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イオンセンサーChapter 6

i

　

製品：2012年8月現在、ライフテクノロジーズから供給している細胞培養用製品を記載しています。このカタログに記載されている製品は、すべて研究用です。これら研究用製品は、ヒト、動物の診断あるいは治療用としては承認されていません。研究用以外の目的には使用しないでください。予告なしに仕様の変更、販売を終了することがありますので、予めご了承ください。販売条件は364ページをご覧ください。

価格：記載価格は2012年8月現在の希望小売価格（単位：円）で、消費税は含まれていません。価格・包装等は予告なしに変更する場合がありますので、予めご了承ください。なお、本価格には荷造費・運送費・保険料等の諸経費は含まれておりません。実費を申し受ける場合もありますので併せてご了承ください。

バルク包装：本カタログ記載以外の包装・バルクにつきましては、当社営業部へご相談ください（TEL：03-6832-9300）。

注文：製品番号ならびに製品名が似ている製品が多々ございます。ご注文の際には正確に製品番号、製品名、サイズ、数量等をご記入ください。

配送：原則として製品は当社取扱販売店へ配送いたします。当社取扱販売店からの午後2時までのご注文を翌日お届けいたします。金曜日のご注文は月曜日にお届けします。なお、温度の影響を受けやすい－70℃保存品につきましては、ご要望に応じてお客様への直送も承っております。

直送できます：対象となる製品は、このマークが目印です。ご注文時に直送希望の旨を当社取扱販売店へご連絡ください。

返品：納品された製品がご注文内容と異なっている、あるいは梱包の不備、製品の破損、または品質上問題がある場合は速やかに対応させていただきますので、ご購入先の取扱販売店へご連絡ください。上記以外の返品はご容赦願います。また、製品番号ならびに製品名が似ている製品が多々ございます。ご返品の際は正確に製品番号、製品名、サイズ、数量等をご連絡ください。

保存：製品の品質上、保存、配送の温度管理は厳重に注意しております。納品、検収後の保存は表示温度を厳守してください。詳細は、マニュアルまたは、製品添付書をご覧ください。

機器の保証：機器については販売から1年以内は、通常の使用状況での破損または故障について保証を行ないます。保証にはご希望と状況に応じて修理、交換、支払金の返却などがございます。

ラベルをお読みください：それぞれの製品のラベルに記載の有効期限に注意し、保存に関する指示を守ってください。当社は、有効期限を過ぎた製品、あるいは不適当な保存、取扱いによって生じた問題に関しては一切責任を負いません。

毒物・劇物：毒物及び劇物取締法に基づく該当品は、本文中に以下の略号を記してありますのでご注意ください。毒物、劇物の判定は法令の改正及び新しい知見に基づき改定されることがあります。

毒劇

GHS（Global Harmonized System）ルールに基づいた製品ラベルへのピクトグラム表示を順次進めております。

カルタヘナ法：カルタヘナ法の該当の有無については弊社WEBサイト（www.lifetechnologies.com/cartagena/）をご参照、またはテクニカルサポート（TEL：0120-477-392）までお願いいたします。

MSDS（Material Safety Data Sheet）：製品のMSDSは、当社ホームページ（www.lifetechnologies.com）をご参照ください。内容についてのお問い合わせはテクニカルサポート（TEL：0120-477-392）までお願いいたします。

カスタムオーダー：当社では、下記の項目についてカスタムオーダーを受けております。お問い合わせください。・カスタムオリゴDNA　　・特注培地　　・カスタムcDNAライブラリー　　・ペプチド合成／ペプチド抗体　　など

お客様情報の登録について：1.ライフテクノロジーズ取扱い製品の中に、ライセンスに関する規定（お客様の情報をライセンス元に連絡することが義務づけられている）のあるものがあります。該当製品ご購入の際に、お客様登録用紙への記載をお願いしております。お客様登録用紙は当社取扱販売店からお渡しいたします。当社ホームページからダウンロードできます。また、各製品の使用説明書にもライセンスに関する記載がございます。ご使用前に必ずお読みください。

お客様登録：対象となる製品は、このマークが目印です。

2.毒素、他該当製品ご購入の際に、弊社指定用紙への記載をお願いしております。

その他：論文記載時の表記についてライフテクノロジーズの製品をご使用になり、論文に社名を記載される場合は“Life Technologies, Carlsbad, CA USA”とお書きください。その他関連製品については当社マーケティング部（TEL：03-6832-9350）までお問い合せください。

Ca2＋およびMg2＋蛍光インジケーター 167

重金属イオン用蛍光インジケーター 173

Na＋、K＋および塩化物の蛍光インジケーター 174

pHインジケーター 175

反応性酸素種（ROS）インジケーター 177

一酸化窒素インジケーター 179

キャリブレーションキット、キレート剤およびイオノフォア 180

細胞ローディング試薬 180

グルコース摂取アッセイ 181

塩素イオンチャネル活性アッセイ 181

カリウム・チャネル活性アッセイ 182

166

イオンセンサー

Important Licensing Information: The products in this catalog may covered by one or more Limited Use Label Licenses (see the Life Technologies website www.lifetechnologies.com). By use of these products, you accept the terms and conditions of all applicable Limited Use Label Licenses. All products are for research use only, and are not intended for human or animal diagnostics, therapeutic, commercial, or other clinical uses unless otherwise specifically indicated in the applicable product Limited Use Label License(s).

記載価格は 2012年 8月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめ了承ください。

167www.lifetechnologies.com

Cell Biology CatalogC

a2

＋およびM

g2

＋蛍光インジケーター

6

Ca2＋およびMg2＋蛍光インジケーターUV光によって励起されるCa2＋およびMg2＋蛍光インジケーター

カルシウムは生物および細胞において解剖学、生理学および生化学的に不可欠な役割を果たします。Ca2＋イオンは多

くのシグナル伝達経路において役割を果たし、通常、哺乳類細胞および植物細胞のサイトゾルにおいてナノモルレベルで維持されます。細胞内のカルシウムホメオスタシスは細胞からカルシウムを除去する輸送タンパク質によって調節されます。ナトリウム-カルシウム交換輸送体はナトリウムを流入させる代わりに細胞からカルシウムを汲み出すこと


多くのイオンは生命の維持においてきわめて重要な役割を果たします。一部のイオンは、骨にとってのカルシウムのように、生体材料の構造にとって重要です。マグネシウムは、DNAおよびRNAバックボーンにおける負に電荷したリン酸のバランスを保つために、核酸構造にとって重要です。亜鉛など他の金属はタンパク質を安定化します。多くの金属イオンは酵素補助因子として重要な役割を果たしており、全タンパク質の3分の1が金属タンパク質であると推定されています。これらの金属酵素は、生体分子の合成、修復および分解、特定の生体シグナル伝達分子の放出および認識、光合成および呼吸などのきわめて重要なプロセスにおける低分子ならびに電子の移動に関与します。例えば、鉄を含むヘモグロビンは血中の酸素を輸送し、カルシウムは細胞外空間から原形質膜（細胞膜）を越えて細胞内に至る受容体を介したシグナル伝達において重要なセカンドメッセンジャーの役割を果たします。

当社は、Fura-2、Indo-1、Fluo-3、Fluo-4、Rhod-2およびPremo™ Cameleonカルシウムセンサーを含む最も豊富な品揃えの蛍光インジケーターを提供します。これらのインジケーターのほとんどのアセトキシメチル（AM）エステル型は通常、高速液体クロマトグラフィー（HPLC）分

析で純度95%以上ですが、多くの場合純度は98%を上回ります。さらに、Ca2

＋およびMg2＋インジケーターの多くの

AMエステルは、取り扱いをより簡便にし、保存中の劣化のリスクを低減するためのスペシャルパッケージで入手可能です。このように多くの選択肢がありますが、蛍光インジケーターを選択する時には、以下の事項を含む多くの要素を考慮する必要があります。

　• インジケーターの型（塩、AMエステルまたはデキストランコンジュゲート）：細胞ローディング方法に影響を及ぼし、インジケーターの細胞内分布および保持に影響を及ぼします。塩型およびデキストラン型は通常マイクロインジェクション法、マイクロプロジェクタイルボンバードメント法もしくはエレクトロポレーション法によるか、またはInflux™飲作用性細胞ローディング試薬を使用することによってロードされます。一方、細胞透過性アセトキシメチル（AM）エステルは細胞内に受動的にロードされ、細胞内エステラーゼによって切断され細胞非透過性産物になります。

　• 測定モード：定性的イオン濃度データが必要であるのか、それとも定量的イオン濃度データが必要であるのかによって左右されます。イオン結合時にスペクトルシフトを示すイオンインジケーターは、不均一な色素ローディング、細胞の厚さ、光退色効果および色素漏れに基本的に左右されない濃度のレシオメトリック測定に使用できます。励起波長および発光波長の選択は、使用する機器の種類のほか、サンプルの自己蛍光および実験での他の蛍光プローブまたは光活性化プローブの存在に左右されます。

　• 解離定数（Kd）：分析対象の濃度範囲に適合している必要があります。インジケーターはおおよそ0.1×Kd

～ 10×Kdの濃度範囲内で検出可能な反応を示します。レシオメトリックなインジケーターでは、反応範囲は使用する測定波長にも左右されます。KdはpH、温度、イオン強度、粘度、タンパク質結合および他のイオンの存在を含む多くの因子に左右されます。したがって、細胞内インジケーターのKd値は通常、無細胞溶液で測定される同数値より有意に高くなります。

Fluo-3およびFura Red Ca2＋インジケーターで標識し、KClおよびニフェジピンによる処理によってCa2＋反応を示したカエル嗅球神経細胞。この画像はライカ社共焦点レーザースキャン顕微鏡で得られたfluo-3とFura Red™蛍光画像の比率を示す。画像提供：J. Bischofberger氏とD. Schild氏（ゲッティンゲン大学生理学研究所）。

168




により、ナトリウムの電気化学的勾配からのエネルギーを使用します。Ca2

＋イオンが過剰になると細胞を傷害する恐れがあり、細胞内Ca2＋濃

度の変化はアポトーシスを誘発するため、このように厳格なコントロールが必要です。細胞内Mg2

＋は、酵素反応、DNA合成、ホルモン分泌および筋収縮を仲介するために重要です。これらおよびその他の細胞機能におけるマグネシウムの役割の研究を容易にするために、細胞内Mg2

＋濃度の測定用に幾つかの異なる蛍光インジケーターが利用できます。これには、構造およびCa2

＋インジケーターのFura-2とのスペクトル反応の類似性を示すMag-fura-2と呼ばれるFuraptraが含まれています。共焦点レーザースキャン顕微鏡およびフローサイトメトリーなどの応用のためには、Magnesium Green™およびMag-fluo-4インジケーターが利用できます。UV光によって励起される蛍光カルシウムおよびマグネシウムインジケーターは、レシオメトリックな性質のおかげで長年にわたり有用性を維持してきた古典的な種類のプローブです。これらの色素は、カルシウムに結合すると、異なる波長でインジケーターを励起するかまたは異なる波長での蛍光発光をモニタリングすることによって検出できるスペクトルシフトを引き起こします（図1および2）。レシオメトリックインジケーターが潜在能力を十分発揮するには、幾分高度な機器が必要ですが、色素漏れ、光退色、不均一なローディングおよび細胞の厚さにほとんど左右されないシグナルが得られます。Indo-1およびfura-2はこのカテゴリーの中でも便利なものであり、ほとんどの実験においてほぼ交換可能とみなされています。いずれの色素も哺乳類細胞における典型的な基礎Ca2

＋レベルに近いKd値を示し、Mg2

＋と比較してCa2＋に高い感度を示します。また、多くの代替インジ

ケーターが入手可能であり、その一部は低親和性のCa2＋結合剤ですの

で、Mg2＋の検出にも適しています。

マウス胚小脳のプルキンエ細胞における遊離Ca2＋濃度の偽色画像。分散組織培養において12日間神経細胞を増殖させ、微小電極を使用してFura-2の五カリウム塩とともにロードした後、細胞外Ca2＋

の非存在下で代謝調節型グルタミン酸受容体アゴニストのtrans-ACPDを投与した。340nmおよび380nmにおける励起で得られた画像の比率を示す合成画像から、Ca2＋流入に起因しない細胞内貯蔵Ca2＋の動員が明らかとなる。画像提供：D.J. Linden氏（ジョンズ・ホプキンス大学）およびM. Smeyne氏とJ.A. Connor

氏（Roche Inst itute of Molecular

Biology）。

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波長（nm）図1　 0～ 39.8µMの遊離Ca2＋を含有する溶液中の

fura-2の蛍光励起スペクトル

蛍光励起

波長（nm）図2　 0～ 39.8µMの遊離Ca2＋を含有する溶液中の

indo-1の蛍光発光スペクトル

蛍光発光

indicator* Kd for Ca2+ (µM) Excitation** Emisson** Form サイズ製品番号価格

BTC 7.0 464/401 533/529tetrapotassium salt 1 mg B6790 ¥34,300 19.2

AM 20 × 50 μg B6791 ¥34,400 19.2

Bis-fura-2 0.37 366/338 511/504 hexapotassium salt 1 mg B6810 ¥40,700 19.2

Fura-4F 0.77 366/336 511/505pentapotassium salt 500 μg F14174 ¥33,300 19.2

AM 10 × 50 μg F14175 ¥57,600 19.2

Fura-FF 5.5 364/335 510/506pentapotassium salt 500 μg F14180 ¥33,300 19.2

AM 10 × 50 μg F14181 ¥57,600 19.2

Mag-fura-2 25 369/329 511/508

tetrapotassium salt 1 mg M1290 ¥57,600 19.2, 19.6

AM1 mg M1291 ¥63,000 19.2, 19.6

20 × 50 μg M1292 ¥39,900 19.2, 19.6

Mag-indo-1 35 349/330 480/417 AM 20 × 50 μg M1295 ¥28,900 19.2, 19.6

Quin-2 0.06 353/333 495 free acid 5 mg Q23918 ¥17,400 19.2

* Acetoxymethyl esters (AM form) are cell permeant; after entering the cells esterase activity cleaves the AM group leaving the free ion indicator. Salt forms are generally cell impermeant. ** Indicators with dual excitation or emission listings are ratiometric. The first number in each pair represents the excitation or emission maxima at zero calcium, the second number is the excitation or emission maxima at high calcium levels



a2

＋およびM

g2


6

可視光によって励起されるCa2＋およびMg2＋蛍光インジケーター

可視光によって励起されるCa2＋インジケーターは、UV光によって励起されるインジケーターを上回る幾つかの利点を提

供します。

　• 共焦点レーザースキャン顕微鏡およびフローサイトメトリーを含むほとんどのレーザーベースの機器で効率的な励起が得られます。

　•サンプルの自家蛍光による干渉を低減します。　•細胞の光損傷および光散乱を低減します。

さらに、これらのインジケーターは色素によるより強い吸光度を提供し、より低濃度での色素の使用を可能にするため、生細胞への光毒性が低減され、光活性化（“caged”）プローブおよびUV励起の光吸収試薬との互換性によって複数パラメータ測定の選択肢が増え、Ca2

＋に大きく依存する蛍光強度の上昇によってCa2＋の初期濃度変化（トランジエント）が高感

度で検出されます。可視光によって励起される最も有効なカルシウムインジケーターは、Ca2

＋に結合すると100倍以上の蛍光増強を示す488nmで励起される単発光色素のFluo-4です。Fluo-4はFluo-3の類似体（Fluo-3の2個の塩素原子をフッ素に置換した化合物）であり、488nmで蛍光励起の増大を示し、より高いシグナルを示します（図3）。さらに、Fluo-4 AMはMolecular


Fura-2 0.15 363/335 512/505

pentapostassium salt 1 mg F1200 ¥35,800 19.2

AM1 mg F1201 ¥43,000 19.2

20 × 50 μg F1221 ¥57,400 19.2

AM (DMSO solution) 1 ml F1225 ¥53,000 19.2

pentasodium salt 1 mg F6799 ¥35,800 19.2

AM (FluoroPure™

grade)20 × 50 μg F14185 ¥69,000 19.2

Indo-1 0.23 346/330 475/401

pentapotassium salt 1 mg I1202 ¥30,000 19.2

AM1 mg I1203 ¥34,200 19.2

20 × 50 μg I1223 ¥52,500 19.2

AM (DMSO solution) 1 ml l1226 ¥49,900 19.2


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波長（nm）

図3　 0～ 39.8µMの遊離Ca2＋を含有する溶液中の同濃度のfluo-4（青色）およびFluo-3（赤色）の蛍光発光スペクトル

蛍光発光

図4　Premo™ Cameleonセンサーのメカニズムの概略図

Ca

2

＋およびM

g2


170




Devices社のFLIPR™システムで使用した場合、fluo-3 AMより高感度です。Fluo-4 AM色素は凍結乾燥固体、高純度のFluoroPure™凍結乾燥固体またはジメチルスルホキシド（DMSO）溶液として提供されます。Premo™ Cameleonカルシウムセンサーは、近接したカルシウムシグナル測定用に遺伝子的にコードされたレシオメトリックセンサー（CFP/YFP FRETに基づいた）です（図4および5）。Premo™ CameleonセンサーはBacMam形式であらかじめパッケージ化されており、生細胞用に設計され、細胞生物学的干渉はきわめてわずかです。Premo™

Cameleonはその生理学的性質のため用途がきわめて広く、イメージングへの適用およびハイスループットスクリーニング（HTS）法またはハイコンテンツスクリーニング（HCS）法を用いた化合物スクリーニングにおいて利点があります。BacMamのデリバリーテクノロジーは証明されており、非感染性かつ非細胞毒性であり、初代細胞および幹細胞を含む多くの細胞系において形質導入に成功してきました。細胞はバッチで容易に形質導入され、 Premo™ Cameleonカルシウムセンサーは数日間の細胞培養中に機能性を維持します。


Calcium

Green™-10.19 506 531

hexapotassium salt 500 μg C3010MP ¥34,300 19.3

AM500 μg C3011MP ¥41,800 19.3

10 × 50 μg C3012 ¥49,200 19.3

Calcium

Orange™0.19 549 576

tetrapotassium salt 500 μg C3013 ¥30,100 19.3

AM 10 × 50 μg C3015 ¥40,700 19.3

Calcium

Crimson™0.19 589 615 AM 10 × 50 μg C3018 ¥40,700 19.3

Calcium

Yellow™0.19 435 550 tetrapotassium salt 500 μg C36202 ¥36,500 －

Calcium

Green™-5N14 506 532

hexapotassium salt 500 μg C3737 ¥34,300 19.3

AM 10 × 50 μg C3739 ¥43,800 19.3


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図5　アゴニストおよびアンタゴニストの用量反応曲線96ウェルプレートにおいて細胞15,000個/ウェルの密度でHeLa細胞をモノレイヤー培養し、Premo™ Cameleonカルシウムセンサーで形質導入後、37℃で一晩インキュベートした。翌日、ヒスタミンの用量反応アッセイを実施した（A）。もう1枚のプレートを使用し、EC80の濃度のヒスタミンの存在下でピリラミン（■）およびチオペラミド（▲）とのアンタゴニスト用量反応を評価した（B）。ピリラミンは、Gqタンパク質およびセカンドメッセンジャーのCa2＋を介して結合する既知のH1受容体アンタゴニストである。チオペラミドは、Giタンパク質およびセカンドメッセンジャーのcAMPを介して結合する既知のH3受容体アンタゴニストである。

[ヒスタミン](µM)

YFP

／CFP

比(

最大値ー最小値)

[アンタゴニスト](µM)

YFP

／CFP

比(

最大値ー最小値)

赤色蛍光カルシウムセンサー

Rhod-3 Imaging Kit

GFPなど緑蛍光と組み合わせてCa2＋を測定できます。従来のRhod-2AMでは、色素はミトコンドリアに蓄積していましたが、Rhod-3AMでは正電荷を覆い隠すように修飾することにより、細胞質基質に一様に分布します。蛍光の減衰が迅速で、正確に細胞質基質のCa2＋を反映します。 Rhod-2より蛍光変化が大きい特長を持ちます。波長特性：Ex/Em＝550/580nm



a2

＋およびM

g2


6indicator* Kd for Ca2+ (µM) Excitation** Emisson** Form サイズ製品番号価格

Fluo-3 0.39 505 526

pentaammonuim salt 1 mg F1240 ¥58,800 19.3

AM

1 mg F1241 ¥66,000 19.3

20 × 50 μg F1242 ¥81,800 19.3

40 × 1 mg F14242 お問い合わせ 19.3

AM (FluoroPure™

grade)10 × 50 μg F23915 ¥66,000 19.3

pentapotassium salt 1 mg F3715 ¥66,000 19.3


Fluo-4 0.35 494 516

pentapotassium salt 500 μg F14200 ¥42,000 19.3

AM10 × 50 μg F14201 ¥53,000 19.3

5 × 1 mg F14202 ¥286,000 19.3

AM (FluoroPure™

grade)10 × 50 μg F23917 ¥81,800 19.3


Fluo-4FF 9.7 494 516pentapotassium salt 500 μg F23980 ¥44,100 19.3

AM 10 × 50 μg F23981 ¥55,600 19.3

Fluo-5N 90 493 518pentapotassium salt 500 μg F14203 ¥40,700 19.3

AM 10 × 50 μg F14204 ¥51,300 19.3

Fluo-5F 2.3 494 518pentapotassium salt 500 μg F14221 ¥40,700 19.3

AM 10 × 50 μg F14222 ¥51,300 19.3

Fura Red™ 0.14 473/436 670/655

Tetrapotassium salt 500 μg F14219 ¥51,300 19.3

AM500 μg F3020 ¥61,900 19.3

10 × 50 μg F3021 ¥69,300 19.3

Mag-fluo-4 22 493 517Tetrapotassium salt 500 μg M14205 ¥61,900 19.3, 19.6

AM 10 × 50 μg M14206 ¥69,300 19.3, 19.6

Magnesium

Green™6.0 506 531

Pentapotassium salt 1 mg M3733 ¥28,400 19.3, 19.6

AM 20 × 50 μg M3735 ¥22,200 19.3, 19.6

Oregon

Green® 488

BAPTA-6F

3 494 523 Hexapotassium salt 500 μg O23990 ¥40,700 19.3

Oregon

Green® 488

BAPTA-1

0.17 494 523Hexapotassium salt 500 μg O6806 ¥41,800 19.3

AM 10 × 50 μg O6807 ¥52,300 19.3

Oregon

Green® 488

BAPTA-2

0.58 494 523Octapotassium salt 500 μg O6808 ¥40,700 19.3

AM 10 × 50 μg O6809 ¥51,300 19.3

Premo™

Cameleon

Calcium

Sensor

0.24 435 480/530Fluorescent protein-

based

1 kit (10 plates)

P36207 ¥39,400 16.3, 19.5

1 kit (100 plates)

P36208 ¥349,200 16.3, 19.5

Rhod-2 0.57 552 578AM

1 mg R1244 ¥68,300 19.3

20 × 50 μg R1245MP ¥78,900 19.3

Tripostassium salt 1 mg R14220 ¥57,600 19.3

Rhod-3 0.57 550 580 AM1 kit

(10 Assay)R10145 ¥53,000 19.3

Rhod-5N 320 551 577 Tripotassium salt 500 μg R14207 ¥40,700 19.3

Rhod-FF 19 552 580 AM 10 × 50 μg R23983 ¥51,300 19.3

X-rhod-1 0.7 580 602 AM 10 × 50 μg X14210 ¥51,300 19.3

X-rhod-5F 1.6 581 603 AM 10 × 50 μg X23985 ¥51,300 19.3


関連製品製品名製品番号価格

Fluo-4F Direct Calcium Assay for 100microplate F10471 ¥65,700 19.3

Fluo-4F Direct Calcium Assay for 10microplate F10472 ¥63,700 19.3

Ca

2

＋およびM

g2


172




蛍光インジケーターコンジュゲート

イオンインジケーターはアセトキシメチル（AM）エステルとして細胞内にロードされる場合、細胞内コンパートメントに移行する場合があり、そこで依然として蛍光を発しますが、サイトゾルのイオン濃度の変化にはもはや反応しません。この問題では、インジケーターが細胞小器官内に隔離されることによってサイトゾルのイオン濃度の推定に誤差が生じるため、しばしば実験の継続時間が限られます。さらに、Fura-2およびIndo-1などのCa2

＋インジケーターは細胞タンパク質に結合する場合があり、Ca2

＋に対するインジケーターの反応を著しく変化させる可能性があります。蛍光イオンインジケーターのデキストランコンジュゲートはしばしばこれらの難点を克服することができます。デキストランは、中～高分子量、優れた水溶性および低い毒性を特徴とする親水性多糖類です。また、デキストランは、ほとんどの内因性細胞グリコシダーゼによる切断に抵抗性を示す珍しいポリ-(α-D-1,6-グルコース) 結合のため、生物学的に不活性です。インジケーターを結合させたデキストランはマイクロインジェクション法、ホールセルパッチクランプ法、マイクロプロジェクタイルボンバードメント法またはエレクトロポレーション法によって細胞内にロードされる必要があります。約2,000MWを上回るデキストランコンジュゲートは生細胞内で十分保持され、ギャップ結合を通らず、区画化（コンパートメント化）する可能性が低下します。また、蛍光退色測定により、低分子量色素と比較して、デキストランコンジュゲートがタンパク質に結合する可能性がはるかに低いことを示しています。なお、デキストランコンジュゲートは本質的に多分散性であり、置換の程度は製造ロットによって変動する場合があるため、これらのインジケーターの各ロットのCa2

＋解離定数はカルシウム校正緩衝液キットを使用してそれぞれ校正する必要があります。

indicator Conjugate Kd for Ca2+ (µM) Excitation* Emisson* サイズ製品番号価格

Calcium Green™-1, 3,000 MW dextran conjugate 0.54 510 535 5 mg C6765 ¥69,300 19.4



Fura-2, 10,000 MW dextran conjugate 0.24 364/338 501/494 5 mg F3029 ¥99,000 19.4

Oregon Green® 488 BAPTA-1, 10,000 MW dextran

conjugate0.27 497 524 5 mg O6798 ¥63,000 19.4

Rhod-2, 10,000 MW dextran conjugate (high affinity) 0.78 556 578 5 mg R34676 ¥78,900 19.4

* Indicators with dual excitation and emission listings are ratiometric. The first number in each pair represents the excitation or emission maxima at zero calcium, the second number is the excitation or emission maxima at high calcium levels.

10,000MWのCalcium Green-1デキストランによるマイクロインジェクション法を行なった

ヒトデ（Pisaster ochraceus）の卵母細胞において受精によって誘発したカルシウム波を5秒間隔で撮影した共焦点画像。画像提供：Stephen A. Stricker氏（ニューメキシコ大学）。


Cell Biology Catalog

6

indicator Ions detected Excitation* Emisson* Form** サイズ製品番号価格

BTC Zn2+, Tl+ 464/401 533/529 AM 20 × 50 μg B6791 ¥34,400 19.2

FluoZin™-1 Zn2+, Tl+495 515 AM 10 × 50 μg F24181 ¥56,400 19.7

495 517 tripotassium salt 500 μg F24180 ¥39,900 19.7

FluoZin™-3, Zn2+ 494 516tetrapotassium salt 500 μg F24194 ¥39,900 19.7

AM 10 × 50 μg F24195 ¥28,900 19.7

Leadmium™ Green Pb2+, Cd2+ 490 520 AM 1 kit M36353 ¥34,300 19.7

TSQ Zn2+ 334 385 See Note 1 25 mg M688 ¥57,600 19.7

Newport Green™ PDX Zn2+ 495 520 AM 1 mg N24191 ¥39,900 19.7

Newport Green™ DCF Zn2+ 505 535dipotassium salt 1 mg N7990 ¥33,600 19.7

diacetate 1 mg N7991 ¥39,900 19.7

Phen Green™ SK Fe2+, Cu2+, others 507 532dipotassium salt 1 mg P14312 ¥33,600 19.7

diacetate 1 mg P14313 ¥39,900 19.7

RhodZIN™-3 Zn2+ 552 576dipotassium salt 500 μg R36350 ¥37,700 19.7

AM 10 × 50 μg R36351 ¥58,500 19.7

* Indicators with dual excitation and emission listings are ratiometric. The first number in each pair represents the excitation or emission maxima at zero calcium, the second number is the excitation or emission maxima at high calcium levels.** Acetoxymethyl esters (AM form) and acetates are cell permeant; after entering the cells esterase activity cleaves the AM group or acetate, leaving the free ion indicator. Salt forms are generally cell impermeant. 1. TSQ is cell permeant but can also be sued in cell-free solutions.

重金属イオン用蛍光インジケーターZn2

＋およびFe2＋など特定の金属イオンは、生物学的構造および活性で

の重要な役割に加え、Ca2＋チャネルを通じたイオン輸送を含む生物学

的プロセスの有用なプローブの役割を果たすことができます。金属汚染は生態学的問題を引き起こし、健康への重大なリスクを示す可能性もあります。幾つかの蛍光インジケーターは、細胞内の多価陽イオン濃度を選択的に測定したり、イオンチャネルを通じた金属イオン輸送を追跡したりするために使用できます（図6）。その他のインジケーターは主に環境用サンプルの溶液中または抽出物中での測定に有用です。ほとんどの場合、金属イオン用インジケーターは親和性が高いため、脱イオン水でサンプルを希釈することにより、他の化合物からの干渉をきわめて小さくすることができます。Ca2

＋およびMg2＋検出と同様に、金属イオ

ン結合への分光学的反応および解離定数（Kd）値はpH、温度、粘度、タンパク質結合および他のイオンの存在を含む多くの因子に左右されます。これらの反応は海水およびサイトゾルなどの複雑な環境において有意に変動する場合があります。

波長（nm）

図6　 FluoZin™-3の蛍光発光スペクトルのZn2＋依存性

蛍光発光

Ca

2

＋およびM

g2

＋蛍光インジケーター／重金属イオン蛍光インジケーター

174




Na＋、K＋および塩化物の蛍光インジケーターSBFI（sodium-binding benzofuran isophtalate）およびPBFI（potassium-

binding benzofuran isophthalate）は、それぞれNa＋およびK

＋の蛍光インジケーターです。標的イオンに対するSBFIおよびPBFIの選択性はfura-2などのカルシウムインジケーターの選択性を下回りますが、他の一価陽イオンの存在下における生理的濃度のNa

＋およびK＋の検出には十

分です。さらに、イオン結合時のSBFIおよびPBFIのスペクトル反応は励起比測定を可能にし、これらのインジケーターはFura-2に使用されるものと同じ蛍光フィルターおよび機器で検出できます。ナトリウムインジケーターのSodium Green™は488nmで励起され、共焦点レーザースキャン顕微鏡およびフローサイトメーターにおいてUV

光によって励起されるSBFIの貴重な代替手段を提供します。また、SBFI

と比較して、Sodium Green™インジケーターはNa＋にK

＋より高い選択性（~41倍対~18倍）を示し、Na

＋を含有する溶液中ではるかに高い蛍光量子収量（0.2対0.08）を示します。励起光のエネルギーはSBFIの励起に必要とされるUV光のエネルギーより低いためSodium Green™インジケーターのより長い波長の吸光は細胞に光損傷を減少させる可能性があります。Na

＋に対するSodium Green™インジケーターのKdはK＋非含有溶液

中で約6mM、生理的イオン強度と同等のNa＋とK

＋の複合濃度が135mM

の溶液中で約21mMです。ナトリウムインジケーターのCoroNa™ GreenおよびRedは、可視光によって励起されるインジケーターの別の選択肢です。これらのインジケーターは他のNa

＋インジケーターより幾分高いKdを持ち、より広範囲のナトリウム濃度に反応性を示します。さらに、これらのインジケーターはしばしばSodium Green™インジケーターより容易に細胞内にロードされます。塩化物インジケーターは、衝突消光によってCl

－を検出する─イオンとインジケーターとの間で複合体が生成されない─という点で他のイオンインジケーターと異なる性質を持っています。このため、塩化物インジケーターは50%消光を引き起こすイオン濃度の逆数であるStern-

Volmer定数（KSV）で表します。Kd（およびCl

－インジケーターではKSV）はpH、温度、イオン強度、他のイオンの濃度および色素-タンパク質相互作用などの因子に左右されます。これらの環境因子のため、これらのイオンインジケーターについてin situで測定されるKdは通常、無細胞緩衝液で測定されるものをかなり上回ります。

indicator Ions detected Kd(mM)or Ksv Excitation Emisson Form* サイズ製品番号価格

CoroNa™

GreenNa+ 80 492 516

See Note 2 1 mg C36675 ¥75,100 21.1

AM 20 × 50 μg C36676 ¥85,400 21.1

MQAE Cl– 200** 350 460 See Note 1 100 mg E3101 ¥32,600 21.2

SPQ Cl– 118** 344 443 See Note 3 100 mg M440 ¥21,700 21.2

MEQ Cl– 145** 344 442 See Note 4 100 mg M6886 ¥63,000 21.2

PBFI K+ 5.1 338 507tetraammonium salt 1 mg P1265MP ¥80,300 21.1

AM 20 × 50 μg P1267MP ¥106,200 21.1

SBFI Na+ 3.8 333 539

tetraammonium salt 1 mg S1262 ¥75,100 21.1

AM1 mg S1263 ¥90,700 21.1

20 × 50 μg S1264 ¥101,100 21.1

Sodium

Green™ Na+ 6 507 532

tetra(tetramethylammonium) salt 1 mg S6900 ¥40,900 21.1

tetraacetate 20 × 50 μg S6901 ¥56,400 21.1

* Acetoxymethyl esters (AM form) are cell permeant; after entering the cells esterase activity cleaves the AM group leaving the free ion indicator. Salt forms are generally cell impermeant. **Chloride indicators generally quench upon binding; the relationship between ion level and fluorescence is related to the Stern-Volmer constant for the indicator. 1. This indicator is cell permeant. 2. This form of indicator is cell impermeant. 3. This indicator is cell impermeant but can be loaded into live cells using hypertonic shock. 4. This indicator is cell impermeant but can be converted to a reduced form which allows it to cross the membrane of live cells.

パッチピペット（右側に見える）から注入したSBFIで満たされた海馬切片のCA1錐体細胞。この画像は790nm

でのSBFIの2光子励起を使用して得られた。画像提供：Christine R. Rose氏（ミュンヘン大学生理学研究所）。



6pHインジケーターpHの変化に応じて色を変化させることができる色素─特にリトマス、フェノールフタレインおよびフェノールレッド─が研究および産業において広く応用されてきましたが、蛍光色素は生細胞内での光学的pH測定に必要な高い感度を示します。蛍光色素は微小電極法と比較して高い空間サンプリング能も示します。これらの利点により、生理的範囲内でのpHの変化を検知できる蛍光色素の開発が促進されてきました。当然、同じ蛍光pHインジケーターの多くが無細胞培地におけるpHセンサーとしても使用できます。pHを定量的に測定するには、インジケーターのpKaを、細胞内pHおよび環境状況でのpHなどの実験系のpHに適合させることが不可欠です。細胞内pHは一般にサイトゾルでは~6.8～ 7.4、酸性の細胞小器官では~4.5～ 6.0です。100倍まで急速に変化する可能性がある細胞内遊離Ca2

＋濃度と異なり、細胞内pHの変化はpH1未満であるにすぎず、このような変化はかなり緩やかです。当社は生物系におけるpH測定用のさまざまな蛍光pHインジケーターおよびインジケーターコンジュゲートを提供します。これらには、ユニークな光学的反応および局在化特性を持つ幾つかのグループのプローブが含まれます。

　• 新しい蛍光色素のpHrodo™は周囲のpHがより酸性になるにつれて、蛍光を劇的に増大させます。（図7）選択したタンパク質またはその他の分子にコンジュゲートさせてユニークなセンサーを作製するためのアミン反応性succinidylエステルとして入手可能です。

　• SNARF® pHインジケーターは二重励起および二重発光pHモニタリングを特徴とし、可視光によって励起されます。（図8）

　•LysoSensor™プローブは酸性の細胞小器官における測定用に使用できます。　• BCECF、Oregon Green® 488およびフルオレセイン誘導体などフルオレセイン誘導pHセンサーは複数のpH依存的

イオン平衡を示します。　• デキストランpHインジケーターコンジュゲートは、注入後にきわめてよく保持され、区画化（コンパートメント化）する傾向が低減できます。

Fluo

resc

ence

em

issi

on

Wavelength (nm)600575 625 675650 700

Ex 532 nm

pH 4

550

pH 5

pH 6

pH 7

pH 8

pH 10

波長（nm）

蛍光発光

波長（nm）

図8　カルボキシSNARF®-1のpH依存的スペクトル

吸光度

Indo-1 AMおよびカルボキシSNARF®-1、AM、酢酸インジケーターで標識したラット下垂体中葉のメラニン細胞刺激ホルモン産生細胞。405nmおよび475nmでの二重発光Ca2＋インジケーターのindo-1からの偽色蛍光を示す（左図）。575nmおよび640nmでの二重発光pHインジケーターのカルボキシSNARF®-1からの偽色蛍光を示す（右図）。画像提供：Stephen J. Morris氏（ミズーリ州大学カンザスシティ校）およびDiane M. Beatty氏（Molecular Probes, Inc）。

図7　pHrodo™色素の蛍光発光スペクトルE. coliをpHrodo™色素で標識し、pH4～ 10の一連の50mMリン酸カリウム緩衝液中で蛍光発光スペクトルを測定した。E. coliは100µg/mLの濃度であり、日立製F4500フルオロメーターで532nmの励起波長を使用して記録した。

Na

＋、K

＋、塩化物の蛍光インジケーター／p

H

インジケーター

176




製　品　名 pKaDetectionExcitation*(nm)

DetectionEmission*(nm) サイズ製品番号価格

Ratiometric pH Indicators

5-(and-6)-carboxy SNARF®-1 7.5 508/537 539/618 1 mg C1270 ¥50,200 20.2

5-(and-6)-carboxy SNARF®-1, acetoxymethyl ester,

acetate7.5 548/576 587/635

1 mg C1271 ¥59,600 20.2

20 × 50 μg C1272 ¥67,900 20.2

5-(and-6)-carboxynaphthofluorescein diacetate 7.6 515/602 565/672 10 mg C13196 ¥26,400 15.2, 20.2

5-(and-6)-carboxynaphthofluorescein, succinimidyl

ester7.6 515/602 565/672 25 mg C653 ¥18,900 1.6, 20.4

5-(and-6)-chloromethyl SNARF®-1, acetate 7.5 548/576 587/635 20 × 50 μg C6826 ¥50,200 14.2, 15.2, 15.6, 20.2

SNARF®-1 carboxylic acid, acetate, succinimidyl ester

(special packaging)7.5 548/576 587/635 10 × 50 μg S22801 ¥67,900 14.2, 15.4, 20.4

SNARF®-4F 5-(and-6)-carboxylic acid 6.4 552/581 589/652 1 mg S23920 ¥50,200 20.2

SNARF®-4F 5-(and-6)-carboxylic acid, acetoxymethyl

ester, acetate6.4 552/581 589/652 20 × 50 μg S23921 ¥67,900 20.2

SNARF®-5F 5-(and-6)-carboxylic acid 7.2 555/579 590/630 1 mg S23922 ¥50,200 20.2

SNARF®-5F 5-(and-6)-carboxylic acid, acetoxymethyl

ester, acetate7.2 555/579 590/630 20 × 50 μg S23923 ¥67,900 20.2

LysoSensor™ Yellow/Blue DND-160 4.2 384/540 329/440 20 × 50 μl L7545 ¥50,200 12.3, 20.3

8-hydroxypyrene-1,3,6-trisulfonic acid, trisodium salt

(HPTS; pyranine)7.3 403/454 511 1 g H348 ¥28,400 14.3, 16.1, 20.2

FDA (fluorescein diacetate) 6.4 473/490 514 1 g F1303 ¥15,900 15.2, 20.2

fluorescein (reference standard) 6.4 473/490 514 1 g F1300 ¥17,000 1.5, 10.1, 20.2

fluorescein-5-(and-6)-sulfonic acid, trisodium salt 6.4 473/490 514 100 mg F1130 ¥30,500 14.3, 20.2

Oregon Green® 488 carboxylic acid 4.7 478/492 518 5 mg O6146 ¥26,400 1.5, 14.3, 20.3

Oregon Green® 488 carboxylic acid diacetate

(carboxy-DFFDA)4.7 478/492 518 5 mg O6151 ¥39,900 15.2, 20.3

Oregon Green® 488 carboxylic acid, succinimidyl ester

(5-isomer)4.7 478/492 518 5 mg O6149 ¥35,300 1.5, 20.4

Oregon Green® 488 carboxylic acid, succinimidyl ester

(6-isomer)4.7 478/492 518 5 mg O6147 ¥35,300 1.5, 20.4

Oregon Green® 514 carboxylic acid 4.7 489/506 518 5 mg O6138 ¥26,400 1.5, 14.3, 20.3

Oregon Green® 514 carboxylic acid, succinimidyl ester 4.7 489/506 518 5 mg O6139 ¥34,400 1.5, 20.4

2',7'-bis-(2-carboxyethyl) -5-(and-6)-carboxyfluorescein

(BCECF acid)7.0 482/503 520/528 1 mg B1151 ¥25,300 14.3, 20.2

2',7'-bis-(2-carboxyethyl) -5-(and-6)-

carboxyfluorescein, acetoxymethyl ester (BCECF, AM)7.0 482/503 520/528

1 mg B1150 ¥26,400 15.2, 15.6, 20.2

1 ml @ 1mg/ml B3051 ¥29,400 15.2, 15.6, 20.2

20 × 50 μg B1170 ¥35,700 15.2, 15.6, 20.2

5-(and-6)-carboxy-2',7'-dichlorofluorescein 4.8 495/504 529 100 mg C368 ¥19,100 14.3, 20.3

5-(and-6)-carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate

(carboxy-DCFDA)4.8 495/504 529 100 mg C369 ¥39,900 15.2, 20.3

5-(and-6)-carboxyfluorescein (5(6)-FAM)

(FluoroPure™ grade)6.4 473/490 514 100 mg C1904 ¥20,100 1.5, 14.3, 20.2

5-(and-6)-carboxyfluorescein 6.4 473/490 514 5 g C194 ¥29,400 14.3, 20.2

5-(and-6)-carboxynaphthofluorescein diacetate 6.4 512/598 563/668 10 mg C13196 ¥26,400 15.2, 20.2

5-(and-6)-carboxynaphthofluorescein, succinimidyl ester 6.4 512/598 563/668 25 mg C653 ¥18,900 1.6, 20.4

Intensity-Based pH Indicators

LysoSensor™ Blue DND-167 5.1 373 425 20 × 50 μl L7533 ¥50,200 12.3, 20.3

LysoSensor™ Green DND-153 7.5 442 505 20 × 50 μl L7534 ¥50,200 12.3, 20.3

LysoSensor™ Green DND-189 5.2 443 505 20 × 50 μl L7535 ¥50,200 12.3, 20.3

9-amino-6-chloro-2-methoxyacridine (ACMA) 8.6 412 471 100 mg A1324 ¥33,300 12.3, 20.3

pH Indicator Dextran Conjugates

dextran, fluorescein, 10,000 MW, anionic 6.4 473/490 514 25 mg D1821 ¥32,600 14.5, 20.4

dextran, fluorescein, 70,000 MW, anionic 6.4 473/490 514 25 mg D1823 ¥32,600 14.5, 20.4

LysoSensor™ Yellow/Blue dextran, 10,000 MW, anionic,

fixable4.2 384/540 329/440 5 mg L22460 ¥33,600 12.3, 20.4

dextran, BCECF, 10,000 MW, anionic 7.0 482/503 520/528 10 mg D1878 ¥33,600 －

dextran, BCECF, 70,000 MW, anionic 7.0 482/503 520/528 10 mg D1880 ¥33,600 －

dextran, SNARF®-1, 10,000 MW, anionic 7.5 548/576 587/635 5 mg D3303 ¥33,600 －

dextran, SNARF®-1, 70,000 MW, anionic 7.5 548/576 587/635 5 mg D3304 ¥33,600 －dextran, fluorescein and tetramethylrhodamine, 70,000

MW, anionicND 495/520 555/575 10 mg D1951 ¥39,900 －

dextran, fluorescein, 3000 MW, anionic 6.4 473/490 514 10 mg D3305 ¥43,900 14.5, 20.4

dextran, Oregon Green® 488; 10,000 MW, anionic 4.7 478/492 518 5 mg D7170 ¥43,900 14.5, 20.4



nigericin, free acid NA NA NA 10 mg N1495 ¥26,400 20.2, 21.2

* Indicators with dual excitation or emission listings are ratiometric. The first number in each pair represents the excitation or emission maxima at zero calcium, the second number is the excitation or emission maxima at high calcium levels.


Cell Biology Catalogp

H

インジケーター／反応性酸素種（R

OS

）インジケーター

6反応性酸素種（ROS）インジケーター一重項酸素（1O2）、スーパーオキシド（･O2

－）、水酸ラジカル（HO･）のほか、脂肪酸過酸化物（ROOR’）およびヒドロペルオキシド（ROOH）を含むさまざまな反応性酸素種（ROS）を生成または検出する幾つかのプローブが入手可能です。ROSの濃度を連続モニタリングする平衡センサーは存在せず、ここに示したプローブは一重項酸素、水酸ラジカルもしくは過酸化物を補足するか、そうでなければこれらと反応します。活性化酸素種はアルツハイマー病、アポトーシスおよび食菌作用など多くの生理的プロセス中に産生され、きわめて高い反応性を示します。これらの酸素種は以下のようなほぼすべての種類の高分子を傷害する可能性があります：炭水化物、核酸（突然変異）、アミノ酸（例えば、フェニルアラニンからm-チロシンおよびo-チロシンへの変換）、還元ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（NADH）、還元ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（NADPH）、ドーパおよびアスコルビン酸。ROSはコレステロールおよび不飽和脂肪酸も酸化し、膜脂質の過酸化を引き起こす可能性があります。重要な細胞構造を保護する唯一の手段は、グルタチオンなどの抗酸化物質および有効な細胞修復系の使用です。

Image-iT® LIVE活性酸素種（ROS）キットを使用した生細胞における酸化ストレスの検出。酸化ストレスを誘発させるためにtert-ブチルヒドロペルオキシドでウシ肺動脈内皮生細胞を処理した（右）か、または未処理のままとした（左）。次に、ROSによって酸化された場合に蛍光を発するカルボキシ-H2DCFDAで細胞を標識し、青色蛍光Hoechst 33342で核を染色した。ストレスを受けた細胞はROS増加を意味する緑色蛍光を示したが、未処理細胞が示した蛍光はきわめてわずかだった。

最初に活性酸素種（ROS）インジケーターの6-carboxy-2', 7'-dichlorodihydrofluorescein

diacetate, di(acetoxymethyl ester)でウシ肺動脈内皮細胞（BPAEC）を染色した。30分間インキュベーション後、細胞を洗浄し、次にリン酸緩衝食塩水（PBS）に溶解したFM® 5-95とHoechst 33342を同時に用いてさらに5分間インキュベートした後、洗浄し、PBSに溶解してマウントした。赤色蛍光FM 5-95は原形質膜（細胞膜）および初期エンドソームの両方を染色することが認められ、緑色蛍光の酸化カルボキシジクロロフルオレセインは細胞質に局在化し、青色蛍光Hoechst 33342色素は核を染色している。Huygensソフトウェア（Scientific Volume Imaging）を使用して画像のデコンボリューションを行なった。

178




Indicators for General Intracellular ROS Detection

製　品　名 DetectionExcitation(nm)

DetectionEmission(nm) サイズ製品番号価格

5-(and-6)-carboxy-2',7'-difluorodihydrofluorescein diacetate

(carboxy-H2DFFDA)495 529 5 mg C13293 ¥39,900 10.5, 18.2

6-carboxy-2',7'-dichlorodihydrofluoresce in diacetate,

di(acetoxymethyl ester)495 529 5 mg C2938 ¥53,300 15.2, 18.2

5-(and-6)-carboxy-2',7' dichlorodihydrofluorescein diacetate 495 529 25 mg C400 ¥36,500 10.5, 15.2, 18.2

5-(and-6)-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydro fluorescein diacetate

CM-H2DCFDA495 529 20 × 50 μg C6827 ¥51,300 14.2, 15.2, 18.2

2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, succinimidyl ester 495 529 5 mg D2935 ¥23,700 16.1, 18.2

2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate 495 529 100 mg D399 ¥21,200 10.5, 15.2, 18.2

Dihydrocalcein AM 494 517 20 × 50 μg D23805 ¥66,800 10.5, 15.2, 18.2

Image-iT® LIVE Green Reactive Oxygen Species Detection Kit 1 kit I36007 ¥49,900 18.2

Indicators for Specific ROS


DetectionEmission(nm) Detects サイズ製品番号価格

RedoxSensor™ Red CC-1 550 579 General 10 × 50 μg R14060 ¥39,900 12.2, 12.3, 15.2, 18.2

Singlet Oxygen Sensor Green 504 525 Singlet oxygen 10 × 100 μg S36002 ¥40,900 18.2

MitoSOX® Red mitochondrial superoxide indicator

510 580 Superoxide 10 × 50 μg M36008 ¥48,100 12.2, 18.2

Dihydroethidium 355/518 420/605Superoxide,

peroxynitrite

25 mg D1168 ¥40,900 8.1, 15.2, 18.2

1 ml D23107 ¥40,900 8.1, 15.2, 18.2

Dihydrorhodamine 123 (5 mM DMSO) 507 529 General 1 ml D23806 ¥40,900 12.2, 15.2, 18.2

Dihydrorhodamine 123 507 529 General 10 mg D632 ¥42,900 12.2, 15.2, 18.2

Dihydrorhodamine 6G 528 551 General 25 mg D633 ¥42,900 12.2, 15.2, 18.2

MitoTracker® Orange CM-H2TMRos 551 576 General 20 × 50 μg M7511 ¥53,500 12.2, 18.2

MitoTracker® Red CM-H2XRos 578 599 General 20 × 50 μg M7513 ¥53,500 12.2, 18.2

Chemiluminescent ROS Indicators



MCLA NA 455 Superoxide 5 mg M23800 ¥26,400 6.2, 10.5, 18.2

Coelenterazine NA 466 Superoxide 250 μg C2944 ¥57,600 10.6, 18.2, 19.5

Lucigenin (bis-N-methylacridinium

nitrate)NA 470 Superoxide 10 mg L6868 ¥8,900 12.2, 18.2, 21.2

Luminol (3-aminophthalhydrazide) NA 425 Superoxide, Peroxide 25 g L8455 ¥33,600 6.2, 10.5, 15.2, 18.2

Trans-1-(2’-methoxyvinyl) pyrene NA 465 Singlet Oxygen 1 mg M7913 ¥30,500 18.2

Spin Traps for Superoxide



TEMPO-9-AC 358 424 Superoxide 5 mg A7923 ¥26,400 18.2

Proxyl fluorescamine 385 485 Superoxide 5 mg C7924 ¥26,400 18.2

Indicators of Lipid Peroxidation



BODIPY® 665/676 665 676 Peroxide 5 mg B3932 ¥32,600 13.5, 18.2

BODIPY® 581/591 C11 582 591 Peroxide 1 mg D3861 ¥21,700 13.2, 18.2

Diphenyl-1-pyrenylphosphine (DPPP) 358 379 Peroxide 5 mg D7894 ¥50,200 18.2

Cis-parinaric acid 320 420 Peroxide 10 ml P36005 ¥46,100 13.2, 18.2

ROS Producers


DetectionEmission(nm) Produces サイズ製品番号価格

Hypericin NA NA Singlet Oxygen 1 mg H7476 ¥20,100 17.3, 18.2

Rose bengal diacetate 556 572 Singlet Oxygen 5 mg R14000 ¥26,400 18.2

Merocyanine 540 555 578Singlet Oxygen,

Superoxide, Peroxide25 mg M24571 ¥99,000 18.2, 22.3

Malachite green isothiocyanate 630 NA Hydroxyl 10 mg M689 ¥45,300 1.6, 18.2

NA = not applicable.



反応性酸素種（

）インジケーター／一酸化窒素インジケーター

6一酸化窒素インジケーターホタルを光らせる分子の一酸化窒素（NO）は、血圧調節および神経伝達を含むさまざまな生理的プロセスの分子メディエーターとしてきわめて重要な役割を果たします。内皮細胞のほか、神経細胞および星状膠細胞では、NOは一酸化窒素合成酵素（NOS）によって触媒される反応においてL-アルギニンから合成されます。NOは平滑筋細胞内に拡散すると、グアニル酸シクラーゼのヘム基に結合します。遊離NOは半減期が5秒間の過渡種であるため、この気体分子に関する多くの研究はNOSの研究に大きく依存してきました。実験系においてNO溶液を調製し、NOを検出するには、再現性が得られるよう特別な注意が必要です。NOはスーパーオキシドと複合体を形成して、炎症、敗血症および虚血/再灌流時に産生される主要細胞毒性因子であると思われる強力なオキシダントのペルオキシナイトライト陰イオン（ONOO

－）を生成することがあります。活性化マクロファージおよび好中球はNOおよびスーパーオキシドを産生し、その結果ペルオキシナイトライト陰イオンをほぼ同じ割合で産生します。NOラジカルはきわめて不安定であり、NOの平衡インジケーターは知られていません。しかし、NOは水溶液中で中程度の安定性を示すニトロソニウム陽イオン（NO

＋）に直ちに酸化されますが、求核体または他の窒素酸化物に高い反応性を示します。好気的条件下では、これらの反応性窒素酸化物はDAF-2またはDAF-FMなどのプローブによって捕捉されます（図9）。

波長（nm）

図9　 0～ 1.2µMの一酸化窒素（NO）を含有する溶液中のDAF-FMの蛍光発光スペクトル

蛍光発光

Solution Nitric Oxide Detectors製　品　名 Detection

Excitation(nm)DetectionEmission(nm) Application Notes サイズ製品番号価格

1,2-diaminoanthraquinone sulfate (DAA) 521 580 5 mg D23840 ¥25,300 18.3

2,3-diaminonaphthalene (DAN) 365 415 100 mg D7918 ¥8,900 3.3, 18.3, 21.2

Griess Reagent Kit 548 NA Colorimetric assay 1 kit G7921 ¥23,200 18.3, 21.2

Measure-iT™ High-Sensitivity Nitrite Assay Kit 365 450 Fluorescent assay 1 kit M36051 ¥59,600 18.3, 21.2

2-(4-carboxyphenyl)-4, 4,5,5-tetramethylimidazoline- 1-oxyl-3-oxide, potassium salt (carboxy-PTIO)

367 NAElectron spin

spectroscopy25 mg C7912 ¥19,100 18.3

4-trimethylammonium-2, 2,6,6-tetramethylpiperidine- 1-oxyl iodide (CAT 1)

<300 NAElectron spin

spectroscopy100 mg T506 ¥79,400 14.3

N-methyl-4-hydrazino-7- nitrobenzofurazan (NBD methylhydrazine)

468 537 25 mg M20490 ¥28,6003.3, 10.5, 18.3,

21.2

NA = not applicable.

Solution Nitric Oxide Donors製　品　名 Attributes サイズ製品番号価格

3-morpholinosydnonimine, hydrochloride (SIN-1) Also produces superoxide25 mg M7891 ¥19,100 18.3

20 × 1 mg M7926 ¥26,400 18.3

S-nitroso-N-acetylpenicillamine (SNAP) Photoactivatable no donor25 mg N7892 ¥19,100 18.3

20 × 1 mg N7927 ¥26,400 18.3

spermine NONOate 39-minute half-life (37°C in pH 7.4) 10 mg S7916 ¥20,100 18.3

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キャリブレーションキット、キレート剤およびイオノフォア蛍光Ca2

＋インジケーターのキャリブレーションは正確なCa2＋測定の前提条件です。実験室のフルオロメーターまたは

定量的イメージングシステムを使用してこのようなキャリブレーションを容易にするために設計された多くのキットが現在入手可能です。これらのキットのすべてに、緩衝液および詳細なプロトコール─Kdの計算方法、サンプル反応曲線のほか、さまざまなpH、温度およびイオン強度の条件下で遊離Ca2

＋の正確な濃度を測定するのに有用な表など─が含まれています。カルシウムおよびその他のイオンの研究をさらに助けるために、当社は細胞内にイオンをロードし、かつ/またはイオンの細胞内濃度に影響を及ぼすための高親和性および低親和性のさまざまなキレート剤とイオノフォアを提供しています。

製　品　名 Attributes Kd for Ca2+(µM) サイズ製品番号価格

A-23187, free acid (calcimycin) Ionophore NA 10 mg A1493 ¥26,900 19.8

Calcium Calibration Kit #1* 0–10 mM Ca2+ calibration NA 1 kit C3008MP ¥41,800 19.8

Ionomycin, calcium salt Ionophore NA 1 mg I24222 ¥21,700 19.8

Probenecid Ion transport inhibitor NA 10 × 77 mg P36400 ¥29,800 19.8

TPEN Zn2+, Fe2+ chelator NA 100 mg T1210 ¥22,700 19.8

BAPTA, tetrapotassium salt Ca2+ chelator 0.16 1 g B1204 ¥29,400 19.8

BAPTA, AM Ca2+ chelator 0.16 25 mg B1205 ¥32,600 19.8

BAPTA, tetracesium salt Ca2+ chelator 0.16 1 g B1212 ¥50,200 19.8

BAPTA, tetrasodium salt Ca2+ chelator 0.16 1 g B1214 ¥29,400 19.8

BAPTA, AM (cell permeant) Ca2+ chelator 0.16 20 × 1 mg B6769 ¥39,900 19.8

Calcium Sponge™ (BAPTA polystyrene) Ca2+ chelator NA 1 g C3047 ¥40,900 19.8

5,5'-Dimethyl BAPTA, AM Ca2+ chelator 0.04 25 mg D1207 ¥39,900 19.8

5,5'-Difluoro BAPTA, AM Ca2+ chelator 0.64 25 mg D1209 ¥50,200 19.8

5,5-Dibromo BAPTA, TETRA Ca2+ chelator 1.6 100 mg D1211 ¥30,500 19.8

Diazo-2, tetrapotassium salt Ca2+ chelator 2.2 1 mg D3034 ¥80,300 5.3, 17.2, 19.8

DMNP-EDTA Ca2+ chelator 0.005† 5 mg D6814 ¥49,200 5.3, 17.2, 19.8

EGTA Ca2+ chelator >1 mM 10 mg E1219 ¥50,200 19.8

NP-EGTA Ca2+ chelator 0.08‡1 mg N6802 ¥66,800 5.3, 17.2, 19.8

20 × 50 μg N6803 ¥77,200 5.3, 17.2, 19.8

Valinomycin Ionophore NA 25 mg V1644 ¥17,000 21.1

Gramicidin Ionophore NA 100 mg G6888 ¥6,600 21.1

Nigericin pH ionophore NA 10 mg N1495 ¥26,400 20.2, 21.2

* Supplied as 0 and 10 mM cell solutions for user-defined dilutions. ** Supplied as 11 premade Ca2+ dilutions. † Prior to photoactivation; Kd = 3 mM after activation. ‡ Prior to photoactivation; Kd = >1 mM after activation. NA = not applicable.

細胞ローディング試薬Influx™飲作用性細胞ローディング試薬は、生細胞に水溶性の物質を簡便、迅速、単純な手順でローディングすることができます。Pluronic® F-127は非イオン性の界面活性剤ポリオールです。これは、水溶性色素や他の物質を生理学的溶媒に溶けやすくします。PowerLoad™はPluronic®含有の当社独自のローディング試薬です。Fluo-4、Fura-2、indo-1、Fluo-3、SBFIなどで最小の影響で最大のローディングが可能です。

製　品　名サイズ製品番号価格

Influx™ pinocytic cell-loading reagent *makes 10 x 5 mL* 1 set I14402 ¥22,200 14.3, 19.8

Pluronic® F-127 *20% solution in DMSO* 1 ml P3000MP ¥8,900 19.8, 21.1

Pluronic® F-127 *10% solution in water* *0.2 μm filtered* 30 ml P6866 ¥19,500 19.8, 21.1

Pluronic® F-127 *low UV absorbance* 2 g P6867 ¥4,900 19.8, 21.1

PowerLoad™ concentrate x100 5 ml P10020 ¥13,400 16.3, 19.8, 21.1



6キャリブレーションキット、キレート剤およびイオノフォア／細胞ローディング試薬／

グルコース摂取アッセイ／塩素イオンチャネル活性アッセイ

グルコース摂取アッセイ2-NBDG

2-NBD-deoxyglucose（2-NBDG、N13195)は、さまざまな有機体の中で輸送と生産能力を算定する為に、グルコース摂取の測定に使用することができます。膵臓の細胞、酵母、Candida albicans、およびバクテリア病原性大腸菌でグルコース摂取をモニターするのに使用されます。また、6-NBD-deoxyglucose（6-NBDG、N23106)　蛍光ブドウ糖アナログの製品もあります。遊離している細胞と組織にてグルコース摂取と輸送の研究に使用されます。NBD蛍光は環境敏感性です。励起/蛍光波長：465/540nm（FITC用蛍光フィルタを使用できます。）


2-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-2-deoxyglucose (2-NBDG) 5 mg N13195 ¥26,400 15.2

6-(N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino)-6-deoxyglucose (6-NBDG) 5 mg N23106 ¥58,900 15.2

塩素イオンチャネル活性アッセイPremo™ Halide Sensor

Premo™ Halide Sensorは、YFPに変異を入れることにより、ハロゲンイオンに対し感受性にしています。（H148Q,

I152Lの2ヶ所を変異）。BacMamテクノロジーを用いて細胞に導入することで、簡単かつ一過性の発現を行うことができ、数日間は発現しています。また、感染細胞を凍結することにより、アッセイ準備済の細胞を用意しておくことができます。初代細胞でも実績があります。ヨウ素イオンを用いて塩素イオンチャネルを測定し、優れたS/N比とZ’値を示します。Cl-チャネル特異的：電圧とリガンドにゲート制御された塩素チャネルや（CFTRのような）トランスポーターのハロゲ

ンイオンの流出・流入を測定できます。迅速：非常に再現性のある結果を伴うハイスループットで塩素流出・流入を測定できます。強力：感染後早期に発現し明るい変異型YFP センサーの信頼性の高い発現は、優れたシグナル・ウィンドウを与えます。便利： BacMam技術によるPremo™ Halide Sensorの効率的で非細胞変性の導入による細胞のモデル中の塩素流出・流

入を研究できます。薬理学的に関連：既知のモジュレーターは用量依存的な消光を示します。また、BacMam導入は初代細胞中のアッセイ

を可能にします。このシステムは、塩素イオンの代用としてのヨウ素イオンとVenus Halide Sensorを用いています。塩素イオンチャネルやトランスポーターが活性化すると、ヨウ素イオンは濃度勾配に従って細胞内に流入します。　その後ヨウ素イオンが変異型YFPと結合すると変異型YFPが消光します。消光量を測定することで、塩素イオンチャネルやトランスポーターの活性を調べることができます。スクリーニングは完全培地を用いて、洗浄ステップ無しに行うことができます。

励起/蛍光

Ion channel Ion channel

I -

I-

I -

I-

I-

I-

I-

I-

I -

Closed

Open

I-

StimulatedResting

IodidePremo™ Halide Sensor

ralullecartnIralullecartxEralullecartnIralullecartxE

I -

I-

I -

I-

I-

I-

I -

I-

I-

I-

I-


Premo Venus Halide Sensor 1 kit P10229 ¥89,900 16.3, 21.2

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カリウム・チャネル活性アッセイFluxOR™ Potassium Ion Channel AssayhERG導入用BacMam-hERG

FluxOR™ Potassium Ion Channel Assay

K+チャネルに特異的で、電圧開口型、リガインド開口型のカリウムチャネルに適合します。ハイスループットモードで高い再現性が得られます。また、既知のブロッカーは大きなシグナルウインドウで用量依存的抑制を示しました。この蛍光指示薬は細胞外では弱い蛍光を示し優れたシグナルノイズの抑制を持ちます。励起/蛍光波長：490/525 nm

FluxOR™タリウム感受性色素エステルを細胞にロードします。細胞内に取り込まれ、内在性エステラーゼによりAMエステルが切断され、細胞内にトラップされます。細胞外への放出はキット中のプロベネシドにより妨げられます。色素をロード後、アッセイバッファーで色素を置換します。アゴニストやマイルドな脱分極で、カリウムチャネルを開く刺激溶液と共に少量のタリウムを細胞に加えます。開いたチャネルを通りタリウムは細胞内に入り、タリウム色素と結合して蛍光が発色します。

FluxOR™ Potassium Ion Channel AssayはロースループットメソッドによるIC50値に相当するデータの再現性が得られます。この均一なアッセイは、タリウムイオンのトランスポーターとカリウムチャネルの透過性を利用しています。

外部媒体からのタリウム流入刺激によりチャンネルが開けられるとき、非常に高感度のインジケーターとなります。

結果として生じる蛍光量は、イオンチャンネルの活性とタリウムに透過するトランスポーターを反映しています。

BacMan-hERG

FluxOR™ Potassium Ion Channel AssayとBacMam-hERGによるhERGのアゴニストのスクリーニングができます。BacMam-hERGでhERGを細胞に導入し、蛍光検出でタリウムの変動（Potassium Ion Channel）を測定します。BacMam技術により多くの細胞タイプへのhERGの非細胞変性的で効果的な導入が可能です。また形質導入した細胞を凍結し、最適なアッセイをいつでも再現性よくスピーディに行えます。


BacMam-hERG *for 10 microplates* 1 kit B10019 ¥53,600 16.3, 21.1

FluxOR™ Potassium Ion Channel Assay for 10 microplates* 1 kit F10016 ¥49,500 16.3, 21.1

FluxOR™ Potassium Ion Channel Assay for 100 microplates* 1 kit F10017 ¥326,700 16.3, 21.1

chapter 6 イオンセンサー - thermo fisher scientific...i 製品：...

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