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ASSOCIAO DO GENE DE EMPENAMENTO LENTO (K)LIGADO AO SEXO, COM O VRUS ENDGENO EV 21

(ASSOCIATION OF THE SEX-LINKED LATE FEATHERINGGENE (K) WITH THE ENDOGENOUS EV 21 VRUS)

R. W. S. CUSTDIO1,2, A. A. D. COELHO1, V. J. M. SAVINO1

RESUMO

Amostras de DNA de 12 linhagens de galinhas para corte pertencentes ESALQ/USP foram enviadas para anliseno ADOL ( Avian Disease and Oncology Laboratory, East Lansing, Michigan ). O DNA foi extrado de sangue e asamostras foram clivadas com a enzima de restrio Hae III. Os fragmentos de DNA foram separados em agarose 0.8%,sendo que as membranas foram hibridizadas com a sonda EV21-int. Das 12 amostras de DNA analizadas, seis delas,extradas de fmeas de empenamento lento ( SF ), revelaram o gentipo empenamento lento tipo B, caracterstico degalinhas para corte. Duas outras amostras, obtidas de fmeas de empenamento rpido ( RF ) tambm apresentaram ogentipo empenamento lento tipo B. Aparentemente, algumas linhagens de galinhas para corte com empenamento rpidopodem ter retido o gene ev21. Outras 3 amostras, tambm obtidas de fmeas com empenamento rpido (RF ) mostraram umgentipo variante tipo G, e provavelmente, perderam o gene ev21. Os fragmentos de juno no foram encontrados,sendo somente detectado uma banda a um repeat no ocupado ( Ura ). Um dos fentipos analisados de outra linhagem deempenamento lento, apresentou um gentipo variante tipo F, sem o gene ev21. Esta uma combinao gentipo/fentipoideal, porque reteve o fentipo sexvel, mas est livre dos efeitos detrimentais do gene ev21. Uma nova linhagem degalinhas para corte homozigtica para o gene K poderia ser formada a partir de variantes K (v ). Essa nova variante, semefeitos detrimentais, poderia ento ser transferida inclusive para linhagens comerciais, com o auxlio da seleo genmicausando marcadores moleculares.

PALAVRAS-CHAVE: Empenamento lento, Gene ligado ao sexo, Vrus endgeno ev-21.

SUMMARY

DNA samples of twelve lines of meat type chickens were sent for analysis to the Avian Disease andOncology Laboratrio ( ADOL ), East Lansing, Michigan. The DNAsamples were extracted from blood and clived by theHae III restriction enzyme. The DNA fragmentswere separated in agarose 0.8% , transfered to membranes and hybridizedwith the probe Ev21-int. Six of the samples were extracted from late feathering females and showed the late feathering typeB genotype, caracteristic of meat type chickens. Other two samples from rapid feathering females also showed the latefeathering genotype B. Aparently, some fast feathering meat type lines can have retained the ev21 gene. Other three samples,also from fast feathered females showed a genotype variant type G, and probably have lost the ev21 gene. The junctionfragments werw not found, being detected only a band associated to a non occupied repeat ( URa ). One of the analyzedphenotypes from another fast feathering line showed a variant genotype type F, without the ev21 gene. This is an idealgenotype-phenotype combination because have retained the phenotypes needed for sexing chicks but it is free from the

1 Departamento de Gentica, ESALQ/USP, Caixa Postal 83, CEP 13.418-900. Piracicaba, SP.2 Bolsista do CNPq

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detrimental effects of the ev21 gene. A new line of meat type chicken,homozigotic for the K gene could be synthetized fromthis variant. This new variant, without detrimetal effects due to the EV21 virus could then be transferred to commerciallines with the help of molecular markers and genomic selection.

KEY-WORDS: Endogenous ev21, Late feathering gene, Sex-linked K gene.

INTRODUO

Pintos de corte sexveis pela asa podem ser obtidosdo acasalamento de machos com gentipo kk(empenamento rpido) com fmeas K (empenamentolento). A mutao dominante ligada ao sexo, empenamentolento (SF) codificada pelo gene K portanto, deconsidervel importncia econmica na seleo do sexode pintos nos incubatrios. Ao contrrio da sexagem pelacloaca, no h necessidade de sexadores altamentehabilitados, economizando-se assim, cerca de 3 centavosde dlar por pinto sexado. Nos Estados Unidos, entre 30 -50% dentre 240 milhes de pintos so selecionados combase no comprimento da pena em hbridos sexados pelaasa. Entretanto, embora os pintos sexveis pela asa sejammuito desejados, o gene K esta intimamente ligado ao geneev21 que codifica o vrus endgeno infeccioso EV21 (BACON et al., 1988 ). Esse vrus responsvel pela menorproduo de ovos das reprodutoras K e tambm provocaefeitos detrimetais na produtividade de suas prognies comrelao taxa de crescimento, viabilidade, peso corporal,ganho de peso, converso alimentar e nmero de ovos emgalinhas ( HARRIS et al., 1984; HAVENSTEIN et al., 1989). Apesar disso, o gene K, possivelmente, tambm,apresenta vantegens para a adaptao de galinhas a climastropicais ( HORST, 1989 ). Multiplicadores comerciais jvem distribuindo matrizes de galinhas para corte,produtoras de pintos de um dia sexveis pela asa mas, atransmisso congnita e a influncia telerognica do geneev21 podem trazer empecilhos a uma maior difuso dessaprtica. Da o intersse em se desenvolver linhagens defrangos sexveis atravs do gene K ligado ao cromossomasexual Z, que no sejam portadores do vrus endgenoEV21. Neste trabalho so revisados e discutidos resultadosobtidos por COELHO et al. ( 1993 ), referente a anlisede DNA de galinhas para corte, objetivando pesquisar apossibilidade de se obter uma linhagem homozigtica parao gene K, porm, sem o vrus EV21.

REVISO DA LITERATURA

Empenamento lento Em galinhas, um gene dominante K regula oempenamento lento ( SF ), enquanto o alelo recessivo k+determina empenamento rpido ( RF ). Este caracter

fornece uma estratgia conveniente e barata paraidentificao de pintos no nascimento. Quando os machos( k+ k+ ) de empenamento rpido ( RF ) so acasaladoscom galinhas de empenamento lento ( K ), as progniesfmeas ( k+ ) so facilmente distinguveis das progniesmacho, de empenamento rpido ( Kk+ ), devido a presenado gene dominante K ( WARREN, 1925 ). Vriosmelhoristas introduziram o gene do empenamento lento (SF ) ligado ao sexo em linhagens maternas, de modo adiminuir custos associados com a sexagem manual empintos de um dia.

GENE K, ev21 e produtividadeO gene K est presente em muitas linhagens de

White Leghorns ( WL ), porm, as prognies fmea deme SF produzem menos ovos e tem maior mortalidadedo que as prognies de me RF. Esta perda emprodutividade tem sido atribuda a maiores taxas deinfeco e liberao de vrus da leucose ( ALV ) emlinhagens maternas SF do que em RF.

H um aumento na incidncia de viremia com vrusexgeno da leucose aviaria ( ALV ) e uma mortalidademaior em prognies fmeas de mes SF portadoras do geneK ( HARRIS et al., 1984 ). Em aves normais, vrusendgenos ( EVs ) so herdados de maneira mendelianacomo genes de cpia nica em locus ev que residem emdiversos cromossomos ( ASTRIN, 1978; ROVIGATTI eASTRIN, 1983 ). A digesto de DNA genmico produzpossui diferentes polimorfismos de fragmentos de restrio( RFLPs ) que so caractersticos para cada locus. Assimfoi encontrado o locus ev 21 ( HUMPHRIES et al., 1984).

Vrus EV21 e gene K ligadosO locus ev21, que codifica vrus infeccioso EV21,

est associado com o gene K ligado ao sexo, o qual confereo caracter SF. BACON et al. ( 1988 ) concluram que genesev21 e K esto fortemente ligados porque, em diferentescruzamentos de WL, todos os pintos SF herdaram o geneev21 e o vrus EV21 estava uniformemente ausente nosirmos RF.

Alternativamente, o gene K em WL pode ser umamutao resultante da insero do vrus EV21. Os pintosSF portadores do gene ev21 expressaram os vrus EV21infeccioso, havendo evidncia de que o vrus EV21 podeinfluenciar a susceptibilidade ao ALV. Como os vrusendgenos infecciosos ( EVs ) podem induzir tolerncia

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imunolgica ao ALV, BACON et al. ( 1988 ) examinarama expresso e distribuio de vrus endgenos em irmosSF e RF derivados de galos Kk+ e mes k+. Genes evespecficos foram identificados por meio de RFLPs apshibridizao com um plasmdio recombinante que continhao genoma completo de um vrus Rous-associado.

ALV e EV congnitosOs vrus da leucose aviria ( AVLs ),

antigenicamente relacionados, de origem endgena eexgena podem coexistir em galinhas. Em plantis decampo, exogenamente, infectados com ALV, o vrus eficientemente liberado no albmen e congenitamente,transmitido atravs do ovo para a descendncia. Por suavez, prognies imunolgicamente tolerantes perpetuam ainfeco porque elas permanecem virmicas. As fmeastambm liberam elevados ttulos de vrus nos ovos etransmitem vrus congenitamente por toda a sua vida (BURMESTER et al., 1955; RUBIN et al., 1961 ).Fenptipicamente falando, genes ev podem estar associadoscom provrus infeccioso, defectivo ou no exprimido (ROVIGATTI e ASTRIN, 1983 ). Os vrus da leucoseaviria ( AVLs ) endgenos e exgenos ncompartilhamextensa humologia de sequncias de nucleotdeos, mas osretrovrus endgenos que so classificados no subgrupo Eno so oncognicos, em contraste com os ALVsclassificados nos subgrupos A, B, C e D que produzemtumores em hospedeiros susceptveis. SMITH eCRITTENDEN ( 1986 ) mostram que uma linhagem deempenamento lento de WL, que era supostamente livre doALV exgeno, produziu ALVs endgenos e exgenos.Produo e transmisso congnita de vrus endgenos daleucose aviria foram estudados por SMITH et al. ( 1986) em galinhas WL virmicas exogenamente infectadas comLTRs ( long terminal repeats ) endgenos e em linhagenssemi-congnitas de galinhas que, naturalmenteexpressaram vrus infecciosos endgenos ( EVs ). Vrusendgenos relacionados a vrus da leucose aviria foram,tambm, caracterizados em famlias de macho de WLs deempenamento lento. As prognies liberaram vrusinfeccioso endgeno quando extratos foram testados emfibroblastos susceptveis ao subgrupo E. O cultivo seletivode ALVs de embries e neutralizaes de soro subgrupo-especfico mostraram que mes SF (mas no galos SF),transmitian, congenitamente, ALV. Triagens virolgicas ehibridizaes moleculares de DNA genmico (RFLPs)revelaram que a linhagem SF era portadora comtransmisso pela linha germinal de ev1, ev5, ev21, e emlocus ev22 que havia sido, originalmente, relatado em outralinhagem tambm de empenamento lento (HUMPHRIESet al., 1984). SMITH e CRITTENDEN, (1988) mostraramque EV21 era, congenitamente, transmitido para filhas demes SF EV-susceptveis, enquanto EV no era transmitido

para filhas de mes SF EV-resistentes.

Anlise do complexo ev21-K Os experimentos descritos por LEVIN e SMITH (1990)constituem uma anlise molecular inicial designada aelucidar o complexo ev21-K, envolvendo: 1) descrio daclonagem molecular de um fragmento de juno e restrio(JF) do gene ev21 e um fragmento homlogo ao stio deintegrao do vrus EV21, chamado sitio no ocupado(US); 2) uso de provas locus-especficas que foramutilizadas para caracterizar stios ev21 ocupados e noocupados, pela anlise de restrio detalhada dos clonesJF e US; 3) Uso de provas locus-especficas para estudara associao entre ev21 e SF em outras raas que no aWL, e identificao de um RFLP caracterstico de SF ev21-induzido e, 4) anlise molecular de DNA de aves RFrevertentes de linhagens SF para determinar o mecanismode reverso. Um fragmento EcoRI correspondente aovrus endgeno EV21-cell junction fragment e umfragmento homlogo ao stio proviral no ocupado (US)foram clonados, respectivamente, de livrarias de DNAgenmico de duas aves WL, sendo uma fmea ev21 e ummacho ev-negativo. Um fragmento de 1,7 kilobase partes(kbp), clivado do provrus US e clonado pela endonucleasede restrio Hae III, foi a prova mais informativa paracaracterizar molecularmente os stios de integraoocupados e no ocupados do locus ev21. A anlise doRFLP de aves SF e RF de vrias raas comerciais, usandoa prova US Hae III de 1,7 kbp, indicou que a completaassociao gentica entre gene ev21 e o fentipo SF comum entre outras linhagens de galinhas Sf e no erarestrita a WL. Tambm foi mostrado que havia pelo menosuma regio adicional de DNA homloga seqncias deDNA flanqueadoras do stio de integrao ev21 do genomada galinha. Em aves SF de ambos os sexos este repeatadicional era distinguvel do stio ocupado pelo ev21 (OR)e representa um repeat no ocupado (UR). Anlises deDNA de fmeas RF revertentes mostrou novos padres dereverso. Nos revertentes RF do tipo I, RF esta associadocom a exciso completa das seqncias de DNA proviraisev21. Nos revertentes do tipo II, o UR homlogo asseqncias da clula que flanqueiam o stio de integraoev21 excisado, mas as seqncias provirais ev21permanecem intactas. Uma hiptese para explicar este tipode reverso uma ntima associao entre OR e UR nocromossoma Z.

Mutagnese de inseroMutagnese insercional por elementos genticos

mveis tem sido til para a anlise funcional de genes(KRATOCHWIL et al., 1989). Mutaes insercionais temsido produzidas experimentalmente pela integrao deretrovrus na linha germinativa do camundongo

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(JAENISCH et al., 1987). Pelo menos trs mutaesexpontneas esto ligadas a provrus endgenos emcamundongo (JENKINS et al., 1981; COPELAND et al.,1983 a; STOYE et al., 1988). Galinhas que so SF-EV21negativas ou RF-EV21 positivas ainda no foramencontradas. Entretanto, melhoristas tem observado aocorrncia de fmeas SF,presumivelmente, homozigticas(BACON et al., 1988). Se a reverso para RF sempreacompanhada pela perda de seqncias ev21, isso poderiaapoiar a hiptese de que SF uma manifestao damutagnese insercional retroviral-induzida, semelhante colorao da pelagem dilute do camundongo ( JENKINSet al., 1981; COPELAND et al., 1983b ).

Resistncia ao EV21O caracter empenamento lento (SF) est

geneticamente, associado com o locus ev21 do retrovrusendgeno (EV) em White Leghorns (BACON et al., 1988).Vrus infeccioso EV21 codificado no locus ev21 umsubgrupo E do vrus da leucose aviria (SMITH eCRITTENDEN, 1986) e est, diretamente, relacionadocom a famlia de retrovrus avirio caracterizado porBOYCE-JACINO et al.(1989). Melhoristas comerciais tema vantagem da sexagem pela asa mas, alguns tem observadodiminuio no desempenho entre prognies deempenamento rpido (RF) de mes SF (HARRIS et al.,1984; HEVENSTEIN et al., 1989). Transmisso congnitado EV21 infeccioso, codificado no locus ev21,seroconverso significativamente e aumentou a incidnciade leucose linfide entre prognies RF de mes SFinfectadas com vrus da leucose aviria (SMITH e FADLY,1988). A transmisso congnita de EV21, porm, erarestrita em galinhas homozigotas resistentes ao EV, ou seja,ao subgrupo E ALV (SMITH e CRITTENDEN, 1988).Consequentemente, a seleo sistemtica para resistnciacelular no locus tvb foi sugerida como meio efetivo contraa transmisso congnita de EV21 em cruzamentos sexadospela asa.

Seleo de variantes ev21 ( - )Durante um levantamento de 10 linhagens

comerciais SF, foram observadas variantes genotpicas SFque no tinham o gene ev21 (SMITH e LEVIN, 1991).Estes raros individos SF com o carter empenamento lento(SF) desejado, mas sem o tolerognico EV21 infeccioso,deveriam escapar da lenta resposta imune infeco porALV exgeno, caracterstica de algumas linhagens degalinhas SF ev21 (+) (SMITH e CRITTENDEN, 1988;SMITH e FADLY, 1988). Quando se deseja selecionarpintos SF que tenham ev21 defectivos, mtodos sensveise especficos so necessrios para identificar variantesraros. Usando sondas moleculares, RFLPs revelaramvariantes genotpicas, porm, Southern blottings

requerem mo de obra intensa e no se prestam a triagensem larga escala. Microtitulao com dot-blots e tcnicasde PCR, entretanto, so adequadas para triagem em massa,mas requerem disponibilidade de primersoligonucleotdeos e sondas para hibridizao. A rpidaidentificao de raros variantes SF ev21 (-) pode sersimplificada pelo uso de PCR para uma triagem em massade linfcitos de linhagens comerciais de poedeiras egalinhas para corte SF. Como os LTRs e seqnciasflanqueadoras so conhecidos (LEVIN e SMITH, 1991),o tamanho do fragmento de juno pode ser predito.Ausncia de fragmentos de juno amplificados indica queo stio de integrao est desocupado pelo ev21. Anlisesde Southern blots so tambm efetuadas para confirmaros resultados do PCR.

ev 6 e EV21Como o ev6, que expressa somente o envelope de

glicoprotena do EV, e tambm restringe a transmissocongnita do EV21 (SMITH et al., 1990a), a soluo paraev6 pode ser uma estratgia alternativa para eliminarimunotolerncia gerada por infeco congnita de progniecom um EV infeccioso. Entretanto, em estudos anteriores(SMITH et al., 1990 a e b), mostraram que ev6 + tambmera, modernamente, tolerognico em um cruzamentosusceptvel ao ALV. SMITH et al. (1991) relatam ainfluncia do ev6 na resposta imune infeco por contatocom uma linhagem de campo de ALV entre prognies queeram resistentes infeco EV. Como as membranas dasclulas hospedeiras de galinhas EV-resistentes,aparentemente, no tem receptores para os envelopes deglicoprotena EV (CRITTENDEN et al., 1967), procurou-se determinar, se a prognie EV-resistente portadora doev6 seria mais tolerante a infeco exgena ALV do quecontemporneos EV-resistentes que no tem ev6, econfirmar a eficincia da resistncia E na preveno datransmisso de EV21 para a prognie RF de mes SF. Ainfluncia do ev6 na resposta imune a infeco por contatocom contemporneos infectados com o vrus da leucoseaviria (ALV) foi comparada com vrias incubaes. Asgalinhas de empenamento rpido (RF), E-resistentes aosubgrupo ALV produzidas por mes SF e RF com e semev6 foram expostas ao nascimento a contemporneosinfectados com ALV subgrupo A (linhagem RPL-40). Aviremia RPL-40, produo e anticorpos neutralizados dovrus foram medidos nas frangas das duas incubaes com22 semanas de idade. Embora diferenas significativasentre incubaes (P> 0,05) na resposta imune a infecopor contato foram notadas entre as frangas ev6 +, umnmero significativamente menor de frangos ev6+ seconverteram do que suas contemporneas ev6-. Com 22semanas de idade, significativamente mais linfomas foramtambm encontrados entre as frangas ev6+ do que entre

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Tabela 1 - Fentipos observados em linhagens nacionaisde galinhas para corte e seus respsctivosgentipos obtidos com a utilizao da sondaEV21-int e a enzima Hae III.

contemporneos ev6-. Em plantis onde ambos os pais eprognie eram homozigotos resistentes ao vrus dosubgrupo E, no houve efeito materno detrimetal naprognie RF de mes portadoras de ev21. Estes resultadostambm confirmam que seleo para resistncia genticacelular a infeco pelo subgrupo E ALV elimina atransmisso comgnita de EV21. SMITH e FADLY ( 1988) descrevem as conseqncias epidemiolgicas datransmisso materna de EV21 sobre a resposta imune e aincidncia de tumor ALV induzido em filhas ev21 negativasque foram continuadamente expostas a aves deempenamento rpido ( RF ) ALV infectadas. Os resultadossugerem que seleo para resistncia a EV pode eliminartolerncia com relao a linhagens de leucose aviria decampo oncognicas e pode melhorar o desempenho daprognie de um cruzamento sexado pela asa.

MATERIAL E MTODOS

Neste trabalho foram analisadas amostras de DNAde 12 linhagens de galinhas para corte da ESALQ/USP.DNA de frangos de corte foram enviados da ESALQ parao ADOL ( Avian Disease and Oncology Laboratory, EastLansing, Michigan, USA ), onde as anlises laboratoriaisda pesquisa foram efetuadas. Cada amostra correspondeua 3 ml de sangue coletado de uma fmea por linhagem. ODNA foi extrado conforme protocolo adaptado porHILLEL et al. ( 1990 ). As amostras de DNA foramclivadas com a enzima de restrio Hae III e os fragmentosde DNA foram separados em agarose 0,8%. As membranasforam hibridizadas com a sonda EV21-int ( SMITH e

Linhagem Amostra Fentipo Gentipo

A

A

A

A

I

II

III

IV

Lento

Rpido

Rpido

Rpido

Lento/Tipo B

Variante Tipo G/URa

Lento Tipo B

Variante Tipo G/URa

B

B

B

V

VI

VII

Lento

Rpido

Rpido

Lento /Tipo B

Variante Tipo G/URa

Lento /Tipo B

A

B

C

D

E

F

VIII

IX

X

XI

XII

Lento

Lento

Lento

Lento

Lento

Lento/Tipo B

Lento/Tipo B

Lento/Tipo B

Lento/Tipo B

Variante Tipo F/URb

LEVIN, 1991 ), obtendo-se uma variao polimrfica.

RESULTADOS E DISCUSSO

O padro utilizado para comparao e determinaodos gentipos foi o obtido por SMITH e LEVIM ( 1991 ),o qual reproduzido na Figura 1, que apresenta algunsdos perfis de polimorfismo obtidos nesta pesquisa ondese observam os gentipos Lento tipo B ( L/B ) e Variantetipo G, com repeat no ocupado ( Var. G/URa ). Osgentipos observados encontram-se na Tabela 1. Nas 12amostras de DNA analisadas ( Tabela 1 ) foram reveladosos gentipos Lento/Tipo B ( 8 aves ), Variante Tipo G/URa ( 3 aves ) e Variante Tipo F/URb. Com relao aofentipo dessas aves, 7 apresentavam empenamento lentoe 5 empenamento rpido. Duas amostras obtidas de fmeascom o fentipo empenamento rpido (RF) das linhagensA e B, tambm apresentaram o gentipo empenamentolento tipo B. Aparentemente, algumas linhagens degalinhas para corte com empenamento rpido podem terretido o gene ev21 (BOULLIOU et al., 1992). A associaontima K e ev21 sugere que SF (K) pode ser um exemplode mutagnese insercional induzida por vrus, e que asegregao de K e ev21 seria improvvel. Porm, foramencontradas aves RF (K-) com o ev21 e na Figura 2(LEVIN e SMITH, 1991) so mostradas as regies queflanqueiam o stio de integrao (EV21-int). O fragmentoJFIL-1 (fragmento de juno clula ev-21), proveio de umaave portadora do ev21, e o fragmento USIL-1 (regio ev21no ocupada), de uma ave sem o ev21. Embora houvessemarcante concordncia (maior que 95%) entre a presenados fragmentos de .juno ev-21clula, e o fentipo SF(K), Southern blots de DNA de algumas aves SF (K) decorte comerciais, no tinham o fragmento ev21 de junomas alguns revertentes eram portadores de fragmentos dejuno. Estas anomalias sugeriram que o ev21 poderia noser o nico determinante do fentipo SF K). A maioriados frangos de corte tinham Urb mas vrias linhagens(cerca de 2% das amostras analisadas) apresentavampadres de hibridizao anmalos. vAves RF (K) comambos alelos no ocupados foram incomuns e fragmentosde juno caractersticos (JFIL-1) foram encontrados emvirtualmente todas as aves SF (K). Em frangos de corteSF (K), foi sempre encontrado Urb mas nunca Ura. Urano foi encontrado entre frangos de corte SF (K), e apresena de Urb alm de dois fragmentos de juno ev21-clula pode ser uma marca registrada dos frangos de corteSF (K).

Outras 3 amostras, tambm obtidas de fmeas comempenamento rpido (RF), das linhagens A e B, mostraramum gentipo variante tipo G, provavelmente por teremperdido o gene ev21. Os fragmentos de juno no foram

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encontrados, sendo somente detectada uma bandaassociada a um repeat no ocupado (Ura). A ltimaamostra analisada, referente a fmea com fentipoempenamento lento da linhagem F, apresentou um gentipovariante tipo F, sem o gene ev21. O encontro de variantessem o ev21 indica que os melhoristas podem ser capazesde selecionar plantis SF (K) que no tenham o ev21. Odesnvolvimento de plantis ideais SF ( K), ev21-negativosest na dependncia da fcil identificao de variantesgenotpicas sem o ev21. O conhecimento das alteraesde seqncia no DNA de variantes SF (K) notadas porSmith e Levin (1991) pode levar ao desenvolvimento desondas que facilitem a identificao de tais indivduos SF(K).

CONCLUSO

Linhagens de galinhas para corte da ESALQapresentaram uma variao polimrfica dentro dos padresdescritos na literatura, no que diz respeito ao gene ev21.A observao de variveis genotpicas sem o gene ev21parece indicar que entre aves do Programa deMelhoramento Gentico de Galinhas para Corte da ESALQpodero ser selecionadas linhagens de empenamento lento,sem os efeitos detrimentais provocados pelo vrus EV21.

AGRADECIMENTO

Os autores agradecem a colaborao do Dr. E. J.SMITH, pesquisador do U. S. Department of Agriculture,Agricultural Research Service, Avian Disease andOncology Laboratory, East Lansing, Michigan 48823. U.S.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ASTRIN, S. M.Endogenous viral genes of the WhiteLeghorn chicken: common site of residence and sitesassociated with specific phenotypes of viral geneexpression. Proceedings of the National Academyof Sciences of the USA. USA 75: 5941 - 5945. 1978.

BOULLIOU, A. J., LE PENNEC, P., HUBERT, G.,DONAL, R., SMILEY, M. The endogenous retroviralev21 locus in commercial chicken lines and itsrelationship with the slow-feathering phenotype ( k ).Poultry Science, v. 71, p. 38 - 46, 1992.

COELHO, A. A. D., SAVINO, V. J. M., CUSTDIO, R.W. S., SMITH, E. J. Caracterizao de linhagensnacionais de galinhas para corte com relao ao genedo empenamento lento, ligado ao sexo, associado ao

gene ev21. Conferncia APINCO de Cincia eTecnologia Avcolas. Anais... 1993. p. 97.

COPELAND, N. G., JENKINS, N. A. and B. K. LEE,Association of the y lethal yellow ( A ) coat colourmutation with an ecotropic murine leukemia virusgenome. Proceedings of the National Academy ofScienses of the USA. USA 80: 247 - 249. 1983a.

COPELAND, N. G., HUTCHISON, K. W. and N. A.JENKINES, Excision of the DBA ecotropic provirusin dilute coat-color revertants of mice occur byhomologous recombination involving the viral LTRs.Cell 33: 379 - 387. 1983b.

BACON, L. D., SMITH, E., CRITTENDEN, L. B.Association of the slow feathering ( K ) and anendogenous viral ( ev21 ) gene on the Z chromosomeof chickens. Poultry Science, v. 67, p. 191 - 197, 1988.

BURNESTER, B. R., 1945. The incidence oflymphomatosis among and female chickens. Poult. Sci.24: 469 - 472.

BOYCE-JACINO, M. T., RESNICK, R. and A. J. FARAS.Structural and functional characterization of theunusually short long terminal repeats and theiradjacents regions of a novel endogenous avianretrovirus. Virology 173: 157 - 166. 1989.

HARRIS, D. L., GARDWOOD, V. A., LOWE, P. C.,HESTER, P. Y., CRITTENDEN, L. B. and FADLY, A.M., Influence of sex-linked feathering phenotypes ofparents and progeny upon lymphoid leukosis virusinfections status and egg production. Poultry Science,63: 401 - 413. 1984.

HAVENSTEIN, G. B., TOELLE, V. D., TOWER, R. H.and A. EMSLEY. Effects of genetic strain, slow versusrepid feathering maternal genotype and cage densityon the performance of Single Comb White Leghorns.Poultry Science, 68: 596 - 607. 1989.

HORST, P. Native fowl as reservoir for genomes and majorgenes with direct and indirect effects on productiveadaptabillity and their potencial for tropical orientedbreeding plans. Working Group n 3 of the WorldsPoultry Science Association Jouy-en-Josas. France,9- 11 May: 14 p.

HUMPHRIES, E. H., DANHOFF, M. L., and I.HLOZANEK, Characterization of endogenous viralloci in five lines of White Leghorn chickens. Virology,135: 125 - 138. 1984.

JAENISCH, R., HARBERS, K., SCHINIEKE, A.,LOHLER, J., CHUMAROV, I., GROTCOPP, D. andH. HOFFMANN, Germline integration of a maloneymurine leukemia virus at the Mov13 locus leads torecessive mutation and early rmbryonic death. Cell 32:290 - 216. 1983.

JENKINS, N. A., COPELAND, G., TAYLOR, B. A. andB. K. LEE, Dilute ( d ) coat colour mutation of DBA/

ARS VETERINARIA, 16(1): 39-45, 2000. 45

2j mice is associated with the site of integration of anecotropic Mul V genome. Nature 293: 370 - 374. 1981.

KRATOWICHWIL, K., von der MARK, K., KOLLAR,E. J., JAENISCH, R., MOOSLEHNER, K.,SCHARTZ, M., HAASE, K., GMACHI, I. and K.HARBERS, Retrovirus-induced insertional mutationin Mov13 mice affects collagent expression in a tissue-specific manner. Cell, 57: 807 - 816. 1989.

LEVIN, I . & E. J. SMITH. Molecular analysis endogenousvrus EV21-slow feathering complex of chickens. 1.Cloning of proviral-cell junction fragment andunoccupied integration site. Poultry Science, v. 69, p.2017 - 2026, 1990.

LEVIN, I. & E. J. SMITH. Association of a chickenrepetitive element with the endogenous virus-21 slow-feathering locus. Poultry Science, v. 70, p. 1948 - 1956,1991.

ROVIGATTI, U. G. and S. M. ASTRIN, Avianendogenous viral genes. Current Topics inMicrobiology and Immunology, 103: 1 - 21. 1983.

RUBIN, H., CORNELIUS A. and L. FANSIER, Thepatterns of congenital transmission of an avian leukosisvirus. Proceedings of the National Academy ofScienses of the USA. 47: 1058 - 1060. 1961.

SILVA, R. & J. B. E. BURCH. Evidence that chicken CR1elements represent a novel family of retroposons.Molecular and Cellular Biology, v. 9, p. 3563 - 3566,1989.

SMITH, E. J., SALTER, D. W., SILVA, R. F.,CRITTENDEN, L. B. Selective shedding andcongenital transmission of endogenous avian leukosisviruses. Journal of Virology, v. 60, n. 3, p. 1050 -1054, 1986.

SMITH, E. J. & L. B. CRITTENDEN. Endogenous viralgenes in a slow-feathering line of White Leghornchickens. Avian Pathology, v. 15, p. 395 - 406, 1986.

SMITH, E. J. & L. B. CRITTENDEN. Genetic resistanceto subgroup E avian leukosis virus in slow-feathering

dams reduces congenital transmission of an endogenousretrovirus encoder at locus ev21. Poultry Science, v.67, p. 1668 - 1673, 1988.

SMITH, E. J. & A. M. FADLY. Influence of congenitaltransmission of endogenous virus-ev21 on theimmune-response to avian leukosis virus infection andthe incidence of tumors in chickens. Poultry Science,v. 67, p. 1674 - 1679, 1988.

SMITH, E. J., FADLY, A. M., CRITTENDEN, L. B.Interactions between endogenous virus loci ev6 andev21. 1. Immune response to exogenous avian leukosisvirus infection. Poultry Science, v. 69, p. 1244 - 1250,1990a.

SMITH, E. J., FADLY, A. M., CRITTENDEN, L. B.Interactions between endogenous virus loci ev6 andev21. 2. Congenital transmission of EV21 viral productto female progeny from slow-feathering dams. PoultryScience, v. 69, p. 1251 - 1256, 1990b.

SMITH, E. J. & I. LEVIN. Application of a locus-specificDNA hybridization probe in the analysis of the slow-feathering endogenous-virus complex of chickens.Poultry Science, v. 70, p. 1957 - 1964, 1991.

SMITH, E. J., FADLY, A. M., LEVIN, I., CRITTENDEN,L. B. The influence of ev6 on the immune response toavian leukosis virus infection in rapid-featheringprogeny of slow and rapid-feathering dams. PoultryScience, v. 70, p. 1673 - 1678, 1991.

SORIANO, P., GRIDLEY, T. and R. JAENISCH.Retroviruses and insertional mutagenesis in mice:Proviral integration at the Mov34 locus lead to earlyembryonic death. Genes & Development, 1: 366 - 375.1987.

STOYE, J. P., SABINE, F., GREENOAK, G.E., MORAN,C. and J.M. COFFIN. Role of retroviruses as mutagens:The hailess mutation of mice. Cell 54: 383 - 391. 1988.

WARREN, D. C., Inheritance of rate of feathering inpoultry. Journal of Heredity, 16:13 - 18. 1925.