uji kualitatif karbohidrat dan protein endrika · pdf file• uji ini didasari oleh reaksi...
TRANSCRIPT
![Page 1: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/1.jpg)
Endrika WIDYASTUTI
Food Science and Technology Department
2013
UJI KUALITATIF
KARBOHIDRAT DAN PROTEIN
FOOD ANALYSIS AND BIOCHEMISTRY PRACTICE
![Page 2: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/2.jpg)
UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT
![Page 3: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/3.jpg)
• Uji KH secara umum
• Uji Molisch dinamai sesuai penemunya yaitu Hans Molisch, seorang ahli botani dari Australia.
CARBOHYDRATE ANALYSIS
UJI MOLISCH
![Page 4: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/4.jpg)
• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk cincin furfural yang berwarna ungu.
• REAKSI POSITIF : munculnya cincin ungu di purmukaan antara lapisan asam dan lapisan sampel
• Sampel yang diuji dicampur dengan REAGENT MOLISCH (α-naphthol yang terlarut dalam etanol)
• Setelah pencampuran atau homogenisasi, H2SO4 pekat perlahan-lahan dituangkan melalui dinding tabung reaksi agar tidak sampai bercampur dengan larutan atau hanya membentuk lapisan.
CARBOHYDRATE ANALYSIS
UJI MOLISCH
![Page 5: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/5.jpg)
CARBOHYDRATE ANALYSIS
UJI MOLISCH
![Page 6: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/6.jpg)
UJI BENEDICT
• Uji kimia untuk mengetahui KANDUNGAN GULA (KARBOHIDRAT) PEREDUKSI.
• Gula pereduksi meliputi semua jenis monosakarida dan beberapa disakarida seperti laktosa dan maltosa
• PROSEDUR KERJA:
a. Masukkan ke dalam tabung reaksi 2 tetes sampel
b. Tambahkan 1 ml Benedict.
c. Panaskan dalam penangas air.
d. Amati hasilnya
CARBOHYDRATE ANALYSIS
UJI BENEDICT
![Page 7: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/7.jpg)
• Pada uji Benedict, pereaksi ini akan bereaksi dengan gugus aldehid, kecuali aldehid dalam gugus aromatik, dan alpha hidroksi keton.
• Oleh karena itu, meskipun FRUKTOSA bukanlah gula pereduksi, namun karena memiliki gugus alpha hidroksi keton, maka fruktosa akan berubah menjadi glukosa dan mannosa dalam suasana basa dan memberikan hasil positif dengan pereaksi benedict
CARBOHYDRATE ANALYSIS
UJI BENEDICT
![Page 8: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/8.jpg)
CARBOHYDRATE ANALYSIS
UJI BENEDICT
![Page 9: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/9.jpg)
• membedakan monosakarida dan disakarida dengan mengontrol kondisi pH serta waktu pemanasan.
• PROSEDUR KERJA :
a. tasukkan 5 tetes larutan sample ke dalam tabung reaksi.
a. tambahkan 1 ml reagen Barfoed.
b. panaskan dalam penangas air, hitung waktu sampai terbentuk perubahan warna merah bata.
c. amati hasilnya.
CARBOHYDRATE ANALYSIS
UJI BARFOED
![Page 10: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/10.jpg)
• Prinsipnya berdasarkan reduksi Cu2+ menjadi Cu+
• Sampel monosakarida mempunyai waktu yang lebih cepat membentuk warna merah bata pada uji barfoed
CARBOHYDRATE ANALYSIS
UJI BARFOED
![Page 11: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/11.jpg)
Iodine test
• Pati dan iodium membentuk IKATAN KOMPLEKS BERWARNA BIRU.
• PROSEDUR KERJA: a. 1 tetes sample di atas
druppel plate. b. tambahkan 1 tetes larutan
yodium. c. amati warna yang terjadi.
CARBOHYDRATE ANALYSIS
IODINE TEST
![Page 12: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/12.jpg)
Pati dalam suasana asam bila dipanaskan dapat terhidrolisis menjadi senyawa yang lebih sederhana, hasil pemecahan pati jika diuji dengan iodium akan memberikan warna biru, coklat, kuning sampai tidak berwarna
CARBOHYDRATE ANALYSIS
IODINE TEST
![Page 13: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/13.jpg)
UJI KUALITATIF PROTEIN
![Page 14: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/14.jpg)
14
PROTEIN ANALYSIS
NINHIDRIN TEST Primary amino groups on the end of proteins, peptides, and free amino acids will react with ninhydrin.
This reaction forms a strongly colored purple solution referred to as Ruheman's purple
Sample can be tested for the amount of primary amino acids currently present, or sample can be alkaline hydrolyzed to increase the amount of these amino acids.
![Page 15: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/15.jpg)
15
PROTEIN ANALYSIS
NINHIDRIN TEST Ninhidrin mengalami deaminasi oksidatif dan asam amino dekarboksilasi menjadi CO2, NH3 dan aldehid
Ninhidrin yang tereduksi akan bereaksi dengan amonia dan dengan molekul ninhidrin lain sehingga terbentuk senyawa kompleks berwarna ungu ( ungu Ruhemann)
![Page 16: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/17.jpg)
17
PROTEIN ANALYSIS
NINHIDRIN TEST ADVANTAGES Faster and more convenient that Kjeldahl
DISADVANTAGES • Large dilutions are necessary for spec. reading • Proteins differ in the dye binding capacity • Make standard curve based on predominant
primary amino acid present in the food • NPN, calcium, or phosphorous constituents will
bind to the dye or to protein, causing interference • Addition of a metal chelator (i.e.. oxalic acid)
may help reduce binding
![Page 18: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/18.jpg)
PROTEIN ANALYSIS
NINHIDRIN TEST
larutan susu skim (10%) gelatin (5%) putih telur enzim keju, pemanis sintetik diasweet MSG (5%) akuades sebagai (kontrol)
BAHAN - Pelabelan tabung reaksi - Pengambilan sampel 2 ml + 2 ml larutan ninhidrin - Pemasukan tabung reaksi pada air mendidih (15- 20 detik) Pengamatan warna larutan : (+ ) jika hasil test positif (berwarna ungu, berarti sampel mengandung gugus amina bebas) (– ) jika hasil test negatif. Jika terbentuk warna lain seperti (kuning, orange dan merah) maka uji negatif
prolin, hydroxyproline, dan 2-, 3-, and 4-asam aminobenzoat
![Page 19: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/19.jpg)
19
PROTEIN ANALYSIS
BIURET
• Cupric ions (Cu2+) react with peptide bonds under alkaline conditions
• (copper sulfate + K-Na-tartrate + alkali) • Measure color in SPEC at 520 nm
N
N
OH
RH
OH
Cu2+
OH-
ON
N
HH
H
R
O
N
N
OH
RH
OH
Cu2+
Purple biuret complex
![Page 20: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/20.jpg)
PROTEIN ANALYSIS
BIURET
![Page 21: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/21.jpg)
21
PROTEIN ANALYSIS
• ADVANTAGES – most sensitive (20-200g)
- Cheaper and faster than Kjeldahl - Less problem with color deviations - Few substances interfere - Does not measure non protein nitrogen (NPN)
• DISADVANTAGES – color development not proportional to protein
concentration – color varying with different proteins – interference (sugars, lipids, phosphate buffers, etc)
BIURET
![Page 22: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/22.jpg)
22
PROTEIN ANALYSIS
BIURET
Pereaksi biuret Larutkan 3 gram CuCO4.5H2O dan 9 gram Na-K-Tartrat dalam 500 ml NaOH 0.2 N. Tambahkan 5 gram KI kemudian encerkan sampai 1000 ml dengan menggunakan NaOH 0.2 N. Larutan protein standar Larutan bovine serum albumin atau kasein 5 mg/ml
PEMBUATAN KURVA STANDAR PERSIAPAN SAMPEL Penimbangan Sampel Penghancuran Sampel Penyaringan dan Pensentrifuga asian Supernatan didekantasi Jika supernatan keruh (atau bahan mengganggu), ada perlakuan tambahan
BAHAN
![Page 23: UJI KUALITATIF KARBOHIDRAT DAN PROTEIN Endrika · PDF file• Uji ini didasari oleh reaksi dehidrasi karbohidrat oleh asam sulfat membentuk ... • Uji kimia untuk ... suasana basa](https://reader033.vdocument.in/reader033/viewer/2022061604/5a7279d97f8b9ac0538d9e28/html5/thumbnails/23.jpg)
Endrikawidyastuti.wordpress.com
23
Download materi ini di: