thin layer chromatography (얇은막크로마토그래피)...

Thin Layer Chromatography(얇은막 크로마토그래피)(박층 크로마토그래피)

기기분석기기분석__박층크로마토그래피박층크로마토그래피(TLC)(TLC)

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(박층 크로마토그래피)

TLC ?

• 크로마토그래피 분리법의 하나로서 얇은막에 고체 지지체나 유도체로 구성된 이동상을 이용한 분리법


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• 정상상 TLC : 극성 판 + 비극성 전개용매

• 역상 TLC : 비극성 판 + 극성 전개용매

TLC 의 활용

• 물질이 비휘발성이거나 저휘발성일 경우

• 극성 비극성 이온성 모두 가능

• 짧은 시간에 해결하거나 대량의 샘플을 분석하거나, 동시에분석하거나, 적은 비용으로 분석할 경우


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분석하거나, 적은 비용으로 분석할 경우

• GC 나 LC를 활용할 경우에 샘플의 파괴가 우려될 경우

• GC 나 LC 검출기에 검출이 안될 경우

• 분석되어야 할 구성 성분들이 각각 다른 검출기에 의해 응답할 경우나 여러 가지 검출기를 활용하여야 할 경우

• 전기가 없을 경우

TLC 활용 분야

• 제약 및 의약품 개발

• 생체화학, 범죄화학 및 생화학 분야

• 화장품학


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• 화장품학

• 식품분석

• 환경분석

• 무기분석

TLC 순서

• 전개통에 용매 장착

• TLC 판 약 1cm위에 연필로 선을 표시


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필로 선을 표시

• 시료 점적

TLC 순서

• 거름종이 투입

• 용매 투입


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• TLC 투입

• 마개막기

보정/표준물질 TLC

• 보정 필요 없음

• 표준물질이 필요함

– 미지시료를 분석하기 위해 필요


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– 미지시료를 분석하기 위해 필요

– Rf 값을 비교

발색(Visualization and derivatization)

• 침습적 발색 (destructive visualization)– 황산 스프레이를 사용해 스프레이 한 후 110oC

정도의 핫플레이트에 구워주면 거의 모든 시료가 눈에 보임


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• 비 침습적 (Nondestructive visualization)

UV를 사용하여 시료의 발색단을 검사하며모든 시료에 적용 되진 않음

– Long wave UV

– Short wave UV

– Semi-destructive visualization

발 색A plate under a UV light to display the compounds after they were developed


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일반적인 전개


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TLC 표시법

• Retardation/retention factor (머무름 지수)

Rf = ZS/ZF-Z0 ZS ZStZF


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• Rf = 머무름 지수

• ZS= 출발점부터 시료 이동 지점까지의 거리

• ZF= 용매 출발점부터 최종 도달 지점까지의 거리

• Z0= 출발점부터 시료 적용 지점까지의 거리

• 최적의 머무름 지수 : 0.3-0.6

Solvent level

Start lineZ0

• hRf = 100 X Rf

• RSt = ZS/ZSt

• ZSt = 출발지점부터 표준 시료 이동 까지 거리

• Flow constant (κ)

TLC 표시법


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• Flow constant (κ)

κ = ZF2/t

κ = flow constant [mm2/s]

ZF = 용매 출발점부터 최종 도달 지점까지의 거리[mm]

t = 전개시간 [s]

• hRf 영역

TLC 용어

• 전개 : Development

• 전개용매 : Solvent system

• 발색 : Visualization/Derivatization


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• 발색 : Visualization/Derivatization

• 전개통 : Developing Chamber

• 모세관 : Capillary spotter

제약학 분야 순도 비교 (고농도)

각기 다른 화합물임

(a) 200 mg 농도에 따른 순도(b)500 mg 농도에 따른 순도

200 mg 원액

불순물


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(c) 300 mg 농도에 따른 순도

저농도로 정확한 Rf를 찾음

TLC의 구조 (흡착물질, Sorbent)• 흡착물질 : 실리카겔 60 (60 옹스트롱 단위의 내부 기공

지름), 카페인이 섞인 실리카 혹은 키셀궈(kieselguhr; 단세포 해조류인 규질 껍질로 구성된 밝은 색을 띤 다공질의 부서지기 쉬운 퇴적암) 혼합물을 대부분 사용함

• Silica gel-F (Fluorescing indicator added)• Magnesium Silicate (Florisil)


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• Magnesium Silicate (Florisil)• Polyamides• 전분 (starch)• 알루미나• RP-8, RP-18 : 말단 역상 부분 변화 (비극성)• NH2 : 말단 아미노기 부분 변화 (약알칼리이온교환)• CN, DIOL : 친수성 중성 부분 변화• CHIR : 광학이성질체의 분리

실리카의 구조 (SiO2)

OH

Si

O

OH

SiO

OO

OH

Si

OO

OH

Si

OO

OH

SiO O

O

Si

OO

Si

OO

Si

OO

SiO O

OSi

OO

Si

OO

SiO O

O


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OH

Si

O

OH

SiO

OO

OH

Si

OO

OH

Si

OO

OH

SiO O

O

Si

OO

Si

OO

Si

OO

SiO O

OSi

OO

Si

OO

SiO O

O

알루미나의 구조

O

AlO O

AlO

OH

AlO

OH

AlO

OH

Al

OH

O


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O

AlO O

AlO

OH

AlO

OH

AlO

OH

Al

OH

O

Acidic: -Al-OH

Neutral: -Al-OH + -Al-O-

Basic: -Al-O-

역상의 구조

C-18으로 처리된 실리카

OO

CH2

CH3

17Si

CH3

CH2

CH3

17Si

CH3

CH3SiCH3)3

SiCH3)3SiCH3)3


18

O

Si

O

O

SiO

OO

Si

OO

O

Si

OO

O

SiO O

O

Si

OO

Si

OO

Si

OO

SiO O

OSi

OO

Si

OO

SiO O

O

SiCH3

3 3

TLC 지지체의 종류


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TLC 지지체의 종류


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• Aluminium foil

• Terephthalate film

• Thin glass plates

TLC의 구조 (구조체)


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• Thin glass plates

• Braided (꼬인) PTFE

• Glass fiber

• Fluorescence indicator

페퍼민트 오일 분리의 예


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