terjemahan kasar

8/13/2019 Terjemahan Kasar

1/6


2/6

2.4. Purification and isolation of chemical constituents

The chemical analysis of the EHE fraction, which contains the polyprenylated benzophenones 7

epiclusianone and garciniaphenone, has been previously reported (Derogis, 2008). This paper

reports the chemical analysis of the EAEE fraction. A 34.9-g portion of EAEE was separated by silica

column chromatography, eluted with gradient polarity mixtures of hexane/ethyl acetate/acetic acid.

A total of 143 fractions (250 mL each) were collected and sorted into five groups [G1 (4.68 g), G2

(5.58 g), G3 (7.25 g), G4 (6.43 g) and G5 (7.24 g)] by CTLC analysis. Each group was further purified by

high-speed countercurrent chromatography (HSCCC), using methods described byConway and

Theory (1989). The best separation, with good distribution and a distribution constant near 1, was

obtained using a hexane/ethyl acetate/methanol/water (1:1:1:1 v/v/v/v) solvent system. The

solvents were mixed in a separating funnel and left to stand for twelve hours before being saturated.

The lower phase was used as the stationary phase, and the upper phase was used as the mobile

phase. The mobile phase was pumped in the tail head direction of the column, using a flow rate of 1

mL/min and a column rotation of 850 rpm. The initial volume of stationary phase was 60 mL, and

81.54% of the stationary phase remained within the column after the initial loading. Next, 600 mg of

each sample group was dissolved in 16 mL of a 1:1 mixture of the upper and lower phases of the

solvent system. The mixtures were filtered through cotton and injected into the loop of the

apparatus with a syringe. Fractions were collected from 3 mL of each group. The content of the

HSCCC fractions was analysed by CTLC. Fractions 3233 from group 2 were completely pure, and

analysis of IR, 1H NMR, COSY, gHMQC and gHMBC spectra led to the identification of 1,3,6,7

tetrahydroxyxanthone. This compound was a yellow crystalline powder (76 mg, 47.5% yield by mass

from the initial injection). Analysis of the IR, 1H NMR, COSY, gHMQC and gHMBC spectra of fractions

39126 from group 3, fractions 106127 from group 4 and fractions 110128 from group 5 and

comparison with previous literature reports (Elfita et al., 2009) led to the identification of thebiflavonoid morelloflavone (2, yellow crystalline solid, 137 mg, 85.7% yield by mass from the initial

injection) and the glycosylated biflavonoids morelloflavone-700-O-b-D-glycoside (3, yellow solid, 92

mg, 57.5% yield by mass from the initial injection) and morelloflavone-4000-O-b-D-glycoside (4,

yellow crystalline solid, 30 mg, 18.75% yield by mass from the initial injection),4 being isolated for

the first time inG. Brasiliensis.

2.6. Evaluation of antioxidant activity

2.6.1. DPPH radical-scavenging activity

The ability of compounds1

4to scavenge DPPH free radicals was evaluated according to the method

of Hatano, Kagawa, Yasuhara, and Okuda (1998). A concentration series (25, 50, 100, 200 and 400

lg/mL in ethanol) of each compound was prepared. A 4-mL aliquot of sample solution was mixed

with 1 mL of DPPH (0.5 mM in ethanol). This mixture was vigorously shaken at room temperature for

30 min. The absorbance of the mixture was then measured at 517 nm. A low absorbance value

indicates effective free radical scavenging. Each solution was analysed in triplicate, and the average

values were plotted to obtain theIC50 against DPPH by linear regression. The activity of ascorbic

acid, a recognised antioxidant, was used as a standard over the same range of concentrations. The

radical-scavenging activity was evaluated as the percentage of inhibition according to the following

equation : % inhibition = [(absorbance of control absorbance of

sample)/absorbance of control)]100.


3/6

2.6.2. Evaluation of reducing power

The reducing power of compounds 14 was evaluated according to the method of Yen and Chen

(1995), with modifications. A concentration series (25, 50, 100, 200 and 400

lgmL 1 in ethanol) of each compound was prepared. A 25-mL test

tube was loaded with 1.0 mL of sample solution, 2.5 mL of phosphate buffer (2 M,pH 6.6) and 2.5 mL

of 1% (m/v) K3[Fe(CN)6]. The mixture was incubated at 45 C for 20

min. Next, 2.5 mL of trichloroacetic acid (10% m/v) were added, and the solution was centrifuged at

4000 rpm for 15 min. A 2.5-mL aliquot of the supernatant was mixed with 2.5 mL of ultra-pure water

and 0.5 mL of ferric chloride (0.1%). The absorbance of this mixture was measured at 700 nm. A

greater absorbance value indicates greater reducing power. Each solution was analysed in triplicate,

and the average values were plotted to obtain the IC50 of Fe3+ reduction by linear regression. The

activities of solutions of ascorbic acid and BHT were used as normalisation standards.


4/6

TERJEMAHAN KASAR

Prosedur umum

Ekstrak dan fraksi terkonsentrasi menggunakan rotary evaporator pengurangan tekanan

pada 45oC . Ekstrak etil asetat dimurnikan dengan kromatografi kolom ( CC ) , dengan

menggunakan silika gel 60 [ 230-400 mesh ( 0,200-0,360 nm) , Merck sebagai fase diam ,

dielusi dengan campuran meningkatnya polaritas ofn-hexane/ethyl asetat dan etil asetat /

etanol . Kromatografi lapis tipis komparatif ( CTLC ) eksperimen mempekerjakan suspensi

berair silika gel PF 254 7749 ( Merck ) , didukung pada pelat kaca . Zat diwarnai dengan uap

yodium , vanili - sulfat asam ( 3 % ) reagen atau 1 % etanol FeCl3in dan divisualisasikan

menggunakan radiasi ultraviolet ( k = 254 dan 366 nm ) . Kecepatan tinggi kromatografi

lawan ( HSCCC ) dilakukan pada kromatografi PC dilengkapi dengan 130 1,6 mm diameter

polytetrafluoroethylene ( PTFE ) kolom . Nilai branged dari 0,5 pada bagian dalam kolom ke0,85 di luar kolom . Total volume kolom adalah 325 mL . Kolom itu diputar di 850 rpm .

Sampel diperkenalkan dengan menggunakan 16 - mL lingkaran injector ( PC Inc ) dengan

bantuan sebuah Waters ( Milford , MA ) pompa . Titik leleh ( INOC ) ditentukan dengan

menggunakan alat titik leleh Mettler . Penyerapan spektrum di daerah ultraviolet

dikumpulkan dengan Shimadzu -2550 dual beam UV-tampak spektrofotometer . Konstituen

fenolik dilarutkan dalam etanol ( 0,1 % ) dan dianalisis oleh scanning atas rangek = 500-200

nm, baik sebelum dan sesudah penambahan AlCl3and HCl , atau NaOAc dan H3BO3 .

Penyerapan spektrum di wilayah inframerah ( IR ) diperoleh dengan Prestige - 21

spektrometer ( Shimadzu ) dengan menggunakan KBr pelet . 1H dan 13C NMR dikumpulkanpada spektrometer 400 MHz Bruker avance DRX . The gHMQC , gHMBC dan peta kontur

COSY dikumpulkan pada 500 MHz Varian ( Palo Alto , CA ) spektrometer dilengkapi dengan

aZ - sumbu gradien multinuclear penyelidikan . Tetrametilsilan ( TMS ) digunakan sebagai

referensi internal untuk semua percobaan NMR . Massa molekul dari senyawa ditentukan

menggunakan modus ionisasi positif dalam MALDI - TOF spektrometri massa menggunakan

asam alpha - siano - 4 - hydroxycinnamic sebagai matriks . Thein percobaan aktivitas

vitroantioxidant dipantau oleh UV-tampak spektrofotometri menggunakan sinar ganda

instrumen Shimadzu - 2550 . Percobaan radikal - pemulungan diamati atk = 517 nm, dan

percobaan daya mengurangi diamati atk = 700 nm.

2.2. bahan tanaman

G. brasiliensisMart. buah dikumpulkan dari kampus Universitas Federal Viosa-MG, Brazil,

pada bulan Februari (musim panas) dari 2010. Identifikasi botani sampel dikonfirmasi oleh

Dr Augusto Alves Joo Meira Neto dari Horto Botnico dari Federal University of Viosa.

Sebuah spesimen voucher (nomor VIC2604) diendapkan di Herbarium dari Federal

University of Viosa.


5/6

2.3. Persiapan ekstrak

Epicarp dari buah G. brasiliensis yang udara kering pada suhu 40oC for8 hari dengan

pemantauan kelembaban terus menerus. Setelah materi itu benar-benar kering, itu bubuk

dalam penggiling pisau, memproduksi 1.052 g sampel tanah. Kering, epicarps tanah menjadi

sasaran ekstraksi lengkap dalam alat Soxhlet menggunakan sistem pelarut polaritas

meningkat, dengan n-heksana dan etil asetat sebagai pelarut selama 24 jam setiap. Ekstrak

kemudian dipekatkan pada tekanan berkurang, menghasilkan 60,2 g ekstrak heksana

epicarp (EHE) dan 102,2 g ekstrak etil asetat epicarp (EAEE).

2.4 . Pemurnian dan isolasi kandungan kimia

Analisis kimia dari fraksi Ehe , yang berisi benzofenon polyprenylated 7 epiclusianone dan

garciniaphenone , telah dilaporkan sebelumnya ( Derogis , 2008) . Makalah ini melaporkan

hasil analisis kimia dari fraksi EAEE . Sebagian 34.9 - g EAEE dipisahkan dengan kromatografikolom silika , dielusi dengan campuran polaritas gradien heksana / etil asetat / asam asetat .

Sebanyak 143 fraksi ( 250 ml masing-masing) dikumpulkan dan disortir menjadi lima

kelompok [ G1 ( 4,68 g ) , G2 ( 5,58 g ) , G3 ( 7,25 g ) , G4 ( 6.43 g ) dan G5 ( 7.24 g ) ] oleh

CTLC analisis . Setiap kelompok selanjutnya dimurnikan dengan kecepatan tinggi

kromatografi lawan ( HSCCC ) , menggunakan metode yang dijelaskan byConway dan Teori (

1989) . Pemisahan terbaik , dengan distribusi yang baik dan konstanta distribusi mendekati

1 , diperoleh dengan menggunakan heksana / etil asetat / metanol / air ( 1:1:1:1 v / v / v / v )

sistem pelarut . Pelarut dicampur dalam corong pisah dan dibiarkan selama dua belas jam

sebelum jenuh . Tahap yang lebih rendah digunakan sebagai fase diam , dan fase atasdigunakan sebagai fase gerak . Fase gerak dipompa ke arah kepala ekor kolom , dengan

menggunakan laju alir 1 mL / menit dan rotasi kolom 850 rpm . Volume awal fase stasioner

adalah 60 mL , dan 81,54 % dari fase diam tetap dalam kolom setelah loading awal .

Selanjutnya, 600 mg dari masing-masing kelompok sampel dilarutkan dalam 16 mL dari

campuran 1:1 dari fase atas dan bawah dari sistem pelarut . Campuran disaring melalui

kapas dan disuntikkan ke dalam lingkaran aparat dengan jarum suntik . Fraksi dikumpulkan

dari 3 mL dari masing-masing kelompok . Isi dari fraksi HSCCC dianalisis oleh CTLC . Fraksi

32-33 dari grup 2 yang benar-benar murni , dan analisis IR , 1H NMR , COSY , gHMQC dan

gHMBC spektrum menyebabkan identifikasi dari 1,3,6,7 tetrahydroxyxanthone . Senyawa ini

adalah bubuk kristal kuning ( 76 mg , 47,5 % hasil massa dari injeksi awal ) . Analisis IR , 1H

NMR , COSY , gHMQC dan gHMBC spektrum fraksi 39-126 dari grup 3 , fraksi 106-127 dari

kelompok 4 dan fraksi 110-128 dari kelompok 5 dan perbandingan dengan laporan literatur

sebelumnya ( Elfita et al . , 2009 ) menyebabkan identifikasi morelloflavone biflavonoid,

terdistribusi ( 2 , kuning kristal padat , 137 mg , 85,7 % hasil massa dari injeksi awal ) dan

biflavonoids glikosilasi morelloflavone - 700 - OBD- glikosida ( 3 , kuning solid, 92 mg , 57,5 %

yield massa dari injeksi awal ) dan morelloflavone - 4000 - OBD- glikosida ( 4 , kristal kuning

solid, 30 mg , 18,75 % yield massa dari injeksi awal) , 4 terisolasi untuk pertama kalinya di G.

Brasiliensis.


6/6

2.6 . Evaluasi aktivitas antioksidan

2.6.1 . DPPH aktivitas radikal - pemulungan

Kemampuan compounds1 - 4to mengais DPPH radikal bebas dievaluasi sesuai dengan

metode Hatano , Kagawa , Yasuhara , dan Okuda ( 1998 ) . Serangkaian konsentrasi ( 25 , 50 ,100 , 200 dan 400 lg / mL dalam etanol ) dari masing-masing senyawa disiapkan . Sebuah

alikuot 4 - mL larutan sampel dicampur dengan 1 mL DPPH ( 0,5 mM dalam etanol ) .

Campuran ini dengan penuh semangat terguncang pada suhu kamar selama 30 menit .

Absorbansi campuran kemudian diukur pada 517 nm. Sebuah nilai absorbansi rendah

menunjukkan radikal bebas yang efektif . Setiap solusi dianalisis dalam rangkap tiga , dan

nilai rata-rata yang diplot untuk memperoleh theIC50 terhadap DPPH dengan regresi linear .

Aktivitas asam askorbat , antioksidan yang diakui , digunakan sebagai standar di atas kisaran

yang sama dari konsentrasi . Kegiatan radikal - pemulungan dievaluasi sebagai persentase

inhibisi menurut persamaan berikut : % inhibisi = [ ( absorbansi kontrol absorbansi sampel )

/ absorbansi kontrol ) ] 100 .

2.6.2 . Evaluasi mengurangi daya

Kekuatan mengurangi senyawa 1-4 dievaluasi sesuai dengan metode Yen dan Chen ( 1995) ,

dengan modifikasi . Serangkaian konsentrasi ( 25 , 50 , 100 , 200 dan 400 lgmL 1 dalam

etanol ) dari masing-masing senyawa disiapkan . Sebuah tes tabung 25 - mL sarat dengan 1,0

mL larutan sampel , 2,5 mL buffer fosfat ( 2 M , pH 6.6 ) dan 2,5 mL dari 1 % ( m / v ) K3 [ Fe (

CN ) 6 ] . Campuran diinkubasi pada 45 C selama 20 menit . Selanjutnya, 2,5 ml asam

trikloroasetat ( 10 % m / v ) ditambahkan , dan larutan disentrifugasi pada 4000 rpm selama

15 menit . Sebuah alikuot 2,5 - ml supernatan dicampur dengan 2,5 mL air ultra- murni dan

0,5 mL besi klorida ( 0,1 % ) . Absorbansi campuran ini diukur pada 700 nm. Nilai absorbansi

yang lebih besar menunjukkan daya mengurangi besar . Setiap solusi dianalisis dalam

rangkap tiga , dan nilai rata-rata yang diplot untuk mendapatkan IC50 pengurangan Fe3 +

dengan regresi linear . Kegiatan larutan asam askorbat dan BHT digunakan sebagai standar

normalisasi .

terjemahan kasar

Documents