vi

ABSTRACT

The purpose of this research was to determine the ability of BAL from

cattle intestine (Bos taurus) in inhibiting the growth of Eschericia coli and

Shigella sp.Testing of BAL capability in inhibiting growth of Escherichia coli and

Shigella sp. using the disc-diffusion method or the Kirby-Bauer method, which

was done by measuring the inhibit zone around the paper disc.Data were analyzed

descriptively by displaying data in table and picture form.The results obtained 2

isolates of BAL from the cow intestine. All isolates showed positive results when

tested for antibacterial against Escherichia coli and Shigella sp. In isolate BAL

with code sp1 has inhibition zone against Escherichia coli equal to 7.5 mm and to

Shigella sp. of 6.8 mm, whereas in isolate BAL with code sp2 has inhibition zone

against Escherichia coli equal to 8.9 mm and to Shigella sp. of 8.0 mm.Based on

the results obtained, it can be concluded that isolates of lactic acid bacteria with

sp2 code has inhibition zone 8.9 mm in inhibitingEschericia coli while against

bacteria Shigella sp. has a diameter of 8.0 mm.

Keywords: Cow (Bos taurus), Lactic Acid Bacteria (BAL), Antibacterial,

Eschericia coli, Shigella sp.

vii

ABSTRAK

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan BAL yang berasal

dari usus sapi (Bos taurus) dalam menghambat pertumbuhan Eschericia coli dan

Shigella sp.Pengujian kemampuan BAL dalam menghambat pertumbuhan

Eschericia coli dan Shigella sp. menggunakan metode difusi cakram atau metode

Kirby-Bauer, yaitu dilakukan dengan mengukur zona hambat di sekeliling cakram

kertas. Data dianalisis secara desktiptif dengan menampilkan data dalam bentuk

tabel dan gambar. Dari hasil penelitian diperoleh 2 isolat BAL dari usus sapi.

Seluruh isolat menunjukkan hasil positif saat diuji antibakteri terhadap Eschericia

coli dan Shigella sp. Pada isolat BAL dengan kode sp1 memiliki zona hambat

terhadap Eschericia coli sebesar 7,5 mm dan terhadap Shigella sp. sebesar 6,8

mm, sedangkan pada isolat BAL dengan kode sp2 memiliki zona hambat terhadap

Eschericia coli sebesar 8,9 mm dan terhadap Shigella sp. sebesar 8,0 mm.

Berdasarkan hasil yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa isolat bakteri asam

laktat dengan kode sp2memiliki kemampuan untuk menghambat bakteri

Eschericia coli sebesar 8,9 mm sedangkan terhadap bakteri Shigella sp.memiliki

daya hambat sebesar 8,0 mm.

Kata kunci : Sapi (Bos taurus), Bakteri Asam Laktat (BAL), Antibakteri,

Eschericia coli, Shigella sp.

viii

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Medan, pada tanggal 15 Desember 1994 anak dari

ayahanda Kemin dan ibunda Surjannah dan merupakan anak keempat dari lima

bersaudara.

Pada tahun 2001, penulis mulai memasuki pendidikan SD di Yayasan

Perguruan Pelita Medan dan lulus pada tahun 2007. Tahun 2007, penulis

melanjutkan pendidikan di SMP Swasta Pelita Medan dan lulus pada tahun 2010.

Pada tahun 2010 penulis melanjutkan pendidikan di SMK Dharma Analitika

Program Keahlian Kesehatan Medan dan lulus pada tahun 2013. Selanjutnya pada

tahun 2014 terdaftar sebagain mahasiswa Strata Satu (S1) di Fakultas Biologi

Universitas Medan Area.

ix

KATA PENGANTAR

Puji dan syukur kehadiran Tuhan Yang Maha Esa yang telah melimpahkan

rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan

judul “Isolasi Bakteri Asam Laktat Dari Usus Sapi (Bos taurus) Serta

Kemampuannya Dalam Menghambat PertumbuhanEschericia coli dan Shigella

Sp.”.

Ucapan terima kasih penulis kepada pihak yang banyak membantu dalam

penulisan skripsi ini. Terutama kepada Bapak Dr. Mufti Sudibyo M.Si selaku

Dekan Fakultas Biologi, Pembimbing I Ibu Dr. Sartini M.Sc, Pembimbing II Ibu

Rahmiati S.Si, M.Si dan sekretaris komisi pembimbing Bapak Denny Akbar

Tanjung S.Si, M.Si. yang memberikan saran dan masukkan yang sangat berguna

dalam penulisan hasil penelitian ini. Serta ucapan terima kasih kepada bapak/ibu

dosen/staff Fakultas Biologi, keluarga besar dan teman-teman mahasiswa/I

Fakultas Biologi Universitas Medan Area.

Penulis menyadari penulisan skripsi ini belum sempurna, masih banyak

kesalahan dan kekurangan. Oleh karena itu kritik dan saran yang bersifat

membangun sangat penulis harapkan demi kesempurnaan penulisan hasil

penelitian ini.

Akhirnya penulis berharap, kiranya skripsi ini dapat bermanfaat untuk

pembangunan ilmu pengetahuan bagi penulis dan pembaca. Amin.

Medan, September 2017

Penulis

x

DAFTAR ISI

Halaman

ABSTAK ........................................................................................................... i

ABSTRACT ....................................................................................................... ii

KATA PENGANTAR ...................................................................................... iii

DAFTAR ISI ...................................................................................................... iv

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... vi

DAFTAR TABEL ............................................................................................. vii

BAB I PENDAHULUAN .................................................................................. 1

1.1.Latar Belakang ............................................................................................. 1

1.2.Rumusan Masalah ........................................................................................ 4

1.3.Tujuan Penelitian ......................................................................................... 4

1.4.Manfaat Penelitian ....................................................................................... 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ........................................................................ 5

2.1. Bakteri Asam Laktat ................................................................................... 5

2.2. Karakteristik Bakteri Asam Laktat.............................................................. 5

2.3. Sumber Bakteri Asam Laktat ..................................................................... 6

2.4. Jenis-jenis Bakteri Asam Laktat ................................................................. 6

2.5. Peran Bakteri Asam Laktat ......................................................................... 8

2.6. Potensi BAL Sebagai Probiotik ................................................................. 9

2.7. Bakteri Patogen ......................................................................................... 10

2.7.1. Eschericia coli ................................................................................. 10

2.7.2. Shigella sp........................................................................................ 12

2.8. Pewarnaan Gram ....................................................................................... 12

2.9. Sapi (Bos taurus) ........................................................................................ 14

2.9.1. Organ Pencernaan Sapi (Bos taurus) ............................................... 16

BAB III BAHAN DAN METODE ................................................................... 22

3.1. Waktu dan Tempat Penelitian .................................................................... 22

3.2. Alat dan Bahan Penelitian .......................................................................... 22

3.3. Lokasi Pengambilan Sampel ...................................................................... 22

3.4. Prosedur Penelitian..................................................................................... 23

3.4.1. Sterilisasi Alat dan Media ................................................................ 23

3.4.2. Isolasi Bakteri Asam Laktat ............................................................ 23

3.4.3. Pengamatan Makroskopis ................................................................ 23

3.4.4. Pengamatan Mikroskopis ................................................................ 24

3.4.5. Uji Biokimia .................................................................................... 24

3.4.6. Uji Antagonis ................................................................................... 25

3.4.7. Uji Ketahanan terhadap pH ............................................................. 26

3.4.8. Uji Ketahanan Kadar Garam ........................................................... 26

3.5. Analisis Data .............................................................................................. 27

xi

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................... 28

4.1. Isolasi Bakteri Asam Laktat ...................................................................... 28

4.2. Karakteristik Mikroskopis isolat Bakteri Asam Laktat ............................. 29

4.3. Ketahanan Isolat BAL terhadap pH dan Kadar Garam ............................. 34

4.4. Kemampuan Isolat BAL dalam Menghambat Bakteri Patogen ................ 38

BAB V SIMPULAN DAN SARAN ................................................................ 42

5.1. Simpulan ................................................................................................... 42

5.2. Saran .......................................................................................................... 42

DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 43

xii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Perbedaan Sifat Bakteri Gram positif dan Gram negatif .................... 14

Tabel 2.Karakteristik Morfologi Isolat BAL .................................................... 28

Tabel 3. Hasil Pewarnaan Gram Isolat BAL .................................................... 29

Tabel 4. Hasil Uji Biokimia Isolat BAL .......................................................... 31

Tabel 5. Pertumbuhan Total Bakteri pada Variasi pH ..................................... 35

Tabel 6. Pertumbuhan Total Bakteri pada Variasi Kadar Garam ..................... 36

Tabel 7. Diameter Zona Hambat ....................................................................... 38

xiii

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Eschericia coli ................................................................................. 11

Gambar 2. Organ Pencernaan Sapi (Bos taurus) .............................................. 15

Gambar 3. Rumen ............................................................................................ 16

Gambar 4. Retikulum ....................................................................................... 17

Gambar 5. Omasum ......................................................................................... 17

Gambar 6. Usus Halus (Intestinum tenue) ........................................................ 18

Gambar 7. Usus Besar (Intestinum crasum) ..................................................... 19

Gambar 8. Biakan Murni isolat BAL ............................................................... 27

Gambar 9. Hasil Pewarnaan Gram ................................................................... 28

Gambar 10. Uji TSIA ....................................................................................... 32

Gambar 11. Zona Hambat Isolat BAL ............................................................. 40

xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Alat dan Bahan Penelitian ............................................................ 47

Lampiran 2. Proses Isolasi Bakteri Asam laktat dari Usus Sapi ....................... 48

Lampiran 3. Uji Biokimia ................................................................................ 49

Lampiran 4. Hasil Uji Ketahanan Isolat BAL Terhadap Variasi pH ............... 50

Lampiran 5. Hasil Uji Ketahanan Isolat BAL Terhadap Variasi Garam ......... 51

1

BAB I

PEDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Sapi potong adalah sapi yang dipelihara dengan tujuan utama sebagai

penghasil daging, sehingga sering disebut sebagai sapi pedaging. Sapi potong di

Indonesia merupakan salah satu jenis ternak yang menjadi sumber utama

pemenuhan kebutuhan daging setelah ayam. Hal tersebut bisa dilihat dari

konsumsi daging ayam 64%, daging sapi 19% dan daging babi 9% (Hastang dan

Asnawi, 2014).

Sapi potong di Indonesia telah berkembang sejak zaman dahulu. Ada tiga

bangsa sapi potong utama di Indonesia yaitu sapi ongole, bali dan madura serta

hasil-hasil persilangannya baik yang telah diakui sebagai suatu strain maupun

yang belum. Sapi potong yang paling tinggi populasinya di antara ketiga bangsa

sapi tersebut adalah sapi Ongole, khususnya Peranakan Ongole (PO) yang

merupakan hasil persilangan dari sapi Jawa yang penyebarannya hampir merata di

seluruh Pulau Jawa dan beberapa wilayah di Pulau Sumatera dan Sulawesi (Talib

dan Siregar, 1991).

Seiring dengan meningkatnya jumlah penduduk di Indonesia, maka

kebutuhan daging di Indonesia tiap tahun mengalami peningkatan. Kebutuhan

konsumsi daging ini menuntut para ahli di bidang peternakan untuk berusaha

meningkatkan produktivitas ternak. Salah satu cara untuk meningkatkan

produktivitas ternak yang sekarang sedang berkembang yaitu dengan

2

memperbaiki pakan ternak menggunakan mikroorganisme seperti probiotik

(Anastiawan, 2014).

Penggunaan probiotik untuk memperbaiki produktivitas ternak semakin

banyak menarik perhatian para peneliti maupun praktisi peternakana. Probiotik

didefiniskan sebagai substrat mikroorganisme yang diberikan kepada manusia

atau ternak melalui pakan dan memberikan efek positif dengan cara memperbaiki

keseimbangan mikroorganisme alami di dalam saluran pencernaan (Pamungkas

dan Anggraeny, 2006).

Kelompok bakteri asam laktat apabila berada dalam saluran pencernaan

inang berperan sebagai probiotik dan apabila berada pada lingkungan sekitar

berperan aktif sebagai dekomposer, sehingga pemberian probiotik memberikan

dampak yang baik karena tidak mengganggu keseimbangan lingkungan.

Pemberian probiotik pada pakan ternak akan meningkatkan daya cerna pakan

dalam saluran pencernaan ternak ruminansia sehingga proses absorbsi sari

makanan menjadi lebih efektif dan efisien (Setyawan, dkk., 2014).

Bagi ternak ruminansia di Indonesia dengan karakter pakan berkualitas

rendah, sangatlah dibutuhkan mikroorganisme selulolitik dalam jumlah yang

cukup tinggi agar mampu memanfaatkan hijauan atau limbah pertanian yang lebih

efisien dalam menghasilkan gizi yang dibutuhkan oleh ternak. Selain itu, perlu

juga dikembangkan probiotik untuk memperbaiki komposisi mikroorganisme

yang hidup di bagian usus halus ternak ruminansia untuk meningkatkan

produktivitasnya. Mikroorganisme selulolitik berperan pada pencernaan pakan

berserat tinggi, sehingga ruminansia memerlukan probiotik baik yang diaktifkan

di saluran pencernaan bagian depan untuk membantu perkembangan bagian

3

rumen, maupun di saluran pencernaan bagian belakang untuk menghindari

terjadinya diare akibat stres perubahan pakan atau bakteri patogen (Pamungkas

dan Anggraeny, 2006).

Menurut WHO (2013) diare adalah salah satu dari dua penyakit yang

menyebabkan angka kematian anak yaitu mencapai 29% diseluruh dunia atau

terhitung sebanyak lebih dari 2 juta anak setiap tahun. Di Indonesia sendiri, kasus

diare merupakan penyebab kedua terbesar kematian anak setelah kasus malnutrisi

dengan total kematiannya mencapai 31,4%. Menurut WHO Eschericia coli dan

Shigella dysentriae merupakan salah satu penyakit yang disebabkan infeksi

bakteri melalui makanan. Spesies kelompok kedua bakteri tersebut merupakan

genus bakteri penyebab utama diare dan dysentri diseluruh dunia dan ditularkan

melalui konsumsi makanan atau air yang terkontaminasi atau melalui penderita.

Keberadaan bakteri asam laktat dalam saluran pencernaan penting untuk

menjaga keseimbangan ekosistem mikroflora dalam usus. Bakteri-bakteri tersebut

menunjukkan aktivitas penghambatan terhadap bakteri patogen Eschericia coli

dan Shigella dysentriae. Pertumbuhan bakteri patogen dapat ditekan oleh bakteri

asam laktat sehingga mampu menjaga keseimbangan mikroflora dalam usus

(Tambunan, 2016).

Berdasarkan hal tersebut diatas, maka perlu dilakukan penelitian untuk

mengeksplorasi BAL yang terdapat di dalam usus sapi (Bos taurus) dan

kemampuannya menghambat pertumbuhan Eschericia coli dan Shigella

dysentriae.

4

1.2 Perumusan Masalah

Rumusan masalah dalam penelitian ini adalah apakah BAL yang terdapat

pada usus sapi (Bos taurus) mampu menghambat pertumbuhan Esherichia coli

dan Shygella sp.

1.3 Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kemampuan BAL asal

usus sapi dalam menghambat pertumbuhan Esherichia coli dan Shygella sp.

1.4 Hipotesis Penelitian

Hipotesis dari penelitian ini adalah BAL yang diisolasi dari usus sapi (Bos

taurus) dapat menghambat pertumbuhan Esherichia coli dan Shygella sp.

1.5 Manfaat Penelitian

Adapun manfaat penelitian ini adalah dapat memberikan informasi ilmiah

mengenai BAL yang terdapat dalam saluran pencernaan sapi (Bos taurus) dan

dapat memberikan informasi terhadap penelitian-penelitian selanjutnya.

5

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Bakteri Asam Laktat

Bakteri asam laktat pertama kali ditemukan oleh Pasteur pada tahun 1957.

Pada saat Pasteur mempelajari kerusakan anggur yang berubah menjadi asam

yang dikenal dengan istilah Milchsauerbacillus yang diartikan sebagai bakteri

bentuk basil penghasil asam yang menyebabkan keasaman pada susu, pertama kali

ditemukan oleh Hueppepada tahun 1984. Bakteri asam laktat biasanya banyak

ditemukan pada bahan pangan, diantaranya sayuran, buah-buahan, produk susu

dan daging. Bakteri asam laktat merupakan bakteri yang mampu mengubah

karbohidrat menjadi asam laktat. Efek bakterisidal dari asam laktat berkaitan

dengan penurunan pH lingkungan dari 3 sampai 4,5 sehingga pembentukan

bakteri lain seperti bakteri pembusuk akan terhambat. Pada umumnya

mikroorganisme akan tumbuh pada kisaran pH 6-8 (Andiani, 2012).

2.2. Karakteristik Bakteri Asam Laktat

Bakteri asam laktat (BAL) merupakan bakteri Gram positif, tidak

membentuk spora, katalase negatif, tahan terhadap kondisi asam dan bersifat

fakultatif anaerob. Secara umum, BAL merupakan bakteri mesofilik dengan

beberapa strain bersifat termofilik dan mampu tumbuh pada suhu 5-450C. BAL

mampu tumbuh pada pH 3,8 dan bersifat proteolitik dengan kebutuhan asam

amino yang sangat spesifik. BAL telah banyak digunakan sebagai kultur starter

dalam industri fermentasi pangan. BAL yang digunakan digunakan dalam produk

fermentasi menghasilkan sejumlah substansi antibakteri, meliputi asam organik,

hidrogen peroksida (H2O2) dan bakteriosin (Widodo, 2017).

6

2.3. Sumber Bakteri Asam Laktat

Secara alami BAL banyak dijumpai di berbagai habitat seperti makanan

fermentasi, buah-buahan dan saluran pencernaan manusia atau ternak. Secara

umum BAL ditemukan pada habitat yang kaya akan nutrisi seperti pada beberapa

produk makanan (susu, daging dan sayuran), tetapi beberapa juga ditemukan pada

mulut, pencernaan dan vagina dari mamalia. Berdasarkan habitat aslinya secara

umum dibagi menjadi dua kelompok besar yaitu bakteri asam laktat yang berasal

dari tanaman (fermentasi nabati) dan bakteri asam laktat yang berasal dari susu

(dairy product). Pada kelompok BAL yang berasal dari fermentasi nabati biasanya

terdapat pada beberapa produk nabati seperti pikel buah dan sayuran, sauerkraut,

kimchi, minuman beralkohol, produk fermentasi kedelai (taucho, miso, tempe),

dan lain-lain. Sedangkan kelompok BAL yang berasal dari susu biasanya terdapat

pada beberapa produk fermentasi susu yang sangat populer seperti yoghurt, keju,

minuman probiotik, kefir, dadih, dan lain-lain (Susilawati, 2016).

2.4. Jenis-jenis Bakteri Asam Laktat

Menurut Sopandi dan Wardah (2014), jenis-jenis Bakteri Asam Laktat

antara lain sebagai berikut :

Lactococcus

Genus bakteri ini meliputi beberapa spesies, tetapi hanya satu spesies yaitu

Lactococcus lactis yang secara luas digunakan dalam fermentasi susu.

Lactococcus lactisberbentuk oval, berdiameter 0,5-1,0 µm, berpasangan atau

rantai pendek, nonmotil, tidak membentuk spora dan fakultatif anaerobik hingga

mikroaerofil. Secara umum, Lactococcus lactistumbuh baik pada suhu 20-300C,

mampu menghidrolisis laktosa dan kasein, serta dapat memfermentasi galaktosa,

7

sukrosa dan maltosa. Habitat alami Lactococcus lactisadalah tanaman hijau,

lingkungan peternakan susu dan susu mentah.

Streptococcus

Genus bakteri ini meliputi Streptococcus thermophilus, Streptococcus lactis

dan Streptococcus cremoris. Hanya satu spesies dari genus Streptococcus, yaitu

Streptococcus thermophillus yang digunakan dalam fermentasi susu.

Streptococcus thermophillusmerupakan bakteri Gram positif yang berbentuk bulat

hingga oval, berdiameter 0,7-0,9 µm, bersifat fakultatif anaerobik, serta dapat

berada dalam bentuk berpasangan sampai rantai panjang. Habitat alami

Streptococcus thermophillus belum diketahui, tetapi pada umumnya ditemukan

dalam susu.

Pediococcus cerevisae

Bakteri ini merupakan bakteri Bram positif berbentuk bulat, khususnya

terdapat berpasangan atau berempat. Walaupun bakteri jenis ini sebagai perusak

bir dan anggur, namun bakteri ini berperan penting dalam fermentasi daging dan

sayuran.

Leuconostoc

Pada saat ini terdapat 5 spesies Leuconostocyang diketahui, yaitu

Leuconostoc mesenteroides, Leuconostoc paramesenteroides, Leuconostoc lactis,

Leuconostoc carnosum dan Leuconostoc gelidum. Leuconostocmerupakan bakteri

Gram positif, berbentuk bulat hingga bulat panjang, berpasangan atau membentuk

rantai, nonmotil, tidak membentuk spora, katalase negatif, bersifat fakultatif

anaerobik, dapat tumbuh baik pada suhu 20-300C, serta dapat memfermentasi

glukosa menjadi asam laktat, etanol atau asam asetat. Spesies

8

Leuconostocditemukan pada tanaman, sayuran, susu dan beberapa susu olahan

serta daging mentah dan daging olahan.

Lactobacillus

Genus bakteri ini meliputi Lactobacillus lactis, Lactobacillus acidophillus,

Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus plantarum dan Lactobacillus delbrueckii.

Keseluruhan spesies bakteri ini merupakan kelompok bakteri berbentuk batang,

Gram positif dan sering berbentuk pasangan dan rantai dari sel-selnya. Jenis

bakteri ini umumnya lebih tahan lama terhadap keadaan asam daripada jenis-jenis

Pediococcus atau Streptococcus dan oleh karenanya menjadi lebih banyak

terdapat pada sayuran. Pada hewan ternak lain seperti sapi dapat ditemukan

bakteri asam laktat seperti Lactobacillus lactis dan Lactobacillus brevis.

Berdasarkan produk akhir metabolisme, BAL dapat dibagi menjadi dua

kategori, yaitu homofermentatif dan heterofermentatif. BAL disebut

homofermentatif apabila mampu menghasilkan asam laktat sebagai produk akhir

utama. Sedangkan, heterofermentatif menghasilkan asam asetat, etanol dan CO2

selain asam laktat. Genus BAL yang bersifat homofermentatif meliputi

Pediococcus, Streptococcus, beberapa strain dari genus Lactococcus dan beberapa

strain dari genus Lactobacillus. Sedangkan, BAL disebut heterofermentatif

diantaranya ialah Weisella, Leuconostoc dan beberapa strain dari genus

Lactobacillus (Widodo, 2017).

2.5. Peran Bakteri Asam Laktat

BAL berperan besar dalam industri fermentasi pangan. Dari semua produk

fermentasi asam laktat, produk fermentasi susu (baik secara kuantitas maupun

kualitas) merupakan yang utama. Mengonsumsi produk pangan yang mengandung

9

BAL sangat menguntungkan. Hal ini karena terdapat beberapa manfaat konsumsi

produk pangan yang mengandung BAL, yaitu (i) meningkatkan kesehatan saluran

pencernaan; (ii) meningkatkan sistem imun; (iii) menurunkan gejala lactose

intolerance dan menurunkan prevalensi alergi pada individu yang rentan; serta

(iv) menurunkan risiko kanker kolon (Widodo, 2017).

2.6. Potensi BAL sebagai Probiotik

Probiotik pertama kali ditemukan oleh seorang ilmuwan Rusia bernama

Metchnikoff. Dalam sebuah artikel yang diterbitkan dalam jurnal Science pada

tahun 1962, dua dokter hewan yaitu Lilly dan Stillwell pertama kali

mengemukakan istilah “probiotik” untuk merujuk “bakteri anaerob yang mampu

menghasilkan asam laktat dari substrat makanan yang berbeda dan untuk

merangsang pertumbuhan mikroorganisme lain. Parker (1974) juga

mengemukakan bahwa probiotik sebagai organisme dan substansi dengan efek

menguntungkan untuk hewan dengan mempengaruhi mkroflora saluran cerna.

Sementara itu, Fuller (1989) mendefinisikan probiotik sebagai suplemen pakan

yang berupa mikroba hidup yang memberikan efek menguntungkan bagi inang

dengan memperbaiki keseimbangan mikroba saluran cerna (Lestari dan Helmyati,

2015).

Probiotik merupakan pakan aditif berupa mikroba hidup yang dapat

meningkatkan keseimbangan mikroba di dalam saluran cerna hewan inang yang

berperan meningkatkan kesehatan dan produktivitas hewan inang tersebut.

Mikroflora yang digolongkan sebagai probiotik adalah Bakteri Asam Laktat

(BAL) yang dapat memproduksi asam laktat terutama dari golongan Lactobacillus

dan Bifidobacteria. Beberapa penelitian menyatakan bahwa BAL mampu

10

menekan jumlah bakteri patogen penyebab gangguan pencernaan, mampu

membentuk koloni, sehingga menjaga keseimbangan bakteri yang

menguntungkan dalam usus dan meningkatkan kekebalan tubuh (Santoso, dkk.,

2013).

Pada penelitian yang dilakukan oleh Sutrisna, dkk., (2015) diketahui bahwa

bakteri asam laktat yang terdapat dalam usus itik mampu menghambat

pertumbuhan bakteri Gram positif Bacillus subtilis dan Staphylococcus aureus.

Dalam menghambat pertumbuhan bakteri patogen, bakteri asam laktat tidak hanya

menghasilkan asam laktat dan asam asetat (asam organik), tetapi juga senyawa-

senyawa lain yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri lain. Senyawa tersebut

diantaranya H2O2 diasetil dan bakteriosin. Bakteriosin merupakan zat antimikroba

berupa polipeptidoglikan yang utuh, sehingga dinding sel akan melemah dan

akibatnya sel bakteri akan mengalami lisis.

2.7. Bakteri Patogen

Salah satu bakteri patogen adalah Eschericia coli dan Shigella dysentriae.

2.7.1 Eschericia coli

Menurut Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (1993), klasifikasi

taksonomi Eschericia coli :

Kingdom : Bacteria

Divisi : Proteobacteria

Kelas : Gamma Proteobacteria

Ordo : Enetrobacteriales

Famiy : Enterobacteriaceae

Genus : Eschericia

Spesies : Eschericia coli

11

Gambar 1. Eschericia coli dengan perbesaran 1000x (Jamin, dkk., 2015).

Morfologi E. coli secara umum merupakan batang pendek dan gemuk tetapi

kadang-kadang teramati sebagai bentuk batang panjang. Karakteristik bakteri

tersebut bersifat sebagai bakteri Gram negatif, tidak tahan asam, tidak membentuk

spora, sebagian besar bakteri E. coli bersifat motil dengan alat pergerakan flagella,

beberapa strain memiliki kapsul serta bersifat anaerob fakultatif dan memiliki

ukuran 0,4 – 0,7 µm x 1,4 µm (Wibowo dan Wahyuni, 2009).

Diare dapat didefinisikan sebagai malabsorpsi garam dan air yang

mengakibatkan berkurangnya cairan dalam tubuh. Hal tersebut dapat terjadi ketika

mukosa usus distimulasi untuk mengeluarkan garam dan air. Sejumlah racun

bakteri, seperti racun bakteri enterotoksin sangat berhubungan erat dengan

penyakit diare. Salah satu bakteri yang sangat identik dengan diare adalah

Eschericia coli. Eschericia coli merupakan bakteri yang selalu terdapat pada

sistem pencernaan manusia dan hewan berdarah panas dan telah umum dianggap

sebagai indikator pencemaran kotoran (Rohdiana, dkk., 2013).

12

2.7.2 Shigella sp.

Menurut Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology (1993), klasifikasi

taksonomi Shigella dysentriae :

Kingdom : Bacteria

Divisi : Proteobacteria

Kelas : Gamma Proteobacteria

Ordo : Enetrobacteriales

Famiy : Enterobacteriaceae

Genus : Eschericia

Spesies : Shigella sp.

Shigella sp. termasuk kelompok bakteri Gram negatif, berbentuk batang,

tidak berkapsul dan tidak membentuk spora, anaerob fakultatif, memfermentasi

glukosa dengan membentuk asam tetapi jarang memproduksi gas dan secara

alamiah hidupnya di usus (Novianti, 2015).

Disentri merupakan suatu infeksi yang menimbulkan luka dan menyebabkan

tukak terbatas di kolon, ditandai dengan gejala khas yang disebut sebagai

sindroma disentri, yakni sakit di perut yang sering disertai dengan tinja yang

mengandung darah dan berlendir. Penyakit ini disebabkan oleh parasit dan

bakteri, yaitu Entamoeba histolytica dan Shigella spp. Penyakit yang disebabkan

oleh Shigella sp. adalah disentri basiller, yaitu suatu infeksi peradangan akut

saluran pencernaan dengan kondisi kronis meliputi diare, buang air besar berair

yang disertai darah, lendir dan nanah (Prasaja, dkk., 2014).

2.8. Pewarnaan Gram

Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode empiris untuk

membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni Gram positif dan

13

Gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Metode ini

diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian Gram

(1853-1938) yang mengembangkan teknik ini pada tahun 1884 untuk

membedakan antara pneumokokus dan bakteri kebsiella pneumoniae. Bakteri

Gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu

pada metode pewarnaan Gram. Bakteri Gram positif akan mempertahankan zat

warna metil ungu gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara bakteri Gram

negatif tidak (Hadioetomo, 1993).

Pengujian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri

berdasarkan perbedaan struktur dinding sel. Bakteri Gram negatif adalah bakteri

yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada metode pewarnaan Gram.

Bakteri Gram positif akan mempertahankan warna ungu gelap setelah dicuci

dengan alkohol, sementara bakteri Gram negatif tidak. Bakteri Gram positif

adalah bakteri yang mempertahankan zat warna metil ungu sewaktu proses

pewarnaan Gram. Bakteri jenis ini akan berwarna biru atau ungu di bawah

mikroskop, sedangkan bakteri Gram negatif akan berwarna merah muda.

Perbedaan klasifikasi antara kedua jenis bakteri ini terutama didasarkan pada

perbedaan struktur dinding sel bakteri (Hadioetomo, 1993).

Perbedaan antara bakteri Gram positif dan Gram negatif dipelihatkan dari

perbedaan dinding sel. Dinding sel bakteri Gram positif seperti bakteri

Staphylococcus aureus dan Streptococcus sp. sebagian besar terdiri atas beberapa

lapisan peptidoglikan yang membentuk suatu struktur yang tebal dan kaku.

Kekakuan pada dinding sel bakteri yang disebabkan karena lapisan peptidoglikan

dan ketebalan peptidoglikan ini membuat bakteri Gram positif resisten terhadap

14

lisis osmotik. Bakteri Gram negatif seperti Eschericia coli dan Pseudomonas sp.

terdiri atas satu atau sangat sedikit lapisan peptidoglikan pada dinding selnya.

Selain itu dinding sel bakteri Gram negatif tidak mengandung asam teikoik tetapi

mengandung sejumlah polisakarida dan lebih rentan terhadap kerusakan mekanik

dan kimia (Jawetz et al., 2005).

Perbedaan penyusun dinding sel antara bakteri Gram positif dan Gram

negatif dapat dilihat pada Tabel 1 dibawah ini :

Tabel 1. Perbedaan Sifat Bakteri Gram positif dan Gram negatif

Sifat Perbedaan

Bakteri Gram positif Bakteri Gram negatif

Komposisi dinding sel Kandungan lipid rendah

(1-4%).

Kandungan lipid tinggi

(11-22%)

Ketahanan terhadap

penicilin

Lebih sensitif Lebih tahan

Penghambatan oleh

pewarna basa

Lebih dihambat Kurang dihambat

Kebutuhan nutrient Kebanyakkan spesies

Relatif kompleks

Relatif sederhana

Ketahanan terhadap

perlakuan fisik

Lebih tahan Kurang tahan

(Fardiaz, 1992).

2.9. Sapi (Bos taurus)

Sapi adalah hewan ternak terpenting sebagai sumber daging, susu, tenaga

kerja dan kebutuhan lainnya. Sapi menghasilkan sekitar 50% (45-55%) kebutuhan

daging di dunia, 95% kebutuhan susu dan 85% kebutuhan kulit. Sapi berasal dari

family Bovidae. Seperti halnya bison, banteng, kerbau (Bubalus), kerbau Afrika

(Syncherus), dan anoa.

15

Bangsa sapi memiliki klasifikasi taksonomi sebagai berikut :

Kingdom : Animalia

Phylum : Chordata

Subphylum : Vertebrata

Class : Mamalia

Ordo : Artiodactyla

Subordo : Ruminansia

Family : Bovidae

Genus : Bos

Spesies : Bos taurus

Bos indicus

Bos sondaicus (Syarif dan Harianto, 2011).

Bangsa sapi perah di bagi menjadi dua, yaitu : Bos taurus dan Bos indicus.

Bos taurus adalah bangsa sapi yang hidup di daerah subtropis atau daerah yang

mempunyai empat musim (musim salju, panas, semi dan gugur). Ciri utamanya

adalah tidak memiliki punuk di punggungnya. Beberapa contoh yang termasuk ke

dalam bangsa Bos taurus adalah sapi Shorthorn dan Guernsey (Inggris), Friesian

Holstein/Fries Holland atau FH (Belanda), Ayrshire (Scotlandia Selatan), Jersey

(Selat Channel antara Inggris dan Perancis), Brown Swiss (Switzerland), Red

Danish (Denmark), Droughtmaster (Autralia), sapi Israeli (Israel) dan terdapat

beberapa jenis sapi lainnya yang merupakan turunan atau hasil persilangan dari

bangsa-bangsa sapi tersebut. Sedangkan, Bos indicus adalah bangsa sapi yang

hidup di daerah tropis atau beriklim panas. Beberapa contoh sapi yang termasuk

ke dalam bangsa Bos indicus adalah sapi Zebu (India), Red Sindhi (India), Grati

16

(persilangan antara FH dan sapi Jawa atau Madura), serta Sahiwal Cross

(persilangan Sahiwal dengan FH) (Rianto dan Purbowati, 2010).

Ternak sapi, khususnya sapi potong merupakan salah satu sumber daya

penghasil daging yang memiliki nilai ekonomi tinggi dan penting artinya di dalam

kehidupan masyarakat. Daging sangat besar manfaatnya bagi pemenuhan gizi

berupa protein hewani. Sapi sebagai salah satu hewan pemakan rumput sangat

berperan sebagai pengumpul bahan bergizi rendah yang diubah menjadi bahan

bergizi tinggi, kemudian diteruskan kepada manusia dalam bentuk daging

(Sudarmono dan Sugeng, 2008).

2.9.1 Organ Pencernaan Sapi (Bos taurus)

Sistem pencernaan merupakan serangkaian proses perubahan fisik dan kimia

yang dialami oleh bahan makanan selama berada dalam alat pencernaan. Proses

pencernaan makanan pada ternak ruminansia relatif lebih kompleks dibandingkan

dengan proses perncernaan pada jenis ternak lainnya (Muslim, dkk., 2014).

Sapi adalah ternak ruminansia yang mempunyai 4 bagian perut, yaitu rumen,

retikulum, omasum dan abomasum. Pencernaan pada ruminansia terjadi secara

mekanis (di dalam mulut), fermentatif (oleh mikroba di dalam rumen), dan

hidrolisis (oleh enzim pencernaan di abomasum dan usus). Pada saat proses

penyerapan nutrisi, dibutuhkan organ pencernaan. Berikut adalah organ-organ

dalam proses pencernaan sapi :

17

Gambar 2. Organ Pencernaan Sapi (Bos taurus)

(Sumber : Rianto dan Purbowati, 2010).

a. Mulut

Di dalam mulut, pakan mengalami penghancuran pertama secara mekanis

oleh gigi. Di dalam mulut, pakan juga mengalami pencampuran dengan saliva

agar mudah ditelan. Saliva terdiri atas 99% air dan 1% sisanya terdiri atas mucin,

garam-garam anorganik dan lisozim kompleks. Saliva pada sapi juga mengandung

urea, fosfor (P) dan natrium (Na) yang dapat dimanfaatkan oleh mikrobia rumen.

Saliva yang masuk ke dalam rumen memiliki sifat buffer (penyangga) yang

berguna dalam menjaga pH rumen agar tidak naik atau turun terlalu tajam.

b. Rumen

Setelah mengalami pengunyahan di dalam mulut, pakan ditelan melalui

pharinx dan melalui oesophagus menuju rumen. Rumen merupakan kantong yang

besar sebagai tempat persediaan dan pencampuran bahan pakan untuk fermentasi

oleh mikroorganisme.

18

Gambar 3. Rumen

(Sumber : Rianto dan Purbowati, 2010).

Fungsi utama rumen adalah sebagai tempat untuk mencerna serat kasar dan

zat-zat pakan dengan bantuan mikrobia. Mikroba tersebut hidup di dalam suasana

anaerob dan sebagian dapat hidup dalam suasana fakultatif anaerob. Secara garis

besar, mikroorganisme rumen dapat dibagi menjadi lima kelompok besar, yaitu

bakteri, protozoa, jamur (fungi), virus dan amoeba. Aktivitas mikroorganisme

rumen dapat berlangsung dengan baik pada pH 6.7-7,0.

c. Retikulum

Retikulum terletak di belakang rumen. Pada dinding retikulum terdapat

papillae yang membentuk alur/garis-garis yang saling berhubungan sehingga

berbentuk seperti sarang lebah. Secara fisik, tidak terdapat batas yang jelas antara

retikulum dengan rumen sehingga kedua bagian tersebut sering disebut sebagai

satu bagian, yaitu retikulo-rumen atau rumino-retikulum. Retikulum berfungsi

mengatur aliran digesta dari rumen ke omasum.

19

Gambar 4. Retikulum

(Sumber : Rianto dan Purbowati, 2010).

d. Omasum

Permukaan dinding omasum berlipat-lipat dan kasar. Terdapat 5 lamina

(daun) yang mempunyai duri (spike). Semakin mendekati abomasum, ukuran

spike semakin kecil. Fungsi lamina adalah menyaring partikel digesta yang akan

masuk ke abomasum. Partikel digesta yang masih terlalu besar akan dikembalikan

ke retikulum. Selanjutnya, partikel digesta tersebut akan mengalami regurgitasi

(dikeluarkan kembali ke mulut) dan remastikasi (dikunyah lagi).

Gambar 5. Omasum

(Sumber : Rianto dan Purbowati, 2010).

20

e. Abomasum

Abomasum disebut perut sejati pada ternak ruminansia (termasuk sapi).

Pada dinding abomasum terdapat kelenjar-kelenjar pencernaan yang

menghasilkan cairan lambung yang mengandung pepsinogen, garam anorganik,

mukosa dan asam hidrokhlorat dan faktor interinsik yang penting untuk absorpsi

vitamin B12 secara efisien. Pepsinogen merupakan bentuk inaktif dari pepsin yang

menghidrolisis protein. Kondisi asam di dalam lambung mengaktifkan pepsinogen

menjadi pepsin.

f. Intestinum tenue (Usus halus)

Intestine terdiri atas 3 bagian, yaitu duodenum, jejenum dan ileum. Panjang

intestine pada sapi 22-30 kali panjang tubuhnya. Intestine berfungsi sebagai

tempat penyerapan nutrisi. Digesta yang masuk ke dalam duodenum mengalami

pencampuran dengan hasil sekresi dari duodenum itu sendiri, hati dan pankreas.

Kelenjar duodenum menghasilkan cairan alkalin yang berguna sebagai pelumas

dan melindungi duodenum dari asam hidrokhlorat yang masuk dari abomasum.

Proses penyerapan terjadi terutama di jejenum dan ileum.

Gambar 6. Usus halus (Intestine)

(Sumber : Rianto dan Purbowati, 2010).

21

g. Intestinum crasum (Usus Besar)

Ada 3 organ pokok yang terdapat di dalam kelompok usus besar, yaitu

colon, caecum dan rectum. Pada saat digesta masuk ke dalam colon, sebagian

besar digesta yang mengalami hidrolisis sudah terserap sehingga materi yang

masuk ke dalam colon adalah materi yang tidak tercerna. Hanya sedikit sekali

digesta yang terserap lewat dinding usus besar. Materi yang tidak terserap

kemudian dikeluarkan lewat anus sebagai feses.

Gambar 7. Usus besar (Colon)

(Sumber : Rianto dan Purbowati, 2010).

22

BAB III

METODE PENELITIAN

3.1. Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian dilaksanakan pada bulan Januari 2018 sampai dengan bulan Maret

2018 di Laboratorium Kesehatan Medan.

3.2. Alat dan Bahan Penelitian

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah labu erlenmeyer, tangkai

pengaduk, aluminium foil, inkubator, mikroskop, pipet tetes, ose jarum, paper

disk, jangka sorong, neraca analitik, spatula, penjepit tabung, autoklaf, lumpang

mortal, tabung reaksi, objeck glass, bunsen, ose cincin, cawan petri, alat vortex,

gelas ukur, rak tabung dan kaki tiga.

Sedangkan bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah usus sapi,

NaCl fisiologis, akuades, media MRSA (de Mangan Rogose Sharpe Agar), kristal

violet, larutan iodin, safranin, alkohol, media Nutrient Agar (uji ketahanan

terhadap keasaman (pH) ), garam empedu, media SIM (uji motilitas), media TSIA

(Triple Sugar Iron Agar), H2O2 (uji katalase) dan media NA (Nutrient Agar).

3.3. Lokasi Pengambilan Sampel

Lokasi pengambilan sampel di Rumah Potong Hewan yang berlokasi di Jl.

Rumah Potong Hewan No.123 Mabar Kelurahan Mabar Hilir Kecamatan Medan

Deli, Sumatera Utara.

23

3.4. Prosedur Penelitian

3.4.1 Sterilisasi Alat dan Media

Alat-alat gelas seperti tabung reaksi, cawan petri, objeck glass dan pipet

tetes disterilkan dengan sterilisasi panas kering (udara panas) dengan

menggunakan oven. Sterilisasi dilakukan pada temperatur 1700-180

0 C selama 1-2

jam. Jarum ose disterikan dengan sterilisasi panas kering diatas nyala api bunsen

sampai merah membara.

Media dan alat non-gelas yang akan digunakan terlebih dahulu disterikan

dengan sterilisasi panas basah yaitu dengan menggunakan autoklaf. Sterilisasi

dilakukan selama 15 menit pada temperatur 1210 C dengan tekanan 2 atm.

3.4.2 Isolasi Bakteri Asam Laktat

Di ambil sebanyak 100 gram usus sapi bagian jejenum dan disterilkan

dengan cara dibilas dengan akuades. Kemudian sampel digerus dengan

menggunakan lumpang mortal. Hasil gerusan diambil sebanyak 1 gr dan

dimasukkan ke dalam tabung reaksi steril yang berisi 10 ml NaCl fisiologi steril.

Dibuat dari tiap seri pengenceran diinokulasikan ke dalam media MRSA steril di

dalam cawan petri. Selanjutnya diinkubasikan pada suhu 25-300C selama 48 jam.

3.4.3 Pengamatan Makroskopis

Pengamatan makroskopis yang dilakukan meliputi bentuk koloni (shape),

bentuk tepi (edge), warna (colour), elevation dan permukaan koloni.

24

3.4.4 Pengamatan Mikroskopis

Pengamatan morfologi koloni dilakukan dengan menggunakan teknik

pewarnaan Gram. Pertama-tama biakan bakteri ditotolkan pada objeck glass

sebanyak 1 ose dan ditambahkan 1-2 tetes akuades selanjutnya dilakukan fiksasi

diatas nyala api bunsen. Selanjutnya setelah kering, sebanyak 2-3 tetes kristal

violet diteteskan pada koloni bakteri, diamkan selama 1 menit. Kemudian preparat

dicuci dengan menggunakan akuades lalu dikeringkan. Kemudian teteskan 2-3

tetes larutan iodine diatas preparat dan dibiarkan selama 30 detik dan bilas

kembali dengan alkohol kemudian dikeringkan. Selanjutnya, preparat ditetesi

dengan larutan safranin sebanyak 2-3 tetes dan tunggu selama 1 menit.

Selanjutnya dibilas dengan akuades dan dikering anginkan. Setelah itu diamati

dibawah mikroskop.

3.4.5 Uji Biokimia

a. Uji Motilitas

Di ambil 1 ose isolat bakteri dengan menggunakan ose jarum. Lalu

diinokulasikan dengan cara ditusuk pada media SIM (Sulfida Indol Motility)

tegak. Kemudian diinkubasi pada suhu 25-300C selama 48 jam.

b. Uji Katalase

Di ambil 1 ose isolat bakteri dengan menggunakan ose cincin. Kemudian

dicelupkan ke dalam tabung reaksi yang berisi reagen H2O2. Hasil positif jika

terbentuk gelembung gas dan hasil negatif jika tidak terbentuk gelembung gas.

c. Uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar)

Di ambil 1 ose isolat bakteri dengan menggunakan ose jarum. Kemudian

diinokulasi dengan cara ditusukkan pada media TSIA (Triple Sugar Iron Agar).

25

Kemudian ambil lagi 1 ose isolat bakteri lalu digoreskan pada permukaan media.

Kemudian diinkubasi selama 48 jam pada suhu 25-300C. Perubahan yang terjadi

setelah diinkubasi yaitu warna media menjadi kuning menandakan asam, warna

media menjadi merah menandakan basa, warna menjadi hitam menandakan

terbentuknya H2S dan bila media terangkat menandakan bahwa mikroba tersebut

mampu untuk memproduksi gas.

d. Uji Sitrat

Di ambil 1 ose isolat bakteri dengan menggunakan ose cincin. Kemudian

diinokulasikan pada medium simmon’s citrate (SCA) pada suhu 370C selama 24

jam. Pengamatan uji sitrat dilakukan dengan membandingkan medium simmon’s

citrate yang diinokulasikan isolat bakteri terhadap kontrol (tanpa inokulasi

bakteri). Perubahan warna dari hijau menjadi biru menunjukkan bahwa bakteri

mampu menggunakan sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon.

e. Uji Hidrolisis Gelatin

Di ambil 1 ose isolat BAL dengan ose jarum, kemudian diinokulasikan pada

media gelatin 12% dan nutrient broth dengan takaran 13 gram/L. Kemudian

tabung uji diinkubasi selama 72 jam. Setelah 72 jam tabung dimasukkan ke dalam

lemari es selama 30 menit. Di amati apakah terjadi pencairan gelatin. Uji positif

jika media mencair, maka berarti bakteri mampu menghasilkan eksoenzim

gelatinase.

3.4.6 Uji Antagonis Isolat BAL terhadap Bakteri Patogen

Uji antagonis dilakukan dengan metode difusi cakram. Isolat BAL

diremajakan pada media MRSA dan isolat bakteri patogen diremajakan pada

26

media NA steril. Masing-masing isolat dan bakteri patogen dibuat menjadi

suspensi dengan kerapatan sel 108

CFU sesuai dengan standar Mc.Farland.

Disiapkan media NA steril di dalam cawan petri. Bakteri patogen di ambil

dengan mencelupkan cotton bud steril ke dalam suspensi bakteri dengan kerapatan

sel 108 CFU, lalu dioles pada permukaan media uji sampai merata. Selanjutnya

sebanyak 10 μl (mikroliter) isolat BAL diteteskan pada kertas cakram kosong

(oxoid) dan diletakkan pada bagian tengah media uji yang sudah diolesi bakteri

patogen. Cawan uji diinkubasi selama 24 jam pada suhu 25-300C. Diamati dan

dicatat zona hambat berupa zona bening yang muncul. Diameter diukur dengan

menggunakan jangka sorong.

3.4.7 Uji Ketahanan Isolat Terhadap Variasi pH

Uji ketahanan isolat terhadap asam dilakukan dengan menggunakan media

Nutrient Broth yang ditambahkan dengan HCl dengan variasi pH (pH 2.5, 3.0, dan

3.5). Selanjutnya 1 ose isolat BAL diinokulasikan pada media tersebut. Lalu

diinkubasi selama 24 jam. Setelah diinkubasi selama 24 jam, selanjutnya ambil

isolat BAL sebanyak 0,1 ml yang kemudian diinokulasikan pada media MRSA

dan selanjutnya diinkubasi selama 24 jam. Dihitung jumlah total bakteri yang

muncul pada media MRSA.

3.4.8 Uji Ketahanan Isolat Terhadap Kadar Garam

Uji ketahanan isolat terhadap kadar garam dilakukan dengan

menggunakan media Nutrient Broth yang ditambahkan dengan garam dengan

variasi pH (0.5, 1.0, 1.5, 2.0, dan 2.5). selanjutnya 1 ose isolat BAL

diinokulasikan pada media tersebut. Lalu diinkubasi selama 24 jam. Setelah

diinkubasi selama 24 jam, selanjutnya ambil isolat BAL sebanyak 0,1 ml yang

27

kemudian diinokulasikan pada media MRSA dan selanjutnya diinkubasi selama

24 jam. Dihitung jumlah total bakteri yang muncul pada media MRSA

3.5. Analisis Data

Data-data yang diperoleh pada semua tahapan penelitian dianalisis secara

deskriptif, yaitu dengan memberikan penjelasan atau penggambaran dari berbagai

isolat BAL yang mempunyai daya hambat terhadap bakteri Eschericia coli dan

Shigella sp.

28

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Isolasi Bakteri Asam Laktat.

Hasil isolasi bakteri asam laktat dari usus sapi (Bos taurus) diperoleh

sebanyak dua isolat bakteri yang berbeda, yaitu sp1. dan sp2. Perbedaan ciri dari

kedua isolat dapat dilihat pada Tabel 2. Isolat bakteri yang telah terpilih tersebut

ditanam pada media MRSA yang bertujuan untuk menghasilkan biakan murni

yang diinginkan tanpa ada kontaminan dari mikroba lain (Ed-har, dkk., 2017).

Tabel 2. Karakteristik Morfologi Isolat BAL

Kode

Isolat

Bentuk Koloni

Bentuk Warna Elevasi Tepi Permukaan

sp1. Bulat Kuning Cembung Rata Halus

sp2. Bulat Putih susu Cembung Rata Halus

Berdasarkan data pada Tabel 2 diketahui bahwa kedua isolat BAL yang

diperoleh memiliki karakteristik yang berbeda. Perbedaan tersebut terdapat pada

warna koloni bakteri, yaitu pada sp1. memiliki warna koloni kuning sedangkan

pada sp2. memiliki warna koloni putih susu. Karakteristik lain yang diperoleh dari

kedua isolat BAL yaitu memiliki bentuk koloni bulat, elevasi cembung, tepi rata

dan permukaan koloni halus.

Hal ini sesuai dengan pendapat Ibrahim (2015) yang menyebutkan bahwa

isolat bakteri asam laktat dari buah mangga mempunyai karakteristik secara

makroskopis yaitu warna koloni putih susu, bentuk koloni bulat, tepi koloni entire

(rata), permukaan halus dan elevasi cembung.

29

Isolat BAL setelah pemurnian dapat dilihat pada Gambar 8. berikut ini :

Gambar 8. Biakan murni isolat BAL

(a). sp1. dan (b). sp2. (Sumber : Koleksi pribadi).

4.2. Karakteristik Mikroskopis Isolat Bakteri Asam Laktat

Pengamatan karakteristik mikroskopis isolat BAL dilakukan dengan melihat

bentuk morfologi sel dan warna sel. Pengamatan karakteristik isolat BAL

dilakukan dengan pewarnaan Gram dan uji biokimia. Pewarnaan Gram dilakukan

untuk membedakan kelompok bakteri Gram positif dan Gram negatif. Hasil

pewarnaan Gram dapat dilihat pada Tabel 3.

Tabel 3. Hasil Pewarnaan Gram Isolat BAL

Kode Isolat Bentuk sel Warna sel bakteri Pewarnaan Gram

sp1. Batang Ungu Gram positif

sp2. Batang Ungu Gram positif

Berdasarkan data pada Tabel 3 diketahui bahwa kedua isolat bakteri

merupakan bakteri Gram positif dengan bentuk sel bakteri batang. Hal ini dapat

diketahui dari warna sel bakteri yang bewarna ungu setelah dilakukan pewarnaan

Gram.

a b

30

(a). sp1. bentuk sel bakteri basil (b). sp2. bentuk sel bakteri basil

Gambar 9. Bakteri Asam Laktat dengan pewarnaan Gram

dengan perbesaran lensa objektif 100x

(Sumber : Koleksi pribadi)

Ibrahim, dkk. (2015) juga menyatakan bahwa pengamatan mikroskopis

terhadap isolat bakteri asam laktat dari buah mangga bersifat Gram positif

ditandai dengan terbentuknya warna ungu pada sel bakteri. Pengamatan secara

mikroskopis terhadap bakteri Gram positif ditandai dengan terbentuknya warna

ungu pada sel bakteri. Hal tersebut disebabkan karena bakteri ini mempunyai

kandungan lipid yang lebih rendah, sehingga dinding sel bakteri akan lebih mudah

terdehidrasi akibat perlakuan dengan alkohol. Dinding sel yang terdehidrasi

menyebabkan ukuran pori-pori sel menjadi kecil dan daya permeabilitasnya

berkurang sehingga zat warna ungu kristal yang merupakan zat warna utama tidak

dapat keluar dari sel dan sel akan tetap berwarna ungu. Sedangkan bakteri Gram

negatif terlihat berwarna merah karena bakteri ini kehilangan pewarna kristal

violet pada waktu pembilasan dengan alkohol namun mampu menyerap pewarna

tandingan yaitu safranin. Bakteri Gram negatif mengandung lipid. Lemak atau

substansi seperti lemak dalam persentase lebih tinggi daripada yang dikandung

bakteri Gram positif. Dinding sel bakteri Gram negatif juga lebih tipis daripada sel

bakteri Gram positif (Cappucino & Sherman, 2002).

31

Setelah dilakukan pengamatan karakteristik secara makroskopis dan

mikroskopis selanjutnya dilakukan juga uji biokimia, yaitu uji motilitas, uji

fermentasi sitrat, uji fermentasi karbohidrat, uji hidrolisis gelatin dan uji katalase.

Adapun hasil uji biokimia yang telah dilakukan dalam penelitian ini dapat dilihat

pada tabel 4.

Tabel 4. Hasil Uji Biokimia Isolat BAL

Kode

Isolat

Uji Fermentasi Karbohidrat

Slant Butt Gas H2S Katalase Motilitas Ferm.

sitrat

Hidrolisi

s Gelatin

sp1. Kuning Kuning - - + - - -

sp2. Kuning Kuning - - - - - -

Berdasarkan data pada tabel 4 diatas, diketahui bahwa isolat sp1 dan sp2

menunjukkan hasil negatif pada pengujian motilitas, fermentasi sitrat dan

hidrolisis gelatin. Pada uji katalase, isolat sp1. menunjukkan hasil (+) dengan

adanya pembentukkan gelembung setelah isolat ditetesi H2O2. Sedangkan, isolat

sp2. menunjukkan hasil negatif pada uji katalase.

Menurut Mutmainnah (2014) Uji katalase merupakan uji untuk

mengidentifikasi mikroba yang mampu menghasilkan enzim katalase yang

digunakan untuk memecah hidrogen peroksida yang terbentuk dari proses

respirasi aerob dan bersifat toksik terhadap bakteri, menjadi dihidrogen oksida

(H2O) dan oksigen (O2) yang tidak bersifat toksik lagi. Beberapa strain

Lactobacillus menghasilkan antibiotik yang dapat membunuh bakteri melalui

penjagaannya dari serangan bakteri yang berbahaya. Laily (2013) menyatakan

bahwa bakteri asam laktat merupakan bakteri katalase negatif karena tidak

menghasilkan enzim katalase yang dapat memecah hidrogen peroksida dan bakteri

32

asam laktat umumnya bersifat mikroaerofilik hingga anaerob fakultatif, yang

artinya apabila terdapat O2 selama pertumbuhan akan bersifat toksik dan dapat

menghambat pertumbuhan bakteri asam laktat.

Laily (2013) juga menyatakan bahwa bakteri asam laktat memiliki

karakteristik Gram positif, non spora, berbentuk kokus atau basil dan tidak

bergerak (non motil) serta memberikan reaksi negatif pada uji katalase (tidak

bereaksi dengan hidrogen peroksida).

Uji motilitas adalah uji yang digunakan untuk melihat kemampuan dari

suatu bakteri untuk bergerak (Amaliah, dkk., 2018). Berdasarkan hasil uji

motilitas pada tabel 4 menunjukkan bahwa kedua isolat BAL sp1. dan sp2.

menunjukkan hasil uji motilitas negatif, yaitu tidak ditemukannya jejak

pergerakan bakteri. Hasil uji motilitas ini sesuai dengan karakteristik bakteri asam

laktat yang bersifat non motil atau yang berarti bakteri tidak memiliki flagela

(Amaliah, dkk., 2018).

Pengujian kemampuan fermentasi sitrat menunjukkan hasil negatif pada

kedua isolat BAL. Hal ini mengindikasikan bahwa kedua isolat BAL yang

diperoleh yaitu sp1. dan sp2. tidak dapat menggunakan sitrat sebagai sumber

karbon. Uji sitrat digunakan untuk melihat kemampuan mikroorganisme dalam

menggunakan sitrat sebagai sumber energi bagi metabolisme sel. Media yang

digunakan untuk uji ini adalah Simmon’s Citrate Agar yang merupakan media

sintetik dengan Na sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon, NH4+ sebagai

sumber N dan brom thymol blue sebagai indikator pH. Bila mikroorganisme

mampu menggunakan sitrat, maka asam akan dihilangkan dari media sehingga

33

menyebabkan peningkatan pH dan mengubah warna media dari hijau menjadi biru

(Candra, 2006).

Candra (2006) menyebutkan bahwa lima jenis isolat bakteri asam laktat

yang diisolasi dari produk bekasam ikan bandeng (Chanos chanos) memiliki

kemampuan yang berbeda dalam memfermentasikan sitrat. Terdapat 2 isolat yaitu

isolat B1 dan B5 menunjukkan hasil positif, dalam memfermentasikan sitrat dan

terdapat ketiga isolat yaitu B2, B3 dan B4 menunjukkan hasil negatif, hal ini

menunjukkan bahwa bakteri tersebut tidak mampunyai kemampuan dalam

menggunakan sitrat sebagai sumber karbon.

Uji hidrolisis gelatin bertujuan untuk melihat apakah isolat bakteri asam

laktat yang diperoleh memiliki enzim gelatinase yang dapat menguraikan gelatin.

Hasil uji hidrolisis gelatin pada kedua isolat sp1 dan sp2 menunjukkan hasil

negatif. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Situmeang (2017),

yang menyatakan bahwa keempat isolat bakteri asam laktat yang diperoleh dari

yoghurt tidak menghasilkan enzim gelatinase sehingga tidak mampu

menghidrolisis gelatin.

Uji fermentasi karbohidrat digunakan untuk mengetahui kemampuan bakteri

dalam memfermentasi glukosa dengan menghasilkan asam dan gas. Pada media

TSIA dapat diketahui terjadinya fermentasi glukosa, laktosa atau sukrosa dan

produksi gas dari glukosa yang ditandai dengan terbentuknya rongga-rongga di

bagian bawah agar. Warna merah pada agar menunjukkan reaksi basa, sedangkan

warna kuning menunjukkan reaksi asam. Warna merah pada permukaan dan

kuning di bagian bawah tabung menunjukkan terjadinya fermentasi glukosa tetapi

tidak laktosa dan sukrosa. Warna kuning pada bagian permukaan dan bawah

34

tabung menunjukkan terjadinya fermentasi glukosa, laktosa dan sukrosa.

Pembentukan gas pada media TSIA dapat dilihat dari adanya rongga yang

terbentuk pada bagian bawah agar dan media terangkat, sedangkan pembentukan

H2S dapat dilihat dari terbentuknya endapan hitam pada dasar media (Mutmainah,

2014).

Pada pengujian fermentasi karbohidrat kedua isolat bakteri asam laktat

diketahui mampu memfermentasikan ketiga jenis gula yaitu glukosa, laktosa dan

sukrosa. Hal ini ditunjukkan dengan perubahan warna media dari merah menjadi

kuning. Warna media berubah karena terjadi hidrolisis Karbohidrat dan perubahan

pH pada media.

Gambar 10. Uji TSIA

(a) sp1. (b) sp2. (Sumber : Koleksi pribadi)

Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Andiani (2012),

menyatakan bahwa isolat bakteri asam laktat asal dari susu kerbau dapat

memfermentasikan glukosa dengan menghasilkan asam tanpa pembentukan gas

dan kedua isolat bakteri dapat memfermentasikan laktosa dan sukrosa.

4.3. Ketahanan Isolat BAL terhadap pH dan Kadar Garam.

a. b.

35

Konfirmasi isolat BAL dilakukan dengan menguji viabilitas hidup BAL

pada variasi pH dan kadar garam. Hasil pengujian dapat dilihat pada tabel 5 dan

tabel 6.

Tabel 5. Pertumbuhan total bakteri pada variasi pH

Jumlah Total Bakteri (CFU)

Isolat bakteri

Variasi pH sp1. sp2.

2,5 8 5

3,0 5 3

3,5 0 0

Uji ketahanan terhadap variasi pH menggunakan tiga variasi pH yang

berbeda, yaitu pH 2,5 , 3,0 , dan 3,5. Pada pH 3,5 tidak ada isolat yang tumbuh,

hal ini diduga dapat terjadi karena perbedaan komposisi membran sitoplasma sel

bakteri. Cotter dan Hill (2003) menyatakan bahwa perbedaan ketahanan terhadap

pH pada beberapa spesies BAL berhubungan dengan permeabilitas dinding sel

terhadap proton (H+). Permeabilitas sel terhadap H

+ salah satunya ditentukan oleh

aliran proton keluar secara aktif (active outflow) yang diaktivasi oleh ATPase

membran untuk translokasi H+. Menurut Puspawati et al., (2010) juga menyatakan

bahwa bakteri asam laktat mengalami kematian disebabkan oleh beberapa faktor

seperti ketersediaan nutrisi pada media berkurang, energi cadangan dalam sel

habis, adanya penumpukan asam dan metabolit lainnya.

Menurut Pratiwi (2008), bakteri asam laktat mempunyai toleransi pH

dengan rentang yang luas. Bakteri asam laktat juga mampu mempertahankan

sitoplasma lebih alkali dari pada pH ekstraseluler. pH menurunkan indikasi

konsentrasi ion hidrogen. Peningkatan dan penurunan konsentrasi ion hidrogen

36

dapat menyebabkan ionisasi gugus-gugus dalam protein, amino dan karboksilat.

Hal ini dapat menyebabkan denaturasi yang dapat mengganggu pertumbuhan sel.

Menurut Surono (2004), untuk pertumbuhannya bakteri juga memerlukan

pH tertentu. Namun pada umumnya bakteri memiliki jarak pH yang sempit yaitu

sekitar 6,5 – 7,5 atau pada pH netral. Beberapa bakteri ada yang dapat bertahan

hidup dibawah pH 4, tetapi ada pula bakteri yang dapat hidup dan tubuh pada pH

alkalis. Oleh karena bakteri termasuk makhluk hidup dimana dalam tubuhnya juga

mengalami proses biokimiawi, misalnya proses metabolisme, memerlukan

peranan enzim, maka masing-masing bakteri juga memiliki pH optimal untuk

pertumbuhannya.

Harimurti, et al (2007) standar yang digunakan untuk isolat bakteri asam

laktat yang dapat digunakan sebagai agensia probiotik adalah isolat tersebut harus

mampu bertahan pada pH 3. Selama itu kondisi pH yang terendah pada saluran

pencernaan diperkirakan pada pH mencapai 2,5. Berdasarkan tabel 5 hasil isolasi

bakteri asam laktat dari usus sapi (Bos taurus) menunjukkan kedua isolat mampu

bertahan dan tumbuh pada pH 2,5 dan 3,0.

Tabel 6. Pertumbuhan total bakteri pada variasi kadar garam

Jumlah Total Bakteri (CFU)

Variasi kadar garam

Isolat Bakteri

sp1. sp2.

0,5% 10 7

1,0% 20 23

1,5% 17 20

2,0% 5 7

2,5% 0 5

37

Uji ketahanan isolat sp1 dan sp2 terhadap variasi kadar garam pada tabel 6

menunjukkan hasil bahwa isolat BAL mampu hidup pada media dengan

konsentrasi garam 0,5%, 1,0%, 1,5%, 2,0% sedangkan sp1. diketahui tidak lagi

mampu hidup pada pH 2,5%. Isolat sp2 mampu bertahan pada media dengan kadar

garam 2,5% yaitu sebanyak 5 CFU. Perbedaan kemampuan viabilitas sp1. dan sp2.

terhadap kadar garam disebabkan adanya perubahan struktur membran sel dan

sifat permeabilitas sel yang terjadi akibat enzim lipolitik yang disekresikan

pankreas bereaksi dengan asam lemak pada membran sitoplasma. Bakteri yang

tahan terhadap garam empedu tidak mengalami permeabilitas seluler dan tidak

mengalami kebocoran materi intraseluler akibat dari terkikisnya lipid oleh garam

empedu sehingga bakteri mampu bertahan dan mengalami peningkatan populasi

(Begley et al., 2006).

Widodo (2017) menyatakan bahwa terdapat hubungan antara komposisi

asam lemak dinding sel bakteri dan kemampuannya untuk dapat bertahan terhadap

garam empedu. Cairan empedu merupakan campuran dari asam empedu,

kolestrol, asam lemak, fosfolipid dan pigmen empedu. Kombinasi tersebut bersifat

bakterisidal bagi mikrobia komensal dalam tubuh manusia, kecuali bagi beberapa

genus penghuni usus yang tahan terhadap empedu.

Sunaryanto (2013) menyatakan bahwa isolat Lactobacillus sp. asal dadih

susu kerbau, mampu bertahan pada konsentrasi garam empedu 0,5% dan mampu

bertahan pada pH 2.

Menurut Sivram PL dan Vishwanath (2012) menyatakan bahwa salah satu

syarat mikroba yang dapat digunakan sebagai agensia probiotik adalah mampu

bertahan pada konsentrasi garam empedu paling tidak 0,3% dan pH 2. Hal ini

38

disebabkan bahwa kondisi dalam saluran pencernaan mengandung garam empedu

rata-rata 0,3% dan dengan tingkat keasaman pH 2.

Dengan demikian kedua isolat bakteri asam laktat yaitu sp1. dan sp2. yang

diisolasi dari usus sapi (Bos taurus) ini berpotensi untuk dapat dimanfaatkan

sebagai agensia probiotik.

4.4. Kemampuan Isolat BAL dalam menghambat bakteri patogen

Kemampuan isolat BAL dalam menghambat bakteri patogen ditunjukkan

dengan terbentuknya zona bening di sekitar koloni bakteri. Nilai rata-rata diameter

zona hambat dari isolasi bakteri sp1. dan sp2. dalam menghambat pertumbuhan

Eschericia coli dan Shigella sp. dapat dilihat pada tabel 7.

Tabel 7. Diameter rata-rata zona hambat hasil uji antagonis BAL terhadap bakteri

Eschericia coli dan Shigella sp.

Kode Isolat Rata-rata diameter zona hambat (mm)

Escherici coli Shigella sp.

sp1. 7,5 mm 6,8 mm

sp2. 8,9 mm 8,0 mm

Sutrisna (2012), menyatakan bahwa kategori penghambatan antibakteri

berdasarkan diameter zona hambat yaitu diameter 8,5-10 mm respon hambatan

pertumbuhan sedang, diameter 10,2-20 mm respon hambatan pertumbuhan kuat

dan diameter >20 mm respon hambatan pertumbuhan sangat kuat. Berdasarkan

tabel 6 isolat yang diuji aktifitas antibakteri dari bakteri asam laktat mampu

menghambat pertumbuhan bakteri Eschericia coli dan Shigella sp. Hal ini

menunjukkan bahwa bakteri asam laktat dari usus sapi mampu menghasilkan daya

hambat atau sebagai antibakteri.

39

Menurut Susanti, dkk., (2007) salah satu kriteria yang diinginkan dari bakteri

asam laktat yang digunakan sebagai kultur probiotik adalah kemampuannya untuk

menghambat bakteri patogen sehingga mampu berkompetisi dengan bakteri

patogen untuk mempertahankan keseimbangan mikroflora normal usus. BAL

umumnya menghasilkan sejumlah besar asam laktat, asam asetat dan etanol serta

sejumlah kecil asam organik lainnya dari fermentasi substrat energi karbohidrat.

Senyawa organik inilah yang diketahui merupakan senyawa antimikroba yang

penting.

Tahap pengujian aktivitas antimikroba BAL bertujuan untuk menyeleksi

isolat berdasarkan aktivitas senyawa antimikrobanya dan pengaruhnya terhadap

bakteri uji yang patogen. Selain senyawa organik utama seperti asam laktat dan

asam asetat, BAL juga diketahui menghasilkan senyawa lainnya yang juga

bersifat antagonistik dan memiliki spektrum penghambatan yang cukup luas.

Senyawa tersebut dihasilkan dalam jumlah lebih sedikit, diantaranya asam format,

asam lemak bebas, amonia, etanol, hidrogen peroksida, diasetil, antibiotik, enzim

yang bersifat bakteriolitik dan bakteriosin (Setianingsih, 2010).

Berdasarkan tabel 7 memperlihatkan aktivitas antimikroba isolat sp1. dan sp2.

terhadap Eschericia coli dan Shigella sp. dengan nilai yang bervariasi. Nilai zona

hambat terbesar terhadap E.coli ditunjukkan oleh sp2. yaitu 8,9 mm. Sedangkan

nilai zona hambat terbesar terhadap Shigella sp. ditunjukkan oleh sp2. yaitu

sebesar 8 mm.

Menurut Misgiyarta dan Widowati (2002), bakteri asam laktat dinyatakan

memiliki kemampuan unggul apabila menghasilkan zona hambat terbesar,

semakin besar zona hambat yang terbentuk maka semakin unggul pula bakteri

40

asam laktat itu dalam menghambat aktifitas hidup bakteri uji. Kemampuan

penghambatan dimungkinkan karena adanya substansi antimikroba (asam laktat

maupun bakteriosin) yang dapat menghambat pertumbuhan Eschericia coli dan

Shigella sp. Selanjutnya perbedaan aktifitas hambat dimungkinkan karena adanya

perbedaan metabolisme glukosa yang dihasilkan bakteri asam laktat, ada yang

bersifat homofermentatif dan heterofermentatif, serta sifat bakteriosin yang hanya

mampu menghambat bakteri tertentu (Rinto, et al., 2010).

Gambar 10. Zona hambat isolat BAL terhadap E.coli dan Shigella sp.

(a). E.coli pada isolat sp1. (b). Shigella sp. pada isolat sp1.

(c). E.coli pada isolat sp2. (d). Shigella sp. pada isolat sp2.

(Sumber : Koleksi pribadi).

Hasil penelitian Setianingsih (2010), menunjukkan bahwa isolat BAL yang

diisolasi dari ASI keseluruhan isolat BAL yang diuji oleh Eschericia coli dan

Salmonella sp. menunjukkan sifat antagonistik yang relatif tinggi dengan rata-rata

a b

.

c d

41

penghambatan sebesar 10,7 mm terhadap Eschericia coli dan penghambatan

sebesar 8,0 mm terhadap Salmonella sp.

Berdasarkan penelitian di atas, membuktikan bahwa isolat bakteri yang

diisolasi dari usus sapi ditemukan adanya bakteri asam laktat, dimana senyawa

antimikroba yang dihasilkan oleh bakteri asam laktat terbukti memiliki

kemampuan sebagai antibakteri terhadap bakteri Eschericia coli dan Shigella sp.

42

BAB V

SIMPULAN DAN SARAN

5.1. Simpulan

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, diperoleh simpulan

sebagai berikut :

a. Diperoleh 2 jenis isolat BAL dari usus sapi (Bos taurus), yaitu sp1. dan sp2.

b. Zona hambat terbesar dalam menghambat bakteri Eschericia coli dan Shigella

sp. ditunjukkan oleh isolat bakteri sp2. dengan rata-rata diameter zona hambat

sebesar 8,9 mm dan sebesar 8,0 mm.

5.2. Saran

Adapun saran untuk peneliti selanjutnya yaitu, penelitian ini perlu

dikembangkan lagi dengan mengidentifikasi isolat bakteri asam laktat yang

diperoleh hingga ke tingkat spesies, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut

mengenai potensi lain yang dimiliki oleh isolat bakteri asam laktat dan perlu

dilakukan penelitian karakteristik substansi antimikroba yang dihasilkan isolat

bakteri asam laktat.

43

DAFTAR PUSTAKA

Anastiawan. 2014. Isolasi Karakteristik Bakteri Probiotik yang Berasal dari Usus

Itik Pedaging Anas domesticus. Skripsi. Fakultas Matematika dan Ilmu

pengetahuan Alam Universitas Hasanuddin. Makasar.

Andiani, W. 2012. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Asam Laktat dari Susu Kerbau

asal Kabupaten Enrekang. Skripsi. Fakultas Ilmu Kesehatan. Universitas

Islam Negeri Alauddin Makasar. Makasar.

Amaliah, Z.Z.N., Bahri, S., dan Amelia, P. 2018. Isolasi dan Karakteristik Bakteri

Asam Laktat dari Limbah Cair Rendaman Kacang Kedelai. Prodi Farmasi

Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan. Universitas Islam Negeri Syarif

Hidayahtullah, Jakarta. Jurnal Farmasi. 5 (1) : 253-257.

Bergey’s, D.H. 1993. Manual of Determinative Bacteriology, 9th

ed.

USA:Baltimore-Maryland.

Begley, M., C. G. M. Gahan, and C. Hill.2006. Bile Salt Hydrolase Activity in

Probiotics. Appl. Environ. Microbiol. 72 : 1729-1738.

Candra, J.I. 2006. Isolasi dan Karakteristik Bakteri Asam Laktat dari Produk

Bekasam Ikan Bandeng (Chanos chanos). Skripsi. Program Studi

Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut

Pertanian Bogor. Bogor.

Cappucino, J. G & Sherman, N. 2002. Microbiology A Laboratory Manual. 8th

Ed. Addison Wesley Publishing Company.

Ed-har, A.A., Widyastuti, R., dan Djajakirana, G. 2017. Isolasi dan Identifikasi

Mikroba Tanah Pendegradasi Selulosa dan Pektin dari Rhizosfer Aquilaria

malaccensis. Alumni Departemen Ilmu Tanah dan Sumberdaya Lahan,

Fakultas Pertanian IPB. Bogor. Jurnal Lahan. 1 (1) : 58-64.

Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan. Jakarta : Gramedia Pustaka Umum.

Fitriyah, N.L. 2015. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Endofit dari Rumput Kebar

(Biphytum sp.) Sebagai Penghasil Senyawa Antibakteri Terhadap Bakteri

Eschericia coli dan Staphylococcus aureus. Skripsi. Jurusan Biologi

Fakultas Sains dan Teknologi. Universitas Islam Negeri Maulana Malik

Ibrahim Malang. Malang.

Hastang dan Asnawi, A. 2014. Analisis Keuntungan Peternak Sapi Potong

Berbasis Peternakan Rakyat di Kabupaten Bone. Dosen Fakultas

Peternakan Universitas Hasanuddin. Makasar. Jurnal. 1(1) : 240-252.

Harimurti, S., Endang, S.R., Nasroedin dan Kurniasih. 2007. Bakteri Asam Laktat

dari Intestin Ayam Sebagai Agensia probiotik. Animal Production. 9 (2) :

82-91.

Hadioetomo, R.S. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek. Jakarta : Gramedia.

44

Ibrahim, A., Fridayanti, A. dan Delvia, F. 2015. Isolasi dan Identifikasi Bakteri

Asam Laktat (BAL) dari Buah Mangga (Mangifera indica L.).

Laboratorium Penelitian dan Pengembangan FARMAKA TROPIS

Fakultas Farmasi Universitas Mulawarman Samarinda. Kalimantan Timur.

Jurnal Ilmiah Manuntung. 1 (2) : 159-163.

Jamin, F., Abrar, M., Dewi, M., S.V.S, Yanrivina., Fakhrurran., Manaf, Z.H dan

Syafruddin. 2015. Infeksi Bakteri Eschericia coli Pada Anak Ayam

Kampung (Gallus domesticus) di Pasar Lambaro Aceh Besar. Fakultas

Kedokteran Hewan Universitas Syiah Kuala Banda Aceh. Jurnal Medika

Veterinaria. 9 (1). 2015.

Jawetz, E., Melnick, J. L., & Adelberg, E. A. 2005. Mikrobiologi Kedokteran

Edisi 20. Jakarta : EGC.

Kadir, I.R. 2016. Pertumbuhan Bakteri Asam Laktat (BAL) Kandidat Probiotik

Asal Saluran Pencernaan DOC Broiler Terhadap Berbagai Kondisi Asam

lambung. Skripsi. Jurusan Ilmu Peternakan Fakultas Sains dan Teknologi.

Universitas Islam Negeri Alauddin Malang.

Laily, I.N., Utami, R. Dan Widowati, E. 2013. Isolasi dan Karakteristik Bakteri

Asam Laktat Penghasil Riboflavin dari Produk Fermentasi Sawi Asin.

Program Studi Teknologi Pangan Fakultas Pertanian. Universitas Sebelas

Maret Surakarta. Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan. 2 (4).

Lestari, L.A dan Helmyati, S. 2015. Peran Probiotik di Bidang Gizi dan

Kesehatan. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta.

Muslim, G., Sihombing, J.E., Fauziah, S., Abrar, A., dan Fariani, A. 2014.

Aktivitas Proporsi Berbagai Cairan Rumen dalam Mengatasai Tanin

dengan Teknik In Vitro. Program Studi Peternakan Fakultas Pertanian

Universitas Sriwijaya. Palembang. Jurnal Peternakan Sriwijaya. 3 (1) :

25-36.

Mutmainnah, H., Gobel, R.B., Djide, N., dan Dwyana, Z. 2014. Isolasi dan

Karakteristik Bakteri Probiotik dari Saluran Pencernaan Ayam Kampung

Gallus domesticus. Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuam Alam universitas Hasanuddin. Makassar. Jurnal Sains.

Misgiyarta dan Widowati, S. 2002. Seleksi dan Karakteristik Bakteri Asam Laktat

Indigenous. Balai Penelitian Biogenik dan Sumber Daya Genetik

Pertanian Bogor.

Novianti, D. 2015. Kemampuan Daya Hambat Ekstrak Buah Mengkudu (Morinda

citrifolia) Terhadap Bakteri Shigella dysentriae. Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam Universitas PGRI Palembang. Jurnal Sainmatika.

12 (1) : 1-7.

Pamungkas, D. dan Anggraeny, Y.N. 2006. Probiotik Dalam Pakan Ternak

Ruminansia. Loka Penelitian Sapi Potong, Jl. Pahlawan No. 2 Grati,

Pasuruan 67184. Jurnal WARTAZOA. 16 (2). 2006.

45

Prasaja, D., Darwis, W dan Astuti, S. 2014. Uji Efektivitas Kombinasi Ekstrak

Kulit Batang dan Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana L.) Sebagai

Antibakteri Shigella dysentriae. Fakultas Matematika dan Ilmu

Pengetahuan Alam Universitas Bengkulu. Jurnal Ilmu Lingkungan. 12 (2)

: 83-91.

Puspawati, N.N., Nuraida, L., Adawiyah, D.R. 2010. Penggunaan Berbagai Jenis

Bahan Pelindung untuk mempertahankan Viabilitas Bakteri Asam Laktat

yang Diisolasi dari Air Susu Ibu pada Proses Pengeringan Beku. Jurnal

Teknologi Industri Pangan. 1 : 59-65.

Pelczar, M.J. & E. C. S. Chan. 2007. Dasar-dasar Mikrobiologi. Universitas

Indonesia Press, Jakarta.

Rohdiana, D., Arief, D.Z., dan Budiman, A. 2012. Aktivitas Penghambatan

Pertumbuhan Bakteri Eschericia coli oleh Berbagai Jenis teh dan

Seduhannya. Fakultas Teknik Universitas Pasundan Bandung. Jurnal

Penelitian Teh dan Kina. 16 (1) : 37-44.

Rianto, E dan Purbowati, E. 2010. Panduan Lengkap Sapi Potong. Penerbit

Penebar Swadaya, Semarang.

Rinto, Sasanti, A.D., dan Fitria, K. 2010. Bakteri Asam Laktat dari Pencernaan

Nila dan Tongkol yang Berpotensi Menghambat Bakteri Pembusuk,

Pembentuk Histamin dan Patogen pada Produk Perikanan. Fakultas

Pertanian Universitas Sriwijaya Indralaya. Prosiding Seminar Nasional.

Sutrisna, R., Ekowati, N dan Rahmawati, D. 2012. Uji Daya Hambat Isolat

Bakteri Asam Laktat usus Itik (Anas domesticus) Pada Bakteri Gram

Positif dan Pola Pettumbuhan Isolat Bakteri Usus Itik Pada Media Mrs

Broth. Fakultas Pertanian Unila Bandar Lampung. Jurnal Penelitian

Pertanian Terapan. 13 (1) : 52-59.

Susanti, I., Kusmaningtyas, R.W. dan Naningtyas, F. 2007. Uji Sifat Probiotik

Bakteri Asam Laktat Sebagai Kandidat Bahan Pangan Fungsional. Pusat

Pengkajian dan Penerapan Teknologi Bioindustri – BPPT Jakarta. Jurnal

Teknologi dan Industri Pangan. 18 (2).

Situmeang, S.M.F., Musthari dan Riadi, S. 2017. Isolasi dan Uji Aktivitas Bakteri

Asam Laktat (BAL) dari Yoghurt dalam Menghambat Pertumbuhan

Bakteri Eschericia coli dan Salmonella typhi. Politeknik Kesehatan

Kemenkes RI Jurusan Analis Kesehatan Medan. Jurnal Biosains. 3 (3).

Santoso, B., Maunatin, A., Hariadi, BT dan Abubakar, H. 2013. Isolasi dan

Identifikasi Bakteri Asam Laktat Asal Rumput Raja (Pennisetum

purpureophoides) sebagai Kandidat Probiotik pada Ternak. Fakultas

Peternakan Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Negeri Papua. Jurnal

IIV. 18 (2) : 131-137.

Supandi, T dan Wardah. 2014. Mikrobiologi Pangan. Penerbit ANDI, Yogyakarta.

46

Sudarmono, A.S dan Sugeng, Y.B. 2008. Pemeliharaan Perbaikan Produksi

Prospek Bisnis dan analisis Penggemukan Sapi Potong. Penerbit Penebar

Swadaya, Semarang.

Syarif, E.K., dan Harianto, B. 2011. Buku Pintar Beternak dan Bisnis Sapi Perah.

PT AgroMedia Pustaka, Jakarta.

Setyawan, A.A., Sukanto dan Widyastuti, E. 2014. Populasi Bakteri Asam Laktat

Pada Budidaya Ikan Nila yang Diberi Pakan Fermentasi Limbah Pertanian

dengan Suplemen Enceng Gondok dan Probiotik. Fakultas Biologi

Universitas Jenderal Soedriman Purwokarta. Jurnal Scripta Biologica. 1

(1) : 91-95.

Susilawati, S. 2016. Isolasi dan Karakteristik Bakteri Asam Laktat (BAL) dari

Fermentasi Air Cucian Beras. Skripsi. Fakultas Kedokteran dan Ilmu

Kesehatan Program Studi Farmasi Universitas Islam Negeri Syarif

Hidayatullah Jakarta. Jakarta.

Setianingsih, S. 2010. Kajian Senyawa Antimikroba Bakteri Asam Laktat

Homofermentatif Isolat ASI. Fakultas Teknologi Pertanian Institut

Pertanian Bogor. Bogor.

Sunaryanto, R., dan Marwoto, B. 2013. Isolasi, Identifikasi dan Karakterisasi

Bakteri Asam Laktat dari Dadih Susu Kerbau. Balai Pengkajian

Bioteknologi BPP Teknologi Kawasan PUSPIPTEK Serpong Tangerang

Banten. Jurnal Saintek dan Teknologi Indonesia. 14 (3) : 228-233.

Surono, I.S. 2004. Probiotik Susu Fermentasi dan Kesehatan. Tri Cipta Karya.

Jakarta.

Tambunan, A.R. 2016. Karakteristik Probiotik Berbagai Jenis Bakteri Asam

Laktat (BAL) Pada Minuman Fermentasi Laktat Sari Buah Nanas (Ananas

sativus). Skripsi. Fakultas Pertanian Universitas Lampung. Bandar

Lampung.

Talib, C., dan Siregar, A.R. 1991. Peranan Pemuliaan Ternak Potong di Indonesia.

Balai Penelitian Ternak Ciawi. Jurnal WARTAZOA. 2 (1-2).

Widodo, Dr. 2017. Bakteri Asam Laktat Strain Lokal. Gadjah Mada University

Press, Yogyakarta.

WHO. 2013. Ending preventable deaths from pneumonia and diarrhoea by 2025.

Diperolehdarihttp://www.who.int/maternal_child_adolescent/news/2013/gapp

d_launch/en/index.html. Mei 2013.

Wibowo, M.H., dan Wahyuni, A.E.T. 2008. Studi Patogenitas Eschericia coli Isolat

Unggas Pada Ayam Pedaging Umur 15 Hari. Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Gadjah Mada. Jurnal Veteriner. 9 (2): 87-93.

Yusmarini, Indrati, R., Utami, T., dan Marsono, Y. 2009. Isolasi dan Identifikasi

Bakteri Asam Laktat Proteolitik dari Susu Kedelai yang Terfermentasi

Spontan. Program Studi Teknologi Hasil Pertanian Universitas Riau.

Pekanbaru. Jurnal Natur Indonesia. 12 (1) : 28-33.

47

LAMPIRAN

Lampiran 1. Alat dan Bahan Penelitian

Usus sapi Labu erlenmeyer

Inkubator Mikroskop

Neraca analitik Autoklaf

48

Lampiran 2. Proses Isolasi Bakteri Asam Laktat dari Usus Sapi (Bos taurus)

Suspensi Sampel Usus Sapi Proses Pengenceran

Isolat BAL Pada Pengenceran 10-2

Biakan Campuran Isolat BAL

Biakan Campuran Isolat BAL

49

Lampiran 3. Uji Biokimia

Isolat bakteri sp1 Isolat bakteri sp2

(A) : Uji Motilitas (A) : Uji Motilitas

(B) : Uji Sitrat (B) : Uji Sitrat

(C) : Uji Fermentasi Karbohidrat (C) : Uji Fermentasi Karbohidrat

(D) : Uji Hidrolisis Gelatin (D) : Uji Hidrolisis Gelatin

Uji Katalase (+) pada sp1 Uji Katalase (-) pada sp2

A B C D A C B D

50

Lampiran 4. Hasil Uji Ketahanan Isolat BAL Terhadap Variasi pH

pH 2,5 pada Isolat bakteri sp1 pH 3,0 pada Isolat bakteri sp1

pH 3,5 pada Isolat bakteri sp1 pH 2,5 pada Isolat bakteri sp2

pH 3,0 pada Isolat bakteri sp2 pH 3,5 pada Isolat bakteri sp2

51

Lampiran 5. Hasil Uji Ketahanan Isolat BAL Terhadap Variasi Kadar

Garam

Kadar Garam 0,5% pada Isolat sp1 Kadar Garam 1,0% pada Isolat sp1

Kadar Garam 1,5% pada Isolat sp1 Kadar Garam 2,0% pada Isolat sp1

Kadar garam 2,5% pada Isolat sp1 Kadar Garam 0,5% pada Isolat sp2

52

Kadar Garam 1,0% pada Isolat sp2 Kadar Garam 1,5% pada Isolat sp2

Kadar Garam 2,0% pada Isolat sp2 Kadar Garam 2,5% pada Isolat sp2