animales transgénicos como herramientas
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Animales Transgénicos como herramientas de trabajo
Daniel Pérez-Witzke, M.Sc.
Laboratorio de Patología celular y molecular, Centro de Medicina Experimental, IVIC
Mecanismos de recombinación en Mamíferos
Técnicas para edición de genomas
Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPRs)
Modelos de enfermedad
Animales Knockout
Autoinmunidad TH2, Modelo
Lupus eritematoso sistémico
Kaveri y col. (2010). Basophils and Nephritis in Lupus. n engl j med 363;11
Sistema Cre-LoxP
Biología de la proteína HSP-70 en la fisiopatología de la hipertensión
arterial esencial
Daniel Perez-Witzke, MSc.
Próximo paso: Noquear HPS-70
Inhibición la expresión de los genes HSP70.1, HSP70.3
1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces (knockout)
Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Cre/Ksp-Cadherinpromotor renal
GFP (doble transgenico)[Rata transgenica A]
Células Renales5´ Ksp-
CadherinCre
Recombinasa
3´
3´ 5´
5´ LoxP
Promotor
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
EnzimaCre
Transcripción/Traducción
Recombinación
5´LoxP
Exón 1 HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
Pro
mo
tor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-(knockout)
Ratas A-C homozigotos de la F3 (triple transgenico)
Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Cre-mER(mutant Estrogen Receptor)
(doble transgenico)[Rata transgenica B]
Células Somáticas
5´mER Cre Recombinasa
3´
3´ 5´
5´ LoxP
Promotor
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
EnzimaCre
Transcripción/Traducción
Recombinación
5´LoxP
Exón 1 HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
Pro
mo
tor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-(knockout)
Tamoxifeno
Ratas B-C homozigotos de la F3
2. Sistema Cre-LoxP mediante infección con virus AAV-2-Cre
(knockout condicional)
Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Células Renales
3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´
5´ LoxP
Promotor
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
EnzimaCre
Recombinación
5´LoxP
Exón 1 HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
Pro
mo
tor
LoxP
dsDNA
HSP70 -/-(knockout)
AAV-2/Cre
Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´
Traducción
Infección con virus con tropismo por células renales
ssDNA
Sobreexpresión de los genesHSP70.1, HSP70.3
1. Sistema Cre-LoxP mediante cruces
Floxed HSP70.1 HSP70.3 genes
[Rata Transgenica C]
Células Renales
3´ Virus AAV-2 Cre Recombinasa 5´
5´ LoxP
PromotorWildtype
(Wt)
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
EnzimaCre
RecombinaciónHomologa
AAV-2/Cre
Transcripción 5´ Cre Recombinasa 3´
Traducción
ssDNA
Pro
mo
tor β
A
LoxP
dsDNA
LoxP
5´ LoxP
Promotorβ-Actina
LoxP
Exón 1HSP70.1 HSP70.3
3´
3´ 5´
PromotorβA
LoxP
dsD
NA
LoxP
Promotor Wt
LoxP
dsD
NA
LoxP
Gracias