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Beatriz Colom FernándezDirección Técnica Unidad de Inmunología

2018 Kick Off Meeting

October 24-26, 2018

BUSCANDO MÁS ALLÁ DE LA SUPERFICIE : SCREENING DE ENFERMEDADES AUTOINMUNES

Congreso Nacional Laboratorio Clínico 2018

2 Proprietary & Confidential

Indice

• Enfermedades del tejido conectivo (CTD).

• Determinación de ANAs en el laboratorio.

• ¿Qué es el Elia CTD Screen?

• Estudio comparativo de la técnica de cribado EliA CTD con la de IFI para la determinación de ANAs en

pacientes en seguimiento o con alta sospecha diagnostica de EAS realizado en Synlab.

• Propuesta de nuevo algoritmo de Screening diagnóstico para laboratorios en el screening de ANA´s.



Enfermedades autoinmunes del Tejido Conectivo

103 Enfermedades autoinmunes (1)

En conjunto afectan al 5-10% población desarrollados (2)

Tienden a la cronicidad y al compromiso de muchos órganos y tejidos, produciendo daño estructural y funcional.

Importancia de diagnóstico precoz para orientar tratamiento adecuado.

Síntomas e historia clínica del paciente junto con examen médico y de laboratorio.

Los anticuerpos antinucleares (ANA) son el “sello serológico” de las enfermedades del tejido conectivo.

(1) Diagnostic criteria in autoimmune disease

(2008)

(2) Journal of Autoimmunity 34 (2010) 168-177



• Clasificación en sistémicas y

órgano-específicas

Enfermedades autoinmunes del Tejido Conectivo (CTD)

Tiroiditis de Hashimoto

Mixedema Primario

Anemia perniciosa

Gastritis atrofia AI

Enfermedad de Addison

Hepatitis Autoinmune

-

-

-

-

Síndrome de Sjögren

Artritis reumatoide

Dermatomiositis

Esclerodermia

EMTC

SAF

Lupus eritematoso discoide

LES

Sistémicas

Órgano específicas

“Inmunología” 7ª edición Elsevier




Primeros síntomas muy genéricos

Síntomas clínicos similares

Múltiples órganos afectados

Diferentes facultativos implicados (médicos de atención primaria, pediatras, reumatólogos, medicina interna,

gastroenterólogos, endocrinos,…)

DIAGNOSTICO DIFICIL

PRUEBAS DE LABORATORIO ESPECIFICAS

Y FIABLES COMO AYUDACongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018


Anticuerpos antinucleares (ANAs)

¿Qué son los ANAs?

Son autoanticuerpos. Anticuerpos que reconocen componentes celulares autólogos, dirigidos frente:

ags nucleares

membrana nuclear

Huso mitótico

citoplasmáticos (organelas)

membranas celulares

Presentes en enfermedades autoinmunes pero también en procesos inflamatorios, infecciosos, fármacos, etc.

Útiles para diagnóstico (ó criterio diagnóstico), diagnóstico diferencial, clasificación, pronóstico, y

seguimiento enfermedades autoinmunes.

Técnicas para detección:

Técnicas de precipitación (inmunoprecipitación, inmunodifusión, contrainmuno-electroforesis) y hemaglutinación.

Inmunoensayos: Inmunoblotting, Radioinmunoensayo, Inmunofluorescencia (IFI), Enzimoinmunoensayo (ELISA),

Tecnología multiplexCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018


Inmunofluorescencia (IFI)

International Consensus of ANA Patters (ICAP)

Homogéneo:dsDNA

Nucleosoma

Histonas

Centromérico

CENP-A, B

Citoplasmáticos

Reticular

Moteado (puntos discretos/fino/fino denso)

Fibrilares (lineal/segmentado/filamentar)

Golgi

Bastones y anillos

Nucleolar

Homogéneo

Grumoso

Granular

Moteado

Fino

Denso

Fino/denso

Membrana nuclear

Parecido PCNA

CENP-F

Mitoticos

Mid body

Huso mitótico

Centriolo

Envoltura cromosómica



Autoantígenos diana y CTD asociadas

*Mahler et al. J Immunolo Res

SLE: systemic lupus erythematosus; SSc: sysemic sclerosis; SjS: Sjögren´s síndrome;

IIM: idiopathic inflammatory myopathy; MCTD: muxed connective tissue disease;



Relevancia ac anti-SSA/RO

Anti-SSA/Ro es el ag mas frecuente en los pacientes ANA+.

Anti SSA/Ro52 y Ro60 suelen darse juntos en los pacientes.

Anti Ro60 puede encontrarse forma exclusiva, pacientes LES.

Anti Ro52 puede encontarse de forma exclusiva, no son específico de una enfermedad, frecuentes en

miositis, S.Sjögren, esclerodermia y LES.

Anti Ro52 en miositis, asociados a Jo-1.

Proporción importante de pacientes CTD, solo se detecta ac anti-Ro52.

Sensibilidad para detección por IFI e inmunoblotting es baja.




Muy sensible: Test screening

Claro y orientativo: Objetivo

Lo más específico posible:

Aumentar el rendimientoCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018


¿Qué es el Elia CTD Screen?

• Cribado por enzimoinmunoensayo (EIA) para

enfermedades del tejido conjuntivo

Sm

RNP 70

RNP A

RNP C

Ro 60

Ro 52

La

Scl-70

CENP

Jo-1

ds-DNA

Fribrilarin

RNA Polym.III

Rib-P

PM/Scl

PCNA

Mi2

Wavelength(l) Ecitation (Amax)

Fluorescence (Emax)

FLUORESCENCIA



Elia CTD Screening



IFI VS ELIA CTD

IFIVentajas

Alta sensibilidad

Detecta mas de 100 Ags (patrones)

Herramienta para descubrir nuevos

autoanticuerpos

Util para amplio espectro enf

autoinmunes(HAI, etc)

Precio

Inconvenientes

Poco específico

Falta sensibilidad (Rib-P, Ro-52, Jo-1)

Subjetivo

No estandarizados

Personal altamente cualificado

Elia CTDVentajas

Alta especificidad

Antígenos clínicamente relevantes

Objetivo

Cuantifica rango

Reproducible

Estructura 3D antígeno

Tiempo

Coste-efectivo

Inconvenientes

Solamente útil ETC

Falta sensibilidad monoantigénica



…Medicina basada en la evidencia



… Medicina basada en la evidencia



… Medicina basada en la evidencia

Elia CTD + especificidad

A = especificidad, Elia CTD +

sensible

VPP Elia CTD > IFI

VPN IFI > Elia CTD



Estudio comparativo de métodos para el cribado de enfermedades autoinmunes sistémica :FLUOROENZIMOINMUNOENSAYO VS INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA

Criterio inclusión: Pacientes ya diagnosticados de EAS o con alta sospecha.

Determinación ANA por IFI Hep-2 (Euroimmun) y Elia CTD Screen.

ENAs específicos a todos los sueros positivos por Elia CTD Screen o por IFI Hep-2.

Se consideró el valor verdadero el concordante con los ENAs y de acuerdo con diagnóstico final descrito en la

Hª clínica.

Se analizó especificidad y sensibilidad



Material y métodos



Resultados

IFI ELiANº

RESULTADOS

+ + 8

- - 62

+ - 25

- + 4

Total 99

Discrepancias

n=29



Resultados

2 casos ENA POS (Ro52+)

2 casos ENA NEG DNA POSI

4 casos

25 casos

23/25 ENA negativo

1/320 Homogéneo. ENA screening+low (sin ENAs específico)Act: 640 Nuclear dots+Homogéneo Scl-70 Probable Esclerosis Sistémica

1/320 Moteado. DNA+ SSA+ SSB+ Act: 640 Moteado. SSA+ SSb+ Sindrome SjögrenCongreso Nacional Laboratorio Clínico 2018


Resultados

RESULTADO IFI ELiA

FN 4 2

FP 23 0

VN 62 84

VP 10 12

Sensibilidad 71,43% 85,71%

Especificidad 72,94% 100,00%



Cómo trabajamos entonces?Congreso Nacional Laboratorio Clínico 2018


Algoritmo ANA laboratorio

Elia CTD Screen

Cuáles??

dsDNA, Rib-P, PM-scl, fibrillarin,

PCNA, RNA Pol III, Mi-2

SOSPECHA CLINICA ETC

Negativo

ETC fuertemente

descartada

ENA específicosIFI

Homogéneo

Centrómero

Moteado

Nucleolar

Citoplasmático

dsDNA

Positivo Según sospecha clínica

Sobrecoste????

COMUNICACIÓN

CLÍNICO-LABORATORIO

Miositis (7-16ags..)

Miopatías inflamatorias

Esclerosis sitémicas



Conclusiones e ideas clave para llevar a casa….

La IFI es una técnica mas sensible para detectar ANA aunque Elia CTD sí detecta algunos ags

que “escapan” a IFI. En nuestro estudio, Elia CTD mayor sensibilidad y especificidad.

¿Qué pasa con los ANAs postivos por IFI que no presentan ENAs positivos?

Comunicación clínico-laboratorio para orientar estudio, para empleo de paneles de ags específicos según

sospecha clínica, para ser eficaces.

Algoritmos de laboratorio eficientes. Se trata de hacer más, con menos. Mejorar y optimizar la gestión de las

muestras y resultados.

Elia CTD: test screening específico, detección óptima, den resultado preciso, fácil y reproducible para seguimiento.



Agradecimientos

Dr. Jose Agustin González

Dr. Luis Carlos Calle

Dra. Carmen Escudero

Unidad de Inmunología Synlab Alcobendas:

Cristina García Maldonado

Esther Avila Elbaz

División Inmunodiagnóstico

Jordi Bertran

Juana Millón

Juan Jiménez


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