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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
EVALUACIÓN DEL EFECTO DE DOSIS BAJAS DE SOMATOTROPINA
BOVINA RECOMBINANTE SOBRE EL PORCENTAJE DE
CONCEPCIÓN EN VACAS LECHERAS DE ALTA PRODUCCIÓN AL
PASTOREO EN DOS PISOS ALTITUDINALES
Informe final de investigación presentado como requisito para optar el
Título de Médico Veterinario Zootecnista
AUTOR:
Darwin David Changoluisa Chiguano
TUTOR:
Dr. Christian Albuja
Quito, Abril 2017
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
EVALUACIÓN DEL EFECTO DE DOSIS BAJAS DE SOMATOTROPINA
BOVINA RECOMBINANTE SOBRE EL PORCENTAJE DE
CONCEPCIÓN EN VACAS LECHERAS DE ALTA PRODUCCIÓN AL
PASTOREO EN DOS PISOS ALTITUDINALES
Informe final de investigación presentado como requisito para optar el
Título de Médico Veterinario Zootecnista
AUTOR:
Darwin David Changoluisa Chiguano
TUTOR:
Dr. Christian Albuja
Quito, Abril 2017
iv
DEDICATORIA
A la paciencia y apoyo incondicional de María Teresa y Luis mis padres, a
Lorena mi hermana y mejor amiga.
El final de un camino, es el inicio de otro. Donde todo empieza, cerca del
final.
Darwin David Changoluisa
v
AGRADECIMIENTOS
Agradezco a Jehová por darme la vida, por darme la bendición de contar
con personas que han sido ejemplo de fortaleza y lucha constante.
Al Dr. Richard Mancheno por la ayuda prestada para realizar esta
investigación, quien puso a disposición sus conocimientos y gran
experiencia, sin su colaboración esta tesis no se hubiera desarrollado.
A mi tutor Dr. Christian Albuja por la paciencia y acertada guía para poder
iniciar y culminar esta investigación
Al departamento de Salud Animal Pronaca por haber donado gentilmente
la somatotropina bovina recombinante Lactotropina® Elanco
A los propietarios de las haciendas, Enrique Dueñas y Pablo Guarderas
por permitir la realización de la parte experimental de esta investigación,
por darme la maravillosa experiencia de conocer haciendas con los
mejores manejos y hermosos ejemplares ya que dichas vacas son
catalogadas como élites en la producción lechera.
Al personal de las haciendas por su colaboración su ayuda fue muy grata.
vi
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL
Yo, Darwin David Changoluisa Chiguano en calidad de autor del trabajo de
investigación “Evaluación del efecto de dosis bajas de somatotropina
bovina recombinante sobre el porcentaje de concepción en vacas lecheras
de alta producción en dos pisos altitudinales” autorizo a la Universidad
Central del Ecuador, hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen
o parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos
o de investigación.
Los derechos que como autor me corresponde, con excepción de la
presente autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo
establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y demás pertinentes de la Ley de
Propiedad Intelectual y su Reglamento.
Así mismo, autorizo a la Universidad Central del Ecuador para que realice
la digitalización y publicación de este trabajo de investigación en el
repositorio virtual, de conformidad a lo dispuesto en el Art. 144 de la Ley
Orgánica de Educación Superior.
En la ciudad de Quito, a los……… días del mes de………. del 2017.
Darwin David Changoluisa Chiguano
CI. N° 17237080903
vii
INFORME DEL TUTOR
En mi carácter de Tutor del Trabajo de Investigación, presentado por el
señor: Darwin David Changoluisa Chiguano, para optar por el Título o
Grado de Médico Veterinario y Zootecnista, cuyo título es “Evaluación del
efecto de dosis bajas de somatotropina bovina recombinante sobre el
porcentaje de concepción en vacas lecheras de alta producción al pastoreo
en dos pisos altitudinales”. Considero que dicho trabajo reúne los requisitos
y méritos suficientes para ser sometido a la presentación pública y
evaluación por parte del jurado examinador que se designe.
Quito, a los ..... días del mes de .............
Dr. CHRSTIAN RENE ALBUJA ARROBA
CI: 1717090433
viii
ix
x
xi
TABLA DE ABREVIATURAS
AGNES Ácidos grasos no esterificados
bST Somatotropina bovina recombinante
BEN Balance energético negativo
BHB Beta hidroxibutirato
CRH Hormona liberadora de corticotropina
E2 Estrógenos
GABA Acido gamma amino butírico
GH Hormona de crecimiento
GHBP Proteína transportadora de la hormona de crecimiento
GHR Receptor de la hormona de crecimiento
GHRH Hormona liberadora de la somatropina
GNRH Hormona liberadora de las gonadotropinas
IA Inseminación artificial
IATF Inseminación artificial a tiempo fijo
IGF-1 Factor de crecimiento similar a la insulina tipo 1
IFGBP Proteína transportadora del Factor de crecimiento similar a la insulina
LH Hormona luteinizante
MCI Masa celular interna
mm Milímetros
NE Norepinefrina
OR Odds ratio
P4 Progesterona
RMG Reconocimiento materno de gestación
SPHH Sistema vascular porta hipotálamo hipofisario
SS Somatostatina
xii
INDICE GENERAL
CONTENIDO
Pág. DEDICATORIA .................................................................................................................iv
AGRADECIMIENTOS ..................................................................................................... v
AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL .................................................vi
INFORME DEL TUTOR ................................................................................................. vii
CALIFICACION TRABAJO DE TITULACION ESCRITO…………………..........viii
TABLA DE ABREVIATURAS........................................................................................ xi
INDICE GENERAL ......................................................................................................... xii
LISTA DE CUADROS ................................................................................................... xiv
LISTA DE FIGURAS ...................................................................................................... xv
LISTA DE ANEXOS ...................................................................................................... xvi
RESUMEN...................................................................................................................... xvii
ABSTRACT................................................................................................................... xviii
CAPITULO I ...................................................................................................................... 1
INTRODUCCION ............................................................................................................. 1
OBJETIVOS ...................................................................................................................... 6
OBJETIVO GENERAL ................................................................................................ 6
OBJETIVOS ESPECIFICOS ...................................................................................... 6
CAPÍTULO II ..................................................................................................................... 7
MARCO TEORICO .......................................................................................................... 7
Hormona de crecimiento .......................................................................................... 7
Factor de crecimiento parecido a la insulina tipo I (IGF-1) ............................. 7
Eje somatotrópico ...................................................................................................... 8
Somatotropina y el factor de crecimiento similar a la insulina tipo 1 en la
reproducción ............................................................................................................... 9
Fertilidad en vacas lecheras de alto rendimiento ........................................... 13
Factores que afectan la fertilidad ........................................................................ 13
Pérdidas embrionarias ........................................................................................... 16
CAPÍTULO III .................................................................................................................. 19
MATERIALES Y METODOLOGIA.............................................................................. 19
xiii
MATERIALES............................................................................................................. 19
MÉTODOLOGÍA ........................................................................................................ 20
Ubicación del estudio ............................................................................................ 20
Descripción de las Haciendas ............................................................................. 21
Unidades de muestreo ............................................................................................ 21
Metodología especifica ........................................................................................... 23
Factores de estudio ................................................................................................. 24
Análisis estadístico ................................................................................................. 25
CAPÍTULO IV ................................................................................................................. 26
RESULTADOS Y DISCUSIÓN .................................................................................... 26
Porcentaje de concepción a los 30 días de gestación ............................... 26
Diámetro embrionario longitudinal a los 30 días de gestación ................... 29
Tasa de concepción a los 60 días de gestación ............................................ 31
Porcentaje de mortalidad entre 30 y 60 días de gestación .......................... 33
CAPITULO V .................................................................................................................. 36
CONCLUSIONES .......................................................................................................... 36
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS .......................................................................... 37
ANEXOS .......................................................................................................................... 49
xiv
LISTA DE CUADROS
Cuadro 1. Identificación de los receptores para GH e IGF-1 en el tracto
reproductivo y en el producto de la concepción del bovino ...................... 12
Cuadro 2. Ubicación geográfica ............................................................... 20
Cuadro 3. Unidades de muestreo ............................................................ 22
Cuadro 4. Muestreo aleatorio estratificado .............................................. 22
Cuadro 5. Análisis individual y general de los porcentajes de concepción
a los 30 días de gestación, resultados de Ji cuadrado y Odds ratio ........ 27
Cuadro 6. Promedio del diámetro embrionario longitudinal por hacienda y
promedio global (análisis t de student) ................................................... 29
Cuadro 7. Análisis individual y general de la reconfirmación de gestación
a los 60 días, resultados de Ji cuadrado y Odds ratio ............................. 32
Cuadro 8. Porcentaje de mortalidad resultados individuales por hacienda
y porcentaje global análisis Ji cuadrado .................................................. 34
xv
LISTA DE FIGURAS
Figura 1. Metabolismo hepático de hormonas esteroideas ...................... 18
Figura 2. Porcentaje de concepción global a los 30 días ......................... 27
Figura 3. Diámetro embrionario longitudinal, resultado global comparación
grupo experimental bST vs grupo control ................................................ 30
Figura 4. Porcentaje de concepción global a los 60 días de gestación .... 32
Figura 5. Tasa de mortalidad entre 30 y 60 días de gestación ................ 35
xvi
LISTA DE ANEXOS
Anexo 1. Imagen satelital Hacienda Puerta de Oro ................................. 49
Anexo 2. Imagen satelital Hacienda Unambiro ........................................ 49
Anexo 3. Estimación del consumo de suplementos en materia seca/
Hcda. Puerta de oro ................................................................................. 50
Anexo 4. Estimación del consumo total de kikuyo y suplemento en
materia seca Hcda. Puerta de Oro ........................................................... 50
Anexo 5. Estimación del consumo de suplementos en materia seca/
Hcda. Unambiro ....................................................................................... 51
Anexo 6. Estimación del consumo total de raygras y suplemento en
materia seca ............................................................................................ 51
Anexo 7. Datos de la Hacienda Puerta de Oro grupo experimental
bST,………………………………………..…………………………………….52
Anexo 8. Datos de la Hacienda Puerta de Oro grupo control ................. 53
Anexo 9. Datos de la Hacienda Unambiro grupo experimental ............... 54
Anexo 10. Datos de la Hacienda Unambiro grupo control ....................... 55
xvii
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
EVALUACIÓN DEL EFECTO DE DOSIS BAJAS DE SOMATOTROPINA
RECOMBINANTE BOVINA SOBRE EL PORCENTAJE DE CONCEPCION EN VACAS LECHERAS DE ALTA PRODUCCION AL
PASTOREO EN DOS PISOS ALTITUDINALES
Autor: Darwin David Changoluisa
Tutor: Dr. Christian Albuja
Fecha: Abril, 2017
RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue evaluar los efectos de la aplicación de
tres dosis de 325 mg de somatotropina bovina recombinante sobre el
porcentaje de concepción en 100 vacas holstein mestizas de alta
producción, manejadas al pastoreo. La investigación se la realizó en dos
haciendas ubicadas en la provincia de Pichincha, en zonas altitudinales
entre 2800 y 3100 msnm. Se seleccionó vacas de hasta 100 días en leche,
sin enfermedades post parto y con una condición corporal promedio de
2,75. La sincronización fue realizada con 500 µg de cloprostenol sódico,
administrado previa identificación ecográfica de un cuerpo lúteo. Para la
aplicación del tratamiento se dividió a las vacas en dos grupos: grupo
experimental bST (n꞊ 50) recibió 325 mg de bST en el día de inseminación
(día 0), segunda dosis al día 14, si no retornó en celo una última dosis al
día 28; grupo control (n꞊ 50) fueron inseminadas sin ninguna aplicación de
bST. El diagnostico de gestación se realizó por ecografía transrectal al día
30 post inseminación. Se realizó una reconfirmación ecográfica de
gestación a los 60 días con el fin de determinar las pérdidas de gestación.
Al día 30 se evidenció un incremento del porcentaje de concepción en el
grupo experimental bST del 52% frente al 34% grupo control (OR 2,1)
(p=0,07). La medición del diámetro embrionario longitudinal en las vacas
que recibieron bST fue mayor (17,7 ± 0,60 mm) en contraste que las del
grupo control (15,3 ± 0,44 mm) (p ˂0,05). La reconfirmación de preñez a
los 60 días de gestación, evidenció un mejor porcentaje de concepción en
el grupo bST con 48% vs 28% en el grupo control (OR 2, 73) (p˂0,05). No
se encontró diferencia entre grupos para las pérdidas de gestación entre
30 y 60 días (p˃0,05) a pesar de que las pérdidas de gestación para el
grupo experimental bST son menores 7,7% frente a 17,6% en el grupo
control. En conclusión las vacas que recibieron la aplicación de tres dosis
de 325 mg de BST lograron mejorar los porcentajes de concepción y el
desarrollo embrionario.
Palabras clave: bST, vacas lecheras, porcentaje de concepción.
xviii
Evaluation of the effect of low doses of recombinant bovine
somatotropin on the rate of conception in dairy cows of high
production to grazing on two altitudinal floors
Author: Darwin David Changoluisa
Tutor: Dr. Christian Albuja
Date: April, 2017
ABSTRACT
The objective of the present study was to evaluate the effects of three doses
of 325 mg of recombinant bovine somatotropin on the rate of conception in
100 holstein cows of high production, managed to grazing. The research
was carried out in two farms located in the province of Pichincha, in
altitudinal zones between 2800 and 3100 meters above sea level. Cows up
to 100 days in milk were selected, without postpartum disease and with an
body condition score 2, 75. The synchronization was performed with 500 ug
cloprostenol sodic, administered prior to the ultrasonography identification
of a luteus corpus. For the application of the treatment, the cows were
divided into two groups: experimental group bST (n = 50) received 325 mg
bST on the day of artificial insemination (day 0), second dose to day 14, but
if don't return in estrus a last dose to day 28; control group (n = 50) were
inseminated without any bST application. The diagnosis of gestation was
performed by transrectal ultrasonography to day 30 post insemination. An
ultrasonography reconfirmation of gestation was performed at 60 days in
order to determine the gestation loss. At day 30 an increase of conception
rate was evidenced in the experimental group bST of 52% front of the 34%
control group (OR 2,1) (p=0,07). The measurement of the longitudinal
embryonic diameter in cows receiving bST was greater (17,7 ± 0,60 mm) in
contrast to those of the control group (15,3 ± 0,44 mm) (p ˂0,05). The
reconfirmation of pregnancy at 60 days of gestation showed a better
conception rate in the bST group with 48% vs 28% in the control group (OR
2, 73) (p˂0,05). No differences were found between groups for the loss of
gestation between 30 and 60 days (p˃0,05) although the gestation losses
for the experimental group bST were lower 7,7% compared to 16,6% in the
control group In conclusion the cows that received the application of three
doses of 325mg of bST managed to improve the rate of conception and the
embryonic development.
Key words: bST, dairy cows, rate conception
1
CAPITULO I
INTRODUCCION
En los últimos años, mucho se ha discutido con respecto a la disminución
de la fertilidad en los hatos de vacas lecheras. Este fenómeno se ha
atribuido a una gran cantidad de factores, sin embargo, el incremento de la
producción que ha experimentado la vaca lechera actual, ha sido uno de
los más mencionados y que más controversia ha generado en los
congresos mundiales de reproducción. (Wiltbank et al., 2006). En un hato
lechero se puede evaluar la fertilidad por diferentes estimadores
reproductivos, cada uno de los cuales ofrece una visión parcial de los
distintos problemas que pueden estar ocurriendo (Hernández, 2012). Uno
de los parámetros más utilizados es el porcentaje de concepción, el cual,
está determinado por la tasa de fertilización y la sobrevivencia embrionaria.
En vacas lecheras se fertilizan alrededor del 80 al 90% de los ovocitos, pero
a los 45 días post inseminación, solo entre el 30 al 40% de vacas mantienen
la gestación, estos resultados indican, que la muerte embrionaria es una de
las principales causas de la falla reproductiva. (Hernández & Gutiérrez
2013; Sreenan et al., 2001).
La mortalidad embrionaria en la vaca lechera, comprende la pérdida de la
gestación durante los primeros 42 días y se estima que puede variar entre
el 10 al 40% en las hembras de primer servicio y el 65% en vacas
repetidoras de alta producción (Bilodeau & Kastelic, 2003)
La causa de este suceso es multifactorial, sin embargo, investigaciones
respaldan que los embriones más pequeños están en un aparente retraso
del desarrollo y no pueden secretar suficiente interferón-tau (IFN-t), por lo
que tienen menor probabilidad de sobrevivencia (Bilodeau & Kastelic,
2003). La mortalidad embrionaria es una de las principales causas del
fracaso reproductivo del ganado, lo que resulta en incremento de los días
abiertos, inseminaciones adicionales, mayor tasa de sacrificios, menor
2
disponibilidad de reemplazos, reducción de la producción de leche,
estancamiento en el proceso de mejoramiento genético, con pérdidas
económicas considerables para el ganadero. Por lo que es necesario
desarrollar estrategias para mejorar la fertilidad de vacas con alto
potencial lechero (Hoglund et al., 2009).
Vacas de alta producción, tienen una reducida calidad de embriones, por
tanto sus productos tienen menor capacidad de sobrevivencia, con bajos
porcentajes de concepción (Sartori et al., 2002). Estudios realizados en
vacas en lactación han determinado bajas concentraciones del factor de
crecimiento similar a la insulina tipo 1 (IGF-1) (Taylor et al., 2004; Wiltbank
et al., 2006), esta deficiencia es uno de los factores que afectan el
desarrollo del ovocito y del embrión, además de causar un microambiente
subóptimo en el útero, disminuyendo así el mantenimiento de la vida
embrionaria temprana, esto puede explicar en parte, las bajas tasas de
concepción y la alta incidencia de mortalidad embrionaria temprana en
vacas lecheras de alto rendimiento (Leroy et al., 2008).
Varias son las investigaciones en las que se ha visto que la somatotropina
bovina (bST) aumenta las concentraciones séricas de IGF-1, este factor
favorece la maduración del ovocito, tasa de fertilización, desarrollo
embrionario temprano, función del cuerpo lúteo y reconocimiento de la
gestación (Hernández & Gutiérrez, 2013).
El tratamiento con bST en vacas lecheras, mejora el desarrollo de los
folículos ováricos, lo que está asociado con el aumento de concentraciones
circulantes de IGF-1 (Rivas et al., 2011).
3
Estos factores trabajan sinérgicamente con las gonadotropinas para
estimular localmente el crecimiento folicular, la maduración y la
esteroideogénesis tanto en el folículo como en el cuerpo lúteo (Kawashima
et al., 2007; Lucy MC, 1999). A más de estas funciones, el IGF-1, estimula
la proliferación de las células de la granulosa, promueve la foliculogénesis,
ovulación, fertilización, implantación y el desarrollo embrionario (Spicer et
al., 2002). Tanto útero como embrión poseen receptores para GH e IGF-
1; factores que juegan un papel importante para el desarrollo temprano e
implantación del embrión (Moreira et al., 2002; Yaseen et al., 2001). El
suministro de bST en vacas lecheras aumenta las concentraciones óptimas
de IGF-1, consecuentemente mejora la tasa de concepción, debido a un
aumento de la longitud del conceptus, estimulando así la producción de
IFN-t (Bilby et al., 2006). Durante el desarrollo temprano la hormona de
crecimiento (GH) estimula la proliferación de la masa celular interna (MCI)
y las células del trofoectodermo, para actuar como elemento de
supervivencia y reducir la apoptosis en la embriogénesis temprana (Kolle
et al., 2002; Jousan y Hansen 2004).
Se ha realizado varios estudios en los que se ha evaluado los efectos de
bST sobre la fertilidad y el desarrollo embrionario en vacas lecheras. Se
reportaron incrementos sobre la tasa de concepción utilizando 500mg de
bST en protocolos de inseminación a tiempo fijo en vacas lecheras de
primer servicio (Moreira et al., 2000; Moreira et al., 2001). La aplicación de
500 mg al día del estro y otra dosis después de 10 días incremento las
tasas de concepción en vacas repetidoras (Morales et al., 2001). Moreira
et al. (2002 a) manifestó que la bST mejora la fertilización y el desarrollo
embrionario temprano al administrar una dosis de 500 mg en el momento
de inseminación en vacas donadoras de embriones. En otro estudio la bST
mejoró el desarrollo en embriones in vitro (Moreira et al., 2002b). La
aplicación de dos dosis de 500 mg de bST al día cero y al día 11 en vacas
no lactantes resulto en una sobreestimulación de las concentraciones de
GH e IGF-1 lo cual fue perjudicial para el mantenimiento de la gestación
(Bilby et al., 2004). Mientras que Rivera et al. (2010) al utilizar 6 dosis de
4
500 mg en IATF no tuvo respuestas favorables sobre la tasa de
concepción. Castañeda et al. (2009) reporto que una sola dosis de 500 mg
al momento de inseminación no incremento las tasas de concepción en
vacas de primer servicio.
Estudios realizados en el Ecuador muestran resultados opuestos, por un
lado Vargas y colaboradores (2010) evidenciaron un incremento de la tasa
de concepción en vacas repetidoras tratadas con 500 mg de bST en
protocolos de inseminación artificial a tiempo fijo mientras que Gallmeier
(2013) no tuvo resultados significativos en vacas de primer servicio,
usando una dosis de 500 mg de bST al día de inseminación comparando
protocolos de sincronización. Puede ser que las diferentes respuestas que
ha dado la aplicación de bST sobre las tasas de concepción, este ligada a
la dosis y numero de aplicaciones utilizadas, al momento de aplicación,
protocolos de inseminación (IATF / celo detectado) y estado fisiológico y
metabólico de la vaca.
Un estudio reciente del uso de bST en vacas lecheras con dosis de 325 mg,
demostró que aumenta las concentraciones de GH e IGF-1 en el plasma,
mejorando el tamaño del embrión y el porcentaje de concepción. En este
experimento se concluyó que probablemente las dosis bajas de bST,
optimizaron el ambiente uterino y su receptividad a la gestación,
estimulando el desarrollo del embrión y la supervivencia durante las etapas
pre y peri-implantación, aumentando la fertilidad de las vacas. Estas
respuestas favorables, estuvieron relacionadas con los incrementos en las
concentraciones sistémicas de GH e IGF-1. Por lo tanto es posible que los
beneficios para la fertilidad en vacas lecheras podrían ocurrir a dosis de
menos de 500 mg (Ribeiro et al., 2014).
Es evidente que una buena producción de leche comprende un eficiente
desempeño reproductivo de las vacas, más aun cuando se trata de
animales altamente productores. Tomando en cuenta estos antecedentes
se planteó, la propuesta de la presente investigación realizada en dos
haciendas ubicadas en la provincia de Pichincha de la sierra ecuatoriana
5
situadas entre 2800 y 3100 metros sobre el nivel del mar, con el objetivo
de determinar el porcentaje de concepción en vacas de alta producción
manejadas en un sistema intensivo de pastoreo, utilizando tres dosis de
325 mg de bST a intervalos de 14 días, iniciando el protocolo desde el día
de inseminación hasta el día 30, evaluando el porcentaje de concepción, a
los 30 y 60 días, desarrollo embrionario a través del diámetro embrionario
longitudinal a los 30 días de gestación y pérdidas de gestación desde el día
30 al 60 post inseminación.
6
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto de dosis bajas de somatotropina bovina recombinante
(bST) sobre el porcentaje de concepción en vacas lecheras de alta
producción al pastoreo en dos pisos altitudinales.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
- Determinar el porcentaje de concepción al primer servicio en vacas
lecheras al pastoreo tratadas con tres dosis de 325 mg de bST, en
una altitud de 2800 msnm y 3100 msnm a los 30 días de gestación.
- Medir el diámetro embrionario longitudinal a los 30 días de
gestación, para evaluar el desarrollo embrionario entre grupos.
- Determinar el porcentaje de concepción al primer servicio en vacas
lecheras al pastoreo tratadas con tres dosis de 325 mg de bST en
una altitud de 2800 msnm y 3100 msnm a los 60 días de gestación
para reconfirmación de preñez.
- Determinar el porcentaje de pérdidas embrionarias que se dan
entre los 30 y 60 días de gestación en el grupo con bST y en el
grupo sin bST una altitud de 2800 msnm y 3100 msnm.
7
CAPÍTULO II
MARCO TEORICO
Hormona de crecimiento
La hormona de crecimiento o somatotropina (GH) es una hormona
proteica, sintetizada y liberada de manera pulsátil por las células
somototrópicas de la adenohipófisis. Es un polipéptido de una sola cadena
de 191 aminoácidos, con dos puentes disulfuro, intracatenarios. Como la
mayoría de las hormonas proteicas complejas, la GH es específica de cada
especie. Se ha logrado sintetizar la pGH de origen porcino, bGH de origen
bovino y somatropina humana hGH, cada una actúa de manera específica
en su especie, por las diferencias existentes en su cadena de aminoácidos
y su especificidad en los receptores. La somatropina bovina recombinante
(BSTr), tiene la particularidad de presentar una leucina en la secuencia 127
y una metionina en la secuencia 190, en la porción amino terminal (Etherton
& Bauman ,1998; Sorensen et al., 2002; Villa 2010).
Factor de crecimiento parecido a la insulina tipo I (IGF-1)
Los factores de crecimiento similares a la insulina (IGF) son una familia de
péptidos que funcionan como intermediarios de la mayoría de las acciones
mitógenas y metabólicas de GH. Son compuestos estructuralmente por 70
aminoácidos formados por dos cadenas (A y B) conectados con puentes
de disulfuro y un péptido C. Tienen la capacidad de estimular la síntesis
de ADN y la multiplicación celular en todos los tejidos (Etherton 2004).
8
Eje somatotrópico
El eje somatrópico desempeña tanto en animales como humanos un papel
importante en la regulación de los mecanismos que determinan el
crecimiento y procesos metabólicos. Las hormonas que son parte del eje
somatotrópico son la somatropina y el factor de crecimiento parecido a la
insulina tipo 1 o somatomedina C (IGF-1). Las estructuras glandulares que
componen este sistema somatrópico son: el hipotálamo, la adenohipófisis
y el hígado. El mecanismo regulador, está a cargo de la hormona
liberadora de somatropina (GHRH) y la somatostina (SS) ejerciendo una
acción inhibidora, ambas de origen hipotalámico (Berne & Levy, 1999; Villa
2010). El hipotálamo determina uno de los controles principales sobre la
estimulación o inhibición de GH. En procesos como el crecimiento, la
gestación y la lactación la estimulación de GH esta incrementada. Los
neurotransmisores ácido gamma amino butírico (GABA), norepinefrina
(NE) y el péptido galanina señalizan al hipotálamo para estimular la
secreción de GHRH, la cual por vía sanguínea va a través del sistema
vascular porta hipotálamo-hipofisario (SPHH), estimulando en los
somatropos de la adenohipófisis la liberación de GH (Giustina & Veldhuis
1998; Muller et al.,1999 ). Este sistema de secreción de GH es inhibido en
condiciones como la inanición, la obesidad, la absorción postprandial, por
medio del sistema simpático-adrenérgico mediado por la secreción de SS.
De igual manera, la dopamina y la hormona liberadora de corticotropina
(CRH), estimulan la liberación de SS en el hipotálamo, impidiendo la
secreción GHRH y por ende la de GH. El IGF-1 y ácidos grasos libres,
realizan una retroalimentación negativa en la liberación de GH en las
células somototrópicas (Fathy & Veldhuis, 2003). La somatotropina puede
actuar directamente en las células blanco que contienen sus receptores
para cumplir su función, mientras que otros efectos son ejecutados a través
de IGF-1. La GH ejerce su acción al activar los receptores de superficie
(GHR) que están presentes principalmente en hígado, tejido adiposo,
muscular y gónadas.
9
En estos tejidos estimula la secreción de IGF-1, que opera de manera
endocrina en el resto de los tejidos, para realizar los efectos señalizados
por GH (Louveau et al., 2000; Spiegel et al., 2004). Cuando el hígado es
estimulado por GH libera y sintetiza IGF-1, al mismo tiempo, se produce la
estimulación para secretar dos tipos de proteínas transportadoras GHPB 1
y 2 para GH e IGFBP 1 a 6 para IGF-1. En el torrente sanguíneo cada
hormona se une a su proteína transportadora (BP) respectivamente, de
esta manera se prolonga la vida media de ambas hormonas. Es importante
destacar que el hígado sintetiza y libera la mayor parte de IGF-1 que se
encuentra en la sangre, por lo que es considerado un órgano clave en el
eje somatotrópico (Duan 2005).
La relación GH-IGF-1 es importante para coordinar la proliferación y
crecimiento longitudinal de las células y tejidos, además, intervienen
regulando los procesos metabólicos de carbohidratos, lípidos y proteínas.
En el metabolismo de carbohidratos, se promueve el incremento de la
glucemia, estimulando en el hígado la síntesis de glucosa
(gluconeogénesis), se incrementa la glucogenolísis y se inhibe la utilización
de glucosa. En el metabolismo de los lípidos, se estimula la lipolisis
promoviendo la utilización de la grasa de reserva (Etherton 2000). En el
metabolismo de las proteínas, de forma general se incrementa el
anabolismo proteico en la mayoría de los tejidos. Para lograr este efecto la
GH incrementa el ingreso de aminoácidos a las células, para acelerar la
tasa de síntesis de las proteínas (Villa 2010).
Somatotropina y el factor de crecimiento similar a la insulina tipo 1
en la reproducción
Somatotropina y el factor de crecimiento similar a la insulina tipo I afectan
el crecimiento de los animales y la lactación, sin embargo, también están
presentes en otros procesos fisiológicos como es el caso de la reproducción
(Lucy 2000; Hull & Harvey 2001). Estos mecanismos reproductivos son
regulados mediante la unión a sus receptores, que se expresan en varias
10
estructuras del tracto reproductivo y también en el embrión y feto (Cuadro1)
(Velásquez et al., 2009).
El efecto estimulador de la somatotropina mediante la proliferación celular
se ve reflejado en el número y tamaño de folículos, los cuales, entre otros
factores, van a depender de las concentraciones de IGF-1 en el líquido
folicular, es decir, que este factor hormonal está implicado con el desarrollo
folicular normal, coincidiendo con un buen estado nutricional del animal
(Hull & Harvey 2001; Van Den Hurt & Zhao 2005). Además, favorece la
maduración del citoplasma y núcleo del ovocito, mediante la expansión del
cúmulos (Idzayar etal., 1998), esto se ha concluido ya que se ha encontrado
ARNm para los receptores de somatotropina en las células del cúmulos,
granulosa y ovocito (Kolle et al., 1998).
Otro mecanismo importante, es la sinergia existente entre IGF-1 y las
gonadotropinas, ya que IGF-1 tiene la capacidad de aumentar el número
de receptores para las gonadotropinas y a su vez estas hormonas
aumentan los receptores para IGF-1 (Spicer et al., 1995). El resultado de
este sinergismo, es estimular la síntesis de IGF-1 en las células de la
granulosa del ovocito y por otro lado favorecer la liberación de LH (Lucy
2000). Por lo tanto, las concentraciones adecuadas de IGF-1 y GH son
importantes para favorecer la ovulación y la calidad de los folículos y de
los ovocitos (Hashizume et al., 2002; Mendoza et al., 1999).
La identificación de los receptores para somatotropina en el útero
(endometrio y miometrio) (Lucy et al., 1998) y receptores de IGF-1 en el
oviducto (Pushpakumara et al., 2002), evidencian la presencia y actividad
de estas hormonas en las diferentes etapas del desarrollo embrionario y
fetal (Palma et al., 1997). Los embriones expresan receptores para
somatotropina a partir del día 2 de su desarrollo, la concentración va
aumentando conforme avanza el desarrollo del embrión, promoviendo la
formación del blastocisto (Kolle et al., 2001). Este desarrollo temprano del
embrión está dado por la utilización eficaz de nutrientes, que depende del
complejo somatotropina-receptor (GHR), el cual es capaz de modular el
11
metabolismo de carbohidratos y lípidos a través de la captación de
glucógeno y transporte de lípidos durante el desarrollo preimplantación del
embrión bovino (Kolle et al., 2004).
El cultivo de embriones in vitro tratados con somatropina aumento las
células en la masa celular interna (MCI) y trofoectodermo de los
blastocistos (Kolle et al., 2002). IGF-1 es considerado como un factor de
supervivencia embrionaria promoviendo la proliferación celular, esta
función permite mitigar el efecto de apoptosis para que el embrión continúe
con su desarrollo (Jousan & Hansen, 2004; Jousan & Hansen, 2007).
Algunas investigaciones han determinado que la somatotropina interactúa
con el interferón tau, sobre la inhibición en la producción de la
prostaglandina F2 alfa del endometrio, ya que IGF-1 opera regulando la
expresión de la fosfolipasa A y la cicloxigenasa 2, enzimas que intervienen
en la síntesis de prostaglandinas. Esta sinergia es indispensable para
lograr un reconocimiento materno exitoso (Bandinga et al., 2002). Por otra
parte Tosca et al. (2008) demostró que el tratamiento con IGF-1 sobre las
células de la granulosa in vitro aumento la secreción de progesterona.
GH e IGF-1 estimulan la formación de blastocistos (Moreira et al., 2002b)
, IGF-1 es producido por el endometrio en la gestación temprana y sus
receptores se encuentran en el trofoblasto (McCarty et al., 2012), este
factor potencia el desarrollo de las células del trofoblasto, por medio de la
proliferación celular, favoreciendo la expansión (aumento del diámetro del
embrión el cual ocasiona adelgazamiento de la zona pelúcida (Peippo et
al., 2011)) del blastocisto (Xie et al., 2015).
12
Cuadro 1. Identificación de los receptores para GH e IGF-1 en el tracto reproductivo y en el producto de la concepción del bovino
Estructura Receptores IGF-1
Receptores GH
Referencia IGF-1/GH
Ovario
Folículo Lucy et al., 1998
Oocito Yassen et al., 2001/ Kolle 1998
Células del cúmulos
Nuttinck et al., 2004/Kolle 1998
Células de la granulosa
Masters et al., 2003/Kolle 1998
Células de la teca
Schams et al., 2002
Cuerpo lúteo Woad et al., 2000
Estroma Persk et al., 1999
Oviducto
Infundíbulo Pushpakumara et al., 2002
Ámpula Pushpakumara et al .,2002
Istmo Fenwick et al., 2008
Cuerno uterino
Lucy et al., 1998
Epitelio luminal Robinson et al., 2000
Glándulas superficiales
Robinson et al., 2000
Glándulas internas
Robinson et al., 2000
Miometrio Robinson et al., 2000
Útero
Endometrio Lucy et al., 1998
Miometrio Lucy et al., 1998
Placenta Spencer et al., 2007
Conceptus
Cigoto Yassen et al., 2001
Embriones a partir de 2 células a 16 células
Yassen et al., 2001 / Kolle 2001
Mórula Yassen et al., 2001
Blastocisto Sawai et al., 2007
Embrión E. Sawai et al., 2007
Fuente Velásquez et al. (2009). Modificado por el autor
13
Fertilidad en vacas lecheras de alto rendimiento
Se puede definir fertilidad como la capacidad de la vaca para concebir,
mantener la gestación y producir una descendencia (Pryce et al., 2004). El
porcentaje de concepción es un parámetro, que ofrece una visión global de
la fertilidad del hato, es la proporción de vacas gestantes del total
inseminado, durante un intervalo de tiempo definido. Está determinado por
la tasa de fertilización y por la sobrevivencia embrionaria (Hernández 2012
; Hernández & Gutiérrez, 2013). Estudios realizados en vacas con altos
rendimientos lecheros han reportado tasas de concepción desde el 25 al
40%, mientras que las vaconas tienen entre 60 a 70% de concepción
(Royal et al., 2000; Lucy 2001). Los porcentajes de concepción más bajos,
han sido reportados durante el primer servicio aproximadamente con un
35%, estos resultados son similares en vacas repetidoras (Roura et al.,
2000). Partiendo de una tasa de fertilización del 90% y un porcentaje de
parición del 40%, se determinaría que el 50% de concepciones se pierden
en algún momento, siendo el periodo embrionario la etapa en donde más
perdidas de gestación se han reportado (Diskin et al., 2006). Según
Humblot (2001) las pérdidas embrionarias tempranas de 0 a 28 días
representan un porcentaje del 32%, mientras que las pérdidas
embrionarias tardías de 28 a 42 días comprenden el 15 %. Las perdidas
fetales 42 días hasta el día del parto corresponden aproximadamente el
10% (Santos et al., 2004)
Factores que afectan la fertilidad
La fertilidad de la vaca va estar condicionada por varios factores de manejo,
medio ambiente y propios del animal. Las infecciones específicas y no
específicas del tracto reproductivo, el balance energético, la producción, la
calidad y transporte de los ovocitos, la expresión y detección del celo, el
desarrollo embrionario temprano y alteraciones en etapa fetal inicial son
algunos de los factores más representativos (Ball & Peter, 2004).
14
a) Balance energético negativo
Después del parto la producción de leche se incrementa rápidamente, en
este momento los requerimientos de nutrientes para el mantenimiento y la
lactación, superan la capacidad de consumo (Lucy 2007). Este déficit de
energía va desencadenar un balance energético negativo (BEN), que se
presenta unos pocos días antes del parto y dura de 10 a 12 semanas (Butler
2003; Butler 2005).
La lactación temprana en la vaca se caracteriza por un claro estado
homeorrético con la activación de varios mecanismos endocrinológicos. Es
claro la manifestación de la resistencia de la insulina en el tejido adiposo y
el en músculo, que favorece el redireccionamiento de altas concentraciones
de glucosa específicamente a la glándula mamaria (Lucy 2007), además
promueve la movilización de los ácidos grasos no esterificados (AGNES)
y aminoácidos (Leroy et al., 2008). Los ácidos grasos no esterificados
(AGNES) son metabolizados a cuerpos cetónicos en el hígado
principalmente a Beta hidroxibutirato (BHB) (Wathes et al., 2007), estos
metabolitos son utilizados como fuentes alternativas de energía en varios
tejidos del cuerpo. El uso de estas rutas metabólicas causan pérdida de
peso, que se hace visible en la condición corporal de la vaca en lactación
temprana (Hoedemaker et al., 2009). Este periodo se caracteriza por la
disminución de receptores para GH en el hígado (Kobayashi et al., 1999),
produciendo un desacoplamiento en el eje GH-IGF-1, causando niveles
altos de GH, y bajas concentraciones de IGF-1 (Butler et al., 2003), esta
situación favorece la gluconeogénesis y la lipolisis. Los bajos niveles de
IGF-1 e insulina también son atribuidos por la disminución en la ingesta de
materia seca (Butler 2006). Estas condiciones dan como resultado un perfil
metabólico, con altos niveles de AGNES, BHB, GH y urea, y bajos niveles
de glucosa, insulina e IGF-1 en el plasma sanguíneo. Cuando la vaca
supera el balance energético negativo (BEN) sus metabolitos se equilibran,
sin embargo, los niveles de IGF-1 se mantienen bajos hasta los 95 días
postparto (Taylor et al., 2004; Maíllo 2014). Las vacas de alto rendimiento
lechero tienen un BEN más severo, este mayor estrés metabólico es uno
15
de los principales factores que desencadenan un rendimiento reproductivo
bajo (Horan et al., 2005) sobretodo en las vacas que son inseminadas
dentro de los 70 y 100 días post parto (Diskin & Moris, 2008).
La calidad del líquido folicular va a depender de la concentración de
nutrientes que contenga el plasma sanguíneo, por lo tanto, los efectos del
BEN van alterar la calidad de ovocito (Leroy et al., 2004). Existe evidencia
de que bajos niveles de glucosa, insulina e IGF-1 en líquido folicular,
afectan el desarrollo folicular y la maduración del ovocito, comprometiendo
la calidad del embrión y su viabilidad (Leroy et al., 2008; Van Coeck et al.,
2011). Las vacas con bajas con concentraciones de IGF-1 antes y después
del parto tiene menos probabilidad de concebir (Taylor et al., 2004).
b) Enfermedades post parto
Los desbalances metabólicos producidos por el BEN contribuyen al
desarrollo de enfermedades que pueden afectar la producción, la
reproducción y estado de salud de la vaca (Emery et al., 1992). Los
trastornos en el metabolismo energético dan lugar a la incidencia de
cetosis, hígado graso y acidosis metabólica, los trastornos en el
metabolismo de los minerales causan hipocalcemia subclínica y clínica y
edema de la ubre, mientras que la disminución de la inmunidad predispone
a retención placentaria, metritis y mastitis (Block 2010). La aparición de
problemas de salud durante el periodo de transición, es uno de los
principales factores, que complican el rendimiento reproductivo de las
vacas (Ferguson 2010).
c) Disfunciones ováricas
Las patologías puerperales son los principales factores de riesgo que
desencadenan disfunciones ováricas y retardan la involución uterina
(Opsomer et al., 2000). Las infecciones uterinas reducen la producción de
la hormona liberadora de las gonadotropinas (GNRH) (Dobson et al.,
2009), las altas concentraciones de lipopolisacáridos producto de la
infecciones uterinas ligadas a Eschericha coli, bajan las concentraciones
16
de estrógenos (E2), estas deficiencias deprimen el crecimiento folicular y
reducen las oleadas de hormona luteinizante (LH) por ende la ovulación
también se verá afectada (Sheldon et al., 2002). Además estas
condiciones producen retraso en la ciclidad ovárica, ovulaciones sin
expresión de celo, formación de quistes ováricos y aumentan los días
abiertos de la vaca (Fourichon et al., 2000; Dobson et al., 2009)
Pérdidas embrionarias
Los efectos directos de la mortalidad embrionaria se ven reflejados en las
bajas tasas de concepción, suceso que se registra principalmente en las
vacas de alta producción (Diskin & Morris, 2008). La sobrevivencia del
embrión va a depender de la calidad de ovocitos, calidad de embrión y de
un microambiente optimo del útero para apoyar al desarrollo embrionario
(Maillo 2014).
Hay evidencia que respalda que los folículos expuestos a condiciones
adversas como el BEN durante las etapas iniciales de crecimiento tendrían
un desarrollo deteriorado lo que resultaría en la producción de ovocitos de
mala calidad, debido a que el fluido folicular refleja el perfil metabólico del
plasma sanguíneo (Leroy et al., 2005). El desarrollo del ovocito está ligado
al crecimiento y salud del folículo en desarrollo (Lequarré et al., 2005), las
bajas concentraciones de insulina, IGF-1 y probablemente de leptina
disminuyen la sensibilidad del ovario a las gonadotropinas (Gong 2002). La
maduración de ovocitos en presencia de altas concentraciones de AGNES
y beta hidroxibutirato, alteran su calidad y desarrollo (Van Hort et al.,
2011). Lonergan et al. (2001) demostraron que la calidad del ovocito es
decisiva para un adecuado y normal desarrollo embrionario. Wiltbank et al.
(2001) comprobaron que los ovocitos de vacas en lactación tienen un
desarrollo significativamente menor, en comparación con vacas secas, ya
que la cantidad de ovocitos que llegaron a blastocisto fue menor.
La calidad de embriones producidos es importante para asegurar su
viabilidad y desarrollo posterior. Las vacas lecheras producen embriones
de baja calidad en comparación con vacas secas y vaconas, en cuanto a
17
su morfología, etapa de desarrollo y número de células (Leroy et al., 2005).
Los embriones de las vacas en lactación tienen la tendencia microscópica
de ser más obscuros, esto es por una excesiva acumulación intracelular de
lípidos, característica que compromete la calidad del embrión (Abe et al.,
2002). Leroy et al. (2005) identificaron la presencia de ácido esteárico,
palmítico y linoleico en los embriones de vacas en lactación y determinaron
que la presencia de ácido palmítico y esteárico altera el metabolismo y
tienen una mayor incidencia de apoptosis en comparación con sus
controles que no estuvieron bajo la influencia de estos ácidos grasos
(Adamiak et al., 2004). Sartori et al. (2002) encontraron que apenas se
puede recuperar un 33% de embriones de buena calidad en vacas en
lactación mientras que en vaconas este porcentaje subió al 72%. Esta
investigación se la realizó con embriones recuperados al día 6 a 7 pos
inseminación.
Las primeras etapas del desarrollo embrionario suceden en el oviducto
aproximadamente durante 4 días alcanzando de 8 a 16 células. Al mismo
tiempo que se da la activación del genoma embrionario, el oviducto está
encargado de capacitar al espermatozoide para fertilizar al ovocito y
apoyar las primeras etapas del desarrollo embrionario temprano. El
oviducto está compuesto de tejido ciliar y células secretoras que se
encargan de secretar un fluido rico en derivados del plasma y proteínas
específicas, que se encargan de asegurar un ambiente y nutrición óptima
(Kolle et al., 2009). El plasma sanguíneo en BEN puede comprometer la
capacidad del útero para ofrecer un ambiente adecuado en el desarrollo
embrionario (Leroy et al., 2008). Aproximadamente el 50% de los
embriones en desarrollo se degeneran antes de llegar a blastocisto entre
los días 6 a 7 (Cerri et al., 2009), por ello el tracto reproductivo oviducto-
útero debe prestar un ambiente apropiado para el desarrollo y
sobrevivencia del embrión (Diskin & Morris 2008).
Una característica de una vaca altamente lechera, es el elevado consumo
de materia seca. A medida que aumenta la demanda de nutrientes, para
la producción de leche, eleva el flujo sanguíneo hepático (Sangsritavong et
18
al., 2002), en consecuencia aumenta la tasa metabólica de hormonas
esteroideas, tanto de estrógenos como progesterona (Figura 1), con el fin
de satisfacer dichos requerimientos, la disminución en la concentración de
dichas hormonas, puede alterar la fisiología reproductiva del animal
(Wiltbank et al., 2006; Santos et al., 2008). Se ha demostrado que las
bajas concentraciones de estrógenos dificultan una correcta maduración
nuclear del ovocito (Beker et al., 2002) mientras que las concentraciones
adecuadas de progesterona (P4) son importantes para la viabilidad del
ovulo en el útero, ya que modulan las secreciones endometriales,
controlando las secreción de proteínas uterinas y factores de crecimiento
esenciales para el desarrollo embrionario temprano, además, aseguran
una receptividad uterina correcta (McEvoy et al ., 1995; Sreenan et al.,
2001)
Figura 1. Metabolismo hepático de hormonas esteroideas
Fuente Sangsritavong et al. (2002)
19
CAPÍTULO III
MATERIALES Y METODOLOGIA
MATERIALES
Semovientes
- 100 vacas holstein mestizas
Hormonas
- 10 frascos de cloprostenol sódico 250 µg/ ml, 20 ml. Estrumate ®
MSD
- 150 dosis de 325 mg de somatotropina bovina recombinante.
Lactotropina® Elanco
Materiales para identificación y detección de celo
- Crayones de tintura oleosa
- Parches detectores de celo.
Equipo de inseminación artificial I.A
- Pistola universal de inseminación artificial (I.A.) para bovinos. Quick
lock clasic ® Minitube
- Pajuelas 100 unidades
- Termo para descongelar pajuelas
- Chemis 2 rollos de 80 unidades
- Vainas universales de I.A 2 bolsas de 50 unidades
- Corta pajuelas
- Guantes ginecológicos 1 caja / 100 unidades
- Termómetro de tarjeta
20
Equipo para el diagnóstico de gestación
- Ecógrafo con sonda lineal de 5,5 Mhz
Insumos y varios
- Jeringas de 3ml desechables 150 unidades
- Agujas subcutáneas desechables 18Gx 1/2'', 1 caja/ 100 unidades
- Agujas intramusculares desechables 18Gx1 1/4'', 2 cajas/ 100
unidades
- Torundas de algodón sumergidas en alcohol
- Libreta de apuntes
- Cámara fotográfica Sony
- Papel desechable
MÉTODOLOGÍA
Ubicación del estudio
El presente estudio se realizó en dos haciendas ubicadas en la región
Sierra ecuatoriana en la Provincia de Pichincha, ubicadas en dos zonas
altitudinales entre 2800 y 3100 metros sobre el nivel del mar. Las vacas
de cada hacienda son manejadas al pastoreo con una dieta suplementaria.
Cuadro 2. Ubicación geográfica
Hacienda 1-Puerta de Oro 2-Unambiro
Provincia Pichincha Pichincha
Cantón Rumiñahui Mejia
Parroquia Curipungo Chaupi
Longitud 0°23'22.89'' S 0°35'50.44'' S
Latitud 78°26'01.91'' O 78°36'50.73'' O
Altura 2800msnm 3100 msnm
Temperatura 17 °C Promedio 14 °C Promedio
Fuente Google Eart (2017)
21
Descripción de las Haciendas
Hacienda Puerta de Oro: cuenta con 20 hectáreas, cuyos pastizales
contienen kikuyo aproximadamente con 16 % de materia seca,
pastoreados con cerca eléctrica. Se ordeña 110 vacas, dos veces al día,
con un promedio de 27 litros por vaca, reciben 4 kg de concentrado
(Pradera ® Pronaca) ,6 kg de silo de maíz, 3 kg de maíz, 190 gr sal mineral.
Las vacas consumen aproximadamente 16.64 kg de materia seca vaca/
día. El tiempo de rotación de potreros es de 28 días. Esta explotación tiene
una altitud 2800 msnm, con 17 °C de temperatura promedio.
Hacienda Unambiro: tiene 40 hectáreas, sus praderas tienen ray grass
perenne asociadas con trébol blanco, se estima que tienen 21% de
materia seca y el pastoreo se lo realiza con cerca eléctrica. Se ordeña
120 vacas dos veces al día, con un promedio 29 litros por vaca. Reciben
4 kg de concentrado (Pronaca ® praderas), 2 kg de palmiste, 3 kg de pan,
6 kg de silo de maíz y 200 gr de sal mineral. El consumo total de materia
seca es de aproximadamente 18.1 kg vaca /día., el tiempo de rotación de
potreros es de 28 días. Esta propiedad tiene una altitud 3100 msnm, con
14 °C de temperatura promedio.
Unidades de muestreo
Se determinó las unidades de muestreo, utilizando la fórmula para estimar
una proporción en poblaciones finitas. Nivel de confianza (Z) 95%, 5%
proporción esperada (p), precisión (d) 3% (Aguilar 2005).
22
Cuadro 3. Unidades de muestreo
Hacienda 1-Puerta de oro 2-Unambiro
Población de estudio
(N)
110 120
Unidades de muestreo
(n)
48.77 50.62
Número de animales
en estudio
50 50
Muestreo aleatorio estratificado
En cada hacienda se seleccionó 50 animales, 25 animales grupo control,
25 animales grupo experimental, la aplicación de la bST fue realizada al
azar.
Cuadro 4. Muestreo aleatorio estratificado
Hacienda Puerta de oro Unambiro
Grupo bST 1 - 25 animales 2- 25 animales
Grupo control 1 - 25 animales 2- 25 animales
Criterios de selección de animales para el estudio
Vacas holstein mestizas, altamente productoras (con un mínimo de
producción de 24 litros), primer servicio, multíparas, manejadas al pastoreo,
con 100 días en leche como máximo, condición corporal entre 2.50 a 3.00
(escala del 1 al 5). Vacas que no hayan manifestado problemas clínicos
post parto tales como: hipocalcemia, cetosis, retención de placentaria,
metritis y sin problemas podales.
23
Metodología especifica
Tipo de estudio
Experimental de campo
Grupo experimental
- Selección de vacas post parto: los animales debían presentarse
con un buen estado clínico aparente. Al chequeo ginecológico, la
exploración ecográfica de útero y de ovarios se sujetó a los criterios
de selección ya mencionados. Estas vacas fueron marcadas con
una “E “para identificar el grupo experimental.
- Sincronización: se aplicó, 2ml (500µg) de cloprostenol vía
intramuscular (en presencia de cuerpo lúteo), y colocación del
parche para detectar el celo.
- Detección de celos: se observó la manifestación de signos de celo
2 veces por día, las vacas despintadas el parche con una
coloración roja fueron consideradas para ser inseminadas.
- Inseminación artificial: se administró bST 325 mg (día 0), vía
subcutánea en la fosa isquiática en el momento de la inseminación
artificial, con previa limpieza de la zona con torundas de algodón
sumergidas en alcohol.
- Aplicación segunda dosis bST 325 mg (día 14), vía subcutánea
en la fosa isquiática.
- Aplicación tercera dosis bST 325 mg (día 28), vía subcutánea en
la fosa isquiática solo en el caso de las vacas que no retornaron celo
alrededor del día 21.
- Diagnóstico de gestación 30 días: ecografía transrectal, en el
caso de vacas preñadas se realizó le medición del diámetro
embrionario longitudinal en milímetros.
- Reconfirmación de gestación 60 días: ecografía transrectal, para
estimar pérdidas embrionarias tardías.
24
Grupo Control
- Selección de vacas post parto: los animales debían presentarse
con un buen estado clínico aparente. Al chequeo ginecológico, la
exploración ecográfica de útero y de ovarios se sujetó a los criterios
de selección ya mencionados. Estas vacas fueron marcadas con
una “C” para identificación.
- Sincronización de celos: aplicación, 2 ml (500µg) de cloprostenol
vía intramuscular (en presencia de cuerpo lúteo), y colocación del
parche para detectar celo.
- Detección de celos: se observó la manifestación de signos de celo
2 veces por día, las vacas despintadas el parche en una coloración
totalmente roja fueron consideradas para I.A
- Inseminación artificial: este grupo no recibió la administración de
somatotropina.
- Diagnóstico de gestación 30 días: ecografía transrectal, en el
caso de vacas preñadas se realizó la medición del diámetro
embrionario en milímetros.
- Reconfirmación de preñez 60 días de gestación, por ecografía
transrectal, para estimar pérdidas embrionarias tardías.
Factores de estudio
Esta investigación evaluó las dosis bajas de somatotropina bovina
recombinante sobre la fertilidad de las vacas a través de la medición de
las siguientes variables
- Porcentaje de concepción a los 30 días de gestación: número de
vacas preñadas divido para el número de vacas en estudio (Ribeiro
et al., 2014)
- Diámetro embrionario longitudinal 30 días de gestación,
desarrollo embrionario.
25
- Porcentaje de concepción a los 60 días de gestación: número
de vacas preñadas divido para el número de vacas en estudio
(Ribeiro et al., 2014).
- Tasa de pérdidas de gestación en el periodo de 30 y 60 días de
gestación: número de vacas preñadas al día 30 menos el número
de vacas preñadas al día 60 divido para en número de vacas
preñadas del día 30 (Ribeiro et al., 2014)
Análisis estadístico
Las variables, porcentaje de concepción a los 30 y 60 días de gestación
y pérdidas de gestación fueron examinadas con Chi cuadrado para
determinar si existe diferencia estadística entre grupos debido a la
aplicación de bST, adicionalmente se utilizó razón de probabilidades
/ odds ratio (RM-OR), es una medida de asociación que determina si
hay relación entre dos variables (Jaramillo & Martínez 2010), es decir
aplicación de bST y la preñez. Mientras que la variable diámetro
embrionario al ser de tipo cuantitativa se realizó inferencia estadística
tomando en cuenta el promedio, y desviación estándar para ser
comparada entre grupos utilizando T de student. Los programas
estadísticos utilizados fueron Excel y SPSS.
26
CAPÍTULO IV
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las vacas lecheras postparto en lactación temprana que reciben su primera
inseminación artificial, tienen bajas concentraciones de IGF-1 (Lucy, 2001).
El perfil metabólico de las vacas lecheras muestra que las bajas
concentraciones de IGF-1 no logran establecerse hasta los 90 días
postparto (Maillo, 2014), esta condición podría limitar el desarrollo de los
embriones. Las vacas multíparas con bajas concentraciones de IGF-1
antes y después del parto, tienen menos probabilidad de lograr la
concepción, por el contrario, las vacas multíparas con mayores
concentraciones de IGF-1 son más propensas a concebir al primer servicio
(Taylor et al., 2004). La aplicación de 325 mg de bST evidencia
incrementos de GH e IGF-1 en la circulación sanguínea que se mantiene
por un periodo de 14 días. Estos incrementos de GH e IGF-1 pueden
compensar las concentraciones inadecuadas de IGF-1 que presentan
las vacas lecheras de alto rendimiento (Ribeiro et al., 2014).
Porcentaje de concepción a los 30 días de gestación
En la hacienda 1, el grupo experimental bST alcanzo el 56% de concepción
frente a un 36% en el grupo control, a pesar de existir un incremento
porcentual no hay diferencia estadística entre grupos (p˃0,05). En la
hacienda 2 también se evidenció un incremento del porcentaje de
concepción, llegando al 48% en el grupo bST frente a un 32% del grupo
control, sin embargo, no se encontró diferencia entre ambos grupos
(p˃0,05). Al analizar en conjunto los datos de las dos haciendas, se obtuvo
un incremento en el porcentaje de concepción en el grupo experimental
bST con el 52% vs 34% en el grupo control (p=0,07).
27
Cuadro 5. Análisis individual y general de los porcentajes de concepción a los 30 días de gestación, resultados de Ji cuadrado y Odds ratio
Estos resultados se confirman con los obtenidos en el análisis de
asociación, en el cuál se evidencio un OR de 2,26, 1,96 y 2,10
respectivamente para la hacienda 1, 2 y el global. Esto nos indica que las
vacas que recibieron tres dosis de 325 mg de bST cada 14 días tienen más
probabilidades de lograr la concepción que aquellas que no recibieron
ningún tratamiento.
Figura 2. Porcentaje de concepción global a los 30 días
Grupo bST: aplicación de 3 dosis de 325 mg de bST día 0, 14 y 28.
Grupo Control: sin aplicación de bST
Diagnóstico de
gestación 30 días
Grupo
Experimental (bST)
Grupo
Control
Valor p OR
Hacienda1 56% (14/25) 36% (9/25) 0,16 2,26
Hacienda2 48% (12/25) 32% (8/25) 0,25 1,96
Tasa general 52% (26/50) 34%(17/50) 0,07 2,10
28
Existen varias investigaciones en las que se ha usado bST con el objetivo
de mejorar la fertilidad en vacas lecheras. Los resultados encontrados
pueden ser contradictorios y varían entre estudios. Generalmente las
modificaciones que se han hecho, han sido en base al momento de la
aplicación, la dosis y el intervalo de la administración de la bST.
El 52% de concepción obtenido en este estudio del grupo bST con 325
mg es contrastable con algunos resultados obtenidos en investigaciones
en las que se han usado dosis de 500 mg. En inseminaciones a tiempo fijo
(IATF), los porcentajes de concepción usando bST van desde el 46,9%
hasta el 55,6% superando a sus grupos controles de 29,6% y 36,9%
respectivamente (Moreira et al., 2000; Moreira et al., 2001). Mientras que
el porcentaje de concepción por inseminación a celo natural registrado por
Santos et al. (2004a) fue del 52,9% con bST sobre el 45,6 % del grupo
control.
Castañeda et al. (2009) no encontró diferencia en los porcentajes de
concepción al usar una sola dosis de bST al momento de inseminación, los
resultados obtenidos fueron del 36,2% en el grupo bST vs 34,8% en el
grupo control, igualmente, Gallmeier (2013) reporto porcentajes de
concepción del 30% con bST frente a 30% sin bST. Sin embargo, en una
investigación liderada por Starbuck et al. (2005), al usar una sola dosis en
vacas sobre los 100 días en leche consiguió elevar la concepción al 60,4
% con un grupo control del 40,3%. En vacas repetidoras los resultados
igualmente han sido favorables, Vargas et al. (2010) obtuvo 41,8% en
vacas a las que en el momento de la inseminación se les administró 500
mg de bST frente a un 25,4% en el grupo control.
Ribeiro et al. (2014) utilizó dosis de 325 mg de bST en dos grupos. Una
sola dosis al día de inseminación resultó en 37,5% de concepción, mientras
que dos dosis, la primera al día de inseminación y la segunda al día 14,
evidenció mejores resultados con un 43,1% de concepción, el grupo
control obtuvo una tasa del 35,6%.
29
Los resultados que se obtuvieron en el porcentaje de concepción en los
grupos controles de 36%, 32% y 34% respectivamente para la hacienda 1,
2 y en el global, están dentro de los parámetros que indica la literatura con
un 35% de concepción a primer servicio en vacas con alto rendimiento
lechero (Roura et al., 2000; Castañeda et al., 2009).
Diámetro embrionario longitudinal a los 30 días de gestación
Se evidenció un mejoramiento en el desarrollo embrionario en el grupo
experimental bST de ambas haciendas. El promedio global del diámetro
embrionario longitudinal fue de 17,7 mm frente a 15,3 mm del grupo
control, resultando estadísticamente diferente (p˂0,05).
Cuadro 6. Promedio del diámetro embrionario longitudinal por hacienda y promedio global (análisis t de student)
Los valores están expresados en promedio y desviación estándar (mm)
El Grupo experimental bST promueve un desarrollo embrionario
longitudinal superior 17,7 ± 0,60 mm al grupo control 15,3 ± 0,44 mm. Al
comparar gráficamente las medias, estas no se sobreponen entre si
mostrando distancia entre las mismas (diferencia numérica 2,4 mm) lo que
determina una diferencia estadística entre grupos (p˂0,05).
Grupo Experimental
(bST) mm
Grupo Control
mm
Valor p
Hacienda1 17,7 ± 0,67 15,1 ± 0,29 0,001
Hacienda 2 17,8 ± 0,53 15,4 ± 0,54 0,001
Promedio global 17,7 ± 0,60 15,3 ± 0,44 0,001
30
Figura 3. Diámetro embrionario longitudinal, resultado global comparación grupo experimental bST vs grupo control
Estas respuestas de bST sobre el desarrollo embrionario han sido
reportadas en algunas investigaciones. Bilby et al. (2006), encontró que
los embriones del grupo bST median 45 cm vs 34 cm del grupo control,
esto fue registrado a los 17 días de gestación, las mediciones se realizaron
in vivo sobre la longitud del conceptus, para ello se sacrificó a las vacas
que formaron parte de esta investigación. Estos resultados se obtuvieron
con la aplicación de dos dosis de 500 mg de bST. Mientras que Ribeiro
et al. (2014) al usar dos dosis de bST de 325 mg también encontró una
respuesta favorable sobre el diámetro embrionario longitudinal. En el
grupo bST obtuvo 13,9 mm vs 12,5 mm del grupo control a los 30 días de
gestación. Estos estudios respaldan los datos obtenidos en esta
investigación.
La administración de bST establece un ambiente uterino que promueve el
crecimiento y el desarrollo antes de la implantación (Castañeda et al., 2009;
Ribeiro et al., 2014). Está documentado que los embriones de vacas que
reciben bST, alcanzan un desarrollo superior en etapas tempranas (día 17
31
de gestación). Bilby et al. (2006) observó una tendencia al aumento de la
longitud del conceptus y las concentraciones de interferón tau (INF t) en el
fluido uterino a 9,4 ug vs 5,3 ug en el grupo control. Esto se debe a las
altas concentraciones de IGF-1 que se logran después de administrar bST,
lo cual a su vez, se correlacionan con secreciones superiores de interferón
tau en el fluido uterino (Ribeiro et al., 2016).
Los embriones bien desarrollados son más eficientes para secretar INF t
y por lo tanto, tienen mayor probabilidad de sobrevivir y mantenerse en el
tiempo (Mann & Lamming 2001). El INF t es un agente antiluteolítico
secretado por las células del trofoblasto, que confiere el reconocimiento
materno de la gestación (RMG). Su secreción es estimulada a medida que
avanza el desarrollo embrionario (Spencer et al., 2004). El RMG comprende
el periodo desde el día 16 a 19 de gestación (Bilby et al., 2006), es un
evento fisiológico importante y critico a la vez, ya que se estima que el 40%
de embriones se pierden entre el día 8 y 17 de gestación (Thatcher et al.,
2006). El hecho de que la bST promueve el desarrollo del embrión
contribuye al número de vacas que establecen la gestación.
Tasa de concepción a los 60 días de gestación
Las tasas de concepción de los grupos de bST lograron mantenerse altos
en relación a sus controles. En la hacienda 1 el grupo experimental bST
evidenció un mejor porcentaje de concepción al día 60 con un 52% vs 28%
del grupo control (p=0.08). En la hacienda 2 a pesar que el grupo
experimental bST también mantuvo una tasa de concepción alta con el
44% vs 28% del grupo control, estos valores no establecieron una
diferencia estadística (p˃0.05). Al realizar el análisis global de todos los
datos obtenidos de las vacas que reconfirmaron preñez, el grupo
experimental bST tiene una tasa global de concepción del 48% vs 28% del
grupo control, evidenciando un significativo incremento en la tasa de
concepción al día 60 (p ˂ 0.05).
32
Cuadro 7. Análisis individual y general de la reconfirmación de gestación a los 60 días, resultados de Ji cuadrado y Odds ratio
Diagnóstico de
gestación 60 días
Grupo
Experimental (bST)
Grupo
Control
Valor p OR
Hacienda1 52%(13/25) 28%(7/25) 0,08 2,79
Hacienda2 44%(11/25) 28%(7/25) 0,24 2,02
Tasa general 48%(24/50) 28%(14/25) 0,04 2,37
Estos resultados se confirman con los obtenidos en el análisis de
asociación, en el cuál se evidencio un OR de 2,79, 2,02 y 2,37
respectivamente para la hacienda 1, 2 y el global. Esto nos indica que las
vacas que recibieron tres dosis de 325 mg de bST cada 14 días tienen más
probabilidades de mantener la concepción a los 60 días que aquellas que
no recibieron ningún tratamiento.
Figura 4. Porcentaje de concepción global a los 60 días de gestación
Grupo bST: aplicación de 3 dosis de 325 mg de bST día 0, 14 y 28.
Grupo Control: sin aplicación de bST.
33
El 48% obtenido en el presente estudio al día 60 de gestación es similar al
reportado por varias investigaciones. Moreira et al. (2001), consiguió un
porcentaje de concepción al día 74 del 48,6% en el grupo bST (500 mg)
frente a 33,6 % en el grupo control. Santos et al. (2004a) obtuvo 50,4%
sobre 38,8% de concepción al día 45 en el grupo bST y grupo control
respectivamente en inseminaciones a celo natural. El uso de una sola dosis
de (500 mg) no aporta incrementos significativos en la concepción, Bell et
al. (2008) obtuvo 24,4% con bST frente a 17,8% grupo control a los 45 días
de gestación. Sin embargo, al aplicar este mismo protocolo pero en vacas
repetidoras, se evidenció resultados favorables, Medel et al. (2013) logró
46% de concepción en el grupo bST vs 35% en el grupo control a los 45
días de gestación.
Ribeiro et al. (2014) utilizó 325 mg de bST en dos tratamientos, en el
primero aplicó una dosis al día de inseminación, obtuvo 29,2% de
concepción, en el segundo tratamiento administró dos dosis, la primera al
día de inseminación y la segunda dosis 14 días después, mejorando la
tasa de concepción 38,8% en comparación con el grupo control 29,9% de
concepción a los 66 días de gestación.
Como se mencionó anteriormente esta variabilidad de respuestas que ha
dado bST sobre la fertilidad puede deberse a las diferencias que hay sobre
el momento de aplicación (antes o después de la inseminación), las dosis
(500 mg dosis común / 325 mg dosis bajas) y el número de aplicaciones
utilizadas. Uno de los objetivos de esta investigación, y a diferencia de
otros estudios, fue mantener altos los niveles de GH e IGF1 en plasma por
toda la etapa embrionaria (42 días) y así favorecer el mantenimiento de la
gestación.
Porcentaje de mortalidad entre 30 y 60 días de gestación
La pérdida de gestación se manifestó en todos los grupos, en la hacienda
1 el grupo experimental bST tuvo una pérdida del 7,1% frente a 22,2 %
en el grupo control, sin tener diferencia estadística (p˃0,05). La hacienda
2 el grupo experimental bST reporto 8,3% frente a 12,5% del grupo control,
34
no fue estadísticamente diferente (p ˃0,05). A pesar de que la pérdida de
la gestación global en el grupo bST (7,7%) es más baja que el grupo control
(17,6%), esta diferencia no es estadísticamente diferente (p ˃0.05).
Cuadro 8. Porcentaje de mortalidad resultados individuales por hacienda y porcentaje global análisis Ji cuadrado
En general este estudio reporto 7,7% en el grupo experimental bST de
pérdidas embrionarias entre los 30 y 60 días de gestación. Al aplicar 500
mg de bST en IATF las cifras de pérdidas embrionarias van desde 13,6%
al 20,8% sin diferencia alguna de sus controles 13,6% y 22,7% (Moreira
et al., 2000; Moreira et al., 2001). Sin embargo, las perdidas embrionarias
son más bajas utilizando bST en inseminaciones a celo natural, como se
demostró por Santos et al. (2004a) quien obtuvo un 4,2% frente a 15,1%
en el grupo control.
Ribeiro et al. (2014) usando dosis bajas de bST 325 mg, reporto los
siguientes resultados sobre las perdidas embrionarias comprendidas entre
30 y 66 días de gestación. Con una dosis se obtuvo 19,1%, dos dosis
consiguió 8,6% y el grupo control 12,6%, indiscutiblemente la aplicación de
dos dosis obtuvo el porcentaje más bajo de pérdidas embrionarias
Tasa de
mortalidad
Grupo
Experimental (bST)
Grupo
Control
Valor p
Hacienda1 7,1% 22,2% 0,29
Hacienda2 8,3% 12,5% 0,76
Tasa general 7,7% 17,6% 0,32
35
Figura 5. Tasa de mortalidad entre 30 y 60 días de gestación
Grupo bST: aplicación de 3 dosis de 325 mg de bST día 0, 14 y 28.
Grupo Control: sin aplicación de bST.
El grupo control reporto una pérdida de gestación global de 17,6%, entre
30 a 60 días. Estudios realizados respecto a las perdidas embrionarias
tardías en vacas de alta producción han documentado cifras entre el 8 al
17,5% (Humblot et al., 2006), mientras que Santos et al. (2004b) y Grimard
et al. (2006) coinciden que las pérdidas de gestación comprendidas entre
los 30 y 60 días son del 15%.
Las investigaciones ejecutadas en vacas en pastoreo documentan
pérdidas embrionarias tardías, que varían desde el 8% (Diskin et al., 2006)
hasta el 11,6% (Silke et al., 2002). Estas pérdidas conllevan causas
multifactoriales, sin embargo, hay factores que alcanzan mayor incidencia
como la pérdida de condición corporal entre los 30 y 60 días después de
la inseminación (Silke et al., 2002; López & Gatius 2003; Sartori et al.,
2002). También, se postula que las vacas lecheras de alto rendimiento
tienen mayor riesgo de muerte embrionaria a consecuencia de bajas
concentraciones periféricas de progesterona como resultado del aumento
del metabolismo hepático (Sangsritavong et al., 2002; Diskin et al., 2006).
Estas son dos de varias causas no infecciosas que conllevan las pérdidas
de gestación.
36
CAPITULO V
CONCLUSIONES
La aplicación de tres dosis de 325 mg de bST logró mejorar las tasas de
concepción al día 30 en vacas de alta producción manejadas al pastoreo,
los porcentajes de concepción conseguidos es el resultado final de varios
eventos fisiológicos reproductivos como la fertilización, el desarrollo
embrionario temprano, el reconocimiento materno de gestación y por ende
la sobrevivencia del embrión.
Al realizar las mediciones del diámetro embrionario longitudinal en el día
30 de gestación quedo claro que los embriones bajo el tratamiento de BST
son más desarrollados, tal efecto es un factor fundamental para la
sobrevivencia del embrión.
Al efectuar la reconfirmación de preñez al día 60 de gestación las tasas de
concepción fueron más altas para las vacas tratadas con bST, sin embargo,
no podemos asumir que las respuestas alcanzadas fueron debido a que
bST disminuye los porcentajes de mortalidad embrionaria tardía (entre 30
y 60 días de gestación) ya que el análisis estadístico no determinó
diferencia sobre la mortalidad embrionaria entre grupos.
37
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302. http://doi.org/10.1530/jrf.0.1200293
Xie, M., Mccoski, S.R., Johnson, S.E., Rhoads, M.L., & Ealy, A.D. (2015).
Combinatorial effects of epidermal growth factor, fibroblast growth factor 2
and insulin-like growth factor 1 on trophoblast cell proliferation and
embryogenesis in cattle. http: /dx.doi.org/10.1071/RD15226. J. Csiro
Yaseen, M. A., Wrenzycki, C., Herrmann, D., Carnwath, J. W., & Niemann,
H. (2001). Changes in the relative abundance of mRNA transcripts for
insulin-like growth factor (IGF-I and IGF-II) ligands and their receptors (IGF-
IR/IGF-IIR) in preimplantation bovine embryos derived from different in vitro
systems.Reproduction,122(4),601–610
http://doi.org/10.1530/rep.0.1220601
49
ANEXOS
Anexo 1. Imagen satelital Hacienda Puerta de Oro
Fuente Google Earth 2017
Anexo 2. Imagen satelital Hacienda Unambiro
Fuente Google Eart 2017
50
Anexo 3. Estimación del consumo de suplementos en materia seca/ Hcda. Puerta de oro
Suplemento Silo de maíz Maíz Nacional Balanceado
Materia seca %
(MS)
35 86 87
Humedad % 70 14 13
Cenizas % 6.4 1.2 6
Extracto Etéreo%
(EE)
4.5 3.6 4
Proteína Bruta%
(PB)
9.4 7.5 14
Fibra Bruta %
(FB)
55 2.3 15
Consumo dieta
kg/ día
6 3 4
Consumo MS
kg/día
2.1 2.58 3.48
Fuente Tablas FEDNA 2010/ Datos Hcda. Puerta de oro. Elaborado por
el autor
Anexo 4. Estimación del consumo total de kikuyo y suplemento en materia seca Hcda. Puerta de Oro
Pastura Kikuyo
Materia seca % 16%
Consumo materia verde en 50 m
kg/día
53
Consumo MS kg/ día 8.48
Consumo total MS Kikuyo /
suplemento
16.64 kg /MS/ /día vaca
Fuente Tablas FEDNA 2010/ Datos Hcda. Puerta de oro. Elaborado por el
autor
51
Anexo 5. Estimación del consumo de suplementos en materia seca/ Hcda. Unambiro
Suplemento Palmiste Pan Silo avena Balanceado
Materia
seca % (MS)
9.8 92.2 25 87
Humedad % 90 7.8 80 13
Cenizas % 4.5 3.1 12.4 6
Extracto
Etéreo%
(EE)
1.8 4.2 4.8 4
Proteína
Bruta% (PB)
16.3 13 13 14
Fibra Bruta
% (FB)
20.2 3.3 33.8 15
Consumo
dieta kg/ día
2 3 6 4
Consumo
MS kg/día
0.2 2.77 1.5 3.48
Fuente Tablas FEDNA (2010)/ Datos Hcda. Unambiro (2016). Elaborado por el autor (2016)
Anexo 6. Estimación del consumo total de raygras y suplemento en materia seca
Pastura Raygras Perenne
Materia seca % 21
Consumo materia verde en 45 m
kg/día
48
Consumo MS kg/ día 10.1
Consumo total MS raygras /
suplemento
18.1 kg /MS/ /día vaca
Fuente Tablas FEDNA (2010)/ Datos Hcda. Unambiro (2016). Elaborado
por el autor (2016)
52
Anexo 7. Datos de la Hacienda Puerta de Oro grupo experimental bST.
Elaborado por el autor: Columna Gestación 30 días 0= vacía, 1=
preñada; Columna Muerte Embrionaria 0= sin muerte embrionaria, 1=
muerte embrionaria; Columna Gestación 60 días: 0= vacía, 1= preñada
53
Anexo 8. Datos de la Hacienda Puerta de Oro grupo control
Elaborado por el autor: Columna Gestación 30 días 0= vacía, 1=
preñada; Columna Muerte Embrionaria 0= sin muerte embrionaria, 1=
muerte embrionaria; Columna Gestación 60 días: 0= vacía, 1= preñada
54
Anexo 9. Datos Hacienda Unambiro grupo experimental bST
Elaborado por el autor: Columna Gestación 30 días 0= vacía, 1=
preñada; Columna Muerte Embrionaria 0= sin muerte embrionaria, 1=
muerte embrionaria; Columna Gestación 60 días: 0= vacía, 1= preñada
55
Anexo10. Datos Hacienda Unambiro grupo control
Elaborado por el autor: Columna Gestación 30 días 0= vacía, 1=
preñada; Columna Muerte Embrionaria 0= sin muerte embrionaria, 1=
muerte embrionaria; Columna Gestación 60 días: 0= vacía, 1= preñada