UNIVERSIDADE SANTA CECÍLIA FACULDADE DE CIÊNCIAS E TECNOLOGIA

FARMÁCIA

DANIELA ALVES SIMÕES LIZANDRA TAMMY ITIOKA

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIFÚNGICA FRENTE AO FUNGO OPORTUNISTA Candida albicans E PERFIL

FITOQUÍMICO DO EXTRATO DA FORMULAÇÃO CHINESA Ba Wei Daí Xia Tang

SANTOS/SP NOVEMBRO/2010

UNIVERSIDADE SANTA CECÍLIA FACULDADE DE CIÊNCIAS E TECNOLOGIA

FARMÁCIA

DANIELA ALVES SIMÕES LIZANDRA TAMMY ITIOKA

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIFÚNGICA FRENTE AO FUNGO OPORTUNISTA Candida albicans E PERFIL

FITOQUÍMICO DO EXTRATO DA FORMULAÇÃO CHINESA Ba Wei Daí Xia Tang

Trabalho de Conclusão de curso apresentado como exigência parcial para a obtenção do título de Farmacêutico a Faculdade de Ciências e Tecnologia da Universidade Santa Cecília, sob a orientação da Profª Dra. Luciana L. Guimarães Fernandes.

SANTOS/SP NOVEMBRO/2010

DANIELA ALVES SIMÕES LIZANDRA TAMMY ITIOKA

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIFÚNGICA FRENTE AO FUNGO OPORTUNISTA Candida albicans E PERFIL

FITOQUÍMICO DO EXTRATO DA FORMULAÇÃO CHINESA Ba Wei Daí Xia Tang

Trabalho de Conclusão de curso apresentado como exigência parcial para a obtenção do título de Bacharel à Faculdade de Farmácia da Universidade Santa Cecília. Data da aprovação:09 /11/2010. Banca Examinadora __________________________________________ Profª. Dra. Luciana L. Guimarães Fernandes Orientadora __________________________________________ Profo Dr. Fernando Augusto Garcia Guimarães __________________________________________ Profº. Dra Elisabeth Brossi Sabia

AGRADECIMENTOS

Agradecemos à Deus por estar sempre do nosso lado mostrando o caminho e

nos dando força para que este trabalho fosse realizado.

Aos nossos pais que se sempre se esforçaram e se sacrificaram para que

estudássemos.

A Profª Dra. Luciana Lopes Guimarães que nos recebeu da melhor forma

possível, nos incentivando a realizar este trabalho de iniciação cientifica e passando

seus conhecimentos para que concluíssemos este trabalho.

Ao Sandro e toda a equipe do laboratório de Biologia Marinha que nos

ajudou intensamente preparando todos os materiais, cedendo os laboratórios e

equipamentos utilizados na execução desse trabalho.

A Kátia e toda equipe do Laboratório de Química que nos forneceu os

materiais e equipamentos utilizados no preparo e análise fitoquímica do extrato.

A Universidade Santa Cecília pelo espaço cedido.

Ao Profº Ms. Edson Spanghero Dalur pela cobrança e conhecimentos

passados.

Aos amigos de classe pela convivência e momentos de alegria.

A todos os Professores do Curso de Farmácia que passaram seus

conhecimentos.

A Viviane Bergamo, pela sua paciência, atenção, material fornecido e por

usar muitos dos seus dias para nos ajudar. Ao Dr. Bergamo por nos passar parte de seus conhecimentos e pela atenção

que nos foi dada.

EPÍGRAFE

Chame o sucesso para fazer parte de sua vida. Acredite no seu potencial criador, seja inovador, treine sua mente para vencer, estipule metas e, principalmente, lute

por seus ideais.

(Flávio Souza)

RESUMO

A busca de tratamentos alternativos para Candida albicans vem aumentando, pois

os fármacos disponíveis produzem resistência, além de apresentarem importante toxicidade. Por esse motivo há uma grande procura de novas terapias e utilizamos então, neste estudo, a Medicina Tradicional Chinesa, pela sua eficácia comprovada ao longo dos séculos. Esta terapia se baseia em recuperar o equilíbrio Yin e Yang, forças que percorrem e nutrem o Organismo Humano através de Canais de Energia chamados Meridianos. Analisamos o efeito antifúngico da formulação magistral chinesa Ba Wei Daí Xia Tang frente ao fungo oportunista Candida albicans, através de testes baseados na medicina ocidental “in vitro” com método de macrodiluição em caldo, sendo testada três concentrações: a descrita na farmacopéia chinesa, a metade dessa concentração e um quarto da mesma, nas quais obtivemos resultados negativos. Na triagem fitoquímica foram realizados testes de identificação para alcalóides, taninos, flavonóides e saponinas, sendo considerada positiva a presença de taninos no extrato aquoso e saponinas de núcleo triterpênico para o extrato etanólico. Baseado nos conceitos da Medicina Tradicional Chinesa a Formulação BA WEI DAÍ XIA TANG atua estagnando a umidade morna, tendo sua ação de purificar o calor, eliminar toxina, gerando assim uma melhora no quadro de Candidíase, mas “in vitro” mostrou-se ser ineficaz.

PALAVRAS-CHAVE : Medicinal chinesa; Candida albicans; triagem fitoquímica; Ba Wei Daí Xia Tang.

ABTRACT The search for alternative treatments for Candida albicans has been increasing since the available drugs produce resistance, and offer significant toxicity. Therefore there is great demand for new therapies and use then in this study, the traditional Chinese medicine for its effectiveness proven over the centuries. This therapy is based on recovering the balance of Yin and Yang forces that run through and nourish the human body through energy channels called meridians. We analyzed the effect of antifungal formulation masterful Chinese Ba Wei Xia Wei Tang against the opportunistic fungus Candida albicans, using tests based on Western medicine in vitro with broth macrodilution method, and tested three concentrations: the one described in Chinese Pharmacopoeia, the half of this concentration and the same quarter in which we obtained negative results. The phytochemical screening tests were performed to identify alkaloids, tannins, flavonoids and saponins, being considered positive the presence of tannins in aqueous extract and triterpenoid saponins core for the ethanol extract. Based on the concepts of traditional Chinese medicine formulation Ba Wei Xia Tang then acts to damp warm stagnating, with its action to purge the heat, eliminate toxin, thus generating an improvement in the condition of candidiasis, but in vitro proved to be ineffective .

KEYWORDS: Chinese Medicinal; Candida albicans, chemical screening, Ba Xia Tang

Wei Dai

LISTA DE TABELAS

Tabela 1- Quadro demonstrativo das reações cromáticas dos diferentes grupos de

flavonóides.................................................................................................................48

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - Teoria dos cinco elementos aplicada na medicina chinesa.......................22

Figura 2 - Imagem de Angelicae sinenses.................................................................28

Figura 3 - Imagem de Radix ligusciti..........................................................................28

Figura 4 - Imagem de Sclerotium poria cocos............................................................29

Figura 5 - Imagem de Flos lonicerae japonicae.........................................................30

Figura 6 - Imagem de Pericarpium citri reticulatae.....................................................30

Figura 7 - Imagem de Caulis akebiae........................................................................30

Figura 8 - Imagem de Radix et rhizoma rhei..............................................................31

Figura 9 - Imagem de Córtex Fraxini.........................................................................32

Figura 10 - Imagem das ervas secas que constituem a formulação Ba Wei Daí

Xia Tang....................................................................................................................44

Figura 11 - Placas de cândida albicans ....................................................................52

Figura 12 - Reação de cloreto férrico.........................................................................53

Figura 13 - Teste com sais de chumbo (acetato).......................................................54

Figura 14 - Reação de sais de cobre (acetato)..........................................................55

Figura 15 - Reação de sais de ferro...........................................................................55

Figura 16 - Reação de acetato de chumbo................................................................56

Figura 17 - Determinação do índice de espuma........................................................56

Figura 18 - Teste de ação superficial.........................................................................57

Figura 19 - Análise quantitativa para saponinas........................................................57

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO................................................................................................12

1.1 Candida albicans.......................................................................................12

1.1.1 Tratamento para Candidíase.......................................................13

1.2 Teoria da Medicina Tradicional Chinesa...................................................13

1.2.1 Teoria do Qi.................................................................................14

1.2.2 Oito princípios..............................................................................14

1.2.2.1 A Teoria do Yin e Yang..................................................15

1.2.2.1.1 As aplicações da teoria Yin e Yang na medicina... 16

1.2.2.2 Exterior versus interior...................................................16

1.2.2.3 Frio versus calor.............................................................17

1.2.2.4 Deficiência versus excesso............................................18

1.2.3 Os cincos sabores .......................................................................19

1.2.4 Cinco elementos ..........................................................................20

1.2.5 As quatro tendências ...................................................................22

1.2.6 A visão chinesa das causas das doenças....................................23

1.2.6.1 Candidíase na medicina chinesa....................................24

1.2.7 Origem dos medicamentos chineses...........................................24

1.2.8 A colheita......................................................................................25

1.2.8.1 Raízes............................................................................25

1.2.8.2 Casca de árvores e raízes..............................................25

1.2.8.3 Plantas inteiras, caules, ramos e folhas.........................25

1.2.8.4 Flores..............................................................................25

1.2.8.5 Frutos.............................................................................26

1.2.8.6 Sementes e cernes.........................................................26

1.2.9 Hierarquia das fórmulas...............................................................26

1.2.10 Fórmula Ba Wei Daí Xia Tang...................................................27

1.3 Triagem fitoquímica...................................................................................32

1.3.1 Alcalóides.....................................................................................33

1.3.1.1 Atividades biológicas e emprego farmacêutico .............34

1.3.1.2 Detecção e caracterização.............................................34

1.3.2 Saponinas....................................................................................35

1.3.2.1 Terminologia e classificação..........................................35

1.3.2.2 Detecção e identificação................................................37

1.3.2.3 Propriedades biológicas.................................................37

1.3.3 Taninos.........................................................................................38

1.3.3.1 Atividades farmacológicas e biológicas..........................38

1.3.3.2 Emprego industrial e outros............................................39

1.3.3.3 Métodos de análises.......................................................40

1.3.4 Flavonóides..................................................................................40

1.3.4.1 Propriedades farmacológicas dos flavonóides...............42

1.3.4.2 Caracterização de flavonóides.......................................42

2. OBJETIVO..............................................................................................................43

3. MATERIAS E MÉTODOS.......................................................................................44

3.1 Extrato etanólico da formulação Ba Wei Daí Xia Tang................................44

3.1.1 Obtenção dos extratos e identificação das ervas........................44

3.1.2 Extrato etanólico padrão..............................................................44

3.2 Cultivo de fungos.......................................................................................45

3.3. Avaliação da atividade antifúngica...........................................................45

3.3.1 Preparo do inóculo......................................................................45

3.3.2 Teste de susceptibilidade ao extrato vegetal...............................45

3.3.2.1 Candida albicans............................................................46

3.4 Perfil fitoquímico........................................................................................47

3.4.1 Extrato hidroalcóolico...................................................................47

3.4.1.1 Flavonóides....................................................................47

3.4.1.1.1 Reações de Shinoda ou Cianidina...................47

3.4.1.1.2 Reação com hidróxido de sódio........................48

3.4.1.1.3 Reação com cloreto férrico...............................48

3.4.1.1.4 Reação com ácido sulfúrico concentrado........48

3.4.1.2 Alcalóides.......................................................................49

3.4.1.3 Taninos...........................................................................49

3.4.1.3.1 Teste com sais de chumbo (acetato)................49

3.4.1.3.2 Reação com sais de cobre (acetato)................49

3.4.1.3.3 Reação com sais de ferro.................................50

3.4.1.3.4 Reação com acetato de chumbo......................50

3.4.1.4 Saponinas.......................................................................50

3.4.1.4.1 Determinação do índice de espuma.................50

3.4.1.4.2 Teste de ação superficial..................................50

3.4.1.4.3 Análise qualitativa para saponinas...................51

4.RESULTADOS........................................................................................................52

4.1 Avaliação da atividade antifúngica do extrato etanólico da formulação Ba Wei Daí

Xia Tang.......................................................................................................52

4.2 Triagem fitoquimica....................................................................................52

4.2.1 Extrato hidroalcóolico...................................................................52

4.2.1.1 Flavonóides ....................................................................52

4.2.1.1.1 Reação de Shinoda ou Cianidina.....................52

4.2.1.1.2 Reação com hidróxido de sódio........................53

4.2.1.1.3 Reação com cloreto férrico...............................53

4.2.1.1.4 Reação com ácido sulfúrico concentrado.........53

4.2.1.2 Alcalóides.......................................................................54

4.2.1.3 Taninos...........................................................................54

4.2.1.3.1 Teste com sais de chumbo (acetato)................54

4.2.2.2.2 Reação com sais de cobre (acetato)................54

4.2.1.3.2 Reação com sais de ferro.................................54

4.2.1.3.4 Reação com acetato de chumbo......................56

4.2.1.4 Saponinas......................................................................56

4.2.1.4.1 Determinação do índice de espuma.................56

4.2.1.4.2 Teste de ação superficial..................................57

4.2.1.4.3 Análise quantitativa para saponinas.................56

5. DISCUSSÃO..........................................................................................................58

6. CONCLUSÃO.........................................................................................................60

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS.......................................................................61

ANEXO I.....................................................................................................................65

ANEXO II ...................................................................................................................66

ANEXO III...................................................................................................................67

ANEXO IV...................................................................................................................68

ANEXO V....................................................................................................................69

ANEXO VI...................................................................................................................70

ANEXO VII..................................................................................................................71

ANEXO VIII.................................................................................................................72

12

1. INTRODUÇÃO

1.1 Candida albicans

C. albicans é um fungo dimórfico, que se apresenta sob formas

leveduriformes (blasto conídios) no estado saprofítico, estando associado à

colonização assintomática; ou como formas filamentosas (pseudo-hifas e hifas

verdadeiras), observadas em processos patogênicos. Além disso, sob condições de

crescimento subótimas, nesse fungo pode ocorrer a formação de clamidósporos

(esporos arredondados que possuem uma espessa parede celular). Dessa forma, o

fungo tem a capacidade de se adaptar a diferentes nichos biológicos, podendo ser

considerado, a rigor, um organismo "pleomórfico". (ÁLVARES et al, 2007)

Candidíase vulvovaginal (CVV) é uma infecção da vulva e da vagina, causada

pelas várias espécies de Candida, fungos comensais da mucosa vaginal e digestiva,

que podem tornar-se patogênica, sob determinadas condições que alteram o

ambiente vaginal. (HOLANDA et al, 2007)

Do ponto de vista taxonômico, são reconhecidas cerca de 200 espécies de

leveduras pertencentes ao gênero Candida, das quais 10% podem causar infecções

em seres humanos. A Candida albicans é a espécie mais frequentemente descrita

nos casos de CVV, seguida por C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. krusei.

(ANDRIOLI et al, 2009)

Essa infecção caracteriza-se por prurido, ardor, dispareunia e pela eliminação

de um corrimento vaginal em grumos, semelhante à nata de leite. Com freqüência, a

vulva e a vagina encontram-se edemaciadas e hiperemiadas, algumas vezes

acompanhadas de ardor ao urinar e sensação de queimadura. As lesões podem-se

estender pelo períneo, região perianal e inguinal. O corrimento, que geralmente é

branco e espesso, é inodoro e, quando depositado nas vestes a seco, tem aspecto

farináceo. Em casos típicos, nas paredes vaginais e no colo uterino aparecem

pequenos pontos branco-amarelados. Os sintomas se intensificam no período pré-

menstrual, quando a acidez vaginal aumenta. (ÁLVARES et al, 2007)

A CVV é um dos diagnósticos mais freqüentes na prática diária em

ginecologia e sua incidência tem aumentado drasticamente, tornando-a a segunda

13

infecção genital mais freqüente nos Estados Unidos e no Brasil. (ÁLVARES et al,

2007)

1.1.1 Tratamento para candidíase

As três principais classes de antifúngicos usados, atualmente, no tratamento

da candidíase são os polienos (como nistatina e anfotericina B), os imidazóis (como

clotrimazol e miconazol) e os triazóis (como o fluconazol e itraconazol). Geralmente,

o tratamento inicial é feito com um agente tópico, a nistatina e miconazol são as

drogas de escolha inicial. Caso a terapêutica tópica não apresente resultados, é

iniciado o tratamento sistêmico, sendo o fluconazol a droga mais prescrita. (Paiva,

2009)

O tratamento das micoses humanas não é sempre efetivo, pois os fármacos

antifúngicos disponíveis produzem recorrência ou causam resistência, além de

apresentarem importante toxicidade. Por esta razão, há uma busca contínua de

novos fármacos antifúngicos mais potentes, mas, sobretudo mais seguros que os

existentes. (FENNER et al, 2006)

1.2 Teoria da medicina tradicional chinesa

A Medicina tradicional chinesa (MTC) apresenta muitos recursos naturais que

vêm sendo utilizados em tratamentos terapêuticos há mais de 5.000 anos. Esse

sistema medicinal se baseia na mistura de diferentes plantas e até mesmo de

produtos de origem animal ou mineral, para que os compostos presentes nestes

elementos interajam entre si e obtenham o objetivo desejado, que é a cura da

doença. O componente principal da mistura, geralmente adicionado em maior

quantidade, é o responsável pelo efeito terapêutico desejado; o componente

secundário potencializa ou colabora com o efeito terapêutico deste. Já os demais

componentes da mistura tratam dos sintomas periféricos, reduzem os efeitos tóxicos

ou direcionam o componente majoritário ao órgão alvo. A MTC considera a saúde

como equilíbrio existente no organismo como um todo. Os medicamentos seriam os

elementos responsáveis pelo restabelecimento deste equilíbrio. (SANTOS, 2006)

14

1.2.1 A Teoria do QI

. O Qi é frequentemente traduzido em energia vital. De acordo com a Filosofia

chinesa antiga, o universo origina-se do Qi original ou primitivo. O Qi Essencial era

tido como o elemento básico de que o universo era composto, e todas as coisas do

mundo eram produzidas por meio das mudanças e movimentos do Qi. (ZHUFAN,

2009)

É importante notar que, na Medicina Chinesa, todas as atividades da vida,

incluindo as atividades mentais, como pensamento, desejos, emoções, são baseadas

nas ações e mudanças do Qi. Acredita-se que os seres humanos são derivados do Qi

da Natureza, baseado nesta visão, a Medicina Chinesa enfatiza que todas as

atividades psicológicas estão em sintonia com as mudanças do meio ambiente natural

e, se conclui que para preservar a saúde deve-se manter a harmonia segundo as leis

da Natureza. (ZHUFAN, 2009).

O Qi na Medicina Chinesa pode ser classificado em duas principais categorias:

O Qi patogênico ou nocivo e o Qi normal ou verdadeiro. O Qi patogênico é prejudicial

à saúde. Isso inclui vários fatores ou agentes patogênicos, como por exemplo,

mudanças atmosféricas anormais, tais como vento, frio, calor, umidade ou secura. O

Qi verdadeiro dos seres humanos vem de três fontes: Qi primordial, Qi da essência

dos alimentos e Qi do ar. O Qi primordial é aquele herdado dos pais, enquanto que o

Qi da Essência dos alimentos e o Qi do ar são adquiridos. Qi verdadeiro inclui toda

matéria e energia essencial das atividades da vida assim como a resistência do corpo

contra as patologias. Neste contexto, a patologia e definida como um processo de luta

entre o Qi patógeno e o Qi verdadeiro, assim podendo afirmar que se o Qi verdadeiro

prevalecer o patógeno nunca acontecerá. (ZHUFAN, 2009).

1.2.2 Oito Princípios

É comum se dizer que há oito critérios gerais para a diferenciação das

síndromes na MTC. Mas deve-se observar que eles não estão no mesmo nível.

Dois deles estão no nível primário, ou seja, Yin e Yang, que é mais geral. A

diferenciação das síndromes Yin e Yang fornecem informação sobre a

característica geral da síndrome, mas nenhum tratamento concreto pode ser

15

determinado simplesmente com base no diagnóstico das síndromes de Yin ou

Yang. Na verdade, as síndromes exteriores, síndromes de excesso e síndromes

de calor são todas Yang, e as síndromes interiores, síndromes de deficiência e

síndromes de frio são todas Yin.

Os outros seis critérios estão todos no nível secundário. São eles; exteriores

versus interior, frio versus calor e deficiência versus excesso. Os seis critérios não

servem como um guia independente de princípios para a classificação das

síndromes. Eles estão envolvidos com os diferentes aspectos de uma síndrome -

exterior e interior indicando a profundidade ou localização da patologia, frio e calor

indicando a Natureza na patologia e deficiência e excesso indicando a força relativa

da resistência do corpo (Qi “antipatogênico” ou normal) e os fatores patogênicos (Qi

patogênico) para sua confrontação. Portanto, devem ser considerados em conjunto

durante a diferenciação das síndromes. Por exemplo, uma síndrome pode ser de

exterior na localização, frio em sua natureza e apresentar, ao mesmo tempo, fatores

patogênicos em excesso. Durante o tratamento uma síndrome exterior pode

transformar-se em uma interior, uma síndrome de frio em uma de calor e uma

síndrome de excesso em uma de deficiência. (ZHUFAN, 2009)

1.2.2.1. A Teoria do Yin e Yang

Acredita-se que todas as coisas têm dois lados. Yin e Yang representam dois

lados opostos de um objeto ou fenômeno.

Não há conflito entre as teorias do Qi e do Yin e Yang. Na verdade, Qi, como o

elemento básico que constitui o universo, pode ser dividido em dois: Yin Qi e Yang Qi.

Yin Qi refere-se, ao aspecto material do elemento, e Yang Qi, o dinâmico.

O equilíbrio entre o Yin e o Yang não é estático, mas dinâmico. O aumento ou

excesso de um está geralmente associado à diminuição ou deficiência de outro. Em

condições normais, aumento-diminuição do Yin e Yang é um estado de equilíbrio

relativo. Se isso for além dos limites fisiológicos, o equilíbrio Yin e Yang serão

alterados, resultando em patologia. (ZHUFAN, 2009).

16

1.2.2.1.1 As aplicações da teoria Yin e Yang na medicina

Para explicar a teoria do Yin Yang todo o corpo é envolvido, visto como uma

estrutura orgânica, a porção externa pertence ao Yang, ao passo que a interior

pertence ao Yin; a parte dorsal pertence ao Yang, enquanto que a parte ventral

pertence ao Yin; a porção superior pertence ao Yang, enquanto que a porção inferior

pertence ao Yin. Entre os órgãos Zang, o coração e o pulmão, situados na parte

superior do corpo (cavidade torácica), pertencem ao Yang, enquanto que o fígado,

baço e rins, situados na parte inferior do corpo (cavidade abdominal), pertencem ao

Yin. Ao considerar cada órgão, pode-se dividi-lo posteriormente em Yin e Yang. Os

equilíbrios dinâmicos entre o Yin e o Yang garantem a saúde. Quando o equilíbrio é

afetado, a patologia surge. A ruptura do equilíbrio normal do Yin e Yang está

relacionada a fatores patogênicos. (ZHUFAN, 2009)

Há dois tipos de fatores patogênicos: - fatores patogênicos Yin: frio, umidade; -

fatores patogênicos Yang: calor, secura e fogo. Por isso, o tratamento na Medicina

Chinesa está sempre focado na restauração do equilíbrio normal do Yin e do Yang.

Os princípios terapêuticos seguintes decorrentes da teoria do Yin e Yang são da

maior importância. (ZHUFAN, 2009).

1.2.2.2 Exterior versus interior

Exterior e interior indicam a profundidade ou a localização da patologia. O

exterior refere-se à porção superficial do corpo incluindo o tecido subcutâneo,

glândulas sudoríparas, músculos esqueléticos e meridianos e colaterais que correm

por esta porção. O interior refere-se aos órgãos internos (Zang Fu). (ZHUFAN,

2009).

A invasão dos fatores exógenos patogênicos (patologia exógena) geralmente

causa uma Síndrome Exterior no início do estágio. De acordo com a natureza do

fator patogênico exógeno e da resposta do corpo humano, as síndromes exteriores

podem ser diferenciadas entre as que envolvem frio exterior e calor exterior.

(ZHUFAN, 2009).

17

Ambas as síndromes são do tipo excesso. Geralmente ocorrem em indivíduos

previamente saudáveis sem deficiência do Qi normal após um ataque dos fatores

patogênicos em excesso. (ZHUFAN, 2009)

As síndromes interiores, associadas com patologias dos órgãos internos,

podem ser causadas em qualquer um dos três caminhos:

1. Transmissão dos fatores patogênicos exógenos do exterior para o interior. Por

exemplo, na síndrome exterior com calafrios, febre, cefaléia, pulso flutuante, os

calafrios desaparecem quando a febre ocorre acompanhada de dispnéia,

expectoração de muco amarelado e pegajoso, dores torácicas, língua avermelhada

com saburra amarela e espessa e pulso vigoroso e rápido. Esta é uma síndrome

interior (calor nos pulmões) devido à invasão do fator patogênico do exterior.

2. Ataque direto dos fatores patogênicos sobre os órgãos internos. Por exemplo,

ficar no frio pode resultar em vômito, dor abdominal e diarréia, que indicam que o

estômago e o baço foram afetados - uma síndrome de ataque direto ao interior pelo

frio.

3. Disfunção dos órgãos internos devido às desarmonias internas. Por exemplo,

crise emocional pode resultar em cefaléia, tontura, olhos injetados, zumbido, pulso

em corda e rápido e língua avermelhada com saburra amarelada, o que indica

hiperatividade do fígado - uma síndrome de fogo do fígado. (ZHUFAN, 2009).

Os pontos-chave que diferenciam as síndromes exteriores das interiores são

as seguintes: a maioria das síndromes exteriores é causada por fatores patogênicos

exógenos (tais como os seis fatores patogênicos exógenos do ambiente natural). As

síndromes exteriores ocorrem no estágio precoce das invasões exógenas e duram

um período curto de tempo, e depois ou se curam ou transformam-se em síndromes

interiores. (ZHUFAN, 2009).

1.2.2.3 Frio versus calor

As síndromes de frio ou calor refletem a deficiência ou o excesso de Yin e

Yang. "Como afirma o The Canon af medicine, a predominância do Yang origina o

18

calor e a predominância do calor origina o frio". Além disso, como regra de

tratamento, a "Síndrome de Frio deve ser tratada com medicamentos de

propriedades quentes e as Síndromes de Calor com medicamentos frios". Portanto,

a diferenciação entre o frio e o calor na natureza de uma síndrome é da maior

importância clínica. De modo geral, a síndrome de frio de um órgão interno refere-se

à hipofunção daquele órgão, e a síndrome de calor à hiperfunção. As características

comuns das síndromes de frio interior e das síndromes de calor Interior podem ser

descritas como seguem:

Síndromes de Frio Interior causam palidez, intolerância ao frio, ausência de

sede, aumento da freqüência intestinal, micção profusa e clara, língua pálida com

saburra branca e pulso lento ou tenso. Se houver dor, pode ser agravada por frio e

aliviada por calor. Se houver expectoração, o muco é fino, espumoso e

esbranquiçado. (ZHUFAN, 2009).

Os sintomas freqüentes da síndromes de calor interior são: rubor facial, febre ou

estado febril, sede, irritabilidade e agitação, constipação, micção escassa de

coloração escura, língua avermelhada com saburra amarelada e pulso rápido. Se

houver dor, é agravada por calor e aliviada por frio. Se houver expectoração, o muco

será espesso, pegajoso e amarelado. (ZHUFAN, 2009)

A síndrome de calor pode se transformar em frio, geralmente devido ao

tratamento impróprio ou inadequado ou por causa do consumo do Qi

“antipatogênico” pelos fatores patogênicos excessivos. A transformação pode ser

abrupta ou gradual. (ZHUFAN, 2009).

1.2.2.4 Deficiência versus Excesso

A deficiência e o excesso definem forças opostas - fatores patogênicos que

atacam o corpo e os fatores “antipatogênicos” que resistem aos fatores patogênicos.

A deficiência refere-se á deficiência na resistência do corpo, excesso refere-se ao

excesso dos fatores patogênicos. Quando os fatores patogênicos estão ausentes ou

debilitados e a resistência corporal é adequada ou forte, o indivíduo apresenta um

estado saudável ou se recuperará rapidamente da patologia. (ZHUFAN, 2009)

As síndromes de deficiência podem ser congênitas ou adquiridas, mas, na

maioria dos casos, são adquiridos por causa de dieta inadequada, fatores

emocionais, estresse, excesso de atividade sexual, patologias crônicas ou

19

tratamentos equivocados. Uma vez que os fatores “antipatogênicos” dos organismos

incluem Yin, Yang, Qi, sangue, essência, fluidos e várias funções dos órgãos

internos (Zang Fu), as síndromes de deficiência podem ser classificadas de acordo:

Deficiência de Yin, Deficiência de Yang, deficiência de Qi, deficiência de sangue etc.

(ZHUFAN, 2009)

O tratamento específico depende de um diagnóstico adicional detalhado da

Síndrome de deficiência, incluindo o elemento deficiente (Yin, Yang, Qi, essência ou

fluidos) e o órgão Zang Fu envolvido, bem como a natureza do frio ou do calor da

síndrome. (ZHUFAN, 2009)

A palavra "Excesso" aqui está relacionada a fatores patogênicos. As

Síndromes de Excesso são causadas por fatores patogênicos excessivos. Os

fatores patogênicos podem ser exógenos ou endógenos. Na maioria dos casos, o

simples excesso dos fatores patogênicos é exógeno. Muitos fatores patogênicos

endógenos são produtos da disfunção dos órgãos Zang Fu, tais como fluido retido,

muco e umidade, estagnação do Qi e do sangue. Os órgãos internos relacionados

podem se encontrar em um estado de deficiência, por exemplo, insuficiência dos rins

com retenção de líquidos e diminuição da função do baço na produção de umidade e

muco. Portanto, as síndromes causadas pelos fatores patogênicos endógenos

podem ser, simplesmente, do tipo excesso, mas podem também ser Síndromes de

Deficiência complicadas pelos sintomas de excesso. (ZHUFAN, 2009)[

1.2.3 Os cinco sabores

São eles:Picante (Xin), doce (Gan), ácido (Suan), amargo (Ku), salgado (

Xian)

Os cinco sabores determinam as funções medicinais das substâncias.

Funções:

Xin (picante): Dispersar e mover.

- Picante dispersivo: dispersa fatores pátogenos externo.

- Picante e movente: mover o Qi e mover o Xue

Energia

Sangue

20

Gan (doce): Tonifica, harmoniza e abrandar.

- Tonificantes: tonificar e nutrir. A maioria das substâncias tonificantes

são de sabor doce.

-Harmonizadoras: harmoniza o Zhong Qi, harmoniza as funções de

outras substancias.

-Abrandante: Abrandar a urgência e acalmar a dor, reduzir a

intoxicação e enfraquecer ação violenta de outras substancias. (NOLETO, 2009)

Suan (ácido): Adstringir e reter.

-Adstringe o suor, o Qi; retém diarréia, hemorragia, esperma e

leucorréia, pode reter urina (corrigir incontinência urinaria).

-Por ter a função de adstringir pode reter o patógeno, por isso, não se

deve ser utilizado em pacientes que sofrem síndrome de patógeno de excesso.

(NOLETO, 2009).

Ku (amargo):

Drena secar umidade e firmar, assim, temos:

-Amargo de drenagem:

-Laxativa: Drena o fogo por evacuação.

-Impedir e drenar a inversão do Qi que sobe:com função de descender

o Qi.

Eliminar o calor e drenar o fogo: com função antipirética.

-Amargo para secar:

-Amargo frio para secar umidade: para tratar calor úmido.

-Amargo morno para secar umidade: para tratar frio úmido (NOLETO,

2009).

Xian (salgado): Amolecem a consistência de massas endurecidas.

1.2.4 Cinco elementos

A Medicina Tradicional Chinesa sintetiza de acordo com as propriedades dos

cinco movimentos, as características fisiológicas dos cinco órgãos correlacionando

as relações fisiológicas entre Zang- Fu e vísceras.

21

O fígado tem a natureza de subir, estender-se livremente e controlar a

drenagem, natureza similar às propriedades da madeira, razão pela qual o fígado

está ligado à madeira. No coração situa-se a energia mental e esta é a manifestação

central da essência de todo o corpo; o coração controla os vasos sanguíneos,

fazendo com que o sangue aqueça e nutra todo o corpo, natureza esta que é similar

às propriedades do fogo, razão pela qual, o coração está associado ao fogo. O

baço/pâncreas encarrega-se de transportar e transformar o alimento e a água,

fontes dos nutrientes, pois o baço/pâncreas tem a natureza da terra, que produz

todo ser, por isso, este órgão está atribuído à terra. O pulmão purifica o ar, fazendo-

o descer e tem a propriedade do metal e por isso o pulmão está associado ao metal.

Nos rins está armazenado a essência, que nutre o Yin de todo o corpo, e controla a

circulação da água, regulando o equilíbrio dos líquidos orgânicos, com propriedades

similares da água de ser fria úmida e que flui para baixo, razão pela quais os rins

estão associados à água.

As relações de geração entre os cinco órgãos estão refletidas na: a essência

dos rins nutre o sangue do fígado e o mantém cheio (a água gera a madeira); o

sangue armazenado no fígado proporciona ao coração e completa o sangue deste

(a madeira gera o fogo); yang do coração aquece o baço / pâncreas, fazendo-o

funcionar normalmente no transporte (o fogo gera a terra); o baço/pâncreas

transforma a água e o alimento em nutrientes para a energia do pulmão (a terra gera

o metal); o pulmão se encarrega de purificar e fazer descender, de normalizar as

vias da água e ajuda os rins no controle da água (o metal gera a água).

Em relação à dominância, a descida e purificação do pulmão inibem o

possível excesso de ascensão do fígado (o metal domina a madeira); a função de

drenagem e de dispersão do fígado evita a estagnação da função do baço /pâncreas

no transporte e na transformação (a madeira domina a terra); o transporte e a

transformação dos líquidos do baço / pâncreas controla o transbordamento da água

dos rins (a terra domina a água); e a água dos rins proporciona o sangue do coração

prevenindo a hiperatividade do coração (a água domina o fogo); o calor de yang do

coração inibe as purificações excessivas do pulmão (o fogo domina o metal).

(NOLETO et al, 2009).

22

Figura 1: Teoria dos cinco elementos aplicada na medicina chinesa

Fonte: AUTEROCHE, 1986

1.2.5 As quatro tendências

São elas: ascensão, descensão, flutuamento e aprofundamento

Conceito: Compreende-se a tendência direcional das funções

medicinais.

Ascensão e flutuamento Yang

Descensão e aprofundamento Yin

Ascensão: Tendência de ascender à ação medicinal

Flutuamento: Tendência de ascender à ação medicinal

Descensão: Tendência de descender a ação medicinal

Aprofundamento: Tendência de mover ação medicinal para baixo (favorece a

diurese) (NOLETO, 2009).

SECURA

FRIO

VENTO

UMIDADE

RIM

FÍGADO

CORAÇÃO

PULMÃO BAÇO

CALOR

GERAÇÃO AVERSÃO

MADEIRA

FOGO

TERRA METAL

ÁGUA

DOMINAÇÃO (controle e avaliação)

23

1.2.6 A visão chinesa das causas das doenças

Na medicina Ocidental, germes e vírus são os principais agentes causadores

de doenças, mas na medicina tradicional chinesa, as causas das doenças são

divididas em três categorias básicas: primeira, causas externas, que incluem seis

energias atmosféricas (isto é, vento, frio, calor de verão, umidade, secura e fogo);

segunda, causas internas que incluem sete emoções (alegria, raiva, preocupação,

reflexão, tristeza, medo e choque); e a terceira, fadiga e alimentos. Sendo estes

fatores não baseados em pesquisas laboratoriais, mas em experiência comum.

(LU,1999)

O bloqueio das funções do baço de transporte e de digestão de água e dos

cereais e na distribuição dos líquidos orgânicos produz umidade, que e turva,

denominada umidade interna, que forma muco. Como a umidade interna é produzida

em virtude de uma fraqueza funcional do baço, ela é classificada como a umidade e

devida à insuficiência do baço ou “baço úmido”. (HUI et al,1999)

A umidade e o calor freqüentemente trabalham juntos para causar todos os

tipos de sintoma, incluindo eliminação de urina amarelada, micção freqüente mais

difícil e corrimento vaginal com odor fétido nas mulheres. Esses sintomas são

chamados de “sintomas do calor úmido” na Medicina Tradicional Chinesa. (LU, 1999)

O corpo humano precisa de fogo para manter a temperatura corpórea normal,

como uma sala precisa de calor para manter-se aquecida, por isso, que o fogo é

essencial para a saúde humana, sendo este o “fogo amigável”. Entretanto, o fogo

também pode ser uma energia hostil quando se origina de cinco outras energias

atmosféricas. O calor extremo torna-se fogo, e o fogo extremo produz efeitos tóxicos,

que na Medicina Tradicional Chinesa e chamado de “efeitos tóxicos de fogo “ou “fogo

tóxico”. (HUI et al,1999)

Os sintomas causados pelo fogo tóxico são caracterizados por sensação de

queimação e dor. A maioria dos casos de infecção e inflamação se inclui nesta

categoria, incluindo infecções oculares, infecções renais, infecção de garganta,

inflamação dos pulmões, inflamações vulvovaginais, furúnculos, carbúnculos e

infecções urinárias. (LU, 1999)

24

1.2.6.1 Candidíase na medicina Tradicional Chinesa

A candidíase do ponto de vista dessa medicina é originada de uma combinação

do calor no fígado e da umidade surgindo da deficiência do baço. A deficiência do

baço é portando, uma pré-condição para que este padrão se manifeste. A umidade

apresenta uma tendência a infundir em descendência. Se fluir em descendência e se

estabelecer no aquecedor inferior, causará secreções vaginais, prurido ou dor e

edema bem como irritação escrotal nos homens. (MACIOCIA, 1999)

Uma vez que a deficiência no baço, que conduz a formação da umidade, e uma

pré-condição para este padrão, qualquer uma das causas que provoca deficiência no

baço pode estar presente. Há um consumo excessivo de alimentos oleosos ou uma

dieta e estilo de vida irregular. (MACIOCIA,1999)

A estagnação persistente do Qi do fígado pode conduzir ao calor do fígado que

combina com a umidade. Qualquer uma das causas da estagnação do Qi do fígado,

portanto, pode conduzir a este padrão. (MACIOCIA, 1999)

Finalmente, calor-umidade pode também ser causado pelo calor-umidade

climático e externo. Sendo comum nos países tropicais, mas não é completamente

desconhecido nos países frios ou de clima temperado, especialmente no verão.

(MACIOCIA, 1999)

Por isso o princípio do tratamento é resolver a umidade e dispersar o calor do

fígado. (MACIOCIA, 1999)

1.2.7 Origem dos medicamentos chineses

A produção e distribuição dos medicamentos estão relacionadas com o clima

do ambiente. A China é um país em que as condições climáticas variam muito de

lugar para lugar devido ao vasto território, portanto, os medicamentos que não sofrem

processamento, carregam uma característica da região onde se encontram, ou seja, o

mesmo medicamento produzido em lugares diferentes pode variar tanto em qualidade

como em produção, por isso médicos antigos davam preferência ao uso de

medicamento „‟didao” (genuínos), que são aqueles produzidos em áreas reconhecidas

pelos vastos campos, excelente efeito terapêutico e alta qualidade. (AEMFTC, 2004)

25

1.2.8 A Colheita

As partes da planta a serem coletadas têm períodos diferentes de maturação, o

que difere assim a eficácia e suas propriedades de partes maduras e imaturas,

portanto colher a planta em seu período correto tem grande importância em seu efeito

terapêutico, pois somente quando são colhidas em sua correta estação produzem

efeitos terapêuticos desejados. (AEMFTC, 2004)

1.2.8.1 Raízes

Aconselha-se a colher raízes no inicio da primavera antes do aparecimento de

brotos e botões, ou quando as plantas começarem a amarelar o que normalmente

ocorre no fim do outono. Isso porque durante este período a maioria dos nutrientes

estão estocadas nas raízes que contem substâncias de maior qualidade e mais

eficazes. Existem algumas exceções. Como por exemplo, Rhizoma pinelia, Rhizoma

cordalis e Radix pseudostellaria, que amarelam no verão sendo assim seu melhor

período de colheita. (AEMFTC, 2004)

1.2.8.2 Casca de árvores e raízes

É recomendada colher as cascas das árvores no início do verão ou no final da

primavera quando as plantas crescem com abundante vigor, pois as cascas colhidas

nesta época podem sem descascadas mais facilmente e contêm mais nutrientes. Em

se tratando de cascas das raízes, a colheita deve ser feita no outono, pois estão

vigorosas e com boa qualidade. (AEMFTC, 2004)

1.2.8.3 Plantas inteiras, caules, ramos e folhas

São colhidos quando seu crescimento está exuberante, com ramos e folhas, ou

florescendo. As plantas com caules e ramos frágeis, ou aquelas que são pequenas e

devem ser utilizadas com suas raízes devem ser totalmente colhidas; as plantas

perenes têm suas partes aéreas cotadas e colhidas; as folhas de algumas plantas são

colhidas no inverno e no outono. (AEMFTC, 2004)

26

1.2.8.4 Flores

Essas devem ser colhidas apenas quando estão começando a abrir ou botões,

assim evitamos que suas pétalas e fragrância se percam. Aconselha-se também a

colher flores com tempo bom para que elas sequem ao ar livre. Algumas plantas

também são colhidas em várias estações porque florescem em diferentes épocas.

(AEMFTC, 2004)

1.2.8.5 Frutos

De uma maneira geral os frutos devem ser colhidos quando estão maduros.

Alguns, contudo, são colhidos antes como por exemplo: Pericarpium citri, Reticulatae

viride e Fructus anrantii immaturus; a alguns que são colhidos quando estão

vermelho; como Fructus trichosanthis e Retinerus luffae fructus. Frutas que

deterioram com facilidade, suculents, devem ser colhidas na época certa e

desidratadas mais tarde como por exemplo Fructus lycii. (AEMFTC, 2004)

1.2.8.6 Sementes e cernes

Estes são colhidos quando os frutos estão maduros. Para aqueles frutos que

se abrem e perdem sementes são colhidos em dias ensolarados assim que

amadurecem, mas ainda, não tenham aberto. (AEMFTC, 2004)

1.2.9 Hierarquia das fórmulas

As fórmulas Magistrais são formadas para manter um equilíbrio, evitando

efeitos colaterais e indesejáveis das drogas vegetais. Portanto as drogas vegetais são

classificadas em:

ERVAS IMPERIAIS

Responsáveis pela ação principal (indispensáveis)

ERVAS MINISTERIAIS

Potencializam a ação terapêutica das imperiais

27

Tratam Padrões Energéticos coexistentes

ERVAS ASSISTENTES

Potencializam as ervas imperiais e ministeriais

Moderam ou neutralizam a toxicidade das demais ervas

Diminuem ou neutralizam a ação das demais ervas

ERVAS AUXILIARES

Harmonizam e integram a ação das demais ervas

Potencializam a ação das demais ervas

ERVAS MENSAGEIRAS

Direcionam a ação das ervas (LOBOSCO, 2005)

1.2.10 Fórmula Ba Wei Daí Xia Tang

Fórmula utilizada para tratar síndrome de retenção de umidade-calor no

aquecedor Inferior acompanhada de deficiência de sangue, indicada para casos de

uretrite, candidíase vaginal, leucorréia, endometrite e cistite. (BERGAMO, 2000)

Ações:

Purifica o calor.

Elimina toxinas.

Elimina a umidade.

Dispersa estagnação.

Indicações:

Estagnação de umidade-morna-calor.

Sintomas e sinais:

Leucorréia.

Prurido.

Disúria.

Estrangúria.

28

Correspondências:

Distúrbios genitourinários: uretrite, candidíase vaginal, leucorréia, cistite.

(LO,2007)

Constituintes da fórmula:

Dang Gui

Figura 2 - Imagem de Angelicae sinensis

Nome científico: Angelicae sinensis Características: Acre, doce, morna. Merianos fígado e estômago Quantidade usada: 80,50 mg Uso tradicional: Tonifica e ativa o sangue, inibe a dor, umedece intestinos e promove fluxo intestinal. (LO, 2007) Farmacologia: Efeito regulador do útero, efeito sobre o metabolismo a secreção, efeito sedativo, efeito antibacteriano. (HSU,1999)

Chuang Xiong

Figura 3 - Imagem de Radix ligustici

29

Nome científico: Radix ligustici Características: Fortemente aromática; acre e amarga; morna. Meridianos: fígado, pericárdio e vesícula Biliar Quantidade usada: 47,20 mg Uso tradicional: Ativa fluxo de sangue e Qi, inibe o vento e alivia a dor.(LO, 2007) Farmacologia: Efeito antifúngico, tranqüilizante, hipotensivo, vasodilatador, antibacteriano (HSU,1999)

Fu Ling

Figura 4 - Imagem de Sclerotium poria cocos

Nome científico: Sclerotium poria cocos Características: Doce e insípida; neutra. Meridianos: coração, baço bexiga e pulmão Quantidade usada: 47,20 mg Uso tradicional: Promove diurese, elimina a umidade, fortalece o baço, harmoniza o aquecedor médio, tranquiliza o coração, acalma os nervos. (LO, 2007) Farmacologia: Efeito diurético, efeito nutritivo, tranqüilizante, e também diminui níveis de açúcar no sangue. (HSU,1999)

Jin-Yin-Hua

Figura 5 – Imagem de Flos lionicerae japonicae

30

Nome científico: Flos lonicerae japonicae Características: Doce; fria. Meridianos: intestino grosso, estômago e pulmão Quantidade usada: 15,8 mg Uso tradicional: Purifica o calor, inibe toxinas, dispersa calor .(LO, 2007) Farmacologia: Efeito antibacteriano, antiviral, estomáquico, antiespasmódico e diurético. (HSU,1999)

Chen Pi

Figura 6 – Imagem de Pericarpium citri reticulatae

Nome científico: Pericarpium citri reticulatae Características: Aromática; acre e amarga; morna. Meridianos: baço e pulmão Quantidade usada: 31,50 mg Uso tradicional: Regula o Qi, alivia o tórax, seca a umidade e dissolve a mucosidade. (LO, 2007)

Mu tong

Figura 7- Imagem de Caulis akebiae

31

Nome científico: Caulis akebiae Características: Amarga; fria. Meridianos: coração, bexiga e intestino delgado Quantidade usada: 47,20 mg Uso tradicional: Promove ação purgativa, purifica o calor, refresca o sangue, seda o fogo e inibe toxinas. (LO,2007) Farmacologia: Efeito diurético, cardiotônico, antibacteriano e anticancerígeno. (HSU, 1999)

Da Huang

Figura 8 - Imagem de Radix et rhizoma rhei

Nome científico: Radix et rhizoma rhei Características: amarga; fria. meridianos: fígado, pericárdio, baço, estômago e intestino grosso Quantidade usada: 15,8 mg Uso tradicional: Remove acúmulo e estagnação, remove fogo, esfria sangue, regula a menstruação. (LO, 2007) Farmacologia: Efeito purgativo, antibacteriano, adstringente, anticarcinogenio, beneficiar o efeito da vesícula biliar. (HSU, 1999)

32

Cortex fraxini

Figura 9 - Imagem de Cortex fraxini

Nome científico: Cortex fraxini Características: doce e insípida; neutra. meridianos: fígado e estômago Quantidade usada: 64,80 mg Uso tradicional: Adstringente, controla diarréia, dispersa o calor, seca a umidade, limpa fígado, clareia a visão. (LO, 2007) Farmacologia: Efeito antiflogístico, analgésico e diurético. (HSU, 1999)

1.3 Triagem Fitoquímica

O estudo químico vem despertando ao longo da história o interesse na

composição química das plantas classificadas como medicinais. A pesquisa

fitoquímica tem como objetivo conhecer os constituintes químicos das plantas ou

conhecer o grupo de metabólitos secundários relevantes nas mesmas. (PAIVA,

2009)

Na maioria das vezes, para se proceder a caracterização de um determinado

grupo de substâncias presentes em um vegetal, deve-se primeiro extrair essas

substancias com um solvente adequado, para, então, caracterizá-las. (SIMOES et

al., 2004).

Os produtos secundários têm um papel importante na adaptação das plantas

aos seus ambientes; são moléculas que contribuem para que as mesmas possam

ter uma boa interação com os diferentes ecossistemas. Os produtos secundários

aumentam a probabilidade de sobrevivência de uma espécie, pois são responsáveis

33

por diversas atividades biológicas com este fim como, por exemplo, podem atuar

como antibióticos, antifúngicos e antivirais para proteger as plantas dos patógenos, e

também apresentando atividades antigerminativas ou tóxicas para outras plantas,

fitoalexinas. Além disso, alguns destes metabólitos constituem importantes

compostos que absorvem a luz ultravioleta evitando que as folhas sejam

danificadas. (FUMAGALI et al.2008)

Classicamente, a caracterização dos principais grupos de substancias vegetais

de interesse tem sido conseguida pela realização de reações químicas que resultem

no desenvolvimento de precipitado e/ou coloração característica. Usualmente, essas

reações são realizadas em tubo de ensaio ou placa de toque, podendo também ser

utilizada a detecção cromatográfica com reagentes específicos (SIMOES et al., 2004).

Assim os metabólitos secundários, por serem fatores de interação entre

organismos, frequentemente, apresentam atividades biológicas interessantes. Nesse

sentido, tem sido estudada a atividade antifúngica de várias classes de compostos

químicos, naturais ou seus modelos sintéticos, como alcalóides, flavonóides,

taninos, saponinas, diterpenos, cumarinas e imidas sobre fungos filamentosos e

leveduriformes. (VIEIRA et al., 2009)

1.3.1 Alcalóides

Alcalóides são compostos nitrogenados farmacologicamente ativos e são

encontrados predominantemente nas angiospermas. A palavra alcalóide é derivada

da palavra arabe alquari, denominação vulgar da planta da qual a soda foi

originalmente obtida. Na sua grande maioria possuem caráter alcalino, com

exceções tais como piperina, colchicina, oximas e alguns sais quaternários como o

cloridrato de laurifolina. Para a definição dessa classe existe uma certa dificuldade

devido a ausência de uma precisa separação entre as aminas complexas de

ocorrência natural. (SIMOES et al., 2007)

Os alcalóides constituem-se num vasto grupo de metabólitos com grande

diversidade estrutural, comparável aquela dos terpenoides, representando cerca de

20% das substancias naturais descritas. Esse grupo químico tem apresentado um

grande impacto através dos tempos na economia, medicina e em outros setores

34

sociais e políticos. O uso de extratos vegetais contendo alcalóides como

medicamentos, venenos e poções mágicas, pode ser traçado desde os primórdios

da civilização. (SIMOES et al., 2007)

Tem sido observado que muitas plantas que produzem alcalóides são

evitadas por insetos ou animais em sua alimentação, isto certamente devido a sua

toxicidade ou ao fato de a maioria dos alcalóides tem gosto amargo. Porem não se

pode afirmar que as plantas produzam tais substâncias apenas para sua proteção,

pois se esse fosse o caso, plantas que não produzissem alcalóides teriam sido

extintas, causando uma predominância daquelas produzindo esses compostos.

(WINK, 1993).

1.3.1.1 Atividades biológicas e emprego farmacêutico

A presença de alcalóides pode ser assinalada em ampla gama de atividades

biológicas investigadas. Assim, pode-se citar emetina (amebicida e emético),

atropina, hiosciamina e escopolamina (anticolinérgicos), reserpina e protoveractrina

A (anti-hipertensivo), quinina (anti-malárico), camptotecina, vimblastina e vincristina

(antitumorais), codeína e noscapina (antitussígenos), morfina (hipnoanalgésico),

quinidina (depressor cardíaco), cafeína (estimulante do SNC), teobromina e teofilina

(diuréticos), colchicina (tratamento da gota), tubocurarina (miorrelaxante), efedrina

(simpaticomiméticos), castanospermina (antiviral), galantamina (tratamento do mal

de Alzheimer), entre muito outros. (SIMOES et al., 2007).

1.3.1.2 Detecção e caracterização

Usualmente os métodos de detecção são procedidos de uma extração e

consistem de reações de precipitação com reativos específicos.

Existem diversos reagentes gerais para a detecção de alcalóides por

precipitação.

A maioria dos alcalóides precipitam em soluções neutras ou levemente ácidas

pelos reagentes de Mayer (solução de iodeto de potássio e cloreto de mercúrio),

Dragendorff (solução de iodeto de potássio e subnitrato de bismuto), Wagner ou

Bouchardat (solução de iodo e iodeto de potássio), Bertand (solução de acido sílico-

35

túngstico), Hager (solução saturada de ácido pícrico) ou com solução de ácido

tânico. Esses precipitados podem ser amorfos ou cristalinos, possui cores diferentes

variando do branco ao marrom alaranjado, podendo ser solubilizados em meio

alcalino ou em excesso de reagente. Assim, resultados negativos com esse

reagentes são indicativos da ausência de alcalóides, enquanto a formação de

precipitados pode ser considerada apenas como provável presença de alcalóides.

(SIMOES et al., 2007).

Existem dois métodos gerais para extração de alcalóides (exceto aqueles

contendo um nitrogênio quaternário) podem ser aplicados: um com extração com

solventes em meio alcalino e outro em meio ácido. (SIMOES et al., 2007).

1.3.2 Saponinas

Saponinas são glicosídeos de esteróides ou de terpenos policíclicos. Esse

tipo estrutura, que possui uma parte com característica lipofílica (triterpeno ou

esteróide) e outra parte hidrofílica (açucares), determina a propriedade de redução

da tensão superficial da água e suas ações detergente e emulsificante. (SIMOES et

al., 2007).

Ao longo do tempo, esse grupo de substâncias sempre tem sido de interesse

farmacêutico, seja como adjuvante em formulações, componentes ativos em drogas

vegetais, ou ainda, como matéria-prima para síntese de esteróides. (SIMOES et al.,

2007).

As saponinas em solução aquosa formam espuma persistente e abundante.

Essa atividade provém, como nos outros detergentes, do fato de apresentarem na

estrutura, uma parte lipofílica, denominada aglicona ou sapogenina e uma parte

hidrofílica constituída por um ou mais açúcares. A espuma formada é estável à ação

de ácidos minerais diluídos, diferenciando-a daquela dos sabões comuns. Essa

propriedade e a mais característica desse grupo de compostos, da qual deriva o seu

nome (do latim sapone = sabão).

Outras propriedades físico-químicas e biológicas encontradas, mas nem

sempre presentes em todas as saponinas, são:

-elevada solubilidade em água;

36

-ação sobre membranas: muitas saponinas são capazes de causar

desorganização das membranas das células sanguíneas (ação hemolítica) ou das

células das brânquias em peixes (ação ictiotóxica);

- complexação com esteróides: razão pela qual freqüentemente apresentam

ação antifúngica e hipocolesterolemiante. (SIMOES et al., 2007).

1.3.2.1 Terminologia e classificação

As saponinas podem ser classificadas de acordo com o núcleo fundamental

da aglicona ou, ainda, pelo se caráter ácido, básico ou neutro. Assim, quanto à

aglicona, denominam-se saponinas esteroidais e saponinas triterpênicas. No grupo

das saponinas esteroidais podem ser considerados também os glicosídeos

nitrogenados esteroidais, que são tratados por alguns autores como um grupo à

parte. O caráter ácido pode ser devido à presença de um grupamento carboxila na

aglicona ou na cadeia de açúcares (por exemplo, ácidos glicurônico e galacturônico),

ou ambos. O caráter básico decorre da presença de nitrogênio, em geral sob forma

de uma amina secundária ou terciária, como nos glicosídeos nitrogenados

esteroidais.

Outra classificação refere-se ao número de cadeias de açúcares ligadas na

aglicona. Assim, saponinas monodesmosídicas possuem uma cadeia de açúcares,

enquanto que saponinas bidesmosídicas tem duas cadeia de açúcares, a maioria

com ligação éter na hidroxila em C-3 e a outra com ligação éster. Essa diferenciação

é importante já que, freqüentemente, as saponinas bidesmosídicas não apresentam

as atividades biológicas relatadas para as saponinas monodesmosídicas. (SIMOES

et al., 2007).

Nas saponinas esteroidais, a aglicona e formada por um esqueleto de 27

carbonos dispostos num sistema tetracíclico. As saponinas mais freqüentemente

encontradas na natureza possuem 30 átomos de carbono e núcleo triterpênico. As

saponinas esteroidais e triterpênicas apresentam uma distribuição diferenciada no

reino vegetal. (SIMOES et al., 2007)

37

1.3.2.2 Detecção e identificação

A detecção de saponinas no vegetal é realizada a partir de suas propriedades

químicas e físico-químicas: pela reação com ácidos minerais, aldeídos aromáticos

ou sais de metais produzindo compostos corados, pela diminuição da tensão

superficial e/ou pela ação hemolítica. Esses testes podem ser realizados qualitativa

ou quantitativos.

O teste de ação superficial e realizado com o extrato aquoso obtido a partir do

decocto do vegetal. Apos agitação enérgica do extrato filtrado em tubo de ensaio, a

formação de espuma, que não desaparece com a adição de um acido mineral

diluído, indica a presença de saponinas.

Sendo glicosídeos, e, portanto, substâncias polares, as saponinas são

geralmente solúveis em água e pouco solúveis em solventes apolares. O extrato

aquoso apresenta como vantagem, além do custo menor, a ausência de lipídeos e

clorofila. (SIMOES et al., 2007)

1.3.2.3 Propriedades Biológicas

O comportamento anfifílico das saponinas e a capacidade de formar

complexos com esteróides, proteínas e fosfolipídeos de membranas determinam um

número variado de propriedades biológicas para essas substâncias, destacando-se

a ação sobre membranas celulares, alterando a sua permeabilidade, ou causando

sua destruição. (SIMOES et al., 2007)

Relacionadas com essa ação sobre membranas, estão as atividades

hemolíticas, ictiotóxica e molusquicida, frequentemente observadas. Para algumas

saponinas também foi relatada ação espermicida; o mecanismo proposto até agora

para essa ação seria a ruptura da membrana plasmática da célula do

espermatozóide. Atividade anti-helmíntica foi apontada para um número significativo

de saponinas; no entanto, irritação causada nas mucosas tem impedindo o

desenvolvimento de aplicações práticas.

38

1.3.3 Taninos

Historicamente, a importância das plantas ricas em taninos esta ligada as

suas propriedades de transformar a pele animal em couro. Durante o curtimento são

formados ligações entre as fibras de colágeno na pele animal, a qual adquire

resistência ao calor, água e abrasivos. Esta capacidade dos taninos em combinar-se

com macromoléculas explica a capacidade deles precipitarem celulose, pectinas e

proteínas. Essas propriedades são a base da definição clássica dos taninos:

substancias fenólicas solúveis em água com massa molecular entre 500 e cerca de

3000 Dalton, as quais apresentam a habilidade de formar complexos insolúveis em

água com alcalóides, gelatina e outras proteínas.

A complexação entre taninos e proteínas é a base para suas propriedades

como fatores de controle de insetos, fungos e bactérias tanto quanto para suas

atividades farmacológicas. (SIMOES et al., 2007)

1.3.3.1 Atividades farmacológicas e biológicas

Tradicionalmente os taninos são classificados segundo sua estrutura química

em dois grupos: taninos hidrolisáveis e taninos condensados. (SIMOES et al., 2007)

Plantas ricas em taninos são empregadas na medicina tradicional no

tratamento de diversas moléstias, tais como diarréia, hipertensão arterial,

reumatismo, hemorragias, feridas, queimaduras, problemas estomacais (azia,

náusea, gastrite e úlcera gástrica), problemas renais e do sistema urinário e

processos inflamatórios em geral. (SIMOES et al., 2007)

Testes in vitro que são realizados com extratos ricos em taninos ou com

taninos puros tem identificado diversas atividades biológicas dessa classe de

substâncias. Dentre essas se podem citar: ação bactericida e fungicida, antiviral,

moluscicida, inibição de enzimas como glicosiltransferases de Streptococcus mutans

e Streptococcus sobrinus, inibição da peroxidação de lipídeos e sequestrador de

radicais livres e antitumoral.

Acredita-se que as atividades farmacológicas são devidas, pelo menos em

parte, a três características gerais que são comuns em maior ou menor grau aos

dois grupos de taninos, condensados e hidrolisáveis:

39

1) complexação com íons metálicos (ferro, manganês, vanádio, cobre, alumínio,

cálcio, entre outros).

2) atividade antioxidante e sequestradora de radicais livres.

3) habilidade de complexar com outras moléculas incluindo macromoléculas tais

como proteínas e polissacarídeos.

Foi sugerido o possível mecanismo de ação dos taninos para o tratamento de

doenças estão intimamente ligados a essas três propriedades.

Outros estudos mostram que os taninos tem efeitos inibitórios sobre bactérias.

Existem três hipóteses para o mecanismo de ação antimicrobiana. A primeira

hipótese pressupõe a inibição das enzimas de bactérias e fungos e/ou a

complexação dos substratos dessas enzimas; a segunda seria a ação dos taninos

sobre as membranas celulares dos microorganismos, modificando o seu

metabolismo. Finalmente, a terceira hipótese menciona a complexação dos taninos

com íons metálicos, diminuindo, assim, a disponibilidade destes elementos

essenciais para o metabolismo dos microorganismos. (SIMOES et al., 2007)

1.3.3.2 Emprego industrial e outros

Taninos condensados reagem rapidamente com formaldeído produzindo

polímeros com poder aglutinante. Esses polímeros têm sido empregados como um

meio para reduzir o fluxo de água em barragens, para estabilizar, o solo em

fundações de construções, na produção de borrachas, na fabricação de

aglomerados e laminados de madeira e na fabricação de resinas de troca catiônicas.

Derivados produzidos entre taninos condensados e amônio quaternário com

etanolamina, dimetilamina e formaldeído, ou cloreto de dietilaminoetila e iodeto de

metila tem sido usados como base para agentes floculantes ou coagulantes para o

tratamento de água. (SIMOES et al., 2007)

Taninos contribuem significativamente para a sensação adstringente de

vinhos, sucos de frutas, chás e de outras bebidas. Os flavan-3-ois, proantocianidinas

e antocianidinas são de crucial importância para o desenvolvimento do sabor e da

aparência do vinho tinto em seu processo de envelhecimento.

O papel biológico dos taninos nas plantas tem sido investigado e acredita-se

que eles estejam envolvidos na defesa química das plantas contra o ataque de

40

herbívoros vertebrados ou invertebrados e contra microorganismos patogênicos.

(SIMOES et al., 2007)

1.3.3.3 Métodos de análise

Vários métodos são conhecidos e tradicionais para o reconhecimento de

taninos. Teste com solução de gelatina a 1%, contendo 10% de cloreto de sódio,

fornece um precipitado ou mesmo turvação. Esse teste não é especifico, sendo que

alguns fenois apresentam reação positiva ao se encontrarem em altas

concentrações. Outro teste baseia-se na propriedade dos taninos de precipitarem

com alcalóides: p.ex. com soluções de cinchonina, cafeína ou estricnina a 1 a 2%.

Na tentativa de diferenciar os tipos de taninos, podem ser empregados dois

diferentes reativos.

1 – Solução de cloreto férrico: taninos hidrolisáveis produzem, com solução

diluída de cloreto férrico, uma forte coloração azul, principalmente em meio alcalino.

Soluções derivados de catequinas, por sua vez, resultam numa coloração verde,

cuja intensidade e mais fraca que os taninos hidrolisáveis. Em misturas de ambos os

tipos de taninos, a coloração verde não é observada.

2 – Formaldeído- ácido clorídrico: uma solução de taninos e mantida sobre

refluxo com formaldeído- ácido clorídrico por 30 minutos. Derivados da catequina

formam precipitados e são separados por filtração. No filtrado, pode ser verificada a

presença do ácido gálico através da adição de acetato de sódio e cloreto férrico.

(SIMOES et al., 2007)

1.3.4 Flavonóides

Os flavonóides, biossintetizados a partir da via dos fenilpropanóides,

constituem uma importante classe de polifenóis, presente em relativa abundância

entre os metabólitos secundários de vegetais. Uma “substância fenólica ou

polifenólica” é aquela que possui um ou mais núcleos aromáticos contendo

substituintes hidroxilados e/ou seus derivados funcionais (ésteres, éteres, glicosídeos

e outros). (SIMOES et al., 2007)

41

Os flavonóides representam um dos grupos fenólicos mais importantes e

diversificados entre os produtos de origem natural. Essa classe de compostos e

amplamente distribuída no reino vegetal.

Podem-se encontrar flavonóides em diversas formas estruturais. Entretanto, a

maioria dos representantes desta classe possui 15 átomos de carbono em seu núcleo

fundamental, constituído de duas fenilas ligadas por uma cadeia de três carbonos

entre elas. (SIMOES et al., 2007)

São conhecidos, até o presente mais de 4.200 flavonóides diferentes, sendo

que o número de novas estruturas identificadas praticamente dobrou nos últimos vinte

anos.

Diversas funções são atribuídas aos flavonóides nas plantas. Dentre elas pode-

se citar:

(a) proteção dos vegetais contra a incidência dos raios ultra-violeta e visível,

além de proteção contra insetos, fungos, vírus e bactérias.

(b) atração de animais com a finalidade de polinização.

(c) antioxidantes.

(d) controle de ação de hormônios vegetais.

(e) agentes alelopáticos

(f) inibidores de enzimas.

Esses compostos possuem também importância farmacológica, resultados de

algumas propriedades atribuídas a alguns representantes da classe, como por

exemplo: antitumoral, antiinflamatória, antioxidante, antiviral, entre outras.

Devido ao grande número de flavonóides existentes eles estão representados

em classes de acordo com suas características químicas e biosintéticas. Dentre essas

classes podemos citar:

1. Flavonas, flavonóis e seus O-heterosídeos

2. Flavonóides C-heterosídeos

3. Antocianos

4.Chalconas

5. Auronas

6. Di-hidro-flavonóis

7. Flavanas, leucoantocianidinas e proantocianidinas

8. Isoflavonóides

9. Neoflavonóides

42

10. Biflavonóides

11. Flavanonas

12. Di-hidro-chalconas. (SIMOES et al., 2007)

1.3.4.1 Propriedades farmacológicas dos flavonóides

De fato, pode-se inferir que os seres humanos ingerem muitas gramas de

flavonóides diariamente, sendo encontrados com freqüência nas frutas e muitas

outras espécies vegetais, no vinho, em cereais e ocasionalmente em corantes

alimentares.

O emprego terapêutico das plantas contendo flavonóides é vasto e, em muitos

casos ainda e empírico. Embora alguns resultados tenham mostrado que alguns

flavonóides possam apresentar efeitos mutagênicos, em geral, são considerados

como benéficos. Alguns medicamentos são elaborados a partir de flavonóides, em

particular para o tratamento de doenças circulatórias, hipertensão e agindo como

cofator da vitamina C. Outras pesquisas sugerem que alguns flavonóides são

responsáveis por ação antitumoral considerável, podendo ainda agir como antivirais,

anti-hemorrágicos, hormonais, antiinflamatórios, antimicrobianos e antioxidantes.

(SIMOES et al., 2007)

1.3.4.2 Caracterização de flavonóides

Os ensaios cromáticos apresentam importância como estágio preliminar de

análise e, em alguns casos, podem ser empregados às dosagens dos respectivos

derivados flavônicos. Em alguns casos é possível distinguir entre as diversas classes

de flavonóides. As cores obtidas variam conforme o núcleo, o número e a disposição

dos substituintes hidroxilados. Dessa forma, os hidróxi-flavonóides reagem a frio com

soluções alcalinas, resultando em fenolatos geralmente corados, solúveis em água,

mas decomponíveis por ácidos; vapores de amônia mudam a coloração das

antocianinas de vermelho para azul e de chalconas e auronas, de laranja para

vermelho. (SIMOES et al., 2007)

43

2. OBJETIVO

Esse trabalho tem como objetivo avaliar o efeito antifúngico in vitro da

formulação chinesa Ba Wei Daí Xia Tang, frente ao fungo oportunista Candida

albicans.

Realizar testes fitoquímicos do extrato da formulação Ba Wei Daí Xia Tang.

44

2. MATERIAS E MÉTODOS

3.1 Extrato etanólico da formulação Ba Wei Dai Xia tang

3.1.1 Obtenção do extrato e identificação das ervas

As oito plantas que constituem a formulação usada para este estudo foram

cedidas pela Fitofórmula farmácia e laboratório, especializada em fitoterapia

chinesa.

As identificações das mesmas foram feitas através de laudos farmacêuticos

que estão citados nos anexos I, II, III, IV, V, VI, VII e VIII.

Figura 10 – Imagem das ervas secas que constituem a formulação Ba Wei Daí Xia Tang

3.1.2 Extrato etanólico padrão

As plantas chegaram secas e embaladas, pois foram fornecidas por um

representante específico. Pesamos 100g das amostras para cada 500mL de álcool

30% (Farmacopoeia of the people´s republic of China, 2005), em seguida,

separadamente as mesmas passaram pelo processo de turbolização e maceração.

Logo após foram filtradas e mantidas, em frasco âmbar esterelizado. Em uma

proveta de 500 ml colocamos a quantidade correspondente de cada erva (citadas no

45

item 1.9.1), está foi armazenada em outro frasco âmbar esterelizado e mantida

sobre refrigeração até o dia do experimento.

3.2 Cultivo dos fungos

As cepas Candida albicans (ATCC-6454-8) foram cedidas pela Profa Dra

Luciana Lopes Fernandes Guimarães. As culturas dos fungos foram cultivadas no

meio Agar Sabourand-dextrose e incubadas a 35°C, subculturas (repiques)

semanais eram feitos para manter as colônias viáveis ate o ensaio.

3.3 Avaliação da atividade antifúngica

Para a avaliação da atividade antifúngica do extrato etanóico da formulação

Ba Wei Dai Xia Tang, foi utilizado o método de macrodiluição em caldo, padronizado

pelo National Comittee for Clinical Laboratory Standards NCCLS (1997) e descrito

em detalhes no trabalho de Colombo (1994).

3.3.1 Preparo do inóculo

Foram realizadas subculturas do fungo para o meio Sabourand-dextrose, este

foi mantido por 48 horas a 35°C. Decorrido tempo as leveduras foram contadas em

câmara de Newbauer, e a suspensão do inoculo foi ajustada para 2,5x103cel/mL com

meio Sabourand- dextrose estéril. (COLOMBO, 1994).

3.3.2 Teste de susceptibilidade ao extrato vegetal

Os experimentos foram realizados em triplicata através de diluições seriadas.

No dia do experimento a suspensão inicial do inoculo foi preparada após ter

determinado a quantidade de inóculo a ser utilizado. (VIEIRA, 2009)

46

3.3.2.1 Candida albicans

Foram preparados nove tubos de ensaio estéreis para serem feitas três series

testando três concentrações diferentes (a citada na farmacopéia tradicional chinesa,

a metade, e um quarto da mesma) e 3 tubos de ensaio estéreis para o controle

negativo contendo somente 100 μL, do álcool a 30% e 0,9ml do inóculo.

Os tubos foram classificados como CA (controle), A1(concentração padrão),

A1/2 (concentração padrão pela metade), A1/4 (¼ da concentração padrão), e

subseqüentes B e C.

Para obter a primeira concentração foi adicionado em um tubo de ensaio 100

μL do Extrato Etanólico Padrão, e 0,9ml de inoculo.

Para obter a segunda concentração foram adicionadas 100 μL de TSB estéril,

100 μL, do extrato e 0,9ml do inóculo, foi realizado a homogeneização e retirados

100 μL, obtendo assim a concentração de ½ da concentração padrão .

Os 100 μL retirados do tubo da segunda concentração foram adicionados a

um terceiro tubo, contendo 100 μL TSB estéril, realiza a homogeneização e retirado

100 μL, obtendo assim a concentração de ¼ da solução padrão.

Foi repetido esse mesmo teste por mais duas vezes classificando os tubos

subseqüentes como B e C. (triplicata)

Os tubos foram homogeneizados e incubados em estufa a 35°C pelo período

de 48 horas. Decorrido o tempo de incubação, foi realizado procedimento de

lavagem das culturas em meio Sabourand-dextrose estéril, e a seguir foram

transferidas para Placa de Petri com meio sólido, como mostra o procedimento a

seguir:

A um tubo de ensaio estéril foi adicionado 1 ml de TSB estéril e 50 μL da

solução padrão, realizou-se homogeneização e transferiu-se 50μL para Placa de

Petri, contendo o meio Agar Sabourand-dextrose.

Este procedimento é repetido com todas as concentrações e com o controle,

as placas são incubadas a 35°C por 48 horas, decorrido tempo é realizada leitura

visual, observando o crescimento das colônias submetidas ao extrato e comparado

com crescimento das colônias do controle negativo. (NCCLS, 1997)

47

3.4 Perfil fitoquímico

Visando a identificação dos principais grupos químicos presentes na

formulação Ba Wei Daí Xia Tang, procedeu-se o ensaio sistemático de analise

fitoquímica do extrato hidroalcóolico utilizando metodologias descritas por Costa,

2000, ( SIMOES et al. 2007), e Gambeta (2008) com algumas adaptações.

.

3.4.1 Extrato hidroalcoólico

O extrato hidroalcoólico utilizado para a triagem fitoquímica foi preparado

conforme o item 3.1.2, a partir do extrato hidroalcoólico procedeu-se as seguintes

reações:

3.4.1.1 Flavonóides

Foi realizada analise qualitativa de flavonóides obtido do extrato hidroalcoólico

das folhas secas da formulação Ba Wei Daí Xia Tang através de reações cromáticas

descritas nos procedimentos a seguir, afim de previamente classificar o tipo de

flavonóide encontrado através das colorações formadas nas reações de

caracterização.

3.4.1.1.1 Reações de Shinoda ou Cianidina

Colocar em um tubo de ensaio 2mL do extrato e adicionar fragmentos de

magnésio e em seguida, cuidadosamente, 5 gotas de Hcl concentrado (verificando a

efervescência). O resultado é considerado positivo com a formação da coloração

com tonalidade avermelhada (laranja, rosa, vermelho) comparada com o tubo

controle (COSTA, 2000).

48

3.4.1.1.2 Reação com hidróxido de sódio

Colocar em um tubo de ensaio 2 mL do extrato e adicionar 2 mL de solução

de hidróxido de sódio 2%. O resultado é considerado positivo com a formação de

coloração amarela comparada ao tubo controle (COSTA, 2000).

3.4.1.1.3 Reação com cloreto férrico

Colocar em um tubo de ensaio 2 mL do extrato hidroalcóolico e adicionar 3

gotas da solução de cloreto férrico a 4,5%. O resultado é considerado positivo com a

formação da coloração verde, amarela, verde-castanho ou violeta comparada ao

tubo controle (COSTA, 2000).

Tabela 1: Quadro demonstrativo das reações cromáticas dos diferentes grupos de flavonóides

Reação Flavonas Flavonóis Flavanonas Chalconas Isoflavonas

Shinoda ou Cianidina

Vermelho – Laranja

Vermelho Vermelho – Laranja

-------- --------

Hidróxido de sódio

Amarelo Amarelo – escura

Amarelo Amarelo Amarelo

Cloreto Ferrico

Verde Verde – Castanho

Verde – Castanho

Amarelo Verde

Fonte: Costa, 2000

3.4.1.1.4 Reação com ácido sulfúrico concentrado

Colocar em um tubo de ensaio 2 mL do extrato e adicionar algumas gotas de

acido sulfúrico concentrado. O resultado é considerado positivo para flavonas e

flavonóis com a formação de coloração fortemente amarelada, as flavononas

originam coloração que podem variar de laranja a vermelho, e as chalconas e

auronas formam coloração que variam do vermelho ao carmim (SIMOES et al.,

2007).

49

3.4.1.2 Alcalóides

A 10 mL do extrato aquoso adiciona 5mL de acido clorídrico 1%, realizando

extração durante 30 minutos em banho-maria. Após resfriado, filtrar com papel filtro.

Coloca-se algumas gotas do filtrado e 3 gotas do Reagente de Dragendorff sobre

uma lamina de vidro, sendo a reação considerada positiva apresentando precipitado

marrom-avermelhado. Para controle é colocado 3 gotas do filtrado sobre uma lâmina

e efetua-se comparação. (GAMBETA, 2008)

O mesmo procedimento pode ser realizado substituindo o Reagente de

Dragendorff pelos Reagentes de Bertrand e Reagentes de Mayer, sendo as reações

consideradas positivas na formação de precipitado branco-azulado e branco-

amarelado respectivamente. (GAMBETA, 2008)

3.4.1.3 Taninos

Do extrato hidroalcoólico foram retiradas alíquotas que foram transferidas a

tubos de ensaio para a análise através de reações descritas abaixo, para o controle

foi utilizado um tubo de ensaio contendo apenas o extrato hidroalcóolico, sem

nenhum reativo.

3.4.1.3.1 Teste com sais de chumbo (acetato)

Adiciona-se a 2 mL do extrato hidroalcóolico algumas gotas de solução a 10%

p/v de acetato de chumbo. Normalmente surge precipitado volumoso e denso

(COSTA, 2000).

3.4.1.3.2 Reação com sais de cobre (acetato)

Junta- se a 2 mL do extrato algumas gotas de acetato de cobre a 3% p/v.

Verifica-se cor do precipitado. (COSTA, 2000)

50

3.4.1.3.3 Reação com sais de ferro

Acrescenta-se a 2 mL do extrato hidroalcoólico 5mL de água destilada e

algumas gotas da solução de cloreto férrico a 2%. Nesta reação os taninos

hidrolisáveis produzem coloração azul-violeta e os taninos condensados coloração

esverdeada. (COSTA, 2000)

3.4.1.3.4 Reação com acetato de chumbo

Adiciona-se a 5 mL de extrato hidroalcoólico 10 mL de ácido acético diluído a

10% e cerca de 5 mL de solução de acetato de chumbo a 10%. Esta reação é

considerada positiva para galhotaninos na presença de precipitado. Nestas

circunstancias, o ácido acético conserva dissolvidos os catequinataninos e evita sua

precipitação. (COSTA, 2000).

3.4.1.4 Saponinas

3.4.1.4.1 Determinação do índice de espuma

Transferir 5 mL do extrato hidroalcoólico para um tubo de ensaio e agitar

vigorosamente, vedando o mesmo com o polegar. A reação é considerada positiva

quando observar o aparecimento do anel de espuma persistente (SIMOES et

al.,2007; GAMBETA, 2008).

3.4.1.4.2 Teste de ação superficial

A um tubo de ensaio contendo extrato hidroalcoólico é realizada agitação

enérgica, após agitação é verificada a formação de espuma, que não desaparece

com a adição de um ácido mineral diluído (ácido clorídrico diluído a 10%), indicando

presença de saponinas (SIMOES et al., 2007).

51

3.4.1.4.3 Análise qualitativa para saponinas

Adiciona-se a 25mL do extrato hidroalcoólico 5mL de acido clorídrico

concentrado e aquece-se por 10 minutos. Esperar esfriar e transferir o liquido para

um funil de extração, contendo 20mL de clorofórmio. Efetua-se a extração obtendo

assim o extrato clorofórmio. Em um tubo de ensaio colocar 5mL do extrato

clorofórmio e adicionar 2mL do reagente de Salkowski (2mL H2SO4 concentrado)

cuidadosamente pelas paredes do tubo, sem agitar.

O aparecimento de um anel de coloração vermelha ou pardo-avermelhada

caracteriza resultado positivo para saponinas que contenham o núcleo triterpenico,

enquanto que, o anel de coloração rósea a violeta indica resultado positivo para

saponinas que contenham o núcleo esteroidal. (SIMOES et al.,2007).

52

4. RESULTADOS

4.1 Avaliação da atividade antifúngica do extrato hidroalcóolico da

formulação Ba Wei Daí Xia Tang

Através da leitura visual das placas de petri verificou-se que o extrato

hidroalcóolico da formulação Ba Wei Daí Xia Tang não inibiu o crescimento do fungo

Candida albicans, sendo assim a atividade antifúngica nula na concentração testada

com a metodologia aplicada no presente trabalho.

Figura 11 - Placas de Candida albicans

4.2 Triagem fitoquimica

4.2.1 Extrato hidroalcoólico

4.2.1.1 Flavonóides

4.2.1.1.1 Reações de Shinoda ou Cianidina

O resultado foi considerado negativo, pois não houve formação de coloração

com tonalidade avermelhada em relação ao tubo controle.

53

4.2.1.1.2 Reação com hidróxido de sódio

O resultado foi considerado negativo, pois não houve formação de coloração

amarela em relação ao tubo controle.

4.2.1.1.3 Reação com cloreto férrico

O resultado foi considerado positivo para flavonoides pois obteve a coloração

verde,comparada ao tubo controle, o que pode indicar presenca flavonoides do tipo

flavonas, flavonois, flavanonas e isoflavonas, segundo Tabela 1 descrita por Costa

(2000).

Figura 12 - Reação com cloreto férrico

4.2.1.1.4 Reação com ácido sulfúrico concentrado

O resultado foi considerado negativo, pois não houve formação das

colorações verde, amarela, verde-castanho ou violeta em relação ao tubo controle.

54

4.2.1.2 Alcalóides

` O resultado foi considerado negativo, pois com a presença do reagente

Dragendorff não houve formação de precipitado marrom-avermelhado, e para os

Reagentes de Bertrand e Reagentes de Mayer, não houve formação de precipitado

branco-azulado e branco-amarelado respectivamente

4.2.1.3 Taninos

4.2.1.3.1 Teste com sais de chumbo (acetato)

O resultado foi considerado positivo, pois houve o aparecimento de

precipitado denso e volumoso.

Figura 13 - Teste com sais de chumbo (acetato)

4.2.1.3.2 Reação com sais de cobre (acetato)

O resultado obtido foi considerado positivo, pois observa-se a formação de

precipitado de coloração esverdeada.

55

Figura 14 – Reação de sais de cobre (acetato)

4.2.1.3.3 Reação com sais de ferro

O resultado obtido foi considerado positivo pois houve formação de coloração

esverdiada, indicando a presença de taninos condensados

Figura 15 – Reação de sais de ferro

56

4.2.1.3.4 Reação com acetato de chumbo

O resultado foi considerado positivo, pois houve formação de precipitado, o

que evidencia um resultado positivo para galhotaninos.

Figura 16 – Reação de acetato de chumbo

4.2.1.4 Saponinas

4.2.1.4.1 Determinação do índice de espuma

O resultado foi considerado positivo, pois houve aparecimento de espuma

após agitação.

Figura 17 – Determinação do índice de espuma

57

4.2.1.4.2 Teste de ação superficial

A reação foi considerada positiva, pois houve presença de espuma

persistente após a adição do ácido mineral diluído.

Figura 18 –Teste de ação superficial

4.2.1.4.3 Análise quantitativa para saponinas

O resultado foi considerado positivo, pois houve aparecimento de um anel de

coloração vermelha ou pardo-avermelhada.

Figura 19 – Análise quantitativa para saponinas

58

5. DISCUSSÃO

A candidíase vulvovaginal é uma das infecções mais comuns na prática clínica

de um ginecologista, a incidência desta infecção micótica tem crescido

acentuadamente, sendo a segunda causa de vaginite logo após a vaginose

bacteriana. Já foram identificadas mais de 400 cepas de candida, sendo a espécie

Candida albicans a mais importante causadora de candidíase. (NETO et.al. 1999)

Os fármacos antifúngicos disponíveis produzem grande recorrência ou causam

resistência, além de apresentarem importante toxicidade (FENNER et al, 2006). A

medicina tradicional chinesa trata-se de uma das artes médicas mais antigas da

humanidade ainda em uso que vem conquistando o mundo com suas técnicas

terapêuticas milenares. A medicina tradicional chinesa e a medicina ocidental têm

suas próprias vantagens e, por isso, tem sido realizados esforços para combinar estas

duas escolas na teoria e na pratica. (FRÓIO, 2006)

Tendo em vista os problemas encontrados, e a popularidade da Medicina

Tradicional Chinesa, neste estudo foi proposto a pesquisa de uma nova alternativa

terapêutica para o tratamento do fungo oportunista Candida albicans, usando uma

formulação tradicional chinesa composta por oito ervas chinesas, através do método

de macrodiluição em calda (NCCLS, 1997), testando a concentração descritas por

Der Cheng Lo da formulação Ba Wei Da Xia Tang, e verificamos o crescimento de

todas as placas de Candida albicans, portanto podemos dizer que para este teste in

vitro realizado, a formulação mostrou-se ineficaz.

De acordo com a Teoria da Medicina Tradicional Chinesa a formulação usada

para este estudo, age tratando áreas do organismo que estão debilitadas (umidade no

fígado e calor no baço citada no item 1.2.6.1), sendo essas, responsáveis por causar

a candidíase melhorando assim o quadro dessa doença.

Na análise fitoquimica do extrato hidroalcóolico da formulação Bai Wei Daí Xia

Tang foram identificados a presença de taninos do tipo condensado que segundo

Simoes et al.(2004) esses metabólitos encontrados possuem atividade antifúngica.,

existindo três hipóteses para pressupor o mecanismo. A primeira hipótese pressupõe

a inibição das enzimas das bactérias e fungos e/ou a complexação dos substratos

dessas enzimas, a segunda seria a ação dos taninos sobre as membranas celulares

modificando o seu metabolismo e a terceira hipótese menciona a complexação dos

taninos com os íons metálicos diminuindo assim, a disponibilidade dos elementos

59

essenciais para o metabolismo dos microorganismos. Também houve presença de

saponinas de núcleo triterpênico que por sua vez possui atividade antifúngica. Para

esse mesmo extrato também foi encontrado um resultado positivo dentro da classe de

flavonóides frente ao reagente cloreto férrico, e de acordo com COSTA et al.,2000,

derivados de catequininas com as soluções de cloreto férrico, resultando uma

coloração verde, cuja intensidade e mais fraca que os taninos hidrolisáveis, o que

pode ter corrido devido a grande presença de taninos evidenciado na amostra.

Informações cedidas pela farmácia e laboratório fitofórmula, relatam que as

pacientes que fazem uso dessa formulação tem tido boa aceitação, e melhora no

caso de candidíase, apesar de não existir nenhuma comprovação científica, mas de

acordo com a Medicina Tradicional Chinesa, essa formulação age em padrões

energéticos, o que não se pode analisar em uma placa de petri, sendo assim de

grande importância estudos “in vitro” com essa formulação.

60

6- CONCLUSÃO

O extrato hidroalcóolico obtido através da formulação Chinesa Bai Wei Daí

Xia Tang não apresentou atividade antifúngica “in vitro” frente ao fungo Candida

albicans.

Na análise fitoquímica o extrato hidroalcóolico evidenciou a presença de

taninos do tipo condensado e saponinas de núcleo triterpênico, que por sua vez

possuem atividade antifúngica

61

7 . REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ADMINISTRAÇÃO ESTADUAL DE MEDICINA E FARMÁCIA TRADICIONAL

CHINESA (AEMFTC). Farmacologia e Medicina Tradicional Chinesa. Tradução

por Ednéa Iara Souza Martins. v 1. São Paulo: Roca, 2004.

ÁLVARES C.A.; SVIDZINSKI T.I.E.; CONSOLARO M.L.- Candidíase vulvovaginal:

fatores predisponentes do hospedeiro e virulência das leveduras - Jornal

Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial. Vol.43 n.5 Rio de

Janeiro set./out. 2007.

ANDRIOLI J.L; OLIVEIRA G.S.A.; BARRETO C.S.; SOUSA Z.L; OLIVEIRA M.C.H;

CAZORLA I.M.; FONTANA R.. - Frequência de leveduras em fluido vaginal de

mulheres com e sem suspeita clínica de candidíase vulvovaginal. Rev. bras.

ginecol. obstet. vol.31 n°.6 - Rio de Janeiro. jun. 2009. Disponível em

<http//www.scielo.br.> Acesso em 07/março/2010

AUTEROCHE, B; NAVAIH P. O Diagnótico na Medicina Chinesa. Tradução por Zilda Barbosa Antony. São Paulo: Organização Andrei, 1986.

BERGAMO, J.A (B). Medicina Tradicional Chinesa e Taoísmo 2000. Disponível

em: <http://www.medtao.com.br/> acesso em: 28 Jul. 2010.

COLOMBO, A. L. Avaliação em in vitro, da sensibilidade de levedura a

antifúngicos azólicos. 1994. Tese (Doutorado em Medicina). Escola Paulista de

Medicina: Universidade Federal de São Paulo, São Paulo.

COSTA, A. F. Farmacognosia parte experimental III. 3ed, 2000.

FENNER, R. B; A. H; Mentz, L. A ; Rates, S. M. K. Plantas utilizadas na medicina

popular brasileira com potencial atividade antifúngica. Revista Brasileira de

Ciências Farmacêuticas vol. 42, n. 3, jul./set., 2006

FRÓIO, L.R. A expansão da Medicina Tradicional Chinesa: uma análise da

vertente cultural das Relações Internacionais. Brasília: Instituto de Relações

62

Internacionais - IREL, 2006 ( Dissertação apresentada como requisito parcial para a

obtenção do grau de Mestre em Relações Internacionais)

FUMAGALI E.; GONÇALVES R.A.C.; MACHADO, M.F.P.S.; VIDOTI, G.J.; ARILDO

JOSÉ BRAZ DE OLIVEIRA, A.J.B.O. Produção de metabólitos secundários em

cultura de células e tecidos de plantas: o exemplo dos gêneros

Tabernaemontana e Aspidosperma. Rev. bras. farmacognosia. vol.18 n°.4 João

Pessoa Oct./Dec. 2008. Disponível em http://www.scielo.br. Acesso em 13/Abril/2010

GAMBETA, R.M. Perfil fitoquímico de diferentes extratos de Ilex paraguariensis

St. Hilaire Universidade regional integrada do alto Uruguai e das missões

departamento de ciências da saúde curso de farmácia, 2008.

HOLANDA, A.A.R.; FERNANDES, A.C.S.; BEZERRA, C.M.; FERREIRA, M.A.F.;

HOLANDA, M.R.R. ; HOLANDA, J. DE C. P.; MILAN, E.P. Candidíase

vulvovaginal: sintomatologia, fatores de risco e colonização anal concomitante

Rev. Bras. Ginecol. Obstet. v.29 n.1 Rio de Janeiro jan. 2007

HSU, HONG-YEN et al. Matéria Médica Oriental. Tradução por Adriana Favano.

São Paulo: Roca, 1999.

HUI YIN HE; BAI ZHANG. Teoria Básica da Medicina Tradicional Chinesa.

Tradução e adaptação por Dina Kaufman. São Paulo : ATHENEU, 1999

LO, DER CHENG. Fórmulas magistrais chinesas. São Paulo: Roca, 2007

LOBOSCO, MAGALI. Fitoterapia chinesa: Introdução à tradição e ao uso das

plantas orientais. Rio de Janeiro: Book Link, 2005.

LU, HENRY C. Curas Herbais Chinesas. Tradução por Adriana Favano. São Paulo:

ROCA, 1999

MACIOCIA,GIOVANNI. Os Fundamentos da Medicina Chinesa: um texto

abrangente para acupunturistas fitoterapeutas. Tradução por Luciane M.D.Faber.

São Paulo: ROCA, 1996.

63

National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Reference

Method For Broth Diluition Antifungal Susceptibility Testing Of Yeasts; Approved

Standard. Villanova, NCCLS 1997; vol. 17. p. 28.M27 – A.

NETO, A.A.; HAMDAN, J.S.; SOUZA, R.C.: Prevalência de Cândida na Flora Vaginal de Mulheres Atendidas num Serviço de Planejamento Familiar. Rev. Bras. Ginecol. Obstet. vol.21 n°8 Rio de Janeiro, 1999

NOLETO, P. Matéria Medica. São Paulo: Ícone, 2009.

PAIVA, L. C. A.; RIBEIRO, R. A.; PEREIRA, J. V.; OLIVEIRA, N. M. C. Avaliação

clínica e laboratorial do gel da Uncaria tomentosa (Unha de Gato) sobre

candidose oral. Revista Brasileira de Farmacognosia. Vol 18 n°2 João

Pessoa Apr./June 2009

Pharmacopoeia of the peoples’s republic of China. Vol I. Chine: People's Medical Publishing House, 2005. Porto Alegre, Florianópolis, 2007. SANTOS, F.V. Avaliação da mutagenicidade in vivo e in vitro de compostos obtidos de plantas nativas do cerrado. Araraquara: Universidade do estado de São Paulo, 2006

SILVA, N. L. A.; MIRANDA, F. A. A.; CONCEIÇÃO, G. M.; Triagem Fitoquímica de

Plantas de Cerrado, da Área de Proteção Ambiental Municipal do Inhamum,

Caxias, Maranhão. SCIENTIA PLENA 6 ( 2), 1-17, 2010

SIMOES, C.M.O. et al. Farmacognosia: da planta ao medicamento. 6 ed.- Porto

Alegre, Florianópolis: UFSC, 2007

VIEIRA, D.E; SILVA, I.D.; DORES R.L. Avaliação da atividade antifúngica e perfil

fitoquímico do extrato das folhas de musa paradisiaca l. Santos, São Paulo:

Faculdade de Ciências e Tecnologia, Universidade Santa Cecília, 2009. (Dissertação

graduação em farmácia) p. 45-57.

WENBU, XI. Tratado de medicina chinesa. Tradução por Dr.Yseo Yamamura. São

Paulo: ROCA, 1993

64

WINK, M. Physiology of secondary product formation in plants.

In:CHARLWOOD, B.V.; RHODES, M.J.C. (ed.) Secondary products from plant tissue

culture.Oxford: Clarendon, 1990.

ZHUFAN, XIE. Prática da Medicina Tradicional Chinesa. Tradução por Luciane

M. D. Farber. São Paulo: Ícone, 2009.

65

ANEXO I

66

ANEXO II

67

ANEXO III

68

ANEXO IV

69

ANEXO V

70

ANEXO VI

71

ANEXO VII

72

ANEXO VIII