avaliaÇÃo da funÇÃo hepÁtica de ratas da...

76 An official publication of the Brazilian Society of Periodontology ISSN0103-9393

Braz J Periodontol - December 2011 - volume 21 - issue 04

AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO HEPÁTICA DE RATAS DA LINHAGEM LEWIS FRENTE A INGESTÃO DE ÁLCOOL ASSOCIADA A PERIODONTITE INDUZIDA POR LIGADURAEvaluation of liver function in wistarfemale lewis ahead of alcohol intake associated with ligature-induced periodontitis

Alessandra Nogueira Porto1, Tereza Delle Vedove Semenoff 1, Fábio Luiz Miranda Pedro1, Álvaro Henrique Borges1, Christiane Lima2, Alex Semenoff Segundo1.

1 Professor(a) Dr.(a) do Curso de Pós-Graduação da Universidade de Cuiabá – UNIC - MT.

2 Cirurgiã-dentista – Centro Universitário de Várzea Grande – UNIVAG - MT.

Recebimento: 28/05/11 - Correção: 25/07/11 - Aceite: 01/11/11

RESUMO

Objetivo: o presente estudo tem por objetivo avaliar a função hepática frente à ingestão de álcool associado com a periodontite induzida por ligadura em ratas Lewis.

Materiais e Métodos: os 24 animais foram divididos nos grupos: álcool+ligadura-GA (n=8), ligadura-GL (n=8) e controle negativo -GCN (n=8). Para a análise dos resultados foram adotados os parâmetros bioquímicos – aspartato aminotransferase (AST\TGO) e transaminase glutâmica pirúvica (ALT\TGP). Os animais foram submetidos à ingestão de solução alcoólica a 20%, ao longo de um período de 60 dias. Para o procedimento de indução da doença periodontal, os animais do GA e GL receberam anestesia geral.

Resultados: os resultados do trabalho demonstraram ausência de diferença estatística (p>0,05) para as variáveis AST\TGO e ALT\TGP paras os grupos GA, GL e GCN.

Conclusão: conclui-se que a ingestão de álcool na dosagem praticada, associado à periodontite induzida por ligadura não modificou os exames de bioquímica AST\TGO e ALT\TGP em ratas Lewis.

UNITERMOS: alcoolismo, ratos endogâmicos Lewis, periodontite induzida. R Periodontia 2011; 21:76-79.

INTRODUÇÃO

A periodontite é uma doença multifatorial causada pela presença de bactérias e seus produtos, associada à resposta inflamatória das células de defesa do hospedeiro.1

Existem vários fatores que podem influenciar a progressão da doença periodontal, incluindo fatores individuais, comportamentais, sistêmicos e genéticos. Os fatores comportamentais incluem o fumo, fator sócio econômico, nutricional, psicológico e consumo excessivo de álcool. 2

O consumo do álcool na sociedade atual se tornou um problema de Saúde Pública, pois é amplamente difundido na população (40-50%), sendo que 10% dos homens e 3-5% das mulheres se tornam alcoólatras. 3

O consumo excessivo e constante do álcool pode afetar a defesa do hospedeiro causando infecções por bactérias

e aumentando a vulnerabilidade do hospedeiro. O efeito sistêmico do álcool inclui a má nutrição, doenças hepáticas, anemia, hipoglicemias entre outros. 4-5

Existem estudos que fazem ligação entre o uso abusivo do álcool com as doenças que afetam o periodonto. 6-7 Apesar de ainda não existir uma ligação forte a exemplo do uso do tabaco8 e do desenvolvimento da diabetes9, a condução de estudos com modelos animais podem auxiliar na elucidação de questões relacionadas aos efeitos da ingestão de álcool associada à indução de doença periodontal.

A alanina aminotransferase (ALT), também conhecida como transaminase glutâmico pirúvica (TGP), é uma enzima transaminase. A ALT é encontrada no plasma e em vários tecidos corpóreos, mas é geralmente associada ao fígado. Estas enzimas são liberadas no sangue em grandes quantidades quando há dano à membrana do hepatócito,

Revista Periodontia dez 2011 - 2ª REV - 09-12-11.indd 76 13/12/2011 10:58:30

Braz J Periodontol - December 2011 - volume 21 - issue 04 - 21(4):76-79

77An official publication of the Brazilian Society of Periodontology ISSN-0103-9393

resultando em aumento da permeabilidade. Assim, a elevação absoluta das aminotransferases tem grande significado diagnóstico nas hepatopatias agudas. 10

O teste ALT geralmente é feito junto com outros testes que verificam danos no fígado, incluindo aspartato aminotransferase (AST), fosfatase alcal ina, lactato desidrogenase (LDH) e bilirrubina. Ambos os níveis de ALT e AST são testes confiáveis para o fígado. TGP e TGO são indicadores sensíveis de dano hepático em diferentes tipos de doenças. A causa mais comum de moderadas elevações destas enzimas é o fígado gorduroso (esteatose) e a causa mais freqüente de fígado gorduroso é o abuso de álcool. 10

Diante desse contexto, o presente trabalho tem por objetivo avaliar a função hepática através dos testes AST/TGO e ALT/TGP frente à ingestão de álcool associado à periodontite induzida por ligadura em ratas Lewis.

MATERIAIS E MÉTODOS

Neste estudo foram utilizadas 24 ratas da linhagem Lewis, com dois meses de idade. As mesmas passaram por uma adaptação ao novo ambiente durante uma semana, os animais foram mantidos em caixas moradia (polietileno 16x40x30) em número de quatro, com ração padronizada e água ad libitum, sob ciclo claro/escuro de 12 horas, temperatura controlada a 24° C e umidade + 50%. O experimento foi aprovado e registrado pela Comissão de Ética na experimentação animal, com número de protocolo CEP/UNIC 0307/32.

Grupos ExperimentaisInicialmente, os animais foram divididos aleatoriamente

(por auxiliar técnico) em 3 grupos experimentais, descritos a seguir:

Grupo GA: álcool+ ligadura (n=8),Grupo GL: ligadura (n=8),Grupo GCN: controle negativo (n=8).Durante todo o experimento os animais do grupo GA

foram expostos a ingestão de álcool a 20% (v/v), portanto não recebendo em nenhum momento água ad libitum. No dia seguinte ao início do experimento, os animais do grupo GA e do grupo GL, passaram pelo processo de indução de doença periodontal experimental, receberam anestesia geral através da administração intramuscular de 0,1 mL de cloridrato de quetamina (Dopalen, Agribrands. Saúde Animal, Paulínia, SP, Brasil) associado a 0,05 mL de cloridrato de xylazina (Rompun, Bayer. Saúde Animal, São Paulo, SP. Brasil) por cada 100 gramas de peso corporal. Após anestesia, um fio de sutura estéril número 4 (Ethicon, Johnson e Johnson,

São Paulo, Brasil) foi inserido no sulco gengival do segundo molar superior direito. Foram realizados cortes histológicos seguindo o longo eixo dos dentes no sentido mesio-distal, que possibilitou constatar que a metodologia proposta para desenvolvimento da doença periodontal foi eficiente.

Os animais do grupo GCN não receberam nenhum tipo de intervenção, mas foram mantidos juntos em caixa moradia durante todo o experimento.

Após 60 dias foi realizada a eutanásia dos animais por excesso de anestésico, em ato contínuo incisou-se a pele e barreira abdominal para obter acesso à cavidade abdominal. Os órgãos internos foram deslocados, de modo a possibilitar a visualização da veia cava posterior. Coletou-se o sangue por punção da veia com agulha 25x7 (sistema Vacutainer - Becton Dickinson, Plymouth, UK) em tubos de cinco mL com o anticoagulante EDTA - ácido etileno diaminotetracético - homogeneizando-se cuidadosamente a amostra. Depois da centrifugação do plasma sanguíneo a 3000 RPM, durante 10 minutos, analisou-se o AST\TGO - mg/dL - e ALT\TGP - mg/dL. Para a dosagem dos exames utilizou-se o método fotocolorimétrico por espectrofotômetro (Femto 700S, São Paulo, SP) sendo feita a calibração do equipamento com solução padrão - Bioclin – Quibasa, Belo Horizonte, MG, Brasil. Houve um treinamento prévio desde a coleta do sangue até o processamento bioquímico das amostras.

Salienta-se que os animais do GCN foram utilizados como referência para efeitos de comparação de resultados.

O teste estatístico escolhido foi Análise de Variância (ANOVA) de uma via com análise Pós-Hoc (teste de Bonferroni). O erro alfa estabelecido para essa análise foi de 5%.

RESULTADOS

Os resultados do estudo demonstraram uma ausência de diferenças estatísticas entre os grupos envolvidos (GA, GL, GCN) para os parâmetros bioquímicos AST\TGO mg/dL e ALT\TGP mg/dL (p>0,05), conforme apresentado na Tabela 1. Durante o processamento bioquímico uma amostra do grupo GL AST/TGO foi perdida.

DISCUSSÃO

A relação entre o álcool como um fator de risco à doença periodontal vem sendo estudada recentemente. Em trabalhos observacionais verificou-se a relação positiva entre estas duas patologias4-11, contudo mesmo em uma revisão sistematizada sobre o assunto, observa-se a necessidade de um cuidado na ligação entre as duas doenças, além da necessidade da



78 An official publication of the Brazilian Society of Periodontology ISSN-0103-9393

Tabela 1

presença de estudos longitudinais.12 Diante das dificuldades expostas, este trabalho buscou

estabelecer um marcador sistêmico amplamente utilizado na literatura médica no diagnóstico das doenças ligadas ao uso crônico do álcool. 12-13 Os testes de função hepática ALT (alanina transaminase) e AST (aspartato transaminase) são avaliações laboratoriais bioquímicas clínicas, realizadas para fornecer informação sobre o estado do fígado.

Os resultados do trabalho demonstram uma ausência de ligação entre a ingestão de álcool a 20% durante 60 dias associado à periodontite induzida por ligadura nos exames AST\TGO e ALT\TGP. Estes resultados, de certa forma, surpreendem pelas evidências demonstrarem que o efeito do uso abusivo do álcool causa sérias complicações no organismo3-4 inclusive com repercussões nos exames utilizados neste estudo. 14-13

Por outro lado, os resultados encontrados podem estar ligados à espécie de animais escolhidas no estudo, pois os ratos endogâmicos da linhagem Lewis são conhecidos pelo padrão de resposta imunológico resistente a infecções15-16, dentre elas a própria periodontite. Por outro lado são capazes de ser susceptíveis a doenças autoimunes15 e também ao consumo de álcool. 17 A escolha desta linhagem se deu por ser susceptíveis ao uso exagerado do álcool.

Uma possibilidade de o animal ter tido resistência ao uso do álcool pode ser uma hipótese para os achados encontrados. Esta situação clínica de tolerância ao estresse químico é um fator relatado desde os achados iniciais de Seley 18-19, além de outros trabalhos mais atuais demonstrarem esta relação.20 Seley sugere que o animal pode resistir a uma condição de estresse até três meses antes de o organismo entrar em exaustão.

É importante salientar que apesar do fato dos resultados não apresentarem diferenças estatísticas, percebe-se que muitos aspectos da pesquisa nesta área precisam ser

méDia e Desvio PaDRão Da concenTRação sanguínea De asT/Tgo e als/TgP

Grupos N Média ± p

GL 8 57,75 18,63 0,201

AST/TGO GA 8 47,41 5,63 0,453

GCN 8 50,63 5,14 0,845

GL 7 137,04 63,30 0,984

ALS/TGP GA 8 131,38 49,18 0,767

GCN 8 160,2 76,42 0,646Teste estatístico de Bonferroni e Bonferroni p<0,05. GL – grupo ligadura; GA – grupo álcool e GCN – grupo controle negativo.

entendidos. Assim espera-se que este trabalho contribua na construção das informações entre as doenças que acometem o periodonto, a ingestão crônica do álcool e exames laboratoriais.

CONCLUSÃO

Conclui-se que o uso de álcool na dosagem praticada, associado à periodontite induzida por ligadura, não modificou os exames de bioquímica AST\TGO e ALS\TGP em ratas Lewis.

ABSTRACT

Objective: This study aims to assess liver function before the intake of alcohol associated with ligature-induced periodontitis in rats Lewis.

Materials and Methods: These 24 animals were divided into two groups: alcohol + GA-ligation (n = 8), ligation-GL (n = 8) and negative control-GCN (n = 8). For the analysis of the results were used biochemical parameters – aspartate aminotransferase (AST \ AST) and glutamic pyruvic transaminase (ALT \ TGP). The animals were submitted to the ingestion of alcoholic solution at 20% over a period of 60 days. For the induction of periodontal disease, animals in the GL and GA general anesthesia.

Results: The results demonstrated no statistical difference (p> 0.05) for the variables AST \ AST and ALT \ TGP paras the GA, GL and GCN.

Conclusion: We conclude that alcohol intake at a dose practiced, associated with ligature-induced periodontitis did not modify the biochemical tests AST \ AST and ALT \ TGP Lewis in rats.

UNITERMS: alcoholism, inbred lewis rats, ligature induced periodontitis.



79An official publication of the Brazilian Society of Periodontology ISSN-0103-9393

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1- Page CR, Kornman KS. The pathogenesis of human periodontitis: an

introduction. Periodontology 2000 1997; 14: 9-11.

2- Nunn ME. Understanding the etiology of periodontitis: an overview of

periodontal risk factors. Periodontol 2000 2003; 32: 11-23.

3- World Health Organization Technical Report Series No. 94, Alcohol

and Alcoholism, Report of Expert Committee, 1955. Disponível em:

http http://whqlibdoc.who.int/trs/WHO_TRS_94.pdf. Acessado em

08/10/2010.

4- Zakhari S. Overview: How is alcohol metabolized by the body? Alcohol

Res Health 2006; 29: 245-54.

5- Szabo G. Consequences of alcohol consumption on host defense.

Alcohol Alcohol 1999; 34: 830-41.

6- Shimazaki Y, Saito T, Kiyohara Y, Kato I, Kubo M, Iida M, et al. Relationship between drinking and periodontitis: the Hisayama Study.

J Periodontol 2005; 76: 1534-41.

7- Tezal M, Grossi SG, Ho AW, Genco RJ. The effect of alcohol

consumption on periodontal disease J Periodontol 2001; 72: 183-9.

8- Susin C, Oppermann RV, Haugejorden O, Alabndar J. Periodontal

attachment loss attributable to cigarette smoking in an urban Brazilian

population. Journal of Clinical Periodontology 2004; 31; 951-58.

9- Taylor GW, Burt BA, Becker MP, Genco RJ, Shlossman M, Knowler

WC, Pettitt DJ. Severe periodontitis and risk for poor glycemic control

in subjects with non-insulin-dependent diabetes mellitus. J Periodontol

1996; 67: 1085–93.

10- Gallieri APV, Wasicky A, Rodrigues V, Elifio-Esposito S, Pereira LF.

Análise de parâmetros bioquímicos do sangue de camundongos

tratados com lidocaína. Estud. Biol 2006; 28: 67-73.

11- Shizuishi S, Hayashi N, Tamagawa H, Hanioka T, Maruyama S,

Takeshita T, et al. Lifestyle and periodontal health status of Japanese

works. Ann Periodontol 1998; 3: 303-11.

12- Amaral CS, Vettore MV, Leão A. The relationship of alcohol

dependence and alcohol consumption with periodontitis: a systematic

review. J Dent 2009; 37: 643-51.

13- Hay JE, Zaia AJ, Rakela J, Ludwig J. The nature of unexplained

chronic aminotransferase elevations of a mild to moderate degree in

asymptomatic patients. Hepatology 1990; 11: 333-35.

14- Zamin Jr. I, Mattos AA, Perin C, Ramos GF. A importância do índice

AST/ALT no diagnóstico da esteatohepatite não-alcoólica. Arq.

Gastroenterol 2002 ; 3: 22-6.

15- Chrousos GP. The hypothalamic-pituitary-adrenal axis and immune-

mediated inflammation. N Engl J Med 1995; 332: 1351-62.

16- Breivik T, Thrane PS, Gjermo P, Opstad P K, Pabst R & Von Horsten

S. Hypothalamic-pituitary-adrenal axis activation by experimental

periodontal disease in rats. Journal of Periodontal Research 2001;

36: 295-300.

17- Murphy JM, Steward RB, Bell RL, Badia-Elder NE. Phenotypic and

genotypic characterization of the Indiana University rat lines selectively

bred for high and low alcohol preference. Behav Genet 2002; 32:

363-88.

18- Selye H. The general adaptation syndrome and the disease of

adaptation. J Clin Endocrinol 1946; 6:117-230.

19- Seley H. Tymus and adrenals in response of the organism to injuries

and intoxication. Br J Exp Pathol 1936:17: 234-48.

20- Seley H. A syndrome produced by diverse nocuous agents. 1936. J

Neuropsychiatry Clin Neurosci 1998: 10: 230-31.

Endereço para correspondência:

Alessandra Nogueira Porto

Rua Manoel Ferreira Mendonça,149 - Bairro Bandeirantes

CEP: 78010-160 – Cuiabá – MT

Tel.: 65 3624-0177 / 65 8417-2523

E-mail: [email protected]


avaliaÇÃo da funÇÃo hepÁtica de ratas da...

Documents