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REINFORMEDE PRÁCTICASDE

ABORATORIOOQUIMICA METABOLICA

PRESENTADO A: JAIRO GRANADOS

MORENOMARIA GABRIELA

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UREASA

Solución deu!e"

#$ oo#%i&o'()

incu*cion+,-c

Con.%*n%e de&ic$el de/)0&&ol1L

 Ti%ul*ndo$id"o2ido de

*&onio

Con &e%odoe.%e3ui&oe%"ic

o

#"oducen +&ole. deN45O4

E. u%il #*"*

De%e"&in*"u"e* en .*n6"e

De%e"&in*"u"e* en o"in*

De%e"&in*"u"e* en el

.uelo

De%e"&in*"u"e* en&*%e"i*O"6*nic*

Mue.%"*7e6e%*l

A6"e6*" /() 6de &ue.%"*

En %uocen%"i!u6*

A6"e6*" /o&l de N* Cl

*l / 8

A6i%*" Cen%"i!u6*" *9,)) "#n

Medi"(de.c*"%*"

Fil%"*" &edi"

en #"oe%*P*.*" * %uode en.*:o

Ro%ul*" 

O%ene"

e2%"*c%o

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIAESCUELA DE CIENCIAS AGRARIAS , PECUARIAS Y DE MEDIO AMBIANTE

PROTOCOLO PREINFORME DE PRACTICA DE LABORATORIOBIOQUIMICA METABOLICA

TEMA 1: ACTIVIDAD UREÁSICA ENMUESTRAS DE ORIGEN BIOLÓGICO

INTRODUCCIÓN

La ureasa se encuentra presente en variostejidos pertenecientes a los vegetales, por lotanto es fácil su determinación de ureaexistente en diferentes materias primasvegetales, por el método de Kjeldhal o por titulación del amonio liberado, titulandohidróxido de aluminio que es producido por lahidrolisis, utilizando el método estequiometricoa que se producen producen ! moles de"#$%# por cada mol de urea desdoblada&

1. MENTEFACTO O DIAGRAMACONSEPTUAL

2. MATERIALES Y METODOS!&'(ateriales equipos requeridos

Tubos de es!"o M!#$!% !&o$!do de 1''()

G$!d*))! )a*o termostatoP*%!s +!$! bu$e#! bea+er de $mLE)e(e"e$ de 12,

()bureta de !-mL

P*+e#!s de , ! 1' () .oporte universal&

!&! /eactivo requeridos

Re!-#*o F/$(u)! Co-.

0reasa &'10rea 2%3"#!4

!,!-(

2loruro de mercurio #g2l! '1 5cido clorh6drico #2l ,'")uffer fosfato p#

7&8ndicador de 9ashiro

!& ;rocedimiento

!&&' <n campo: /ealizar toma de muestra deforraje o de suelo calculando el peso engramos&

!&&! <n el laboratorio:

;eso muestras: =m> <xtracción con "a2l '1>2entrifugación> ?iltración> medidasobrenadante: @s> 9itulación con #2l> /egistrode mL gastados: @#2l> 9abla de datos

0. DIAGRAMA DE FLUO

8ndicadores

(uestras analzadasFo$$!e Co-e

#$!doSue)o O$*3e

4( 536

V& 5(L6

V 7C)5(L6

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8. RESULTADOS ESPERADOS Al aparecer permaner un color rosadoBvioláceo& <sto indica que los equivalentesBgramo del hidróxido de amonio fueronneutralizados por los equivalentesBgramo delácido clorh6drico&

,. GLOSARIO

TITULACIÓN9  e. un &;%odo de análisisqu6mico cuantitativo en el l*o"*%o"io( 3ue.e u%ili<* #*"* de%e"&in*"

la concentración  desconocida deun reactivo conocido

UREASA: esuna enzima que cataliza la hidrólisis de urea adióxido de carbono  amon6aco&

CENTRIFUGACI:N: <s un método por el cualse pueden separar sólidos de l6quidos dediferente densidad por medio de una fuerzagiratoria&

REFERENCIAS

;##+s9<<es.=*>*+ed*!.o$3<=*>*<A?C0?A1)*s*s@o)u(?C0?A#$*-o

;##+s9<<es.=*>*+ed*!.o$3<=*>*<Ce#$*&u3!-*?C0?B0

Cairo <nrique Dranados (oreno& (.c&;rotocolo de práctica& )ioqu6mica (etabólica&0niversidad "acional Abierta a Eistancia&0"AE& !'$http:FFdatateca&unad&edu&coFcontenidosF-!'FD08AGA298@8EAE<.G(%(<"9%GG!'-B

 G2ontextualizacionGpracticaGB)(B!H&pdf 

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SUELO

MATERIAORGANICA

4UMOS 4UMINASACIDO

ORANICO

MICROORGANISMOS

REACCIONES

BIOQUIMICAS

EN=IMATICAS

RESULTADODE

PROCESOSBIOQUIIMICO

S

4UMNEDAD

BALANCEELECRROLITICO

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TEMA II. CARBONO ORGÁNICO MATERIAORGÁNICA Y CAPACIDADAMORTIGUADORA 56 DE SUELOS

INTRODUCCIÓN

<l .uelo posee una composición de materiaorgánica e inorgánica, presentes en todos losestados de la materia, cada uno de estoscumple una función está concentrada graciasa la actividad microbiana es por ello que puedegenerar vida a las plantas nutrirlas por medio

de humus, numinas ácidos hImicos&;ara lograr un perfecto balance se requiereuna buena capacidad amortiguadora, opotencial qu6mico que tienen los sistemasedáficos para regular controlar su p#,cuando son sometidos a procesos deacidificación o alcalinización&

MENTEFACTO O DIAGRAMA CONSEPTUAL

1. MATERIALES Y METODOS

2.1 M!#e$*!)es " eu*+os

E)e(e"e$ de 12, () embudos

P*+e#!s 3$!du!d!s de1' ()

)ureta de !- ml

Es+#u)! (e#)*-! .oporte universalA3*#!do$ de *d$*o )ea+er de !- mlP$obe#! 3$!du!d! de1'' ()

;otenciómetro

Eu*+o de #*#u)!-*/ )alanza anal6ticaEspec!o"o#me!o celd*.

e.#ec%"o!o%o&;%"ic*.(ues#$!s de sue)o P*#el >l%"o

2.2. Re!-#*os $eue$*dos

Eicromato depotasio

$%SO&

co'ce'!(do? +C"+O' /N

D)"e')*(m)'(.ulfato de hierro FeSO5 /N#idróxido desodio

N*O4 )(/N

 5cido2lorhidrico

4Cl '1N

Fe'o*"(*e+ '(2!#'$%$ ó2J#$2%%232J#$BB#%#4!

Au(des)*(d(So*uc)#'bu-e!"os"(o

#;%$F#;%$

2.0 P$o-ed*(*e#o!&&' <n el campo : /ealizar toma de

muestra!&&! <n el laboratorio: ;ara 2arbono

%rgánico 32%4, aplicar el (étodo detitulación volumétrica, ;ara 2arbono%rgánico 32%4 (étodo<spectrofotométrico, para La2apacidad amortiguadora el (étodo;otenciométrico&

2. DIAGRAMA DE FLUO

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 AE828%"A/ KFB !,

D/A(%. E< .0<L%

$, (L E< AD0A

E<.98LAEA

AGITAR ENAGITADOR

MAGN@TICO POR,MIN

ESPERAR )SEGUNDOS

OBSERAR EL P4(CON EL

ELECTRODO DELPOTECIOMETRO

AGREGAR , ML DENAO4 )(/N (

AGITAR DE NUEOPOR UN MINUTO

MEDIR EL P4+

 TERCER CUARTOBEA?ERS(

ADICIONAR +)MLDE AGUA

DESTILADA +) MLDE SOLUCIN

BUFFER P4 '()(

ESPERAR )SEGUNDOS TOMAR

EL P4

AGREGAR , ML DENAO4 )(/N (

AGITAR MEDIR P4

REGISTRAR TODOSLOS ALORES

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0 TABLA DE DATOS2arbono orgánico, métodos volumétricos espectrofotométrico&

(uestras ;eso3=m4 @?e.%$3mL4  Absorbancia3A4

('(!)lanco 3M4

Eatos potenciométricos para capacidadamortiguadora de .uelos

(uestras.uelo '

Peso54(6

Vo)5(L6

p#' p#!

.uelo ! Aguadestilada.olución)uffer

TABLA 0. @alores de capacidad potencialamortiguador para las muestras analizadas&

Mues#$!s

(mEq 

HCl 

 /ΔpH)

(mEqN 

aOH 

 /ΔpH)

P567

C)

P 56N!O

7

7!$*!?orraje

0. RESULTADOS ESPERADOS

 Al 2olocar el <rlenmeer ó bea+er quecontiene la solución diluida de suelo debajo de

la bureta 9itular lentamente, adicionando elsulfato sobre la solución hasta debe aparecer

permanecer un color verde esmeralda brillante&2arbono orgánico(ateria %rgánica"itrógeno total& 

8 GLOSARIO

ESPECTROFOTÓMETRO 9 es un instrumentousado en el análisis qu6mico que sirve paramedir, en función de la longitud de onda, larelación entre valores de una misma magnitud

fotométrica relativos a dos hacesderadiaciones  la concentración o reaccionesqu6micas que se miden en una muestra&

CAPACIDAD AMORTIGUADORA: Lacapacidad amortiguadora de un tampón es lacantidad de ácido o de base que se puedeagregar, antes de que el p# comience acambiar de modo apreciable, estádeterminada por el valor real de lasconcentraciones de los componentes del parácidoFbase conjugado&

MTODO POTENCIOMTRICO9 .irve paramedir el ;h de una solución&

, REFERNCIAS

;##+s9<<es.=*>*+ed*!.o$3<=*>*<Es+e-#$o&o#?C0?B0(e#$o

;##+9<<do-e-*!.ude!.edu.-o<-e<Hu*(*-!A!)*#*-!II<+o#1.;#()

Cairo <nrique Dranados (oreno& (.c&;rotocolo de práctica& )ioqu6mica (etabólica&

0niversidad "acional Abierta a Eistancia&0"AE& !'$http:FFdatateca&unad&edu&coFcontenidosF-!'FD08AGA298@8EAE<.G(%(<"9%GG!'-B

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METODODE FENOL

ACIDO.ULFURIC

O

CARBO4IDRATOS NOESTRUCTU

RALES

MONOSACARIDOS FLUCTOSA GLUCOSA

BASA SU CONTENIDO ENALMIDONES 4IDROLI=ABLES

  A=UCARES SOLUBLES

REALI=ANDOME=CLA DE

REACTIOS PARALECTURA

ESPECTROFOMETRICA

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III. DETERMINACIÓN DE CARBO7IDRATOSNO ESTRUCTURALES 5CNE6 ENFORRAES POR EL MTODO DE NELSONSOMOGYI

INTRODUCCIÓN

Las plantas vegetales estan compuestos por carbohidratos estructurales no estructurales,los no estructurales se almacenan en órganosvegetativos como ra6ces, rizomas, estolones,coronas parte inferiores del tallo Los

principales 2"<9 en los tejidos de especiesforrajeras son monosacáridos como glucosa fructosa, disacáridos como sucrosa maltosa polisacáridos como almidones fructosanos&

1. MENTEFACTO O DIAGRAMACONSEPTUAL

2MATERIALES Y METODOS

2.1 M!#e$*!)es " eu*+os

)alanza anal6tica varilla de vidrio

vaso de precipitado )a*o termostatobea+er de $ ml ;apel filtro

9ubo de ensao Dradilla

2.2 Re!-#*os $eue$*dos

Re!-#*o F/$(u)! Co-e#$!-*/?enol 2J#-%# -1

 5cido sulfIrico #!.%$ '"

#idróxido desodio

"a%# %,J"

 Agua destilada #!% ! mL

G)u-os! C4/+O0 ' 1

2.0 P$o-ed*(*e#o

2.0.1 <n el campo: /ealizar toma de muestras

2.0.2 <n el laboratorio: ;esar FB !&g de muestra en balanza

anal6tica registrar como: 34(4,depositarla luego en un vaso de precipitado agregar - mL de solución de #2l ,J"&

 Agitar constantemente con la varilla devidrio durante minutos&

Llevar el bea+er con la solución al ba*otermostatado calentar a NO2,durante !

min

Eejar enfriar por - min filtrar sobre papelfiltro&

(edir el volumen del filtrado3@f4  pasar -mL a un tubo de ensao, adicionar a éste-mL de "a%# ,J", agitar por '-segundos, tapar rotular as6: ??2"<:?iltrado de forraje para carbohidratos noestructurales&

Lectura espectrofometrica:

 Alistar el espectrofotómetro a una , calibrarel aparato con el tubo blanco, ajustando a'1 de 9ransmitancia 3194 , de

 Absorbancia 3A4

Leer la Absorbancia 3A4 de los tubos st m>registrar en su tabla de datos

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PESAR1 +0)G

DEMUESTR

A REGISTR

AR

AGREGAR,) ML DESOLUCIN

DE 4CL)(N

AGITAR

DURANTE9

MINUTOS

LLEAR ELBEA?ER CONLA SOLUCIN

AL BAO TERMOSTATAD

O

CALENTARA

H)C(DURANTE +) MIN

DEJARENFRIAR

POR , MIN  FILTRARSOBREPAPELFILTRO

MEDIR ELOLUMEN

DELFILTRADOFK  PASAR ,ML

A UN TUBODE ENSAO

ADICIONAR A@STE ,ML DENAO4 )(N(

AGITAR POR /,SEGUNDOS

 TAPAR ROTULAR

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0 DIAGRAMA DE FLUO

8. TABLA DE DATOSD*%o. #*"* l* cu*n%i>c*ción de CNE

8ndicadores Eescripción @alor  

wm

;eso de lamuestra

V  F 

@olumen delfiltrado

 A st 

 Absorbancia delestándar

 A m

 Absorbancia deltubo que conten6ael ??2"<

,. RESULTADOS ESPERADOS

La determinación cantidad de carbohidratostotales "o estructurales, basándose en sucontenido de almidones hidrolizables azIcares solubles

J. GLOSARIO

ALMIDONES 7IDROLIKABLES: .on los queproducen azIcares 3principalmente, glucosa4

para el metabolismo& <ste grupo inclueazIcares simples, sacarosa algunos

almidones que son fácilmente digeridos en elintestino delgado producen fluctuaciones enla glucosa en sangre después de ingerirlos&

ESPECTROFOTOMTRICA9 <s la mediciónde la cantidad de energ6a radiante que absorbeo transmite un sistema qu6mico en función dela longitud de onda> es el método de análisisóptico más usado en las investigacionesqu6micas  bioqu6micas&

  <l espectrofotómetro  es un instrumento quepermite comparar la radiación absorbida otransmitida por una solución que contiene unacantidad desconocida de soluto, una quecontiene una cantidad conocida de la mismasustancia&

http:FFPPP&horse'&esFesFinicioFNBpublicacionesFcientificosF''7BlosBcarbohidratos

https:FFes&Pi+ipedia&orgFPi+iF<spectrofotometr 121AEa

Cairo <nrique Dranados (oreno& (.c&;rotocolo de práctica& )ioqu6mica (etabólica&

0niversidad "acional Abierta a Eistancia&0"AE& !'$http:FFdatateca&unad&edu&coFcontenidosF-!'FD08AGA298@8EAE<.G(%(<"9%GG!'-B

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M@TODOPERMANGANOM@TRIC

OCATALASA

EN=IMA( QUE PERMITEPERDURAN LA IDA DEALGUNOS ALIMENTOS

IN4IBE LASREACCIONESOIDATIAS

GENERA POR LAOIDACIN DE ÁCIDOSGRASOSAGK EN LOS

PEROISOMAS

SE OBTIENE A PARTIRDE

MICROORGANISMOSPESAR MÁS OMENOS +G DE

MUESTRA PICADA PULERI=ADA

REGISTRAR ELALOR COMO: M

COLOCARLA EN UN TUBO DE

CENTRIFUGA

ADICIONAR /)MLDE SOLUCIN FRA

DE BUFFERFOSFATO )(),M(

P4('()( AGITAR

CENTRIFUGAR A+,))RPM DURANTE

,MIN

FILTRAR MEDIRSU OLUMEN(REGISTRARLO

COMO: F

 TOMAR , ML

(DEPOSITARLO ENUN TUBO DEENSAO( TAPARLO(

ROTULARLO0

COLOCARLOS ENBAO DE 4IELO

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TEMA IV9 ACTIVIDAD CATALTICA DE LACATALASA

INTRODUCCIÓN

La catalasa se obtiene fundamentalmente apartir de microorganismos su función esconvertir el agua oxigenada 3#!%!4 en agua3#!4 ox6geno

<l uso de esta enzima permite alargar la vidaItil de zumos de c6tricos, cerveza vino a

que, al degradar el agua oxigenada 3un agenteoxidante4 en sustancias no reactivas 3agua ox6geno4 se inhiben las reacciones oxidativassin problemas secundarios0

./ MENTEFACTO O DIAGRAMACONSEPTUAL

%/ MATERIALES Y METODOS2.1 M!#e$*!)es " eu*+os

.oporte 0niversal ;ipeta graduada)ureta ;robeta graduada;inzas bea+er de $mL<lenmeer 9ubo de ensao

(ontaje de 9itulación Dradilla

2.2 Re!-#*os $eue$*dos

Re!-#*o F/$(u)! Co-e#$!-*/

;eróxido de#idrogeno

4+O+

 5cido sulfIrico 4+SO5 !"

;erganmanatode potasio

?MnO5 )()/M

<xtracto decatalasa

ECATK ! gr 

2.0 P$o-ed*(*e#o

2.0.1 <n el campo: /ecoger las muestras

2.0.2 <n el laboratorio ;esar más o menos !gde muestra picada ó pulverizada, registrar elvalor como: =m colocarla en un tubo decentrifuga, luego adicionar 'mL de soluciónfr6a de buffer fosfato ,-(, p#QJ,RB7,, agitar,con agitador de vidrio 3min4 centrifugar a

!-rpm durante -min& .acar el sobrenadante,filtrar medir su volumen, registrarlo como: @f tomar - mL de éste para depositarlo en untubo de ensao, taparlo, rotularlo como:<@2A93extracto de verdura para catalasa 4 ó<?2A93extracto de fruta para catalasa4, ó<22A9 3extracto de concentrado paracatalasa4, ó <.2A9, colocarlos inmediatamenteen ba*o de hielo&

0 DIAGRAMA DE FLUO

$& 9A)LA E< EA9%.

Mues#$!s <#ubos Id*-!do$es

=m 3g4 @f 3mL4 @K(n%$

3mL4

.uelo#arina?orraje@erdura)lanco

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9ipo demuestras

analizadas

%rigen, ubicación geográfica,región, agroclimatolog6a

8. RESULTADOS ESPERADOS

.e determinó la actividad de la catalasa por método permanganométrico, se cuantifico laactividad enzimática de la catalasa enmuestras de origen vegetal

,. GLOSARIO

CATALASA  La catalasa es una catalazaperteneciente a la categor6a delas oxidorreductasas que cataliza ladescomposición delperóxido de

hidrógeno 3#!!4 en ox6geno   H 2O  

REACCIONES OIDATIVAS9

 <s una reacción qu6mica  en la que uno omás electrones se transfieren entre losreactivos, provocando un cambio ensus estados de oxidación

J REFERENCIAS

;##+s9<<es.=*>*+ed*!.o$3<=*>*<C!#!)!s!

?uente 8nternet:http:FFPPP&!bachillerato&esFbiologiaFtema'Ftema'&pdf 

<s propiedad9

PPP&profesorenlinea&2l

B /egistro "O 'RR&-$

Dranados (oreno& Cairo <nrique (.c&;rotocolo de práctica& )ioqu6mica (etabólica&0niversidad "acional Abierta a Eistancia&0"AE& !'$http:FFdatateca&unad&edu&coFcontenidosF-!'FD08AGA298@8EAE<.G(%(<"9%GG!'-B

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CUANTIFICACIN DENITROGENO NO

PROTEICO

REACTIOS

ACIDO TRICLOROAC@TICOATAK AL /)8 CL9

CCOO4 K

AGUA DESTILADA

FORRAJES B SUELO

PUEDE SERASIMILADO O NO

ASIMILADO POR ELANIMALFRACCIN A DE

AN SOEST K

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TEMA V9 CUANTIFICACI0N DENITR0GENO NO PROTE1CO ENSUELOS Y PASTOS, M2TODO ATA,DE VAN SOEST

INTRODUCCI0N

Los pastos contienen compuestosnitrogenados de origen proteico no proteico,que pueden variar dependiendo de la madurez

de la planta 32hurch ?ontenot, 'N7N, elcontenido total de este nitrógeno 3"4 nosiempre resulta completamente utilizable anivel digestivo, a que parte de este " seencuentra incrustado en la pared celular indigestible 3;ichard @an .oest, 'N77> @an.oest, 'NR!4, lo que puede reducir elaprovechamiento del nitrógeno ingerido& <neste laboratorio se pretende cuantificar por elmétodo de @an .oest el nitrógeno no proteicocontenido en una muestra de forraje&

1. MENTEFACTO O DIAGRAMACONSEPTUAL

2. MATERIALES Y METODOS

2.1 M!#e$*!)es " eu*+os

)alanza Anal6tica nevera@aso de precipitado espectrofotómetrotubo de ensao

2.2 2 Re!-#*os $eue$*dos

Re!-#*o F/$(u)! Co-e#$!-*/

Á-*doT$*-)o$o!-#*-o5ATA

3 2lB2B2%%# 4

 Al ' 1

 Agua destilada

2.0 +$o-ed*(*e#o

<n el campo: 9oma de muestras

<n el laboratorio: <xtracción con ácido9ricloroacético 3A9A4 ;esar FB !, g de muestra 3.uelo, forraje4

3picada ó pulverizada4 , en balanza

anal6tica registrar como 3 colocar envaso de precipitado

 Adicionar ! mL de agua destilada fr6a,agitar por 'min

Eejar reposar la mezcla por '- min  Adicionar mL de sol& /eposar a 9emperatura ambiente por !

min ?iltrar sobre papel filtro en probeta

 (edir el volumen del filtrado3V& 4

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PESAR 1 +()G DE

MUESTRASUELO(

FORRAJEK

REGISTRAR COLOCAR EN

ASOPRECIPITADO

ADICIONAR +)&l DE AGUADESTILADA

FRIA

DEJARREPOSAR POR/, MINUTOS

ADICIONAR 9)&l DE

SOLUCIN DEATA AGITAR

POR UNMINUTO

REPOSAR OR+) MINUTOS

FILTRAR

MEDIROLUMENFILTRADO

ROTULAR GUARDAR

REFRIGERADO

APLICARSOLUCIONINDICADA

OBTENERABSORANCIA

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 /ecolectar - mL del filtrado, colocarlosen un tubo de ensao rotularlo: ??"";:

filtrado de forraje para nitrógeno noproteico o ?.""; 3?iltrado de suelo paranitrógeno no proteico

9apar los tubos guardar en nevera arefrigeración, hasta ser utilizados en lamezcla reactiva&

0. DIAGRAMA DE FLUO

8. TABLA DE DATOSD*%o. #*"* Ni%"ó6eno no #"o%eicoNNPK

(uestras Ftubos

8ndicadores

=m3g4 @f 3mL4

 Absorbancia3A4

.uelo

?orraje

.tandar 

9ipo demuestrasanalizadas

%rigen, ubicación geográfica,región, agroclimatolog6a

,. RESULTADOS ESPERADOS

2uantificar el nitrógeno no proteico 3"";4&Eeterminación del contenido de ""; ;rote6na verdadera 3;@4 en forrajes concentrados&

GLOSARIO

ANÁLISIS ELDA7L9  Las determinaciones denitrógeno de Kjeldahl se realizan sobre unavariedad de sustancias alimentarias& <l métodoKjeldahl se puede desglosar en tres pasosprincipales: digestión, destilación valoración&

NITRÓGENO NO PROTEICO9  .e denomina"itrógeno no proteico a los compuestos denitrógeno que pueden ser convertidos en prote6naspor algunos organismos vivos& (uchos organismossuperiores no pueden obtener aminoácidos de otrasformas, más que absorbiéndolos de la dieta& Los

cuales pueden ser convertir algunos aminoácidosen otros diferentes& Los compuestos que forman el""; son los quecontienen amon6aco, nitritos nitratos otros comola urea, el biuret o el ácido Irico& Los organismosque puede utilizar el ""; son los hongos,las plantas algas, bacterias organismos queviven en simbiosis con ellos&

BIBLIOGRAFIA

;##+9<<s*!.**!.3ob.e<$e+os*#o$*o<$e*s#!s@#e-<-e*!+;o"<!$#*-u)os<<!$#*<ob*s+o@<ob*s+o@.;#

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