Informe. 91ª Reunión Anual de la Endocrine Society, WASHINGTON, DC – JUNE 10-13, 2009

Marco A. Rivarola y Alicia Belgorosky Servicio de Endocrinologia, Hospital de Pediatria Garrahan, Buenos Aires, Argentina

Tal como presentamos luego de las cuatro Reuniones Anuales previas de la Endocrine Society, intentaremos llevar a cabo una revisión de la 91ª Reunión Anual, ENDO 09, que tuvo lugar en Washington, DC, en el Centro de Convenciones Walter E de Washington, entre el miércoles 10 y el sábado 13 de Junio de 2009.

En este año, el Comité Científico logró realizar un programa que inclyó 16 Conferencias Plenarias, 69 Simposios, 128 sesiones de Encuentro con el Profesor (Conversaciones con Clínicos y con Investigadores Básicos) y 32 Foros de manejo de casos. El programa ofreció nuevos tipos de sesiones. Los foros de Manejo de Casos representan una de la nuevas modalidades educativas, dirigidas a los clínicos dedicados a la práctica médica; en estos foros, dos expertos toman un tópico dado y buscan trasmitir objetivos docentes focalizados a través de casos ilustrativos. Estas sesiones, junto con los Encuentros con el Profesor utilizaron el manejo de casos clínicos para ofrecer oportunidades de discusiones interactivas entre los expertos y la audiencia. Durante la presentación de los Posters, se seleccionaron trabajos de personas en formación para un premio en la “Competición Presidencial de Posters”.

La Reunión también incluyó la presentación de tres nuevas Guías de la Endocrine Society, que cubrieron los temas siguientes: “Evaluación y Manejo de las Alteraciones Hipoglucémicas del Adulto”, “Tratamiento Endocrino de las Personas Transexuales” y “Manejo Endocrino y Nutricional de Paciente luego de la Cirugía Post-Bariática”.

El piso de Exhibidores ofreció numerosos Stands con materiales diversos para los 8715 participantes inscriptos. El sitio web de la Endocrine Society es “www.endo-society.org“. Se puede acceder a información adicional de la Reunión en la página web de la Endocrine Society, http://www.abstracts2view.com/endo/.

A continuación siguen comentarios sobre algunas de las Conferencias Plenarias (L).

[L1-1] Sesión Plenaria Presidencial: La historia de la retroalimentación del colesterol. – De Como los Genes Controlan el Colesterol I. JL Goldstein. Univ of Texas SW Med Ctr, Dallas, TX [L1-2] Sesión Plenaria Presidencial: La historia de la retroalimentación del colesterol. – De Como los Genes Controlan el Colesterol II. MS Brown. Univ of Texas SW Med Ctr, Dallas, TX NO HAY RESUMEN

En estas dos Conferencias Plenarias Presidenciales, dos investigadores galardonados con el Premio Nobel explicaron sus investigaciones sobre como las células controlan la síntesis y captación de colesterol a través de un mecanismo de retroalimentación mediado por los receptores de lipoproteínas de baja densidad (LDL). Los

dos científicos, JL Goldstein, and S Brown, son médicos que comparten un Laboratorio en el Jonsson Center for Molecular Genetics,en la University of Texas Southwestern Medical center, en Dallas, USA, y han venido colaborando desde 1972. Juntos ganaron el Premio Nobel de Fisiologia en 1985 por haber demostrado que las mutaciones homocigotas en el receptor de LDL producen hipercolesterolemia familiar y llevan a infarto de miocardio prematuro. Este descubrimiento posibilitó el desarrollo de las estatinas. En sus estudios elucidaron el mecanismo por el cual el receptor de LDL media un control por retroalimentación de la síntesis del colesterol.

Según dijo el Dr Goldstein, el colesterol tiene una función vital y una función letal. Su función vital es su rol como un componente estructural esencial de la membrana plasmática de las células y su papel en la síntesis de las hormonas esteroides y los ácidos biliares. Sus aspectos letales entran en juego cuando se acumula un exceso de colesterol en la sangre en la forma de lipoproteínas de baja densidad, las cuales inician el proceso de aterosclerosis en la pared arterial que lleva a la enfermedad coronaria y los ataques cardiacos. Debido a que el colesterol es tan vital para la función de la membrana, las células animales han desarrollado un mecanismo sofisticado para regular su concentración, de tal manera que la composición lipídica de la membrana plasmática pueda ser mantenida dentro de límites muy estrechos. El mecanismo de retroalimentación opera primariamente a nivel transcripcional. Un elemento clave para esta retroalimentación son los factores de trascripción unidos a membrana conocidos como SREBPs, o proteínas de unión de elementos reguladores de esteroles, en inglés sterol regulatory element-binding proteins. Las SREBPs regulan la síntesis y captación de colesterol y ácidos grasos en las células animales. Las SREBPs son reguladores mayores de los lípidos.

Otros elementos que participan del mecanismo de retroalimentación son un par de proteínas unidas a membrana llamadas SCAP e Insig. La proteína de membrana SCAP transporta los SREBPs desde al retículo endopplásmico (ER) al Golgi done sufre una proteólisis secuencial y previa a poder activar la síntesis del colesterol. A su vez la acumulación de colesterol en las membranas del ER hace que se una a SCAP y cambie su conformación, ésta a su vez une retiene a Insig (1 o 2), Como consecuencia, las SREBPs son retenidas en el ER y se desactiva la síntesis y captación de colesterol. Desde el Golgi, organella responsable de dirigir el tráfico molecular, los productos de proteólisis de las SREBSs son dirigidos al núcleo donde actúan como factores de transcripción, activando genes que codifican para proteínas que actúan en la síntesis y captación del colesterol. Cuando se acumulan cantidades excesivas de esteroles en las membranas del ER, SCAP se une a colesterol e Insig se une a oxiesteroles (por ejemplo 25OH-colesterol). Pero el evento central de la regulación es la unión de las proteínas reguladas por esteroles (Sec23/Sec24) del complejo de proteína de revestimiento COPII a una secuencia específica de SCAP, llamada MEDLADL. El resultado de la unión de los esteroles a SCAP e Insig es un cambio conformacional en SCAP que impide que las proteínas COPII tengan acceso a la secuencia MEDLADL de SCAP.

El Dr. Brown, el segundo Premio Nobel, dijo que los estudios que llevaron a descubrir el mecanismo de retroalimentación de la síntesis del colesterol se realizaron en células de cultivo de tejidos. Presentó las investigaciones que él y sus colegas realizaron en hígados de ratones para confirmar los hallazgos previos, manipuleando los genes involucrados en la síntesis del colesterol. Dijo que en lo relacionado con la síntesis todo sucede en

el hígado. Todos los resultados de una serie de manipulaciones genéticas en los ratones encontrados podrían haber sido predichos a partir de los resultados de los cultivos de células. Fabricaron un ratón transgénico que producía una SREBP truncada que nunca se une a las membranas y no necesita ir al GOLGI para ser procesada. Va directamente al núcleo donde estimula a todos los genes necesarios para fabricar colesterol y ácidos grasos.

La SREBP truncada produce un agrandamiento masivo del hígado de los ratones que se llena de colesterol y triglicéridos. También pudieron hacer un ratón KO para Insig, y los hígados se llenaron de lípidos. Lo mismo sucedió con un ratón KO para SCAP.

Ambos científicos concluyeron que habían encontrado cual es el mecanismo que controla el metabolismo del colesterol regulando la síntesis de colesterol y triglicéridos mediada por el receptor de LDL. (Tomado de ENDO daily, el diario de la Reunión, con modificaciones)

[L2-1] Conferencia Plenaria Edwin B Astwood: Intercambio Mediado por los Transportadores de Hormonas Tiroideas. TJ Visser. Internal Med, Erasmus Univ Med Ctr, Rotterdam, Netherlands NO HAY RESUMEN Resumen de publicación. Sigue un resumen de una revisión reciente: El metabolismo y la acción de las hormonas tiroideas son principalmente hechos intracelulares que requieren del transporte de hormonas tiroideas a través de la membrana plasmática. Durante mucho tiempo se pensó que esto sucedía por difusión pasiva, pero se ha vuelto cada vez más claro que la captación celular y el flujo de hormonas tiroideas está mediado por proteínas transportadoras. Recientemente, se han identificado varios transportadores activos y específicos de hormonas tiroideas, incluyendo el transportador monocarboxilado 8 (MCT8), MCT10, y el polipéptido transportador de aniones orgánicos 1C1 (OATP1C1). Este último se expresa predominantemente en los capilares cerebrales y transporta en forma preferencial a T4, mientras que MCT8 y MCT10 se expresan en múltiples tejidos y y son capaces de de transportar diferentes iodotironinas. La importancia patofisiológica de los transportadores de hormonas tiroideas se ha establecido por la demostración de las mutaciones de MCT8 en pacientes con retardo psicomotor severo y niveles elevados de T3 sérica. El MCT8 pareciera ser que juega un papel importante en el transporte de hormonas tiroideas en el cerebro, el cual es esencial para la acción crucial de la hormona durante el desarrollo del cerebro. Es de esperar que se descubrirán nuevos transportadores específicos de hormonas tiroideas en el futuro cercano, que llevarán a una mejor comprensión de la regulación, específica de tejido, de la biodisponibilidad de las hormonas tiroideas. (Heuer H, Visser TJ. Endocrinology. 2009 150:1078-83). Comentarios. El resúmen se explica por si mismo. [L2-2] Conferencia Plenaria: Modulación Selectiva de los receptores de Hormonas Tiroideas para atacar a la Aterosclerosis, la Obesidad y la

Diabetes. JD Baxter. Diabetes Inst, Methodist Hosp Res Inst, Houston, TX NO HAY RESUMEN Resumen de publicación. A continuación sigue el resumen de una Revisión reciente: Las hormonas tiroideas ejercen influencia sobre el ritmo cardiaco, los lípidos del suero, el peso corporal y aspectos múltiples del metabolismo de lípidos, carbohidratos, proteínas, y minerales. Aunque el aumento de los niveles de las hormonas tiroideas puede mejorar los perfiles de lípidos del suero y reducir las grasas, estos efectos positivos están contrabalanceados por los efectos indeseables sobre el corazón, músculo y hueso. Por lo tanto, los intentos de usar las hormonas tiroideas para bajar los niveles de colesterol y el peso corporal han sido limitados hasta el momento. Sin embargo, en la última década se han desarrollado análogos de hormonas tiroideas con la propiedad de separar los efectos beneficiosos de los dañinos. Estas drogas podrían servir como nuevos y poderosos instrumentos para enfrentar dos de los problemas médicos más grandes en los países desarrollados y no desarrollados: la aterosclerosis y la obesidad. (Baxter JD, Webb P Nat Rev Drug Discov. 2009 8:308-20). Cometarios. Los agonistas del receptor de hormonas tiroideas subtipo-beta (TRbeta) han sido estudiados como potenciales agentes para el tratamiento de la hipercolesterolemia y la obesidad, así como el tratamiento de la diabetes. El agonista selectivo de TRbeta KB-141 induce aumentos entre 5-10% en el metabolismo basal y desciende los niveles de colesterol plasmáticos sin producir taquicardia en ratas delgadas, a diferencia de la principal hormona tiroidea, la T3. En estudios experimentales se observó que la KB-141 produce disminución de peso en animales obesos y tiene también efectos anti-diabetogénicos. En ratones ob/ob, la KB-141 disminuye el colesterol sérico, los triacilgliceroles, y los ácidos grasos libres séricos y hepáticos sin taquicardia. También mejora la tolerancia a la glucosa y la sensibilidad a la insulina en una forma dosis-dependiente, sin ningún efecto en el ritmo cardiaco. De esta manera, la KB-141 produce anti-obesidad, descenso de los lípidos y efectos anti-diabéticos sin taquicardia, sugiriendo que la activación TRbeta selectiva podría ser una estrategia útil para atenuar las principales características del síndrome metabólico (Bryzgalova G, J Steroid Biochem Mol Biol. 2008 111:262-7). [L3-1] Conferencia Plenaria Gerald D Aurbach: - Hormonas Reguladoras de Calcio: Nuevos Roles para Viejas Hormonas. D Goltzman. Med, McGill Univ/Royal Victoria Hosp, Montreal, Canada Resumen. La homeostasis del calcio está modulada en parte por las acciones catabólicas sobre el esqueleto de la hormona paratiroidea (PTH) y la 1,25 dihidroxivitamina D [1,25(OH)2D]. Más aún, el péptido relacionado con la PTH (PTHrP), cuando

se produce en exceso en los tumores malignos, puede inducir osteólisis. Consecuentemente, se piensa clásicamente que los 3 factores reguladores del calcio inducen pérdida de hueso. Los autores, utilizando ratones modificados genéticamente, encontraron que la PTH endógena es esencial para la formación de hueso trabecular en el feto, y que este efecto metabólico puede persistir en el adulto. A partir de estudios que utilizan ratones nulos para la PTHrP intacta, y de ratones que expresan una forma truncada de PTHrP, encontraron que se necesita PTHrP para el desarrollo normal del cartílago de crecimiento, principalmente vía la acción de su dominio amino-terminal, pero también en parte vía la acción de un dominio que consiste en una secuencia localizadora del núcleo y en el dominio carboxilo-terminal (dominio de localización nuclear). Más tarde en la vida, la PTHrP parece ser anabólica para el hueso, también por un mecanismo dual. A partir de estudios que utilizan deleciones dirigidas del gen cyp27b1, que codifica para la enzima que sintetiza 1,25(OH)2D, encontraron que la 1,25(OH)2D es esencial para la formación basal de hueso. Además, pudieron demostrar que la 1,25(OH)2D exógena tiene propiedades de formación de hueso, y por lo menos una parte de los efectos anabólicos de la PTH exógena parece deberse a su capacidad de estimular la producción de 1,25(OH)2D endógena. Aunque la PTHrP se ha asociado primariamente a su acción sobre el esqueleto, los animales KO para la PTHrP mueren en el período neonatal, y la deleción del dominio de localización nuclear produce retardo de crecimiento y mortalidad temprana, debido a sus efectos en múltiples tejidos derivados de las células madre neurales, hematopoyéticas, y mesenquemáticas. Aunque la acción de la vitamina D se ha relacionado primariamente con el esqueleto, varios estudios en humanos demuestran que la ingestión de vitamina D se asocia a reducción de la mortalidad, y a efectos beneficiosos sobre los sistemas cardiovascular e inmunológicos, así como también sobre el cáncer. En conclusión estos estudios demuestran acciones anabólicas y catabólicas de PTH, PTHrP y 1,25(OH)2D mediando la homeostasis esquelética y también implican a la PTHrP y a la vitamina D en la regulación de importantes hechos extra esqueléticos. Comentarios. El resúmen se explica por si mismo. [L3-2] Conferencia Plenaria: La Nueva Endocrinología del Hueso G Karsenty. Columbia Univ Med Ctr, New York, NY NO HAY RESUMEN. Resumen de publicación. La remodelación del hueso, el proceso por el cual los huesos se auto renuevan, está regulado por múltiples hormonas. La observación clínica de que la obesidad protege de la osteoporosis llevó a los autores a proponer que la remodelación de hueso y el metabolismo energético podrían estar regulados por la(s) misma(s) hormona(s). Demostraron que la leptina, una hormona derivada de los adipocitos, es un regulador importante de la remodelación ósea actuando sobre los osteoblastos a través de dos caminos nerviosos diferentes. Por un lado, la señalización simpática en los osteoblastos favorece la diferenciación osteoclástica induciendo la expresión de RANKL; por el otro, a

través de CART (transcripto regulado por cocaína anfetamina), la leptina inhibe la expresión de RANKL. La noción de que el cerebro regula la masa ósea se ha verificado experimentalmente en muchos laboratorios. Estos estudios plantearon inmediatamente una segunda pregunta: si la grasa y el cerebro regulan la remodelación del hueso actuando sobre los osteoblastos, ¿podrían los osteoblastos regular a su vez algún aspecto del metabolismo energético? En otras palabras, ¿el esqueleto es un órgano endocrino además de sus funciones conocidas? En la búsqueda de una hormona derivada del hueso que regule el metabolismo energético, generaron un ratón Osteocalcina-/- que mostró un fenotipo de exceso de masa ósea. Al analizar este ratón mutado comprobaron que tenía un exceso de grasa visceral (P. Ducy y G. Karseny, observación no publicada). Esta fue la primera evidencia sugiriendo que el esqueleto regula al metabolismo energético. Para identificar a los osteblastos enriquecidos en genes que afectan el metabolismo energético, generaron ratones transgénicos deficientes en genes que se expresan solamente o preferencialmente en los esteoblastos. De esta manera pudieron inactivar de una manera osteoblasto-específica al gen Esp, que se expresa en los osteoblastos y en las células de Sertoli y que codifica para una proteína tipo receptor tirosina fosfatasa llamada OST-PTP4. Los ratones Esp-/- son hipoglucémicos protegidos contra la obesidad y la intolerancia a la glucosa por un aumento en la proliferación de las células beta, y de la secreción y sensibilidad a la insulina, mientras que los ratones que carecen de Osteocalcina muestran intolerancia a la glucosa y disminución de la proliferación de células beta. Los estudios genéticos los análisis bioquímicos demuestran que los esteoblastos, vía osteocalcina, estimulan la proliferación de células beta y la expresión de los genes de Insulina y de Adiponectina, una adipokina que aumenta la sensibilidad a la insulina, que el fenotipo metabólico del ratón deficiente en Esp está causado por una ganancia en la bioactividad de osteocalcina, y que el OST-PTP regula indirectamente la modificación posttranscripcional de osteocalcina. Al revelar que el esqueleto ejerce una regulación tipo endocrina de la homeostasis de la glucosa, este estudio expande nuestro conocimiento del metabolismo energético y sus alteraciones. (N.K. Lee and G. Karsenty J Musculoskelet Neuronal Interact 2008; 8:351). [L4-1] Conferencia Plenaria: Nuevos trucos de un Viejo Dogma: Mecanismos celulares de la diferenciación sexual del cerebro MM McCarthy. Dept of Physiology, Univ of Maryland-Baltimore, Baltimore, MD NO HAY RESUMEN. Resumen de publicación. Se conoce desde hace más de 50 años que el cerebro es un órgano sensible a los efectos organizacionales permanentes de los esteroides gonadales. Avances recientes han revelado una variedad de mecanismos inesperados mediante los cuales los esteroides impactan sobre el perfil sináptico de núcleos hipotalámicos que son críticos para el control de la reproducción. Se comentan tres aspectos particulares: 1) el rol de las prostaglandinas en la masculinización del área preoptica y el control del comportamiento sexual masculino, 2) el rol de

GABA en el núcleo arcuato potencial control de la hipófisis anterior, y 3) y la activación no genómica de la fosfotidolinositol 3 (PI3) kinasa y el glutamato en el núcleo ventromedial, que es relevante en el control del comportamiento reproductivo de las hembras. La importancia de la comunicación célula a célula, sea ésta entre neuronas o entre neuronas y astrocitos, se destaca como un principio esencial de para expandir el impacto de los esteroides más allá de las células que expresan receptores nucleares de esteroides. El desarrollo del cerebro está influenciado por una multitud de factores exógenos, desde los genéticos hasta los ambientales. Variaciones tan sutiles como el fenotipo de las células vecinas, la intensidad de los impulsos sensitivos, y la atención materna recibida durante un corto período luego del nacimiento pueden imprimir una marca permanente sobre la red neuronal en desarrollo. Los esteroides gonadales constituyen una señal especialmente única para regular el desarrollo del cerebro en el sentido de que los niveles entre machos y hembras son diferentes, que son derivados endógenamente pero pueden ser imitados exógenamente, y que actúan en durante un período perinatal sensible en zonas específicas del cerebro para inducir modificaciones epigenéticas y permanentes, que dirigen las funciones del cerebro adulto. En este aspecto el papel del estradiol es central: 1) en el cerebro de los roedores el estradiol es un determinante primario de la masculinización luego de la aromatización de los andrógenos testiculares, y 2) se ha acumulado evidencia que el estradiol puede ser sintetizado en forma completa dentro del cerebro. Se enfatizan los nuevos conceptos de la acción de los estrógenos tanto para obtener las diferencias sexuales del cerebro como su rol trófico general y posible factor neroprotector endógeno. (McCarthy MM, Schwarz JM, Wright CL, Dean SL. J Neuroendocrinol. 2008 20:777-83). [L4-2] Conferencia Plenaria: Las vías cerebrales que regulan el peso corporal y la homeostasis de la glucosa JK Elmquist. Internal Med, Univ of Texas SW Med Ctr, Dallas, TX NO HAY RESUMEN Resumen de publicación. Las acciones centrales de la leptina son esenciales para el control homeostático de la masa de tejido adiposo, el metabolismo de la glucosa y el de muchos sistemas autonómicos y neuroendocrinos. En el cerebro, la leptina actúa sobre numerosos tipos celulares diferentes vía el receptor de leptina de forma larga (LepRb) (la variante de splicing del receptor de leptina necesaria para que la leptina ejerza sus efectos biológicos) para desencadenar sus acciones. La identificación precisa de los blancos celulares de leptina es fundamental para comprender los mecanismos de sus pleotrópicas acciones centrales. La baja abundancia relativa del ARNm de LepRb y la falta de anticuerpos selectivos para el receptor de leptina ha impedido una caracterización completa de su distribución en el cerebro del ratón. Para superar estas limitaciones y para encontrar una manera directa de identificar a las poblaciones celulares, los autores desarrollaron un nuevo ratón transgénico que expresa la recombinasa Cre en el locus LepR, específicamente en células que expresan el LepR. Cruzando el ratón LepRb-IRES-Cre con las líneas R26R-EYFP y R26R-LacZ de ratón reportero CRE pudieron marcar a las

neuronas que expresan LepRb, superando la necesidad de realizar hibridización in situ y evitando los problemas inherentes a la detección de la baja expresión de ARNm del LepR Los autores pudieron así caracterizar en forma sistemática la distribución del LepRb en el cerebro del ratón usando hibridización in situ en ratones salvajes, así como mediante el uso de inmunoreactividad EYFP (proteína fluorescente amarilla intensa) en la línea de ratón reportero LepRs-IRES-cre EYFP que puede mostrar altos niveles de co-expresión ARNm LepRb/EYFP. Se encontró una expresión sustancial de ARNm LepRb/EYFP en sitios hipotalámicos y extra hipotalámicos, incluyendo el núcleo dorsomedial del hipotálamo, el núcleo ventral pre-mamila, el área ventral tegmental, el núcleo parabranquial, y el complejo vagal dorsal. Se observó también, por primera vez, expresión en la corteza insular, el núcleo septal lateral, el área pre-optica medial, el núcleo linear rostral, y en el núcleo de Edinger-Westphal. La línea línea de ratón reportero LepRs-IRES-cre se usó para caracterizar químicamente a neuronas del cerebro medio que expresan receptor de leptina. Se encontró que la tirosina hidroxilasa y el reportero Cre, se co-expresaban en el área tegmental ventral y en otras neuronas dopaminérgicas del cerebro medio. Por fin esta línea se usó para mapear la extensión de las neuronas LepRb del sistema nervioso central sensibles a la leptina periférica. La línea de ratón reportero LepRs-IRES-cre es entonces útil para evaluar las características anatómicas y funcionales de las neuronas que expresan el receptor de leptina. (Scott MM, Lachey JL, Sternson SM, Lee CE, Elias CF, Friedman JM, Elmquist JK. J Comp Neurol. 2009 514:518-32). [L5-1] Conferencia Plenaria Roy O Greep: Nuevas Conceptos sobre las Viejas Teorías de como el Estrés Inhibe a la Reproducción – Un Rol para los Glucocorticoides FJ Karsch. Molecular and Integrative Physiology, Univ of Michigan, Ann Arbor, MI NO HAY RESUMEN Resumen de publicación. La elevación de glucocorticoides plasmáticos inducida por estrés produce una rápida inhibición de la secreción pulsátil de LH en ovejas ovariectomizadas mediante la reducción de la respuesta pituitaria al GnRH. Este efecto puede ser bloqueado por un antagonista no específico del receptor de glucocorticoides (GR) tipo II , el RU486. Se realizaron experimentos para aumentar la evidencia del rol mediador del GR tipo II y para investigar el sitio neuroendocrino y los mecanismos celulares que posibilitan este efecto inhibitorio del cortisol. Primero, se demostró que, un agonista específico del GR tipo II, la dexametasona, imita la acción supresora del cortisol sobre la respuesta hipofisaria a los pulsos de GnRH en las ovejas ovariectomizadas. Este efecto, que se medió antes de los 30 minutos, documentó que el efecto se produjo mediado por el GR tipo II. Luego se determinó que la exposición de células pituitarias ovinas en cultivo al cortisol redujo la respuesta de LH a la infusión pulsátil de GnRH al 50% dentro de los 30 minutos, indicando que el sitio de acción es hipofisario. Finalmente, se testeó la hipótesis de que la supresión de la respuesta hipofisaria al GnRH en ovejas ovariectomizdas es debida a una disminución de la concentración tisular del receptor de GnRH. Se observó que

aunque el cortisol suprimió la amplitud de los pulsos de LH inducidos por GnRH dentro de 1-2 horas, la cantidad de ARNm o proteína receptor de GnRH no fue afectada en el tiempo estudiado. En general, estas observaciones proveen evidencias de que el cortisol actúa vía el receptor de GnRH en la hipófisis para inducir una rápida disminución de la respuesta al GnRH independientemente de cambios en la expresión del receptor de GnRH. (Breen KM, Davis TL, Doro LC, Nett TM, Oakley AE, Padmanabhan V, Rispoli LA, Wagenmaker ER, Karsch FJ. Endocrinology. 2008 149:767-73). [L5-3] Conferencia Plenaria: El Factor Esteroidogenico 1 (SF-1): Regulando a Este Regulador Maestro del Sistema Endocrino HA Ingraham. Univ of California-San Francisco, San Francisco, CA NO HAY RESUMEN Resumen de publicación. A pesar de que muchos receptores nucleares son ligando-dependientes, se discute si la existencia de ligandos reguladores para algunos receptores es obligatoria, incluyendo al factor esteroidogénico 1 (SF-1). Aunque se descubrió por casualidad de que había unión de fosfolípidos de bacteria en la estructura del dominio de unión a ligando (LBD) del SF-1, estos lípidos podrían servir solamente como ligandos estructurales sin desencadenar respuestas. Se estudió entonces si fosfolípidos exógenos agregados podrían intercambiarse con estos lípidos de bacteria y unirse al SF-1. Los autores muestran por primera vez la estructura cristalina del LBD de SF-1 con la fosfatidilcolina intercambiada. Aunque los fosfolípidos de la fofatidilcolina imitan la conformación de los fosfolípidos de bacteria unidos, dos “loops” de superficie, el L2-3 y el L11-12, que envuelven la entrada al bolsillo de unión, varían significativamente entre las diferentes estructuras de los LBD de SF-1. Basados en estas observaciones los autores proponen la hipótesis de que un ligando unido podría controlar las conformaciones de los “loops” L2-3 y L11-12, y que residuos de aminoácidos conservados de estos “loops” dinámicos podrían influenciar la unión de ligandos y la función del receptor. Consistente con esta hipótesis es la demostración de que mutantes de los “loops” L11-12 de SF-1 y el mutante humano R255L del “loop” L2-3 impiden el intercambio de fosfolípidos y disminuyen la transcripción. La enfermedad endocrina asociada a esta mutación L2-3 y los datos bioquímicos y celulares acá presentados sugieren que residuos críticos ubicados en la boca del bolsillo de unión de ligandos son necesarios para una unión eficiente y para lograr una actividad funcional de SF-1 óptima. (Sablin EP, Blind RD, Krylova IN, Ingraham JG, Cai F, Williams JD, Fletterick RJ, Ingraham HA. Mol Endocrinol. 2009 23:25-34). [L6-1] Conferencia Plenaria: Receptores Nucleares y Enfermedades Atopicas P Chambon. Functional Genomic, Inst de Genetique et de Biol Moleculaire, Illkirch, France NO HAY RESUMEN Resumen de publicación La dermatitis atópica (AD) es frecuentemente el paso inicial en la “marcha atópica” dado que más de la mitad de los pacientes con AD moderada o severa

desarrollan asma más tarde en la vida. Ambos, la AD y el asma comparten un fenotipo “atópico” similar que incluye inflamación T helper tipo 2 con eosinofilia e inmunoglobulinemia hyper-IgE, pero los mecanismos moleculares que causan la marcha “atópica” permanecen sin aclararse. Los autores demostraron que la expresión inducida de linfopoietina estromal tímica (TSLP) en keratinocitos epidérmicos de ratón luego de la aplicación tópica de MC903 (un análogo calcémico de la vitamina D3) no solamente desencadena AD sino también agrava el asma alérgica experimental inducida por desafío de hipersensibilidad a la ovoalbúmina. El modelo de ratón propuesto para estudiar la marcha “atópica” indica que la TSLP producida por keratinocitos podría representar un factor importante en el nexo entre la dermatitis atópica y el asma. (Zhang Z, Hener P, Frossard N, Kato S, Metzger D, Li M, Chambon P. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009 106:1536-41. [L6-2] Conferencia Plenaria: Inhibidores de Aromatasa y Cáncer de Mama AM Brodie. Pharmacology, Univ of Maryland Med Sch, Baltimore, MD NO HAY RESUMEN Resumenes de publicaciones El artículo describe los orígenes y la evolución de la medicina “anti-estrógenica” para el tratamiento y prevención del cáncer de mama. El desarrollo de drogas que tienen como blanco directo (tamoxifeno) o indirecto (inhibidores de aromatasa) al receptor de estrógenos (ER) ha mejorado el pronóstico del cáncer de mama y ha avanzado significativamente el cuidado de la salud. El desarrollo de estos principios de tratamiento y su éxito ha llegado a ser un modelo de medicina molecular y presagiado el testeo actual de numerosas drogas para todas las formas de cáncer. La investigación clínica aplicada con el tamoxifeno para impactar sobre el ER con la duración apropiada (5 años) de terapia ha contribuido a la caída de la tasa nacional americana de muerte por cáncer de mama. Además, la exploración de la farmacología endocrina del tamoxifeno y de los antiestrógenos no esteroideos relacionados (por ejemplo, el keoxifeno ahora conocido como raloxifeno) tuvo como resultado el reconocimiento en el laboratorio de la modulación selectiva del ER el desarrollo del concepto de usar el raloxifeno para la prevención de la osteporosis y del cáncer de mama. Sin embargo, la evaluación extensa del tratamiento con tamixifeno reveló la existencia de pequeños pero significativos “efectos secundarios” tales como cáncer de endometrio, coágulos sanguíneos y el desarrollo de resistencia al tratamiento. La solución fue el desarrollo de drogas que actúen sobre la enzima aromatasa específicamente para prevenir la conversión de androstenodiona en estrona y subsecuentemente en estradiol. La investigación clínica aplicada exitosa con el inhibidor suicida 4-hidroxiandrostenodiona (conocido como formestano) fue pionera para el desarrollo de un número de inhidores de aromatasa orales que son ya sea inhibidores suicidas (exesmetano) o competitivos (letrozol y anastrazole) de la enzima aromatasa. El tratamiento con inhibidores de la aromatasa está mostrando ser exitoso y se asocia con reducción de la incidencia de cáncer endometrial y coágulos sanguíneos cuando se la compara con el tamoxifeno. También hay una baja resistencia al tratamiento, de manera que este tratamiento puede ser secuencial. Actualmente, los ensayos clínicos están evaluando la utilidad de los inhibidores de la aromatasa como agentes quimio-

preventivos para las mujeres postmenopáusicas (Jordan VC, Brodie AM Steroids. 2007 72:7-25). Se ha observado que, en el modelo de xenotransplante intratumoral de aromatasa (Ratones hembra atímicos “nude” transfectados con el gen de aromatasa humano e inoculados con células cancerígenas de mama MCF-7Ca), los tumores comienzan eventualmente a crecer a pesar de la inhibición prolongada del crecimiento tumoral durante el tratamiento continuado con letrozol. En las células aisladas de estos tumores tratados largo tiempo con letrozol (LTLT-Ca) los niveles del ERalfa están disminuídos, mientras que los de las proteínas de señalización de la cascada proteína kinasa activada por mitógenos (MAPK) estaban aumentados junto con los del receptor de factor epidérmico humano 2 (Her-2). Por ello evaluaron los efectos de la suspension del tratamiento con letrozole sobre el crecimiento de los tumores y células resistentes al letrozol. Las células formaron tumores en forma activa y similar en la ausencia o presencia de letrozol presentando las mismas velocidades de crecimiento. Luego de suspender el tratamiento durante 6 meses, se reinició el tratamiento con letrozole. Se observó un marcado retroceso del crecimiento tumoral en el segundo ciclo de tratamiento con letrozol. El crecimiento de xenoinjertos MCF-7Ca tuvo efectos similares luego de un descanso de 6 semanas en el tratamiento con letrozol. Para comprender el mecanismo de este efecto, las células LTLT-Ca se cultivaron en ausencia de letrozol durante 16 semanas, las células resultantes (RLT-Ca) exhibieron propiedades a las células MCF-7Ca. El crecimiento celular fue inhibido por letrozol y estimulado por estradiol. La expresión de la MAPK fosforilada estaba disminuida y el ERalfa y la aromatasa aumentados comparando con células LTLT-Ca y eran similares a los de las células MCF-7Ca. Estos resultados indican que la suspensión del tratamiento puede revertir la resistencia al letrozol. Esta podría ser una estrategia beneficiosa para prolongar la respuesta a los inhibidores de aromatasa, en los pacientes con cáncer de mama. (Sabnis GJ, Macedo LF, Goloubeva O, Schayowitz A, Brodie AM Cancer Res. 2008 68:4518-24) [L7-1] Conferencia Plenaria Premio al Investigador Clínico: Péptidos Similares al Glucagon (GLP-1) – Mecanismos de Acción y Relevancia Terapéutica DJ Drucker. SLRI, Mt Sinai Hosp, Toronto, Canada NO HAY RESUMEN Resúmenes de publicaciones. Se revén los mecanismos que regulan la síntesis, secreción, acciones biológicas, e importancia terapéutica de los péptidos incretinas, polipéptido insulinotrópico dependiente de glucosa (GIP) y péptido similar al glucagon (GLP-1). Se hace énfasis en los avances recientes relacionados con la comprensión de la biología de GIP y de GLP-1. Ambos, GIP y GLP-1, son segregados dentro de minutos de la ingestión de nutrientes y facilitan la utilización rápida de los nutrientes ingeridos. Ampos péptidos comparten acciones comunes sobre las células beta de los islotes, actuando sobre receptores estructuralmente diferentes pero relacionados.La activación de los receptores de incretinas estimula la secreción de insulina dependiente de

glucosa, proliferación de células beta, y aumento de la resistencia a la apoptosis. GIP también promueve el almacenamiento de energía vía acciones directas sobre el tejido adiposo, y estimula la formación de hueso vía estimulación de la proliferación de los osteoblastos e inhibición de la apoptosis. En contraste, GLP-1 ejerce acciones glucoregulatorias vía enlentecimiento del vaciamiento gástrico e inhibición de la secreción de glucagon dependiente de glucosa. GLP-1 también promueve la saciedad y la activación sostenida del receptor de GLP-1 está asociada a pérdida de peso tanto en estudios pre-clínicos como clínicos. La degradación rápida de ambos, GIP y GLP-1 por la enzima dipeptidil peptidasa-4 ha llevado al desarrollo de agonistas del receptor de GLP-1 resistentes a la degradación y de inhibidores de la dipeptidil peptidasa-4 para el tratamiento de la diabetes. Estos agentes disminuyen los niveles de hemoglobina A1c (HBA1c) en forma segura sin aumento de peso en sujetos con diabetes tipo 2. GLP-1 y GIP integran señales derivadas de los nutrientes para controlar la ingestión de comida, la absorción de energía y asimilación. Los agentes terapéuticos recientemente aprobados basados en la potenciación de las acciones de las incretinas proveen un enfoque fisiológico nuevo para el tratamiento de la diabetes tipo 2. (Baggio LL, Drucker DJ. Gastroenterology. 2007 132:2131-57). En esta revisión, se comenta la eficacia del nuevo péptido agonista de los receptores de glucagon y de GLP-1 que tiene potentes y sostenidos efectos de inducción de saciación y lipólisis. Modificaciones químicas selectivas del glucagon resultaron en una pérdida de especificidad, sin pérdida de la actividad inherente. La base estructural para el co-agonismo parece ser una combinación de interacciones posicionales locales y cambios en la estructura secundaria. Se estudiaron, en modelos de obesidad de roedores, dos péptidos co-agonistas que se diferencian solamente en el nivel de agonismo por el receptor de glucagon. La administración de péptidos PEGilados (de acción prolongada) una vez por semana, normalizó la adiposidad y la tolerancia a la glucosa en ratones con obesidad inducida por dieta. La disminución del peso se obtuvo por pérdida de masa grasa secundaria a disminución de la ingestión de grasa y aumento del gasto de energía. Estos estudios pre-clínicos indican que cuando se aumenta plenamente el agonismo GLP-1 con un grado adecuado de activación del receptor de glucagon, la reducción de la grasa corporal se logra sin ningún efecto adverso visible. (Day JW, Ottaway N, Patterson JT, Gelfanov V, Smiley D, Gidda J, Findeisen H, Bruemmer D, Drucker DJ, Chaudhary N, Holland J, Hembree J, Abplanalp W, Grant E, Ruehl J, Wilson H, Kirchner H, Lockie SH, Hofmann S, Woods SC, Nogueiras R, Pfluger PT, Perez-Tilve D, Dimarchi R, Tschöp MH. Nat Chem Biol. 2009). [L7-2] Conferencia Plenaria: Una etiología Mitocondrial de la Diabetes y el Sindrome Metabólico. DC Wallace. Univ of California, Irvine, CA NO HAY RESUMEN Resumen de publicación La medicina occidental está en crisis. Se gastan recursos cada vez más elevados para combatir las enfermedades relacionadas con la vejez que incluyen la diabetes y el síndrome metabólico, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad cardiovascular, y el cáncer. Sin

embargo, las causas de estas enfermedades permanecen en el misterio, mientras que la incidencia y morbilidad, o permanece igual o aumenta. Las grandes inversiones en la investigación biomédica del pasado reciente han dado como resultado logros impresionantes, incluyendo la secuenciación del ADN cromosómico humano, la identificación de cientos de miles de polimorfismos de nucleótido único de los cromosomas humanos (SNPs) y la identificación de agregados regionales de SNPs cromosómicos (el HapMap). Si embargo, estos logros han fracasado en revelar las causas genéticas de las enfermedades comunes relacionadas con la vejez, tal como se había anticipado. Por ejemplo, una serie de “scans” de todo el genoma incluyendo miles de SNPs cromosómicos en más de 32000 sujetos encontró 9 sitios polimórficos que explican solamente una pequeña proporción del riesgo total de diabetes. Thomas Kuhn, en su libro La Estructura de las Revoluciones Científicas, ha argumentado que cuando el esfuerzo científico gastado en un problema aumenta y simultáneamente la productividad decae, entonces la dificultad está en los supuestos (paradigmas) en los que se basa la investigación. Durante los últimos 100 años, la ciencia biomédica Occidental se ha sostenido en dos pilares filosóficos: el paradigma anatómico de la medicina y paradigma Mendeliano de la genética. El paradigma anatómico de la medicina tuvo su comienzo en el trabajo de Vesalius, quien fue el que primero describió los órganos del cuerpo humano hace 450 años. Desde entonces los médicos y los científicos de la medicina se han especializado en distintos órganos individuales y sus manifestaciones de enfermedad asociadas, llevando a la creación de los campos de la neurología, oftalmología, nefrología, cardiología, endocrinología, etc. La compartamentalización de la medicina ha llevado también a varios corolarios generalmente aceptados: los síntomas asociados a un órgano son el resultado de problemas específicos de ese órgano, los que a su vez son el resultado de defectos de genes y proteínas específicas de tejido, y los defectos específicos de proteínas deben ser tratados con drogas que interactúan específicamente con las proteínas específicas de tejido defectuosas. El paradigma Mendeliano de la genética sostiene que los rasgos genéticos se trasmiten a través de las generaciones de acuerdo a las leyes de Gregor Mendel. El corolario médico asociado es que si un rasgo clínico se trasmite de una forma Mendeliana, es genético, pero si no, entonces esa característica debe ser consecuencia de factores ambientales. Este corolario se formaliza a través de la estimación de hereditabilidad mediante la división de la frecuencia en que un rasgo fenotípico se comparte en mellizos idénticos por la frecuencia en que se comparte en mellizos fraternales. Sin embargo, debido a que la genética Mendeliana es el resultado de la dinámica cromosómica, el paradigma Mendeliano es específico para los genes del ADN nuclear (ADNn). Aunque el paradigma anatómico de la medicina y el paradigma Mendeliano de la genética que han influido poderosamente a las relaciones médicas durante el último siglo, están fallando en encontrar soluciones para las enfermedades comunes relacionadas con la edad. Para resolver la crisis y volver a la “ciencia normal” productiva debe generarse un nuevo paradigma que incluya las fortalezas del paradigma previo pero que agregue elementos nuevos que enfrenten a los problemas actuales. ¿Cuáles pueden ser los componentes faltantes de los paradigmas anatómico y Mendeliano necesarios para comprender a las enfermedades relacionadas con la edad?

La primera sugerencia de respuesta a esta pregunta vino con la publicación de 3 artículos en 1988-hace 20 años. El primer artículo informó que deleciones en el ADN extra nuclear de las mitocondrias (ADNmt) pueden asociarse con una patología muscular característica que incluye fibras musculares rojas rasgadas y mitocondrias anormales llamada miopatía mitocondrial. Las deleciones del ADN mitocondrial y la miopatía mitocondrial fueron posteriormente asociadas con la oftalmoplejía progresiva crónica espontánea. El segundo artículo demostró que una mutación sin sentido del nucleótido 11778 (G > A) polipéptido ND4 en el ADNmt (R340H) produce la neuropatía óptica hereditaria de Leber (LHON) con herencia materna. El tercer artículo aprovechó la transmisión hereditaria materna para asociar a una enfermedad del cerebro y del músculo, llamada epilepsia mioclónica con fibras rojas rasgadas, con alteraciones en las mitocondrias, una conclusión que luego se confirmó mediante la identificación de la mutación mitocondrial que la causa. Siendo que el ADNmt codifica para proteínas del metabolismo energético mitocondrial estos artículos tuvieron dos implicancias principales. Primero, enfermedades humanas que afectan un amplio rango de órganos puede ser provocadas por defectos en el metabolismo energético, y segundo, enfermedades humanas hereditarias podrían ser consecuencia de mutaciones en el ADNmt no-Mendeliano. En consecuencia, la biología y la genética mitocondrial podrían ser excelentes candidatos para estudiar las complejidades de las enfermedades relacionadas con la edad, el envejecimiento y el cáncer. La vida implica un inter-juego entre la estructura y la energía. Para la célula eucariota, esta dualidad se generó hace alrededor de 2 billones de años por la simbiosis de lo que aparentemente fue una célula móvil glucolítica que dió lugar al núcleo-citosol, y una α-protobacteria, que evolucionó luego a la mitocondria. Inicialmente ese organismo vivió libremente y contenía todos los genes necesarios para una forma de vida independiente. Sin embargo, durante los 1,2 billones de años subsiguientes, los descendientes unicelulares de esta simbiosis experimentaron muchos rearreglos alternativos de interdependencia bioquímica y reorganización genómica. Finalmente, se llegó a un arreglo en el cual la mitocondria se especializó en la producción de energía y el núcleo-citosol se especializó en la estructura. Este diseño final impulsó el desarrollo de la multicelularidad y la evolución de las plantas superiores y de los animales, incluyendo los humanos. La restructuración del genoma proto-mitocondrial incluyó la transferencia de virtualmente todos los genes del genoma mitocondrial, alrededor de 1500 al ADNn cromosómico. Aún así, el ADNmt persistió y todavía conserva 13 genes que codifican proteínas más un gran gen de ARNr y 22 de genes ARNt. Todos los polipéptidos codificados por el ADNmt son subunidades “core” de los complejos enzimáticos del aparato mitocondrial generador de energía, la fosforilación oxidativa (OXPHOS). En la OXPHOS, los equivalentes reducidos (electrones) derivados de las calorías de nuestra dieta son transferidos a través de una serie de complejos enzimáticos redox localizados en la membrana interna de la mitocondria, llamada la cadena transportadora de electrones. En el proceso, la energía potencial se convierte en uniones fosfato gamma de alta energía del ATP, que puede ser usada para generar trabajo químico y/o calor para mantener la temperatura corporal. Otro producto de la OXPHOS son las especies reactivas del oxígeno (ROS), que proveen un sistema de señales desde la mitocondria al núcleo. Sin embargo, cuando la producción de ROS es

excesiva, la mitocondria y el ADNmt pueden dañarse. Las mitocondrias dañadas deben removerse por apoptosis. Esto se logra por activación del poro de transición de permeabilidad mitochondrial (PTPmt), que detecta el exceso de estrés oxidativo, reduce el potencial electroquímico y los fosfatos de alta energía, y la captación excesiva de calcio. Si fue beneficioso que los primeros 1500 genes mitocondriales se transfirieran al núcleo, ¿porqué no los últimos 13? Sin embargo, todos los organismos oxidativos de la línea hongo-animal retienen en el ADNmt los mismos genes. Por lo tanto, el ADNmt debe ser importante. Una mutación en cualquiera de los polipéptidos dentro del ADNmt afectaría el circuito energético y tendría consecuencias fisiológicas sobre todos los otros. El intercambio al azar de polimorfismos genético-proteicos entre diferentes linajes de ADNmt resultaría en una combinación incompatible de elementos genéticos resultando en una falla energética. Para evitar esta mezcla al azar, es necesario prohibir que los genes de los diferentes linajes de ADNmt entren en recombinación. Esto se logra haciendo que el ADNmt se herede de un solo progenitor, la madre en el caso de los humanos y de la mayoría de las especies. El ADNmt tiene una alta frecuencia de mutación en los tejidos somáticos. Por ello los rearreglos del ADNmt y las mutaciones por sustitución de bases se acumulan con la edad en múltiples tejidos. Como resultado, esta acumulación de mutaciones del ADNmt y la declinación de la función mitocondrial consecuente serían un factor importante del reloj biológico de la vejez. Dos líneas de evidencias sugieren que la acumulación de mutaciones somáticas es la causa del envejecimiento en los mamíferos. La introducción de un gen que favorece el error en el ratón produjo una aceleración de la velocidad de mutación del ADNmt y un fenotipo de envejecimiento prematuro. También, la generación de un ratón transgénico en el cual la enzima antioxidante peroxisomal catalasa se redirigió hacia la matriz mitocondrial resultó en una prolongación de la vida junto con una disminución del daño oxidativo y nivel de mutaciones del ADNmt. Una síntesis de estos conceptos genómicos mitocondriales provee un modelo plausible de la predisposición y desarrollo de enfermedades relacionadas con la vejez. En este escenario, un individuo nace con una capacidad energética mitocondrial inicial basada en la variación hereditaria en los genes codificados en los ADNn y ADNmt. Las variaciones relevantes del ADNn podrían afectar la producción energética mitocondrial, las defensas antioxidantes, los límites de apoptosis, la biogénesis y regeneración de las mitocondrias, etc. A medida de que el individuo envejece, surgen mutaciones somáticas del ADNmt en las células post-mitóticas y en las células madre, estas mutaciones se amplifican en forma clonal dentro de cada célula afectada. La amplificación clonal intracelular puede ser o el resultado del desvío genético durante la regeneración de mitocondrias en sucesivas divisiones celulares o, alternativamente, el resultado de amplificaciones selectivas del ADNmt mutado. A medida de que el ADNmt mutado se acumula, va erosionando progresivamente la capacidad energética de cada célula. Finalmente, la energética celular cae debajo del mínimo necesario para la función celular y tisular, y para la sobrevida. Esto lleva a una declinación de las funciones orgánicas, pérdidas del número de células, falla tisular, y a un fenotipo de vejez.

Mientras que los defectos mitocondriales son sistémicos, las manifestaciones clínicas son frecuentemente órgano-específicas. Esto se explica porque los diferentes tejidos y órganos del cuerpo tienen necesidades y roles diferentes en la homeostasis de la energía, la anatomía energética del cuerpo. Algunos tejidos requieren altos niveles de ATP mitocondrial, tales como la retina del ojo, la cóclea del oído, los otros componentes del sistema nervioso central, el corazón, los músculos, y el sistema renal. Estos órganos se afectan preferencialmente a medida que declina la producción de energía. Otros tejidos almacenan la energía como grasa. Los tejidos adiposos blancos almacenan la grasa para la producción de ATP futura, mientras que los tejidos adiposos pardos la almacenan para la regulación térmica futura. El hígado es un tejido homeostático de energía. Las células pancreáticas alfa y beta son tejidos sensores de energía. Monitorean el tipo de calorías y su disponibilidad, y envían señales apropiadas, glucagon o insulina, a los tejidos homeostáticos que almacenan o utilizan la energía. La dualidad eucariota núcleo celular-citosol + mitocondria completa el paradigma biomédico humano. El organismo núcleo-citosol se especializa en elaborar nuevas estructuras cambiando la expresión de genes y proteínas órgano y tejido-específicos a través de los reguladores del desarrollo. Los genes nucleares son bi-parentales, permitiendo que se combinen los alelos materno y paterno para maximizar la capacidad para la diversificación. Las dos copias de cada gen resultan también en manifestaciones fenotípicas y bioquímicas cuantificadas de los locus bialélicos (+/+, +/-, y -/-), facilitando la expresión de nuevas combinaciones. En contraste, el organismo mitocondria se especializa en la energética. Los genes mitocondriales son uniparentales, están presentes en miles de copias por célula, y tienen una rápida evolución de sus secuencias. Por lo tanto es posible que haya una distribución porcentual gradual y continua de ADNmt mutantes de un locus bialélico, resultando en cambios bioquímicos graduales y una genética cuantitativa ventajosa para adaptarse a los cambios graduales del entorno. Por lo tanto, la adaptación estructural de los genes del ADNn y la adaptación energética del ADNmt proveen al animal con una capacidad multidimensional para adaptarse a cambios ambientales, aportando una medicina evolutiva coherente. Ambos generan paso a paso y en forma gradual cambios genotípicos y consecuentemente fenotípicos proveyendo una genética médica coherente. También estos dos sistemas actuando en conjunto, proveen todos los parámetros necesarios para comprender la biología y la genética de las enfermedades relacionadas con la edad. Si bien la célula eucariota bipartita provee una explicación para muchos de los fenómenos inexplicables de las enfermedades relacionadas con la edad, ¿será útil para hacer predicciones que resulten en nuevos tratamientos para estas enfermedades? Lamentablemente, se han invertido pocos recursos para estudiar la biología y genética de las mitocondrias. Sin embargo, se han descubierto unas pocas drogas que aumentan la función mitocondrial. Por ejemplo, las que estimulan la transcripción de genes mitocondriales codificados por ADNn como agonistas del factor de transcripción del PPARγ (rosiglitazona) o las que estimulan la deacetilación del coactivador de PPARγ, PGC-1α, via agonistas de SIRT1 (resveratrol). La oxidación de ácidos grasos mitocondrial puede estimularse con bezfibrato, y los efectos adversos de la producción de ROS mitocondrial con antioxidantes naturales (ácido lipoico, vitaminas A y C,

etc). La apoptosis se modula regulando el PTPmt usando ciclosporina A, y se intenta regular la metabolización mitocondrial por la autofagia. Sin embargo, otros intentos terapéuticos están limitados por la falta de conocimientos básicos sobre la biología de las mitocondrias. Un enfoque promisorio podrían ser las tradicionales medicaciones de Asia con hierbas. A diferencia del desarrollo de drogas en la farmacología Occidental, que requiere que exista un blanco conocido sobre el que actuaría la droga, los medicamentos tradicionales de Asia se descubrieron por ensayo y error, sobre la base de que es lo que hace sentir mejor al paciente. Esto puede ser ineficiente pero no está influenciado por paradigmas. Estas hierbas medicinales podrían afectar la función energética mitocondrial. Se ha desarrollado un “cDNA expression array” que incluye alrededor de 1000 genes involucrados en la producción de energía mitocondrial, la biología de ROS, y la apoptosis. Algunas drogas encontradas que actúan sobre las mitocondrias son el extracto de hojas de Ginkgo biloba, el agente antimalaria Artemisinin (quinghaosu) y el derivado de la hierba china deoxisppanona B que aumenta la OXPHOS y disminuye la ROS mitocondriales. Quizás, entonces, una búsqueda sistemática de las hierbas medicinales chinas y su acción sobre las mitocondrias pueda revelar caminos mitocondriales desconocidos y desarrollar nuevas estrategias terapéuticas para tratar las enfermedades relacionadas con la edad. Si esta estrategia es exitosa, adquiriría relevancia ese concepto tradicional de la medicina asiática, llamado “chi” que podría traducirse liberalmente como “factor vital o energía”. (Wallace DC Genetics. 2008 June; 179:727–735). [L8-1] Genómica, Proteómica y Otras "ómicas" en Medicina Cardiovascular A Dominiczak. BHF Glasgow Cardiovascular Res/Univ of Glasgow, Glasgow, UK NO HAY RESUMEN Resúmenes de publicaciones La insuficiencia cardíaca es una carga económica y social para la sociedad y su prevalencia está en aumento. A pesar de los avances de los últimos años el manejo de manejo de la falla cardíaca sigue siendo un desafío. El diagnóstico se hace convencionalmente sobre la base de una combinación de historia, examen físico, y evaluación de la función ventricular izquierda. Sin embargo, estos estudios estándar pueden ser inadecuados ya que muchos de los signos y síntomas son inespecíficos. Aún con los los sustanciales avances terapéuticos recientes, los pacientes con insuficiencia continúan con síntomas progresivos y tienen últimamente una vida acortada. Hay una necesidad real de disponer de biomarcadores simples para facilitar el diagnóstico, determinar el pronóstico, y ayudar en el manejo de este complejo síndrome. Un biomarcador se puede definir como un evento medible en un sistema biológico que indica la existencia de una alteración en la fisiología que lo diferencia de lo normal. El biomarcador ideal debe reunir varias condiciones. Además de ser biológicamente lógico, debe ser sensible y específico para el diagnóstico, e idealmente aplicable a todos los subgrupos independientemente de la edad, género, raza, y aún etiología. El ensayo debe ser fácil de realizar reproducible

entre diferentes laboratorios. Finalmente, un biomarcador ideal debe demostrar una relación temporal reflejando los cambios en el status clínico. En la aplicación clínica debe complementar y aumentar el saber clínico en términos de diagnóstico, pronóstico o respuesta terapéutica. A medida de que nuestro conocimiento de la patofisiología de la falla cardíaca ha progresado desde un simple modelo hemodinámico a un complejo síndrome multi-sistémico, el porfolio de candidatos se ha expandido en forma acorde, variando desde un parámetro dado de laboratorio de rutina a nuevos péptidos. El desafío más importante es trasladar esto a una mejoría tangible del cuidado clínico y la aplicación de las terapias más intensas y frecuentemente más costosas a aquellos que están en mayor riesgo. (J. P. Rocchiccioli, J. J. V. McMurray, A. F. Dominiczak, Biomarkers in heart failure: a clinical review, Heart Fail Rev. 2008). A partir de estudios en modelos animales se han identificado varios genes candidatos a estar involucrados en las enfermedades cardiovasculares. Hay una tendencia a realizar estudios en gran escala de asociación amplia al genoma, sujetos a criterios de estricta calidad tanto en relación al genotipo como al fenotipo. (Delles C, McBride MW, Padmanabhan S, Dominiczak AF. Trends Endocrinol Metab. 2008 19:309-16). Entre las enfermedades complejas comunes, la hipertensión ha sido especialmente desafortunada dentro del reciente surgimiento de resultados positivos a partir de estudios en gran escala de asociación amplia al genoma. Los problemas enfrentados por los estudios genético de la hipertensión no son únicos, pero la caracterización fenotípica, la heterogenicidad y la alta prevalencia la hace un caso especial, requiriendo un enfoque individualizado. Se piensa que aun en presencia de un componente ambiental fuerte, el riesgo de hipertensión es relevante para el modelo enfermedad común/variante común pero exige un diseño especial para los estudios en gran escala de asociación amplia al genoma. Es probable que la relación de riesgo individual para variantes de la enfermedad sería menor de 1,3 y aunque individualmente estos efectos son de pequeño tamaño, la combinación de varios polimorfismos comunes puede tener un riesgo sustancial atribuible a la población. La identificación de variantes génicas de hipertensión debería dar información novedosa sobre la susceptibilidad, progresión y severidad. Podría llevar a la identificación de posibles conclusiones sobre estilo de vida e intervención farmacológica con el objetivo último de mejorar la prevención, el diagnóstico y el tratamiento. (Padmanabhan S, Melander O, Hastie C, Menni C, Delles C, Connell JM, Dominiczak AF. J Hypertens. 2008 26:1275-81). [L8-2] Disección de la Genética Molecular de la Hipertensión Humana y sus Consecuencias. RP Lifton. Howard Hughes Med Inst, Yale Univ Sch of Med, New Haven, CT NO HAY RESUMEN Resúmenes de publicaciones El aldosteronismo primario es una causa importante de hipertensión secundaria (HTN), pero los mecanismos que regulan la característica secreción de aldosterona independiente de renina permanecen no aclarados en la mayoría de los pacientes. Se reporta una nueva forma familiar de aldosteronismo en un padre y sus dos hijas. En todos se diagnosticó una HTN severa refractaria al tratamiento médico alrededor de los 7 años de edad. Los estudios bioquímicos

revelaron hiporeninemia, hiperaldosteronismo y niveles muy elevados de 18-oxocortisol y 18-hidroxicortisol, esteroides que reflejan oxidación por ambas 17-alfa hidroxilasa y aldosterona sintasa. Estas enzimas están normalmente compartamentalizadas en la fasciculata y glomerulosa respectivamente. La administración de dexametasona no suprimió la secreción de aldosterona ni la de cortisol; estos hallazgos distinguen a este síndrome clínico de aldosteronismo remediable por glucocorticoides, otra forma autosómica dominante de HTN, y sugieren un defecto global en la regulación de la producción de esteroides suprarrenales. Los estudios genéticos excluyeron una mutación en el sitio de la aldosterona sintasa, distinguiendo este trastorno aún más del aldosteronismo remediable por glucocorticoides. Debido a su HTN intratable los pacientes fueron suprarrenalectomizados en forma bilateral, que pudo corregir la HTN en todos los casos. Las glándulas suprarrenales estaban muy agrandadas, con pesos del par de glándulas tan altos como 82 g. La histología reveló hiperplasia masiva e hipertrofia celular de un solo compartimento con las características de fasciculata o zona transicional, con una glomerulosa atrófica. Estos hallazgos definen una nueva forma hereditaria de aldosteronismo y sugieren que la identificación de la alteración subyacente dará nueva información sobre los mecanismos normales que regulan la biosíntesis de los esteroides suprarrenales. (Geller DS, Zhang J, Wisgerhof MV, Shackleton C, Kashgarian M, Lifton RP. A novel form of human mendelian hypertension featuring nonglucocorticoid-remediable aldosteronism. J Clin Endocrinol Metab. 2008 93:3117-23) Hasta ahora se habían descripto dos formas familiares de aldosteronismo primario [hiperaldosteronismo familiar (FH)], llamadas FH-I, o aldosteronismo remediable por glucocorticoides (GRA), y FH-II. Esta forma nueva de aldosteronismo primario podría llamarse FH-III, y se caracteriza por severa hipertensión en la niñez temprana asociada a aldosteronismo, hipokalemia y daño orgánico, resistente al tratamiento anti-hipertensivo agresivo, incluyendo espironolactona y amiloride, y requiriendo entonces suprarrenalectomía bilateral. Los autores no pudieron identificar la alteración genética responsable de la enfermedad. FH-I/GRA se trasmite en forma autosómica dominante y se caracteriza por hipertensión, secreción de aldosterona dependiente de ACTH, supresión de renina, y niveles altos de esteroides híbridos, 18OHcortisol (18OHF) y 18-oxo-cortisol (18oxo-F). El defecto genético que produce FH-1/GRA es una recombinación genética desigual entre la CYP11B1 (11β-hidroxilasa) y CYP11B2 (aldosterona sintasa) que genera un gen CYP11B1 quimérico conteniendo las secuencias del CYP11B1 (incluyendo el promotor) y su extremo 5´ y secuencias CYP11B2 en su extremo 3´. Debido a que la expresión del CYP11B1 está regulada por el ACTH, el gen híbrido codifica para una enzíma quimérica con actividad aldosterona sintasa y expresión dependiente de ACTH a través de toda la corteza suprerrenal. Por lo tanto, en los pacientes FH-1/GRA los niveles de aldosterona son suprimidos por la administración de glucocorticoides. La mayoría de los pacientes afectados desarrollan HTN severa en edades tempranas, pero también se describen pacientes con HTN moderada o normal en muchas familias. La FH-II es una forma familiar de aldosteronismo primario no remediable por glucocorticoides. Los pacientes afectados presentan una historia familiar de aldosteronismo causado ya sea por adenoma o hiperplasia suprarrenal. Cada caso de FH-II es indistinguible clínica, bioquímica, o morfológicamente, de

formas aparentemente esporádicas de aldosteronismo primario. En la mayoría de las familias la trasmisión vertical sugiere una herencia autosómica dominante. El diagnóstico de FH-II se basa en la demostración de aldosteronismo primario en por lo menos dos miembros de una misma familia. Lamentablemente, la genética del FH-II permanece desconocida, y por lo tanto, el diagnóstico se basa por el hallazgo de una relación aldosterona/renina alta, sin medicación que interfiera, con una prueba confirmatoria (sobrecarga salina ± fluorhidrocortisona), y falta del gen híbrido responsable de la FH-1/GRA. La nueva forma familiar de aldosteronismo primario (FH-III) se caracteriza por HTN severa en la niñez temprana asociada a aldosteronismo marcado, hipokalemia, y daño en los órganos blanco, resistente a terapia anti-hipertensiva agresiva, incluyendo espirolactona y amiloride y requiriendo suprarrenalectomía bilateral. SESION DE SIMPOSIOS: BASICO: GnRH Una experiencia extracorporal [1] Regulación posnatal de la liberación de GnRH en el mono. TM Plant. Dept Cell Biol & Physiology, Univ of Pittsburgh, Pittsburgh, PA Resumen. Aunque el comienzo de la pubertad en los primates está demorada varios años, la generación de pulsos de GnRH durante los primeros meses de vida es robusta, y tanto en el varón infantil y el mono macho la actividad endocrina del eje hipófiso-testicular es similar a la que existe luego de la pubertad. Unos pocos meses luego del nacimiento, la pulsatilidad de GnRH disminuye y se garantiza la quiescencia de de la prepubertad gonadal. Este sube y baja de la pulsatilidad del GnRH durante el desarrollo postnatal persiste en ausencia de la gonada, y conceptualmente puede ser visto secundario a un freno neurobiológico que restringe la actividad de la red neuronal de GnRH durante el período posterior de fase de niñez/juvenil (hombre/mono) del desarrollo. Es interesante que la expresión del gen que codifica para el GnRH no está sujeto a la regulación del desarrollo, y rápida y fácilmente se logra un tipo adulto de liberación pulsátil de GnRH hipotalámica mediante un estímulo neuroquímico intermitente. Hay evidencias de que la inmunoactividad kisspectina en el hipotálamo mediobasal cambia en paralelo con la liberación de GnRH desde el nacimiento a la pubertad, y que la estimulación repetitiva del receptor de kisspectina (GPR54) en el hipotálamo juvenil induce un tipo de liberación de GnRH característico de pubertad precoz sostenida. La pericaria de kisspectina del cerebro de los primates se localiza en la región del núcleo arcuato en el hipotálamo mediobasal, mientras que los cuerpos celulares de las neuronas GnRH se localizan más lateralmente. Aunque las neuronas kisspectina y las neuronas GnRH aparentemente se conectan vía contactos axo-somáticos y axo-dendríticos, las extensas e íntimas asociaciones entre proyecciones axonales GnRH y kisspectina en la capa interna de la eminencia media del mono abre la posibilidad de que la regulación de tipo de liberación de GnRH puberal por la kisspectina sea ejercido, al menos en parte, a nivel de la eminencia media. Queda por determinarse si las neuronas kisspectina del núcleo arcuato son un componente del reloj biológico de la pubertad o si simplemente sirven como nexos que envían información

entre tal reloj puberal y la red neuronal GnRH. En forma similar, hay una necesidad urgente de integrar la señalización de kisspectina con las otras vías (neurokinina B, GABA, neuropéptido Y, glutamato y factores derivados de la glia) implicados en el regulación del desarrollo de la liberación de GnRH, en los primates. SESION SIMPOSIOS: CLINICO: Hipotiroidismo Fetal y Materno

[S14-1] Mecanismos no-Mendelianos de las Disgenesias Tiroideas. JY Deladoey. CHU Sainte-Justine, Montreal, Canada

El hipotiroidismo primario permanente es la alteración endocrina congénita más común. En hasta el 85% de los casos es el resultado de una disgenesia de la glándula tiroides, una alteración que incluye deficiencias en la diferenciación, migración o crecimiento del tejido tiroideo. La alteración más común es la migración incompleta que resulta en un tejido tiroideo ectópico (tiroides sublingual), hasta el 80% de los casos. Realmente, el hipotiroidismo congénito por disgenesia es una enfermedad heterogénea que existe en formas familiares (2%) o no familiares (esporádica 98%). Además, el resultado de un estudio en mellizos monocigotas que dio un tasa de discordancia del 92% y el dimorfismo sexual documentado sugieren que un mecanismo de herencia no-Mendeliano existe en esta condición. Por otra parte, es improbable que existan causas ambientales porque: 1) no se han observado tendencias temporales o estacionales, 2) los mellizos homozigotas son discordantes para la enfermedad pero concordantes para el peso. También apoya la idea de una contribución genética no-mendeliana el hecho de que las mutaciones germinales de los factores de transcripción relacionados con la tiroides (TTF-1, TTF-2, PAX-8 y NFX-2) solamente se han encontrado en el 3% de los pacientes con hipotiroismo congénito esporádico y ánalisis de “linkage” en familias con hipotiroismo congénito han excluido a estos genes. Esto sugiere que nuevos genes están involucrados y que hay necesidad de un enfoque original. Proponen un modelo de múltiples impactos que debería ser compatible con la característica esporádica y la evidencia de la contribución genética no-mendeliana de a etiología. En este modelo, habría una combinación de múltiples impactos genéticos en genes involucrados en el desarrollo tiroideo sensibles a un umbral que llevarían a la disgenesia tiroidea. Estos impactos pueden ocurrir en la línea germinal, el tejido, o ambos. Por el momento, los autores se focalizan en el rol de las epi-mutaciones en el hipotiroidismo congénito. Para ello usaron un análisis combinado del transcriptosoma (confirmado por qRT-PCR), metiloma, y variaciones genómicas estructurales, comparando tiroides ectópicas vs. eutópicas. Los resultados preliminares sugieren que hay una desregulación de la vía Wnt/catenina y de genes que codifican para proteínas del cito-esqueleto en las tiroides ectópicas que son independientes de la metilación de los promotores. No se sabe aún si esta alteración es causa o consecuencia de la localización ectópica, por lo que se necesitan nuevos estudios.

[S14-3] TRH Testing in Congenital Hypothyroidism.

T Vulsma. Pediatric Endocrinology, Emma Children's Hosp AMC, Amsterdam, Netherlands

El principal sistema regulatorio para mantener el eutiroidismo está localizado en el complejo hipotálamo-hipofisario. Este sistema usando una interacción de retroalimentación negativa se desarrolla temprano en la gestación y funciona plenamente a término. A diferencia de las hormonas tiroideas y la TSH, la TRH hipotalámica se segrega al sistema porta-hipofisario y no puede medirse en la sangre periférica, por lo que evaluar al sistema regulatorio no es fácil. La forma de la curva de respuesta de la TSH del suero luego de administrar TRH depende fuertemente del estado tiroideo y también refleja a que “nivel” está alterado el sistema. El objetivo del “screening” neonatal del hipotiroidismo congénito intenta prevenir el daño cerebral ya que los signos y síntomas del hipotiroidismo congénito no son fácilmente reconocibles al nacimiento, pero cuando utiliza solamente TSH no es capaz de detectar el hipotiroidismo central hipotálamo-hipofisario (HC). Debido a que la incidencia de HC se estima en 1:15000 neonatos, por lo menos el 10% de los hipotiroidismos congénitos se perderán en el “screening”. Además, frecuentemente el HC se acompaña de deficiencia hipofisarias múltiples (MPHD) y especialmente hipocortisolismo, una condición con riesgo de vida. Para mejorar la detección de pacientes HC con riesgo de MPHD se puede hacer una prueba de TRH en recién nacidos con T4 libre baja y TSH baja o levemente elevada. De acuerdo con un estudio holandés en recién nacidos, la respuesta de TSH a la administración de TRH es una prueba valiosa para diferenciar normales de deficiencias hipotalámicas o hipofisarias. Se requieren más estudios a nivel mundial para verificar la incidencia de esta patología.

SESION SIMPOSIOS:

BASICO – Significado functional de las acciones rápidas de hormonas esteroideas en el cerebro.

[S17-2] Efectos del Estradiol en Membrana sobre los Receptores de Glutamate. PG Mermelstein. Neuroscience, Univ of Minnesota, Minneapolis, MN NO HAY RESUMEN

Resumen de publicación

Hasta hace poco tiempo había muchas controversias sobre la idea de que el estradiol pudiese afectar a los procesos celulares independientemente de los receptores nucleares de estradiol (ER). Esto a pesar de que se han publicado muchos estudios cuidadosamente controlados, tanto dentro como fuera del sistema nervioso central, demostrando que los estrógenos regulan varios caminos de señalización intracelulares actuando sobre la membrana de la superficie celular y/o en un tiempo biológico incompatible con una respuesta iniciada a nivel genómico. Actualmente, se acepta con menos controversia, de que el estradiol actúa a nivel de receptores de membrana para regular funciones en el sistema nervioso central. Estudios recientes han demostrado que los clásicos ERs, alfa y beta, actúan en la membrana celular regulando la

función del sistema nervioso central. Luego del tratamiento con estradiol ambos ERs son capaces de activar a diferentes receptores de glutamato metabotrópicos (mGluRs). La activación de los mGluRs es independiente del glutamato, pero requiere la expresión de varias proteínas caveolinas para compartamentalizar los diferentes ERs con los mGluRs, en microdominios de señalización funcional. La señalización ER/mGluR es un medio potencial mediante el cual los estrógenos pueden influenciar rápidamente y por largo tiempo varios procesos de señalización y comportamiento intracelular. (Mermelstein PG. Membrane-localised oestrogen receptor alpha and beta influence neuronal activity through activation of metabotropic glutamate receptors. J Neuroendocrinol 2009 21:257-62).

SESION DE SIMPOSIOS.

CLINICO. Lecciones aprendidas de las causas genéticas del hipopituitarismo

[S23-1] Deficiencia Congenita de ACTH: Lecciones aprendidas del Tpit. S Vallette. Endocrinology, Ctr Hosp Univ de Montréal, Montreal, Canada Resumen La mayoría de los casos de deficiencia de ACTH se asocia a otras deficiencias de hormonas hipofisarias. Algunos casos de obesidad severa de comienzo temprano son consecuencia de mutaciones del gen del POMC o del PC1. La deficiencia congénita aislada de ACTH (IAD) es muy rara. Se han descripto algunos casos con comienzos desde el período perinatal hasta la adolescencia temprana, pero la patofisiología y descripción clínica de esta condición estaban poco definidas hasta la identificación de mutaciones del gen TPIT como la principal causa molecular de IAD congénita. El Tpit es un factor de transcripción restringido a las líneas celulares que expresan al POMC, tanto en ratones como en humanos. Investigaron la secuencias codificantes del gen TPIT en 73 pacientes IAD y encontraron mutaciones en el 50% de los casos neonatales (n=56) pero no las encontraron en ningún caso de iniciación en la pubertad tardía (n=17). La presentación clínica de los pacientes cob IAD y mutaciones del TPIT es muy homogénea: hipoglucemia neonatal, niveles muy bajos de cortisol y ACTH, y otras funciones hipofisarias normales, todo asociado a una ictericia prolongada colestásica en 60% y muerte en 20% de los casos. Se presentan 9 mutaciones nuevas del gen TPIT: una deleción de un pb, 3 mutaciones de sitios de splicing, 3 mutaciones sin sentido que afectan el BOX T, y una mutación sin sentido que afecta el extremo C-terminal de la proteína. Hubo una frecuencia elevada de heterocigotas compuestos (40%), sugestiva de una frecuencia alta de alelos mutados en la población humana. En 3 pacientes se encontró mutación en un solo alelo. En ellos, la genetic familiar era consistente con heterocigosis compuesta ya que los padres y los hermanos con el alelo mutado no estaban afectados. El alelo sin explicación podría ser un gran deleción del gen o una mutación en las secuencias reguladoras. En un paciente se identificó una gran deleción de todo el exón 1 usando PCR cuantitativa. El trabajo confirma de que el TPIT es la causa principal de IAD congénita de aparición temprana, una enfermedad recesiva homogénea más frecuente de lo esperado. Han identificado 21 mutaciones del gen TPIT que

llevan a pérdida de función por diferentes mecanismos, tales como decaimiento del ARN mediada por mutación sin sentido, pérdida de unión del TPIT al ADN, interacciones proteína-proteína, y pérdida por splicing. Las mutaciones de genes humanos son un experimento único en mutagénesis que muestran correlatos bioquímicos importantes sobre la función de los genes. [S23-3] Las multiples caras de la insuficiencia hipofisaria y las mutaciones del LHX4. TC Brue. Service d'Endocrinologie, Hosp de la Timone, Marseille, France Resumen. El LHX4 es un factor de transcripción de tipo homeodominio LIM involucrado en la ontogénesis hipofisaria. Se han reportado solamente 5 mutaciones heterocigotas de LHX4 responsables de deficiencia congénita de hormonas hipofisarias (Machinis, 1999; Pfaeffle, 2007; Castinetti, 2008). En un estudio multicéntrico reciente basado en 136 pacientes (de 133 familias) con deficiencia de hormona de crecimiento asociada a anormalidades de la línea media o del cerebro, los autores reportaron tres variantes alélicas de LHX4 (c293InsC, pThr90Met, and pGly370Ser). Sobre la base de estudios funcionales solamente una mutación (c293InsC) era responsable del fenotipo del paciente, mientras que las otras dos eran probablemente polimorfismos. Es interesante que los pacientes con la mutación c293InsC tuvieron fenotipos variables: dos hermanos presentaron deficiencia de somatolactotropos y tirotropos con hipoplasia hipofisaria; el más joven tenía también atrofia parcial del cuerpo calloso y neurohipofisis ectópica; el padre tenía insuficiencia somatotrófica y gonadotrófica parcial sin malformación intracranial ni anormalidades hipofisarias. La mutación c293InsC produce un corrimiento del marco de lectura que resulta en una proteína truncada. Los estudios funcionales muestran que hay una pérdida completa de la actividad transcripcional de PRL, GH, y de los promotores de POU1F1. La cotransfección del mutante c293InsC y el LHX4 salvaje no evidenció ningún efecto dominante negativo, sugiriendo que existe un mecanismo de haploinsuficiencia. La comparación con otras mutaciones de LHX4 muestra claramente la variabilidad fenotípica en términos de deficiencia hipofisaria (inconstante o demorada), y anormalidades en la RMN ( hipo o hiperplasia hipofisaria, anormalidades cerebrales inconstantes). Es interesante que el 50% de los pacientes presentaron una silla turca pobremente desarrollada. Esta variación fenotípica existe entre mutaciones, pero también entre pacientes de la misma familia que tienen la misma mutación. Es por lo tanto altamente probable que el LHX4 interacciona con varios factores de transcripción aún desconocidos, activadores y represores, que juegan un rol importante en esta variabilidad fenotípica. A pesar del bajo número de mutaciones encontradas hasta el momento la gran variedad fenotípica hace difícil definir un fenotipo en el cual las mutaciones del gen de LHX4 debería ser investigada. Estudios adicionales en modelos murinos deberían ayudar para comprender mejor los mecanismos patofisiológicos del hipopituitarismo inducido por LHX4, y el rol de este factor en el desarrollo de la hipófisis.

[S42-2] Influencias Ambientales y Edad de la Pubertad J Toppari. Dept of Physiology, Univ of Turku, Turku, Finland

Resúmen.

Los estudios en mellizos y otros estudios epidemiológicos sugieren que la pubertad retrasada sigue una herencia dominante. Sin embargo, está claro que el medio ambiente también ejerce influencia. Las tendencias seculares del comienzo de la pubertad indican el rol permisivo de la nutrición adecuada, mientras que la obesidad puede ser relacionada con una aceleración de la pubertad, particularmente en las mujeres. La frecuente aparición de pubertad precoz central en niñas que migran de un país en desarrollo a áreas con más recursos económicos sugiere que un factor ambiental desencadena el comienzo de la pubertad. Se ha planteado la hipótesis de que la interrupción de la exposición a estrógenos débiles ambientales podría ser el desencadenante. Estos compuestos estimularían primeramente al eje hipotálamo-hipófiso-gonadal y al mismo tiempo suprimirían la secreción de gonadotropinas por retroalimentación negativa. Cuando cesa la exposición, también desaparece el feed-back negativo y entonces comienza la pubertad. Sin embargo, hay aún escasa evidencia epidemiológica que conecte a los disruptores endocrinos con el comienzo puberal. En contraste, hay mucha evidencia, y a veces epidemias, de pubertad precoz periférica causada por estrógenos farmacéuticos y disruptores endocrinos.

[S42-3] La Edad de la Pubertad: ¿Está cambiando? ¿Es importante? EC Walvoord. Pediatric Endocrinology and Diabetology, Indiana Univ, Indianapolis, IN

Resumen.

La mayoría de los expertos creen que existe una tendencia secular en los Estados Unidos de un adelantamiento en la edad de la pubertad en las niñas. Sin embargo ha habido mucho debate sobre la existencia de un bias en esta evaluación porque el desarrollo mamario se ha estimado solamente por inspección. Un análisis reciente de los datos NHANES III encontró que niñas con índice corporal normal tuvieron la telarca y la menarca a edades no tan tempranas como se había sugerido previamente, y que las diferencias étnicas y de adiposidad influyen en la tendencia a una pubertad más temprana. Unos pocos estudios transversales y algunos longitudinales también han demostrado que el aumento de la adiposidad en las niñas probablemente causa un comienzo puberal más temprano, siendo la leptina un factor permisivo significativo. La edad de la pubertad en los varones no ha sido estudiada tan prolijamente y las consecuencias de la adiposidad podrían ser las opuestas a las observadas en las niñas. Los efectos posibles de los disruptores endocrinos sobre la edad de la pubertad son preocupantes. Estudios en animales han demostrado que existe un desarrollo puberal más temprano luego de la exposición a fitoestrógenos, pesticidas, fungicidas, bifenilos policlorinados (PCBs) y bisfenol A, para nombrar solo algunos. El mecanismo por el cual estos compuestos afectan la reproducción humana es poco conocido, pero los aumentos en los niveles de ftalatos y PCBs se han asociado con desarrollo

puberal temprano en niñas. Posiblemente las implicaciones en la salud a largo tiempo asociadas a una pubertad más temprana incluyen tanto problemas médicos como psicológicos. La menarca temprana es un factor de riesgo conocido para el cáncer de mama y para la obesidad. La fertilidad está también afectada porque se asocia a reserva ovárica limitada. Hay menos estudios que evalúan la influencia de la edad de la pubertad sobre la salud a largo término en varones. Si bien la incidencia pico del cáncer testicular está ligada a la edad de la pubertad, no está claro si el riesgo de cáncer testicular aumenta con una pubertad temprana. Los datos también indican que las niñas que maduran temprano tienen mayor riesgo para la psicopatotolgía, imagen corporal negativa, abuso y experiencias sexuales tempranas. Es interesante que los mismos problemas no se observan en los varones, y la pubertad tardía en ellos tiene aparentemente efectos negativos en la auto-estima y bienestar psicológico.

SESION SIMPOSIOS: TRADUCCIONAL – Desenmascarando las complejidades del crecimiento.

[S59-2] Fármacogenética de la GH: Prediciendo la respuesta al tratamiento con GH. AAL Jorge. The Endocrinology Dept, Univ of Sao Paulo, Sao Paulo, Brazil

Resumen.

La GH recombinante humana (rhGH) ha sido usada para tratar la baja estatura en diferentes condiciones, pero existe una considerable diferencia entre individuos en la respuesta a corto y largo plazo. La farmacogenética puede proveer información importante sobre la terapia con rhGH. El receptor de GH es la primera molécula clave que media la acción de la GH. En los últimos 3 años se ha investigado la influencia sobre la respuesta a la rhGH de un polimorfismo común, la presencia (HGRfl) o ausencia (GHRd3) del exon-3. Estas dos isoformas de GHR presentan una amplia distribución en humanos, desde el informe inicial se han geno-tipificado un total de 1063 controles caucásicos demostrando una frecuencia de cada genotipo de 43% para fl/fl, 45% para fl/d3 y 12% para d3/d3. Los 22 residuos codificados por el exón 3 no se localizan en la interfase de unión a la GH. Los estudios experimentales iniciales demostraron que el GHRd3 y el GHRfl presentan la misma capacidad de unión a la hGH 22kDa. Sin embargo, un estudió mostró que las células transfectadas transitoriamente con GHRd3 inducían una acitividad transcripcional más alta luego de ser tratadas con hGH 22kDa que la de las células con GHRfl en ensayos reporteros de luciferasa. Estudios que han evaluado a esta dos isoformas del GHR en niños y adultos con deficiencia de GH, niñas con síndrome de Turner, niños nacidos pequeños para edad gestacional y pacientes acromegálicos mostraron que los pacientes que portan el alelo GHRd3 presentan una mayor sensibilidad a la GH que los pacientes homocigotos para el alelo GHRfl. Sin embargo, otros estudios presentaron resultados contradictorios. Los datos contradictorios pueden ser causados por factores tales como tamaño muestral pequeño y diferencias en el diseño experimental. Este genotipo GHR-exón 3 es el primer factor genético identificado que modula la respuesta individual a la terapia con GH.

Recientemente, el gripo de los autores demostró que el alelo -202 A de la región promotora de IGFBP-3 está asociado a mayores niveles de IGFBP-3 y aumento de la velocidad de crecimiento durante el tratamiento con rhGH en niños pre-puberales. Se discutirá el análisis de validaciones actuales y futuras de la relación de la terapia con GH y nuevos estudios de la influencia de polimorfismos en otros genes. Se espera que estos estudios pueden trasladarse de la farmacogenética a la aplicación rutinaria para permitir una de las dosis de GH y optimizar el resultado final.

[S59-3] Epigenética, Imprinting Genómico y Regulación del crecimiento Y Le Bouc. Lab Endo, Hosp Armand-Trousseau, Paris, France

Resumen.

Los mecanismos epigenéticos juegan un papel clave en la regulación de la expresión de los genes. Una de las modificaciones más estudiadas es la metilación del ADN en los nucleótidos CpG. El imprinting se refiere a una marcación epigenética de genes que resulta en una expresión monoalélica que depende del origen parental. Hay dos períodos de tiempo críticos en la reprogramación epigenética: la gametogénesis y la preimplantación temprana. Una reprogramación importante tiene lugar en las células germinales primordiales en las que se borra el imprinting de los progenitores y se restaura la toti-potencialidad. Entonces se restablecen las nuevas marcas de imprinting durante la espermatogénesis o la ovogénesis, dependiendo del sexo. Luego de la fertilización, se produce una demetilación amplia del genoma, seguida de una nueva ola de metilación de novo, ambas son resistidas por los lugares con imprinting. La alteración del imprinting causa alteraciones en el crecimiento, tales como sobre-crecimiento en el síndrome de Beckwith-Wiedemann (BWS) o el retardo de crecimiento intrauterino y postnatal del síndrome de Russell-Silver (RSS), que tienen fenotipos opuestos. Estas alteraciones del crecimiento son producidas por una metilación anormal del ADN en la región de imprinting (ICR), 11p15 que incluye varios genes con imprinting como el IGF II. En el BWS, se ha observado pérdida de metilación (LOM) en la región centromérica ICR2/KCNQ1OT1 en el alelo materno, o ganancia de metilación en la región telomérica ICR1/IGFII/H19 en el alelo materno. Este último defecto epigenético está asociado a un mayor riesgo de tumor. En el extremo opuesto, se observado LOM en el ICR1 telomérico del alelo paterno en el RSS. La embriogénesis temprana es un tiempo crítico para la regulación epigenética, y este proceso es sensible a factores ambientales. En los procedimientos de concepción por tecnología asistida de la reproducción (ART) se ha observado una prevalencia anormalmente alta de BWS, sugiriendo que la ART podría favorecer alteraciones del imprinting en el locus centromérico 11p15 (LOM en el ICR2 materno metilado). La causa de estas alteraciones del imprinting no se conocen. Sin embargo datos recientes ha demostrado que los pacientes con BWS, incluidos los nacidos con la tecnología ART, los defectos de la metilación afectan a múltiples lugares de imprinting aparte del 11p15. Esto sugiere que hay una des-regulación de un factor regulador de acción trans- luego de la fertilización.