Differential glycosilation of polar and lateral flagellins in Aeromonas hydrophila AH-3

Differential glycosilation of polar and lateral flagellins in Aeromonas hydrophila AH-3

CARACTERÍSTICAS TAXONÓMICAS

Bacilos Gram-negativosAnaerobios facultativos.Oxidasa/ Catalasa positivos.Habitualmente motiles. 57-64% G+C

HABITAT

Ubicuas de medios acuáticos.Frecuentes en suelo, alimentos y animales.

CARACTERÍSTICAS DE LAS AEROMONAS MESÓFILASCARACTERÍSTICAS DE LAS AEROMONAS MESÓFILAS

PATOGENESIS

Infecciones en animales poiquilotermos.

Perdidas en acuicultura

Infecciones en animales homeotermos.- Gastrointestinales.- Extraintestinales.

(septicemia e infección de heridas).

A. veronii bv sobria, A. hydrophila y A. caviae.

Exotoxinas.Endotoxina (LPS).Complejos tóxicos extracelulares(LPS-CPS-Protein).Sistemas de secreción de tipo III y IV..

Lesiones en tejidos ydiseminación

Lipopolisacarido (LPS).Porinas.Cápsula (CPS).Lámina S.

Superar las defensas del huésped

Sistemas de captura de hierro de alta afinidad.Sideroforos.Receptores unidos a membrana.

Multiplicación en tejidos

FACTORES DE VIRULENCIA PROCESO INFECCIOSO

Fimbria.Flagelo.Adhesinas no filamentosas (CROMPs y LPS).

Entrada en el huesped

FACTORES DE VIRULENCIA DE LAS AEROMONAS MESÓFILASFACTORES DE VIRULENCIA DE LAS AEROMONAS MESÓFILAS

FAGELACIÓN POLAR Y LATERAL EN Aeromonas hydrophila AH-3FAGELACIÓN POLAR Y LATERAL EN Aeromonas hydrophila AH-3

FLAGELACIÓN LATERAL

FLAGELACIÓN POLAR

FLAGELACIÓN POLAR EN Aeromonas hydrophila AH-3FLAGELACIÓN POLAR EN Aeromonas hydrophila AH-3

FLAGELACIÓN LATERAL EN Aeromonas hydrophila AH-3FLAGELACIÓN LATERAL EN Aeromonas hydrophila AH-3

GLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS DE A. hydrophila AH-3GLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS DE A. hydrophila AH-3

A

AH-3:flrAMedio Líquido Medio Semisólido

FlaA

MGLYINTNVSSLNAQRNLMNTNKSLDTSYTRLASGLRINSAKDDAAGLQIANRLTSQINGLDQGNRNANDGISVAQTAEGAMDEVTSMLQRMRTLAQQSANGSNNTDDRTALQQEYSQLMTEIDRVAKDTTFGGQNLLKGGYVGSFQVGADASQTITFRMTTAFTISGMASATSGSATVATTTSGEPYSITKTAGTPVSSTKHVDHYCGKAPPSRAMANLDYMIKVVDSKRAELGAVQNRFDSTIRNQANVSENVSAARSRIRDADFATETANLTKQNILQQAASTILSQANQRPQSALSLLQG

MW estimado: 32,4 KDa

FlaBMAMYINTNTSSLNAQRNLMNTNKSLDTSYTRLASGLRINTAKDDAAGLQISNRLTSQVNGLDQGNRNANDGISVAQTAEGAMDEVTSMLQRMRTLAQQSANGSNNTDDRTALQQEFDQLTTEINRISSDTSFGGQKLLDGNYKGSFQVGADAGQTITFKMTSAFTISGIASSTKGSATVATSASGEPYTVTKGTTAVTSTSVSSIKAASSAQLAMANLDFMIKAVDSKRAELGAVQNRFDSTIRNQSNVSENLSAARSRIRDADFATETANLTKQNILQQAASSILAQANQRPQSALSLLG

MW estimado: 31,8 KDa

LafAMGLSIHTNFASMTTQNQLNSTNKMLGTAMQRLGTGLRINSAADDAAGLQIATRLQAQSNGQKVGMRNAQDAISMIQTAESAMDEMTNITQRMKDLATQAANGTNSTKDLDAMDAEFKELGKELGNIRDNTTFGGTSLLKTGGKFQATGGVTFQIGASVDEKLVFDASTKVTSVNTAISTASAAALTTGAAAQITAMDSMLEKIGEARSAFGANINRLEHTVNNLSNMKENTDMANGRIMDADFAQESTNMTKNQMLMQAGMSVLSNSNQMTGMVTGLLR

MW estimado: 29,5 KDa

GLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS POLARESGLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS POLARES

MS/MS de péptidos de flagelina polares de A. hydrophila AH-3

1679 Da = 376 Da- Hex- Hex-HexNAc-HexNAc-HexNAc-102 Da

S. Logan and S.M. Twine

Antígeno O:34

MS/MS de flagelina polar (FlaB) intacta

2

3 4 5

6

GLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS POLARESGLICANO PRESENTE EN LAS FLAGELINAS POLARES

S. Logan and S.M. Twine

MS/MS de flagelina lateral intacta

321

0

MS/MS de péptidos de flagelina lateral de A. hydrophila AH-3

Caracterización estructural del glicano mediante MS

C15H25N2O9

C13H21N2O7

C6H10O5

Pse5Ac7Acacetilado

A. hydrophila ATCC 7966T

A. caviae Sch3N

A. caviae Sch3N

GENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINASGENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINAS

A. hydrophila AH-3

UDP-GlcNAc

FlmAFlmBFlmDNeuB

Pse5Ac7Ac

NeuA

CMP-Pse5Ac7Ac

AH-3∆flmBAH-3∆neuBMedio Líquido

Medio Semisólido

AH-3∆maf-1Medio Líquido

Medio Semisólido

Medio Líquido

Medio Semisólido

Medio Líquido

Medio Semisólido

AH-3∆maf-2

FRACCIÓN INSOLUBLE (I)

FRACCIÓN SOLUBLE (S)

AH-3 maf-1 maf-2 flrA flaA flaH flmBflaB

Inmunodetección de flagelinas polares

50-

38-

FLAGELO POLAR

AH-3 maf-2

S I

50-

38-

FRACCIONES AH-3

Inmunodetección de flagelina lateralFRACCIÓN INSOLUBLE (I)

FRACCIÓN SOLUBLE (S)

AH-3 maf-5 lafA flmA

GENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINASGENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINAS

Medio Líquido Medio Semisólido

AH-3∆maf-5

UDPGalNAc 4-epimerasa (Gne)

UDP-GalNAc UDPGlcNAc

Antígeno O:34 AH-3 AH-3∆wecP AH-3::gne

WbaP S. enterica LT2

WecP A. hydrophila AH-3

WecA E. coli VW187

1: AH32: AH3∆wecP 3: 2 + wecP AH-34: 2 + wbaP LT25: 2 + wecA VW187

1 2 3 4 5

Flagelo Polar Purificado

Anti-Flag. Polar

SDS-PAGE

AH-3 gne wecP rmlB66

45

30

AH-3 gne wecP rmlB

Espectro de masas

GENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINASGENES IMPLICADOS EN GLICOSILACIÓN DE FLAGELINAS

MIEMBROS DEL GRUPO MIEMBROS DEL GRUPO

Dra. Susana Merino (Titular de Universidad)Dr. Juan Tomás Magaña (Catedrático de Universidad)Dra. Susana Merino (Titular de Universidad)Dr. Juan Tomás Magaña (Catedrático de Universidad)

Investigadores Postdoctorales Dra. Eleonora Aquilini (Contratado)Dr. Markus Wilhelms (Contratado)

Investigadores Postdoctorales Dra. Eleonora Aquilini (Contratado)Dr. Markus Wilhelms (Contratado)

Investigadores Predoctorales Ivania Loreto Cortes (Becaria AECI)Raquel Molero (Becaria FI)Victor Gonzalez Motos

Investigadores Predoctorales Ivania Loreto Cortes (Becaria AECI)Raquel Molero (Becaria FI)Victor Gonzalez Motos

Técnico de Laboratorio Mª Teresa Polo

Técnico de Laboratorio Mª Teresa Polo