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Key Code TSMX9410 www.oxoid.com/ifu Europe +800 135 79 135 US 1 855 236 0910 CA 1 855 805 8539 ROW +31 20 794 7071

RIM E. coli O157:H7 Latex Test

REF R24250……………………… 50 EN

INTENDED USE Remel RIM™ E. coli O157:H7 Latex Test is recommended for use in qualitative procedures to presumptively identify Escherichia coli serogroup O157:H7 grown on culture media.

SUMMARY AND EXPLANATION Escherichia coli O157:H7 was first recognized as a cause of hemorrhagic colitis in 1982.1,2 Since then, the verocytotoxin produced by E. coli O157:H7 has also been identified as an agent of hemolytic uremic syndrome (HUS).3-5 E. coli serotypes other than O157:H7 also produce verocytotoxins, but are usually not associated with bloody diarrhea.

E. coli O157:H7 is difficult to detect with methods ordinarily used in clinical laboratories. Most strains of E. coli O157:H7 ferment lactose rapidly and are indistinguishable from non-O157:H7 E. coli on conventional enteric media. E. coli O157:H7 does not ferment sorbitol, unlike most strains of non-O157:H7 E. coli, Salmonella, and Citrobacter. The use of a selective/differential medium such as Sorbitol MacConkey Agar (SMAC) has been found to facilitate detection of E. coli O157:H7. Sorbitol-fermenters form pink to red colonies on SMAC; nonsorbitol-fermenters are colorless E. coli O157:H7 Latex Test can be used to presumptively identify E. coli O157:H7 from sorbitol-negative colonies grown on SMAC primary culture plates.

PRINCIPLE E. coli O157:H7 Latex Test includes 3 latex reagents. The particles in each reagent are coated with a different antibody: one against E. coli serotype O157, another against E. coli serotype H7, and the third with normal rabbit globulin, to serve as the control latex. When Test Latex particles are mixed with fresh colonies of O157 and/or H7 strains of E. coli, an immunochemical reaction occurs, resulting in agglutination. No agglutination indicates the test isolate is not E. coli O157:H7. The Control Latex reagent identifies non-specific agglutination.

PRECAUTIONS This product is for in vitro diagnostic use and should be used by properly trained individuals. Precautions should be taken against the dangers of microbiological hazards by properly sterilizing specimens, containers, and media after use. Directions should be read and followed carefully.

Control Latex contains sodium azide (0.1%) which is toxic if swallowed and harmful by inhalation or skin contact, may be toxic to the aquatic environment, and cause long-term effects. Refer to Safety Data Sheet for additional information on reagent chemicals. Contains:

Sodium azide 26628-22-8 Ethyl alcohol 64-17-5 Formaldehyde 50-00-0 Signal Word

Danger

Hazard Statements

May cause cancer Contains formaldehyde. May produce an allergic reaction Precautionary Statements Prevention

Obtain special instructions before use Do not handle until all safety precautions have been read and understood Wear protective gloves/ protective clothing/ eye protection/ face protection IF exposed or concerned: Get medical advice/ attention Use personal protective equipment as required Additional EU labelling

Restricted to professional users Response

IF exposed or concerned: Get medical attention/advice Storage

Store locked up Disposal

Dispose of contents/container to an approved waste disposal plant Hazards not otherwise classified (HNOC)

None identified Emergency Telephone Number

INFOTRAC - 24 Hour Number: 1-800-535-5053 Outside of the United States, call 24 Hour Number: 001-352-323-3500 (Call Collect)

STORAGE This product is ready for use and no further preparation is necessary. Store product in its original container at 2-8°C until used. Do not freeze. Do not incubate prior to use.

PRODUCT DETERIORATION This product should not be used if (1) the color has changed, (2) the expiration date has passed, or (3) there are other signs of deterioration.

SPECIMEN COLLECTION, STORAGE, AND TRANSPORT Specimens should be collected and handled following recommended guidelines.7,8

MATERIALS SUPPLIED E. coli O157 Test Latex (green cap) 4.0 ml - one dropper vial containing latex particles coated with E. coli O157 pooled rabbit antibody, suspended in buffered solution with preservative

E. coli H7 Test Latex (blue cap) 4.0 ml - one dropper vial containing latex particles coated with E. coli H7 pooled rabbit antibody, suspended in buffered solution with preservative

E. coli Control Latex (neutral cap) 4.0 ml - one dropper vial containing latex particles coated with pooled normal rabbit globulin, suspended in buffered solution with 0.1% sodium azide

E. coli O157:H7 Positive Control (red cap) 3.0 ml - one dropper vial containing formalin-killed cell suspension of E. coli O157:H7 in buffered saline

E. coli (not O157:H7) Negative Control (yellow cap) 3.0 ml - one dropper vial containing a formalin-killed cell suspension of non-toxigenic E. coli in buffered saline

Plastic Stirring Sticks (75)

Disposable Slides (35)

Instructions for Use (IFU) MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED (1) Loop sterilization device, (2) Inoculating loop, needle, collection containers, (3) Incubators, alternative environmental systems, (4) Supplemental media, (5) Quality control organisms (optional), (6) Boiling water bath, (7) McFarland standard #1 (REF R20411) or equivalent, (8) Sterile saline (0.85%), (9) Glass test tubes, (10) Micropipettes.

http://www.oxoid.com/ifu

12076 Santa Fe Drive, Lenexa, KS 66215, USA General Information: (800) 255-6730 Website: www.remel.com Email: [email protected]

Local/International Phone: (913) 888-0939 International Fax: (913) 895-4128

Contents Symbols

E. coli O157 Test Latex


E. coli H7 Test Latex


E. coli Control Latex


E. coli O157:H7 Positive Control


E. coli (not O157:H7) Negative Control


Plastic Stirring Sticks


Disposable Slides

Disposable Slides

PROCEDURE Note: Allow reagents to equilibrate to room temperature before use. Mix latex reagents thoroughly by gentle agitation. Hold the vials vertically and dispense only free-falling drops. Do not interchange components among different lot numbers of test kits.

1. Acceptable isolates and media include only:

a. Non-sorbitol fermenting colonies (NSFC) isolated on Sorbitol MacConkey Agar (SMAC) to test for E. coli O157.

b. A subculture of NSFC growing on blood agar to test for E. coli H7.

2. For each isolate to be tested dispense one drop of Test Latex (green cap) into a well of the test slide.

3. In like manner, dispense one drop of E. coli Control Latex (neutral cap) into a separate well of the test slide.

4. Using a plastic stick (provided), remove a portion of the NSFC from the SMAC plate and emulsify in E. coli O157 Test Latex on the slide. Spread over two-thirds of the reaction area. Discard the plastic stick. Using a fresh plastic stick, repeat the process with remaining NSFC and emulsify in E. coli Control Latex on the slide.

5. Rotate slide using circular motions through 3 planes for up to 1 minute or until agglutination appears.

6. If agglutination occurs with the E. coli O157 Test Latex and the Control Latex is negative, streak the isolate to a blood agar plate, incubate overnight, and proceed to step 7. If agglutination occurs with both the Test Latex and the Control Latex, proceed to step 8. Dispose of the test slide after reading.

7. After overnight incubation (18-24 hours) repeat the test. Emulsify a sweep of growth from the blood agar plate in a drop of E. coli H7 Test Latex (blue cap). The Control Latex is omitted in this step. Do not use boiled cells with the H7 Test Latex.

a. Agglutination indicates the presence of E. coli O157:H7.

b. If no agglutination occurs with the H7 Latex, retest the isolate after passage through appropriate motility media (followed by subculture to a blood agar plate) before concluding that the H7 antigen is absent.

8. Any test isolate that agglutinates with both E. coli O157 Test Latex and E. coli Control Latex should be treated as follows:

a. Suspend the test isolate in 0.5 ml of sterile saline in a glass tube. The suspension turbidity should be > a #1 McFarland Standard or equivalent.

b. Place tube in a boiling water bath for 10 minutes. Allow tube to cool to room temperature. Retest the isolate, using 30-50 µl of the suspension, with O157 Test Latex and the Control Latex.

i) If agglutination occurs with E. coli O157 Test Latex and not with Control Latex, subculture the isolate to a blood agar plate. After overnight incubation, test with the H7 Test Latex as in step 7.

ii) If agglutination occurs with both E. coli O157 Test Latex and Control Latex after boiling, the test is inconclusive. Send isolates biochemically confirmed as E. coli to a reference laboratory for further testing.

INTERPRETATION OF THE TEST Positive Result - Agglutination* of Test Latex (O157 or H7) accompanied

by no agglutination of Control Latex within 1 minute

Negative Result - No agglutination of the Test Latex and the Control Latex within 1 minute

Inconclusive - Agglutination of the O157 Test Latex and the Control Latex within 1 minute

*Large black clumps visible to the unaided eye, with clearing of the background

O157 Test Latex

H7 Test Latex

Control Latex

INTERPRETATION

+ - - E. coli O157 not H7 present

+ + - E. coli O157:H7 present

+ Not tested + Non-specific agglutination (boil and retest O157)

- - + E. coli O157:H7 not present

+ + + Inconclusive results

- - - E. coli O157:H7 not present

Isolates that are positive with E. coli O157:H7 should always be confirmed biochemically as E. coli.6

Because bacteria vary in their expression of flagellar antigens, E. coli O157 positive isolates that are initially negative in E. coli H7 Test Latex should be retested after passage through appropriate motility media to enhance motility before concluding that the H7 antigen is not present.

Strain variations and the concentration of the cell suspension will affect the degree of agglutination. This test is considered negative when there is no agglutination in the E. coli Test Latex and the E. coli Control Latex.

QUALITY CONTROL A Positive and Negative Control is included with each kit. Test Controls with each new kit lot number and shipment or following applicable regulatory guidelines. Test the Positive Control (red cap) with O157 Test Latex, H7 Test Latex, and Control Latex. In like manner, test the Negative Control (yellow cap) with all 3 latex reagents. The controls should perform as indicated in the table below. If aberrant quality control results are noted, patient results should not be reported.

INTERPRETATION OF QUALITY CONTROL

O157 Latex

H7 Latex

Control Latex

Result

Positive Control + + - Satisfactory performance

Positive Control - - - Potency dropped, do not report test results

Negative Control - - - Satisfactory performance

Negative Control + + +/- Loss of specificity, do not report test results

Agglutination of Positive Control with both Test Latex reagents indicates reagent sensitivity has been retained.

No agglutination of Negative Control with both Test Latex reagents indicates reagent specificity has been retained.

PERFORMANCE CHARACTERISTICS E. coli O157:H7 Latex Test was compared to other reagents made and used at a large U.S. government reference laboratory and to commercial reagents used at a state health laboratory (Study #1). The strains were from stock culture collections and the test was performed following the procedure in this IFU. The results are outlined below.

Study #1 (n=162):

REFERENCE REAGENTS

(+) O157:H7 (-) NSFC not E. coli O157:H7

Inconclusive

Remel E.coli Test

(+) 64

(-) 5** 89

Inconclusive 4***

Relative sensitivity* >99% Relative specificity* >99% *As compared to combined biochemical and reference serological identification. **Five isolates were positive for agglutination with E. coli H7 Test Latex after passage through motility medium. ***Four strains of E. coli agglutinated with the Control Latex and were scored as inconclusive. None of these isolates were confirmed as E. coli O157.

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Study #2: (n=127): A second study was performed in three clinical laboratories to evaluate the relative specificity of E. coli O157:H7 Latex Test compared to biochemical identification and another commercially available E. coli O157 Latex Test, using fresh isolates. A total of 127 NSFC clinical isolates from fresh human stool specimens were tested. These isolates were identified using both biochemical and serological methods. Of the isolates tested, 126 were negative by both methods (specificity >99%). One isolate was identified as E. coli O157 by both latex reagents and as E. coli O157:H7 by the method.

Both studies included 22 different sorbitol-nonfermenting genera and species.

LIMITATIONS 1. Test only pure cultures initially grown on SMAC agar for O157. 2. Some brands of wooden applicators have been reported to affect

results and should not be used in this test. 3. Nonmotile isolates positive for the O157 antigen should be evaluated

for Shiga toxin production to rule out enterohemorrhagic E. coli. Some strains of E. coli O157 do not produce Shiga toxin, but do have an H antigen other than H7. A few toxin-producing strains of nonmotile E. coli O157 have been reported.9

4. The use of SMAC agar and/or RIM™ E. coli O157:H7 Latex Test will not determine nor confirm that an E. coli isolate is a verocytotoxin-producing strain. Other serotypes of E. coli have been identified which produce verocytotoxin.

5. Young, fast-growing cultures more readily express antigens identified by this test. Isolates removed from the agar surface of an overnight culture will yield the best results.

6. Blood agar may enhance the production of flagella and affords better detection of flagellar antigens.

7. When infections of E. coli O157:H7 are identified, they should be reported to local health departments for further evaluation and, if necessary, public action to prevent the spread of disease.2

8. Citrobacter freundii and Salmonella Group N (O30) are antigenically related to E. coli O157 and have been reported to yield positive results with E. coli O157:H7 Latex Test. These strains readily ferment sorbitol and are biochemically distinguishable from E. coli. Isolates that are positive with E. coli O157:H7 should always be confirmed biochemically as E. coli.6

9. When making a diagnosis, test results must be interpreted in the context of patient illness, history, and physical examination. Laboratory testing should not be used as the sole basis for the institution of antibiotic therapy.

10. Strains of E. coli O157:H7 that do not produce Shiga toxin have been reported.10

BIBLIOGRAPHY 1. Wells, J.G., B.R. Davis, I.K. Wachsmuth, L.W. Riley, R.S. Remis, R.

Sokolow, and G.K. Morris. 1983. J. Clin. Microbiol. 18:512-520. 2. Centers for Disease Control and Prevention. 1993. Preliminary Report:

Foodborne Outbreak of E. coli O157:H7 Infections from Hamburgers-Western United States. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 42: 85-86.

3. Centers for Disease Control and Prevention. 1993. Update: Multistate Outbreak of E. coli Infections from Hamburgers-Western United States, 1992-1993. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 42:258-263

4. Ratnam, S., S.B. March, R. Ahmed, G.S. Bezanson, and S. Kasatiya. 1988. J. Clin. Microbiol. 26: 2006-2012.

5. Ewing, W.E. 1986. Identification of Enterobacteriaceae. 4th ed. Elsevier, New York, N.Y.

6. Sowers, E.G., J.G. Wells, and N.A. Strockbine. 1996. J. Clin. Microbiol. 34:1286-1289.

7. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry, and M.A. Pfaller. 2007. Manual of Clinical Microbiology. 9th ed. ASM Press, Washington, D.C.

8. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology. 12th ed. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.

9. Centers for Disease Control and Prevention. 2009. Recommendations for Diagnosis of Shiga Toxin-Producing E. coli Infections by Clinical Laboratories. Morbid. Mortal. Weekly Rep. 58: 1-14.

10. Schmidt, H., J. Scheef, H.I. Huppertz, M. Frosch, and H. Karch. 1999. J. Clin. Microbiol. 37:3491-3496.

PACKAGING REF R24250, E.coli O157:H7 Latex Test ............................... 50 Tests/Kit

Symbol Legend

Contains sufficient for < n > tests

REF Catalog Number

IVD In Vitro Diagnostic Medical Device

LAB For Laboratory Use

Consult Instructions for Use (IFU)

Temperature Limitation (Storage Temp.)

LOT Batch Code (Lot Number)

Use By (Expiration Date)

EC REP

Authorized European Representative

Manufacturer

RIM™ is a trademark of Remel Inc. ATCC® is a registered trademark of American Type Culture Collection.

IFU X9410 Revised October 9, 2017 Printed in U.S.A.


Code clé TSMX9410 www.oxoid.com/ifu Europe +800 135 79 135 États-Unis 1 855 236 0910 CA 1 855 805 8539 Autres pays +31 20 794 7071

Test au latex RIM E. coli O157:H7

REF R24250……………………… 50 FR

UTILISATION PRÉVUE Le test au latex E. coli O157:H7 RIM™ Remel est recommandé dans les procédures quantitatives afin d’identifier de manière présomptive le sérogroupe Escherichia coli O157:H7 cultivé dans un milieu de culture.

RÉSUMÉ ET EXPLICATION Escherichia coli O157:H7 a été reconnu pour la première fois comme étant à l’origine de la rectocolite hémorragique en 1982.1,2 Depuis, la vérocytotoxine produite par l’E. coli O157:H7 a été identifiée comme un agent du syndrome hémolytique et urémique (SHU).3-5 Les sérotypes d’E. coli autres que l’O157:H7 produisent également des vérocytotoxines, mais ils ne sont généralement pas associés aux diarrhées sanglantes.

L’E. coli O157:H7 est difficile à détecter avec les méthodes traditionnellement utilisées dans les laboratoires cliniques. La plupart des souches d’E. coli O157:H7 fermentent le lactose rapidement et ne se distinguent pas de l’E. coli non O157:H7 dans les milieux entériques traditionnels. L’E. coli O157:H7 ne fermente pas le sorbitol, contrairement à la plupart des souches d’E. Coli non O157:H7, de Salmonella et de Citrobacter. Il a été prouvé que l’utilisation d’un milieu sélectif / différentiel comme l’agar MacConkey au sorbitol (SMAC) facilite la détection de l’E. coli O157:H7. Les fermenteurs au sorbitol forment des colonies roses-rouges sur le SMAC. Les fermenteurs sans Sorbitol sont incolores. Le test au latex E. coli O157:H7 peut être utilisé pour identifier de manière présomptive l’E. coli O157:H7 des colonies sorbitol-négatives cultivées sur les plaques de culture SMAC, principalement.

PRINCIPE Le test au latex E. coli O157:H7 inclut 3 réactifs au latex. Les particules de chaque réactif sont enduites d’un anticorps différent : l’un contre le sérotype E. coli O157, un autre compte le sérotype E. coli H7 et le troisième avec de la globuline de lapin normale, qui agit comme latex de contrôle. Lorsque les particules de latex de test sont mélangées avec des colonies d’O157 fraîchement préparées et/ou des souches de H7 d’E. coli, une réaction immunochimique se produit et entraîne une agglutination. L’absence d’agglutination indique que l’isolat du test n’est pas l’E. coli O157:H7. Le réactif au latex de contrôle identifie une agglutination non spécifique.

PRÉCAUTIONS Ce produit est destiné au diagnostic in vitro et son usage est réservé à des personnes dûment formées. Les échantillons, les récipients et le milieu doivent être correctement stérilisés après utilisation afin de prévenir tout risque microbiologique. Ces instructions doivent être lues attentivement et appliquées avec soin.

Le latex de contrôle contient de l’azoture de sodium (0,1 %), qui est toxique en cas d’ingestion et dangereux en cas d’inhalation ou de contact cutané, et qui peut être toxique pour les environnements aquatiques et peut provoquer des effets à long terme. Se reporter à la fiche de données de sécurité pour obtenir davantage d’informations sur les produits chimiques réactifs. Contenu :

Azoture de sodium 26628-22-8 Éthanol 64-17-5 Formaldéhyde 50-00-0

Mention d’avertissement

Danger

Mentions de danger

Peut provoquer le cancer. Contient du formaldéhyde. Peut provoquer une réaction allergique. Conseils de prudence Prévention

Se procurer les instructions spécifiques avant utilisation Ne pas manipuler avant d’avoir lu et compris toutes les précautions de sécurité Porter des gants de protection / vêtements de protection / lunettes de protection / masques de protection EN CAS d’exposition avérée ou suspectée : demander un avis médical / consulter un médecin Utiliser l’équipement de protection individuel requis Étiquetage UE supplémentaire

Usage limité aux utilisateurs professionnels Intervention

EN CAS d’exposition avérée ou suspectée : demander un avis médical / consulter un médecin Stockage

Garder sous clé Mise au rebut

Éliminer le contenu / récipient dans une usine approuvée de traitement des déchets Dangers non classifiés autrement (DNCA)

Aucun connu Numéro de téléphone en cas d’urgence

INFOTRAC – 24h/24 : 1-800-535-5053 À l’extérieur des États-Unis, numéro d’appel 24h/24 : 001-352-323-3500 (appel à frais virés)

STOCKAGE Ce produit est prêt à l’emploi et ne nécessite aucune préparation supplémentaire. Conserver le produit dans son conditionnement d’origine à 2-8 °C jusqu’à ce qu’il soit utilisé. Ne pas congeler. Ne pas incuber avant l’emploi.

DÉTÉRIORATION DU PRODUIT Ce produit ne doit pas être utilisé en cas (1) de changement de la couleur, (2) de dépassement de la date de péremption ou (3) de présence d’autres signes de détérioration.

PRÉLÈVEMENT, CONSERVATION ET TRANSPORT DES ÉCHANTILLONS Les échantillons doivent être prélevés et manipulés conformément aux directives recommandées.7,8

CONTENU DU KIT Latex de test E. coli O157 (capuchon vert) 4,0 ml – un flacon avec compte-gouttes contenant des particules de latex enduites d’un mélange d’anticorps de lapin anti-E.coli O157, suspendues dans une solution tamponnée avec conservateur

Latex de test E. coli H7 (capuchon bleu) 4,0 ml – un flacon avec compte-gouttes contenant des particules de latex enduites d’un mélange d’anticorps de lapin anti-E.coli H7, suspendues dans une solution tamponnée avec conservateur

Latex de contrôle E. coli (capuchon neutre) 4,0 ml – un flacon avec compte-gouttes contenant des particules de latex enduites d’un mélange de globuline de lapin normale, suspendues dans une solution tamponnée avec 0,1 % d’azoture de sodium

Contrôle positif E. coli O157:H7 (capuchon rouge) 3,0 ml – un flacon avec compte-gouttes contenant une suspension de cellules d’E. coli O157:H7 tuées à la formaline, dans une solution saline tamponnée

Contrôle négatif E. coli (non O157:H7) (capuchon jaune) 3,0 ml – un flacon avec compte-gouttes contenant une suspension de cellules d’E. coli non toxigènes tuées à la formaline, dans une solution saline tamponnée


Mélangeurs en plastique (75)

Lames jetables (35)

Notice d’utilisation MATÉRIEL REQUIS, MAIS NON FOURNI (1) dispositif de stérilisation de l’anse, (2) anse d’ensemencement, écouvillons, récipients de prélèvement, (3) incubateurs, systèmes environnementaux alternatifs (4) milieux de supplémentation, (5) organismes de contrôle qualité (facultatif), (6) bain d’eau bouillante, (7) standard McFarland n° 1 (RÉF. R20411) ou équivalent, (8) solution saline stérile (0,85 %), (9) tubes à essai en verre, (10) micropipettes. Symboles du contenu


Latex de test E. coli O157


Latex de test E. coli H7


Latex de contrôle E. coli


E. coli O157:H7 Contrôle positif


E. coli (non O157:H7) Contrôle négatif


Mélangeurs en plastique

Disposable Slides

Lames jetables

PROCÉDURE Remarque : équilibrer les réactifs à la température ambiante avant toute utilisation. Mélanger minutieusement les réactifs au latex en remuant délicatement. Tenir les flacons à la verticale et ajouter uniquement des gouttes en chute libre. Ne pas permuter les composants entre les kits de test provenant de lots différents.

1. Isolats et milieux de culture exclusivement autorisés :

a. Colonies non fermentantes de sorbitol (NSFC) isolées sur l’agar MacConkey au sorbitol (SMAC) pour détecter l’E. coli O157.

b. Une sous-culture de NSFC cultivée sur l’agar au sang pour détecter l’E. coli H7.

2. Pour chaque isolat à tester, disposer une goutte de latex de test (capuchon vert) dans un puits de la lame de test.

3. De la même manière, disposer une goutte de latex de contrôle d’E. coli (capuchon neutre) dans un autre puits de la lame de test.

4. À l’aide d’un mélangeur en plastique (fourni), retirer une partie de la NSFC de la plaque de SMAC et émulsifier dans le latex de test E. coli O157 sur la lame. Répartir sur deux tiers de la zone de réaction. Mettre le mélangeur en plastique au rebut. À l’aide d’un mélangeur en plastique neuf, répéter le processus avec le reste de la NSFC et émulsifier dans le latex de contrôle d’E. coli sur la lame.

5. Faire pivoter la lame à l’aide de mouvements circulaires sur 3 plans pendant 1 minute au maximum, ou jusqu’à ce qu’un phénomène d’agglutination se produise.

6. Si une agglutination se produit avec le latex de test E. coli O157 et que le latex de contrôle est négatif, répartir l’isolat sur une plaque d’agar au sang, incuber pendant la nuit et passer à l’étape 7. En cas d’agglutination avec le latex de test et le latex de contrôle, passer à l’étape 8. Mettre la lame de test au rebut après l’opération.

7. Après la période d’incubation (18-24 heures), répéter le test. Émulsifier un échantillon de culture de la plaque d’agar au sang dans une goutte de latex de test E. coli H7 (capuchon bleu). Le latex de contrôle n’est pas inclus dans cette étape. Ne pas utiliser de cellules passées à ébullition avec le latex de test H7.

a. L’agglutination indique la présence d’E. coli O157:H7.

b. Si aucun phénomène d’agglutination ne se produit avec le latex H7, retester l’isolat après un passage dans un milieu à motilité appropriée (suivi par une sous-culture sur une plaque d’agar au sang) avant de confirmer l’absence d’antigène H7.

8. Les isolats de test qui s’agglutinent avec le latex de test E. coli O157 ET le latex de contrôle E. coli doivent être traités comme suit :

a. Suspendre l’isolat de test dans 0,5 ml de solution saline stérile, dans un tube en verre. La turbidité de la suspension doit être > à un standard McFarland n° 1 ou équivalent.

b. Placer le tube dans un bain d’eau bouillante pendant 10 minutes. Laisser le tube refroidir à température ambiante. Retester l’isolat, à l’aide de 30-50 µl de suspension, avec le latex de test O157 et le latex de contrôle.

i. Si une agglutination se produit avec le latex de test E. coli O157, mais pas avec le latex de contrôle, créer une sous-culture d’isolat sur une plaque d’agar au sang. Après la nuit d’incubation, procéder au test avec le latex de test H7, comme indiqué à l’étape 7.

ii) En cas d’agglutination avec le latex de test E. coli O157 ET le latex de contrôle, après ébullition, le test est non concluant. Transmettre les isolats biochimiquement confirmés comme E. coli à un laboratoire de référence afin de procéder à d’autres tests.

INTERPRÉTATION DU TEST Résultat positif – Agglutination* du latex de test (O157 ou H7), sans

agglutination du latex de contrôle, dans un délai de 1 minute

Résultat négatif –

Pas d’agglutination du latex de test ni du latex de contrôle dans un délai de 1 minute

Non concluant – Agglutination du latex de test O157 et du latex de contrôle dans un délai de 1 minute

*Gros amas noirs visibles à l’œil nu, avec éclaircissement du fond.

Latex de test

O157

Latex de test H7

Latex de contrôle

INTERPRÉTATION

+ - - E. coli O157 présent, H7 absent

+ + - E. coli O157:H7 présent

+ Non testé + Agglutination non spécifique (faire bouillir et retester O157)

- - + E. coli O157:H7 absent

+ + + Résultats non concluants

- - - E. coli O157:H7 absent

Les isolats testés positifs à l’E. coli O157:H7 doivent faire l’objet d’une confirmation biochimique attestant qu’il s’agit bien d’E.coli.6

L’expression des antigènes flagellaires des bactéries varie. C’est pourquoi les isolats positifs à l’E. coli O157 qui sont initialement négatifs dans le latex de test E. coli H7, doivent être retestés après un passage dans un milieu à motilité appropriée afin d’améliorer la motilité avant de confirmer l’absence d’antigène H7.

Les variations de souches et la concentration de la suspension cellulaire affectent le degré d’agglutination. Ce test est considéré comme négatif lorsque le latex de test E. coli et le latex de contrôle E. coli ne présentent pas d’agglutination.

CONTRÔLE QUALITÉ Un contrôle positif et un contrôle négatif sont inclus dans chaque kit. Tester les contrôles avec chaque nouveau lot de kit et chaque livraison, ou conformément aux directives règlementaires en vigueur. Tester le contrôle positif (capuchon rouge) avec le latex de test O157, le latex de test H7 et le latex de contrôle. De la même manière, tester le contrôle négatif (capuchon jaune) avec les 3 réactifs au latex. Les contrôles doivent être effectués conformément au tableau ci-dessous. Si des résultats aberrants sont observés au contrôle qualité, les résultats du patient ne doivent pas être rapportés.

INTERPRÉTATION DU CONTRÔLE QUALITÉ

Latex O157

Latex H7

Latex de contrôle

Résultat

Contrôle positif + + - Performance satisfaisante

Contrôle positif - - - Diminution de l’activité, ne pas rapporter les résultats du test

Contrôle négatif - - - Performance satisfaisante

Contrôle négatif + + +/- Perte de spécificité, ne pas rapporter les résultats du test

L’agglutination du contrôle positif avec les deux réactifs au latex de test indique que la sensibilité du réactif a été conservée.

L’absence d’agglutination du contrôle négatif avec les deux réactifs au latex de test indique que la spécificité du réactif a été conservée.

CARACTÉRISTIQUES DE PERFORMANCE Le test au latex E. coli O157:H7 a été comparé à d’autres réactifs créés et utilisés dans un grand laboratoire de référence américain et à des réactifs

commerciaux utilisés dans un laboratoire de santé étatique (étude n° 1). Les souches provenaient de prélèvements de culture mère et le test a été réalisé conformément à la procédure détaillée dans la présente notice d’utilisation. Les résultats obtenus sont reportés ci-dessous.

Étude n° 1 (n = 162) :

RÉACTIFS DE RÉFÉRENCE

(+) O157:H7 (-) NSFC non-E. coli O157:H7

Non concluant

Test E.coli Remel

(+) 64

(-) 5** 89

Non concluant 4***

Sensibilité relative* > 99 % Spécificité relative* > 99 % *Par rapport à l’identification sérologique de référence et biologique combinée. **Cinq isolats ont été testés positifs pour l’agglutination avec le latex de test E. coli H7 après passage dans un milieu de motilité. ***Quatre souches d’E. coli se sont agglutinées avec le latex de contrôle et ont été identifiées comme étant non concluantes. Aucun de ces isolats n’a été confirmé comme étant E. coli O157.

Étude n° 2 (n = 127) : Une deuxième étude a été réalisée dans trois laboratoires cliniques, afin d’évaluer la spécificité relative du test au latex E. coli O157:H7 par rapport à l’identification biochimique et un autre test au latex E. coli O157 disponible sur le marché, à l’aide d’isolats fraîchement préparés. En tout, 127 isolats cliniques de NSFC provenant d’échantillons de selles humaines fraîches ont été testés. Ces isolats ont été identifiés à l’aide des méthodes biochimiques et sérologiques. Sur les isolats testés, 126 ont été déclarés négatifs avec les deux méthodes (spécificité > 99 %). Un isolat a été identifié comme E. coli O157 par les deux réactifs au latex et comme E. coli O157:H7 par la méthode.

Les deux études incluaient 22 espèces et genres non fermentants de sorbitol différents.

LIMITES 1. Pour O157, tester uniquement des cultures pures initialement

cultivées sur agar SMAC. 2. Certaines marques d’applicateurs en bois peuvent affecter les

résultats et ne doivent pas être utilisées pour ce test. 3. Les isolats non motiles positifs à l’antigène O157 doivent subir une

évaluation de la production de shigatoxines afin de confirmer l’absence d’E. coli enterohémorragiques. Certaines souches d’E.coli O157 ne produisent pas de shigatoxines, mais possèdent un antigène H autre que H7. La présence de quelques souches productrices de toxines d’E.coli O157 non motiles a été signalée.9

4. L’utilisation de l’agar SMAC et/ou du test au latex E. coli O157:H7 RIM™ ne permet pas de déterminer ni de confirmer qu’un isolat E. coli est une souche productrice de vérocytotoxines. D’autres sérotypes d’E. coli producteurs de vérocytotoxines ont été identifiés.

5. Les cultures jeunes et à croissance rapide expriment plus rapidement les antigènes identifiés par ce test. Les isolats retirés de la surface de l’agar d’une culture ayant incubé pendant la nuit génèrent les meilleurs résultats.

6. L’agar au sang peut améliorer la production de flagelles et la détection des antigènes flagellaires.

7. Lorsque des infections d’E. coli O157:H7 sont identifiées, elles doivent être signalées aux départements de santé locaux afin de procéder à des évaluations approfondies et, si nécessaire, afin de mettre en œuvre une action publique visant à prévenir la prolifération de la maladie.2

8. Les Groupes N Citrobacter freundii et Salmonella (O30) sont antigéniquement associés à l’E. coli O157 et ont effectivement généré des résultats positifs au test au latex E. coli O157:H7. Ces souches fermentent rapidement le sorbitol et se distinguent biochimiquement de l’E. coli. Les isolats testés positifs à l’E. coli O157:H7 doivent toujours faire l’objet d’une confirmation biochimique attestant qu’il s’agit bien d’E.coli.6

9. Lors du diagnostic, les résultats des tests doivent être interprétés en fonction de la maladie, de l’historique et de l’examen physique du

patient. Le laboratoire procédant au test ne doit pas être la seule référence pour la mise en œuvre d’un traitement antibiotique.

10. Des souches d’E. coli O157:H7 qui ne produisent pas de shigatoxines ont été signalées.10

BIBLIOGRAPHIE 1. Wells, J.G., B.R. Davis, I.K. Wachsmuth, L.W. Riley, R.S. Remis, R.

Sokolow et G.K. Morris. 1983. J. Clin. Microbiol. 18:512-520. 2. Centers for Disease Control and Prevention. 1993. Preliminary Report:



4. Ratnam, S., S.B. March, R. Ahmed, G.S. Bezanson et S. Kasatiya. 1988. J. Clin. Microbiol. 26: 2006-2012.


6. Sowers, E.G., J.G. Wells et N.A. Strockbine. 1996. J. Clin. Microbiol. 34:1286-1289.

7. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry et M.A. Pfaller. 2007. Manual of Clinical Microbiology. 9th ed. ASM Press, Washington, D.C.

8. Forbes, B.A., D.F. Sahm et A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology. 12th ed. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.


10. Schmidt, H., J. Scheef, H.I. Huppertz, M. Frosch et H. Karch. 1999. J. Clin. Microbiol. 37:3491-3496.

CONDITIONNEMENT RÉF. R24250, Test au latex E.coli O157:H7 ........................... 50 tests / kit

Symboles

Contenu suffisant pour < n > tests

RÉF. Référence du catalogue

IVD Dispositif médical de diagnostic in vitro

LAB Usage réservé aux laboratoires

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Limites de température (Temp. de stockage)

LOT Code de lot (numéro de lot)

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EC REP

Représentant européen agréé

Fabricant

RIM™ est une marque de commerce de Remel Inc. ATCC® est une marque déposée d’American Type Culture Collection.

Notice d’utilisation X9410 révisée le 9 octobre 2017 Imprimée aux États-Unis.

Freischalt-Code TSMX9410 www.oxoid.com/ifu Europa +800 135 79 135 USA 1 855 236 0910 Kanada +1 855 805 8539 Übrige Länder weltweit +31 20 794 7071

RIM E. coli O157:H7 Latex-Test

REF R24250……………………… 50 DE VERWENDUNGSZWECK Der Latex-Test für E. coli O157:H7 von Remel RIM™ wird für die Verwendung in qualitativen Verfahren empfohlen, um die auf Kulturmedien gezüchtete Escherichia-coli-Serogruppe O157:H7 präsumptiv zu identifizieren.

ZUSAMMENFASSUNG UND BESCHREIBUNG Escherichia-coli O157:H7 wurde im Jahr 1982 zunächst als eine Ursache von hämorrhagischer Kolitis verstanden.1,2 Seitdem wurde das von E. coli O157:H7 produzierte Verocytotoxin ebenfalls als Ursache des hämolytisch-urämischen Syndroms (HUS) identifiziert.3-5 Andere E. coli-Serotypen als O157:H7 produzieren ebenfalls Verocytotoxin, aber werden normalerweise nicht mit blutiger Diarrhoe in Verbindung gebracht.

E. coli O157:H7 lässt sich mit Methoden, die normalerweise in klinischen Laboren verwendet werden, nur schwer nachweisen. Die meisten Stämme von E. coli O157:H7 können Laktose sehr schnell fermentieren und sind von nicht-O157:H7 E. coli auf herkömmlichen enterischen Medien nicht unterscheidbar. E. coli O157:H7 fermentiert im Gegensatz zu den meisten Stämmen von nicht-O157:H7 E. coli, Salmonellen und Citrobacter kein Sorbitol. Es wurde festgestellt, dass die Verwendung eines selektiven/differenziellen Mediums, wie beispielsweise Sorbitol MacConkey-Agar (SMAC) den Nachweis von E. coli O157:H7 ermöglicht. Sorbitol-Fermenter aus roten bis pinkfarbenen Kolonien auf SMAC; Nicht-Sorbitol-Fermenter sind farblos; Der Latex-Test für E. coli O157:H7 kann verwendet werden, um E. coli O157:H7 präsumptiv aus sorbitol-negativen Kolonien, die auf primären SMAC-Kulturplatten kultiviert wurden, zu identifizieren.

TESTPRINZIP Der Latex-Test für E. coli O157:H7 umfasst 3 Latexreagenzien. Die Partikel in jedem Reagenz sind mit einem unterschiedlichen Antikörper beschichtet: einer gegen E. coli-Serotyp O157, ein anderer gegen E. coli-Serotyp H7 und der dritte mit normalen Kaninchen-Globulinen, um als Kontroll-Latex zu dienen. Wenn Test-Latex-Partikel mit neuen Kolonien von O157- und/oder H7-Stämmen von E. coli gemischt werden, findet eine immunchemische Reaktion statt, was zu einer Agglutination führt. Wenn keine Agglutination stattfindet, weist dies darauf hin, dass das Testisolat nicht E. coli O157:H7 ist. Das Kontroll-Latexreagenz identifiziert eine nicht spezifische Agglutination.

VORSICHTSMASSNAHMEN Dieses Produkt ist für den Gebrauch als In-vitro-Diagnostikum vorgesehen und darf nur von entsprechend geschulten Fachkräften eingesetzt werden. Zur Abwehr mikrobiologischer Gefahren sind entsprechende Vorsichtsmaßnahmen zu ergreifen. So müssen Proben, Behälter und Medien nach dem Gebrauch fachgerecht sterilisiert werden. Die Anweisungen müssen aufmerksam gelesen und genau befolgt werden.

Kontroll-Latex enthält Natriumazid (0,1 %), welches beim Verschlucken giftig und beim Einatmen sowie bei Berührung mit der Haut schädlich ist, und welches für die aquatische Umwelt giftig sein und langfristige Auswirkungen haben kann. Weitere Angaben zu den Reagenz-Chemikalien sind dem Sicherheitsdatenblatt zu entnehmen. Enthält:

Natriumazid 26628-22-8 Ethylalkohol 64-17-5 Formaldehyd 50-00-0

Signalwort

Gefahr

Erklärungen zu Gefahren

Kann Krebs erzeugen Enthält Formaldehyd. Kann eine allergische Reaktion hervorrufen Sicherheitshinweise Prävention

Vor Gebrauch besondere Anweisungen einholen Vor Gebrauch alle Sicherheitshinweise lesen und verstehen Schutzhandschuhe/Schutzkleidung/Augenschutz/Gesichtsschutz tragen Bei Exposition oder falls betroffen: Ärztlichen Rat einholen/ärztliche Hilfe hinzuziehen Vorgeschriebene persönliche Schutzausrüstung verwenden Zusätzliche EU-Kennzeichnung

Für geschultes Fachpersonal Reaktion

Bei Exposition oder falls betroffen: Ärztlichen Rat einholen/ärztliche Hilfe hinzuziehen Lagerung

Verschlossen lagern Entsorgung

Inhalt/Behälter bei einer zugelassenen Abfallentsorgungsanlage entsorgen Nicht anderweitig klassifizierte Gefahren

Keine identifiziert Notrufnummer

INFOTRAC – 24 Stunden erreichbar: 1-800-535-5053 Rufnummer außerhalb der USA – 24 Stunden erreichbar: 001-352-323-3500 (R-Gespräch)

LAGERUNG Dieses Produkt ist gebrauchsfertig und kann ohne weitere Aufarbeitung verwendet werden. Bis zum Gebrauch bei 2 – 8 °C im Originalbehälter aufbewahren. Nicht einfrieren. Vor Gebrauch nicht inkubieren.

QUALITÄTSMINDERUNG DES PRODUKTS Dieses Produkt darf nicht verwendet werden, wenn (1) sich die Farbe geändert hat, (2) das Verfallsdatum überschritten ist oder (3) andere Anzeichen einer Qualitätsminderung sichtbar sind.

ENTNAHME, LAGERUNG UND TRANSPORT DER PROBEN Proben sind entsprechend den empfohlenen Richtlinien zu entnehmen.7,8

PACKUNGSINHALT Test-Latex für E. coli O157 (grüner Deckel) 4,0 ml – ein Tropfer-Fläschchen, das Latex-Partikel enthält, die mit gepooltem E. coli O157-Kaninchen-Antikörper beschichtet sind und in Pufferlösung mit Konservierungsmittel suspendiert wurden

Test-Latex für E. coli H7 (blauer Deckel) 4,0 ml – ein Tropfer-Fläschchen, das Latex-Partikel enthält, die mit gepooltem E. coli H7-Kaninchen-Antikörper beschichtet sind und in Pufferlösung mit Konservierungsmittel suspendiert wurden

Kontroll-Latex für E. coli (neutraler Deckel) 4,0 ml – ein Tropfer-Fläschchen, das Latex-Partikel enthält, die mit gepoolten normalen Kaninchen-Globulinen beschichtet sind und in Pufferlösung mit 0,1 % Natriumazid suspendiert wurden

Positivkontrolle für E. coli O157:H7 (roter Deckel) 3,0 ml – ein Tropfer-Fläschchen, das eine durch Formalin zerstörte Zellsuspension von E. coli O157:H7 in gepufferter Kochsalzlösung enthält

Negativkontrolle für E. coli (nicht O157:H7) (gelber Deckel) 3,0 ml – ein Tropfer-Fläschchen, das eine durch Formalin zerstörte Zellsuspension von nicht-toxigenem E. coli in gepufferter Kochsalzlösung enthält

Kunststoff-Rührstäbchen (75)

Einweg-Objektträger (35)

Gebrauchsanweisung




ERFORDERLICHE MATERIALIEN, NICHT IM LIEFERUMFANG (1) Impfösen-Sterilisationsvorrichtung, (2) Impföse, Nadel, Sammelbehälter, (3) Inkubatoren, Systeme für alternative Umgebungsbedingungen, (4) Ergänzungsmedien, (5) Qualitätskontroll-Organismen (optional), (6) Siedendes Wasserbad, (7) McFarland-Standard Nr. 1 (REF R20411) oder ähnlich, (8) Sterile Kochsalzlösung (0,85 %), (9) Glasteströhrchen, (10) Mikropipetten. Inhaltssymbole


Test-Latex für E. coli O157


Test-Latex für E. coli H7


Kontroll-Latex für E. coli


E. coli O157:H7 Positivkontrolle


E. coli (nicht O157:H7) Negativkontrolle


Kunststoff-Rührstäbchen

Disposable Slides

Einweg-Objektträger

VERFAHREN Hinweis: Reagenzien vor dem Gebrauch auf Raumtemperatur bringen. Latexreagenzien durch vorsichtiges Schütteln gut durchmischen. Die Fläschchen vertikal halten und nur frei fallende Tropfen abgeben. Komponenten mit verschiedenen Losnummern von Testkits dürfen nicht vertauscht werden.

1. Zulässige Isolate und Medien beinhalten ausschließlich Folgendes:

a. Nicht-Sorbitol fermentierende Kolonien (NSFC), die auf Sorbitol MacConkey-Agar (SMAC) isoliert sind, um auf E. coli O157 zu prüfen.

b. Eine Subkultur von NSFC, die auf Blutagar wächst, um auf E. coli H7 zu prüfen.

2. Für jedes zu prüfende Isolat einen Tropfen Test-Latex (grüner Deckel) in ein Well des Testobjektträgers abgeben.

3. Auf die gleiche Weise einen Tropfen Kontroll-Latex für E. coli (neutraler Deckel) in ein separates Well des Testobjektträgers abgeben.

4. Mit einem Kunststoff-Stäbchen (im Lieferumfang enthalten) einen Teil der NSFC aus der SMAC-Platte entfernen und im Test-Latex für E. coli O157 auf dem Objektträger emulgieren. Über zwei Drittel des Reaktionsbereichs verteilen. Das Kunststoff-Stäbchen entsorgen. Mit einem neuen Kunststoff-Stäbchen den Vorgang mit den übrigen NSFC wiederholen und in Kontroll-Latex für E. coli auf dem Objektträger emulgieren.

5. Den Objektträger in kreisenden Bewegung durch 3 Ebenen bis zu 1 Minute oder bis zum Auftreten der Agglutination drehen.

6. Wenn eine Agglutination mit negativem Test-Latex für E. coli O157 und negativem Kontroll-Latex auftritt, das Isolat auf einer Blutagarplatte ausstreichen, über Nacht inkubieren und mit Schritt 7 fortfahren. Wenn eine Agglutination sowohl mit dem Test-Latex als auch mit dem Kontroll-Latex stattfindet, mit Schritt 8 fortfahren. Den Testobjektträger nach der Analyse entsorgen.

7. Den Test nach der Inkubation über Nacht (18–24 Stunden) wiederholen. Mit einem Tupfer Wachstum aus der Blutagarplatte entnehmen und in einem Tropfen des Test-Latex für E. coli H7 emulgieren (blauer Deckel). Das Kontroll-Latex wird in diesem Schritt ausgelassen. Keine gekochten Zellen mit dem Test-Latex für H7 verwenden.

a. Eine Agglutination weist auf das Vorhandensein von E. coli O157:H7 hin.

b. Wenn mit dem H7-Latex keine Agglutination stattfindet, muss das Isolat nach dem Durchlass durch angemessene Motilitätsmedien (gefolgt von einer Subkultur zu einer Blutagarplatte) erneut geprüft werden, bevor geschlussfolgert wird, dass das H7-Antigen fehlt.

8. Jedes Testisolat, das sowohl mit dem Test-Latex für E. coli O157 als auch mit dem Kontroll-Latex für E. coli agglutiniert, muss folgendermaßen behandelt werden:

a. Das Testisolat in 0,5 ml steriler Kochsalzlösung in einem Glasrohr suspendieren. Die Suspensionstrübung muss > a Nr. 1 McFarland-Standard oder ähnlich betragen.

b. Rohr 10 Minuten lang in ein siedendes Wasserbad einsetzen. Rohr auf Raumtemperatur abkühlen lassen. Isolat mit 30–50 µl der Suspension mit dem Test-Latex für O157 und dem Kontroll-Latex erneut prüfen.

i) Wenn eine Agglutination mit dem Test-Latex für E. coli O157 und nicht mit dem Kontroll-Latex auftritt, das Isolat auf einer Blutagarplatte subkultivieren. Nach der Inkubation über Nacht mit dem H7-Test-Latex wie in Schritt 7 prüfen.

ii) Wenn nach dem Kochen eine Agglutination sowohl mit dem Test-Latex für E. coli O157 als auch mit dem Kontroll-Latex stattfindet, ist der Test nicht schlüssig. Als E. coli biochemisch bestätigte Isolate für weitere Prüfungen an ein Referenzlabor senden.

AUSWERTUNG DES TESTS Positives Ergebnis –

Agglutination* des Test-Latex (O157 oder H7) begleitet von keiner Agglutination des Kontroll-Latex innerhalb 1 Minute

Negatives Ergebnis –

Keine Agglutination des Test-Latex und des Kontroll-Latex innerhalb 1 Minute

Nicht schlüssig – Agglutination des O157-Test-Latex und des Kontroll-Latex innerhalb 1 Minute

*Große schwarze Klumpen, die mit bloßem Auge erkennbar sind, mit Trübung des Hintergrunds

O157-Test- Latex

H7-Test- Latex

Kontroll- Latex

AUSWERTUNG

+ - - E. coli O157 nicht H7 vorhanden

+ + - E. coli O157:H7 vorhanden

+ Nicht getestet

+ Nicht spezifische Agglutination (O157 kochen und erneut testen)

- - + E. coli O157:H7 nicht vorhanden

+ + + Unschlüssige Ergebnisse

- - - E. coli O157:H7 nicht vorhanden

Isolate, die mit E. coli O157:H7 positiv sind, müssen biochemisch immer als E. coli bestätigt werden.6

Da Bakterien in ihrem Ausdruck von H-Antigenen variieren, müssen die positiven Isolate für E. coli O157, die im Test-Latex für E. coli H7 zunächst negativ sind, nach dem Durchlass durch angemessene Motilitätsmedien erneut geprüft werden, um die Motilität zu verbessern, bevor geschlussfolgert wird, dass das H7-Antigen nicht vorhanden ist.

Abweichungen der Stämme und die Konzentration der Zellsuspension beeinflussen den Grad der Agglutination. Dieser Test wird als negativ angesehen, wenn keine Agglutination im Test-Latex für E. coli und im Kontroll-Latex für E. coli auftritt.

QUALITÄTSKONTROLLE Eine Positiv- und Negativkontrolle ist in jedem Kit enthalten. Testkontrollen mit jeder neuen Kit-Losnummer und mit jedem neuen Versand oder gemäß geltenden regulatorischen Richtlinien. Die Positivkontrolle (roter Deckel) mit O157-Test-Latex, H7-Test-Latex und Kontroll-Latex testen. Auf die gleiche Weise die Negativkontrolle (gelber Deckel) mit allen 3 Latexreagenzien testen. Die Kontrollen müssen gemäß den Angaben in der folgenden Tabelle durchgeführt werden. Wenn bei der Qualitätskontrolle abweichende Ergebnisse erhalten werden, sollten die Ergebnisse der Patientenproben nicht weitergegeben werden.

AUSWERTUNG DER QUALITÄTSKONTROLLE

O157- Latex

H7- Latex

Kontroll- Latex

Ergebnis

Positivkontrolle + + - Zufrieden stellende Leistung

Positivkontrolle - - - Wirkstärke gesunken, Testergebnisse nicht melden

Negativkontrolle - - - Zufrieden stellende Leistung

Negativkontrolle + + +/- Verlust der Spezifität, Testergebnisse nicht melden

Eine Agglutination der Positivkontrolle mit beiden Test-Latexreagenzien weist darauf hin, dass die Empfindlichkeit eines Reagenz beibehalten wurde.




Keine Agglutination der Negativkontrolle mit beiden Test-Latexreagenzien weist darauf hin, dass die Spezifität eines Reagenz beibehalten wurde.

LEISTUNGSDATEN Der Latex-Test für E. coli O157:H7 wurde mit anderen Reagenzien verglichen, die in einem großen Referenzlabor der US-Regierung hergestellt und verwendet wurden, sowie mit kommerziellen Reagenzien, die in einem staatlichen Gesundheitslabor (Studie Nr. 1) verwendet wurden. Die Stämme stammten aus vorrätigen Kultursammlungen und der Test wurde gemäß dem Verfahren in dieser Gebrauchsanleitung durchgeführt. In der folgenden Tabelle sind die Ergebnisse aufgeführt.

Studie Nr. 1 (n = 162):

REFERENZREAGENZIEN

(+) O157:H7 (-) NSFC nicht E. coli O157:H7

Nicht schlüssig

Remel E.coli-Test

(+) 64

(-) 5** 89

Nicht schlüssig 4***

Relative Empfindlichkeit*>99 % Relative Spezifität* >99 % *Verglichen mit kombinierter biochemischer und serologischer Referenzidentifikation. **Fünf Isolate waren positiv für die Agglutination mit dem Test-Latex für E. coli H7 nach dem Durchlass durch das Motilitätsmedium. ***Vier Stämme von E. coli haben mit dem Kontroll-Latex agglutiniert und wurden als nicht schlüssig bewertet. Keine dieser Isolate wurden als E. coli O157 bestätigt.

Studie Nr. 2 (n = 127): Es wurde eine zweite Studie in drei klinischen Laboren durchgeführt, um die relative Spezifität des Latex-Tests für E. coli O157:H7 im Vergleich zur biochemischen Identifizierung und eines anderen kommerziell erhältlichen Latex-Tests für E. coli O157 zu bewerten, und zwar unter Verwendung neuer Isolate. Eine Gesamtzahl von 127 klinischen NSFC-Isolaten aus neuen menschlichen Stuhlproben wurde getestet. Es wurde identifiziert, dass diese Isolate sowohl biochemische als auch serologische Methoden verwenden. Von den getesteten Isolaten waren 126 mit den beiden Methoden negativ (Spezifität >99 %). Ein Isolat wurde mit beiden Latexreagenzien als E. coli O157 und von der Methode als E. coli O157:H7 identifiziert.

Beide Studien umfassten 22 unterschiedliche nicht fermentierende Sorbitol-Gattungen und -Spezies.

BESCHRÄNKUNGEN 1. Ausschließlich reine Kulturen, die anfänglich auf SMAC-Agar für

O157 gezüchtet wurden, testen. 2. Es wurde gemeldet, dass einige Marken von Applikatoren aus Holz

die Ergebnisse beeinträchtigen und in diesem Test nicht verwendet werden dürfen.

3. Unbewegliche Isolate für das O157-Antigen müssen für die Shiga-Toxin-Produktion bewertet werden, um das enterohämorrhagische E. coli auszuschließen. Einige Stämme von E. coli O157 produzieren kein Shiga-Toxin, aber weisen ein anderes H-Antigen als H7 auf. Es wurden ein paar Toxin-produzierende Stämme von unbeweglichem E. coli O157 gemeldet.9

4. Die Verwendung eines SMAC-Agars und/oder des Latex-Tests für E. coli O157:H7 von RIM™ kann weder bestimmen noch bestätigen, dass ein E. coli-Isolat ein Verocytotoxin-produzierender Stamm ist. Es wurden andere Serotypen von E. coli identifiziert, die Verocytotoxin produzieren.

5. Junge, schnell wachsende Kulturen drücken durch diesen Test identifizierte Antigene schneller aus. Isolate, die aus der Agar-Oberfläche einer Kultur über Nacht entfernt werden, erzielen die besten Ergebnisse.

6. Blutagar kann die Produktion von Flagellen verbessern und bietet einen besseren Nachweis von H-Antigenen.

7. Wenn Infektionen mit E. coli O157:H7 erkannt werden, müssen sie den lokalen Gesundheitsbehörden zur weiteren Bewertung gemeldet werden und, wenn nötig, müssen staatliche Maßnahmen ergriffen werden, um die Ausbreitung der Krankheit zu verhindern.2

8. Citrobacter freundii und Salmonellen Gruppe N (O30) sind antigenetisch mit E. coli O157 verwandt und es wurde berichtet, dass mit dem Latex-Test für E. coli O157:H7 positive Ergebnisse erzielt werden. Diese Stämme können Sorbitol schnell fermentieren und sind biochemisch von E. coli unterscheidbar. Isolate, die mit E. coli O157:H7 positiv sind, müssen biochemisch immer als E. coli bestätigt werden.6

9. Wenn eine Diagnose gestellt wird, müssen die Testergebnisse im Kontext der Krankheit, Krankengeschichte und körperlichen Untersuchung des Patenten ausgewertet werden.

Laboruntersuchungen dürfen nicht als einzige Grundlage für die Einleitung einer Antibiotikatherapie verwendet werden.

10. Stämme von E. coli O157:H7, die kein Shiga-Toxin produzieren, wurden gemeldet.10

LITERATURANGABEN 1. Wells, J.G., B.R. Davis, I.K. Wachsmuth, L.W. Riley, R.S. Remis, R.

Sokolow und G.K. Morris. 1983. J. Clin. Microbiol. 18:512-520. 2. Centers for Disease Control and Prevention. 1993. Preliminary Report:



4. Ratnam, S., S.B. March, R. Ahmed, G.S. Bezanson und S. Kasatiya. 1988. J. Clin. Microbiol. 26: 2006-2012.

5. Ewing, W.E. 1986. Identification of Enterobacteriaceae. 4. Aufl. Elsevier, New York, N.Y.

6. Sowers, E.G., J.G. Wells und N.A. Strockbine. 1996. J. Clin. Microbiol. 34:1286-1289.

7. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry und M.A. Pfaller. 2007. Manual of Clinical Microbiology. 9. Aufl. ASM Press, Washington, D.C.

8. Forbes, B.A., D.F. Sahm und A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology. 12. Aufl. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.


10. Schmidt, H., J. Scheef, H.I. Huppertz, M. Frosch und H. Karch. 1999. J. Clin. Microbiol. 37:3491-3496.

VERPACKUNG REF R24250, Latex-Test für E.coli O157:H7 .......................... 50 Tests/Kit

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Código clave TSMX9410 www.oxoid.com/ifu Europa: +800 135 79 135 EE. UU.: 1 855 236 0910 Canadá: 1 855 805 8539 Resto del mundo: +31 20 794 7071

Prueba de látex RIM para E. coli O157:H7

REF R24250……………………… 50 ES USO PREVISTO Se recomienda el uso de la prueba de látex Remel RIM™ para E. coli O157:H7 en procedimientos cualitativos para identificar de manera presuntiva el serogrupo O157:H7 de Escherichia coli cultivado en los medios de cultivo.

RESUMEN Y EXPLICACIÓN La Escherichia coli O157:H7 se identificó por primera vez como la causa de la colitis hemorrágica en 1982.1, 2 Desde entonces, las verocitotoxinas producidas por la E. coli O157:H7 también se han identificado como un agente del síndrome urémico hemolítico (SUH).3-5 Los serotipos de la E. coli diferentes al O157:H7 también producen verocitotoxinas, pero normalmente no se asocian con la diarrea hemorrágica.

La E. coli O157:H7 es difícil de detectar con los métodos empleados habitualmente en laboratorios clínicos. La mayoría de cepas de la E. coli O157:H7 fermentan lactosa rápidamente y no se diferencian de las E. coli diferentes al O157:H7 en medios entéricos convencionales. A diferencia de la mayoría de cepas de E. coli que no son O157:H7, Salmonela y Citrobacter, la E. coli O157:H7 no fermenta sorbitol. Se ha determinado que la utilización de un medio selectivo/diferencial, como Sorbitol MacConkey Agar (SMAC), facilita la detección de la E. coli O157:H7. Los fermentadores de sorbitol forman colonias de rosa a rojo en SMAC, mientras que los fermentadores que no son de sorbitol no tienen color. La prueba de látex para E. coli O157:H7 puede utilizarse para detectar de manera presuntiva la E. coli O157:H7 en colonias sorbitol negativas cultivadas en placas de cultivos primarios SMAC.

PRINCIPIO La prueba de látex para E. coli O157:H7 incluye tres reactivos de látex. Las partículas de cada reactivo están revestidas de un anticuerpo diferente: uno contra el serotipo O157 de la E. coli; otro contra el serotipo H7 de la E. coli y el tercero con globulina de conejo normal, a modo de látex de control. Cuando las partículas de látex de la prueba se mezclan con las colonias nuevas de las cepas O157 o H7 de la E. coli, se produce una reacción inmunoquímica que causa una aglutinación. Si no se produce ninguna aglutinación, querrá decir que el agente aislado de la prueba no es la E. coli O157:H7. El reactivo de látex de control identifica la aglutinación no específica.

PRECAUCIONES Este producto debe tener un uso diagnóstico in vitro y deben utilizarlo personas con la formación adecuada. Como precaución para evitar peligros microbiológicos, las muestras, los recipientes y los medios deben esterilizarse de forma adecuada después de su uso. Las instrucciones deben leerse y cumplirse de forma estricta.

El látex de control contiene azida sódica (0,1 %), que es tóxica en caso de ingesta y perjudicial en caso de inhalación o contacto con la piel. También puede resultar tóxica para el medio acuático y provocar efectos a largo plazo. Consulte la hoja de datos de seguridad para obtener información adicional sobre reactivos químicos. Contiene:

Azida sódica 26628-22-8 Alcohol etílico 64-17-5 Formaldehído 50-00-0 Indicación de advertencia

Peligro

Indicaciones de peligro

Puede causar cáncer Contiene formaldehído. Puede producir reacciones alérgicas Instrucciones de precaución Prevención

Obtener instrucciones específicas antes del uso No manipular antes de haber leído y comprendido todas las precauciones de seguridad Llevar guantes protectores/ropa de protección/protección ocular/protección facial EN CASO DE exposición real o supuesta: consultar/acudir a un médico Utilizar el equipo de protección individual según sea necesario Etiquetado UE adicional

Restringido para usuarios profesionales Respuesta ante emergencias

EN CASO DE exposición real o supuesta: consulte/acuda a un médico Almacenamiento

Guardar bajo llave Eliminación

Elimine el contenido/recipiente en una planta autorizada de eliminación de residuos Peligros no clasificados

No se conocen Teléfono de emergencia

INFOTRAC (teléfono de emergencia 24 horas): 1-800-535-5053 Fuera de los Estados Unidos, llame al teléfono de emergencia disponible 24 horas: 001-352-323-3500 (llamada a cobro revertido)

ALMACENAMIENTO Este producto está listo para su uso y no requiere preparación. Conserve el producto en su recipiente original a entre 2 y 8 °C hasta que lo vaya a utilizar. No lo congele. No lo incube antes de su uso.

DETERIORO DEL PRODUCTO Este producto no debe utilizarse si (1) su color ha cambiado, (2) ya ha pasado su fecha de caducidad o (3) hay otros signos de deterioro.

RECOGIDA, ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS Las muestras deben recogerse y manipularse siguiendo las pautas recomendadas.7, 8

MATERIAL SUMINISTRADO Prueba de látex de E. coli O157 (tapón verde) de 4,0 ml: frasco cuentagotas con partículas de látex revestidas del anticuerpo de conejo combinado de E. coli O157, suspendidas en una solución tamponada con conservante

Prueba de látex de E. coli H7 (tapón azul) de 4,0 ml: frasco cuentagotas con partículas de látex revestidas del anticuerpo de conejo combinado de E. coli H7, suspendidas en una solución tamponada con conservante

Látex de control de E. coli (tapón neutro) de 4,0 ml: frasco cuentagotas con partículas de látex revestidas de globulina de conejo normal combinada, suspendidas en una solución tamponada con 0,1 % de azida sódica

Control positivo de E. coli O157:H7 (tapón rojo) de 3,0 ml: frasco cuentagotas con suspensión de células inactivada por formol de E. coli O157:H7 en solución salina tamponada

Control negativo de E. coli (que no sea O157:H7) (tapón amarillo) de 3,0 ml: frasco cuentagotas con suspensión de células inactivada por formol de E. coli no toxigénica en solución salina tamponada

Varillas removedoras de plástico (75)

Portaobjetos desechables (35)

Instrucciones de uso (IFU)


MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO (1) Dispositivo de esterilización de bucle, (2) bucle de inoculación, aguja, recipientes de recogida, (3) incubadoras, sistemas medioambientales alternativos, (4) medios suplementarios, (5) organismos de control de calidad (opcional), (6) baño de agua hirviendo, (7) patrón de McFarland #1 (REF R20411) o equivalente, (8) solución salina estéril (0,85 %), (9) tubos de ensayo de vidrio, (10) micropipetas. Símbolos del contenido


Prueba de látex de E. coli O157


Prueba de látex de E. coli H7


Látex de control de E. coli


Control positivo de E. coli O157:H7


Control negativo de E. coli (que no sea O157:H7)


Varillas removedoras de plástico

Disposable Slides

Portaobjetos desechables

PROCEDIMIENTO Nota: Deje que los reactivos y las muestras se estabilicen a temperatura ambiente antes de utilizarlos. Mezcle con detenimiento los reactivos de látex mediante una agitación suave. Mantenga los frascos en posición vertical y dispense solo las gotas en caída libre. No intercambie los componentes entre los diferentes números de lote de los kits de prueba.

1. Los agentes aislados y los medios aceptables solamente incluyen:

a. Colonias no fermentadoras de sorbitol (NFSC, por sus siglas en inglés) aisladas en el agar Sorbitol MacConkey (SMAC) para detectar la E. coli O157.

b. Un subcultivo de NSFC cultivado en un agar de sangre para detectar la E. coli H7.

2. Para cada agente aislado que se examine, dispense una gota de la prueba de látex (tapón verde) en un pocillo del portaobjetos de análisis.

3. Del mismo modo, dispense una gota del látex de control de E. coli (tapón neutro) en un pocillo del portaobjetos de análisis.

4. Con una varilla de plástico (suministrada), retire una parte de las NSFC de la placa SMAC y emulsione en la prueba de látex de E. coli O157 en el portaobjetos. Extienda sobre dos tercios del área de reacción. Deseche la varilla de plástico. Con una varilla de plástico nueva, repita el proceso con el resto de NSFC y emulsione en el látex de control de E. coli en el portaobjetos.

5. Gire el portaobjetos utilizando movimientos circulares en tres planos durante al menos un minuto o hasta que aparezca la aglutinación.

6. Si la aglutinación aparece con la prueba de látex para E. coli O157 y el látex de control es negativo, estríe el agente aislado en una placa agar con sangre, incube por la noche y continúe con el paso 7. Si la aglutinación aparece con la prueba de látex y el látex de control, continúe con el paso 8. Deseche el portaobjetos del análisis tras su lectura.

7. Tras la incubación por la noche (de 18 a 24 horas), repita la prueba. Emulsione una pasada de la placa del agar con sangre en una gota de prueba de látex de E. coli H7 (tapón azul). El látex de control se omite en este paso. No utilice células hervidas con la prueba de látex de H7.

a. La aglutinación indica la presencia de la E. coli O157:H7.

b. Si no se produce una aglutinación con el látex H7, pruebe de nuevo el agente aislado después de haberlo pasado por los medios de motilidad apropiados (seguidos por un subcultivo en una placa de agar con sangre) antes de llegar a la conclusión de que el antígeno H7 está ausente.

8. Cualquier aislado de prueba que aglutine con la prueba de látex de E. coli O157 y el látex de control de E. coli debe tratarse de la siguiente manera:

a. Suspenda el aislado de la prueba en una solución salina esterilizada de 0,5 ml en un tubo de vidrio. La turbidez en la suspensión debe corresponderse con un patrón McFarland >#1 o equivalente.

b. Coloque un tubo en un baño de agua hirviendo durante 10 minutos. Deje que el tubo se enfríe a temperatura ambiente. Vuelva a examinar el agente aislado, utilizando de

30 a 50 µl de la suspensión con la prueba de látex O157 y el látex de control.

i) Si la aglutinación aparece con la prueba de látex de E. coli O157 y no con el látex de control, realice un subcultivo en una placa agar con sangre. Tras la incubación por la noche, examine la prueba de látex de H7, como en el paso 7.

ii) Si la aglutinación aparece con ambos, con la prueba de látex de E. coli O157 y el látex de control después del hervido, la prueba no será concluyente. Envíe los agentes aislados confirmados bioquímicamente como E. coli a un laboratorio de referencia para realizar más pruebas.

INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA Resultado positivo:

Aglutinación* de la prueba de látex (de O157 o H7) sin aglutinación del látex de control en un minuto

Resultado negativo:

Sin aglutinación de la prueba de látex y del látex de control en un minuto

No concluyente: Aglutinación de la prueba de látex de O157 y del látex de control en un minuto

*Grandes grumos negros visibles a simple vista con fondo claro

Prueba de látex

de O157

Prueba de látex de H7

Látex de control

INTERPRETACIÓN

+ - - E. coli O157 sin H7 presente

+ + - E. coli O157:H7 presente

+ No se ha probado

+ Aglutinación no específica (hervir y volver a probar O157)

- - + E. coli O157:H7 no presente

+ + + Resultados no concluyentes

- - - E. coli O157:H7 no presente

Los agentes aislados positivos con E. coli O157:H7 deben confirmarse siempre bioquímicamente como E. coli.6

Como las bacterias varían en su expresión de antígenos flagelares, los agentes aislados E. coli O157 positivos que inicialmente son negativos en la prueba de látex de E. coli H7 deben volver a examinarse después de haberlos pasado por los medios de motilidad apropiados para aumentar la motilidad antes de llegar a la conclusión de que el antígeno H7 no está presente.

Las concentraciones y variaciones de cepas de la suspensión celular afectarán al grado de aglutinación. Los resultados de esta prueba se consideran negativos cuando no se produce aglutinación en la prueba de látex para E. coli ni en el látex de control de E. coli.

CONTROL DE CALIDAD Se incluye un control positivo y negativo con cada kit. Pruebe los controles con cada número de lote y envío de kit nuevo o siga las pautas regulatorias aplicables. Pruebe el control positivo (tapón rojo) con la prueba de látex de O157, la prueba de látex de H7 y el látex de control. Del mismo modo, pruebe el control negativo (tapón amarillo) con los tres reactivos de látex. Los controles deben funcionar como se indica en la siguiente tabla. Si el control de calidad obtiene resultados anómalos, no deben comunicarse los resultados de los pacientes.

INTERPRETACIÓN DEL CONTROL DE CALIDAD

Látex

de O157 Látex de H7

Látex de control

Resultado

Control positivo + + - Rendimiento satisfactorio

Control positivo - - - Descenso en potencia, no informe de resultados de la prueba

Control negativo - - - Rendimiento satisfactorio

Control negativo + + +/- Pérdida de especificidad, no informe de resultados de la prueba

La aglutinación del control positivo con ambos reactivos de la prueba de látex indica que se ha conservado la sensibilidad del reactivo.

La no aglutinación del control negativo con ambos reactivos de la prueba de látex indica que se ha conservado la especificidad del reactivo.

CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO La prueba de látex de E. coli O157:H7 se comparó con otros reactivos realizados y empleados en un gran laboratorio de referencia del gobierno estadounidense y con los reactivos comerciales utilizados en un

laboratorio de salud estatal (Estudio n. 1). Las cepas procedían de colecciones de cultivos y la prueba se realizó siguiendo el procedimiento descrito en este IFU. Los resultados se describen a continuación.

Estudio n. 1 (n = 162):

REACTIVOS DE REFERENCIA:

(+) O157:H7 (-) NSFC E. coli que no sea

O157:H7

No concluyente

Remel Prueba de E. coli

(+) 64

(-) 5** 89

No concluyente 4***

Sensibilidad relativa* >99 % Especificidad relativa* >99 % *En comparación con la identificación combinada bioquímica y serológica de referencia. **Cinco agentes aislados positivos para aglutinación con la prueba de látex de E. coli H7 tras pasar por medios de motilidad. ***Cuatro cepas de E. coli con el látex de control y que fueron determinadas como no concluyentes. Ninguno de estos agentes aislados se determinó como E. coli O157.

Estudio n. 2 (n = 127): Se llevó a cabo un segundo estudio en tres laboratorios clínicos para evaluar la especificidad relativa de la prueba de látex de E. coli O157:H7 en comparación con la identificación bioquímica y otras pruebas de látex de E. coli O157 disponibles comercialmente, utilizando agentes aislados nuevos. Se analizaron un total de 127 agentes aislados clínicos NSFC de muestras de heces humanas. Estos agentes aislados se identificaron mediante métodos bioquímicos y serológicos. De los agentes aislados analizados, 126 resultaron negativos por ambos métodos (especificidad >99 %). Un agente aislado se identificó como E. coli O157 por ambos reactivos de látex y como E. coli O157:H7 por el método.

Ambos estudios incluyeron 22 géneros y especies diferentes no fermentadoras de sorbitol.

LIMITACIONES 1. Prueba solamente cultivos puros que en un principio se cultivaran en

un agar SMAC para O157. 2. Se ha informado que algunas marcas de aplicadores de madera

afectan a los resultados y no deben utilizarse en esta prueba. 3. Los agentes aislados sin motilidad positivos en el antígeno O157

deben evaluarse para detectar la producción de la toxina Shiga y descartar así la E. coli enterohemorrágica. Algunas cepas de la E. coli O157 no producen la toxina Shiga, pero tienen un antígeno H además del H7. Se ha informado de algunas cepas que producen toxinas de E. coli O157 sin motilidad.9

4. El uso del agar SMAC o de la Prueba de látex RIM™ para E. coli O157:H7 no determinará ni confirmará que un agente aislado de E. coli sea una cepa productora de verocitotoxinas. Se ha detectado que otros serotipos de la E. coli producen verocitotoxinas.

5. Los cultivos jóvenes de rápido crecimiento expresan con mayor facilidad los antígenos detectados en esta prueba. Los agentes aislados que se retiren de la superficie del agar en un cultivo durante la noche pueden ofrecer mejores resultados.

6. El agar con sangre puede facilitar la producción de flagelos y permitir una mejor detección de antígenos flagelares.

7. Cuando se identifican las infecciones de E. coli O157:H7, debe informarse a los departamentos locales de salud para realizar más evaluaciones y, si es necesario, debe recurrirse a la acción pública para evitar que la enfermedad se propague.2

8. Citrobacter freundii y el Grupo N (O30) de Salmonella están relacionados antigénicamente con la E. coli O157 y se han informado para producir resultados positivos con la prueba de látex para la E. coli O157:H7. Estas cepas fermentan con facilidad sorbitol y se diferencian bioquímicamente de la E. coli. Los agentes aislados positivos con E. coli O157:H7 deben confirmarse siempre bioquímicamente como E. coli.6

9. Cuando se hace un diagnóstico, los resultados de las pruebas deben interpretarse en el contexto de enfermedades, historial y exploración física del paciente. Las pruebas de laboratorio no deberán utilizarse como base única para la determinación de un tratamiento con antibióticos.

10. Se ha informado de las cepas de la E. coli O157:H7 que no producen la toxina Shiga.10

BIBLIOGRAFÍA 1. Wells, J.G., B.R. Davis, I.K. Wachsmuth, L.W. Riley, R.S. Remis, R.

Sokolow, and G.K. Morris. 1983. J. Clin. Microbiol. 18:512-520. 2. Centers for Disease Control and Prevention. 1993. Preliminary Report:





6. Sowers, E.G., J.G. Wells, and N.A. Strockbine. 1996. J. Clin. Microbiol. 34:1286-1289.

7. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry y M.A. Pfaller. 2007. Manual of Clinical Microbiology. 9ª ed. ASM Press, Washington, D.C.

8. Forbes, B.A., D.F. Sahm y A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology. 12ª ed. Mosby Elsevier, San Luis, MO.


10. Schmidt, H., J. Scheef, H.I. Huppertz, M. Frosch, and H. Karch. 1999. J. Clin. Microbiol. 37:3491-3496.

ENVASE REF R24250, prueba de látex para la E.coli O157:H7 ......... 50 pruebas/kit

Leyenda de símbolos

Contenido suficiente para < n > pruebas

REF Número de catálogo

IVD Producto sanitario para diagnóstico "in vitro"

LAB Para uso en laboratorios

Consultar las instrucciones de uso (IFU)

Límite de temperatura (temperatura de conservación)

LOT Código de lote (número de lote)

Usar antes de (fecha de caducidad)

EC REP

Representante autorizado en Europa

Fabricante

RIM™ es una marca comercial de Remel Inc. ATCC® es una marca registrada de American Type Culture Collection.

IFU X9410, revisado el 9 de octubre de 2017 Impreso en EE. UU.

Codice TSMX9410 www.oxoid.com/ifu Europa +800 135 79 135 USA 1 855 236 0910 CA 1 855 805 8539 Resto del mondo +31 20 794 7071

RIM E. coli O157:H7 Latex Test

REF R24250……………………… 50 IT

USO PREVISTO Remel RIM™ E. coli O157:H7 Latex Test è raccomandato per l’uso in procedure qualitative per l’identificazione presuntiva di Escherichia coli sierogruppo O157:H7 cresciuto su terreni di coltura.

RIASSUNTO E SPIEGAZIONE DEL TEST Escherichia coli O157:H7 è stato riconosciuto come causa di colite emorragica per la prima volta nel 1982.1,2 Da allora, la verocitotossina prodotta da E. coli O157:H7 è inoltre stata identificata come agente della sindrome uremica emolitica (HUS).3-5 Anche alcuni sierotipi di E. coli diversi da O157:H7 producono verocitotossine, ma non sono generalmente associati a diarrea emorragica.

E. coli O157:H7 è difficilmente rilevabile con i metodi normalmente utilizzati nei laboratori clinici. La maggior parte dei ceppi di E. coli O157:H7 fermentano rapidamente il lattosio e non sono distinguibili dall’E. coli non O157:H7 con terreni enterici convenzionali. Diversamente dalla maggior parte dei ceppi di E. coli non O157:H7, Salmonella e Citrobacter, E. coli O157:H7 non fermenta il sorbitolo. È stato dimostrato che l’utilizzo di terreno selettivo/differenziale quale Sorbitolo MacConkey Agar (SMAC) facilita il rilevamento di E. coli O157:H7. I microorganismi fermentanti il sorbitolo producono colonie di colore rosa-rosso sullo SMAC, mentre i microorganismi che non fermentano il sorbitolo sono incolori. E. coli O157:H7 Latex Test può essere utilizzato per l’identificazione presuntiva di E. coli O157:H7 da colonie sorbitolo-negative cresciute su terreno SMAC in piastre con colture primarie.

PRINCIPIO E. coli O157:H7 Latex Test include 3 reagenti al lattice. Le particelle in ciascun reagente sono rivestite con un anticorpo diverso: uno contro il sierotipo O157 di E. coli, un altro contro il sierotipo H7 di E. coli e il terzo con normale globulina di coniglio, che funge da lattice di controllo. Quando le particelle del Test Latex vengono mescolate con colonie fresche di ceppi O157 e/o H7 di E. coli, si verifica una reazione immunochimica che causa un’agglutinazione. L’assenza di agglutinazione indica che l’isolato di test non è E. coli O157:H7. Il reagente Control Latex identifica un’agglutinazione non specifica.

PRECAUZIONI Questo prodotto è destinato esclusivamente all’uso diagnostico in vitro e deve essere utilizzato da personale in possesso di una formazione adeguata. Attenersi alle precauzioni contro i pericoli di rischio biologico, sterilizzando adeguatamente i campioni, i contenitori e i terreni dopo ogni impiego. Leggere e seguire attentamente le indicazioni.

Il Control Latex contiene azoturo di sodio (0,1%) che è tossico per ingestione, nocivo per inalazione o contatto con la pelle e può avere effetti tossici anche a lungo termine se disperso in ambiente acquatico. Per ulteriori informazioni sui reagenti chimici, fare riferimento alla scheda di sicurezza (MSDS). Contiene:

Azoturo di sodio 26628-22-8 Alcool etilico 64-17-5 Formaldeide 50-00-0

Avvertenze

Pericolo

Indicazioni di pericolo

Può provocare il cancro Contiene formaldeide. Può provocare una reazione allergica Consigli precauzionali Prevenzione

Procurarsi istruzioni specifiche prima dell’uso Non manipolare prima di avere letto e compreso tutte le precauzioni di sicurezza Indossare guanti/indumenti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso In caso di esposizione o di possibile esposizione: consultare un medico Utilizzare il dispositivo di protezione individuale richiesto Etichettatura UE aggiuntiva

Limitato agli utenti professionali Reazione

In caso di esposizione o di possibile esposizione: consultare un medico Conservazione

Conservare sotto chiave Smaltimento

Smaltire i contenitori e il contenuto in un centro autorizzato allo smaltimento dei rifiuti. Pericoli non altrimenti classificati

Non individuati Numero telefonico per le emergenze

INFOTRAC - numero attivo 24 ore su 24: 1-800-535-5053 Al di fuori degli Stati Uniti, chiamare il numero attivo 24 ore su 24: 001-352-323-3500 (a carico del destinatario)

CONSERVAZIONE Questo prodotto è pronto per l'uso e non richiede un'ulteriore preparazione. Conservare il prodotto nel suo contenitore originale a 2-8°C fino al momento dell'utilizzo. Non congelare. Non incubare prima dell’uso.

DETERIORAMENTO DEL PRODOTTO Questo prodotto non deve essere utilizzato se (1) si è verificata una variazione del colore, (2) la data di scadenza è oltrepassata, o (3) vi sono altri segni di deterioramento.

RACCOLTA, CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI Prelevare e trattare i campioni seguendo le linee guida raccomandate.7,8

MATERIALI FORNITI E. coli O157 Test Latex (tappo verde) 4,0 ml - una fiala contagocce contenente particelle di lattice rivestite con anticorpi di coniglio specifici per E. coli O157, sospese in soluzione tampone con conservante

E. coli H7 Test Latex (tappo blu) 4,0 ml - una fiala contagocce contenente particelle di lattice rivestite con anticorpi di coniglio specifici per E. coli H7, sospese in soluzione tampone con conservante

E. coli Control Latex (tappo neutro) 4,0 ml - una fiala contagocce contenente particelle di lattice rivestite con normali globuline di coniglio, sospese in soluzione tampone con azoturo di sodio allo 0,1%

E. coli O157:H7 Positive Control (tappo rosso) 3,0 ml - una fiala contagocce contenente sospensione cellulare di E. coli O157:H7 inattivata con formalina in soluzione salina tamponata

E. coli (non O157:H7) Negative Control (tappo giallo) 3,0 ml - una fiala contagocce contenente sospensione cellulare di E. coli non tossigena inattivata con formalina in soluzione salina tamponata

Bastoncini di miscelazione in plastica (75)

Vetrini monouso (35)

Istruzioni per l’uso (IFU)




MATERIALI NECESSARI NON FORNITI NEL KIT (1) Dispositivo di sterilizzazione per ansa, (2) Ansa per inoculo, ago, contenitori di raccolta, (3) Incubatori, sistemi per la formazione di atmosfere modificate, (4) Terreni di coltura supplementari, (5) Organismi di controllo qualità (opzionale), (6) Bagno d'acqua in ebollizione, (7) Standard McFarland #1 (RIF. R20411) o equivalente, (8) Soluzione salina sterile (0,85%), (9) Provette in vetro, (10) Micropipette. Simboli sul contenuto


E. coli O157 Lattice test


E. coli H7 Lattice test


E. coli Lattice di controllo


E. coli O157:H7 Controllo positivo


E. coli (non O157:H7) Controllo negativo


Bastoncini di miscelazione in plastica

Disposable Slides

Vetrini monouso

PROCEDURA Nota: lasciare equilibrare i reagenti a temperatura ambiente prima dell’uso. Miscelare accuratamente i reagenti al lattice agitando con delicatezza. Tenere le fiale in posizione verticale e dispensare esclusivamente gocce in caduta. Non scambiare i componenti tra diversi numeri di lotti di kit di test.

1. Gli isolati e i terreni accettabili includono esclusivamente:

a. Colonie non fermentanti il sorbitolo (NSFC) isolate su Sorbitolo MacConkey Agar (SMAC) per l’analisi di E. coli O157.

b. Una sottocoltura di NSFC cresciuta su agar sangue per l’analisi di E. coli H7.

2. Per ogni isolato da analizzare dispensare una goccia di Test Latex (tappo verde) in un pozzetto del vetrino di analisi.

3. In maniera analoga, dispensare una goccia di E. coli Control Latex (tappo neutro) in un pozzetto separato del vetrino di analisi.

4. Utilizzando un bastoncino in plastica (in dotazione), rimuovere una porzione delle NSFC dalla piastra SMAC ed emulsionare in E. coli O157 Test Latex sul vetrino. Distribuire su due terzi della superficie reattiva. Gettare il bastoncino in plastica. Con un nuovo bastoncino in plastica, ripetere la procedura con le NSFC rimanenti ed emulsionare in E. coli Control Latex sul vetrino.

5. Ruotare il vetrino con movimenti circolari sui 3 piani per massimo 1 minuto o fino alla comparsa dell’agglutinazione.

6. Se l’agglutinazione si verifica con E. coli O157 Test Latex e il Control Latex è negativo, strisciare l’isolato su una piastra di agar sangue, lasciare in incubazione per una notte e procedere al punto 7. Se l’agglutinazione si verifica sia con il Test Latex che con il Control Latex, procedere al punto 8. Smaltire il vetrino di analisi dopo la lettura.

7. Al termine dell’incubazione per una notte (18-24 ore) ripetere il test. Emulsionare una porzione di colonia di crescita prelevata dalla piastra di agar sangue in una goccia di E. coli H7 Test Latex (tappo blu). Il Control Latex viene omesso in questo passaggio. Non utilizzare cellule portate ad ebollizione con H7 Test Latex.

a L’agglutinazione indica la presenza di E. coli O157:H7.

b. Se non si verifica l’agglutinazione con H7 Latex, ripetere il test sull’isolato dopo averlo fatto passare su terreni mobili idonei (seguito da una sottocoltura su una piastra di agar sangue) prima di concludere che l’antigene H7 è assente.

8. Qualsiasi isolato di test che agglutina sia con E. coli O157 Test Latex che con E. coli Control Latex deve essere trattato come segue:

a. Sospendere l’isolato di test in 0,5 ml di soluzione salina sterile in una provetta di vetro. La torbidità della sospensione deve essere > a uno Standard McFarland #1 o equivalente.

b. Collocare la provetta in un bagno d’acqua in ebollizione per 10 minuti. Lasciare raffreddare la provetta a temperatura ambiente. Ripetere il test sull’isolato, utilizzando 30-50 µl della sospensione, con O157 Test Latex e Control Latex.

i) Se l’agglutinazione si verifica con E. coli O157 Test Latex e non con Control Latex, eseguire sottocoltivare l’isolato su una piastra di agar sangue. Al termine dell’incubazione per una notte, eseguire il test con H7 Test Latex come descritto al punto 7.

ii) Se l’agglutinazione si verifica sia con E. coli O157 Test Latex che con Control Latex dopo l’ebollizione, i risultati del test sono ambigui. Inviare gli isolati biochimicamente confermati come E. coli ad un laboratorio di riferimento per ulteriori analisi.

INTERPRETAZIONE DEL TEST Risultato Positivo -

Agglutinazione* del Test Latex (O157 o H7) accompagnata dall’assenza di agglutinazione del Control Latex entro 1 minuto

Risultato Negativo -

Assenza di agglutinazione del Test Latex e del Control Latex entro 1 minuto

Ambiguo - Agglutinazione del Test Latex O157 e del Control Latex entro 1 minuto

*Grossi aggregati di colore nero visibili a occhio nudo, con trasparenza dello sfondo

O157 Test Latex

H7 Test Latex

Control Latex

INTERPRETAZIONE

+ - - E. coli O157 non H7 presente

+ + - E. coli O157:H7 presente

+ Non testato + Agglutinazione non specifica (portare ad ebollizione e ripetere il test per O157)

- - + E. coli O157:H7 non presente

+ + + Risultati ambigui

- - - E. coli O157:H7 non presente

Gli isolati che risultano positivi con E. coli O157:H7 devono sempre essere confermati biochimicamente come E. coli.6

Dal momento che i batteri variano nell’espressione degli antigeni flagellari, gli isolati E. coli O157 positivi che sono inizialmente negativi in E. coli H7 Test Latex devono essere rianalizzati dopo essere stati fatti passare su terreni mobili idonei che ne migliorano la motilità, prima di giungere alla conclusione che l’antigene H7 non è presente.

Le variazioni di ceppi e la concentrazione della sospensione cellulare influiscono sul grado di agglutinazione. Questo test è considerato negativo quando non si verifica alcuna agglutinazione nell’E. coli Test Latex e nell’E. coli Control Latex.

CONTROLLO QUALITÀ In ogni kit è incluso un Controllo positivo e negativo. Testare i controlli con ogni numero di lotto di nuovo kit e spedizione o seguendo le linee guida regolamentari applicabili. Testare il Controllo positivo (tappo rosso) con O157 Test Latex, H7 Test Latex e Control Latex. Analogamente, testare il Controllo negativo (tappo giallo) con tutti e 3 i reagenti al lattice. I controlli devono fornire le prestazioni indicate nella tabella sotto riportata. Se dovesse risultare che la qualità è scadente, non procedere alla registrazione dei risultati relativi al paziente.

INTERPRETAZIONE DEL CONTROLLO QUALITÀ

O157 Latex

H7 Latex

Control Latex

Risultato

Controllo positivo + + - Prestazione soddisfacente

Controllo positivo - - - Calo di potenza, non procedere alla registrazione dei risultati del test

Controllo negativo - - - Prestazione soddisfacente

Controllo negativo + + +/- Perdita di specificità, non procedere alla registrazione dei risultati del test

L’agglutinazione del Controllo positivo con entrambi i reagenti Test Latex indica che è stata mantenuta la sensibilità dei reagenti.

L’assenza di agglutinazione del Controllo negativo con entrambi i reagenti Test Latex indica che è stata mantenuta la specificità dei reagenti.

CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI E. coli O157:H7 Latex Test è stato confrontato con altri reagenti prodotti e utilizzati presso un importante laboratorio di riferimento del governo statunitense e con reagenti disponibili in commercio utilizzati presso un laboratorio sanitario statale (Studio #1). I ceppi provenivano da collezioni




di colture di riferimento e il test è stato eseguito seguendo la procedura descritta nelle presenti Istruzioni per l’uso (IFU). I risultati sono riportati di seguito.

Studio #1 (n=162):

REAGENTI DI RIFERIMENTO

(+) O157:H7 (-) NSFC non E. coli O157:H7

Ambiguo

Remel E.coli Test

(+) 64

(-) 5** 89

Ambiguo 4***

Sensibilità relativa* >99% Specificità relativa* >99% *Rispetto all’identificazione biochimica e sierologica di riferimento combinata. **Cinque isolati sono risultati positivi per l’agglutinazione con E. coli H7 Test Latex dopo il passaggio in un terreno mobile. ***Quattro ceppi di E. coli sono stati agglutinati con il Control Latex e classificati come ambigui. Nessuno di questi isolati è stato confermato come E. coli O157.

Studio #2: (n=127): Un secondo studio è stato eseguito in tre laboratori clinici per valutare la specificità relativa di E. coli O157:H7 Latex Test rispetto all’identificazione biochimica e ad un altro E. coli O157 Latex Test disponibile in commercio, utilizzando isolati freschi. Sono stati testati in totale 127 isolati clinici NSFC di campioni fecali umani freschi. Questi isolati sono stati identificati utilizzando sia metodi biochimici che sierologici. Degli isolati testati, 126 sono risultati negativi con entrambi i metodi (specificità >99%). Un isolato è stato identificato come E. coli O157 da entrambi i reagenti al lattice e come E. coli O157:H7 dal metodo.

Entrambi gli studi hanno inclusi 22 diversi generi e specie non fermentanti il sorbitolo.

LIMITAZIONI 1. Testare esclusivamente colture pure cresciute inizialmente sullo

SMAC agar per O157. 2. È stato segnalato che alcuni marchi di applicatori in legno influiscono

sui risultati; questi, pertanto, non devono essere utilizzati nel presente test.

3. Gli isolati non mobili positivi all’antigene O157 devono essere valutati per determinare la produzione della tossina Shiga al fine di escludere l’E. coli enteroemorragico. Alcuni ceppi di E. coli O157 non producono la tossina Shiga, ma hanno un antigene H diverso da H7. Sono stati segnalati alcuni ceppi produttori di tossina di E. coli O157 non mobili.9

4. L’uso dello SMAC agar e/o del RIM™ E. coli O157:H7 Latex Test non determinerà né confermerà che un isolato di E. coli è un ceppo produttore di verocitotossina. Sono stati identificati altri sierotipi di E. coli che producono verocitotossina.

5. Le colture giovani in rapida crescita esprimono più rapidamente gli antigeni identificati mediante questo test. Gli isolati rimossi dalla superficie dell’agar di una coltura lasciata in incubazione per una notte produrranno i risultati migliori.

6. L’agar sangue può migliorare la produzione di flagelli e permette una migliore rilevazione degli antigeni flagellari.

7. L’identificazione di eventuali infezioni da E. coli O157:H7 deve essere segnalata alle aziende sanitarie locali per un’ulteriore valutazione e, se necessario, un’azione pubblica volta a prevenire la diffusione della malattia.2

8. Citrobacter freundii e Salmonella Gruppo N (O30) sono antigenicamente correlati a E. coli O157 e ne è stato segnalato l’ottenimento di risultati positivi con E. coli O157:H7 Latex Test. Questi ceppi fermentano rapidamente il sorbitolo e sono biochimicamente distinguibili dall’E. coli. Gli isolati che risultano positivi con E. coli O157:H7 devono sempre essere confermati biochimicamente come E. coli.6

9. Nell’esecuzione di una diagnosi, i risultati del test devono essere interpretati nel contesto della malattia, dell’anamnesi e degli esami fisici del paziente. I test di laboratorio non devono essere utilizzati come unica base per l’istituzione della terapia antibiotica.

10. Sono stati segnalati ceppi di E. coli O157:H7 che non producono la tossina Shiga.10

BIBLIOGRAFIA 1. Wells, J.G., B.R. Davis, I.K. Wachsmuth, L.W. Riley, R.S. Remis, R.

Sokolow, e G.K. Morris. 1983. J. Clin. Microbiol. 18:512-520. 2. Centers for Disease Control and Prevention. 1993. Preliminary Report:





6. Sowers, E.G., J.G. Wells, e N.A. Strockbine. 1996. J. Clin. Microbiol. 34:1286-1289.

7. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry, e M.A. Pfaller. 2007. Manual of Clinical Microbiology. 9th ed. ASM Press, Washington, D.C.

8. Forbes, B.A., D.F. Sahm, e A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scott’s Diagnostic Microbiology. 12th ed. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.


10. Schmidt, H., J. Scheef, H.I. Huppertz, M. Frosch, e H. Karch. 1999. J. Clin. Microbiol. 37:3491-3496.

CONFEZIONE RIF. R24250, E.coli O157:H7 Latex Test .................................. 50 Test/Kit

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