第 25 卷 第 1 期2019年2月

（自然科学版）JOURNAL OF SHANGHAI UNIVERSITY (NATURAL SCIENCE)

Vol. 25 No. 1Feb. 2019

DOI: 10.12066/j.issn.1007-2861.2086

• 精准与转化医学 •

小鼠非酒精性脂肪性肝炎中线粒体功能的障碍

后文琳1, 潘 雯1, 付思艺1, 宋美怡2, 王 菲2

(1. 上海大学 生命科学学院, 上海 200444; 2. 同济大学附属同济医院 消化内科, 上海 200065)

摘摘摘要要要: [目的] 研究非酒精性脂肪性肝炎 (non-alcoholic steatohepatitis, NASH) 中线粒体功能的变化. [方法] C57BL/6 小鼠采用胆碱蛋氨酸缺乏 (methionine choline deficient, MCD) 饮

食诱导小鼠 NASH 模型, 喂食胆碱蛋氨酸充足 (methionine choline sufficient, MCS) 组作为

对照; 4 周后, 处死小鼠同时取血清和肝组织. 生化指标检测血清丙氨酸氨基转酶 (alanine

aminotransferase, ALT) 活性、天冬氨酸氨基转移酶 (aspartate aminotransferase, AST) 活性、肝组织甘油三酯 (triglyceride, TG)、总胆固醇 (total cholesterol, TC) 水平; 观察肝组织病理学变化; 实时荧光定量聚合酶链式反应 (quantificational real-time polymerase chain

reaction, qRT-PCR) 检测小鼠肝脏组织中 mtDNA/nDNA 和 nDNA, 以及由线粒体 DNA 编

码的的基因、线粒体 DNA 复制相关的基因、与小鼠肝脏中能量代谢相关的基因的表达变化.

[结果] 与 MCS 模型组相比, MCD 组 ALT, AST, TG 水平明显升高, 但 TC 水平降低; 肝组织

变性严重, 产生大量脂肪空泡, 小叶结构破坏严重, 炎细胞浸润明显; MCD 模型组线粒体生成能力、能量代谢水平和 DNA 修复能力显著降低. [结论] 小鼠非酒精性脂肪性肝炎中线粒体功能发生障碍.

关关关键键键词词词 : 非酒精性脂肪性肝炎; 线粒体; 能量代谢中中中图图图分分分类类类号号号 : G 804.5 文文文献献献标标标志志志码码码 : A 文文文章章章编编编号号号 : 1007-2861(2019)01-0001-09

Dysfunction of mitochondrial in mice withnon-alcoholic steatohepatitis

HOU Wenlin1, PAN Wen1, FU Siyi1, SONG Meiyi2, WANG Fei2(1. School of Life Sciences, Shanghai University, Shanghai 200444, China;

2. Department of Gastroenterology, Tongji Hospital Affiliated to Tongji University,

Shanghai 200065, China)

Abstract: [Objective] This research is to study the changes of mitochondrial function in

non-alcoholic steatohepatitis (NASH). [Methods] The method is to use C57BL/6 mice fed

with choline methionine deficient (MCD) diet to induce a mouse NASH model. The choline

methionine sufficient (MCS) group serves as the control group. Four weeks later, serum and

liver tissue are detected when mice are sacrificed. Biochemical indicators of serum alanine

aminotransferase (ALT) activity, aspartate aminotransferase (AST) activity, liver triglyc-

eride (TG), total cholesterol (TC) levels are detected by enzymelinked immunosorbent

收稿日期: 2018-09-19基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (81400635)

通信作者: 王 菲(1979—), 女, 主治医师, 博士, 研究方向为慢性肝病和肝纤维化. E-mail: 1132469@tongji.edu.cn

2 （自然科学版） 第 25 卷

assay. Pathological examination has also been performed. The mtDNA/nDNA and nDNA

in liver tissue of mice and the expression of genes encoded by mitochondrial DNA, mito-

chondrial DNA replication and associated with energy metabolism in mouse liver are tested

by qRT-PCR (quantificational real-time polymerase chain reaction). [Results] Compared

with the MCS group, the MCD model group shows severe degeneration of liver tissue, and

ALT, AST, and TG become significantly elevated, but TC levels are decreased. A large

amount of fat vacuoles, severe destruction of lobular structure, and significant infiltration

of inflammatory cells become increased in MCD model. In addition, the amount of mito-

chondrial is decreased. Furthermore, the capacity of energy metabolism and DNA repair of

the MCD model group are significantly reduced. [Conclusion] Mitochondrial dysfunction

occurs in mice with non-alcoholic steatohepatitis.

Key words: non-alcoholic steatohepatitis (NASH); mitochondria; energy metabolism

非酒精性脂肪性肝病 (non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD) 是指脂肪在肝内积累超过肝脏总重的 5%∼10%, 同时出现弥漫性肝细胞大泡性脂肪变性. 病变主要是从

单纯性脂肪肝 (non-alcoholic fatty liver, NAFL) 发展至非酒精性脂肪性肝炎 (non-alcoholicsteatohepatitis, NASH), 最后发展为非酒精性肝硬化 (non-alcoholic cirrhosis, NAC) 直至肝癌[1]. NAFLD 的进展是一个连续的过程, 最初 NAFL 病变部位为肝小叶, 此时出现脂滴的肝细胞超过 30%, 无其他组织学改变. NASH 是 NAFL 的延续, 在肝细胞脂肪变性的基础上发生以肝细胞气球样变、弥散性肝小叶炎症为病理特征的慢性肝炎[2-3]. NASH 的相关肝硬化是长期炎症导致的损害, 其病理结构可见肝细胞大量坏死、肝小叶结构破坏、纤维瘢痕形成以及肝组织变性等. NAFLD 的发病因素包括肥胖、糖代谢紊乱、高血压、饮食结构的改变[4-5]等, 目前已成为我国最常见的肝脏疾病, 且发病率呈逐年上升的趋势, 因此 NAFLD 是近年来研究的主要热点之一[6].

这几年, NAFLD 被发现与线粒体功能障碍密切相关, 线粒体的功能在 NAFLD 的发病和进展过程中起着重要作用[7-8]. 事实上, 早在 1976 年 Huttenlocher 等[9]就将肝脏疾病与线粒体疾病联系在一起; 2012 年 Gomez-Zorita等[10]研究发现, 白藜芦醇可激活腺苷酸活化蛋白激

酶 (adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase, AMPK) 的通路来降低氧

化应激, 减少肝脂肪生成, 从而改善肝脂肪变性. 由于胆碱蛋氨酸缺乏 (methionine cholinedeficient, MCD) 饮食诱导的小鼠模型早期会出现肝细胞脂肪变性, 且后期会逐渐出现肝细胞

炎性反应及纤维化反应, 故在国际上公认是成功复制 NASH 模型之一[11]. 本工作旨在通过检

测小鼠 NASH 模型中线粒体功能的变化, 探讨线粒体对 NASH 病变过程的影响, 从而研究其

中可能的分子机制, 为预防及治疗 NASH 提供新的分子靶点.

1 材料与方法

1.1 材料1.1.1 实验动物

雄性 C57BL/6 小鼠, 8∼10 周龄, 质量为 (28±1) g, 饲养于上海大学 SPF (specific pathogenfree) 级动物房, 温度 (22±2) ◦C, 湿度 50%∼60%. 所有操作均遵守美国国立卫生院 (NationalInstitutes of Health, NIH) 的相关规定.1.1.2 实验仪器

分光光度计, 微量移液器, 旋涡混匀器, 全自动生化分析仪, 聚合酶链式反应 (polymerasechain reaction, PCR) 仪, 实时荧光定量 PCR(quantification real-time PCR, qRT-PCR) 仪,

第 1 期 后文琳, 等: 小鼠非酒精性脂肪性肝炎中线粒体功能的障碍 3

Nano Drop 测定仪.

1.1.3 材料

采用胆碱蛋氨酸充足 (methionine choline sufficient, MCS) 作为对照组饲料[12], 选用胆

碱蛋氨酸缺乏 (methionine choline deficient, MCD) 组饲料作为实验组饲料[11]. 在 MCS 饮

食 配 方 上 减 去 胆 碱 2 g/kg、蛋 氨 酸 3 g/kg (饲 料 均 由 江 苏 南 通 特 洛 菲 饲 料 有 限 公 司 提供); HE (hematoxylin-eosin) 染色相关试剂购于美国 Sigma 公司; 丙氨酸氨基转移酶 (alanineaminotransferase, ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶 (aspartate aminotransferase, AST)、总胆固醇 (total cholesterol, TC) 测定和甘油三酯 (triglyceride, TG) 测定试剂盒均购于南京建成生物

公司; PCR 相关试剂 Trizol、反转录试剂盒和 SYBR Green 购于 Takara 公司; 384 孔 PCR 板购于 Roche 公司.

1.2 实验方法

1.2.1 动物实验方案

采用 MCD 饮食构建小鼠 NASH 模型, 其对照组喂食 MCS 的饲料. 8∼10 周的 C57BL/6 小鼠随机分为 2 组: MCS 对照组 (n = 6) 和 MCD 实验组 (n = 6), 分别不间断喂食 4 周. 对照组以 MCS 饲料喂养, NASH 模型组以 MCD 饲料喂养. 4 周后, 禁食不禁水, 次日称体重后, 腹腔

注射麻醉, 固定打开腹腔, 采取下腔静脉采血, 迅速游离并取出肝脏, 预冷生理盐水冲尽血迹

后, 称量肝脏湿质量, 计算肝指数 (肝指数=肝质量/体质量×100%). 取部分肝组织用 4% 多聚甲醛固定, 其余−80 ◦C 冰箱保存.

1.2.2 血清生化指标检测

利用试剂盒检测小鼠血清中 ALT (南京建成生物公司, C009-3)、AST (南京建成生物公司,C010-1)、TC (南京建成生物公司, A111-2) 和 TG (南京建成生物公司, A110-2) 的相关水平.

1.2.3 HE 染色

二甲苯梯度酒精脱蜡; 1×PBS 洗 3 遍, 每次 5 min; 蒸馏水轻洗 1∼2 min, 用力甩掉水分;核染液染色 5 min, 水洗 3∼5 s; 浆液染色 20 s; 增色液冲洗 1 次, 自然晾干; 封片后于 Leica 生物

显微镜下观察.

1.2.4 DNA 的提取

通过 DNeasy Blood & Tissue 试剂盒 (德国 Hilden Qiagen 公司) 提取总 DNA, 包括线粒体 DNA(mtDNA) 和核内基因组 DNA (nDNA).

1.2.5 RNA 的提取

运用 Trizol 试剂 (日本 Takara 公司) 抽提总 RNA, 使用 Nano Drop 仪测定 RNA 的浓度和纯度.

1.2.6 荧光定量 PCR

通 过 Trizol-异 丙 醇 法 提 取 小 鼠 肝 脏 组 织 的 RNA, 将 RNA 逆 转 录 为 cDNA 后 检 测 基因 mRNA 水平的表达, 取 1 µg 的总 RNA, 加入 5×逆转录试剂 2 µL, 利用 DEPC (diethyl py-rocarbonate) 水将总体积补充到 10 µL, 并利用合成的 cDNA 和特异性的 PCR 引物检测目标 mRNA 的表达, 扩增的 DNA 产物以 SYBR Green 标记, 采用 18S 作为内参基因, 以 2−∆∆CT

的计算方法进行相对表达量计算. 本工作采用的引物序列如表 1 所示.

4 （自然科学版） 第 25 卷

表 1 qRT-PCR 引物序列

Table 1 Sequences of the primers for qRT-PCR

基因 序列(5’-3’)

POLGGAGCCTGCCTTACTTGGAGG

GGCTGCACCAGGAATACCA

SSBP1CAACAAATGAGATGTGGCGATCA

ACGAGCTTCTTACCAGCTATGA

TOP1MTGTTTCCAGCATGTCCCCTG

TTGCCATCGTAGAGGAAGTGC

TWINKLETTCTCCGACGTGCATATCCC

GCGCTTCTTTTCTGTACCTTCT

ND1GCGCTTTGAGACCTGGAAAAA

GGCCAGTGCGATAAAAGTTCG

ND2CTCTTGAGCAGCATCCTCACA

GCCTCTCGACACTGAATCCTT

ND6GCTCAAGAAACTAATCACAGCCA

GGTGGGCTTATTCTACCATTGC

COX1GACCGCAATGAACTTCGGGA

TCCATTAGGTCTCTAAAGCCGAG

COX2AACCCAGGGGATCGAGTGT19

CGCAGCTCAGTGTTTGGGAT

16S rRNATGCCTGCCCAGTGACTAAAGT

AACAAGTGATTATGCTACCTTTGCA

ATPase6CTGGTGGCGGGTGCTTTAG

GCTACGTCTGGGATTCGATCT

PGC-1αTATGGAGTGACATAGAGTGTGCT

CCACTTCAATCCACCCAGAAAG

PGC-1βTCCTGTAAAAGCCCGGAGTAT

GCTCTGGTAGGGGCAGTGA

NRF1AGCACGGAGTGACCCAAAC

TGTACGTGGCTACATGGACCT

NRF2ACACTGACAGAAATGGACAGCA

CACTGGGCTCTGCTATGAAAG

NRF2B2GCTGGGGAATTTGCACTCCAT

CTGTCGGTATTTCTGGGCCTC

TFAMATTCCGAAGTGTTTTTCCAGCA

TCTGAAAGTTTTGCATCTGGGT

TFB1MCGGGAGATCATTAAGTTGTTCGG

GCCCAGGACCCACTTCATAAA

TFB2MGGCCCATCTTGCATTCTAGGG

CAGGCAACGGCTCTATATTGAAG

18SGGACAGGACTAGGCGGAACA

TAGTAGCGACGGGCGGTGTG

1.2.7 统计方法

运用 SPSS 20.0 统计软件进行分析, 实验数据均采用“均值±标准差”方法表示, 分析前进行方差齐性检验. 当满足条件时, 选用独立样本 t 检验进行 2 组间比较, P < 0.05 表示有统计学差异.

第 1 期 后文琳, 等: 小鼠非酒精性脂肪性肝炎中线粒体功能的障碍 5

2 结 果

2.1 MCD 饮食诱导的 NASH 模型的建立

经过 MCD 饲料喂养的的小鼠体重、肝重、肝重/体重、腹股沟脂肪、腹股沟脂肪/体重、附睾脂肪、附睾脂肪/体重、肩胛骨脂肪较 MCS 组显著下降, 肝重/体重 (肝指数)、肩胛骨脂

肪/体重无明显差异 (见表 2)，这说明 MCD 喂食成功诱导了 NASH 的发生.

表 2 经过 4 周 MCD 饮食后小鼠的特征

Table 2 Characteristics of mice after four weeks of experimental diets

特征对照组

MCS MCD

体重/g 28.42±0.47 15.96±0.27***

肝重/g 1.09±0.05 0.06±0.03***

肝重/体重/% 3.82±0.19 4.10±0.19

腹股沟脂肪/g 0.25±0.05 0.05±0.01*

腹股沟脂肪/体重/% 0.87±0.18 0.30±0.05*

附睾脂肪/g 0.56±0.12 0.05±0.02**

附睾脂肪/体重/% 1.90±0.42 0.29±0.12**

肩胛骨脂肪/g 0.11±0.01 0.05±0.002***

肩胛骨脂肪/体重/% 0.40±0.04 0.03±0.02

注: *表示 P <0.05, **表示 P <0.01, ***表示 P <0.001; n = 6.

2.2 MCD 小鼠生化指标和肝组织病理学形态的变化

与对照组相比, MCD 组小鼠血清中 ALT 和 AST 活性、肝脏组织中 TG 水平较 MCS 组显

著提高 (见图 1(a)∼1(c)), 而 TC 水平降低 (见图 1(d)). 此外, HE 染色情况下在光学显微镜下

可见对照组小鼠肝小叶结构清晰, 未见脂肪变性及炎症细胞浸润; 而 MCD 组在光学显微镜下

可见肝组织变性严重, 有大量脂肪空泡, 小叶结构破坏严重, 炎细胞浸润明显 (见图 1(e)), 进一

步证实了模型构建成功.

2.3 MCD 小鼠中线粒体功能的变化

成功构建小鼠 NASH 模型后, 本工作采用 qRT-PCR 分别检测了小鼠肝脏组织中 mtDNA(mitochondrial DNA, mtDNA) 和 nDNA (nuclear DNA, nDNA), 结果显示MCD 组 mtDNA/nDNA 表达量明显降低 (见图 2(a)), 说明 MCD 组小鼠肝脏线粒体的 mtDNA/nDNA 的值降

低. 同时检测线粒体 DNA 复制相关的基因 (POLG, SSBP1, TWINKLE 和 TOP1MT) 的表达

变化发现, TOP1MT 的表达量明显降低, POLG, SSBP1 和 TWINKLE 表达无明显差异 (见图 2(b)), 这说明线粒体的生成能力受到影响. 然后检测线粒体 DNA 编码的参与能量代谢的基因 (ND1, ND2, ND6, COX1, COX2, 16S rRNA, ATPase6 和 CYTB) 的表达变化. 结果发现, 与对照组相比, MCD 组中在线粒体 DNA 编码的参与能量代谢的基因中, MCD 组中 ND1,ND6, COX1, COX2, 16S rRNA 和 CYTB 的表达量明显降低 (见图 3), 说明 MCD 饲养的小鼠肝组织线粒体的 mtDNA/nDNA 值降低, 功能受到损伤.

6 （自然科学版） 第 25 卷

图 1 MCD 饮食对肝脏中血脂和转氨酶水平和肝脏病理形态的影响 (**: P <0.01, ***: P <0.001;

n = 6)

Fig. 1 Effects of the MCD diet on serum lipids, transaminase levels and hepatic pathological

changes in liver (**: P<0.01, ***: P<0.001; n = 6)

图 2 线粒体 DNA 和线粒体 DNA 复制的基因的表达水平 (*: P<0.05, ***: P<0.001; n = 6)

Fig. 2 Expressions of mtDNA replication-related genes and mitochondrial DNA (*: P<0.05,

***: P<0.001; n = 6)

第 1 期 后文琳, 等: 小鼠非酒精性脂肪性肝炎中线粒体功能的障碍 7

2.4 MCD 小鼠肝脏中能量代谢相关的 PGC-1 信号通路中相关基因的变化采用 qRT-PCR 检测 NASH 小鼠肝脏中能量代谢相关的 PGC-1 通路相关的基因 (PGC-

1α, PGC-1β, NRF1, NRF2A, NRF2B2, TFAM, TFB1M 和 TFB2M). 结果发现, 与对照组相

比, MCD 组中 PGC-1β, NRF1, NRF2A, NRF2B2, TFAM, TFB1M 和 TFB2M 表达水平均明

显降低, 但 PGC-1α 表达水平无明显差异 (见图 4). 事实上, 与 PGC-1α 相比, 在高呼吸活性的细胞中 PGC-1β 呈现高表达[13], 这说明 MCD 组的能量代谢能力减弱.

图 3 线粒体 DNA 编码参与能量代谢相关基因的表达水平 (*: P <0.05, **: P <0.01, ***: P <0.001;

n = 6)

Fig. 3 Expression levels of genes involved in energy metabolism encoded by mitochondrial

DNA (*: P<0.05, **: P<0.01, ***: P<0.001; n = 6)

图 4 在肝脏中调控 PGC-1 通路相关基因的表达水平 (*: P<0.05, **: P<0.01, ***: P<0.001; n = 6)

Fig. 4 Regulation of PGC-1 pathway related gene expression in the liver (*: P <0.05, **:

P<0.01, ***: P<0.001; n = 6)

3 讨 论

NAFLD 是临床常见的疾病之一, 是一种由多种疾病或者因素引起的以肝脏脂肪积蓄过多为特征的慢性疾病, 其 15%∼25% 的病历可发展为肝硬化[14-15]. NASH 作为 NAFLD 病程中最关键的环节, 是单纯性脂肪肝发展为肝纤维化和肝硬化的必经阶段[16], 因此对 NASH 的发病

机制的研究和防治就显得格外重要[17].越来越多的研究证明, 线粒体功能障碍会诱导肝脏炎性反应、肝细胞坏死和肝纤维化的发

生[18], 进而导致 NASH 的发生和发展. 众所周知, 线粒体是真核细胞能量代谢过程中重要的细

胞器之一, 是 ATP 产生的主要场所, 在细胞内分裂和融合的动态结构中起平衡作用[19]. 据报

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道, 当线粒体受损时膜电位下降从而导致 ATP 合成减少, 肝细胞质膜发生脂质过氧化损伤, 进而导致 NASH 的发生[20].

在本工作中可以发现, 在 MCD 饲料喂养的小鼠组中, 线粒体的 mtDNA/nDNA 和编码的基因 (ND1, ND2, ND6, COX1, COX2, 16S, ATPase6 和 CYTB) 线粒体复制相关基因 (POLG,SSBP1, TWINKLE 和 TOP1MT) 表达水平出现降低的情况, 这表明线粒体数量和功能的降

低可能对 NASH 的发病起到了促进作用; 同时, 从 PGC-1 介导的能量代谢来看, PGC-1 通路

中 PGC-1β, NRF1, NRF2A, NRF2B2, TFAM, TFB1M 和 TFB2M 表达水平降低, 表明能量代谢能力降低.

在 MCD 饮食诱导的 NASH 模型中, 小鼠肝脏中线粒体的生成、维持线粒体的功能和激

活 PGC-1 途径均受到阻碍, 可见线粒体的数量及功能障碍与 NASH 发病密切相关, 并会导致 NASH 进程加快. 根据此研究, 通过促进线粒体的生成可能是治疗 NAFLD 的一种方法, 为

临床治疗提供新的思路.

参参参考考考文文文献献献:

[1] Bjornsson E, Angulo P. Non-alcoholic fatty liver disease [J]. Scand J Gastroenterol, 2007,

42(9): 1023-1030.

[2] Hubscher S G. Histological assessment of non-alcoholic fatty liver disease [J]. Histopathology,

2006, 49(5): 450-465.

[3] Neuschwander-Tetri B A, Clark J M, Bass N M, et al. Clinical, laboratory and histological

associations in adults with nonalcoholic fatty liver disease [J]. Hepatology, 2010, 52(3): 913-924.

[4] Chalasani N, Younossi Z, Lavine J E, et al. The diagnosis and management of nonalcoholic

fatty liver disease: practice guidance from the American Association for the Study of Liver

Diseases [J]. Hepatology, 2018, 67(1): 328-357.

[5] Bellentani S. The epidemiology of non-alcoholic fatty liver disease [J]. Liver Int, 2017, 37(S1):

81-84.

[6] Cohen J C, Horton J D, Hobbs H H. Human fatty liver disease: old questions and new

insights [J]. Science, 2011, 332(37): 1519-1523.

[7] Pessayre D, Fromenty B. NASH: a mitochondrial disease [J]. J Hepatol, 2005, 42(6): 928-

940.

[8] Koch L. Metabolism: mitochondrial pathways in NAFLD [J]. Nat Rev Endocrinol, 2012, 8(3):

129.

[9] Huttenlocher P R, Solitare G B, Adams G. Infantile diffuse cerebral degeneration with

hepatic cirrhosis [J]. Arch Neurol, 1976, 33(3): 186-192.

[10] Gomez-Zorita S, Fernandez-Quintela A, Macarulla M T, et al. Resveratrol attenu-

ates steatosis in obese Zucker rats by decreasing fatty acid availability and reducing oxidative

stress [J]. Br J Nutr, 2012, 107(2): 202-210.

[11] Rizki G, Arnaboldi L, Gabrielli B, et al. Mice fed a lipogenic methionine-choline-deficient

diet develop hypermetabolism coincident with hepatic suppression of SCD-1 [J]. J Lipid Res,

2006, 47(10): 2280-2290.

第 1 期 后文琳, 等: 小鼠非酒精性脂肪性肝炎中线粒体功能的障碍 9

[12] Lee G S, Yan J S, Ng R K, et al. Polyunsaturated fat in the methionine-choline-deficient

diet influences hepatic inflammation but not hepatocellular injury [J]. J Lipid Res, 2007, 48(8):

1885-1896.

[13] Lin J, Wu H, Tarr P T, et al. Transcriptional co-activator PGC-1 alpha drives the formation

of slow-twitch muscle fibres [J]. Nature, 2002, 418(6899): 797-801.

[14] Greenfield V, Cheung O, Sanyal A J. Recent advances in nonalcholic fatty liver

disease [J]. Curr Opin Gastroenterol, 2008, 24(3): 320-327.

[15] Kashi M R, Torres D M, Harrison S A. Current and emerging therapies in nonalcoholic

fatty liver disease [J]. Semin Liver Dis, 2008, 28(4): 396-406.

[16] Ioannou G N. The role of cholesterol in the pathogenesis of NASH [J]. Trends Endocrinol

Metab, 2016, 27(2): 84-95.

[17] Pariente A. Management of non alcoholic fatty liver diseases in adults [J]. Rev Prat, 2012,

62(10): 1421-1425.

[18] Ding W X. Role of autophagy in liver physiology and pathophysiology [J]. World J Biol Chem,

2010, 1(1): 3-12.

[19] Basaranoglu M, Basaranoglu G, Senturk H. From fatty liver to fibrosis: a tale of “second

hit” [J]. World J Gastroenterol, 2013, 19(8): 1158-1165.

[20] Cortez-Pinto H, Chatham J, Chacko V P, et al. Alterations in liver ATP homeostasis in

human nonalcoholic steatohepatitis: a pilot study [J]. JAMA Network, 1999, 282(17): 1659-1664.

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