proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi

8/18/2019 proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi

1/24

HALAMAN PENGESAHAN

Nama Materi : Enzim

Kelompok : 3 / Senin Siang

Anggota : 1. Bambang Rianto

2. Nadia Sevi Ardiana

3. Senind!a A!i Sito Sand!

Semarang" Mei 2#1$

%engamp&


2/24

RINGKASAN

Reaksi kimia yang terjadi dalam sistem biologis selalu melibatkan katalis. Katalis

ini dikenal sebagai katalis biologis (biokatalisator) berupa protein yang sangat spesifik yang

disebut enzim, merupakan katalis yang sedang dikembangkan dalam industri kimia. Enzimmerupakan biokatalisator yang sangat efektif yang akan meningkatkan kecepatan reaksi

kimia spesifik secara nyata, dimana reaksi ini tanpa enzim akan berlangsung lambat.

Enzim memiliki keunggulan sifat, antara lain mempunyai aktivitas yang tinggi,

efektif, spesifik dan ramah lingkungan. erdasarkan biosintesisnya, enzim dibedakan

menjadi enzim konstitutif dan enzim induktif. !erdapat tiga metode isolasi enzim, antara lain

ekstraksi, separation, dan presipitasi.

"ada praktikum kali ini bahan yang digunakan antara lain,

aseton#formaldehid#etanol, cystein, celite, $a%l, ($& ' )*' , $a* %& +%**&, auadest,

induser enzim. edangkan alat yang digunakan diantaranya erlenmeyer, pipet tetes, gelas

ukur, pengaduk, beaker glass, timbangan. %ara kerja yang dilakukan dimulai dari isolasi

enzim kemudian reaksi enzimatis.


3/24

PRAKATA

Segala puji bagi Allah SWT atas segala limpahan rahmat, nikmat, serta

hidayah-Nya, sehingga laporan praktikum mikrobiologi industri ini bisa

terbentuk.

Terima kasih kepada asisten laboratorium, Rossa Dwi dan semua pihak

yang telah membantu, sehingga laporan ini bisa selesai terbentuk.

Dalam laporan ini berisi tentang hasil praktikum mikrobiologi industri

materi yoghurt. Di laporan ini dipaparkan hasil praktikum pembuatan

yoghurt dengan beberapa !ariabel.

Semoga laporan ini bisa berman"aat untuk menunjang proses

pembelajaran selanjutanya. Dan kritik serta saran yang bersi"at membangun

masih dibutuhkan agar laporan ini bisa menjadi lebih baik lagi.


4/24

DAFTAR ISI

#alaman

$udul .................................................................................. .............................

........ i

%embar

engesahan ........................................................................ .............................

.......... ii

Ringkasan &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&iii

rakata &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&.i!

Da"tar

'si ....................................................................................... ..............................

........... !

BAB I PENDAHULUAN

(.( %atar

)elakang ........................................................................ .............................

............. (

(.* erumusan

+asalah ................................. .....................................................................

.... (

(. Tujuan

erobaan ................................................. .......................................................

..... (

(. +an"aat

erobaan ............................................................ ............................................

... (


5/24

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

......................................... ................................................. *

BAB III PELAKSANAAN PERCOBAAN

.( )ahan dan

Alat ..................................................................................................................

/

.* 0ara

1erja .................................................................................................................

........ 2

DAFTAR PUSTAKA

............................................................................................................(3LEMBAR KUANTITAS REAGEN

.................................................................................... ((

DAFTAR TABEL

Tabel 3.1 Variabel Operasi……………………………………………………………….. 1


6/24

DAFTAR GAMBAR

Ga!bar ".1 S#e!a Pe!b$a%a& '()*$r%……………………………………………………..+


7/24

BAB I

PENDAH,L,AN

I. 1. La%ar Bela#a&)


8/24

Reak'i kimia !ang ter(adi dalam 'i'tem biologi' 'elal& melibatkan katali'. Katali'

ini dikenal 'ebagai katali' biologi' )biokatali'ator* ber&pa protein !ang 'angat 'pe'i+ik

!ang di'eb&t enzim ),inarno" 1-$*" mer&pakan katali' !ang 'edang dikembangkan

dalam ind&'tri kimia. %engembangan katali' biologi' dit&(&kan &nt&k meng&rangi

kon'&m'i energi pro'e' 'erta mengilangkan terik&tn!a 'en!aa0'en!aa pengotor

dalam prod&k '&at& pro'e'. Katali' ini dig&nakan 'ebagai alternati+ katali' anorganik

'eperti natri&m" kali&m ata& kal'i&m idrok'ida.

Enzim mer&pakan biokatali'ator !ang 'angat e+ekti+ !ang akan meningkatkan

keepatan reak'i kimia 'pe'i+ik 'eara n!ata" dimana reak'i ini tanpa enzim akan

berlang'&ng lambat )eninger" 1--*. Si+at0'i+at i'timea enzim adala kapa'ita'

katalitik dan 'pe'i+i'ita'n!a !ang 'angat tinggi. 4i'amping it& enzim memp&n!ai peran

dalam tran'+orma'i berbagai (eni' energi ),inarno" 1-$*. )K&rnia" 2#1#*

I. ". T$-$a& Per(baa&

1 Mengi'ola'i enzim dari 5 )tanaman/b&a0b&aan*.

2 Mengit&ng aktivita' enzim .

3 Membandingkan aktivita' enzim 5 'e'&ai variabel perobaan

I. 3. Ma&/aa% Per(baa&

1. Maa'i'a mamp& mengi'ola'i enzim dari

2. Maa'i'a mamp& mengit&ng aktivita' enzim

3. Maa'i'a mamp& membandingan aktivita' enzim ... 'e'&ai variabel perobaan

BAB II

TIN0A,AN P,STAKA

II. 1. Pe&)er%ia& ,!$! E&i!

Kata enzim bera'al dari baa'a 6&nani 7enz!me8 !ang berarti 7di dalam 'el8.

,ill! K&ne )19$* mende+ini'ikan enzim 'ebagai +ermen )ragi* !ang bent&kn!a


9/24

tidak tertent& dan tidak terat&r" !ang dapat beker(a tanpa adan!a mikroba dan dapat

beker(a di l&ar mikroba. 4e+ini'i ter'eb&t ber&ba 'etela dilak&kan penelitian

lan(&tan ole B&ner pada ta&n 1-9. Enzim dapat diprod&k'i ole mikroba ata&

baan lainn!a 'eperti ean dan t&mb&an. Enzim (&ga dapat dii'ola'i dalam bent&k

m&rni ),inarno" 1-$*.

)K&rnia" 2#1#*

II. ". Si/a% 2 si/a% E&i!

Enzim memiliki ke&ngg&lan 'i+at" antara lain memp&n!ai aktivita' !ang tinggi"

e+ekti+" 'pe'i+ik dan rama lingk&ngan )id!a dan 4(enar" 2###*" 'edangkan men&r&t

)Saktian'!a" 2##1*" enzim memiliki 'i+at !ang ka'" !ait& 'angat akti+ ala&p&n

kon'entra'in!a amat renda" 'angat 'elekti+ dan beker(a pada kondi'i !ang rama)mild*" !ait& tanpa temperat&r ata& tekanan tinggi dan tanpa logam !ang &m&mn!a

bera&n. al inila !ang men!ebabkan reak'i !ang dikatali'i' 'eara enzimatik

men(adi lebi e+i'ien dibandingkan dengan reak'i !ang dikatali'i' ole katali' kimia

)A&g&'t" 2###*.

Enzim memp&n!ai kek&'&'an aktivita'" !ait& peranann!a 'ebagai katali' an!a

teradap 'at& reak'i ata& beberapa reak'i !ang 'e(eni' 'a(a. ;adi dapat melibatkan

beberapa (eni' '&b'trat ),inarno" 1-$*. Si+at 'pe'i+ik )'pe'i+i'ita' enzim*

dide+ini'ikan 'ebagai kemamp&an '&at& enzim &nt&k mendi'krimina'ikan '&b'tratn!a

berda'arkan perbedaan a+inita' '&b'trat0'&b'trat &nt&k menapai 'i'i akti+ enzim

)A&g&'t" 2###*. Si+at 'pe'i+inita' ini dapat diman+aatkan &nt&k t&(&an reak'i ata&

(eni' prod&k !ang diarapkan. Si+at ini 'angat meng&nt&ngkan karena tidak akan

di(&mpai reak'i0reak'i 'amping" 'eingga lebi rama lingk&ngan.

)K&rnia" 2#1#*

II. 3. Pe&))(l(&)a& E&i!

Berda'arkan bio'inte'i'n!a" enzim dibedakan men(adi enzim kon'tit&ti+ dan

enzim ind&kti+. Enzim kon'tit&ti+ adala enzim !ang 'elal& ter'edia di dalam 'el

mikroba dalam (&mla !ang relati+ kon'tan" 'edangkan enzim ind&kti+ adala enzim

!ang ada dalam (&mla 'el !ang tidak tetap" tergant&ng pada adan!a ind&'er. Enzim

ind&kti+ ini (&mlan!a akan bertamba 'ampai beberapa rib& kali bakan lebi


10/24

apabila dalam medi&m mengand&ng '&b'trat !ang mengind&k'i" ter&tama bila

'&b'trat pengind&k'i mer&pakan 'at&0'at&n!a '&mber karbon )id!a dan 4(enar"

2###*.

Berda'arkan tempat beker(an!a" enzim dapat dibedakan dalam 2 golongan" !ait&

endoenzim dan ek'oenzim. Endoenzim di'eb&t (&ga enzim intra'el&ler" dia'ilkan di

dalam 'el !ait& pada bagian membran 'itopla'ma dan melak&kan metaboli'me di

dalam 'el. Ek'oenzim )enzim ek'tra'el&ler* mer&pakan enzim !ang dia'ilkan 'el

kem&dian dikel&arkan melal&i dinding 'el 'eingga terdapat beba' dalam media !ang

mengelilingi 'el dan bereak'i memea baan organik tanpa tergant&ng pada 'el !ang

melepa'kann!a )Soedigdo" 1-*.

)K&rnia" 2#1#*

II. . Me%(4e Is(lasi E&i!

a. E#s%ra#si

dalam metode ek'trak'i dibagi men(adi tiga (eni'" !ait& :

1. 4etergent

4etergent < detergent anionik" kationik" dan nonionik &k&p e+ekti+ &nt&k

mer&'ak membran 'el.

=onto detergent !ang 'ering dig&nakan &nt&k i'ola'i enzim a.l : 'etiltrimetil

amoni&m bromida )kationik*" natri&m la&ril '&l+at )anionik*" teen'" 'pan'" dan

triton )non < ionik*.

%ada kondi'i % dan kek&atan ion !ang 'e'&ai" detergent akan berinterak'i dengan

lipoprotein &nt&k membent&k mi'el. Akibatn!a lipoprotein !ang mer&pakan

kon'tit&en membran dapat lar&t dan enzim dapat dikel&arkan. %emilian dan

pengg&naan detergent ini ar&' &k&p 'elekti+" karena beberapa enzim dapat

men(adi tak akti+ akibat denat&ra'i protein dan pengendapan ole detergen.

>m&mn!a detergent ar&' 'egera dipi'akan 'ebel&m a'il i'ola'i dig&nakan.

2. Enzim itik

%emeaan dinding 'el dengan ara ini mer&pakan ara !ang paling e+ekti+.

Enzim litik !ang &m&m dig&nakan adala li'ozim !ang diperole dari p&ti tel&r.

Enzim ini memea ikatan ?.01"@ gliko'ida dari poli'akarida )a'am m&ramat*

pen!&'&n dinding 'el. 4inding 'el bakteri gram po'iti+ lebi ban!ak mengand&ng


11/24

poli'akarida dibandingkan dengan bakteri gram negati+" 'eingga pengg&naan

enzim litik lebi e+ekti+ &nt&k memea dinding 'el bakteri gram po'iti+. E4A

perl& ditambakan pada media 'ebel&m enzim ini dig&nakan &nt&k memea

dinding 'el bakteri gram negati+" &nt&k mengikat ion0ion divalen !ang dapat

menginakti+kan enzim ini.Enzim li'ozim '&da dig&nakan 'eara komer'ial pada

ek'trak'i enzim gl&ko'a i'omera'e dari Streptom!e' 'p. ;eni' enzim lain : papain

4m&da dikendalikan dan ber'i+at 'elekti+

3. Alkali

%enempatan 'el pada medi&m dengan p 11


12/24

klari+ika'i dapat di(&al 'ebagai airan enzim komer'ial. Kon'entra'i 'en!aa

peng&mpal ar&' tepat" agar enzim tidak mengg&mpal. aram amoni&m '&l+at

pada kon'entra'i tinggi men!ebabkan 'alting o&t protein terma'&k enzim.

)Eli'a" 2#12*

II. +. ,-i A#%i5i%as E&i!

a. ,-i A#%i5i%as E&i! Pr(%ease

Ek'trak ka'ar enzim protea'e di prod&k'i dari +ermenta'i media air 'intetik.

Cermenta'i dilak&kan di dalam 7'aker aterbat8 pada '&& 39o=" 1# rpm.

D'ola'iek'trak ka'ar enzim protea'e dilak&kan pada akt& ink&ba'i optim&m !ang

ditetapkan dengan k&rva pert&mb&an !ait& 32 (am. %rotea'e dari

ek'tra'el&lerdiperole dengan men'entri+&ga'i medi&m prod&k'i pada keepatan

$.### rpm pada'&& @o=" 'elama 1 menit. )El+i" 2##3* Enzim ini akan berada di

'&pernatann!a danmer&pakan ek'trak ka'ar protea'e. Ek'trak ka'ar ini kem&dian

dim&rnikan melal&itaap +reeze dr!ing" dan 'elan(&tn!a di+rak'ina'i dengan

amoni&m '&l+at. Creezedr!ing mer&pakan taap pemekatan ata& pengeringan

lar&tan protein &nt&k menega denat&ra'i protein. Sedangkan +rak'ina'i amoni&m

'&l+at mer&pakan pro'e' pengendapan protein dari lar&tann!a. al ini

dilak&kan 'etela ek'trak ka'ar protea'edipekatkan melal&i +reeze

dr!ing.Crak'ina'i dengan amoni&m '&l+at mer&pakan 'ala 'at& ara

pem&rnianprotein melal&i pro'e' pengendapan garam. %engendapan ini ter(adi kare

na ion < iongaram amoni&m '&l+at akan berkompeti'i dengan protein &nt&k

menarik molek&l air'eingga meng&rangi molek&l air pada bagian perm&kaan

idro+ob protein" danmen&r&nkan kelar&tan protein" 'elan(&tn!a protein

berinterak'i 'at& 'ama lainn!amembent&k g&mpalan dan mengendap. Molek&l

protein dengan berat molek&l be'armemerl&kan kon'entra'i garam !ang keil

&nt&k membent&k endapan dan akanmengendap lebi d&l& al ini

men!ebabkan ter(adin!a e+ek 'alting o&t )Catoni" 2##*.Salting o&t adala

peri'tia peningkatan m&atan li'trik di 'ekitar protein" !ang akanmenarik mantel

air dari koloid protein dan men!ebabkan peri'tia idro+obikantarmolek&l protein

pada '&a'ana ionik tinggi !ang men!ebabkan pen&r&nankelar&tan protein.

Sedangkan pada kon'entra'i renda" ion0ion ini akan mengelilingimolek&l protein


13/24

dan menega mereka ber'at& 'eingga protein melar&t. %eri'tia inidi'eb&t

'alting in.%engendapan ter(adi 'eara perlaan dan di'etimbangkan 'elama 12

(am.Endapan !ang terbent&k dipi'akan dengan ara 'entri+&ga'i" >nt&k

mengilangkan'i'a0'i'a garam amoni&m '&l+at dan molek&l0molek&l keil lainn!a"

maka endapan!ang diperole didiali'i' mengg&nakan tab&ng 'elovan )El+i" 2##3*.

)El+ira" 2#1@*

b. ,-i A#%i5i%as E&i! A!ilase

D'ola'i enzim amila'e mer&pakan enzim ek'tra'el&ler 'eingga dalam pro'e'

i'ola'in!a tidak memerl&kan pro'e' pemeaan 'el. %eman+aatan ampran onggok

dan dadak &k&p poten'ial dig&nakan 'ebagai media pert&mb&an kapang

a'pergill&' niger dalam &pa!a prod&k'i enzim dalam 'i'tem +ermenta'i media 'emi padat 'e&b&ngan dengan kadar pati" protein" vitamin 'erta mineral !ang ma'i

terkand&ng didalamn!a. Enzim amila'e !ang diperole dari a'pergil&' niger lebi

lan(&t dilak&kan i'ola'i )pem&rnian* 'eara pr'ial dengan penambaan

)N@*2S@. al ini dim&ngkinkan karena garam ber+&ng'i &nt&k mer&'ak mantel

air !ang terdapat di'ekitar enzim )protein* 'eingga protein akan mengendap.

%engendapa mak'im&m diperole dengan penambaan )N@*2S@ $#F.

Selan(&tn!a dilak&kan 'entri+&ga'i dingin dengan +reezedr!ing 'eingga diperole

'erb&k enzim ka'ar amila'e 'eban!ak #" g radi 1## ml '&pernatan.

Kondi'i optim&m aktivita' enzim amila'e dapat dipengar&i beberapa +aktor"

diantaran!a pengar& dari '&& dan %. 4ari a'il peng&(ian pengar& p teradap

aktivita' enzim diperole a'il" baa p optim&m enzim amila'e adala $"#. %

ber&b&ngan dengan 'tr&kt&r enzim !ang terdiri dari a'am < a'am amino.

%er&baan p dalam '&at& lar&tan men&n(&kan per&baan < per&baan (&mla ion

G !ang ada dalam lar&tan. ;&mla ion !an ada akan mempengar&i 'tr&kt&r enzim

!ang terdiri dari a'am < a'am amino" ter&tama pada ikatan idrogenn!a. Karena

aktivita' enzim berkaitan erat dengan 'tr&kt&rn!a maka per&baan 'tr&kt&r akan

men!ebabkan per&baan < per&baan aktivita' enzim. Sedangkan pada p

optim&m (&mla ion G tidak mempengar&i kon+orma'i enzim 'eingga

kon+orma'i '&b'trat 'ama dengan kon+roma'i enzim. al ini men!ebabkan


14/24

interak'i antara enzim dan '&b'trat meningkat" 'edangkan pada p optim&m

aktivita' enzim paling tinggi.4ari a'il peng&(ian pengar& '&& teradap aktivita' enzim diperole a'il"

baa '&& optim&m enzim amila'e adala $#o=. Sebel&m menapai '&& ter'eb&t

terliat baa aktivita' enzim keil" al ini di'ebabkan karena '&& ter'eb&t energi

aktiva'i !ang diperl&kan enzim &nt&k mengkatali'i' reak'i idroli'i' '&b'trat

amil&m tidak &k&p 'eingga enzim tidak dapat beker(a dengan baik. Kenaikan

'&& men!ebabkan aktivita' enzim meningkat 'ampai '&& optim&m. Setela

menapai kondi'i optim&m terliat baa aktivita' enzim men&r&n. er(adin!a

pen&r&nan aktivita' ini diperkirakan karena pada '&& tinggi 'tr&kt&r ter'ier enzim

!ang terdiri dari ikatan b&kan kovalen ata& elektro'tatik" ikatan idrogen" ikatan

di'&l+ida dan ikatan idro+obik bila men!erap energi tinggi akan ter(adi pem&t&'andan menagkibatkan ter(adin!a pemb&kaan 'tr&kt&r ter'ier dan k&artener !ang

men!ebabkan kon+orma'i enzim ber&ba dan men!ebabkan aktivita' men&r&n.

)Cirman" 2#1*

. ,-i A#%i5i%as E&i! Lipase

Akti+ita' lipa'e memp&n!ai 'at&an &nit )>*. Sat& &n dengan 1 Hmol a'am lemak

beba' !ang dia'ilkan dari idroli'i' '&b'trat !ang dikatali'i' ole lipa'e tiap

'at&an menit )anda!ani" 2##*. >nt&k menent&kan akti+ita' optim&m pada

kondi'i optim&m lipa'e maka perl& dilak&kan peng&k&ran. akti+ita' enzimatik pada

varia'i temperat&r dan p" 'eingga akan diketa&i akti+ita' lipa'e di'etiap rentang

temperat&r dan p !ang ditent&kan. >(i aktivita' enzim lipa'e dapat dilak&kan

dengan metode poten'iometri. %rin'ip dari &(i aktivita' enzim ini adala '&b'trat

olive oil dib&at dalam bent&k em&l'i dan diberi enzim lipa'e !ang bel&m diketa&i

keakti+ann!a" diink&ba'i pada temperat&r 3#= dan p "$ )=r&eger" 1-@*.

Selama ink&ba'i a'am lemak beba' dilepa'kan dan akan mengalami pen&r&nan p.

4engan ara titra'i" baik 'eara man&al ma&p&n otomati' akan didapat (&mla titer

per'at&an akt& !ang mer&pakan arga aktivita' lipa'e. >nt&k mendapatkan

em&l'i !ang 'tabil bia'an!a ditambakan g&m arabik" tetapi dapat (&ga dig&nakan

idrok'imetil'el&lo'a ata& natri&m oleat ),inarno" 1-$*. Aktivita' enzim dengan

metode poten'iometri dapat diit&ng dengan mengg&nakan r&m&' )arnanik"

2###* :


15/24

Aktivita' enzim I )A < B* J N Na J 1### )2.* J t

Keterangan :

A I vol&me Na 'ampel )m*

B I vol&me Na blanko )m* N Na I #"#1 N < #"# N

1### I konver'i dari m mol ke Hmol

I vol&me enzim !ang dig&nakan )dalam ml*t I akt& ink&ba'i

Keakti+an lipa'e diketa&i dengan abi'n!a '&b'trat ata& timb&ln!a prod&k

idroli'i' a'am lemak beba'. abi'n!a '&b'trat dapat didetek'i antara lain dengan

pearna nile bl&e '&l+at !ang bearna bir&. Sebel&m idroli'i'" lar&tan lemak akan

berarna pink !ait& arna !ang ditimb&lkan ole reak'i antara nile bl&e '&l+at

dengan glob&la lemak. Bila '&b'trat tela abi' diidroli'i'" arna pink akan

ber&ba kembali men(adi bir&. %rod&k a'am lemak !ang dibeba'kan dapat

dig&nakan &nt&k mendetek'i keberadaan enzim lipa'e dengan mengg&nakan

metoda pelat dengan media agar. Metoda pelat dilak&kan dengan mengg&nakan

'en lain met!l red" penol red" rodamine B" !ang ter(adi men!ebabkan

terbent&kn!a arna ata& di'ekitar koloni )K&lkarni" 2##2*. Metoda !ang

dig&nakan &nt&k k&antitati+ adala metoda titrimetri" )potometr!" +l&orimetr!

imm&noemi'tr! dan kond&ktometri. Sebagian be'ar metoda ter'eb&t dide'ain

&nt&k memperkirakan prod&k a'il reak'i idroli'i'. %ro'e' idroli'i' !ang ter(adi

men!ebabkan terbent&kn!a arna ata& +l&ore'ent alo' )K&lkarni" 2##2*. %ro'e'

idroli'i' +l&ore'ent alo' ata& ila!a memperkirakan aktivita' lipa'e 'eara

inter+aial ten'iometr!" Spetro'op! dan t&rbidimetri*" kromatogra+i" dan

kond&ktometri. Sebagian be'ar metoda ter'eb&t dide'ain )K&lkarni" 2##2*.

Aktivita' enzim !ang di&k&r mengg&nakan metoda titrimetri pada prin'ipn!a

adala pemb&atan '&b'trat dalam bent&k em&l'i kem&dian diberi enzim lipa'e

!ang bel&m diketa&i keakti+ann!a dan diink&ba'i pada dan p optim&mn!a.

Selama ink&ba'i" pro'e' beba' dilepa'kan. al ini akan men&r&nkan p. itra'i

!ang dilak&kan mengg&nakan lar&tan alkali akan menga'ilkan (&mla titer

per'at&an akt& !ang men&n(&kkan (&mla a'am lemak !ang dia'ilkan. ;&mla

a'am lemak ter'eb& men&n(&kkan arga aktivita' lipa'e. Em&l'i !ang 'tabil dan


16/24

peningkatan 'en'iti+ita' peng&(ian dapat dilak&kan dengan menambakan g&m

arabik" idrok'imetil'el&lo'a ata& natri&m oleat ),inarno" 1-$*. a(& reak'i

mer&pakan +&ng'i linier dari lipa'e dan k Kon'entra'i '&b'trat !ang berada pada

kondi'i inter+a'ial 'angat penting" 'eingga tria'ilgli'erol dibent&k dalam bent&k

em&l'i" antara lain dengan metoda 'oniation. %enelitian !ang dilak&kan ole

oodman dan 4&rgan )1-$-*" Enzim ipa'e dari A'pergill&' niger 'ebagai

Biokatali' pada %ro'e' li'eroli'i' Menga'ilkan Monoa'ilgli'erol %eng&(ian

aktivita' lipa'e dengan 'pekto+otometri dan +l&ore'en. Aktivita' enzim !ang di&k&r

mengg&nakan metoda titrimetri pada prin'ipn!a adala pemb&atan '&b'trat dalam

bent&k em&l'i kem&dian diberi enzim lipa'e !ang bel&m diketa&i keakti+ann!a

dan diink&ba'i pada temperat&r men&n(&kkan baa 'onika'i min!ak zait&n !ang

diem&l'ikan dengan g&m arabi meningkatkan 'en'iti+ita' peng&(ian )K&lkarni"

2##2*.

)K&rnia" 2#1#*

II. 6. Fa#%(r 2 Fa#%(r 7a&) Me!pe&)ar$*i A#%i5i%as E&i!

Aktivita' dari enzim dalam mengkatali' reak'i dipengar&i ole beberapa +aktor"

diantaran!a adala:

1. K(&se&%rasi e&i!

%ada '&at& kon'entra'i '&b'trat tertent& keepatan reak'i enzimati' bertamba

pada 'aat ber0tamban!a kon'entra'i enzim.

". K(&se&%rasi s$bs%ra%

%ada 'aat kon'entra'i enzim kon'tan ber0tamban!a kon'entra'i '&b'trat

meningkatkan ke0epatan reak'i enzimati'. %ada kon'entra'i tertent& tidak

ter(adi peningkatan keepatan reak'i ala&0p&n kon'entra'i '&b'trat ditamba.

3. S$*$

%ada '&& renda reak'i kimia berlang'&ng lam0bat" pada '&& tinggi 'eara

&m&m reak'i kimia berlang'&ng epat. %ada '&& optim&m keepatan reak'i

enzimati' adala mak'im&m. %ada '&& meleati '&& optim&mn!a dapat

men!ebabkan ter(adin!a denat&ra'i enzim 'eingga men&r&nkan keepatan


17/24

reak'i.

. Dera-a4 Keasa!a& 8pH9

Str&kt&r enzim dipengar&i ole p lingk&ngann0!a. Enzim dapat berm&atan

po'iti+" negati+ ata& berm&atan ganda )zitter ion*. %engar& per&0baan

p lingk&ngan berpengar& pada aktivita' 'i'i akti+ dari enzim.

+. I&*ibi%(r

Keberadaan inibitor akan men&r&nkan keepatan reak'i enzimati'. Dnibitor

dapat membent&k kom0plek' dengan enzim baik pada 'i'i aktiv enzim ma&p&n

bagian lain dari 'i'i aktiv enzim. er0bent&kn!a komplek enzim inibitor akan

men&r&nkan aktivita' enzim teradap '&b'tratn!a )%oed(iadi" 1--@*

),&r!anti" 2##@*

II. :. Ki&e%i#a Rea#si E&i!a%i#

Kon'entra'i '&b'trat mempengar&i keepatan reak'i !ang dikatali' ole enzim.

%engar& berbagai kon'entra'i '&b'trat teradap keepatan reak'i aal (ika

enzim di(aga on'tant dapat diliat di gra+ik berik&t :

ambar 2.1 ra+ik &b&ngan kon'entra'i '&b'trat teradap

keepatan reak'i enzimati'

%er'amaan Miaele' < Menten 'eara matemati' dapat din!atakan dalam per'amaan :

o:Vmaks+[S ]

km+[S ]

dengan : o I keepatan aal pada kon'entra'i '&b'trat LS


18/24

mak' I keepatan mak'im&m

Km I tetapan Miaele' < Menten enzim bagi '&b'trat tertent&

)Mari'on"D.," 1-*.

II. ;. E&i! Papai&

a. Papai&

Enzim %apain mer&pakan enzim protea'e !ang terkand&ng dalam geta papa!a" baik

dalam b&a" batang ma&p&n da&nn!a. Sebagai enzim !ang berkemamp&an 'ebagai

memeakan molek&l protein" dea'a ini papain men(adi '&at& prod&k !ang 'angat

berman+aat bagi keid&pan man&'ia" baik di keid&pan r&ma tangga ma&p&n

ind&'tri. Men&r&t angket kami" didapatkan baa !ang mengeta&i 'eara pa'ti

tentang enzim papain 2 orang" 'edangkan !ang tidak mengeta&i tentang enzim

papain 1# orang dan !ang ma'i rag&0rag& tentang enzim papain adala 2 orang. ;ika

dit&angkan dalam per'en maka 9#F !ang pa'ti mengeta&i tentang enzim papain"

1#F !ang tidak mengeta&i tentang enzim papai dan 2F !ang ma'i rag&0rag&

tentang enzim papain.)N&r&l" 2#12*

b. Apli#asi 4ala! I&4$s%ri 4a& Ke*i4$pa& Se*ari 2 Hari

Melal&i angket !ang tela kami 'ebarkan" didapatkan a'il baa ban!ak re'ponden

!ang men!atakan man+aat enzim papain dapat mengilangkan ra'a a&' adala

orang )F*" !ang men(aab 'ebagai krim pember'i 3# orang )9F* dan !ang

men(aab &nt&k mengilangkan (eraat orang )F*.4ari a'il ter'eb&t dapat ditarik ke'imp&lan baa 'ebagian re'ponden baa '&da

ban!ak !ang mengeta&i man+aat dari enzim papain.

Adap&n man+aat Enzim %apain !ait& dig&nakan dalam ind&'tr! pengolaan daging.

4aging dari ean t&a p&n dapat men(adi l&nak (ika diberi Enzim papain. Bia'an!a

daging ean t&a bertek't&r 'angat kera'. 4engan demikin adirn!a enzim papain

dapat meningkatkan ek'por dan impor ean t&a !ang 'ebel&mn!a tidak lak&

dipa'aran. %apain 'ebagai pel&nak daging ban!ak di(&al dipa'aran dalam kema'an

keil 'e'&ai dengan keb&t&an r&ma tangga. Enzim %apain ini '&da diamp&r


19/24

dengan baan lain 'eperti garam dan g&la agar kand&ngan enzim papainn!a tidak

terlal& k&at. Enzim papain (&ga dig&nakan 'ebagai baan pengan&r 'i'a ata& b&angan a'il

ind&'tr! pengalengan ikan men(adi b&b&r ikan ata& kon'entrat protein eani. B&b&r

ikan ata& kon'entrat eai ini dig&nakan &nt&k keperl&an baan pakan ternak dan

ikan ata& bakan dapat diola men(adi keap.

4a!a memeakan protein !ang dimiliki ole enzim papaindapat ditingkatkan lebi

(a& men(adi kegiatan idroli'i' protein. al ini 'ering dig&nakan dalam pemb&atan

pepton dan a'am0a'am amino. %epton dan a'am amino diperl&kan dalam penelitian

mikrobiologi dan ind&'tri. Bia'an!a arga prod&k 'emaam ini 'angat maal.

%ada ind&'tri pen!amakan k&lit" Enzim papain 'ering dig&nakan &nt&k melemb&tkan

k&lit. K&lit !ang lemb&t dapat dib&at 'ar&ng tangan" (aket bakan kao' kaki.

4an (&ga enzim papain berperan penting dalam ind&'tri bir. 4i'trib&'i dan pen!impanan bir berlang'&ng &k&p lama ata& '&a'ana 'ekitarn!a dingin karena iklim

ata& 'enga(a didinginkan maka dapat terbent&k kab&t p&ti 'eingga dapat

meng&rangi m&t& dan 'elera dari bir ter'eb&t. 4engan penambaan enzim papain 'aat

akan dibotolkan" pembent&kan kab&t ini tidak ter(adi. Dt&la 'ebabn!a enzim papain

'ering di'eb&t 'ebagai obat antidingin.

Enzim papain dapat dig&nakan 'ebagai baan akti+ dalam preparat +arma'i 'eperti

&nt&k obat gangg&an penernaan protein" di'pe'ia" ga'triti'" 'erta obat aing.

Enzim papain (&ga dapat dig&nakan 'ebagai baan krim pember'i k&lit" ter&tama

m&ka. Dni di'ebabkan enzim papain dapat melar&tkan 'el0'el mati !ang melekat pada

k&lit dan '&kar terlepa' dengan ara +i'ik. Selain it&" enzim papain 'ering di(adikan

baan akti+ dalam pemb&atan pa'ta gigi. Enzim papain dalam pa'ta gigi dapat

member'ikan 'i'a protein !ang melekat pada gigi. ama Si'a protein ini 'ering

menimb&lkan ba& b&'&k bila terlal& lama dibiarkan.

Selain beberapa man+aat diata'" enzim papain p&n dapat dig&nakan &nt&k beberapa

keb&t&an" diantaran!a !ait&:a. Baan pen&ian kain '&tera )deter(en*

b. Baan pen&i len'a.

. %eren!a dalam pemb&atan k&e kering

d. Baan pen(erni pada pemb&atan min&man te.e. Baan pengg&mpal '&'& pada pemb&atan ke(&.

)N&r&l" 2#12*


20/24

BAB III

METODOLOGI PER


21/24

III. ". Ga!bar Ala%

Beaker gla'' =entri+&ge =&vet

Kerta' Saring

Magneti 'tirer ab&ng Reak'i Erlenme!er %engi'ap

ermometer ela' >k&r %engad&k


22/24

Stopat imbangan Dndikator %

Kompor i'trik

III. 3.


23/24

didapatkan endapan DD dan +iltrat DD.

Keringkan dan timbang endapan DD )mi'al a gram*" 'impan endapan DD

i ambakan garam pengendap 2 gram L'e'&ai variabel pada +iltrat DD" lal& 'impan 1

malam dalam lemari e'.

( Saring +iltrat DD dengan kerta' 'aring dan mengg&nakan pompa vak&m" 'eingga

didapatkan endapan DDD dan +iltrat DDD.

k Keringkan dan timbang endapan DDD )mi'al b gram*.

l Ambil endapan DD" amp&rkan dengan endapan DDD" (ika (&mla dari endapan DD dan DDD

)a G b gram* lebi be'ar dari 1 gram" ambil 1 gram endapan ter'eb&t" lar&tkan dalam

air 'ampai 1# ml )lar&tan ini adala enzim*.

m ;ika aGb k&rang dari 1 gram" ambil 1 ml +iltrat DDD" enerkan 'ampai 1# ml )lar&tan ini

adala enzim*.

Rea#si E&i!a%is

Enzim %rotea'e

a B&at lar&tan '&'& @# F , dengan ba'i' 12# ml L'e'&ai variabel.

b %ana'kan lar&tan a'ein ter'eb&t 'ampai '&& 3o="@o="o="$o= L'e'&ai variabel.

Ambil 1 dan 3 ml lar&tan enzim dan 3 dan 1 ml lar&tan a'ein L'e'&ai variabel.

d Setela menapai '&& ter'eb&t" t&angkan lar&tan enzim ke dalam lar&tan a'ein.

e =atat akt& 'ampai ter(adin!a pengg&mpalan

pertama. +. %erit&ngan aktivita' enzim

proteolitik :

O

)S&ler dan Cikret" 1--2*

4engan :

I den'ita' '&'& )ka'ein*

I perbandingan vol&me enzim : '&'&

t I akt& pengg&mpalan


24/24

DAFTAR P,STAKA

A&g&'t" E. 2###. Ka(ian %engg&naan ipa'e Amobil dari A'pergill&' Niger pada

%emb&atan Monoa'ilgli'erol !ang Ber'i+at Antibakteri dari Min!ak Kelapa. Bogor:D%B.

El+ira" ;&mra. 2#1@. Kinetika dan Aplika'i Enzim 7Enzim %rotea'e8

Eli'a" ;&lianti. 2#12. ttp'://eli'a(&lianti.+ile'.ordpre''.om/2#12/#-/i'ola'i0dan0

pem&rnian0enzim1.pd+ " diak'e' pada tgl 19 'eptember 2#1

Cirman" S&ba!ang. 2##. D'ola'i dan %eng&(ian Aktivita' Enzim P0amila'e dari

A'pergill&' niger dengan Mengg&nakan Media =amp&ran nggok dan 4edek.

K&rnia" 4R4. 2#1#. St&di Aktivita' Enzim ipa'e dari A'pergill&' Niger 'ebagai

Biokatali' %ada %ro'e' li'eroli'i' &nt&k Menga'ilkan Monoa'ilgli'erol.

eninger. 1--. 4a'ar0da'ar Biokimia. ;akarta:Erlangga.

Miael S&ler dan Kargi Cikret. 1--2. Bioproe'' Engineering Ba'i =onept'. Ne

;er'e!:%rentie all

N&r&l" ,arda. 2#12. ttp://!oroelz#-.blog'pot.o.id/2#12/12/enzim0papain0dari0

pepa!a.tml. 4iak'e' pada tgl 1 'eptember 2#1

Sragg" A.". 1-. Biotenolog! +or Engineer'. Ne 6ork: E. orood

,inarno" C. 1-$. Enzim %angan. ;akarta: ramedia.

,&r!anti. 2##@. D'ola'i dan %enent&an Aktivita' Spe'i+ik Enzim Bromelin dari B&a

Nana') -nanas comosus .)
https://elisajulianti.files.wordpress.com/2012/09/isolasi-dan-pemurnian-enzim1.pdfhttps://elisajulianti.files.wordpress.com/2012/09/isolasi-dan-pemurnian-enzim1.pdfhttp://yoroelz09.blogspot.co.id/2012/12/enzim-papain-dari-pepaya.htmlhttp://yoroelz09.blogspot.co.id/2012/12/enzim-papain-dari-pepaya.htmlhttp://yoroelz09.blogspot.co.id/2012/12/enzim-papain-dari-pepaya.htmlhttp://yoroelz09.blogspot.co.id/2012/12/enzim-papain-dari-pepaya.htmlhttps://elisajulianti.files.wordpress.com/2012/09/isolasi-dan-pemurnian-enzim1.pdfhttps://elisajulianti.files.wordpress.com/2012/09/isolasi-dan-pemurnian-enzim1.pdf

proposal isolasi enzim praktikum mikrobiologi

Documents