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GlycoScopeTM
Plateforme analytique haut débit de glycoanalyse basée sur l'utilisation de lectines
Mars 2012
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Fondée : 2000 (TASE:PRCG)
Employés: 26
Location : Ashdod, Israel
Buts : Biopharmaceuticals Biomarkers/Diagnostics
Glyco-Pharma Stem Cells
IP : 13 familles de brevets Obtention de 25 brevets
lectines array, algorithmes & applications)
Compagnie de biotechnologie offrant des solutions analytiques et
thérapeutiques basées sur les glycanes pour les industries
pharmaceutiques, de diagnostiques et de recherches
Plateformes TechnologiquesPlateformes Technologiques
Procognia Israel Ltd.
AnalytiqueAnalytique
DiagnostiqueDiagnostique
ThérapeutiqueThérapeutiqueStem CellsStem Cells
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GlycoScopeTM
Glycoanalyse haut débit, quantitative et précis avec des
kits prêt à l'emploi
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GlycoScopeTM : Technologie utilisable du clonage à la production. Permet l'optimisation des
conditions de culture
GlycoScopeTM permet le développent et la production des molécules plus rapide et plus efficace
Quality by Design :
• Selection du clone et du milieu de culture optimaux
• Selection des conditions de cultures optimales
Permet de cibler le profil désiré de glycosylation très rapidement
Réduction des temps et des coûts de développement économie $MM
Augmente la probabilité de succès pour le passage à la nouvelle phase de développement
Mise sur le marché + rapide ~$80M/mois en vente annuelle pour un produit à $1B
Réduit le ratio de déchets jusqu'à la production
Do It Right First Time
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Les besoins de Glycoanalyse des
industries pharmaceutiques
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La Glycosylation joue un rôle important dans les produits biopharmaceutiques
La Glycosylation affecte les protéines: Stabilité et demi-vie dans le sérum (e.g. Acide Sialique)
Pharmaco-cinétiques et pharmacodynamiques (PK/PD) Immunogénicité (e.g. Gal α)
Activité biologique
Les glycanes dans les Ac affectent la liaison au réception de la Fc ,:
– Affecte les bioactivitées ADCC and CDC; le facteur
critique étant l'activité anti-tumorale
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Les facteurs procédé qui affectent la Glycosylation du produit
Facteurs clés dans la production de molécules biologiques Lignée cellulaire Clone Composition du milieu Conditions de culture
Type de Bioreacteur Température, PO2, pH… Nutriments Durée de la culture
Conditions de purification
Affecte la synthèse des carbohydrates
sur les protéines
Hétérogénéité
InconsistenceBiosimilaires: des Glycosylations différentes donnent des produits
différents non souhaités
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Plateforme haut débit de Glycoanalyse pour le développement de produits Biopharmaceutiques
GlycoScopeTM
A partir de glycoprotéines intactes A partir de glycoprotéines intactes IgG et non-IgG IgG et non-IgG
Haut débit (1-96 échantillons/essai) Haut débit (1-96 échantillons/essai)
Faibles concentrations (0.1-15µg/ml) Faibles concentrations (0.1-15µg/ml)
Rapide Rapide
Faible volume Faible volume
Analyse complète et automatique des données 1mn/E Analyse complète et automatique des données 1mn/E
Aisée à utiliser Aisée à utiliser
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GlycoScopeTM
Matrices de Lectines
Concept technologique intégré
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Procognia’s Lectin-Array concepte technologique
Glc
NA
c0Glc/man comple
xGal/GalNAcα-Galβ-Gal N-
linked
core
Sia
lic a
cid
untreatedSialic acid removed
1
2
3
4
5N
orm
aliz
ed inte
nsi
ty
Douzaines de lectines avec spécificités
complémentaires et de chevauchements
Profils sensibles à de
très faibles changements
dans les structures de
glycane
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Lectines ArrayArray scan
Empreinte de la
protéine
Glycoprotéine
Détection
Binding
Fonctionnement du GlycoScopeTM
Résultats en 4 heures
Structure glycanique
Base de connaissance
algorithmes
Base de connaissance
algorithmes
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GlycoScopeTM
Value Proposition
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GlycoScopeTM vs. HPLCComparison technique
GlycoScopeTMHPLCApplication IgG et non-IgGIgG et non-IgG
Protocole d'exécutionSimple ; travail de technicien
Complexe et nécessite une expertise pour la réalisation de la mesure et son interprétation
Temps d'obtention des résultats pour 96 échantillons
1 jour de travail2-6 jours pour préparation des échantillons et LC/MS + 16 jours pour analyse des données
Temps de réalisation2-3 heures>10 jours
Quantité d'échantillon2µg20 - 50µg
Nombre d'échantillon traités/essai
Jusqu'à 9610-20
Temps d'analyse< 1,5 minute (analyse des données automatique)
1,5 hr
Equipement nécessaireSlide ScannerHPLC/MS
Coût direct/échantillon(Matériels +main d'oeuvre)
$150-$200/échantillon$1,000-1,500 pour IgG, $2,000-$4,000 pour protéines complexes
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Pour anticorps monoclonaux
Efficacité du GlycoScopeTM démontrée: Performance Comparable à l'HPLC
Structure Glycoscope HPLC Glycoscope HPLC Glycoscope HPLC
high mannose 8 ±2 6.8 3 ±1 1.4 4 ±1 5.1
complex 92 ±2 93.2 97 ±1 98.6 96 ±1 94.9
G0 76 ±4 76.5 78 ±4 78.8 34 ±2 34
G1 22 ±3 19.9 20 ±4 17.5 49 ±1 43
G2 2 ±1 3.6 1 ±0 3.7 17 ±2 24
Core Fucose 93 ±6 90.5 98 ±5 94.2 85 ±6 93
Antennae termini
Sialic acid 2 ±0 0-3.7 3 ±0 2.4-3.6 1 ±0 6
Gal a1-3 Gal 1 ±1 .n.d ±0 0 .n.d ±0 0 0
GalNAc 0 ±0 .n.d ±0 0 .n.d ±0 0 0
# of experiments 18 11 5
% Abundance ± SD
Mab X Mab Y Mab Z
Validation parameter
Accuracy
Repeatability (CV) 0.3-1.7% (1) 2.6-6.45% (2)
Reproducibility (CV) 0.61-4.35 % (1) 7.2-19.6 % (2)
Linearity (RSQ)
Limit of Quantitation
95-108%
Validation Result
0.94-0.99
5%
(1) Épitopes >20% d'abondance(1) Épitopes >20% d'abondance
(2) Épitopes <20% d'abondance(2) Épitopes <20% d'abondance
15
LeGlycoScopeTM montre des résultats comparables à
l'HPLC sur toute la plage d'abondance des glycanes
20 échantillons de 3 différents IgGs testés au cours d'un procédé de dévelopement par le GlycoScope et l'HPLC
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GlycoScopeTM vs. HPLCcomparatif
GlycoScopeTMHPLCApplications1. Screening de Clones
2. Optimisation Milieu3. Développement à l'échelle Labo des
conditions de culture4. Développement purification échelle
Labo5. Scale up purification échelle labo6. Contrôle procédé
1. Non applicable2. Non applicable3. Non applicable 4. Applicable si purifié 5. Applicable si purifiés6. Non applicable
Coût direct Faible : Nombreux échantillons/essai faible coût d'obtentionPlus de données pour un moindre coût
Très fort : Peu d'échantillons/essai à un coût de mise en œuvre 5-50 supérieur
Temps pour résultats et
capacité d'analyses
Résultats même jour & haute capacité de glycoanalyse
Prise de décision améliorée et efficace effectué pendant le développement
Développement + rapide et meilleure qualioté produit Gains en mois & en $Millions
Plusieurs jours & analyse peu nombreuses
Prise de décision limitée et en retard à un moment critique du développement et de la production
Gros risques de devoir ré-itérer les phase de développement et
beaucoup de perte
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GlycoScopeTM vs. HPLCComparison
Résultats de comparaison additionnels par rapport à l'HPLC sont présentés en
appendix B
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GlycoScopeTM: Une technologie unique qui permet
d'offrir une grande valeur au développement pré-clinique
L'utilisation du GlycoScopeTM (GS) pour la sélection des clones, des milieux et des
conditions de culture permet de réaliser la struture de glycosylation désirée en
parralèle avec une productivité forte, en moins de temps et à moindre coût
Do It Right the First Time
Economise temps et coût de développement 3-9 mois
Haut débit et réponse rapide Réponse en temps réel
Sur le marché + rapidement $80M/mois pour produit de $1B/an
Développement Procédé
2 ans + ~ 1 an d'itérations
2 ans - Minimise les itérations
Without GS
With GS
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GlycoScopeTM est une technologie unique qui permet
de haute valeur ajoutée pour la production
GlycoScopeTM permet de piloter le
procédé en temps réel pour assurer la
qualité et la consistance du produit
Pilotage et réponse en temps réel Evite le rejet de votre production
Réduit le ratio d'échecs économie de $KK- $MM
Les changements de Glycosylation peuvent être détectés au cours d'une de la culture par le GlycoScopeTM
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La précision et la répétabilité du GlycoScopeTM ont été validés avec des
douzaines de glycoprotéines et des milliers d'échantillons au cours des phases
de développement et de prodcution
– Avastin, Humira, Rituxan, Erbitux, Herceptin, Remicade, FSH, EPO, FVII, FVIII, et
plus envore
La plateforme GlycoScopeTM est basée sur des douzaines de lectines, couvrant
une large variété de glycanes et ont été vérifiés par HPLC. Cette plateforme a
été développée en utilisant une base de plus de 80 glycoprotéines et
glycovariants ce qui explique sa grande capacité à identifier les variations de
glycosylation, même très faible.
Procognia a été impliquée avec succès pour de nombreux projets de
développement d'Ac et de complexes protéiques :
– Biosimilaires et nouvelle molécules avec des compagnies comme Teva, Ferring et
d'autres, ainsi que nombreux instituts de recherche
GlycoScopeTM est un outil analytique de Glycoanalyse bien validé
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Quality Control
Procognia est certifié ISO 13485
Les lectines arrays sont produits au standards de l'assurance qualité pharmaceutique
– SOP’s approuvées
– Contrôle qualité
– Documentation (enregistrement des lots, des modifications de contrôle etc.)
Les essais de Glycoanalyse incluent:
– Un standard de calibration
– Un standard interne
– Des critères d'acceptation et de rejet des analyses
Les équipements de calibration et de maintenance
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EMEA
La plateforme de glycoanalyse haut débit GlycoScopeTM a été présentée en Octobre 2008 au BMWP
FDA
La plateforme de glycoanalyse haut débit GlycoScopeTM a été présentée en Novembre 2008 à la FDA
Regulatory Authorities
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GlycoScopeTM
Etudes de cas
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GlycoScopeTM Augmente les capacité de sélection du bon clone
Est ce que plus grand
producteur est le meilleur
clone ?
GlycoScopeTM ajoute une nouvelle dimension à votre sreening de
clones Surveille la glycosylation de votre molécule pendant le
screening Sélectionne le clone optimal (la bonne Glycosylation + Productivité) et augmente votre
succès en réduisant vos risques
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GlycoScopeTM Optimisation du milieu de culture
Effect of Media on Glycosylation ProfileCHO-S Clone 83D1(2H12)
0
20
40
60
80
100
120
Comple
x
CoreF
ucos
e
GalAlph
a
G0
G1
G2
Man
High
SialicA
cid
Glaycan Epitope
% A
bu
nd
an
ce
Comercial Reference Comercial Reference H12 CD CHO-1 H12 CD CHO-1 H12 ExCell-2
H12 ExCell-2 H12 ExCell-11 H12 ExCell-12 H12 ExCell-16 H12 IS CHO-13
H12 IS CHO-13 H12 IS CHO-3 H12 IS CHO-3
Clone CHO poussant dans différents milieux SFM montre des différences dans les concentration de Galactose
* Les barres de même couleur représentent le même échantillon testé en duplicata indépendant Les barres vertes représentent le profil de glycosylation de l'IgG générique de référence
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Effect of Media on Glycosylation Profile CHO-DG44 Clone 442D5
0
20
40
60
80
100
120
Complex CoreFucose GalAlpha G0 G1 G2 ManHigh SialicAcid
Glaycan Epitope
% A
bu
nd
ance
Comercial Reference D5 ExCell-10 D5 ExCell-10 D5 ExCell-4 D5 ExCell-7
D5 ExCell-7 D5 ExCell-15 D5 ExCell-15 D5 CD CHO-14 D5 CD CHO-9
D5 CD CHO-9 D5 Hyclone-5 D5 Hyclone-5 D5 Hyclone-8
Exemple BEffet du milieu sur le profil de Glycosylation
Clone CHO-DG44 poussant sur different SFM montre des différences des contenus en Galactose, High Mannose et Core Fucose
* Les barres de même couleur représentent le même échantillon testé en duplicata indépendant Les barres vertes représentent le profil de glycosylation de l'IgG générique de référence
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Le GlycoScopeTM permet une sélection efficace
du meilleur clone et milieu de culture
Selection of Clones and Media Combination
0
20
40
60
80
100
120
Comple
x
CoreF
ucos
e
GalAlph
a
G0
G1
G2
Man
High
SialicA
cid
Glaycan Epitope
% A
bu
nd
an
ce
Comercial Reference Comercial Reference H12 CD CHO-1 H12 CD CHO-1
H12 IS CHO-3 H12 IS CHO-3 D5 ExCell-7 D5 ExCell-7
C2 CHO CD-6 C2 CHO CD-6 H12 ExCell-12
Différents Clones montrent des différences de contenu en Galactose, High Mannose et Core Fucose
* Les barres de même couleur représentent le même échantillon testé en duplicata indépendant Les barres vertes représentent le profil de glycosylation de l'IgG générique de référence
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GlycoScopeTM Permet de sélectionner les conditions optimales de cultures
Three representative bioreactor runs under different conditions
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Cible la Glycosylation désirée pendant la culture
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GlycoScopeTM Permet de sélectionner les conditions optimales d'ajout de nutriments
Analyse de clusters
0 20 40 60 80 100 120
0 5
1015
2025
3035
40
20 30 40 50 60
70 80 90100
TiterG
0
Ma
nH
igh
Cluster 3DG44 86 C2 0 CD_CHO 14 Temp 33 0 Feed 7 14 Titer 81
D5 86 ExCell 50 Temp 36.5 100 Feed 13 36 G0 42CHO5 14 H12 14 HyClone 21 Feed 20 50 ManHigh 6
E6 0 IS_CHO_CD 14 cluster size 14
Cluster 4DG44 65 C2 12 CD_CHO 29 Temp 33 76 Feed 7 26 Titer 34
D5 53 ExCell 0 Temp 36.5 24 Feed 13 65 G0 78CHO5 35 H12 29 HyClone 18 Feed 20 9 ManHigh 9
E6 6 IS_CHO_CD 53 cluster size 34
Cluster 5DG44 19 C2 8 CD_CHO 31 Temp 33 77 Feed 7 38 Titer 68
D5 12 ExCell 0 Temp 36.5 23 Feed 13 31 G0 81CHO5 81 H12 38 HyClone 12 Feed 20 31 ManHigh 6
E6 42 IS_CHO_CD 58 cluster size 26
Titre Haut – faible G0
Faible titre - Optimale
G0
combination optimale en titre et G0
Screening de 230 échantillons
Etude de cas additionnels sont présentés en Appendix C
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Conclusions des études de cas
Le type de clone et les paramètres procédé, milieu et conditions de culture ont un impact évident sur la productivité et le profil de glycosylation de la protéine : Ils interagissent en plus entre eux
Par conséquent, afin de parvenir à un processus
optimal, productivité la plus élevée et profil de
glycosylation désiré, il est important d'évaluer, à un
stade très précoce de la mise au point, une
matrice de variété des conditions pour surveiller le
profil de glycosylation en plus de la productivité
Par conséquent, afin de parvenir à un processus
optimal, productivité la plus élevée et profil de
glycosylation désiré, il est important d'évaluer, à un
stade très précoce de la mise au point, une
matrice de variété des conditions pour surveiller le
profil de glycosylation en plus de la productivité
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GlycoScopeTM Kit & Services
Services de Glycoanalyse
Optimisation de la préparation de l'échantillon
et du domaine d'application
Préparation et test d'échantillons de Glyco
variant
Ajustement des algorithmes d'analyse de la
Glycoanalyse (si nécessaire)
Libération définitive du protocole de dosage
Qualification test
Formation des utilisateurs
Appui technique et analytique
Générique & Validé
Kit pour MAbs
Dévéloppement du kit
(non-MAb)
Fournitures des kits
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GlycoScopeTM
en résumé
GlycoScopeTM est la méthode de glycoanalyse la plus rapide, la plus facile et
efficace sur le marché pour optimiser les processus de développement
biologique tout comme assurer un meilleur contrôle du manufacturing
Une surveillance étroite de la glycosylation produit tout au long du
développement du procédé peut augmenter de manière significative la
probabilité de réussite réduction significative des coûts et des délais de
commercialisation résultat gain potentiel se chiffrant en MM $
La surveillance en temps réel de la glycosylation des produits en cours de
production (IPC) permet d'augmenter le niveau de contrôle et peut réduire les
résultats incohérent et le ratio de déchets en cas de dysfonctionnement ou
d'écarts par rapport aux valeurs de consigne définies
GlycoscopeTM increase your chance to succeed
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Thank You
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Appendix A
Glycoanalyse Centre d'Excellence
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Sur la base de son équipe scientifique hautement qualifiée et d'une vaste expérience
dans les défis très complexe de la glycosylation, Procognia propose une large
gamme de solutions pour répondre aux divers besoins de glycoanalyse :
Analyse GlycoScopeTM
Haut débit
IgG et non-IgG
Faibles concentration & volume
Vérifié par HPLC (MALDI)
N & O glycanes
Détermination Ratio NANA/NGNA
Dossier validation complet
Glycoanalysis Centre d'ExcellenceOne Stop Shop pour un large éventail de besoins Glycoanalyse
• Développement procédé
• Optimisation milieu
• Contrôle en ligne Manufacturing
Etudes de comparabilité
• Discovery et Recherche
• Structure - Activité des profils de
glycoproteine
39
Appendix B
Platformed Procognia’s GlycoScopeTM
Février 2012
Comparaison avecl'HPLC
40
mAb3/581
HPLC
mAb3/581
GS
mAb3/582
HPLC
mAb3/582
GS
mAb3/382
HPLC
mAb3/382
GS
mAb3/386
HPLC
mAb3/386
GS
mAb3/397
HPLC
mAb3/397
GS
N-linked
%
%
%
%
%
%
%
%
%
%High Mannose
2.603.003.554.363.30
Complex 97.410097.010096.59595.79496.7100
G071.57570.87474.87977.38177.378
G120.52320.724191612.81215.420
G22.823.022.814.102.61
Sialic Acidn.d1n.d21.121.321.32
Gal a1-3 Gal n.d1n.d2n.d0n.d0n.d0
Core Fucose95.010094.5100938590.77991.4100
The GlycoScopeTM Demonstration de résultats Comparables à ceux obtenus par HPLC
Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés
aux résultats obtenus par HPLC
41
mAb3/401
HPLC
mAb3/401
GS
mAb3/402
HPLC
mAb3/402
GS
mAb3/405
HPLC
mAb3/405
GS
mAb3/406
HPLC
mAb3/406
GS
mAb3/410
HPLC
mAb3/410
GS
N-linked%%%%%%%%%%
High mannose
2.83443.544.347.56
Complex 97.297969696.59695.79692.594
G074.97973.18079.68178.28074.779
G114.91715.21510.51410.71512.115
G24.71614.914.412.51
Sialic Acid1.32n.d31.521.821.7
Gal a1-3 Gal
n.d0n.d0n.d0n.d0n.d0
Core Fucose
919790.88891.88389.7828690
Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés
aux résultats obtenus par HPLC
The GlycoScopeTM suite
42
The GlycoScopeTM suite
Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés aux résultats obtenus
par HPLC pendant le procédé de développement sur un an (N=22)
Date Complex G0 G1 G2 GalAlpha ManHigh SialicAcid 04-Mar-10 94.2 70.7 21.8 1.7 2.1 5.8 3.225-Mar-10 91.8 63.2 25.9 2.7 2.5 8.2 4.106-Apr-10 93.2 70.6 21.1 1.6 1.7 6.8 1.825-Apr-10 93.1 73.0 18.9 1.2 1.1 6.9 2.426-Apr-10 94.6 65.0 26.8 2.8 2.6 5.4 4.303-May-10 94.6 67.7 24.6 2.2 1.9 5.4 3.405-May-10 95.1 76.1 17.9 1.1 1.4 4.9 2.809-May-10 93.4 69.8 21.9 1.7 3.0 6.6 1.909-May-10 94.0 74.4 18.5 1.2 1.6 6.0 1.212-May-10 92.3 71.6 19.4 1.3 1.5 7.7 1.707-Jul-10 95.5 69.0 24.3 2.2 1.9 4.5 2.508-Jul-10 94.0 64.9 26.4 2.7 1.6 6.0 3.105-Oct-10 92.9 72.2 19.5 1.3 1.3 7.1 2.506-Oct-10 92.3 71.4 19.6 1.3 0.9 7.7 2.101-Nov-10 93.4 70.2 21.6 1.7 1.8 6.6 2.603-Nov-10 91.4 68.9 20.9 1.6 1.5 8.6 2.403-Nov-10 92.3 71.4 19.6 1.3 0.3 7.7 2.326-Dec-10 94.6 70.0 22.8 1.9 3.2 5.4 2.130-Jan-11 92.3 72.4 18.7 1.2 1.2 7.7 2.421-Feb-11 92.1 68.1 22.1 1.8 1.1 8.0 1.816-Mar-11 93.9 72.4 20.1 1.4 1.9 6.1 2.116-Mar-11 92.7 72.4 19.0 1.3 2.0 7.3 2.5
Average 93.3 70.2 21.4 1.7 1.7 6.7 2.5STDV 1.1 3.1 2.7 0.5 0.7 1.1 0.7HPLC Results 93 71 19 3 0 7 1Difference 0.3 -0.8 2.4 -1.3 1.7 -0.3 1.5
43
Ref. 1
HPLC
Ref. 1
GS
mAb2/3
HPLC
mAb2/3
GS
mAb2/4
HPLC
mAb2/4
GS
mAb2/5
HPLC
mAb2/5
GS
mAb2/6
HPLC
mAb2/6
GS
N-linked%%%%%%%%%%
High mannose
1.432.433.111.612.32
complex 98.69796.59796.59996.89996.798
G077.78071.37169.17063.45773.465
G117.316222523.62728.93620.829
G23.614.234.236.164.43
Sialic Acid2.41n.d1n.d2n.d4n.d4
Gal a1-3 Gal
n.d1n.d1n.d0n.d1n.d1
Core Fucose
94.28088.99693.1951.341.17
The GlycoScopeTM Suite (Customer B)
5 échantillons de Mab#2 testés par le GlycoScopeTM et comparé à l'HPLC
44
The GlycoScopeTM Résultats comparables avec l'HPLC (Customer C)
HPLC GlycoScope HPLC GlycoScope HPLC GlycoScopeHM 4.5 4.0 16.0 13.0 4.6 8.0
complex 95.5 96.0 84.0 87.0 95.4 92.0G0 80.1 85.0 45.6 45.0 58.3 60.0G1 11.5 11.0 27.6 35.0 28.3 28.0G2 4.2 0.0 10.4 7.0 9.1 3.0SA 2.6 1.0 3.8 1.0 4.6 1.0
Gal Alpha n.d 2.0 n.d 5 n.d 3CoreF 92.8 90.0 79.4 67.0 91.8 78.0
IgG 1 Sample 22 IgG 1 Sample 27 Reference 1 lot#B3354B01
HPLC GlycoScope HPLC GlycoScope HPLC GlycoScopeHM 2.8 3.0 3.8 1.6 1.4 3.3
complex 97.2 97.0 96.2 98.4 98.6 96.75G0 37.0 40.0 39.1 44.6 77.7 80.0G1 41.4 45.0 42.2 43.3 17.3 15.9G2 15.0 12.0 15.6 10.5 3.6 0.9SA 7.3 0.0 6.9 2.8 2.4-3.6 1.3
Gal Alpha n.d 3 n.d 1.3 n.d 0.9CoreF 91.6 88.0 93.2 98.3 94.2 79.7
Epitope
Epitope
IgG 1 Sample 12 IgG 1 Sample 16 IgG 1 Sample 20
Resultats de 6 échantillons d'IgG#1 sous différentes conditions de culture
testés pour customer C par GlycoScopeTM et comparés à l'HPLC
Conditions
de culture
montrent des
différences en
G0 détectées
GlycoScope et
confirmées par
HPLC
Les signaux des Lectines sont en corrélation linéaire avec la
concentration de l'échantillon et comparable à l'HPLC (Customer D)
45
0
5000
10000
15000
20000
Com
plex
(1)
Com
plex
(3)
Com
plex
(4)
Glc
NA
c (1
)
Glc
NA
c (2
)
Glc
\Man
(1)
Glc
\Man
(2)
Glc
\Man
(3)
Man
nose
(2)
Man
nose
(3)
Man
nose
(5)
Ter
min
al G
lcN
Ac
(1)
Alp
ha G
al (
1)
Alp
ha G
al (
2)
Alp
ha G
al (
4)
Bet
a G
al (
1)
Bet
a G
al (
2)
Gal
\Gal
NA
c (2
)
Gal
\Gal
NA
c (4
)
Gal
\Gal
NA
c (5
)
Gal
\Gal
NA
c (6
)
Gal
\Gal
NA
c (8
)
Sia
lic A
cid
(4)
Sig
nal
In
ten
sity
34-1-mAb1-1 0.15uM
34-1-mAb1-1 0.125uM
34-1-mAb1-1 0.1uM
34-1-mAb1-1 0.075uM
34-1-mAb1-1 0.05uM
34-1-mAb1-1 0.025uM
Plate RUN ID User Date Sample Name Complex CoreFucose G0 G1 G2 GalAlpha ManHigh SialicAcid within_assay K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.15uM 94 83 74 18 1 0 6 1 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.125uM 94 82 75 18 1 0 6 1 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.1uM 94 80 72 21 1 0 6 1 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.075uM 95 79 71 22 2 0 5 2 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.05uM 94 76 69 23 2 1 6 2 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.025uM 0
k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.15uM 94 88 75 18 1 0 6 1 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.125uM 95 94 78 17 1 0 5 1 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.1uM 96 91 74 21 2 0 4 1 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.075uM 96 87 70 24 2 0 4 2 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.05uM 96 83 64 28 3 1 4 3 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.025uM 91 70 58 29 4 1 9 3 1
HPLC reference 93 90 71 18 4 0 7 2
46
The GlycoScopeTM résultats comparables à l'HPLC (Customer D)
0.0
20.0
40.0
60.0
80.0
100.0
34-1-mab1-1 34-1-mab1-2 34-1-mab1-3 34-1-mab1-4
% GS
HPLC
4 échantillons de Mab#34-1
testés par GlycoScopeTM et
comparés aux résultats
HPLC
www.procognia.com www.celld.com47
Appendix C
Effets des paramètres procédé sur le profile de Glycosylation
Exemples de cas d'étude utilisant le
GlycoScopeTM
Impacte du clone/procédé sur le N-glycosylationTemp shift Feed Rate Clone Media type
G1
G2
Gal alpha
G0
48
Effet des paramètres procédé sur la glycosylation des
glycoprotéines (Comparaison Bioréacteurs vs. µBioréacteurs
49
2 types de conditions ont été testées sur des bioréacteurs et desµ Bioreactors:GlycoScopeTM détecte les effets des paramètres procédé sur la glycosylation en temps réelProfiles similaire sont obtenus dans les deux échellesLes résultats du procédé A montrent un G0&SA similaire le D un HMsimilaire
Pas d'effet signification du taux de dilution
Effect of Feed Rate on G0In CD CHO Media
0102030405060708090
C2 D5 E6 H12
CD CHO Temp 33
G0 Feed7 G0 Feed13 G0 Feed20
Effect of Feed Rate on G0 In IS CHO CD Media
0102030405060708090
C2 D5 E6 H12
IS CHO CD
G0 Feed7 G0 Feed13 G0 Feed20
www.procognia.com www.celld.com51
Effect of DO on SA
0.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.00
CD CHO CD CHO IS CHO IS CHO ExCell ExCell
D5 E6 D5 E6 D5 E6
% A
bund
ance
10.5 20
Une augmentation de l'oxygène dissous de 10.5% à
20% augmente de environ 124% (91-176%)
l'abondance de l'acide sialique
Le niveau d'oxygène dissous affecte la Sialylation
10.5 20
12
34
5
DOS
ialic
Aci
d
www.procognia.com www.celld.com52
L'augmentation de l'oxygène dissous réduit les niveaux de Core Fucose
Effect of DO on CF
0102030405060708090
CD CHO CD CHO IS CHO IS CHO ExCell ExCell
D5 E6 D5 E6 D5 E6
% A
bund
ance
10.5 20
Une augmentation de l'oxygène
dissous de 10.5% à 20% conduit à
une réduction de 15% (8-22%) en
Core Fucose
10.5.p-II 20.p-II 10.5.p-III 20.p-III
60
70
80
90
Effect of DO on Core Fucose levels
DO
Co
re F
uco
se
L'effet de la concentration
d'oxygène dissous sur le % de
Core Fucose a été démontré
dans 2 essai indépendant
experiments
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Oxygène dissous n'a pas d'effet signification sur G0 et GalAlpha
Effect of DO on G0
0102030405060708090
CD CHO CD CHO IS CHO IS CHO ExCell ExCell
D5 E6 D5 E6 D5 E6
% A
bu
nd
an
ce
10.5 20
Effect of DO on GalAlpha
0
1
2
3
4
5
6
CD CHO CD CHO IS CHO IS CHO ExCell ExCell
D5 E6 D5 E6 D5 E6
% A
bu
nd
an
ce
10.5 20