flavonoides final

5/23/2018 Flavonoides Final

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Estn presente en las plantas, la mayora en forma O- y C-glucsidos. Desempean un papel importante en elcrecimiento, florecimiento, en los frutos y defensa a las

bacterias.

Estructura generalSon una serie de compuestos que contienen

dos anillos de benceno (anillo Ay anillo B)conectados por una va de tres tomos decarbono.

A

B

Flavano

A

B


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Categora de flavonides

O

O

O

O

O

OOH

OH

O

O

O

O

OH

O

OH

O

OH

OH

O+

O

O

O

O

CH

Tipo Estructura bsica Tipo Estructura bsica

Flavonas

Flavan-3-oles

Flavanonas Flavan-3,4-oles

Flavonoles Antocianidinas

Flavanonoles Xantonas

Isoflavonas Auronas


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Tipo Estructura bsica Tipo Estructura bsica

Isoflavanonas Furanocromonas

Homosioflavanonas Fenilcromonas

Chalconas Dihidrochalconas

O

O

O

O

OH

O

O

O

O

O

O

OH

O


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Propiedades fsicas yqumicas

Flavonas,flavonolesy sus glicosidos sonamarillos grisceosa amarillos

Chalconas sonamarillas a naranjaamarillos

Flavonas y flavonoles

son generalmenteincoloros, sinembargo puedendistinguirse con luzUV y el color cambiacon gas de amonia.

Isoflavonas sonamarillo plidoAntocianidinas conpH8.5

Flavonoides con agliconas soninsolubles en agua y muysolubles en metanol y cloroformo.

Generalmente los flavonoides son

slidos cristalinos o en polvo amorfo.

Flavonoides glicosidicos sonsolubles en disolventes polarescomo el agua.


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Presencia de flavonoidesen plantas


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Los flavonoides son derivadosde la chalcona.


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Flavonas y flavononas: Plantas Angiospermas (Rutaceae,Compositae, Labiatae,Leguminosae)

Flavonoles y flavononoles: Plantas Dicotiledoneas (Rosaceae,Zingiberaceae)

Chalconas y dihidrochalconas : (Asteraceae, Leguminoseae,Gesnericeae,Valerianaceae)

Isoflavonas e isoflvonas: Plantas Angiospermas(leguminoseae,Iridaceae, Moraceae)

Antocianidinas: Proporciona a flores, frutos diferentes colores comorojo, purpura, azul, etc.

Flavonoles: Estn presentes extensamente en el reino vegetal.

Aster novi-belgi Hacer palmutum


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Auronas: Comunmente en plantas Asteraceae, Gesneriaceae,Scrophlariaceae.

Biflavonoides: Gingkoceae, Taxodiaceae, Pinaceae.

Xantonas: Gentianaceae, Guttiferae.

Gingko Biloba Vicia sativa (Leguminoseae)


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Extraccin y aislamientoSe mencionarn algunos mtodos comunes de extraccin.

Extraccin con agua caliente: Usada para flavonoides polares glicosidicos, comoflavanol, flavandiol y proantocianidina.

Extraccin con metanol o etanol: Usada para flavonoides. Se usa alcoholconcentrado (90 a 95%) para extraer agliconas y alcohol con concentracin al 60%para extraer glucsidos. El proceso de extraccin a menudo toma dos a cuatrosecuencias.

Extraccin con sucesin de solventes: Para esta extraccin diferentes solventes

de baja a alta polaridad son usados. Pejm.Primero Hexano para desengrasar .Despus benceno para los isopentil, metil y poli-metoxiflavonoides.ter, cloroformo, acetato de etilo para extraer agliconas.Acetona, etanol, metanol para polihidroxiflavonoides.Alcohol diluido o agua caliente para glicosidos.HCl para antocianidinas.


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Los mtodos comunes de aislamiento son: extraccin por solventes, extraccinbsico y precipitacin acida, cromatografa capa fina, cromatografa en columna degel slica, precipitacin de sal de plomo extraccin de gradiente de pH.

Agua alcalina o alcohol alcalino: como agua o etanol al 50% con Na2CO3,NaOH,, o etanol al 50%

d d i l i i


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Nuevos mtodos de aislamiento y extraccin

Extraccin ultrasnica (UE):Se aprovecha el efecto de cavitacin producida porultrasonido, para una extraccin muy rpida .

Ultrafiltracin (UF):Este mtodo basa en tomar ventaja de una membranasemipermeable porosa con una cierta presin para obligar a las molculas pequeas apasar a travs de la membrana y a las molculas grandes no y as poder aislarpurificar y concentrar el extracto

Cromatografa resina de adsorcin macroporosa: Es especialmente usado para

aislamiento y purificacin de flavonoides y saponinas a escala industrial

Extraccin acuosa de dos fases: se basa en principio de particin selectiva para lassustancias en un sistema acuoso de dos fases. Las diferentes sustancias tienendiferentes coeficientes de particin en las dos fases, as que cuando las sustanciasentran en el sistema acuoso de dos fases, se pueden dividir selectivamente entre las

fases superior e inferior. A continuacin puede ser extrado y aislado lo que se desea.

Extraccin enzimtica: Este mtodo utiliza enzimas para descomponer y eliminar lasimpurezas que coexisten con los flavonoides de las plantas, tales como el almidn,protenas, pectina, etc.


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Identificacin,estructura y estudio de

flavonoides


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Identificacin, estructura y

estudio de flavonoidesLas mtodos de

identificacin

mas comunes sonlos fsicos y losqumicos, como

las cromatografaen capa fina y lacromatografa en

alto rendimiento


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Identificacin fsica y

qumica La identificacin qumica y

fsica depende de laspropiedades de los gruposde flavonoides.

Los grupos de flavonoidestienen variabilidades encolor, los flavonas no tienenrotacin optica y lasflavanonas si tienen. La

solubilidad, los flavonoidescomo la aglicona esescasamente soluble enagua pero el glucosido delflavonoide es un pocosoluble.


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Color

Reaccin colorida del cido clorhdrico con polvo deMg: se aade una pequea porcin de polvo de magnesiocon metanol y etanol y en esta solucin se agrega el

flavonoide , se agita y se le agregan unas gotas de cidoclorhdrico, el color aparece en uno o dos minutos. Las flavones, flavonoles y flavanonas se muestran

positivos cuando la coloracin se torna de roja a purpura,muy pocos se tornan de color verde o azul.

Cuando el anillo B contiene un sustituyente -OH o -OCH3la coloracin se torna un poco ms oscura. Los isoflavonas, las chalconas y las antocianidinas, no

presentan esta reaccin.


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Cromatografa en capa fina e

identificacin espectral Cromatografa en papel y

de capa fina puedenservir para identificar los

compuestos objetivo, deacuerdo a los Rfobtenidos, fluorescenciaUV, etc. que despus secomparan con los de unareferencia estndar.

Los espectros de UV e IRse comparan con lainformacin de referencia

estndar actual.


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Estudio de la estructura


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Estudio de la estructura

Las tcnicas msutilizadas son RMN, IR,UV y MS, para

determinar la estructurade los flavonoides. Si se cuenta con una

referencia estndar ,determinar la estructuraes mas fcil con los datos

de TLC, espectro IR y elpunto de fusin. Si el flavonoide se

desconoce es fcildeterminar su estructuracon IR, UV, RMN MS.


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Caractersticas espectrales

Las investigaciones actuales de los flavonoides se hacentrado en los flavonoides glucsidos , los cualescontienen mas de una unidad de glucosa.

Es difcil la interpretacin del espectro con C 13 con lossacridos, debido a las seales superpuestas en muchoslugares.

Electron ionizaction/Mass Spectroscopy (EI-MS): es unmtodo usado para determinar la estructura de

flavonoides aglicona. Se ha optado por la resonancia de dos dimisiones, ya que

es una herramienta muy til en la identificacin deflavonoides glucosidicos.


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Compuestos glucsidos ionizado se pueden romper en fragmentos. EI-MSRest equipado con un detector de captura de aniones y el espectro de masasanin resultante puede complementar el espectro de masas de cationes, esto

hace que la informacin obtenida sea ms amplia y ms fiable.Espectrometra ionizacin electrospray de masas (ESI-MS)y la ionizacinqumica atmosfrica de presin atmosfrica MS(APCI-MS) puede ser usada.ESI y APCI son tcnicas de ionizacin suaves, eso hace que sea fcil adquirir lainformacin de masa molecular relativa, pero con pocos o ninguno de los picos

de iones fragmentados. Para obtener ms informacin sobre la estructura, sernecesaria la disociacin inducida por colisin (CID). Mediante el ajuste de latensin de la celda de colisin, la informacin MS en diferentes grados dedisociacin se puede conseguir. Adems, cuando la cascada de tecnologa MSse combina con CID, de una mnera mas simple y ms abundante informacinde MS puede ser obtenido.


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Estudio de la aglicona

Los flavonoides conocidoscomo la aglicona y losglucosidadas con la

preparacin de sus derivadosy la espectroscopia se puededeterminar su estructura.

Los derivados de flavonoidesusados comnmente sonmetida y acetilados. As al ser

preparados se puedecomparar sus propiedadesfsicas y qumicas con las quese encuentran reportadas enla literatura, tambin sepueden comparar susespectros.


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Preparacin del

derivado acetiladoLos grupos hidroxilo pueden ser acetilados por anhidrido actico ycloruro de acetilo con un catalizador como piridina, acetato de sodio oacido sulfrico concentrado. Todos los reactivos deben de estar en un

ambiente anhidroAlgunos flavonoides son inestables o se pueden isomerizar en solucinalcalina. Para estos flavonoides es difcil la acetilacin Una pequeacantidad de acido sulfrico concentrado o acidop-metilbenzosulfonicoanhirdo puede ser usado como el catalizador.


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Preparacin del derivado

metida Se disuelve 4 a mg de glucosidos o sacaridos en .3 a .5 mL de

(DMSO) dimetil sulfoxido. agregar 20 mg de NaOH en polvo finamente molido a

temperatura ambiente. se agita durante 6 min, a continuacin, aadir 0,1 ml de yodo

metano y se agita durante otros 6 min. Tomar el cloroformo, se lava con agua, luego de que seque, se

lleva a evaporar. Al final el producto puede ser purificado usando cromatografa

o ser cristalizado. El espectro UV sirve para determinar la posicin de los

hidroxilos de las muestras. Los agentes mas ocupados para determinar la posicion son:

CH3Na, ALCL3. La resonancia de protones funciona para determinar la posicion

del metoxil en un flavonoide


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Espectro UV

determinacinDeterminacin del espectro UV para posicin del hidroxilo.Los reactivos comunes son CH3ONa, CH3COONa, AlCl3, CH3COONa/H3BO3,

AlCl3/HCl3, etc.Mediante la comparacin de los espectros UV antes y despus de la adicin de reactivosse puede obtener el valor de cambio y, en base a esto, se puede decidir an ms laposicin del hidroxilo. Los detalles del mtodo y la relacin entre los diferentes cambiosespectro UV incurridos por diferentes reactivos de diagnstico y flavonas hidroxilo sepueden encontrar en las referencias. este mtodo es simple y la cantidad de la muestra

requerida es muy pequea. Por lo tanto, se ha utilizado ampliamente.

H NMR NOE d t i i d l d d l i t d l t


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H-NMR-NOE y una determinacin de valor de desplazamiento de solvente.La posicin metoxilo de un flavonoide puede ser determinada por espectroscopia efectooverhauser nuclear(NOE). Entre el protn y el orto-aryl proton.El H-RMN desplazamiento del metoxilo de los flavonoides es inducida por el benceno,este mtodo ya ha sido utilizado para la determinacin de la estructura. Para

flavonoides que contienen una estructura bsica de anillo condensado, la relacin deNOE con los protones puede ayudar a determinar la posicin del esqueleto de anillocondensado y la estereoqumica de protones.

La degradacin qumicaLa degradacin qumica utiliza un mtodo qumico para descomponer la complicada

estructura de un compuesto en compuestos de estructura ms simple. Despues elestudio estructural se realizar para los productos de degradacin, y en base a esto, paradeterminar la estructura complicada original. Con los usos de las tecnologas deespectroscopia altamente desarrollados, la degradacin qumica rara vez se utiliza enlas estructuras de estudio de hoy, pero para compuestos con estructuras extraas oinusuales, la degradacin qumica sigue siendo un tcnica importante. Los mtodos de

degradacin qumica comunes utilizan la oxidacin, la reduccin, la degradacinalcalina, etc


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Algunos ejemplosCorylifolin. Formula molecular CF20H20O4, punto de fusion a 212C,reaccion con HCl/ polvo de Mg dio color purpura/azul. Puede serconvertida a chalcona en EtOH/KOH 10% a temperatura ambiente.,presenta actividad optica y el anillo se abre al reaccionar con una basepara formar la chalcona.


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La configuracin absoluta de el C2 se determino por comparacin por elespectro de rotacin ptica de (2S)-liquiritigenina. Las curvas de los espectrosde rotacin ptica fueron muy similares en 325 a 375 nm.


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Corylifoninina. Formula molecular C20 H20 O4, punto de fusin166 a 1667C, no tiene actividad ptica, muestra el tpico espectroUV de la chalcona. Puede formar flavonona racemica en solucin de5% HCl-EtOH mediante la reaccin de cierra tambin se demuestra

que corylifoninina es una chalcona. Despus de ozonolizacion ehidrogenacin , acetona y dihiduro son obtenidos.


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Acido p-hidroxibenzoico y una acetofenona sustituida C5H9 son obtenidas pordegradacin bsica.

La sal monosodica de 2,4 dihidroxi acetofenona en suspensin en benceno

anhidro se calienta a reflujo con 1-bromoisopreno durante 19 h. Productos dedescomposicin alcalina de corylifolin y corylifolinin,-C5H9-sustituido derivadosde acetofenona, se obtienen. Bajo fuertes condiciones alcalinas, las reacciones decondensacin entre derivados de acetofenona de corylifolinina y p-hidroxibenzaldehdo ocurriran y formar corylifolinina. Su compuesto de cierre deanillo es otra prueba de la estructura corylifolinina.


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Estudio de la estructura deflavonoides glicosidos

Los flavonoides se encuentran mayoritariamente como O- glicosidos,si los glicosidos son categorizados de a cuerdo al numero deunidades de azcar, puede haber monoglicosidos,,biosido,triglicosido, etc.Los flavonoides glicosidos no se hidrolizan bajo condicionescomunes de hidrolisis.

HidrolizisC-glicosidos no son hidrolizables con acido

O-glicosidos son bajo condiciones hidrolizables especiales con acidoy enzimas


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Posicin de la glicosidacionPuede identificarse con H-RMN y C-RMN, los carbonos de enlaceglicosido de la aglicona aparecen en 2ppm.

Carbono anomericoPuede tener dos configuraciones, alfa y beta, H-RMN y C-RMN esconveniente y simple para identificar un carbono anomerico.

Identificacin de sacarido

Despus de la hidrolisis se procede con una cromatografia de poliamidao cromatografia en papel en condiciones estndar.

Los protones de sacridos en RMN se encuentran en 3-6 ppm.


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Estudio farmacolgico de los

flavonoides Se ha demostrado que

con la quertetecina sehan mostrado efectosrelajantes el musculocardiaco, combaten laarritmia cardiacatambin handemostrado tiles aracombatir el dolor decabeza.


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Actividad cardiovacular

Rutin, quercetin, puerarin, recordil, tiene efectosbeneficos en la enfermedad de corazon

coronaria, el gingko tiene propiedadesvasodilatadoras, hyperin, lteonin, sylibin, tienenefectos protectores para ocasionados porischemia, y tienen efectos benficos para la

arritmia cardiaca.


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Actividad antimicrobiana y

antiviral La cianodenona,

baicalina, y baicaleina

presentan actividadantimicrobiana. La quertecina, distlina y

el kaempferoldemostraron actividad

antiviral. El crisantemo y la swertia

bimaculata (genisteina,saidzeina)son fuertesinhibidores de los efectos

del VIH en el cuerpo.


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Actividad antitumoral

Propiedadesantioxidantes: En lasplantas los flavonoides

actan comoantioxidantes,especialmente lascatequinas

Proteccin del hgado:algunos flavonoides handemostrado disminuir laprobabilidad deenfermedades en elhgado, regenera lesionesocasionada por lacirrosis.


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Actividad antiinflamatoria y

analgsica Procyanidin presenta

propiedades

antiinflamatorias ycomo antipirtico. El hidrohydroxyethyl

rutin y la taxifolina

presentan efectosinhibidores sobre laartritis y losgranulomas.

Procyanidin


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ANLISISDETERMINACIN Y

FORMULACIN DEFLAVONOIDES


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ANLISIS DETERMINACIN YFORMULACIN DE FLAVONOIDES

Determinacin de ensayo flavonoides . Determinacin de ensayo es muy importante para la

identificacin exacta de los medicamentos chinos crudos,la evaluacin del proceso de formulacin y control decalidad de las MTC ..

ULTRAVIOLETA ESPECTROFOTOMETRA


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ULTRAVIOLETA ESPECTROFOTOMETRA(UV)

A veces , los reactivos dediagnstico , tales como ALCl3 ,

se pueden aadir como unagente cromognico , y en

general el complejo formado porlos flavonoides y de iones de

metal da color amarillo o naranja.

Sin embargo , elmtodo UV no es

especfica y slo sepuede utilizar para

estimar

aproximadamente elcontenido total deflavonoides y no sepuede utilizar para

determinar elcompuesto

cuantitativamente y

Sigue siendo un mtodofcil y conveniente quepuede ser utilizado para elcontrol de calidad durantela produccin inicial .

El uso de UV para determinar elensayo de flavonoides ya se haindicado en ciertas farmacopea. Sebasa en los dos principales picos deabsorcin de los flavonoides bajo uv:banda I (300 a 400 nm) y la banda II

(240-280 nm ) .

Escaneo TLC fue ESCANEO DE CROMATOGRAFA CAPA FINA


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Escaneo TLC fueuna vez el

mtodo mscomnmenteutilizado para

analizarflavonoides, yaque es fcil de

operar y muestrauna buena

reproducibilidad.

. Ejemplos incluso usando

escanear fluorescente TLCpara determinar elcontenido de la puerarina

en la raz kudzuvine,usando doble longitud de

onda TLC exploracin

para determinar elcontenido icariside, y eluso de TLC exploracin

para determinar elcontenido diadzena

determinar y su

formulacin Xuezhi kang

. Sin embargo, cuandose compara un pococon HPLC, los

procedimientos deexploracin de TLCson demasiadotedioso, y la precisintambin es baja. En laactualidad laexploracin TLC ya ha

sido reemplazado porHPLC

ESCANEO DE CROMATOGRAFA CAPA FINA(TLC SCAN)


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HPLCDesde finales de 1970 HPLC ha sido ms ampliamente utilizado para ensayardiversos compuestos qumicos. HPLC puede detectar cuantitativamentemuestras a niveles de nanogramos o picogramos.

. Cuando se determina el ensayo de flavonoides cuantitativamente, los mtodosExtraccin comunes utilizados son la extraccin de metanol de reflujo, cloroformo

sacudidas extraccin, extraccin reflujo de acetona, la extraccin de la fase mvil yla extraccin ultrasnica

HPLC


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Se han reportado muchos estudios sobreel uso de HPLC para determinar el

ensayo de flavonoides. HPLC ha sidoconsiderada como un mtodo

conveniente, rpido y eficiente para laevaluacin de la calidad de losmedicamentos chinos crudos,

determinacin del tiempo de recogidaptica, deteccin proceso de extracciny control de calidad de la formulacin

A.-Determinacin de la puerarinaen la raz kudzuvine recogidos dediferentes regiones por HPLCB.-Determinacin de baicalina en

baicalensis scutellaria (solideo)Baical races por HPLCC.-determinacin de icariina en[epimedium sagittatum (Sieb. etzucc.) Maxim] extractos acuosospreparados con diferentes procesosde purificacin.

D.-Determinacin de la agliconade flavonoide en las diferentes

formulaciones de ginko biloba L.E.- Informes de investigacin enel extranjero


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Por eso el HPLC es una tecnologa madura

con una alta sensibilidad, un excelenterendimiento reproducibilidad, y es fcil deoperar. Se ha convertido en la primera opcinpara la determinacin del ensayo, y estambin un buen mtodo utilizado paradeterminar los flavonoides en losmedicamentos crudos chinos y formulacin.

El t f i il (CE)


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En comparacin con los mtodos de UV y

TLC, CE tiene muchas ventajas, tales comoun menor tiempo de anlisis, el consumode menos disolvente, menor coste y menosresiduos. Es adecuado para la rpidaanalisis cuantitativo de ciertos flavonoides.

Electroforesis capilar. (CE)

5.2 Las formulaciones de los flavonoides

a causa de las diversas actividadesfarmacolgicas de los flavonoides, lapreparacin en formas de dosificacinacabadas sociables es muy importante paraRYD.

Formulacin de fla onoides


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Desde la dcada de 1990, con la mejora de las

formulaciones de los procesos y tcnicas de produccindistintas de ginkgo biloba L. formulaciones han estadooampliamente distribiudos, incluyendo extractos,comprimidos, cpsulas, lquidos orales y inyecciones, quepueden ser ampliamente utilizados para Trat enfermedadcardio-cerebrovascular, hgado , trastornos renales ypulmonares, sicosis, la diabetes, etc, con efectossatisfactorios.

Cuando la daidzena de la razkudzuvine y PVP se combinan

en las raciones apropiadas parahacer tabletas de dispersinslida, la biodisponibilidad invivo ha aumentadosignificativamente y los efectosteraputicos tambin aumentar.

el desarrollo de latecnologa

moderna haproporcionado unentorno excelentepara formulacionesde TCM

Formulacin de flavonoides


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con la creciente demanda de atencin sanitaria y mdica,las formulaciones farmacuticas se centrarn ms en"tres efectos" (ms eficientes, de accin prolongada y

rpida) y "tres cargas fraccionadas" [pequeas dosis,pequea toxicidad y los efectos secundarios pequeas].La formulacin ideal de TCM debe tener un compuestomarcador activo estable y definida, as como los datosfarmacolgicos y clnicos reproducibles. Sin embargo, enla actualidad, la mayora de las formulaciones de TCMtodava mucho camino por recorrer para llegar a esteobjetivo. La tecnologa de formulacin moderna ymateriales avanzados promover en gran medida la rydde formulacin de flavonoides


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CONCLUSIN:En resumen, los flavonoides son de gran variedad ampliamentepresentes y exhiben diversas actividades farmacolgicas. Son yamuchos productos de flavonoides en el mercado. nuevosestudios y desarrollo de flavonoides, con tecnologas comonuevos mtodos de aislamiento de nuevas tcnicas deformulacin, las nuevas tcnicas de anlisis, las biotecnologasmodernas tecnologas de la informacin, etc, harn posible eldesarrollo de nuevos anti-cncer ms, anti-envejecimiento ymedicamentos contra enfermedades cardiovasculares con ungran potencial de mercado y la contribucin a la sociedad.


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flavonoides final

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flavonoides glicosidicos

proceso de extraccin

plantas asteraceae

estructura generalson

agua caliente

plantas angiospermas

mtodos comunes

despus benceno