Vol. 90,1974

Acta Anatomica Internat iona l Archives of A n a t o m y , Histology, Embryo logy and Cytology Archives Internationales d 'Anatomie , d'Histologie, d 'Embryologie et de Cytologie Internationales A r c h i v für Anatomie , Histologie, Embryologie u n d Zellforschung

Condiderunt: G . G u M S T E D T f , T . P E T E R F i f , G . W O L F - H E I D E G G E R

Redactores: A . D E L M A S , Paris F . W A L B E R G , Oslo

Editores : W . E . A D A M S , Dunedin , N.Z.

R. A M P R I N O , B a r i J . A R I E N S K A P P E R S ,

Amsterdam W . B A R G M A N N , K i e l J . A . B A U M A N N , Geneve S. R. Bawa, Chandigarh Ν. J . B E R R I L , Montreal P . B O D I A N , Ba l t imore , M d . G . B O E H M , Basel A . B R O D A L , Oslo L . B U C C I A N T E , Padova O. B U C H E R , Lausanne W . B U N O , Montevideo T. CASPERSSON, Stockholm K . S. F . C H A N G , Hongkong M . C H E V R E M O N T , Liege R . C O U R R I E R , Paris E . V . C O W D R Y , St .Louis , Mo. A . D A L C Q , Bruxelles J . D A N K M E I J E R , Leiden L . J . A . D I D I O , Toledo, Ohio L . E I N A R S O N , Aarhus O. E R Ä N K Ö , Hels inki Z. E R E N C I N , Ankara A . F A L L E R , Fr ibourg D . W . F A W C E T T , Boston

Mass. W . U . G A R D N E R ,

New H a v e n , Conn.

G. W O L F - H E I D E G G E R , Basel

A . G I R O U D , Paris P. G L E E S , Göttingen ST. G R Z Y C K I , L u b l i n A . H A D J I O L O F F , Sofia A . W . H A M , Toronto G. C. H E R I N G A , Amsterdam Β. E . I N G E L M A R K , Göteborg J . J A N S E N , Oslo N . A . J A V A C H I S H V I L I , Tb i l i s i C H . A . J O E L , Te l A v i v D . K A D A N O F F , Sofia G . L E P L A T , Liege W . L I E R S E , H a m b u r g R . L O C C H I , Säo Paulo K . S. L U D W I G , Basel 0 . M A C H A D O D E SOUSA,

Säo Paulo Ü. M A S K A R , I s t a n b u l R . M I L I N E , No v i Sad G. A . G. M I T C H E L L ,

Manchester M . M O R I , Fukuoka 0 . M . O L I V O , Bologna F. O R T S L L O R C A , Madr id N . P E S O N E N , Hels ink i T . P E T R E N , Stockholm A. P O L I C A R D , Paris A . P O R T M A N N , Basel M . R E I C H E R , Gdansk Ε . C. R O O S E N - R U N G E ,

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New Y o r k , N . Y . M . W . W O E R D E M A N ,

Amsterdam J . W O L F , Praha J . M . Y O F F E Y , Jerusalem J . Z. Y O U N G , London K . 2 L Ä B E K , Brno

S. Karger · Basel · München · Paris · London · New York · Sydney

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Index autorum 634

Acta anat. 90: 394-402 (1974)

Anatomisches I n s t i t u t und I n s t i t u t für Hygiene und Mikrobiologie, Universität Innsbruck , Innsbruck, Osterreich

Probleme mit Konservierungsflüssigkeiten im anatomischen Präpariersaalbetrieb

1. Mitteilung

R E I N H A R D P U T Z , S E P P P O I S E L und F R I E D R I C H T I E F E N B R U N N E R 1

Seit mehr als 150 Jahren, als von der Verwendung nicht konservierten Leichenmaterials i n den Präpariersälen abgegangen wurde, erschienen immer wieder Veröffentlichungen, die sich m i t der Unzulänglichkeit der bestehenden Konservierungsmethoden befassten. Die erste diesbezügliche, zusammenfassende Abhandlung s tammt von GRÖNROOS [1899], der sich die Mühe gemacht hat , die üblichen Konservierungsmethoden an den anatomischen I n s t i t u t e n Europas zusammenzustellen und kr i t i s ch zu betrachten. Vier grundsätzliche Möglichkeiten sind es, die für die F ixa t i on und Konservierung von Leichen zur Verfügung stehen. A m längsten verwendet werden Lösungen verschiedener Neutralsalze [ F R A N C H I N A u n d L A U T H , beide u m 1830, z i t iert nach L A S K O W S K Y , 1886], wie z . B . Ka l iumbi chromat , Chlorzink, Koch salz, Subl imat u n d Salpeter. Viel später erst wurde die Eignung der Karbolsäure für diesen Zweck entdeckt [ L A S K O W S K Y , 1886] u n d erst B L U M [1894] führte das Formal in ein. C A N N I E U [1897] verwendete schliesslich Glyzerin für die Leichenkonservierung, das in der Folgezeit hauptsächlich für die Konservierung von Einzelpräparaten gebraucht wurde [ S T I E D A , 1905].

Diese Substanzen werden n u n seit mehr als 75 Jahren allein oder in verschiedenen Gemischen verwendet. A m bekanntesten sind die Kombinat ionen nach K A I S E R L I N G [1886, 1900, 1922], J O R E S [1896, 1913], P I C K [1900, 1924] u n d R O M H A N Y [1941, 1946]. A u c h die neueren zusammenfassenden Arbei ten [ P E T E R F I , 1928; S C H W E R I N , 1952; P I E C H O C K I , 1967] bringen keine wesentlichen Änderungen oder Verbesserungen althergebrachter Methoden. Die letzte uns bekannte Einzelmitte i lung stammt von P E T E R S [1956]. Obwohl seine Methode wesentliche Verbesserungen hinsichtl ich Geruchbelästigung und Farberhaltung br ing t , sei darauf hingewissen, dass die Herstellung der Flüssigkeit re lat iv langwierig erscheint und die Präparate an der Frischl u f t , also während des Präpariervorganges, austrocknen und ihre Farbe verlieren.

Für die Herstel lung von Einzelpräparaten sind alle diese Methoden sicherlich ausreichend, das Ergebnis bei der F i x a t i o n ganzer Leichen ist jedoch keineswegs be-

1 W i r möchten H e r r n Dr . P E T E R S I M M O N S B E R G E R v o m Zoologischen I n s t i t u t der Universität Salzburg recht herzlich danken für die rasterelektronenmikroskopischen Bilder.

P U T Z et al. 395

friedigend. Bis zum Jahre 1968 wurde am Anatomischen I n s t i t u t der Universität Innsbruck als Konservierungsmittel ein Gemisch von 10 %igem Formol m i t A lkoho l verwendet. Die Nachteile dieser bezüglich des Fixationsergebnisses guten Methode sind bekannt [vg l . auch B A N D M A N N und D O H N , 1967] und führten bei verschiedenen Angestellten des Anatomischen Inst i tutes u n d vereinzelt auch bei Studenten zu lokalen sowie systemallergischen Schädigungen. Abgesehen von der oft k a u m erträglichen Geruchsbelästigung mussten wir zudem das massenhafte Auf t re ten von Pilzen sowohl auf den Präparaten als auch i n der Konservierungsflüssigkeit feststellen. Aus diesen Gründen griffen w i r i n der Folgezeit auf die alte Hochstetter-sche Methode zurück, die auch von P E R N K O P F [1928] empfohlen w i r d . Die Leichen werden dabei m i t einer 4 %igen Lösung von Karbolsäure in j iz ier t u n d anschliessend einige Monate i n derselben Flüssigkeit aufbewahrt . Diese A r t der Präparation liefert sehr gute Ergebnisse bei mageren Leichen, schlecht ist der Erfo lg allerdings bei fetten I n d i v i d u e n , wie sie in der heutigen Zeit mehr und mehr die Grundlage unseres Seziermaterials bi lden. Besonders störend macht sich die Tatsache bemerkbar, dass die Konsistenz der Brust - und Bauchorgane bisweilen stark herabgesetzt w i r d . Überdies neigt die Muskulatur dazu, während des Präpariervorganges rasch auszutrocknen. Sie verfärbt sich dabei braunschwarz. Leider bemerkten w i r auch beim Umgang m i t karbol f lx iertem Mater ia l immer wieder das Auf treten verschiedener gesundheitlicher Schädigungen. Zwar t ra ten keine allergischen Erkrankungen auf, bei längerem K o n t a k t m i t dem Leichenmaterial machten sich jedoch Parästhesien vornehmlich i m Versorgungsbereich des N . ulnaris und Hautveränderungen («rauhe Hände») sehr störend bemerkbar. Diese Schwierigkeiten Hessen sich allerdings durch die Verwendung von Handschuhen bzw. Handcremen vermeiden. W i r mussten jedoch nach kurzer Zeit feststellen, dass auch beim karbol f ixierten Mater ia l eine starke Verpi lzung auf trat .

Aus al l den obengenannten Gründen haben wir uns n u n entschlossen, neue Fixations- bzw. Konservierungsmethoden ausfindig zu machen u n d zu erproben. Da die Verpi lzung auch m i t diesen neuen Fixationsflüssigkeiten nicht auszuschalten war, mussten die Versuche nach kurzer Zeit vorübergehend eingestellt werden. Es erschien uns daher als vorrangiges Problem, über die Natur dieser so widerstandsfähigen Pilze K larhe i t zu schaffen u n d Möglichkeiten ihrer Bekämpfung zu finden. Erst dann ist es s innvol l , neue Fixationsmethoden für den Präpariersaalbetrieb zu erproben.

U m einen möglichst repräsentativen Uberbl ick über die beteiligten Organismen zu erhalten, wurden von 53 verschiedenen Stellen Proben genommen, so ζ. B . von der Oberfläche und aus der Tiefe der Flüssigkeit der Leichenbottiche, von Präpariertischen, von Abdeckplanen u n d Leichensäcken sowie von Leichenteilen selbst. Dabei wurden sowohl Stücke von Leichensäcken u n d Abdeckplanen auf drei verschiedene Nährböden übertragen (Bacto-Standard-Nährboden, Di fco ; b-Nährboden [ M O S E R , 1958]; Malzextrakt -Agar , M A I [ D R E W S , 1968]) als auch Direktabimpfungen von gut versporten Myzelrasen auf die genannten Nährböden durchgeführt.

V o n 53 Proben zeigten 28 einwandfreies Wachstum, 22 davon konnten rein gezüchtet werden. I n diesen 22 rein erhaltenen K u l t u r e n wurden vier verschiedene Organismen festgestellt, drei Euascomycetidae: Aspergillus versicolor, Penicillium cyclopium, Penicillium frequentans u n d ein Deuteromycet : Cladosporium sphaero-spermum. Die routinemässige Überprüfung der vorbest immten Pilze wurde v o m Centraalbureau voor Schimmelcultures, Baarn (Hol land) durchgeführt.

396 P U T Z et al.

Abb.l. A. versicolor ( V u i l l . ) Tiraboschi auf Malzagar (L ichtmikroskop) . L inks X75. Rechts X650.

A. versicolor ( A b b . l ) ist eine der am weitesten verbreiteten Aspergillusarten und wurde bisher an allen untersuchten Bodenstandorten gefunden. Die A r t wurde auch i m Zusammenhang mit der Verrottung von militärischer Ausrüstung in den Tropen mehrfach beschrieben. Die Kolonien werden nach T H O M und R A P E R [ 1 9 4 5 ]

auf Czapek-Agar zunächst weiss, dann leicht orange-gelblich und schliesslich erbsengrün bis graugrün. Die Unterseite der K u l t u r e n k a n n sich von gelblich über orange bis rötlich verfärben. Das lineare W a c h s t u m auf Malzagar wird von D O M S C H und G A M S [ 1 9 7 0 ] mit

2 0 m m in 1 0 Tagen bei 2 0 °C angegeben. Diese Autoren weisen auch darauf hin , dass dieser Pilz ebenso wie P. frequentans Weichmacher angreifen k a n n , eine Tatsache , die besonders i m H i n b l i c k auf die Aufbewahrung und Konservierung von L e i c h e n in Kunststoff-bottichen und dickwandigen Plastiksäcken von Bedeutung sein könnte. Obwohl wir mehrfach grosse und gut versporte Aspergillus-rasen an der Innenseite der dicht verschweissten Leichensäcke beobachteten ( A b b . 2 ) , konnten wir dennoch auch durch eingehende Untersuchungen i m Rasterelektronenmikroskop keinen klaren B e weis für eine Veränderung der Oberfläche des Plast ikmaterials erbringen. Auffallend war an einigen Proben das Auftreten einer gallertartigen Schicht zwischen Pilzrasen und Plastikoberfläche, deren Herkunft von uns nicht geklärt wurde ( A b b . 3 ) . A. versicolor wurde im Zusammenhang mit Mykosen bei Haust ieren relativ häufig isoliert, an Keratomykosen scheint er nicht so häufig beteiligt zu sein [ G I N G R I C H , 1 9 6 2 ] . I m Gegensatz zu anderen Vertretern der Gattung ist seine Pathogenität nicht erwiesen. Speziell i m H i n b l i c k

Konservierungsflüssigkeiten i m Präpariersaal 397

Abb.2. Verpilztes Plast ikmater ia l (Leichensack). Rechts der dichte Pilzrasen; l inks Unebenheiten der bewachsenen Plastikoberfläche. Rasterelektronenmikroskop, nach Kohlekegelvorbekernung (90°) u n d anschliessender Goldkegelbeschattung (45°). X9400.

auf diese fakultativ pathogenen Vertreter muss darauf hingewiesen werden, dass alle diese Pilze als Saprophyten häufig in menschlichem und tierischem Untersuchungsmaterial nachgewiesen werden können.

P . cyclopium (Abb. 4 ) stellt eine der verbreitesten Penici l l ium-arten dar. Der Pi lz wurde bisher neben den üblichen Vorkommen in Boden und L u f t auch in stark verschmutzten Binnengewässern bis zu Euli toralstandorten i m Meer nachgewiesen [ D O M S C H und G A M S ,

1 9 7 0 ] . Die Kolonien sind nach R A P E R und T H O M [ 1 9 4 9 ] zunächst

bläulich oder grünlich, die Farbtöne verstärken sich mit zunehmendem Alter in ein bläuliches Graugrün. Die Unterseite ist zunächst farblos (kann es dauernd bleiben) und wird i m Alter (nach 2-3 Wochen) gelblich bis orangebraun. Die Oberfläche der Kolonien er-

398 P U T Z et al.

Abb. 3. Teilweise abgelöste P i l zku l tur . Hyphenabdrücke auf der gal lertart igen Substanz zwischen Pilzrasen u n d Plastikoberfläche. Rasterelektronemikroskop, K r i t i s c h p u n k t t r o c k n u n g , Kohlekegelvorbekernung (90°) u n d anschliessende Goldkegelbeschattung (45°), X5500.

scheint mehlig bis granulär. Die Penicil l i sind unsymmetrisch verzweigt, die Konidiphoren zeigen meistens eine granuläre Oberfläche. Das W a c h s t u m beträgt auf Czapek-Agar bei 2 0 °C 4 5 - 5 0 m m i n 1 2 - 1 4 Tagen. Dieser Pi lz ist an einen besonders weiten p H - B e r e i c h anpassungsfähig, er k a n n i n einem Milieu von p H 2 - 1 0 sowie in sauerstoffarmer Atmosphäre gut gedeihen. E r k a n n organische Säuren in Mengen produzieren, die ausreichen, u m Metalle zu korrodieren.

P. frequentans (Abb. 5 ) ist ebenso weltweit verbreitet , bevorzugt jedoch n a c h D O M S C H und G A M S [ 1 9 7 0 ] saure Waldböden. V o n

H I R T E [ 1 9 6 1 ] konnte er auch auf den Berl iner Rieselfeldern isoliert

Konservierungsflüssigkeiten i m Präpariersaal 399

Abb. 4. P. cyclopium (Westl.) auf Malzagar (L i chtmikroskop) . L i n k s X550. Rechts X800.

Abb. 5. P. frequentans (Westl.) auf Malzagar (L ichtmikroskop) . L i n k s X500. Rechts X750.

Abb. 6. C. sphaerospermum (Penz.) auf Malzagar (L i chtmikroskop) . L inks X450. Rechts X650.

400 P U T Z et al.

werden. Hinsicht l ich des Verhaltens gegenüber Plastikoberflächen zeigt er ähnliche Eigenschaften wie A, versicolor. Die Kolonien erscheinen zunächst grünlich und gehen dann in ein mittleres bis dunkles G r a u oder Grün über. Die Unterseite zeigt Spuren von gelborange bis mittelbraun. Die Kolonien sind auf der Oberseite sehr deutlich zoniert und radiär gefurcht. A u f Czapek-Agar wachsen die Kolonien relativ schnell , 5 5 - 6 0 m m bei 20 °C in 12-14 Tagen.

C. sphaerospermum (Abb.6) ist ebenfalls eine weltweit und häufig vorkommende A r t , die v o n verschiedensten Materialien und S t a n d orten isoliert wurde, gelegentlich auch von Menschen und H a u s tieren [ E L L I S , 1971]. I m Gegensatz zu anderen Vertretern der F o r m gattung ist der Pi lz jedoch noch nicht aus mykoseverdächtigem Material gezüchtet worden und scheint auch keine für Warmblüter toxischen Endotoxine zu bilden. Die Kolonien werden olivgrün bis ol ivbraun, die Oberfläche erscheint mehlig, oft leicht aufgerauht. Die Unterseite der Kolonien wird auf Malzagar dunkelgrün bis schwarz. Uber die durchschnittliche Wachstumsgeschwindigkeit unter standardisierten Bedingungen konnten wir in der L i t e r a t u r keine Angaben finden.

E s ist durchaus wahrscheinlich, dass durch die Reinzüchtung der beschriebenen vier Pilze andere, weniger anpassungsfähige und nur vereinzelt auftretende Pilze verdrängt wurden. Die oben beschriebenen Erscheinungen dürften jedoch in der Hauptsache auf die reingezüchteten A r t e n zurückzuführen sein. Entsprechend der Produktion einer Vielfalt von verschiedenen Fermenten und E n z y men und der damit verbundenen Flexibilität der Ernährungsweise wird deutlich, dass diese Pilze - einmal sesshaft geworden - auch allgemeinen Desinfektionsmassnahmen gegenüber sehr widerstandsfähig sind. E i n e einmal stattgefundene massive Infektion von Räumlichkeiten, Geräten usw. ist nur schwer und nur mit gezielten Massnahmen wieder rückgängig zu machen.

E s ist daher unerlässlich, Mittel und Methoden zu finden, das «hospitalismusartige» Auftreten dieser Pilze im Präpariersaalbetrieb zu verhindern. Als nächster Schritt zu diesem Ziel soll ein Zusatz zur Konservierungsflüssigkeit gefunden werden, der eine gute fungista-tische bzw. fungizide W i r k u n g gegenüber diesen Pi lzen zeigt, die Fixierungseigenschaften nicht beeinträchtigt u n d keine wie auch immer gearteten Gesundheitsschädigungen in den verwendeten

Konservierungsflüssigkeiten i m Präpariersaal 401

Mengen verursacht . Darüber wird in einer weiteren Mitteilung berichtet werden.

Zusammenfassung

Nach einem historischen Überblick w i r d auf gesundheitliche Schädigungen, unbefriedigende Fixationsergebnisse u n d immer wieder auftretende starke Verpilzungen, die auch bei Versuchen m i t neuen Fixationsflüssigkeiten nicht auszuschalten waren, eingegangen. Aus diesem Grunde wurden zunächst mykologische Untersuchungen angestellt u n d dabei v ier Pi lzarten i n R e i n k u l t u r gezüchtet.

Summary

After a historical survey the authors refer to the problems w i t h t rad i t i ona l preserving fluids, such as unsatisfactory fixation effects, various skin and generalised allergic diseases and, above a l l , the frequent occurrence of fungus infections of the dissection material . Because of th is , mycological studies were made and revealed four different species of fung i which were prevalent i n the dissection mater ia l .

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Eingegangen 7. Oktober 1973

Adresse des A u t o r s : D r . R E I N H A R D P U T Z , Anatomisches I n s t i t u t der Universität Innsbruck, Müllerstr. 59, A-6010 Innsbruck (Österreich)