appl. environ. microbiol. 1987 garcia 2384 7

8/10/2019 Appl. Environ. Microbiol. 1987 Garcia 2384 7

1/5

1987, 53(10):2384.Appl. Environ. Microbiol.

Matti Leisola

Susana Garcia, Jean Paul Latge, Marie Christine Prevost andPeroxidase-Immunoglobulin-Gold ComplexesCytochemical Studies Using LigninWood Degradation by White Rot Fungi:

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2/5


3/5

LIGNIN

PEROXIDASE

IMMUNOCYTOCHEMISTRY 2 3 8 5

d y l a t e

b u f f e r ( p H

7 . 4

a t room

t e m p e r a t u r e

f o r 1

h . A f t e r

s e v e r a l b u f f e r

w a s h e s ,

r e s i d u a l

f r e e

a l d e h y d e s w e r e

q u e n c h e d w i t h

1 0 mM

N H 4 C l

i n t h e

s a m e b u f f e r a t 4 C

o v e r n i g h t .

S a m p l e s w e r e

e m b e d d e d

i n t h e

h y d r o p h i l i c r e s i n

L o w i c r y l

K4M 3 . U l t r a t h i n

s e c t i o n s

w e r e r e c o v e r e d o n

F o r m v a r

( L a d d R e s e a r c h I n d u s t r i e s ,

I n c . , B u r l i n g t o n , V t . -

c o a t e d g r i d s a n d i n v e r t e d o v e r P B S .

L i g n i n

l a b e l i n g

i n

w o o d .

S ec ti o n s o f

t h e

l i g n i n s a m p l e s

w e r e

i n c u b a t e d

d i r e c t l y

w i t h l i g n i n p e r o x i d a s e - g o l d ( p H

5 . 5

o r l i g n i n

p e r o x i d a s e - g o l d

( p H 7 . 0 , d i l u t e d 1 : 1 0 , 1 : 5 0 , o r

1 : 1 0 0

i n

P B S - 1

B SA

f o r

1

h a t r o o m

t e m p e r a t u r e ,

a n d

w a s h e d s u c c e s s i v e l y w i t h P B S - 0 . 1 BSA, P B S ,

a n d

w a t e r .

A c o n t r o l e x p e r i m e n t w a s

p e r f o r m e d

w i t h a p r o t e i n - g o l d

c o m p l e x w h i c h

d i d

n o t h a v e a n y

l i g n i n p e r o x i d a s e a c t i v i t y ,

s u c h a s p r o t e i n A - g o l d ( p H

7 . 0 .

An

i n d i r e c t

l a b e l i n g t e c h n i q u e w a s a l s o u s e d. S ec ti o n s

w e r e i n c u b a t e d

f o r 1

h

a t

r o o m t e m p e r a t u r e o n a ( dr o p

o f

s o l u t i o n c o n t a i n i n g 1 m l

o f

u n l a b e l e d

l i g n i n p e r o x i d a s e

i n

P B S - 1 BSA,

0 . 5

m l

o f

0 . 3 3 M s o d i u m t a r t r a t e b u f f e r

( p H

3 . 0 , 0 . 1 7 m l

o f

4 mM v e r a t r y l a l c o h o l , a n d 7 0 , u l o f 1 0 . 8

mM

H 2 0 2 . T h e s e c o n d i t i o n s

h a v e b e e n

r e p o r t e d

t o

b e o p t i m a l f o r

l i g n i n p e r o x i d a s e a c t i v i t y 2 6 . S e c t i o n s w e r e

t h e n

w a s h e d

* w i t h PBS-0.1

B SA

a n d

i n c u b a t e d

f o r

1

h

a t r o o m t e m p e r -

a t u r e o n a n t i - l i g n i n p e r o x i d a s e r a b b i t a n t i s e r u m

d i l u t e d

1 : 1 0 0

o r 1 : 3 0 0

i n

P B S - 1

B S A .

S e c t i o n s

w e r e

t h e n w a s h e d ,

i n c u b a t e d o n

p r o t e i n A - g o l d d i l u t e d 1 : 1 0 0 i n P B S - 1 B S A ,

a n d w a s h e d s u c c e s s i v e l y

w i t h

PBS-0.1 BSA, P B S , a n d

w a te r . P r o t e in A - m a r k e r

c o n j u g a t e s

p r o v i d e v a l u a b l e

v i s u a l

t a g s b a s e d o n t h e a b i l i t y o f p r o t e i n A

t o b i n d i n

a

s p e c i f i c

m a n n e r

t o r a b b i t

i m m u n o g l o b u l i n G

m o l e c u l e s 2 0 . T o

d e m o n s t r a t e

t h e s p e c i f i c i t y

o f t h e l a b e l i n g , we p e r f o r m e d

s e v er al c o n tr o l

e x p e r i m e n t s :

i

l i g n i n p e r o x id a s e w i t h o u t

H 2 0 2 , v e r a t r y l a l c o h o l ,

o r

b o t h

H 2 0 2 a n d v e r a t r y l

a l c o h o l ;

i i d e n a t u r e d l i g n i n

p e r o x i d a s e

a f t e r b e i n g

h e a t e d a t

7 0 C

f o r

1

h ; i i i n o r m a l r a b b i t

s e r u m

d i l u t e d 1 : 1 0 0 o r

1 : 3 0 0 ; a n d i v

p ro t ei n A - g o l d .

L i g n i n p e r o x i d a s e

l a b e l i n g .

L i gn i n p er o x id a s e

w a s l o c a l -

i z e d

i n s i t u b y i n c u b a t i n g u l t r a t h i n s e c t i o n s o f f u n g i g r o w n o n

s a w d u s t f o r 1

h a t

r o o m t e m p e r a t u r e

o n a n a n t i - l i g n i n

p e r o x i d as e a n t i s e r u m d i l u t e d 1 : 1 0 0

o r 1 : 3 0 0

i n

P B S - 1

B SA

a n d

t h e n w a s h i n g t h e m w i t h

PBS-0.1

B S A . S e c t i o n s w e r e

t he n i n c u b at e d

f o r 1

h

o n p r o t e i n A - g o l d

d i l u t e d

1 : 1 0 0

i n

P B S - 1 B SA

a n d w a s h e d s u cc e s s i v e l y w i t h P B S - 0 . 1

BSA,

P B S , a n d w a t e r . C o n t r o l s i n c l u d e d

s e c t i o n s

t r e a t e d

w i t h

n o r m a l r a b b i t s e r u m

o r o n l y

p r o t e i n

A - g o l d .

To

t e s t t h e

s p e c i f i c i t y

o f t h e

l i g n i n p e r o x i d a s e l a b e l i n g

i n w o o d -

d e s t r o y i n g

f u n g i , we

p e r f o r m e d

t h e s a m e i m m u n o c y t o c h e m -

i c a l r e a c t i o n s o n

t h i n s e c t i o n s

o f t w o n o n l i g n i n o l y t i c f u n g i :

C a n d i d a

a l b i c a n s 3 1 5 3 - A

I n s t i t u t

P a s t e u r ) a n d A s p e r g i l l u s

f u m i g a t u s

1 0 2 8 I n s t i t u t

P a s t e u r ,

e m b e d d e d i n L o w i c r y l

K4M a s

d e sc r ib e d a b o v e .

RESULTS

L i g n i n v i s u a l i z a t i o n . No l a b e l i n g w a s o b s e r v e d a f t e r i n c u -

b a t i o n

o f

u l t r a t h i n

s e c t i o n s

o f p o p l a r

c e l l

w a l l s

w i t h

l i g n i n

p e r o x i d a s e - g o l d c o m p l e x e s . I n c u b a t i n g

t h e

p o p l a r s e c t i o n s

w i t h l i g n i n

p e r o x i d a s e

u n d e r

t h e o p ti m a l c o nd i ti o ns f o r i n

v i t r o a c t i v i t y d i d n o t i m p r o v e t h e b i n d in g o f t h e e n z y m e

t o

t h e

wood

l i g n i n

F i g .

l a .

S i m i l a r l y ,

t r e a tm e n t s o f t h e wood

w i t h H 2 0 2 a n d c h l o r i n e

w a t e r

t o

p r o d u c e

r e a c t i v e f r e e

r a d i c a l s t h a t

w o u l d b i n d

t o t h e

e n z y m e

h a v e a l s o

f a i l e d . T h e

a b s e n c e

o f

l a b e l i n g

o f

a l l wood

s a w d u s t s a m pl e s i n t h e

p r e s e n c e

o r a b s e n c e

o f H 2 0 2 a n d v e r a t r y l a l c o h o l d e m o n -

s t r a t e d

t h a t


w a s

u n a b l e t o

b i n d t o

t h e

l i g n i n

o f n a t u r a l s u b s t r a t e s . A l s o ,

p o p l a r

s a w d u s t

a n d t h e

n a t u r a l l y

r o t t e d

p i n e t h a t w e r e p a r t i a l l y

h y d r o l y z e d

b y

l i g n i n o l y t i c

f u n g i w e r e n o t l ab e l e d w i t h t h e

e n z y m e

p r o b e .

H o w e v e r ,

i s o l a t e d MWL c o u l d

b e

l a b e l e d b y

l i g n i n p e r o x i d a s e a n d

d e t e c t e d

b y a n t i - l i g n i n

p e r o x i d a s e

a n t i s e r u m - p r o t e i n

A - g o l d

c o m p l e x F i g . l b , a l t h o u g h l i g n i n


d i d n o t

l a b e l MWL.

L i g n i n

p e r o x i d a s e l a b e l i n g . A l l

t h e

t e s t e d


f u n g i

e x c e p t P l e u r o t u s o s t r e a t u s c o u l d b e

l a b e l e d

w i t h

t h e a n t i -



A - g o l d

c o m p l e x

F i g .

l c

t o

f .

I n P .

c h r y s o s p o r i u m

a n d D .

s q u a l e n s , g o l d

g r a n u l e s

w e r e f o u n d

m a i n l y i n t r a c e l l u l a r l y i n

t h e

c y t o p l a s m i c

a r e a

c l o s e t o

t h e

p l a s m a l e m m a

F i g .

l c

a n d

d .

C o r i o l u s

v e r s i c o l o r w a s

o n l y s l i g h t l y

l a b e l e d

o n l y

i n t r a c e l l u l a r l y

F i g .

l e . No e x t r a c e l l u l a r l i g n i n

p e r o x i d a s e

was

d e t e c t e d i n

t h e p r o x i m i t y o f t h e

f u n g i

o r a s s o c i a t e d

w i t h

t h e

w o o d .

S i m i l a r l y

t o

i n v i t r o

e x p e r i m e n t s ,

f u n g i

d e g r a d i n g p i n e

w o o d

i n n a t u r e w e r e

l a b e l e d w i t h t h e

a n t i - l i g n i n

p e r o x i d a s e


A - g o l d

c o m p l e x

F i g .

l g

t o

i L i g n i n

p e r o x i d a s e

w a s

c o n c e n t r a t e d

m a i n l y

i n

t h e p l a s m a

mem-

b r a n e r e g i o n

F i g .

l g

a n d

h .

Some

l i g n i n


c o m pl e x e s w e r e v i s u a l i z e d

e x t r a c e l l u l a r l y ,

s o m e t i m e s

t r a p p e d i n t h e

e x t r a c e l l u l a r

f u n g a l

s l i m e

F i g .

l i ,

b u t n e v e r

i n d i r e c t

c o n t a c t w i t h t h e

w o o d . W a l l c h a n n e l s

p o s s i b l y

r e s p o n s i b l e

f o r t h e

t r a n s p o r t o f t h e

e n z y m e t o

t h e e x t e r i o r

w e r e

d e t e c t e d

F i g .

l h

a n d

i .

No l a b e l i n g o f C .

a l b i c a n s

o r A .

f u m i g a t u s

w a s

o b s e r v e d ,

i n d i c a t i n g

t h a t

t h e


p e r o x i d a s e - p r o t e i n

A - g o l d

c o m p l e x

r e a c t i o n w a s s p e c i f i c

t o l i g n i n

p e r o x i d a s e

p r o d u c e d

b y


f u n g i .

DISCUSSION

L i g n i n

p e r o x i d a s e

p r o d u c t i o n i n

v i t r o

h a s b e e n o b s e r v e d

f o r s e v e r a l

l i g n i n o l y t i c f u n g i

( M .

L e i s o l a ,

u n p u b l i s h e d

d a t a .

T h e

c r o s s - r e a c t i v i t y

o b s e r v e d

b e t w e e n a n

a n t i - P .

c h r y s o s p o -

r i u m

l i g n i n

p e r o x i d a s e

a n t i s e r u m a n d

t h e d i f f e r e n t

f u n g i

g r o w i n g e i t h e r

u n d e r

l a b o r a t o r y

c o n d i t i o n s

o r

i n

n a t u r a l l y

b i o d e g r a d e d

wood

s u g g e s t s

t h a t

o t h e r


f u n g i

a r e

a l s o

a b l e t o p r o d u c e

s i m i l a r

o r

h i g h l y

r e l a t e d

l i g n i n

p e r o x i -

d a s e c o m p l e x e s , w h i c h

a r e

s t o r e d

n e a r

t h e

p l a s m a l e m m a .

T h e a b s e n c e

o f

l a b e l i n g i n P l e u r o t u s o s t r e a t u s i n d i c a t e s

t h a t

t h i s

f u n g u s

p r o d u c e s

a n

e n z y m e

d i f f e r e n t f r o m

t h a t

p r o d u c e d

b y P .

c h r y s o s p o r i u m .

O u r r e c e n t

r e s u l t s s h o w t h a t

P l e u r o t u s

o s t r e a t u s

p r o d u c e s

e x t r a c e l l u l a r

l i g n i n

p e r o x i d a s e s

w h i c h

a r e

n o t

r e c o g n i z e d

b y t h e

P .


a n t i b o d i e s

b y

i m m u n o b l o t t i n g

m e t h o d s ( M .

L e i s o l a

a n d

R .

W a l d n e r ,

u n -

p u b l i s h e d

r e s u l t s .

L i g n i n

p e r o x i d a s e

w a s

l o c a t e d

m a i n l y

i n t r a c e l l u l a r l y

i n

n a t u r a l l y

d e c a y e d

w o o d ,

i n d i c a t i n g

t h a t

l i g n i n

p e r o x i d a s e

w a s

n o t

r e l e a s e d ,

a t

l e a s t i n

h i g h

a m o u n t s ,

e x t r a c e l l u l a r l y .

M o r e o v e r , n o

e x t r a c e l l u l a r l i g n i n

p e r o x i d a s e

was d e t e c t e d

w h e n

u n f i x e d

s a m p l e s o f

P .


g r o w n

o n

p o p l a r

s a w d u s t w e r e

s u c c e s s i v e l y

i n c u b a t e d

w i t h


p e r o x -

i d a s e

a n t i s e r u m

a n d

a n t i - r a b b i t

i m m u n o g l o b u l i n

G - f l u o r e s -

c e i n

i s o t h y o c y a n a t e

c o n j u g a t e S .

G ar c i a a n d J . P .

L a t g e ,

u n p u b l i s h e d

r e s u l t s .

T h i s

e x p e r i m e n t

c o n f i r m e d

o u r

t r a n s -

m i s s i o n

e l e c t r o n

m i c r o s c o p y

s t u d i e s

a n d

i n d i c a t e d

t h a t

t h e

a b s e n c e o f

e x t e r n a l

l a b e l i n g

w a s

n o t

d u e

t o

t h e f i x a t i o n

a n d

e m b e d d i n g

t r e a t m e n t s .

H o w e v e r ,

o u r

s t u d i e s

h a v e d e m o n -

s t r a t e d

t h a t t h e

e n z y m e

c a n

b e

t r a n s p o r t e d

t h r o u g h

w a l l

c h a n n e l s t o

t h e

e x t e r n a l m e d i u m .

More

w o r k

i s

n e c e s s a r y

t o

u n d e r s t a n d

t h e

k i n e t i c s o f s y n t h e s i s

a n d r e l e a s e

o f

t h e

l i g n i n

p e r o x i d a s e

u n d e r

n a t u r a l c o n d i t i o n s .

T h e s t r u c t u r e o f

t h e

c h a n n e l s

a l l o w i n g

t h e

t r a n s p o r t

o f

p r o t e i n s

t h r o u g h

t h e w a l l

i s

p r e s e n t l y

u n k n o w n .

H o w e v e r ,

s e v e r a l s t u d i e s

on z o o -

p a t h o g e n i c

f u n g i h a v e

s u g g e s t e d

t h a t s i m i l a r c h a n n e l s a r e

i n v o l v e d

i n

t h e

s e c r e t i o n

o f

a n t i g e n s

2 5 .

V O L .

5 3 ,

1 9 8 7


4/5


5/5

LIGNIN

PEROXIDASE

IMMUNOCYTOCHEMISTRY

2 3 8 7

Th e l o c a l i z a t i o n o f

l i g n i n

p e r o x i d a s e

i n s i d e

t h e c e l l

w a l l

d u r i n g t h e d e g r a d a t i o n o f

n a t u r a l

s u b s t r a t e s

may a l s o

i n d i -

c a t e t h a t

i n n a t u r e ,

l i g n i n p e r o x i d a s e i s

n o t n e c e s s a r y

d i -

r e c t l y i n

c o n t a c t

w i t h

l i g n i n .

Harvey e t a l . 1 0 h a v e

s u g -

g e s t e d a n d Haemmerli e t a l .

9

d e m o n s t r a t e d

t h a t

t h e l i g n i n

p e r o x i d a s e c a n o x i d i z e l i g n i n

t h r o u g h

o n e - e l e c t r o n

t r a n s f e r

m e d i a t o r s

s u c h a s v e r a t r yl a l co h o l . T h i s means t h a t

n o d i r e c t

c o n t a c t

i s

n e c e s s a r y

b e t w e e n t h e

enzyme

a n d

t h e

l i g n i n .

N e v e r t h e l e s s ,

t h e a b i l i t y

o f t h e enzyme

t o r e c o g n i z e l i g n i n

i s

d e m o n s t r a t e d ,

s i n c e

i t

i s

a b l e

t o

b i n d

t o

a n

i s o l a t e d

l i g n i n ,

MWL Th e a b s e n c e

o f l a b e l i n g

o f

wood w i t h

l i g n i n

p e r o x i -

d a s e - a n t i - l i g n i n

p e r o x i d a s e - p r o t e i n

A - g o l d c o u l d b e d u e

t o

t h e

i n a c c e s s i b i l i t y o f t h e l i g n i n i n wood t o

t he a c t i v e s i t e s o f

t h e

e n z y m e .

J a n s h e k a r

e t a l .

1 4

a n d

C h u a e t a l .

5

h a v e shown

t h a t

i s o l a t e d l i g n i n s a r e

t i g h t l y

bound t o t h e f u n g a l

m y c e l i a d u r i n g

d e g r a d a t i o n

b y P .


We s u g g e s t t h a t

t h e l i g n i n

d e g r a d a t i o n i n s u c h

a c a s e

n e e d s a d i r e c t

c o n t a c t

w i t h

t h e

f u n g a l

c e l l w a l l a n d i s i n i t i a t e d

b y


a n d

m e d i a t e d b y v e r a t r y l a l c o h o l c a t i o n r a d i c a l s .

On t h e o t h e r

h a n d , t h e r e a r e r e s u l t s b a s e d o n e l e c t r o n m i c r o s c o p y

2 t h a t

show

t h a t l i g n i n i s

b e i n g d e g r a d e d

a t

some d i s t a n c e

f r o m

t h e

f u n g a l h y p h a e . W i t h t h e

p r e s e n t

l e v e l

o f

u n d e r s t a n d i n g o f

t h e

l i g n i n

b i o d e g r a d a t i o n

m e c h a n i s m s , t h e s e o b s e r v a t i o n s

a r e

d i f f i c u l t t o

e x p l a i n .

T he enzymes s u c h

a s

l i g n i n

p e r o x i d a s e

a n d

l a c c a s e ,

w h i c h a r e known t o a t t a c k l i g n i n ,

d o

n o t

d e g r a d e

l i g n i n i n v i t r o b ut , r a t he r , p o l y m e r i z e

i t 9 . Thus

a t

some d i s t a n c e

f r o m

t h e f u n g a l h y p h a e ,

l i g n i n

c o u l d

b e

m o d i f i e d

b y

t he a ct i o n o f v e r a t r y l a l c o h o l c a t i o n

r a d i c a l s ,

a c t i v a t e d

oxygen

s p e c i e s , o r M n ( I II ) . T h i s k i n d o f

m o d i f i c a -

t i o n i s e x p e c t e d

t o

l e a d t o a r o m a t i c r i n g

o p e n i n g

a n d

i n c o r p o r a t i o n

o f

oxygen

i n t o t h e l i g n i n s t r u c t u r e .

F u r t h e r

d e m e t h o x y l a t i o n

a n d a c i d

a n d

q u i n o n e f o r m a t i o n

w i l l p r o b -

a b l y o c c u r ( M . S .

A .

L e i s o l a , S . D . H a e m m e r l i , J . D .

G .

S m i t ,

J . T r o l l e r ,

R .

W a l d n e r ,

H .

E .

S c h o e m a k e r , a n d

H .

S c h m i d t ,

I

I n t . C o n g r . L i g n i n Enzymic M i c r o b i a l

D e g r a d a -

t i o n , P a r i s , 1 9 8 7 , p .

6 .

However, f o r r e a l

d e p o l y m e r i z a t i o n

o f

l i g n i n ,

t h e

e q u i l i b -

r i u m w h i c h f a v o r s s p o n t a n e o u s p o l y m e r i z a t i o n

m u s t

b e

s h i f t e d

b y

some m e a n s .

T h i s m i g h t o c c u r b y

r e d u c t i v e

r e a c t i o n s

a n d b y

i m m e d i a t e

i n c o r p o r a t i o n o f t h e

d e g r a d e d

m a t e r i a l t h r o u g h

t h e f u n g a l

c e l l w a l l . F o r

a l l

o f

t h e s e

p r o c e s s e s

t h e l i g n i n m u s t b e l o c a t e d

n e a r t h e h y p h a e .

To

u n d e r s t a n d a l l t h e o b s e r v a t i o n s

made s o f a r

o n

l i g n i n

d e g r a -

d a t i o n

i n v i t r o a n d

i n v i v o ,

more

b a s i c

r e s e a r c h

m u s t

b e

c a r r i e d

o u t .

LITERATURE

CITED

1 . B e n d a y a n ,

M . 1 9 8 1 .

E l e ct r on m ic ro s co pi c a l

l o c a l i z a t i o n

o f

n u c l e i c a c i d s b y

m e a n s o f

n u c l e a s e - g o l d

c o m p l e x e s .

H i s t o c h e m .

J . 1 3 : 6 9 9 - 7 1 0 .

2 . B l a n c h e t t e ,

R . A . ,

a n d

I . D . R e i d . 1 9 8 6 . U l t r a s t r u c t u r a l

a s p e c t s

o f w o o d

d e l i g n i f i c a t i o n

b y

P h l e b i a

M e r u l i u s t r e m e l l o s u s .

A p p l .

E n v i r o n .

M i c r o b i o l .

5 2 : 2 3 9 - 2 4 5 .

C a r l e m a l m , E . , R . M . G a r a v i t o a n d

W.

V i l l i g e r .

1 9 8 2 .

R e s i n

d e v e l o p m e n t

f o r

e l e c t r o n m i c r o s c o p y

a n d a n a n a l y s i s o f

e m b e d -

d i n g

a t

l o w

t e m p e r a t u r e .

J .

M i c r o s c .

( O x f o r d )

1 2 6 : 1 2 3 - 1 4 3 .

4 . C a t e s s o n ,

A . M.

1 9 8 3 . A c y t o c h e m i c a l i n v e s t i g a t i o n

o f

t h e

l a t e r a l

w a l l s o f

D i a n t h u s v e s s e l s . D i f f e r e n t i a t i o n a n d

P I T -

m e m b r a n e

f o r m a t i o n .

I n t . A s s o c . Wood

A n a t .

B u l l .

4 : 8 9 - 1 0 1 .

5 . C h u a ,

M. G .

S . ,

S . C h o i ,

a n d T . K .

K i r k .

1 9 8 3 .

M y c e l i u m

b i n d i n g

a n d

d e p o l y m e r i z a t i o n o f s y n t h e t i c

1 4 C - l a b e l e d

l i g n i n

d u r i n g d e c o m p o s i t i o n

b y

P h a n e r o c h a e t e


H o l z -

f o r s c h u n g 3 7 : 5 5 - 6 1 .

6 .

C z a n i n s k i ,

I . 1 9 7 9 . C y t o c h i m i e u l t r a s t r u c t u r a l e d e s p a r o i s

d u

x y l e m e

s e c o n d a i r e .

B i o l . C e l l . 3 5 : 9 7 - 1 0 2 .

7 .

E g g e l i n g ,

L . 1 9 8 3 . L i g n i n - a n e x c e p t i o n a l b i o p o l y m er a n d

a

r i c h

r e s o u r c e

. ? T r e n d s

B i o t e c h n o l .

1 : 1 2 3 - 1 2 7 .

8 .

E r i k s s o n ,

K . - E . , A . G r u n e w a l d , T .

N i l s s o n , a n d

L .

W a l l a n d e r .

1 9 8 0 .

A

s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y

s t u d y

o f

t h e

g r o w t h

a n d

a t t a c k o n

wood b y t h r e e

w h i t e - r o t

f u n g i

a n d t h e i r c e l l u l a s e l e s s

m u t a n t s .

H o l z f o r s c h u n g

3 4 : 2 0 7 - 2 1 3 .

9 . H a e m m e r l i ,

S . D . , M. L e i s o l a , a n d A . F i e c h t e r . 1 9 8 6 .

P o l y m e r i s a t i o n o f l i g n i n s

b y

l i g n i n a s e

f r o m


c h r y s o s p o r i u m . FEMS M i c r o b i o l .

L e t t . 3 5 : 3 3 - 3 6 .

1 0 .

H a r v e y ,

P . J . , H . E .

S c h o e m a k e r , a n d J . M. P a l m e r .

1 9 8 6 .

V e r a t r y l a l c o h o l a s a m e d i a t o r a n d t h e

r o l e

o f

r a d i c a l

c a t i o n s

i n

l i g n i n

b i o d e g r a d a t i o n

b y P h a n e r o c h a e t e

c h r y s o s p o r i u m . FEBS

L e t t .

1 9 5 : 2 4 2 - 2 4 6 .

1 1 . H o d g e s ,

G .

M . , M . A . S mo l i ra , a n d D .

C .

L i v i n g s t o n .

1 9 8 4 .

S c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y

i m m u n o c y t o c h e m i s t r y i n

p r a c -

t i c e ,

p . 1 8 9 2 3 3 . I n J .

M . P o l a k

a n d

I . M . V a r n d e l l

e d . ,

I m m u n o l a b e l l i n g f o r

e l e c t r o n

m i c r o s c o p y . E l s e v i e r

S c i e n c e

P u b l i s h e r s

B . V . , A m s t e r d a m .

1 2 . H o f f m a n n ,

P . ,

a n d

N .

P a r a m e s w a r a n .

1 9 7 6 . On t h e

u l t r a s t r u c -

t u r a l

l o c a l i z a t i o n

o f

h e m i c e l l u l o s e s

w i t h i n d e l i g n i f i e d t r a c h e i d s

o f

s p r u c e . H o l z f o r s c h u n g

3 0 : 6 2 - 7 0 .

1 3 .

H o r i s b e r g e r ,

M . 1 9 7 9 . E v a l u a t i o n

o f c o l l o i d a l

g o l d a s a

c y t o -

c h e m i c a l m a r k e r f o r

t r a n s m i s s i o n

a n d

s c a n n i n g

e l e c t r o n

m i c r o s -

c o p y .

B i o l . C e l l . 3 6 : 2 5 3 - 2 5 8 .

1 4 . J a n s h e k a r ,

H . ,

C .

B r o w n ,

T . H a l t m e i e r ,

M . L e i s o l a , a n d

A .

F i e c h t e r .

1 9 8 2 .

B i o a l t e r a t i o n

o f K r a f t p i n e l i g n i n b y

P h a n e r o -

c h ae t e c h ry s o s po r i u m .

A r c h .

M i c r o b i o l .

1 3 2 : 1 4 - 2 1 .

1 5 .

K i r k ,

T .

K . ,

S . C r o a n ,

M. T i e n

K . E . M u r t a g h , a n d R .

L .

F a r r e l l .

1 9 8 6 . P r o d u c t i o n o f m u l t i p l e l i g n i n a s e s

b y P h a n e r o -

c h ae t e c h ry s o s po r i u m :

e f f e c t

o f s e l e c t e d

g r o w t h

c o n d i t i o n s

a n d

u s e

o f a m u t a n t s t r a i n .

Enzyme M i c r o b . T e c h n o l . 8 : 2 7 - 3 2 .

1 6 . L a u r e l l , C .

B .

1 9 6 5 .

Q u a n t i t a t i v e

e s t i m a t i o n

o f

p r o t e i n s

b y

e l e c t r o p h o r e s i s i n

a g a r o s e g e l

c o n t a i n i n g a n t i b o d i e s .

A n a l . B i o -

c h e m . 1 0 : 3 5 8 3 6 1 .

1 7 .

L e i s o l a ,

M . , U . T h a n e i - W y s s , a n d

A . F i e c h t e r . 1 9 8 5 .

S t r a t e g i e s

f o r

p r o d u c t i o n o f h i g h l i g n i n a s e

a c t i v i t i e s

b y


c h r y s o s p o r i u m . J .

B i o t e c h n o l .

3 : 9 7 1 0 7 .

1 8 .

L i b e r m a n - M a x e ,

M .

1 9 8 2 .

L a d i f f e r e n c i a t i o n

d e s

t r a c h e i d e s

d u

p o l y p o d e . E t u d e c y t o l o g i q u e

e t c y t o c h i m i q u e . A n n .

S c i . N a t .

B o t . B i o l . V e g . 1 3 4 : 9 1 - 1 1 1 .

1 9 .

M o n t i e s

B . , E . O d i e r ,

G .

J a n i n ,

a n d I . C z a n i n s k i .

1 9 8 1 .

U l t r a -

s t r u c t u r a l

e v i d e n c e o f b a c t e r i a l a n d

c h e m i c a l d e l i g n i f i c a t i o n

o f

p o p l a r w o o d . H o l z f o r s c h u n g

3 5 : 2 1 7 - 2 2 2 .

2 0 . R o t h ,

J .

1 9 8 2 . T h e

p r o t e i n

A - g o l d

( p A g )

t e c h n i q u e - a

q u a l i t a -

t i v e a n d q u a n t i t a t i v e

a p p r o a c h f o r a n t i g e n l o c a l i z a t i o n

o n

t h i n

s e c t i o n s , p . 1 0 8 1 3 3 . I n

G . R . B u l l o c k a n d P . P e t r u s z

e d . ,

T e c h n i q u e s

i n

i m m u n o c y t o c h e m i s t r y ,

v o l .

1 .

A c a d e m i c

P r e s s ,

I n c . ( L o n d o n ) , L t d . , L o n d o n .

2 1 . R u e l ,

K . , F .

B a r n o u d ,

a n d

K . - E . E r i k s s o n . 1 9 8 1 .

M i c r o m o r -

p h o l o g i c a l a n d

u l t r a s t r u c t u r a l a sp e ct o f s p r u c e w o o d

d e g r a d a -

t i o n b y w i l d - t y p e S p o ro t r i c h u m p u l ve r u l en t u m a n d i t s

c e l l u l a s e -

l e s s

m u t a n t

c e l

4 4 .

H o l z f o r s c h u n g

3 5 : 1 5 7 - 1 7 1 .

2 2 .

R u e l , K . ,

a n d

J .

P .

J o s e l e a u .

1 9 8 4 .

U s e

o f e n z y m e - g o l d c o m -

p l e x e s f o r t h e u l t r a s t r u c t u r a l

l o c a l i z a t i o n o f h em ic e ll u l o se s

i n

t h e

p l a n t

c e l l

w a l l .

H i s t o c h e m i s t r y

8 1 : 5 7 3 - 5 8 0 .

2 3 . S a k a ,

S . , a n d

R . J . T h o m a s . 1 9 8 2 . A s t u dy o f

l i g n i f i c a t i o n i n

l o b l o l l y

p i n e t r a c h e i d s b y

t h e SEM-EDXA t e c h n i q u e .

Wood

S c i . T e c h n o l .

1 6 : 1 6 7 - 1 7 9 .

2 4 .

S a k a , S . , R . J . T h o m a s , a n d J . S . G r a t z l . 1 9 7 8 .

L i g n i n

d i s t r i b u -

t i o n .

D e t e r m i n a t i o n

b y

e n e r g y - d i s p e r s i v e a n a l y s i s

o f

X

r a y s .

T a p p i 6 1 : 4 7 3 - 4 7 6 .

2 5 . T a k a m i y a , H . ,

A .

V o g t ,

S .

B a ts f or d , E .

S . K u t t i n , a n d

J .

M u l l e r .

1 9 8 5 . F u r t h e r s t u d i e s o n

t h e

i m m u n o e l e c t r o n

m i c r o s c o p i c l o c a l -

i z a t i o n

o f

p o l y s a c c h a r i d e

a n t i g e n s

o n

u l t r a t h i n

s e c t i o n s o f

C a n d i d a a l b i c a n s .

M y k o s e n 2 8 : 1 7 2 2 .

2 6 . T i e n , M . , a n d

T .

K . K i r k .

1 9 8 4 .

L i g n i n - d e g r a d i n g

e n z y m e f r o m


c h r y s o s p o r i u m : p u r i f i c a t i o n ,

c h a r a c t e r i z a t i o n

a n d c a t a l y t i c p r o p e r t i e s o f

a

u n i q u e

H 2 0 2 - r e q u i r i n g

o x y g e n a s e .

P r o c .

N a t l .

A c a d . S c i .

USA

8 1 : 2 2 8 0 - 2 2 8 4 .

2 7 . V i a n ,

B . , J . M.

B r i l l o u e t ,

a n d

B .

S a t i a t - J e u n e m a i t r e .

1 9 8 3 .

U l t r a s t r u c t u r a l v i s u a l i z a t i o n

o f x y l a n s i n c e l l w a l l s

o f h a r d w o o d

b y m e a n s

o f

x y l a n a s e - g o l d c o m p l e x .

B i o l . C e l l .

4 9 : 1 7 9 - 1 8 2 .

2 8 .

W e g e n e r , G . ,

a n d D .

F e n g e l .

1 9 7 9 . R a p i d

u l t r a s o n i c

i s o l a t i o n o f

m i l l e d

w o o d

l i g n i n s .

F r a c t i o n a t i o n a n d

d e g r a d a t i o n

e x p e r i -

m e n t s .

T a p p i

6 2 : 9 7 - 1 0 0 .

V O L .

5 3 ,

1 9 8 7

appl. environ. microbiol. 1987 garcia 2384 7

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