Universidad de Carabobo

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela de Medicina Dr. Witremundo Torrealba

Departamento de Morfología Normal y Patológica

Br .Contramaestre Roiman

Microscopio óptico

Este es un instrumento que nos sirve

para visualizar estructuras pequeñas

cuyas dimensiones son inferiores al límite del

poder de resolución del ojo humano

Partes del microscopio óptico

Parte Mecánica

BASE

TORNILLO MACROMÉTRICO.

TORNILLO MICROMÉTRICO.

BRAZO PLATINA

FUENTE DE LUZ ARTIFICIAL

Parte Óptica

OCULARES

REVOLVER

OBJETIVOS

EL CONDENSADOR

LOS OBJETIVOS

En números de 3 a 5 están insertados en la parte inferior del tubo, este sistema óptico proporciona una imagen real,

aumentada e invertida.Los objetivos poseen un valor grabado 10x, 40x y 100x que

indica el aumento del objetivo.

EL CONDENSADOR

Es una combinación de lentes ubicados por debajo de la platina, que enfoca la luz sobre el objeto.

EL ESPEJO

Refleja los rayos de la fuente luminosa sobre el objetivo.

LA FUENTE DE LUZ ARTIFICIAL

Esta colocada por debajo del espejo dentro de la base del microscopio.

Propiedades del microscopio AMPLIACIÓN… de la imagen que se va a observar, se recomienda comenzar por el objetivo de menor aumento.

DEFINICIÓN… es la nitidez que nos proporciona el uso adecuado de los lentes.

RESOLUCIÓN… cuanto mayor sea el poder de resolución del objetivo, será más clara la imagen y aumentará la capacidad de poner en manifiesto detalles estructurales.

PROFUNDIDAD DE FOCO… es la capacidad de los objetivos de permitir observar varios planos en una misma posición de enfoque.

DISTANCIA FOCAL… es la disancia que existe entre el lente frontal del objetivo y el portaobjetos cuando la imagen está enfocada.

OBJETIVO 10x de 5-6mm

OBJETIVO 40x de 0.5-1.5mm

OBJETIVO 100x de 0.15-0.20mm

CAMPO OSCURO Bacteriología con preparaciones húmedas, para detectar espiroquetas u otros microorganismos con movilidad.

CONTRASTE DE FASE Permite el estudio de material vivo no teñido.

POLARIZACIÓN Sirve para identificar cuerpos extraños, tales como partículas de talco, suturas y pelos en los tejidos.

FLUORESCENCIA INMUNOFLUORESCENCIA

ELECTRÓNICO Permite investigar detalles ultraestructurales de las células y los tejidos al ofrecernos un incremento al aumento y del poder de resolución, utiliza como fuente de luz un haz de electrones.

Tipos de microscopio

Tipos de microscopio electrónico

ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN (MET)

Este tipo de microscopio nos proporciona imágenes

ultraestructurales.

ELECTRÓNICO DE BARRIDO (MEB)

Rastrea la superficie de la muestra.

Pasos de la técnica histológica para microscopía óptico

RECOLECCIÓN DE MATERIAL

Material muerto (necropsia) o material vivo (biopsia).

FIJACIÓN

Tiene como finalidad preservar las estructuras de la célula.

AUTÓLISIS

Es el proceso por el cual, después de la muerte, se produce la autodigestión enzimática celular, tras la

salida de contenido lisósomico al citoplasma por rotura de la membrana delimitante de estos

orgánulos.

PUTREFACCIÓN

Es el efecto ejercido por determinadas toxinas y enzimas bacterianas sobre los tejidos.

Autólisis

y putrefacci

ón

Temperatura ambiente

37°C y 42°C

Velocidad de autólisis y putrefacción

IMAGEN HISTÓLOGICA REAL

Es la que mostraría ese tejido cuando estaba vivo.IMAGEN HISTÓLOGICA EQUIVALENTE

Obtenida después de la manipulación histológica (fijación, inclusión, corte y coloración).

PRINCIPIOS GENERALES DE LA FIJACIÓN

No existe un método universal fijación.

No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido.

Un defecto de fijación jamás puede ser corregido.

Es inútil un estudio histológico sobre un material con graves defectos de fijación.

FIJACIÓN HISTOLÓGICA

Conserva la arquitectura y estructura de los tejidos y células sin considerar los cambios moleculares sobre

sus componentes bioquímicos.

FIJACIÓN HISTOQUÍMICA

Es más importante preservar la composición molecular y bioquímica de los tejidos.

CLASES DE AGENTES FIJADORES SEGÚN SU MECANISMO DE ACTUACIÓN

Se clasifican en dos grupos:

Fijadores por métodos físicos: congelación.

Fijadores por métodos químicos: agentes fijadores.

CARACTERÍSTICAS FUNDAMENTALES QUE DEBE POSEER UN LÍQUIDO FIJADOR IDEAL

Capacidad para bloquear de inmediato la autólisis.

Efecto microbicida.

No provocar retracciones o distorsiones del tejido.

Alta velocidad de penetración.

TIPOS DE FIJADORES

FIJADORES SIMPLES

Alcohol etílico.

Acetona.

Ácido acético.

Ácido tricloro acético.

Ácido crónico.

Cloruro de mercurio.

Dicromato potásico.

Ácido pícrico.

Acetato de uranilo.

Formol o formaldehido.

MEZCLAS FIJADORAS

Líquido de BOUIN (Ácido pícrico, formol y ácido acético).

BOUIN – Hollander (Acetato, ácido pícrico, formol, agua destilada y ácido acético).

BOUIN – Alcohólico (Duboscq - Brasil) (Alcohol etílico, ácido pícrico, formol y ácido acético).

Fijador de Müller (Dicromoto potásico, sulfato sódico, agua destilada).

Fijador Orth (Müller - formol).

Solución de Zenker.

FIJACIÓN EN MICROSCOPIA ELECTRÓNICA

Glutaraldehído.

Tetróxido de osmio.

Procesamiento del material histológico

Deshidratación Extraer toda el agua de los tejidos.

Aclaramiento Consiste en eliminar el exceso de alcohol.

Inclusión Consiste en sustituir con parafina todos los espacios ocupados por el agua.

PARAFINASe saca la muestra del procesador de tejidos.

Se llena el molde de metal con parafina.

Confección de bloques de parafina

Orientación de la muestra.

Bloque de parafina terminado listo para el corte.

Corte del bloque de parafina

Obtención de la tira de parafina.

Se extiende la tira de parafina en el baño de flotación para

eliminar las arrugas del tejido.

Se saca la tira de parafina extendida de baño de

flotación en una lámina portaobjetos.

Las láminas portaobjetos conteniendo las tiras de parafina son introducidas en una estufa, para fijar los cortes a la

lámina. Son introducidas por un mínimo de quince minutos en la estufa.

Coloración

XILOL XILOL ALCOHOL ALCOHOL

HEMATOXILINAALCOHOLEOSINAALCOHOL

ALCOHOL

ALCOHOL XILOL XILOL XILOL

TIPOS DE COLORANTES

Ácidos.

Básicos.

Neutros.

Indiferentes.

Después de fijadas

las tiras de parafina en

la estufa se sacan y se dejan

enfriar por cinco

minutos y luego se

procede a la

coloración .

Según su afinidad

Basofilia.

Acidofilia.

Ortocromática Mismo color.

Metacromática Color diferente.

Coloración vital

Intravital Supravital

Células principales con

citoplasma basófilo (teñido

de azul)

Células parietales

con citoplasma eosinófilo (teñido de

rojo).

Preparaciones de cortes para microscopía

electrónica1) Tejidos de menor tamaño.

2) Bloques más pequeños.

3) El tejido tiene que ser lo más fresco posible.

4) Procesamiento más rápido.

5) Fijadores (formol, tetroxido de osmio y glutaraldehido).

6) Medio de inclusión: Resina epon.

7) Colorantes sales de metales pesados como el citrato de plomo y uranio.

8) Método de preparación para los tejidos se utiliza la criofractura (congelación y fractura).

Métodos de investigación histológica

Existen dos métodos de estudio:

Material muerto.

Material vivo.

Ventajas de material muerto

Permite la aplicación de gran variedad de técnicas.

Nos proporciona un material de estudio permanente para la docencia e investigación (preparaciones histológicas).

Desventajas de material muerto Puede producir artefactos.

Estos artefactos pueden ser causados por: Muescas en las cuchillas (por falta de filo). Precipitación del fijador. Restos de colorantes. Autólisis. Arrugas. Retracción de los tejidos.

Ventajas de material vivo

Nos da información directa sobre estructuras vivas, se puede estudiar la fisiología animal.

Se observan estructuras que con la muerte desaparecen.

Desventajas de material vivo

No se obtienen preparaciones permanentes.

No se pueden aplicar muchas técnicas de estudios (se utilizan solo coloraciones vitales).

Otros métodos de estudio histológico

Citoquímica e histoquímica.

Inmunohistoquímica.

Histoautorradiografía.

Cultivo de tejido.

Microcirugía.

Fraccionamiento celular.

UNIVERSIDAD DE CARABOBOFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE MEDICINA “WITREMUNDO TORREALBA”DEPARTAMENTO DE MORFOLOGIA NORMAL Y PATOLOGICA

MORFOLOGIA MICROSCOPICA

Prof(a) Morella de RoloMarzo 2013

La Célula

Definición de célulaConocer los componentes celularesDescribir la organización generalDefinir tejidos, órganos y sistemasComposición químicaTamaño celularIdentificar al M.O. las diversas formas

celularesPropiedades fisiológicas de las células

Agenda

Es la unidad estructural y funcional fundamental de los seres vivos.

Membrana plasmática

Protoplasma NúcleoCitoplasma

Las células se pueden dividir en dos gruposPROCARIOTASMaterial genetico disperso en elCitoplasma (NUCLEOIDE)Bacterias, rickettsias

EUCARIOTASHombre, multicelulares.material genético concentrado en el núcleo

Reino Móneras Protista Hongos vegetales Animales

• Organismos representativ

o

BacteriasAlgas Azules

ProtozoosCrisófitas

HongosHongos verdes

Algas verdesAlgas rojas y

pardasBriofílas

Traqueófila

Metazoos

Clasificación celular

Procariotas Eucariotas

Clasificación de los organismos y las células

Diferencias entre las procariotas y eucariotasC. Procariotas C. Eucariotas

Envoltura nuclear Ausente Presente

ADN Desnudo Combinado con proteínas

Cromosomas Único Múltiples

Nucléolo Ausentes Presentes

Ribosomas 70S (50S+30S) 80S (60S+40S)

Endomembranas Ausentes Presentes

Mitocondrias

Enzimas respiratorias y

fotosintéticas en la membrana plasmática

Presentes

Pared celular No celulósica Celulósica en las c. vegetales

Exocitosis y endocitosis Ausente Presente

Locomoción Fibrilla única ó flagelo Cilios y flagelos

CONSTITUCIÓN

Núcleo

Membrana plasmática

Citoplasma:OrganoidesInclusionesCitoesqueleto

CITOPLASMAOrganoides

Metabólicamente activosDesempeñan una función específica

Inclusiones Acúmulos transitoriossustancias alimenticias, productos inertes o depósitos de sustancias (pigmentos melanina, gotas lípidos)

Citoesqueleto NO visible al MO sólo visible al MEElementos fibrilares Microtúbulos, microfilamentos y filamentos Intermedios)

Organización general de una célula eucariotaPrincipal componente Subcomponentes Función

Membrana celular Membrana plasmática ProtecciónInteracción celularPermeabilidadEndo y Exocitosis

Núcleo CromosomasNucléolo

GenesSíntesis de ribosomas

Citoplasma

Citosol Enzimas solublesRibosomas

GlicolisisSíntesis proteica

Citoesqueleto MicrotúbulosMicrofilamentos

Forma y movilidad celular

Organoides microtubulares

Centrosomas y CentríolosCuerpos basales y cilios

División celularMotilidad celular

Sistema de Endomembranas

Membrana nuclearR. EndoplásmicoAparato de GolgiEndosomas y lisosomas

Permeabilidad nuclearSíntesis y procesamientoSecreciónDigestión

Organoides de Membrana MitocondriasPeroxisomas

Síntesis de ATPProtección

Inclusiones Gránulos de glucógenoGotas de lípidosPigmentos de MelaninaGránulos de Lipofuscina

Reserva Energética

Deposito de SustanciasCuerpos residuales

Composición Química de las Células

Inorgánicos

Agua 75-85%95% en forma libre5% ligada a las proteínas

Minerales 2 – 3 %Cl-, Na+ y K+

Mg+2

Ca+2

FeVestigios: Manganeso, cobre, cobalto, yodo, selenio, níquel, molibdeno y zinc

Composición Química de las Células

Orgánicos

Hidratos de Carbono

Proteínas

Lípidos

Ácidos Nucleicos

Proteínas

Son cadenas de aminoácidos ligados por uniones peptídicas Pueden existir como solución ó gel

Aminoácidos ácido orgánico con un grupo amino (NH2), uno carboxilo (COOH) y un radical (R). Existen 20 aa diferentes

Simple Fibrosas y globularesCombinadas

Funciones Síntesis de más proteínas Forman parte de las membranas

celulares Matriz fundamental Material genético Enzimas Hormonas Metabolismo celular

Lípidos

Compuestos insolubles en agua. Triglicéridos: fuente de reservaFosfolípidos: componente estructural de las membranas biológicas

Hidratos de carbono

Principal fuente de energía de las células en forma de glucógeno y glucosa.Constituyentes estructurales de la pared celular y de las sustancias intercelulares

Ácidos Nucleicos

ADN ADN doble hélice (núcleo)ADN lineal (mitocondria)

ARN ARN mensajeroARN de transferenciaARN ribosomal

Bases nitrogenadas

Un azúcar:ADN: DesorribosaARN: Ribosa

Formas y tamaño de las células

1.-Presión que ejercen las células vecinas2.-Tensión superficial3.-Rigidez de la membrana celular4.-Viscosidad del citoplasma

PlanaCúbicaPrismáticaEsféricaEstrellada

Fusiforme Cilíndricas CaliciformePiriforme

LEY DEL VOLUMEN CELULAR CONSTANTE

la ≠ en la masa total de un órgano se debe al número de células y no al tamaño de las células

HIPERPLASIA aumenta número celular

HIPERTROFIA aumenta tamaño celular

Hoja parietal de la cápsula de Bowman Riñón Planas

Hoja parietal de la cápsula de Bowman Riñón Planas

Raspado Vaginal Planas

Tiroides Cúbicas

TCP o TCD Riñón Cúbicas

Leucocitos Esférica

Prismática C. caliciforme

Células musculares lisasFusiforme

Células musculares estriadas esqueléticasCilíndrica

Motoneuronas Médula Espinal

Estrellada

Células de Purkinje PiriformeCerebelo

Neurona PiramidalCerebro

EritrocitoBiconcava

POLIÉDRICASHígado

Propiedades fisiológicas de las células

Irritabilidad: Respuesta a estímulos

Conductividad: Onda de excitación, sitio de estímulo, cambio potencial eléctrico, se propaga,

se trasmite a otras células

Contractilidad: Acortamiento de las células

Absorción y asimilación: Captar alimentos y sustancias del ambiente, modificarlas y

transformarlas (metabolismo)

Secreción: Utilizar sustancias absorbidas para síntesis de nuevas sustancias que van a ser

eliminadas

Propiedades fisiológicas de las células

Excreción: Eliminación de sustancias que no se necesitan o que su alta concentración puede ser

nociva (urea, creatinina)

Respiración: El O2 absorbido se usado para oxidar sustancias alimenticias en su interior

obteniendo energía necesaria para funcionamiento

Crecimiento y reproducción: Constante renovación de elementos estructurales de

órganos y tejidos

Polaridad funcional: Polo Basal, Polo Apical. En cel secretoras de proteínas, acino

pancreático, citoplasma basal abundante RER y mitocondrias, citoplasma apical Golgi muy desarrollado supranuclear con gránulos de

zimógeno

Resúmen

• Tipos celulares procariotas y eucariotas

• Constitución celular, núcleo, membrana y citoplasma (organoides, inclusiones y citoesqueleto)

• Composición química (orgánicos e inorgánicos)

• Formas y tamaño celular

• Propiedades fisiológicas de las células