominan terjadiGambar 2: LC-MS analisis menunjukkan kromatogram perwakilan dari array dioda UV pada 300 nm (a) Ekstrak kasar dari telur kapsul orbita D., (b) Semi-dimurnikan fraksi dari minyak mentah ekstrak dan (c) obat Murex. Puncak sesuai dengan brominasi indoles, di mana b, tyrindoxyl sulfat; c: tyrindoleninone; d: tyrindolinone; e: tyriverdin; f: 6-bromoisatin. Perhatikan bahwa karena deteksi rendah dari setiap senyawa dalam obat Murex terkonsentrasi sampel, y-sumbu memiliki intensitas sekitar 10 kali lebih sedikit dari telur ekstrak.

di 11.3min dengan ion utama di ESI-MS pada m / z 255, 257 sesuai dengan massa molekul tyrindoleninone (Gambar 1 (c)) dan puncak yang lebih kecil sebesar 9,5 menit telah m / z 303, 305 sesuai dengan berat molekul tyrindolinone

[6-bromo-2 ,2-dimethylthioindolin-3-one] (Gambar 1 (d)) suatu metana tiol aduk dari tyrindoleninone. Sebuah puncak tambahan 12.1min terdaftar di sebuah cluster isotop pada m / z 513, 515, 517 (dalam rasio tinggi puncak 1: 2: 1) sesuai dengan ion molekul tyriverdin (MH +; Br79 Br79, Br79 Br81, Br81 Br81). kembar tiga fragmen tambahan ion (menunjukkan dua bromines masih menempel) yang berpusat di sekitar m / z 465 (Br79 Br81) dari penghapusan kelompok tiol metana tunggal, dan jurusan puncak pada m / z 419 [Br79 Br81 (MH-2SCH3) +] mengkonfirmasikan ini puncak sebagai tyriverdin (Gambar 1 (e)). A minor KCKT puncak di 5.1min di ekstrak kasar (Gambar 2 (a)) sesuai dengan tyrindoxyl sulfat (Gambar 1 (b)), dengan besar ion di ESI-MS pada m / z 338, 336. LC-MS analisis menunjukkan bahwa semi-pemurnian D. telur orbita ekstrak (Gambar 2 (b)) dengan kromatografi silika berhasil dalam berkonsentrasi tyrindoleninone (c). Relatif proporsi tyrindoleninone meningkat dari 31,12% dari ekstrak kasar (Gambar 2 (a)) untuk 61,72% dari semipurified fraksi (Gambar 2 (b)) berdasarkan analisis spektral serapan pada 300 nm. Ada penurunan nilai dalam proporsi relatif dari 6-bromoisatin (f) dari 52,97% minyak mentah ekstrak (Gambar 2 (a)) untuk 18,88% pada semipure yang fraksi (Gambar 2 (b)). Tyrindolinone (d) dan tyriverdin (E) tetap hadir sebagai komponen kecil dalam semi-murni fraksi (Gambar 2 (b)). Sulit mendaftarkan senyawa dari puncak menyerap dalam kisaran UV-Vis dari kromatogram array dioda dari obat Murex terkonsentrasi. Namun, setelah mengurangi skala sumbu y untuk mengintensifkan puncak, dua brominated senyawa tersebut terdeteksi pada 300nm (Gambar 2 (c)). Pada 6.3 min, 6-bromoisatin (f, M + 225, 227) terdeteksi mewakili proporsi yang relatif (59,35%) dari terpadu daerah dari semua puncak mendaftar pada 300 nm. Seorang rekan eluting puncak sebesar 5,4 menit diidentifikasi sebagai sulfat tyrindoxyl (b, M + = 338, 336), yang mewakili sekitar 9,1% dari terkonsentrasi obat Murex ekstrak. Tak satu pun dari puncak lainnya dihasilkan ion cluster isotopik karakteristik brominasi senyawa atau ion molekul sesuai dengan indoles sebagai sebelumnya dicatat dalam Muricidae ekstrak [9, 12, 15]. 3.2. Efek pada Viabilitas Cell. Para DMSO solusi dari

mentah-larut kloroform ekstrak dari massa telur orbita D. ditemukan untuk mengurangi produksi relatif formazan dengan kontrol pelarut dalam semua lini sel pada konsentrasi 1mg/mL, dengan efek tambahan pada konsentrasi yang lebih rendah dengan semua tumor padat dan sel-sel limfoma U937 (Gambar 3 (a)). Pada konsentrasi tertinggi 1mg/mL, pengurangan rata-rata sebesar 39,7% viabilitas sel diamati untuk untransformed IEC-6 sel (Gambar 3 (a)), dibandingkan dengan rata-rata 78,5% pengurangan HT29 karsinoma kolorektal dan 66,7% rata-rata pengurangan Caco-2 viabilitas sel karsinoma kolorektal. Penurunan viabilitas sel juga terjadi dalam padat tumor diinkubasi dengan ekstrak kasar 0.5mg/mL, yang menyebabkan lebih dari 70% penurunan produksi formazan untuk HT29 sel dan penurunan lebih dari 40% untuk Caco-2 dan MCF7 sel. pengurangan lebih lanjut viabilitas sel lebih dari 20% diamati pada 0,01 mg / mL sel HT29, serta dalam MCF7 sel diinkubasi dengan baik 0.1mg/mL dan 0.01mg/mL ekstrak. dosis efek yang signifikan diamati pada semua padat baris sel tumor (P 50%) saat diinkubasi dengan 0.1-1mg/mL dari ekstrak murni semi(Gambar 3 (b)), Namun, aktivitas kurang diamati terhadap karsinoma kolorektal HT29 lini sel (Gambar 3 (b)). Tidak ada pengaruh dosis signifikan telah diamati dengan semi-murni ekstrak terhadap salah satu tumor padat (P> .05). Pengobatan sel T limfoma dengan kasar ekstrak mengakibatkan pengurangan viabilitas sel lebih dari 50% pada 1 dan 0.5mg/mL (Gambar 3 (a)). Sebagai perbandingan, pengobatan MNC normal hanya menghasilkan pengurangan kecil di viabilitas sel pada konsentrasi tinggi (1 mg / mL, 30,8% pengurangan). Berbeda dengan baris sel yang patuh, tidak signifikan efek dosis yang diamati untuk Jurkat dan U937 sel, tetapi, variasi yang relatif besar yang diamati antara

ulangi pengujian dan ulangan (Gambar 3 (a)). Lebih kuat efek pada viabilitas sel ditemukan dengan semi-murni ekstrak terhadap kedua garis limfoma sel (Gambar 3). Untuk sel Jurkat, ada penurunan yang signifikan dalam sel proliferasi oleh hampir 80% apabila diobati dengan semipurified ekstrak 1 mg / mL. Lebih lanjut efek dari semipurified ekstrak diamati pada konsentrasi yang lebih rendah sebesar 0,01 dan 0,1 mg / mL, dengan kurang dari 80% dari sel sisa layak (Gambar 3 (b)). Dalam U937 sel, penurunan viabilitas sel menjadi sekitar 50% dari kontrol pelarut yang dihasilkan setelah inkubasi dengan ekstrak 0,1 mg semi-murni / mL, dibandingkan dengan viabilitas sel lebih dari 90% dengan minyak mentah ekstrak pada konsentrasi ini (Gambar 3). Viabilitas sel U937 sel-sel secara signifikan dikurangi dengan pengobatan dengan semipurified ekstrak di 0.1mg/mL dibandingkan dengan 0,01 mg / mL (P = 0,0001). Tidak ada pengurangan viabilitas sel terlihat di sebagian besar sel baris diobati dengan obat encer Murex (Gambar 3 (c)). Demikian pula, tidak ada efek terlihat dengan Murex terkonsentrasi obat (4 mg / mL), dengan pengecualian dari histiocytic limfoma sel baris U937, di mana kelangsungan hidup sel berkurang sebesar 35% (Gambar 3 (c)). Viabilitas sel sel adalah U937 secara signifikan lebih rendah setelah perawatan dengan terkonsentrasi produk dibandingkan dengan obat encer (P = 0,004). Sebuah ringan peningkatan jumlah produksi formazan diamati di HT29, Caco-2 dan sel MCF-7 diperlakukan dengan melemahkan Murex obat relatif terhadap kontrol pelarut (rata-rata> 100%, Gambar 3 (c)), walaupun ada perbedaan yang signifikan secara statistik dalam kelangsungan hidup sel terdeteksi relatif terhadap terkonsentrasi perawatan.Gambar 3: Persentase viabilitas sel dari berbagai jalur sel padat dan haemopoietik terbuka selama 4 jam untuk berbagai konsentrasi (a) mentah ekstrak, (b) fraksi semi-murni (berkonsentrasi senyawa tyrindoleninone) dari orbita D. dan (c) obat Murex. Viabilitas sel ditentukan oleh absorbansi persen pada 490nm relatif terhadap kontrol pelarut, berdasarkan konversi garam tetrazolium untuk formazan di proliferasi sel MTS assay. Sel dirawat di rangkap tiga dan pengujian yang diulang pada kesempatan terpisah, ditampilkan sebagai rata-rata SE ulangi percobaan.

3.3. Inisiasi Nekrosis dan Apoptosis. Arus cytometric analisis menunjukkan bahwa sel Jurkat diperlakukan dengan 1 mg / mL DMSO solusi minyak mentah-larut kloroform ekstrak 4h (Gambar 4 (d)) menjalani induksi dari nekrosis baik (54,89% PI positif) dan apoptosis (44,95% Annexin-V positif)

dibandingkan dengan kontrol perlakuan (11% Annexin-V positif, 8,07% positif PI, Gambar 4 (a)). Sebaliknya, HT29 sel diperlakukan dengan solusi DMSO kloroform-larut ekstrak kasar yang didominasi PI positif (Angka 5 (b) -5 (d)), menunjukkan bahwa mereka sedang mengalami nekrosis. Pada 1mg/mL, lebih dari 80% dari sel HT29 adalah PI positif (Gambar 5 (d)), dibandingkan dengan 11,68% dari kontrol pelarut sel (Gambar 5 (a)). Peningkatan proporsi PI sel positif juga diamati pada sel HT29 diperlakukan dengan 0,5 (Gambar 5 (c)) dan 0.1mg/mL (Gambar 5 (b)) dibandingkan dengan kontrol pelarut (Angka 5 (a) dan 6 (b)), sedangkan suatu peningkatan sel-sel PI Jurkat positif hanya diamati pada konsentrasi tertinggi 1mg/mL (Gambar 6 (a)). Rata-rata, hampir dua kali lipat jumlah sel Jurkat adalah Annexinpositif pada konsentrasi rendah 0.5mg/mL, V ketika dibandingkan dengan kontrol pelarut (Gambar 6 (a)), sedangkan tidak ada jelas meningkatkan proporsi Annexin-V sel positif diamati untuk sel HT29 dirawat di setiap konsentrasi telur ekstrak (Gambar 6 (b)). 4. Diskusi Penelitian ini menegaskan adanya indoles brominasi dengan antikanker kegiatan di ekstrak dari massa telur dari Australia moluska D. orbita. Meskipun deteksi jejak jumlah dua indoles brominated dalam komersial tersedia Murex obat, tidak ada efek signifikan terhadap viabilitas sel diamati dengan ekstrak produk ini komersial di berbagai jalur sel, dengan pengecualian ringan pengurangan baris sel limfoma histiocytic U937 setelah pengobatan dengan produk terkonsentrasi. Akibatnya, antikanker aplikasi obat alami ini tidak dapat dibuktikan dengan penelitian kami. Namun demikian, spektrum yang luas penurunan viabilitas sel dalam tumor padat dan limfoma Gambar 4: analisis aliran Perwakilan cytometric sel T Jurkat sel-sel limfoma (1 105) diobati dengan: (a) DMSO saja (konsentrasi akhir 2%), (b) 0,1 mg / mL ekstrak kasar; (c) 0,5 mg / mL ekstrak kasar dan (d) 1 mg / mL ekstrak kasar fromD. orbita selama 4 jam FL1 (x-axis) menunjukkan Annexin-V sel positif, FL2 (y-axis) menunjukkan propidium iodide (PI) sel positif. Sel dirawat di duplikat, dual diwarnai dengan PI dan Annexin-V-FITC dan dianalisis menggunakan aliran cytometer FACscan dan software FlowJo analisis. baris sel telur kami diperlakukan dengan kasar dan semi-murni ekstrak menyiratkan bahwa ada potensi untuk mengoptimalkan alami obat antikanker dari Muricidae. Ekstrak kasar

ditemukan memiliki efek yang berbeda tergantung pada sel fenotipe, baik inducing apoptosis dan nekrosis di Jurkat sel baris, sedangkan efek kuat nekrotik diamati dengan sel HT29 karsinoma. Efek Anti-proliferasi pada crude ekstrak yang diperoleh dari massa telur orbita D. terutama dilihat di kanker berasal baris sel, dengan aktivitas kurang terhadap untransformed tikus usus kecil lini sel epitel IEC-6 dan baru terisolasi MNC. Dosis ini tergantung spesifisitas terhadap garis sel kanker berubah berguna karena sitotoksisitas non-spesifik terhadap sel sehat adalah utamaGambar 5: Analisis aliran Perwakilan cytometric dari HT29 sel karsinoma kolorektal (1 105) diobati dengan: (a) DMSO saja (final konsentrasi 2%), (b) 0,1 mg / mL ekstrak kasar; (c) 0.5mg/mL ekstrak kasar dan (d) kasar 1mg/mL ekstrak dari orbita D. selama 4 h. FL1 (x-axis) menunjukkan Annexin-V sel positif, FL2 (y-axis) menunjukkan propidium iodide (PI) sel positif. Sel dirawat di duplikat, dual diwarnai dengan PI dan Annexin-V-FITC dan dianalisis menggunakan aliran cytometer FACscan dan software FlowJo analisis. keterbatasan dalam pengembangan banyak produk alami laut sebagai antikanker agen [4, 33]. Semi-pemurnian telur ekstrak berhasil meningkatkan konsentrasi relatif dari tyrindoleninone relatif dengan yang 6-bromoisatin. Namun, ini mengakibatkan meningkatnya aktivitas usus jinak terhadap sel epitel dan tidak konsisten meningkatkan potensi terhadap semua baris sel tumor padat diuji. Hal ini menunjukkan bahwa garis-garis sel tertentu (misalnya, HT29) relatif tahan terhadap efek anti-proliferasi tyrindoleninone, dibandingkan dengan efek sitotoksik diketahui 6-bromoisatin [11, 14], sedangkan jalur sel lain (misalnya, IEC-6 dan limfoma sel) lebih rentan terhadap konsentrasi yang lebih tinggi tyrindoleninone. Ini diamati perbedaan lini sel spesifisitas mungkin menunjukkan senyawa bioaktif dalam jalur target ekstrak alternatif tergantung pada sel fenotipe, seperti yang disarankan oleh Nguyen andWells [34]. Hasil penelitian kami menunjukkan bahwa ada potensi untuk mengoptimalkan komposisi dan pengiriman Muricidae ekstrak untuk perawatan kanker yang berbeda dengan berkonsentrasi yang berbeda brominasi indoles. Terkuat efek pada viabilitas sel

Gambar 6: Rata-rata ( SE) proporsi populasi sel terjaga keamanannya dari ulangi percobaan flow cytometry untuk (a) Jurkat (T limfoma sel)

sel dan (b) HT29 (karsinoma kolorektal) sel menunjukkan persentase sel positif bagi PI dan Annexin-V. menggunakan D. kasar orbita ekstrak yang diberikan terhadap HT29 sel kanker usus besar. Hal ini berbeda dengan sebelumnya studi tentang efek antikanker turunan indol, dimana Vine et al. [14] melaporkan efek lebih besar pada sel-sel limfoma dibandingkan dengan tumor yang solid dalam berbagai isatin sintetik derivatif dan Hoessel et al. [22] menemukan HT29 sel untuk sensitif terhadap monoxime indirubin-3?-. Yang relatif kuat hambatan selektif diamati terhadap karsinoma kolon diperlakukan dengan kasar orbita D. ekstrak adalah tertentu bunga mengingat orbita D. adalah spesies edible moluska laut. The indoles brominasi bioaktif yang ditemukan ekstrak kloroform-larut telur juga hadir dalam hypobranchial dan organ-organ reproduksi dewasa D. orbita [15] dan tampaknya ditahan setelah merebus siput (KB, data tidak dipublikasikan). Para Muricidae yang sangat memancing sebagai sumber protein di banyak negara di dunia [35] menyarankan berpotensi untuk dikembangkan sebagai makanan obat. Dalam beberapa budaya (misalnya, Asia), Muricidae sering dikonsumsi utuh, dengan kelenjar hypobranchial utuh (KB, pribadi pengamatan), sedangkan dalam kasus lain (misalnya, Mediterania) kelenjar hypobranchial biasanya dibuang bersama dengan yang visceral organ. Kami mencicipi kelenjar hypobranchial dari orbita D. menunjukkan bahwa itu adalah pahit dan daun mati rasa efek pada mulut, kemungkinan besar karena otot santai kolin ester yang juga diproduksi di organ ini [10, 36]. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk menentukan apakah senyawa bioaktif dari Muricidae yang beracun dan Ketersediaan hayati setelah pencernaan. Berbeda dengan karsinoma HT29, kegiatan yang lebih besar adalah diamati terhadap U937 dan sel-sel limfoma Jurkat menggunakan semi-ekstrak dimurnikan. Namun demikian, tingkat aktivitas diamati agak mengecewakan didasarkan pada sebelumnya penelitian [11], di mana ekstrak orbita telur D. dilaporkan menyebabkan lebih dari 80% penurunan viabilitas sel sel U937 setelah 1 jam pada 0.01mg/mL inkubasi. Selain itu, tingkat aktivitas yang diamati di semi-murni ekstrak adalah tempat dalam urutan LC50 4 pM diprediksi oleh Vine et al. [14] untuk tyrindoleninone. Perbedaan ini dapat terjadi karena variabilitas parameter pertumbuhan budaya yang berbeda dari sama cell line [37, 38] atau variabilitas dalam proporsi bioaktif senyawa hadir di ekstrak dari massa telur. Hal ini juga kemungkinan bahwa plastisiser mencemari pada sebelumnya penelitian [14] bertindak sinergis dengan tyrindoleninone dengan meningkatkan kelarutan dan atau stabilitas di media.

Hal ini akan meningkatkan bioavailabilitas kepada sel-sel di rendah konsentrasi, dibandingkan dengan kuat lipophylic sifat ekstrak kita, yang dapat menyebabkan pembentukan misel di media air. Upaya oleh Vine et al. [14] telah gagal mensintesis tyrindoleninone di laboratorium, karena ketidakstabilan prekursor dengan eksposur O2. Akibatnya, akan sulit untuk menetapkan dosis yang mematikan benar efektif atau konsentrasi hambat minimum ini aktif biologis produk alam laut. Kegiatan diferensial orbita D. ekstrak terhadap padat tumor dan sel suspensi bisa memiliki implikasi yang berguna untuk memahami cara kerja dan khususnya, apakah senyawa bioaktif efektif menginduksi diprogram sel kematian. Nguyen dan Wells [34] menemukan apoptosis yang tidak diinduksi di semua lini sel sementara efek senyawa menyelidiki pada sitokrom c-induced caspase aktivasi dan disebabkan ini untuk kemungkinan bahwa diferensial ekspresi dari berbagai pro-dan anti-apoptosis faktor dapat memberikan strategi untuk selektivitas. Menarik Temuan dari analisis aliran cytometry kami ada peningkatan dalam apoptosis pada sel Jurkat diperlakukan dengan semua konsentrasi ekstrak relatif terhadap kontrol pelarut. Namun, HT29 diperlakukan terutama sel mengalami nekrosis dengan sedikit peningkatan positif Annexin-V. Hal ini konsisten dengan laporan sebelumnya bahwa apoptosis karakteristik untuk sel limfoid, tetapi mode signifikan kematian sel tumor padat banyak [39]. Efek yang paling mungkin nekrotik dikaitkan dengan 6-bromoisatin, senyawa dominan dalam kasar ekstrak kloroform-larut (Gambar 7), seperti sebelumnya penelitian telah menunjukkan perilaku sitotoksik brominasi isatin derivatif pada konsentrasi yang lebih besar dari 10 mg / mLGambar 7: Ekstrak Kloroform dari massa telur orbita D. mengandung setidaknya dua indoles brominasi dengan aktivitas anti-kanker yang bisa dimurnikan oleh chromotography silika. Fraksi oranye berisi tyrindoleninone, yang diperkirakan untuk menginduksi apoptosis pada sel-sel limfoma, sedangkan senyawa kuning lebih polar adalah cytotoxin 6-bromoisatin, yang menyebabkan nekrosis pada limfoma dan tumor solid baris sel. [14]. Tidak jelas mengapa Jurkat sel tampaknya kurang rentan untuk efek sitotoksik, meskipun semi-pemurnian ekstrak untuk mengurangi bromoisatin relatif terhadap tyrindoleninone bisa mengurangi efek nekrotik pada kedua saluran sel (Gambar 7). Penyelidikan lebih lanjut modus tindakan ekstrak kita semi-dimurnikan dan / atau terisolasi bioaktif metabolit sekunder diperlukan, untuk menentukan

jalur seluler ditargetkan oleh senyawa ini. Menggunakan analisis LC-MS kami mengidentifikasi adanya 6 bromoisatin dan melacak jumlah sulfat tyrindoxyl di yang Murex obat. Kehadiran sulfat tyrindoxyl menegaskan obat Murex sebagai berasal dari hypobranchial kelenjar Muricidae, sebagai senyawa ini pertama kali dilaporkan dari orbita D. [40] dan hanya kemudian dilaporkan dari spesies lain dalam keluarga yang sama moluska [9]. Namun, meskipun fakta bahwa sekresi ini bersumber dari "sekresi ungu", Purple Tyrian pigmen 6,6?-dibromoindigotin dan biologis aktif struktur isomer 6,6-dibromoindirubin,? tidak terdeteksi. Hal ini mungkin disebabkan oleh hal tdk dpt memecahkan hidrofobik ini senyawa dalam 20% etanol berair, yang merupakan pengiriman agent yang digunakan dalam produk homeopati. Kehadiran 6 bromoisatin menyiratkan bahwa setidaknya beberapa sulfat tyrindoxyl telah mengalami pembelahan enzimatis atau hidrolisis asam dan oksidasi untuk memungkinkan pembentukan produk akhir [9]. Tapi meskipun kehadiran 6-bromoisatin, kami mengamati ada signifikan pengurangan viabilitas sel di salah satu padat tumor dan hanya sedikit penurunan dalam satu baris sel limfoma diuji dengan menggunakan obat Murex terkonsentrasi. Akibatnya, 6-bromoisatin tidak harus hadir dalam jumlah cukup obat Murex mengerahkan efek yang kuat, mungkin karena pengenceran dengan senyawa lain yang tidak bisa terdeteksi di LC-MS. Sebelumnya kimia studi tentang homeopati solusi telah menunjukkan bahwa hasil sering tidak dapat direproduksi [41]. Demikian pula, kami LC-MS pada batch yang berbeda dari obat Murex ditunjukkan variabilitas dalam deteksi 6-bromoisatin (data tidak ditampilkan), walaupun semua kita tes dilakukan pada batch yang berisi maksimal konsentrasi senyawa ini seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2 (c). Homeopathic praktisi sering resep obat dalam dilusi yang sangat tinggi, termasuk pengenceran dimana tidak satu molekul zat mulai hadir ("Ultramolecular" pengenceran) [42]. Oleh karena itu, dalam banyak kasus anekdot laporan tentang manfaat pengobatan homeopati mungkin disebabkan oleh efek plasebo. Homeopati adalah diambil dari prinsip pusat memperlakukan seperti dengan seperti [42] dan terutama, ada sedikit peningkatan (non-signifikan) dalam proliferasi sel tumor padat diobati dengan melemahkan obat. Namun demikian, efek ini tidak meningkat dalam produk terkonsentrasi, seperti yang diharapkan untuk promotor ringan replikasi sel. Akibatnya, hasil kami menyarankan

bahwa penggunaan obat Murex tetap kebenarannya sebagai obat homeopati alami untuk pengobatan kanker. Mengingat bahwa aplikasi utama dari obat Murex merupakan untuk masalah Perempuan, penelitian terus-menerus kami akan terus untuk mengeksplorasi efek terhadap proliferasi sel dan hormon produksi pada kanker rahim dan sel granulosa. Di sini kita telah mengidentifikasi indoles brominasi bioaktif di Murex obat yang tersedia secara komersial dan ekstrak dari kapsul telur segar dari orbita D. muricid Australia. Konsentrasi obat Murex tidak signifikan mengurangi viabilitas sel dalam alat tes proliferasi sel metabolisme, di sebagian besar jalur sel diuji. Sebaliknya, baik mentah dan ekstrak semi-murni signifikan mengurangi proliferasi dalam berbagai tumor padat dan garis limfoma sel. Yang terkuat kegiatan anti-proliferasi di ekstrak kasar diamati terhadap karsinoma usus besar HT29 dan flow cytometry mengungkapkan nekrosis meningkat secara signifikan dibandingkan dengan perlakuan kontrol setelah hanya 4 jam Ekstrak kasar ditemukan menginduksi apoptosis dan nekrosis pada sel T Jurkat sel-sel limfoma (Gambar 7) dan semi-pemurnian ekstrak untuk berkonsentrasi tyrindoleninone menghasilkan efek peningkatan pada sel viabilitas dari kedua garis limfoma sel diuji dalam uji MTS. Hasil ini menunjukkan potensi untuk mengoptimalkan bioaktif muricid ekstrak untuk dikembangkan sebagai obat alternatif untuk pengobatan kanker.

Abstrak Kami melaporkan peran defensif diduga untuk prekursor ungu Tyrian dalam massa telur dari muricid Australia, Dicathais orbita. Massa telur segar mengandung proporsi yang tinggi tyrindoleninone, yang bereaksi membentuk tyriverdin dan kemudian Tyrian ungu dan 6-bromoisatin sebagai telur berkembang dan menetas larva. Pengujian antimikroba mengungkapkan bahwa tyrindoleninone adalah racun bagi kedua patogen laut dan manusia pada konsentrasi 1 mg / ml. Tyriverdin menghambat pertumbuhan dua patogen laut, serta ragi Candida albicans pada 0,001 mg / ml dan efektif bakteriostatik pada 0,0005 mg / ml terhadap tiga bakteri patogen manusia. Tyriverdin tampaknya tidak signifikan melisiskan sel mikroba. 6-Bromoisatin

memiliki sifat antimikroba ringan, sedangkan Tyrian ungu menunjukkan tidak ada aktivitas yang signifikan. Sifat antimikroba dari senyawa dan perubahan dalam kehadiran mereka selama perkembangan telur berkorelasi dengan pemasakan pada massa telur orbita D.. Ini adalah laporan pertama dari kimia pematangan telur dalam lingkungan laut.

POTENTIAL ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF MARINE MOLLUSCS FROM TUTICORIN, SOUTHEAST COAST OF INDIA AGAINST 40 BIOFILM BACTERIA

Abstrak Metanol: air (1:1), metanol: diklorometana (1:1) dan ekstrak aseton moluska yang terdiri dari 77 seluruh tubuh, empat tinta, empat opercula, 10 massa telur, dan 10 kelenjar pencernaan diskrining untuk aktivitas antimikroba terhadap bakteri biofilm laut . Metanol: air (1:1) ekstrak seluruh tubuh albicilla Nerita dan oryzarum Nerita menunjukkan aktivitas hambat luas spektral terhadap 93% dan 95% dari 40 bakteri biofilm. Telur massa dari 10 gastropoda menunjukkan aktivitas terhadap lebih dari seperempat dari bakteri biofilm. Ekstrak metanol virgineus Chicoreus, massa Chicoreus ramosus telur, dan aseton ekstrak massa telur rapiformis Rapana menunjukkan aktivitas antibakteri spektrum luas terhadap semua 40 strain bakteri biofilm. Kegiatan dalam massa telur gastropoda itu terlokalisasi untuk matriks internal mereka. Secara keseluruhan skrining menunjukkan aktivitas di 38,1% dari ekstrak metanol diikuti oleh 13,3% metanol: air, 12,4% metanol: diklorometana, dan 3,8% dari ekstrak aseton. Gastropoda menunjukkan aktivitas yang baik bila dibandingkan dengan kerang dan cumi.

Indole Derivatives from the Egg Masses of Muricid MolluscsAbstrak: Berbagai turunan indol brominasi ditemukan di massa telur dari enam jenis moluska muricid. Indoles non-brominasi Beberapa juga hadir dalam telur dua Mediterania Muricidae, meskipun ini tidak

ditemukan dalam spesies Australia. Tyrindoleninone (3), adalah senyawa hanya ditemukan dalam semua enam spesies dan kemungkinan akan bertanggung jawab atas aktivitas antimikroba diamati dari massa telur muricid [1,2]. Bioaktif indoles ini tampaknya menjadi ciri khas massa telur muricid dan tidak ditemukan di massa telur dari 17 spesies dalam keluarga yang berbeda dari moluska laut.

The distribution, biosynthetic origin and functional significance of Tyrian purple precursors in the Australian muricid Dicathais orbita (Neogastropoda: Muricidae)Abstrak Informasi tentang asal biosintesis dan keuntungan fungsional produk alami moluska laut tidak hanya penting untuk pemahaman kita tentang ekologi kimia, tetapi untuk pengembangan dan produksi bertanggung jawab agen terapeutik. Seperti yang menunjukkan aktivitas situ secara metodologis terhalang, fungsi disimpulkan oleh aktivitas in vitro telah diasumsikan untuk metabolit sekunder. Distribusi anatomis dan ontogenetic produk alami tidak bisa hanya memberikan informasi tentang biosintesis dan penyimpanan metabolit, tetapi mengidentifikasi tekanan selektif yang cenderung mempengaruhi ketahanan hidup pada tahap kehidupan tertentu. Jadi, pembedahan dan kimia analisis jaringan yang berbeda, dalam kombinasi dengan histokimia mungkin menawarkan pendekatan yang berharga. Gastropoda Laut dari Muricidae terkenal untuk pewarna ungu kuno Tyrian, yang berevolusi dari kolin ester sulfat bromoindoxyl dalam kelenjar hypobranchial melalui serangkaian reaksi enzimatik dan foto-oksidatif. Hidrolisis Prochromogen oleh arylsulphatase membebaskan ester kolin neuromuskular aktif dan prekursor bromoindole sitotoksik, yang juga terjadi pada massa telur muricid. Meskipun rekening visual pigmen pewarna di gonoduct muricid menyarankan prekursor mungkin dimasukkan ke dalam massa telur dari sumber ibu, asal biosintesis mereka dan signifikansi evolusi dari kelenjar hypobranchial tidak diketahui. Dengan demikian, Muricidae, dan orbita Dicathais khususnya pada yang sebagian besar penelitian sebelumnya telah terfokus, adalah model ideal untuk pendekatan baru untuk penelitian produk alami. Untuk mengkonfirmasi pengamatan pigmen pewarna pada gonoducts muricid dan memperoleh pemahaman tentang distribusi anatomi mereka, spektrometri massakromatografi cair (LC-MS) metode dikembangkan untuk mengukur secara bersamaan pigmen, prekursor dan prochromogen itu, sulfat tyrindoxyl. Prochromogen ini tidak hanya terdeteksi pada ekstrak kelenjar albumen dan kapsul, tetapi intermediet

bioaktif dan pewarna 6,6 '-dibromoindigo juga hadir dalam kedua. Temuan ini memberikan bukti awal untuk penyediaan ibu prochromogens di massa telur orbita D. dan daerah diidentifikasi di mana untuk melakukan investigasi histokimia. Tyrindoxyl sulfat juga terdeteksi dalam ekstrak kelenjar prostat laki-laki, bersama dengan isomer dibromoindigo, 6,6 '-dibromoindirubin dan prekursor oksidatif nya, 6-bromoisatin. Hal ini tidak hanya berarti perbedaan fisiologis gonoducts ada di antara pria dan wanita, tetapi bahwa metabolit sekunder yang tidak hanya ditujukan untuk massa telur dan dapat memegang penting sepanjang siklus hidup. Pemeriksaan Histomorphological kompleks kelenjar pallial gonoduct-hypobranchial dilakukan selama siklus tahunan untuk menentukan mekanisme untuk mentransfer prekursor antara struktur. Walaupun koneksi anatomi tidak terdeteksi, sekresi dari dua jenis sel hypobranchial diduga terlibat dalam sintesis ungu Tyrian adalah kesamaan biokimia yang luar biasa kepada mereka dari berbagai kapsul dan lobus kelenjar albumen. Bersama temuan ini tersirat potensi untuk sintesis produk alam dalam gonoduct pallial dari orbita D.. Untuk membuat peran kelenjar lobus ini dalam penggabungan cairan intracapsular dan lamina kapsul, teknik histokimia identik diterapkan untuk melintang bagian dinding kapsul. Biokimia korelasi tidak hanya memberikan metode sederhana menguraikan proses kompleks enkapsulasi di neogastropods, tapi efektif mengidentifikasi tujuan sekresi gonoduct dalam kapsul telur orbita D.. Perbandingan kapsul dan biokimia gonoduct mengungkapkan bahwa cairan intracapsular dan dinding kapsul dalam disekresikan oleh posterior kelenjar kapsul lobus, lamina tengah oleh lobus lateral dan lapisan luar dengan lobus punggung, kelenjar albumen dan pedal. Investigasi ke lokasi enzim peraturan dan prekursor dilakukan untuk menetapkan asal biosintetik prochromogens ungu Tyrian dan mekanisme yang mengatur prekursor sintesis bioaktif. Histokimia teknik Novel untuk lokalisasi bromoperoxidase, enzim pemikiran untuk memfasilitasi brominasi prochromogen, dan sulfat tyrindoxyl dikembangkan dan diterapkan pada gonoduct, kelenjar hypobranchial, dan dikemas bagian larva. Standar pewarnaan reaksi untuk prekursor indol, triptofan, dan arylsulphatase juga diterapkan. Pendekatan histokimia mengadopsi mengungkapkan bahwa sulfat tyrindoxyl adalah de novo disentesis melalui brominasi pasca-translasi dari tryptophan berasal makanan. Dua situs biosintetik diidentifikasi, satu berhubungan dengan metabolisme sekunder hypobranchial dan yang kedua signifikansi kehadiran prekursor bioaktif dalam massa telur muricid. Tryptophan disimpan dalam sel yang keluar dari epitel hypobranchial lateral dan sekali exocytosed, dipersatukan dengan bromoperoxidase dari sel-sel yang mendukung untuk membentuk sulfat tyrindoxyl. Sintesis Prochromogen juga terjadi pada sinus vaskuler subepitel untuk penyimpanan dan sekresi oleh sel-sel sekretori hypobranchial medial. Prekursor sintesis bioaktif pada permukaan epitel diatur oleh pembebasan arylsulphatase dari sel mendukung berdekatan. Temuan ini tidak hanya memberikan bukti untuk biosintesis novo de prekursor ungu Tyrian, tetapi rekening pertama biosintesis produk alami di dalam kelenjar hypobranchial gastropoda. Bersama temuan ini menyiratkan fungsi alami dipilih untuk sintesis indoles bioaktif

dalam sekresi kelenjar hypobranchial dari Muricidae dan Gastropoda. Tyrindoxyl sulfat

juga diangkut dalam pembuluh darah untuk sinus lateral dan dorsal lobus kelenjar kapsul mana bromoperoxidase dan arylsulphatase juga terjadi. Arylsulphatase juga terdeteksi dalam kelenjar albumen, yang bersama dengan lobus posterior kelenjar kapsul, bertindak sebagai tempat penyimpanan untuk diet tryptophan. Dengan demikian, sulfat tyrindoxyl dan konstituen untuk prochromogen dan prekursor biosintesis diperkenalkan untuk cairan intracapsular dan lamina kapsul oleh kelenjar kapsul. Histokimia dalam kombinasi dengan LC-MS menunjukkan profil biosintetik identik dalam vitellus larva, yang diuraikan selama oogenesis dan juga dapat menerima sekresi dari kelenjar albumen. Karena tidak adanya kelenjar hypobranchial di veligers, tampak bahwa larva pelagis mengandalkan produk alami vitelline sampai selesai dan metamorphous. Temuan ini bersama-sama dengan aktivitas antimikroba in situ bromoindoles menunjukkan prekursor ungu Tyrian dimasukkan ke dalam massa telur muricid sebagai investasi ibu dalam pertahanan melawan patogen larva. Hasil penyelidikan ini jelas