dengue - laboratorio
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DengueDiagnostico de laboratorio
Clasificación revisada de dengue
Dengue severo1. Fuga plasmática de gran
volumen que conduce a:• Shock (SSD)• Acumulación de líquidos con
SDRA2. Hemorragia severa clasificada por un médico3. Falla severa de órganos Hígado: AST o ALT ≥ 1000 SNC: trastornos de la
conciencia Corazón u otro órgano
Dengue probable Vive/ ha viajado a áreas endémicas de dengue mas fiebre y dos de los siguientes criterios:- Náuseas /vómitos- Exantema- Dolor y malestar- Prueba de torniquete (+)- Leucopenia-Y cualquier signo de alarma
Laboratorio: Dengue confirmado (de importancia cuando no hay fuga capilar)
Dengue severoDengue ± signos de alarma
Signos de alarma* •Dolor espontáneo o a la
palpación del abdomen• Vómitos persistentes• Acumulación clínica de
líquidos• Sangrado de mucosas• Letargia o irritabilidad• Hepatomegalia > 2cm• Laboratorio: incremento
del hto. asociado a disminución del conteo de
plaquetas •Requiere monitoreo estricto e • intervención médica
2
+
Dengue Exámenes esenciales
• Hemograma completo
• Hematocrito
• Plaquetas
Dengue Exámenes complementarios
• Albúmina y proteínas séricas
• Aminotransferasas
• Eritrosedimentación
• NU y creatinina
• Examen general orina
DengueExámenes específicos
Diagnostico individual •Confirmación de casos•Diagnostico diferencial•Manejo clínico
Soporte de vigilancia •Detección temprana•Circulación de cepas•Estudios de incidencia•Caracterización de cepas
DengueExámenes específicos
• Cultivo
• Biología molecular
• Serologia
• Hemaglutinación
• Inhibición de la hemaglutinación
• Inmunofluorescencia
DengueExámenes específicos
• Cultivo
• Los tres primeros días
• Diez mililitros de sangre total
• Colocar en hielo, refrigerar a menos 4°C
• Conservar a -20-70 °C
Dengue laboratorio Aislamiento viral
• Inoculación intratecal en ratón RN• Inoculación cultivos celulares de mamíferos• Inoculación intra toráxica de mosquitos adultos• Inoculación en células de mosquitos
Dengue laboratorio Aislamiento viral
• Inoculación intracerebral en ratón– Inconvenientes:
• Alto costo
• Tiempo largo para aislar
• Baja sensibilidad
Dengue laboratorio Aislamiento viral
• Cultivos celulares en mamíferos– Con frecuencia pasos múltiples
• Inconvenientes
Dengue laboratorio Aislamiento viral
Ventajas cultivo en células de mosquito– Alta sensibilidad– Fáciles de mantener– Crecen a temperatura ambiente– Se mantienen por 14 días en el medio
DengueExámenes de laboratorio
Efecto citopáticoCultivo normal
DengueExámenes de laboratorio
Biología molecular– Diagnostico viral de dengue
– Identificación de serotipos
– Vigilancia molecular
– Caracterización genética
DengueExámenes de laboratorio
Biología molecular
• Reacción en cadena de Polimerasa (PCR)– Demostración de infecciones concurrentes– Diagnostico retrospectivo– Clasificación rápida en genotipos y sub-
grupos geográficos– Niveles de viremia
DengueExámenes de laboratorio
Muestras para serologia• Inhibición de la hemaglutinación (IH)• Inmunofluorescencia (IF)• Inmunoensayo enzimático (ELISA)
– Sensibilidad ELISA de captura IgM: 90-97%– Falsos positivos 2%– Se elevan y duran mas en infección primaria– En la infección secundaria se elevan menos y pueden
estar ausentes
DengueExámenes de laboratorio
• ELISA IgG identifican infección primaria y secundaria por dengue
• Durante la infección 1ª : 7°-10° día• Durante infección 2ª : elevados desde la
fase aguda y mucho mas en la convalecencia
• ELISA: proteínas no estructurales 1 (NS1)
DengueExámenes de laboratorio
• ELISA de captura de IgM
– Sensibilidad: 92%
– Especificidad: 98%
– Coincidencia con IH: 94%
DengueExámenes de laboratorio
Muestras para serologia
• Primera desde el 5° día de la enfermedad
• Segunda 2-3 semanas despues de la primera
• Enviar al laboratorio preferentemente a
-20°C o en su defecto a 4 °C
Infección por DengueComportamiento del virus, T°, y Acs.
-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 21 23 25 28
6
4
2
4140393837
20480
5100
12020
VIREMIALog/mlNS1Ag
T° ( °C)
Anticuerpos
Días
IgM IgG
-2 -1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 21 23 25 28
6
4
2
640
12020
20480
5100
12020
VIREMIAlog/ml, NS1 Ag
IgM Ac
HI antibodies1rio
HIAntibodies2rio
Días
Comportamiento de los marcadores para el diagnóstico
virus virus
Infección por dengue: respuesta inmune
Infecciónprimaria
InfecciónSecundaria
-2 0 5 60 (6m)
tiempo en días (meses)
NS1 IgMNS1
IgM
14
IgG
20nm
Dengue. Interpretación de resultados frente a la infección (2)
Laboratorio Muestra Clasificación de caso
Títulos de Ac. elevados
IgM positiva
Una sola muestra suero o plasma
Probable
Seroconversión
Cuadruplicación de los títulos
Muestra pareada suero o plasma
Confirmado
Aislamiento (+)
Prueba de Ag. (+)
PCR (+)
Muestra en la fase aguda o crónica de la infección (suero, tejido, LCR, sangre total)
Confirmado
Interpretación de resultados de laboratorio frente a la infección (3)
Laboratorio Muestra Clasificación de casos
Ventajas y desventajas
Serología •Título de anticuerpos • Anticuerpos IgM (+)
• Una sola muestra (suero o plasma)
Probable Ventajas:
1. Toma de muestra fácil
2. Identifica la circulación de agentes infecciosos recientes
Desventajas:
1. No confirma la infección actual
•Seroconversión• Cuadruplicación de titulo de anticuerpos
•Muestra pareada (suero o plasma)
Confirmado Ventajas:
1. Confirmación del caso
Desventajas:
1. Rechazo de parte del paciente
2. Costo elevado (toma de muestra y pruebas de laboratorio)
3. Requiere mas tiempo
• Pruebas de antígeno (+)• Aislamiento viral (+)• PCR (+)
•Muestras en la fase aguda o crónica de la infección (suero, tejidos, LCR, sangre total)
Confirmado Ventajas:
1. Confirmación del caso
2. Genotipificación, vacunas, pruebas, etc.
Desventajas:
1. Costo elevado (pruebas de laboratorio)
Muchas gracias
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